JPS59210885A - 安定な酵素組成物 - Google Patents
安定な酵素組成物Info
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- JPS59210885A JPS59210885A JP8392883A JP8392883A JPS59210885A JP S59210885 A JPS59210885 A JP S59210885A JP 8392883 A JP8392883 A JP 8392883A JP 8392883 A JP8392883 A JP 8392883A JP S59210885 A JPS59210885 A JP S59210885A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、安定な酵素組成物に関するものである。さら
に詳しくは１ペルオキシダーゼ単独および／あるい（は
ペルオキシダーゼと免疫活性物質と結合した複合物のペ
ルオキシダーゼ酵素の安定化に関するものである。
に詳しくは１ペルオキシダーゼ単独および／あるい（は
ペルオキシダーゼと免疫活性物質と結合した複合物のペ
ルオキシダーゼ酵素の安定化に関するものである。
ペルオキシダーゼは１近年種々の目的で使用されるよう
になってきており、特に臨床検査部門での診断試薬とし
て用いられ１＃素免疫測定法の進歩により１この測定法
のラベル酵素としてのペルオキシダーゼの重要性は増加
してきている。しかしながら）ペルオキシダーゼは１他
の成分（例えば免疫活性物質）と結合していても洩又１
単独遊離状態でも低濃度の水溶液状態においてきわめて
不安定であり１測定に必要な酵素活性を維持することは
非常に困難である。そこで一般には、ペルオキシダーゼ
活性を長期間保持するためには＼特公昭５Ｂ−５６６８
号公報に示されているような８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸を添加するか、凍結乾燥といった手段を
用いて安定化が行なわれているが）この凍結乾燥の場合
でも乾燥時にペルオキシダーゼの酵素活性が相当低下す
ることも明らかにされている。これらの理出よりペルオ
キシダーゼを使用する際１かなり限定された使用法にな
らざるをえない。
になってきており、特に臨床検査部門での診断試薬とし
て用いられ１＃素免疫測定法の進歩により１この測定法
のラベル酵素としてのペルオキシダーゼの重要性は増加
してきている。しかしながら）ペルオキシダーゼは１他
の成分（例えば免疫活性物質）と結合していても洩又１
単独遊離状態でも低濃度の水溶液状態においてきわめて
不安定であり１測定に必要な酵素活性を維持することは
非常に困難である。そこで一般には、ペルオキシダーゼ
活性を長期間保持するためには＼特公昭５Ｂ−５６６８
号公報に示されているような８−アニリノ−１−ナフタ
レンスルホン酸を添加するか、凍結乾燥といった手段を
用いて安定化が行なわれているが）この凍結乾燥の場合
でも乾燥時にペルオキシダーゼの酵素活性が相当低下す
ることも明らかにされている。これらの理出よりペルオ
キシダーゼを使用する際１かなり限定された使用法にな
らざるをえない。
本発明者等は上記欠点を有しないペルオキシダーゼの安
定化法を開発すべく研究した結果１ペルオキシダーゼに
血清蛋白質およびポリアルキレンゲリコールを配合する
ことを見出し１既に提案した（特願昭５７−１３６１２
６号）〆ところが上記組成物ではペルオキシダーゼが長
期間安定ではあるが１長期保存中に沈殿が形成される。
定化法を開発すべく研究した結果１ペルオキシダーゼに
血清蛋白質およびポリアルキレンゲリコールを配合する
ことを見出し１既に提案した（特願昭５７−１３６１２
６号）〆ところが上記組成物ではペルオキシダーゼが長
期間安定ではあるが１長期保存中に沈殿が形成される。
本発明者等は長期保存中に沈殿が形成されない安定化剤
