JPS59216894A - ゲルマニウム含有リポソ−ム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不発明は、有機ケ゛ルマニウム化合物を含有するリポソ
ームに関するものである。

有機ゲルマニウム化合物は、最近、その中のあるものが
病態動物に対して好ましい効果を示すため、注目を集め
ている。

而して、との右後ゲルマニウム化合物ハ、杼口投与又は
静注投与さねたとき、体外への排泄が比較的速いという
特徴があり、この特徴は、有機ゲルマニウム化合物を医
薬品という見地から考えたときけ残溜がないということ
で優れたものといえるが、有機ゲルマニウムは極めて安
全性が高いことからその排泄の速度を調節して有機ケ゛
ルマニウム化合物の有する効力を持続的に充分に発揮さ
せることも必萼なことといえる１、 本発明の発明者らは上述した事情を背景として多くの実
験を通じて種々検討を重ねた結果、リポソームを利用す
ることにより有機ゲルマニウム化合物の排泄速度を調整
することに想到し、更に実験を重ねて本発明を完成した
ものであり、本発明の構成は、有機ゲルマニウム゛化合
物を含有することを特徴とするものである。

次に本発明の詳細な説明する。

本発明に用いられるリポソームは、リン脂質を水硬いは
緩衝液中に懸濁したときに生じる脂質ニ重層膜からなる
閉鎖小胞体で、二重層における脂質の配列、膜透過、融
合反応や類似分子との交換反応などのモデル材料として
良く利用されているものであって、前記リン脂質として
は、両親媒性基を有し、水系の媒体で二重層膜を形成す
るすべての脂質、例えばホスファチジルコリン（レシチ
ン）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノー
ルアミン、リゾレシチン、スフィンゴミエリンなどがあ
り、又、二重層膜を安定化させるために、コレステロー
ルなどの添加剤が使用される。

このような成分からなるリポソームは一般に優れた特徴
があり、その主なものは以下のとおりである。

（１）生体膜の構成成分であるリン脂質を用いるので、
生体拒否反応を示すことけないと考えられる。

（２）閉鎖小胞体内に、親水性及び疎水性のどちらの薬
物も、カプセル化しつる。

（３）生体内には、リン脂質分解酵素が存在するため、
代謝が容易である。

（４）各臓器に選択的に取り込み易くするととが出来る
。

（５）生体膜に良＜イｌ′Ｊているため、腸による吸収
が極めて良い。

一方、本発明において前記リポソームに含有される有機
ケ゛ルマニウム化合物としては、一般式（式中、Ａ、Ｂ
け水素原子又は低級ア ルキル基、Ｘけ水酸基、アミノ基又は −〇−低級アルキル基、Ｙけ酸素原子又は硫黄原子を示
す］ で示されるものを例示することができ、中でも式（Ｉ）
でＸが水酸基の場合の化合物であるカルボキシエチルゲ
ルマニウムセスキオキサイド（ＧｅＣＨ２ＣＨ，Ｃ００
Ｈ）１０゜ が生産、入手の容易な点で好オしい。

この有機ゲルマニウム化合物け、前述のよう釦。

正常動物には何ら生理作用を示さないが、成る種の病態
動物又は異常細胞或いけ代謝異常に対して好寸しい効果
を示すことが知られている。即ち、成る種の腫瘍細胞又
は実験腫瘍動物には抗腫瘍効果を、ウィルス感染動物に
対してけ抗ウイルス効果をそれぞれ示し、又、Ｃａｅど
の代謝異常を正常化させる他、がん性疼痛、骨疼痛に対
して寛解作用を示すなどの特徴がある結果、薬理作用と
して、抗腫瘍効果、抗ウイルス効果、感染防御作用など
の生体防御機構増強作用に関連のある薬理作用を示し、
その上Ｃａ代謝改善作用や疼痛緩和作用などオ のホシ式りターシス促進作用を有１．ており、一方この
有機ゲルマニウム化合物の毒性は、極めて低く、例えば
、前記カルボキシエチルゲルマニウムセスキオキサイｒ
についていえば、経口投与による体重１に！？当り（７
）　ＬＤｓｏ値は、マウスノ場合６　Ｂ　［１ＤＷ。

ラットでけ１０ｆ以上であり、静注でもマウス。

ラットともに物即的な最大投与可能量である１　０００
η以上のＬＤ、。値を示し、更に、慢性毒性試験におい
ても、ラットの場合、経口で６箇月間８０■／ｋｇ　。

８ｎ　Ｑ＋ｌｑ／ｋｇ、　　８０　［１ｎｑ、’に９の
連続投与によりいずれの投与群においても一例の死亡も
なく、又、病理所見の異常もなく、更に、イヌの６箇月
間の静注でも５　ｎ　［１ｖｎｑＡ９で何らの毒性も認
められない。

