JPS59205993A - 連続的発酵法による有機酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、連続的発酵法による有機酸の製造方法に調す
る。

発明の背景 微生物による有機化学薬品の製造は、発酵技術に熟達し
た技術者にとってよく知られている。

そのような発酵反応は、しばしば希薄水溶液中で各種の
生成物をもたらす。化学薬品をそれら相互からまた多量
の水から分ぞ「する費用が非常に条約となるので、発酵
による化学薬品の製造は、化石燃料源からの同様々化学
品の製造に匹敵し得なかった。しかしながら石油化石燃
料が次第に枯渇するに伴なって石油化学の供給原料、の
価格が次第に高騰したために、復活できる原料である炭
水化物を単純な有機化学品に転換しうるような発酵反応
に興味をよみがえらせた。

単一酸産生発酵反応（ｈｏｍｏａｃｉｄｏｇｅｎｉｃ　
ｆｅｒｍｅｎ−ｔａｔｉｏｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　）は
、発酵において単一の酸性化合物を生成せしめるがゆえ
に特に興味あるものである。これらの発酵によって得ら
れる生成物には、工業的に重要な酢酸および乳酸が包含
される。クロストリジウム・テルモアセチクテルモアセ
チクムと略記する）によるグルコースの発酵は、理論上
グルコース１モルからアセテート６モルを生成しうる故
に特に魅力がある。

これらの発酵反応の研究は、ゼイクス（Ｊ、Ｇ。

Ｚｅｔｋｕｓ）によって論評されている（　Ａｎｎ、Ｒ
ｅｖ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、３４．４２３−４６４（１９８
０）器間）。

上記論者は、化学薬品生成発酵を実施するのに有用な微
生物を分類した。これらは、３つの群に分類された：酸
産生菌（ａｃｉｄｏｇｅｎ）、溶媒産生菌（ｓｏｌｖｅ
ｎｔｏｇｅｎ）およびメタン産生菌（ｍ６ｔｈ−ａｎｏ
ｇｅｎ）がこれであシ、そ°れぞれ酸類、溶媒およびメ
タン″に定住する。酸産生菌のうちで、酢酸が乳酸かま
たは酪酸を産生する単一酸産生菌種が生成物の収量に関
して最も興味のあるものとして記述されている。

従って、これらの発酵反応を連続的方式で使用して酸を
製造する方法を開発することができるならば、かなりに
工業的意義のあるものとなるであろう。最近の文献にお
いて、ウオン（Ｇ、Ｙ。

Ｗａｎｇ）およびウオｙ　（ｆａｎｇ）によｐ　（Ｄ、
Ｔ、Ｃ９１７８゜Ｎａｔ、１０　ｎａｌ　Ａ　、　Ｃ、
ＩＥ　０Ｍｅ　ｅ　ｔ　ｌｎｇ、Ｌａｅ　Ｖｅｇａ　８
　、　ＮｅＶａｄａ　。

八ｕｇｕＳｔ、、１９８０参照）。寒天およびカラギナ
ンのゲルの中で耐熱性でかつ好気性の迅−酸産生バクテ
リア、Ｃ，テルモアセチクムを固定化する方法が記載さ
れた。酢酸の連続的製造のためのこのゲルの安定性を試
験するために、このゲルを使用してバッチ英、＠を繰返
して実施した。１ノツトル一時間当ｐ　２．２　ｇの割
合の酢酸生産率Ｕ／１−ｈｒ）が達成された。これは、
ノくンチ式発酵における細胞によって得られるＱ　、　
５ｆｌ／ｉ　−ｈｒを超える明らかな改善であるが、そ
れは未だ許容できない程低いものである。

連続的発酵法が工業的用途に受容されるためには、それ
は高い希釈＊知おいて操作され、なければならない。希
釈率は、反応器を通る発酵媒質の流′１・を反応器の容
積で割ることによって得られる哨である。更に、発酵が
高い希釈率において行なわれる場合には、容積生産末、
すなわち、規定の時間内に反応器の単位体積当り生成さ
れる生成物の量が多くなければならない。高い和訳率に
おいて実施することができ、し７かもすでに知られてい
る最良の方法のそわよりもはるかに大＠ガ容積生産率を
もたらす連続的発酵法がこの度本発明者らによって見出
さね、た、発明の概要 本発明によれば、洋−酸産生発酵反応によって有機酸を
連続的に製造する方法において、活性炭およびトウモロ
コシ穂軸粒からなる群から選ばれた支持物質の表面上で
生得する単一酸産生微生物の細胞上に炭水化ｖｌｌ液液
、上記酸を少くとも約５９／１．ｈｒの容積生産率にお
いて生成するのに有効なｐＨ１温度および希釈率の条件
下で通すことにより上記炭水化物溶液を発酵させるとと
（てよって上記酸を製造することを特徴とする前記有機
酸の連続的製造方法が提供される。

本発明の方法は、単一酸産生発酵反応によつて生産され
る有機酸の製造ＫＡしている、単一の酸がそのような発
酵の唯一の有機生成物である。このことは、１種より多
くの有機化合物を生成する他の酸産生発酵および溶剤産
生発酵とよい対照をなしている。