について種々鋭意検討した結果、本発明に到達した。
について種々鋭意検討した結果、本発明に到達した。
即ち）本発明はペルオキシダーゼ１ハロゲン（１化水素
で為脂質成分を抽出除去した血清蛋白質およびポリアル
キレンゲリコールを含む安定な酵素組成物である。
で為脂質成分を抽出除去した血清蛋白質およびポリアル
キレンゲリコールを含む安定な酵素組成物である。
本発明の安定化剤は特に溶液中のペルオキシダーゼを著
しく安定化させ１長期間保存中に沈殿の形成がほとんど
見られない。
しく安定化させ１長期間保存中に沈殿の形成がほとんど
見られない。
本発明に用いるポリアルキレングリコールとしては、ポ
リエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エ
チレンオキサイド・プロピレンオキサイド・コポリマー
１ポリテトラメチレンゲ１ノコールなどが挙げられる。
リエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エ
チレンオキサイド・プロピレンオキサイド・コポリマー
１ポリテトラメチレンゲ１ノコールなどが挙げられる。
本発明において用いるポリアルキレングリコールの分子
量は約１０００〜２００００、好ましくは約４０００〜
６０００のものである。添加量としては水性組成物に対
して約１〜１０重置対容量（Ｗ／Ｖ ）％、好ましくは
３〜６％重量対容量（ｗ／′ｖ）％である。１０重重量
容量（ｗ、’ｖ）飴を越える添加は血清蛋白質の沈殿を
ひきおこし１好ましいものではない。
量は約１０００〜２００００、好ましくは約４０００〜
６０００のものである。添加量としては水性組成物に対
して約１〜１０重置対容量（Ｗ／Ｖ ）％、好ましくは
３〜６％重量対容量（ｗ／′ｖ）％である。１０重重量
容量（ｗ、’ｖ）飴を越える添加は血清蛋白質の沈殿を
ひきおこし１好ましいものではない。
又、血清蛋白質として、牛アルブミン、ヒトアルブミン
、牛血清、ヒト血清１ウマ血清′、家兎血清等多種挙げ
られる。
、牛血清、ヒト血清１ウマ血清′、家兎血清等多種挙げ
られる。
本発明に用いるハロゲン化炭化水素としては炭素原子数
２〜５の炭化水素であって１水素原子の５０％以上がハ
ロゲン原子で置換されているものが好ましい。ハロゲン
原子としては１塩素１集素１沃素が挙げられる。好まし
いノ１０ゲン化炭化水素としては、１，１．２− ）リ
クロロ−１，２，２−）リフルオロエタン、パークレン
、トリクレン等＃ｆ 例示される。
２〜５の炭化水素であって１水素原子の５０％以上がハ
ロゲン原子で置換されているものが好ましい。ハロゲン
原子としては１塩素１集素１沃素が挙げられる。好まし
いノ１０ゲン化炭化水素としては、１，１．２− ）リ
クロロ−１，２，２−）リフルオロエタン、パークレン
、トリクレン等＃ｆ 例示される。
上記血清蛋白質は粉末状でけｌから１０重量／容量％の
水溶液とし為血清蛋白質１容に対し１ハロゲン化炭化水
素Ａ例えば１，１．２− ） ！Ｊクロル１．２．２−
トリフルオロエタン１，５〜５容の割で混合し１よく攪
拌し、血清蛋白質中の脂質成分を抽出する。３００Ｏｒ
、ｐ、ｍ、ｌｏ分間逮心労難し１上清部分の血清蛋白質
を用い、添加量は水性組成物に対し１〜ｂ ポリエチレングリコールは、ラジオアイソトープを用い
た免疫測定法）即ちラジオイムノアッセイ法で免疫複合
体の沈殿剤として使用されているが酵素の安定化）特に
ペルオキシダーゼの安定化に使用された例はない。
水溶液とし為血清蛋白質１容に対し１ハロゲン化炭化水
素Ａ例えば１，１．２− ） ！Ｊクロル１．２．２−
トリフルオロエタン１，５〜５容の割で混合し１よく攪
拌し、血清蛋白質中の脂質成分を抽出する。３００Ｏｒ
、ｐ、ｍ、ｌｏ分間逮心労難し１上清部分の血清蛋白質
を用い、添加量は水性組成物に対し１〜ｂ ポリエチレングリコールは、ラジオアイソトープを用い
た免疫測定法）即ちラジオイムノアッセイ法で免疫複合