而して、不発明は上述の優れた特性を有する有機ゲルマ
ニウムイト合物を内包したゲルマニウム含有リポソーム
に関する４のであり、本発明リポソームは、容易に人体
の疎水性細胞膜と融合できるので、リポソーム内部に含
有する有機ゲルマニウム化合物を細胞内に運びこむこと
ができ、しかも、その外部を構成している膜が生分解に
より代謝される際、免疫学的にも抗原抗体反応を起すこ
とがなく、毒性も斥いので、人体に投与したときに全く
副作用が生じない。そして、本発明リポソームは、有機
ゲルマニウム化合物を単独で投与した場合よりも放出が
抑制されることが見出されるのであるが、これは、リポ
ソーム膜単独と有機ゲルマニウム化合物とを単に混合し
た場合には放出がそれほど抑制されなかったことから考
えて、有機ゲルマニウム化合物がリポソーム膜内に含有
されることにより、徐放型になる本のと思われ、この事
実は、有機ゲルマニウム化合物が経口、静注投与された
ときに、排泄が早いという点を考慮に入れルト、優ｆま
た利点といえる。

従って本発明リポソームは、その中に取り込まれた有機
ゲルマニウム化合物と同じく、正常動物には何ら生理作
用を示さないが、成る種の病態動物又は異常細胞又は代
謝異常に対して好ましい効果を示す。即ち、成る種の挿
瘍細胞或いは実験腫瘍動物に対しては抗ＩＰ瘍効果を、
又ウィルス感染動物に対しては抗ウイルス効果をそれぞ
れ示し、又Ｃａ等の代謝異常を正常化させる他、がん性
疼痛、骨疼痛に対し寛解作用を示すのである。

一方、本発明リポソームは種々の方法により製造するこ
とができ、その−例を示せば、まずリン脂質をベンゼン
或いは塩化メチレンなどの有機溶媒に溶解したもの２部
と、これに対し約０．３〜１．５部好ましくけ約０．７
〜約１．２部の有機ゲルマニウム化合物を含有する水溶
液とを混合士ひ拌してＷｌｏ型のエマルジョンを作成す
る。この際、ベンゼンの代りに、低沸点のエーテルなど
も使用でき、又、放出挙動をコントロールするために、
荷電物質（正の場合は、ステアリルアミンを用い、負の
場合はホスファチジン酸又はジセチルホス７エートを用
いる）を少量添加してもよい。次に、このエマルジョン
１部に対し約７〜１２部好オしくけ約７〜１２部の水相
中に攪拌混合することにより、Ｗｌｏ、／’Ｗ型の複合
エマルジョンを作り、攪拌を昨らに長時間連続的に行い
、油相に含まれる有機溶媒を水中に移行させて、水相表
面から蒸発させると、油相に溶解していた脂質が、親水
性の部分を内相及び外相の水相に向けて配向し、閉鎖形
の脂質二重層小胞体即ち本発明のリポソームが得られ、
この方法によれば、大量にリポソームを得るととが可能
となる。

又、リン脂質ヲクロロホルムなどの有機溶媒に溶解して
容器に移し、ロータリーエバポレータを用いて溶媒を除
き、容器の低にリン脂質膜を薄く均一に形成し、更に、
この膜を室温で乾燥して残存している溶媒を完全に除去
する。これに、有機ゲルマニウム化合物を含有している
少量の水溶液を加え、ミキサー又は超音波などにより脂
質を容器から剥離し、水中に分散させても、目的とする
リポソームを得ることが出来るが、本発明リポソームの
製造方法は、これらの方法に限定されるものではない。

ｆ、Ｍ、本発明リポソームを作るのに用いられるリン脂
質の代表的なものとしては、式 ％式％ （） で示されるものが挙げられ、又、リン酸エステルのアル
コール成分としては、エタノールアミン。

プリン、セリンなどが、一方、脂肪酸成分としてけ、ラ
ウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸。

オレイン酸、リノール酸などがそれぞれ挙げられる。又
、ホスファチジルエタノールアミンやリゾレシチンも、
約５０モル−〇コレステロールを加えると、リポソーム
を形成する。その他、天然のものから抽出された卵黄ホ
スファチジルコリン。

ウシ脳スフィンゴミエリンや種々の赤血球その他の細胞
膜を破壊、抽出して見られる混合脂質も用いることが出
来る。

而して、本発明リポソームに有機ゲルマニウム化合物が
取り込まれたどうかけ、得られたリポソームの膜を破壊
し、内容物が有機ゲルマニウム化合物であることを確認
することによって確められる。膜の破壊は、例えば、リ
ポソームに非イオン性界面活性剤例えばトリトンｘ−ｎ
ｏを作用させることにより達成される。