体の沈殿剤として使用されているが酵素の安定化）特に
ペルオキシダーゼの安定化に使用された例はない。
本発明の組成物におけるペルオキシダーゼの安定化作用
は１ハロゲン化炭化水素で処理された血Ｙ：ｊ 蛋白質
とポリアルキレングリコールがペルオキシダーゼに作用
し、その特殊借造を保持しているものと考えられる。
は１ハロゲン化炭化水素で処理された血Ｙ：ｊ 蛋白質
とポリアルキレングリコールがペルオキシダーゼに作用
し、その特殊借造を保持しているものと考えられる。
ペルオキシダーゼは、遊出状態でも、免疫活性物質と結
合した結合状態のものであってもよい。
合した結合状態のものであってもよい。
また遊離状態のものと結合状態のものとの混合物であっ
てもよい。
てもよい。
免疫活性物質としては、ハブテン、多価抗原、抗体等が
あげられる。ハブテンとしては、チロキシン、ヒスタミ
ン、ジゴキシン１アドレナリン１プロスタグランジン、
ステロイドホルモン飄例えばペニシリンなどが用いられ
る。多価抗原としてはホルモン、例えば、成長ホルモン
などタンパクは連鎖球菌１肝炎ウイルス、風疹ウィルス
などが用いられる。抗体としては、従来既知の方法で１
ヤギ、ウサギなどの哺乳動物に上記ハブテン又は抗原を
免疫することによって得られた抗体く例えば、抗インス
リン抗体、抗α−フェトプロティンなど）が用いられる
。又、ハイブリドーマ法によって作成された抗体も同様
に使用できる。
あげられる。ハブテンとしては、チロキシン、ヒスタミ
ン、ジゴキシン１アドレナリン１プロスタグランジン、
ステロイドホルモン飄例えばペニシリンなどが用いられ
る。多価抗原としてはホルモン、例えば、成長ホルモン
などタンパクは連鎖球菌１肝炎ウイルス、風疹ウィルス
などが用いられる。抗体としては、従来既知の方法で１
ヤギ、ウサギなどの哺乳動物に上記ハブテン又は抗原を
免疫することによって得られた抗体く例えば、抗インス
リン抗体、抗α−フェトプロティンなど）が用いられる
。又、ハイブリドーマ法によって作成された抗体も同様
に使用できる。
また１免疫活性物質とペルオキシダーゼ結合物の結合形
態としては１共有結合があげられＳ種々の公知の方法、
例えばグルタルアルデヒドを架橋剤として免疫活性物質
のアミ７基とペルオキシダーゼのアミノ基を共有結合す
る方法（ＡｖｒａｍｅａＢ、Ｓ、 ｉ断し、アルデヒド
基を噂人後免疫活性物質のアミ７基とシップ塩基を作製
し結合式せる方法（ｌａ）ｃａｎθ。
態としては１共有結合があげられＳ種々の公知の方法、
例えばグルタルアルデヒドを架橋剤として免疫活性物質
のアミ７基とペルオキシダーゼのアミノ基を共有結合す
る方法（ＡｖｒａｍｅａＢ、Ｓ、 ｉ断し、アルデヒド
基を噂人後免疫活性物質のアミ７基とシップ塩基を作製
し結合式せる方法（ｌａ）ｃａｎθ。
Ｐ、 Ｋ、、 ＆ Ｔｈｗａｏｉ、 Ａ、 ｉ ｔＴ、
Ｍｉｓｔｏｃｈｅｍ、 Ｏｙｔｏｃｈｅｍ、 ２２：
１０８４−１０９１、（１９７４） ）などを用いて共
有結合を作ることができる。
Ｍｉｓｔｏｃｈｅｍ、 Ｏｙｔｏｃｈｅｍ、 ２２：
１０８４−１０９１、（１９７４） ）などを用いて共
有結合を作ることができる。
遊離のペルオキシダーゼあるいは共有結合しているペル
オキシダーゼの酵素活性は１過酸化水素と適当な発色剤
、例えば０−アミノフェノール）４−アミノアンチピリ
ン１フエノール、０−フェニレンジアミンなどを用い１
比色法によりその酵素活性を定量することが可能である
。
オキシダーゼの酵素活性は１過酸化水素と適当な発色剤
、例えば０−アミノフェノール）４−アミノアンチピリ
ン１フエノール、０−フェニレンジアミンなどを用い１
比色法によりその酵素活性を定量することが可能である
。
又八本発明の組成物はへ緩衝作用を有する任意成分を添
加しても良いし１生理食塩水濃度の塩化ナトリウムを添
加しても良い。緩衝剤としては１リン歇綾衝液）トリス
緩衝液などが用いられ、水性溶液のｐＨが６〜８に示す
ものが好ましい。水性組成物をＭ製する場合、各物質の
添加順序はとくに限定されない。
加しても良いし１生理食塩水濃度の塩化ナトリウムを添
加しても良い。緩衝剤としては１リン歇綾衝液）トリス
緩衝液などが用いられ、水性溶液のｐＨが６〜８に示す
ものが好ましい。水性組成物をＭ製する場合、各物質の
添加順序はとくに限定されない。
本発明による安定化されたペルオキシダーゼ組成物を用
いた有利な検査薬としては１免疫診断用試薬八特に酵素
免疫測定法があげられる０又九酵當免疫測定法以外の診
断薬として１例えばグルコースを定量するためのグルコ
ースオキシダーゼ法の試薬としても使用可能である。
いた有利な検査薬としては１免疫診断用試薬八特に酵素
免疫測定法があげられる０又九酵當免疫測定法以外の診
断薬として１例えばグルコースを定量するためのグルコ
ースオキシダーゼ法の試薬としても使用可能である。
以下に実疵例を楯げて本発明を説明するがＡ本Ｊ
発明１これら実弛例に限定されるものではない。
実施例 １
１．１．２− ）ジクロロ−１，２，２−トリフ０ロエ
タン１．５答に対し、家兎血清１容の割で混合）撹拌し
、３０００ｒ＊ｐ、ｍ にて遠心分離した上滑部分の
家兎血清１０谷址％と西洋ワサビペルオキシダーゼ（東
洋紡績株式会社製、グレード１−０）とポリエチレング
リコ−ルナ４０００（牛丼化学社製）５＊量対容量（Ｗ
／Ｖ ）％を含む０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（以下
０．０１ Ｍ Ｆ Ｂと略す）に溶解した。
タン１．５答に対し、家兎血清１容の割で混合）撹拌し
、３０００ｒ＊ｐ、ｍ にて遠心分離した上滑部分の
家兎血清１０谷址％と西洋ワサビペルオキシダーゼ（東
洋紡績株式会社製、グレード１−０）とポリエチレング
リコ−ルナ４０００（牛丼化学社製）５＊量対容量（Ｗ
／Ｖ ）％を含む０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩衝液（以下
０．０１ Ｍ Ｆ Ｂと略す）に溶解した。
対照例１として上記家兎血清を含むがポリエチレングリ
コール弁４０００を含まないものへ又対照例２としてポ
リエチレングリコール４４０００を含むが何も処理しな
い芝兎血渭を含むものを用意し１以下の酔業安定性試荻
に供した。又１西洋ワサビペルオキシダーゼの１ＪＪｋ
度（ｒｉ１各々、１．０μｆ／ｌ であった。各溶液
は、０．２２μｍ の滅菌ｐ過器で濾過し１５艷の殺菌
したビンにとり１４℃と４０°Ｃで貯蔵した。０ 、７
、１４ 、２１ 、２８日口の酵素安定性を臓べた。
コール弁４０００を含まないものへ又対照例２としてポ
リエチレングリコール４４０００を含むが何も処理しな
い芝兎血渭を含むものを用意し１以下の酔業安定性試荻
に供した。又１西洋ワサビペルオキシダーゼの１ＪＪｋ
度（ｒｉ１各々、１．０μｆ／ｌ であった。各溶液
は、０．２２μｍ の滅菌ｐ過器で濾過し１５艷の殺菌
したビンにとり１４℃と４０°Ｃで貯蔵した。０ 、７
、１４ 、２１ 、２８日口の酵素安定性を臓べた。
安定性は１４０°Ｃ貯蔵の酵素活性の４゛Ｃ貯蔵で示す
活性に対するパーセントで示した。
活性に対するパーセントで示した。
又１組成液の安定性は４℃で２ケ月）４ケ月１６ケ月１
９ケ月１１２ケ月と保存し１沈殿の形成を目視判定した
。
９ケ月１１２ケ月と保存し１沈殿の形成を目視判定した
。
尚、酵素活性は過敲化水ｆ、 Ｑ、ＱＱ％およびＯ−フ
エニレンジアミンニ塩截塩（以下ＯＰＤと略す）を３キ
省含むｐＨ５，０のシトレート・ホスフェート０゜１Ｍ
緩衝液００５−に上記各溶液を５０μｌ加え、室温、３
０分放置後１Ｎ硫瞭２．０−を加え、４９２ｎｍにて吸
光度を測定した。
エニレンジアミンニ塩截塩（以下ＯＰＤと略す）を３キ
省含むｐＨ５，０のシトレート・ホスフェート０゜１Ｍ
緩衝液００５−に上記各溶液を５０μｌ加え、室温、３