このようにして得られた本発明リポソームは、平均粒径
が約１μｍのものであり、そのオままたけ従来の経口投
与用の種々の剤型にして用いられる。種々の剤型として
は、例えば、散剤、細粒、顆粒、錠剤、カプセル、丸剤
などの形態が挙げられ、これらの剤型を作るに当って、
従来用いられている賦形剤、離型剤、放壊剤などを用い
ることができる。又、本発明リポソームの単位投与形態
は、２〜５００岬の活性成分即ち有機ゲルマニウム化合
物を含有したものが挙げられ、用法としては、年令、症
状に応じて例えば活性成分として１゜〜２００　ｍ１７
ｋｇを１日１〜数回投与する。

本発明リポソームは、毒性が極めて弱く、長期にわたっ
て連用しても副作用が生じることがない等の優れた特性
を有する。

次に本発明の実験例について述べる。

実施例 卵黄レシチン（卵黄ホスファチジルコリン）１．４０　
ｍ　ｍｏｌとコレステロール０．４０ｍｍｏｌとを×ン
ゼン１０−に溶解して得られた溶液と、１０（Ｗ／Ｖ）
１β−カルボキシルエチルゲルマニウムセスキオキサイ
ドの炭酸ナトリウム溶液５ｍｌとを合わせ、ホモジナイ
ザーにより乳化し、Ｗ２Ｏ型のエマルジョンを作った。

次いで蒸留水１５〇−中に、攪拌下前記Ｗ１０型エマル
ジョンを添加し、Ｗ１０／Ｗ型の複合エマルジョンを得
、この系を３０℃に保って、攪拌をさらに２時間続ける
と、脂質を溶解している（ンゼンが徐々に水中に溶解し
、さらにとのベンゼンが水性母液の表面から蒸発し、そ
して次第に脂質が内外相の水相に対して極性基を配向し
て脂質二重層全形成して、β−カルボキシルエチルゲル
マニウムセスキオキサイドを含有するリポソームが生成
した。

次に、リポソームと遊離のβ−カルボキシルエチルゲル
マニウムセスキオキサイドとを分離するため、１ｎｎ、
ｏｎｏｆで１時間遠心操作を行い、β−カルボキシルエ
チルゲルマニウムセスキオキサイドを含有するリポソー
ムを得た。

得られたリポソームをトリトンＸ−１ｎＯを作用させて
膜を破壊すると、リポソームの内部からβ−カルボキシ
ルエチルゲルマニウムセスキオキサイドが遊離してきた
。

尚、このリポソームの光学顕微鏡写真及び走査型電子顕
微鏡写真はそれぞれ第１図及び第２図に示したとおりで
あった。

実施例 実験例１の方法において、卵黄レシチンとコレステロー
ルとの×ンゼン溶液に、０．２ｍｍｏｌの荷電物質〔ス
テアリルアミン（＋）、ホスファチジン　　酸又はジセ
チルホスフェート（−）〕を加える以外は実験例１と同
様にして行うと、実験例１と同様に、β−カルボキシル
エチルゲルマニウムセスキオキサイドを含有するリポソ
ームを得た。

伺、上記両実験例により得られた本発明リポソームの有
機ゲルマニウム含有量・け、各構成成分の田率及び操作
条件等により異るが、１０チ以上含有するものも得るこ
とができた。

実施例 生体外におけるリポソームからのβ−カルボキシルエチ
ルゲルマニウムセスキオキサイドの放出挙動について調
べるため、実験例１で得られ六リポソーム溶液をセルロ
ースチューブに入れ、これを緩衝液中に入れ、種々の条
件下で透析した。β−カルボキシルエチルゲルマ二つム
セスキオキサイドの定量は、原子吸光分析装置を用い、
波長２６５、１　ｎｍによ抄行った。

まず、緩衝液の温度を３７℃に保持した鳩舎のβ−カル
ボキシエチルゲルマニウムセスキオキサイドの放出挙動
を調べてみると、表１に示すとおり、本発明リポソーム
は同一条件下でのβ−カルボキシエチルゲルｉニウムセ
スキオキサイド単独やそれとリポソームとの混合物に比
較し、放出が抑制されるととがわかった。

表　　１ 〔放出−険（チ）〕 又、緩衝液の温度の影響を胛ぺるため、緩衝液の温度を
変化させ、それぞれ２４時間後の放出率について調べた
ところ、表２に示すような結果が得られた。

表　　２ １５ 更に、実験例２で得られた本発明リポソームからのセス
キオキサイドの放出と、緩衝液の…との関係について調
べたところ、荷電物質の種類とは無関係に、表３に示す
ような結果が得られた。

表　　３

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明リポソームの光学顕微値写真、第２図は
同じく走査型電子顕微鐙写真である。 代理人　小　泉　良　邦 第　Ｌ　図 第　２　凹

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　有機ゲルマニウム化合物を含有することを特徴と
   するゲルマニウム含有リポソーム。 ２、有機ゲルマニウム化合物が、式 （式中、Ａ、Ｂは水素原子又は低級ア ルキル基、Ｘは水酸基、アミノ基又は −〇−低級アルキル基、Ｙは酸素原子又は硫黄原子を示
   す） である特許請求の範囲第１項のリボ°ソーム。