０分放置後１Ｎ硫瞭２．０−を加え、４９２ｎｍにて吸
光度を測定した。
その結果を第１表１第２表に示す。
第 １ 表 安定性（％）第２表 沈殿形
成の有無 判定−：沈殿の形威無し。
成の有無 判定−：沈殿の形威無し。
±：沈殿の形成わずかに認められる。
＋：〃 有る。
実施例 ２
ポリエチレングリコ−ルナ１０００ （牛丼化学社製）
について実店例１記載の方法で１安定性を調べた。ポリ
エチレングリコ−ルナ１０００の濃度は）８車量対容景
（Ｗ／Ｖ ）％とした。その結果を第３表１第４表に示
す。なお対照例１．２は実施例１における対照例１．２
と同様に配合した。
について実店例１記載の方法で１安定性を調べた。ポリ
エチレングリコ−ルナ１０００の濃度は）８車量対容景
（Ｗ／Ｖ ）％とした。その結果を第３表１第４表に示
す。なお対照例１．２は実施例１における対照例１．２
と同様に配合した。
第 ３ 表 安定性（％）
第 ４ 表 沈殿形成の有無
判定−二沈殿の形成無し。
±：沈殿の形成わずかに認められる。
＋：〃 有る。
実施例 ３゜
過ヨウ累敏塩削化法（Ｎａｋａｎｅ、’Ｐ、に、 、
＆ Ｋａｗａｏｉ、Ａ。：Ｊ。
＆ Ｋａｗａｏｉ、Ａ。：Ｊ。
Ｈｌｅｔｏｃｈｅｍ、 Ｏｙｔｏｃｈｅｍ、 ２２．１
８４０−１０９１．（１９７４） ）により家兎イムノ
グロブリンＧ（以下家兎１ｆＧと略す）と結合させた西
洋ワサビペルオキシダーゼをセファデックス（）−２０
０によるゲルｐ過で遊離のペルオキシダーゼを除去した
結合ペルオキシダーゼとゲルｐ過をかけず為遊離のペル
オキシダーゼと結合したペルオキシダーゼとが共存する
場合の各各について安定性ならびに沈殿形成を調べた。
８４０−１０９１．（１９７４） ）により家兎イムノ
グロブリンＧ（以下家兎１ｆＧと略す）と結合させた西
洋ワサビペルオキシダーゼをセファデックス（）−２０
０によるゲルｐ過で遊離のペルオキシダーゼを除去した
結合ペルオキシダーゼとゲルｐ過をかけず為遊離のペル
オキシダーゼと結合したペルオキシダーゼとが共存する
場合の各各について安定性ならびに沈殿形成を調べた。
すなわち、ポリエチレングリコール＋６０００（半回化
学社製）４車量対容景（Ｗ／Ｖ）％及び実施例１と同様
に処理した家兎血清１０答緻％を含む０．０５ ’Ｍリ
ン酸緩誦食塩水（以下０００５ Ｍ Ｐ Ｂ Ｓと略す
）に加えた場合と１対照例１として１上記組成からポリ
エチレングリコ−ルナ６０００だけを除いたもの為対照
例２として上記組成の家兎血清に代えて未処理の家兎血
清を用いたものについて、実施例１に記ａの操作法で一
、溶液中のペルオキシダーゼの安定性と沈殿形成の有無
を調べた。その結果を第５表１第６表に示す。
学社製）４車量対容景（Ｗ／Ｖ）％及び実施例１と同様
に処理した家兎血清１０答緻％を含む０．０５ ’Ｍリ
ン酸緩誦食塩水（以下０００５ Ｍ Ｐ Ｂ Ｓと略す
）に加えた場合と１対照例１として１上記組成からポリ
エチレングリコ−ルナ６０００だけを除いたもの為対照
例２として上記組成の家兎血清に代えて未処理の家兎血
清を用いたものについて、実施例１に記ａの操作法で一
、溶液中のペルオキシダーゼの安定性と沈殿形成の有無
を調べた。その結果を第５表１第６表に示す。
第 ５ 表 安定性Ｃ％）
判定−：沈殿の形成無し。
±：沈殿の形成わずかに認められる。
十：沈殿の形成有り。
＋：〃 強い。
実施例 ４
家兎血清と１０重量対容紡（Ｗ／ｖ）％の牛血清アルブ
ミン（フラクションＶ）をそれぞれ、１，１．２− ）
’） り０）Ｌｉ −１，，２，２−トリフロロエタ
ンヲ用いて＼血清蛋白液ｌ容に対し一％１，１．２−
）リクロル−１，２，２−）す７０田エタン１゜５容の
割で、混合撹拌し、３００ Ｏｒ、ｐ、ｍ。で遠心分離
し、上清の血清蛋白液を回収した。このように回収した
血清蛋白液を用いて１以下のペルオキシダーゼ液を調製
した。
ミン（フラクションＶ）をそれぞれ、１，１．２− ）
’） り０）Ｌｉ −１，，２，２−トリフロロエタ
ンヲ用いて＼血清蛋白液ｌ容に対し一％１，１．２−
）リクロル−１，２，２−）す７０田エタン１゜５容の
割で、混合撹拌し、３００ Ｏｒ、ｐ、ｍ。で遠心分離
し、上清の血清蛋白液を回収した。このように回収した
血清蛋白液を用いて１以下のペルオキシダーゼ液を調製
した。
実施例３で用いた家兄工Ｐσに結合している西洋ワサビ
ペルオキシダーゼとポリプロピレングリコール１ジオー
ルタイプ平均分子Ｍ ２ ｏ ｏ ｏ （和光純薬工業
社製）５重量対容鈑（Ｗ／Ｖ ）％、および１，１．２
トリクロロづ、２，２ ）リフロロエタンで処理した家
兎血清２容量％と、牛血清アルブミン１重量対容レンゲ
リコールを含まないもの、対照例ａとして）処理した血
清歯白質液のかわりに未処理の家兎血清＼牛血Ｙｎアル
ブミンを用いた場合のペルオキシダーゼの安定性と１４
℃での沈殿形成の有無を実施例１の方法で調べた結果を
第７表１第８表に示す。
ペルオキシダーゼとポリプロピレングリコール１ジオー
ルタイプ平均分子Ｍ ２ ｏ ｏ ｏ （和光純薬工業
社製）５重量対容鈑（Ｗ／Ｖ ）％、および１，１．２
トリクロロづ、２，２ ）リフロロエタンで処理した家
兎血清２容量％と、牛血清アルブミン１重量対容レンゲ
リコールを含まないもの、対照例ａとして）処理した血
清歯白質液のかわりに未処理の家兎血清＼牛血Ｙｎアル
ブミンを用いた場合のペルオキシダーゼの安定性と１４
℃での沈殿形成の有無を実施例１の方法で調べた結果を
第７表１第８表に示す。
判定−二沈殿の形成無し
±：わずかに沈殿の形成が認められる程度＋：沈殿の形
成有り ＋１−：大きな沈殿の形成が認められる手 続 補 正
書（自発） 昭和５８年６月１４日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 Ｌ 事件の表示 昭和５８年特許願第８３９２８号 ａ 発明の名称 安定な酵素組成物 ＆ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜二丁目２番８号 挿入する。
成有り ＋１−：大きな沈殿の形成が認められる手 続 補 正
書（自発） 昭和５８年６月１４日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 Ｌ 事件の表示 昭和５８年特許願第８３９２８号 ａ 発明の名称 安定な酵素組成物 ＆ 補正をする者 事件との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜二丁目２番８号 挿入する。
「実施例５
テトラクロロエチレン２容あるいは、トリクロロエチレ
ン２容に対し・家兎血清１の割で混合、攪拌し、３００
Ｑ ｒ、込ｍにて遠心分離した上清部分の家兎血清１
０容ｈ１％と西洋ワサビベルオキンダーゼ（東洋紡績株
式会社製、グレード１−ｃ）と１ポリエチレングリコー
ル＃４ｏＯＯ（牛丼化学社製）５重垢対容Ｊへ（Ｗ／Ｖ
）％を含むＯ，ＯＩＭリン酸緩衝生理食塩水（以下０
．ＯＬＭＰＢＳと略す。）に溶解した。対１１１例１と
してポリエチレングリコール＃４０００を含まないもの
、又、対照例２として、処理していない家兎血清を含む
もの、対照例３として、ポリエチレングリコール＃４０
００処理家兎血Ｚ″ｊを含まないものを用意し、実施例
１と同様な酵素安定化試験に供した。
ン２容に対し・家兎血清１の割で混合、攪拌し、３００
Ｑ ｒ、込ｍにて遠心分離した上清部分の家兎血清１
０容ｈ１％と西洋ワサビベルオキンダーゼ（東洋紡績株
式会社製、グレード１−ｃ）と１ポリエチレングリコー
ル＃４ｏＯＯ（牛丼化学社製）５重垢対容Ｊへ（Ｗ／Ｖ
）％を含むＯ，ＯＩＭリン酸緩衝生理食塩水（以下０
．ＯＬＭＰＢＳと略す。）に溶解した。対１１１例１と
してポリエチレングリコール＃４０００を含まないもの
、又、対照例２として、処理していない家兎血清を含む
もの、対照例３として、ポリエチレングリコール＃４０
００処理家兎血Ｚ″ｊを含まないものを用意し、実施例
１と同様な酵素安定化試験に供した。
結果を第９表、第１０表に示す。
第９表 安定性（％）
第１０表 沈殿形成の有無
判定ニー 沈殿の形成なし
± 沈殿の形成わずかに認められる
＋ 沈殿の形成が認められる。
Claims (3)
- （１） ペルオキシダーゼ１ハロゲン化炭化水素で抽
出処理した血清惨白質およびポリアルキレンゲリコール
を含む安定な酵素組成物。 - （２）ペルオキシダーゼが遊離状態のペルオキシダーゼ
および／あるいは結合状態のペルオキシダーゼであるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の安定な酵素
組成物。 - （３）結合状ＪＢのペルオキシダーゼがペルオキシダー
ゼと免疫活性物質との結合体であることを特徴とする特
許請求の範囲第２項記載の安定な酵素組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8392883A JPS59210885A (ja) | 1983-05-12 | 1983-05-12 | 安定な酵素組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8392883A JPS59210885A (ja) | 1983-05-12 | 1983-05-12 | 安定な酵素組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59210885A true JPS59210885A (ja) | 1984-11-29 |
| JPH0357751B2 JPH0357751B2 (ja) | 1991-09-03 |
Family
ID=13816254
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8392883A Granted JPS59210885A (ja) | 1983-05-12 | 1983-05-12 | 安定な酵素組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59210885A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0254172A2 (en) * | 1986-07-24 | 1988-01-27 | Miles Inc. | Enzyme-labeled antibody reagent with polyalkyleneglycol linking group |
| JPH03133378A (ja) * | 1989-07-19 | 1991-06-06 | Modrovich Ivan E | 被験体を安定化させて液体中でのその生物学的活性を保存する方法 |
-
1983
- 1983-05-12 JP JP8392883A patent/JPS59210885A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0254172A2 (en) * | 1986-07-24 | 1988-01-27 | Miles Inc. | Enzyme-labeled antibody reagent with polyalkyleneglycol linking group |
| JPH03133378A (ja) * | 1989-07-19 | 1991-06-06 | Modrovich Ivan E | 被験体を安定化させて液体中でのその生物学的活性を保存する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0357751B2 (ja) | 1991-09-03 |
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