炭水化物を発酵せしめて主生成物として１種の酸をもた
らすいかなる微生物でも本発明の実施に使用するのに適
している。好適方微生物のチクム（Ｏｌｏｓｔｒｉａｉ
ｕｍ　ｆｏｒｍｉ’ｃｏａｃｅｔｉｃｕｍ）　、アセト
バクテリウム・ウーディ−（ＡｃｅｔＯｌ）ａＣｔｅｒ
ｉｕｍトトロフイクム（Ｃ！ｌｏｅｔｒｉｄｉｕｍ　ｔ
ｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉ　−’ｋｉｗｕｉ）お
よびラクトバチルス、デルブルエキイ（ＬＰＬｃｔｏｂ
ａｃｉｌｌｕｓ　ａｅＬｂｒｕｅｃｋｉｉ）がある。特
に好適な微生物は、グルコースをほとんど定量的々収量
で酢酸へと変換しうるＣ、テルモアセテクムである。　
□ 本発明の発酵法は、溶解された炭水化物、栄養素および
微生物の生長に必要な生長因子を含有する水溶液を含む
発酵培地において行なわれる。この培地は、使用前に熱
またはこの技術分野においてよく知られたその他の手段
によって滅菌され乙。

本発明の実施に使用される炭水化物は、使用された微生
物によって所望の酸に転化されるいかなる炭水化物でも
よい。大抵の微生物にとって、グルコースが有利な炭水
化物である。Ｃ。

テルモアセチクムの場合には、発酵は、グルコースの代
すにフルクトースまたはキシロースを用いても実施され
うる。

使用された特定の微生物によって要求される金属イオン
およびその他の生長因子の小濃度が発酵培地に添加され
る。更に、この培地のｐ）ｌは、微生物の生長に適した
範囲内に維持される。これは、培地に緩衝塩を添加する
ことによって達成されうる。

本発明の方法は、反応器内に保持された固体支持体の表
面上で生長する微生物の細胞を使用する連続的発酵の手
段によって実施されうる。

上記支持体は、細胞に対するすぐれた吸着能力を有し、
そして反応器を通して培地の適当な流れを可能にするい
かなる不活性物質でもよい。

活性炭、軽石およびトウモロコシの穂軸粒のような物質
が使用されうる。

細胞に対してすぐれた吸着能力を示しそして反応器を通
して発酵培地の適商な流れを可能にするいかなる活性炭
でも本発明の方法に適している、カルボン社（０ａｌｑ
Ｏｎ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ。

Ｐｉｔｔｓ７ｕｒｇｈ、Ｐｅｎｒ＋５ｙｌｖａｎｉａ、
ＵＳＡ　）から市販されているＯＰＧビンソバーグ活性
炭は、そのような適当な活性炭の１例である。

約１４ないし２０メツシユ（１，４１ｍｍないし０．８
４ｘｍの篩の目数を有する米国標準篩の太きさ）１＊：
はそれ風上のトウモロコノ穂軸粒もまた固定細胞発酵の
ための好適な支持体を提供しそして培地の所望の流れを
可能にする。支持体としてトウモロコシ墳軸粒を使用し
た場合の生産率は、活性炭を支持体として使用した場合
のそれと同穆度に良好であり、他の支持体を使用した場
合の生産率よりもはるかにすぐれていた。

トウモロコシ穂軸粒は、活性炭に比較してはるかに低廉
なので、大量の支持体物質が必要な場合には、重要な利
益をもたらす。更に、使用ずみのトウモロコシ穂軸粒は
、動物の飼料として好適である。このことは、発酵の完
了後の消耗した細胞支持体を処分するための経済的な方
法を提供する。

本発明の連続的発酵を実施するために使用される反応器
は、まず微生物の細胞を支持するために使用される固体
物質を充填される。次いで無菌の媒地が添刀■される。

最後に、この培地に微生物の生長しつつある培養菌が接
種される。

支持体物質、培地および接種物を含有する反応器は、こ
の反応器内に細胞がよく増殖するのに十分な時間の間培
養に付される。そのような細胞の生長は、培地の混濁度
の増加によって示される。

細胞の生長が十分に確立された場合には、反応器に培地
を通すことによって連続的発酵が行なわれる。酸の所望
の生産率を得るために、流−貸が調整される。培地の流
れの方向は、重大なことではないが、反応器を貫く上昇
流は、細胞の生物体唖の渦犬なビルドアップを防止し、
かつ液体の流れを促進するのに役立つ。

培養中および連続的発酵による酸の製造中の反応器の温
度は、約４５℃と約７・０℃との間の温度に維持される
。供給原料培地のｐ）Ｉは、この培地に適当な緩衝塩を
添加するととによって４．０と７．５との間に維持され
る。不発明の方法がＣ，テルモアセチクムを用いて炭水
化物を発酵することによって酢酸を製造するために使用
された場合には、供給培地の好ましいｐＨは、約６．７
と約７．４との間であり、そして好ましい温度は、約５
５℃と約６０℃との間である。反応器を通る培地の流量
は、毎時約０．０４ないし約３の希釈率を与えるように
調整される。

満足すべき連続的発酵においては、細胞は、一定の割合
で生成物を生成しつつある。酸が産生される鴫合には、
定常状態の条件は、一定のｐＨＫよって示される。また
、新区い細胞が形成されつつある割合は、細胞が反応器
から消失しつつある割合に舛しく、反応器内には一定数
の細胞が与えられる。そのような定常状態の条件は、５
４０ｎｍにおいて測定された一定の流出物の光学密度に
よって指示されうる。

本発明の明細書において使用される０希釈率”の用語は
、／　ｈｒで表わされる次元を有する、すでに指摘した
ように、この率は、培地の流量を反応器の全容積で割る
ことによって得られる。

ここで使用される「容積生産率」という用語は、１１当
９のｇ数で表わされた、反応器からの流出物中の酸の濃
度に煽釈率を掛けることによって得られる。容積生産率
の単位は、９／１）−ｈｒとして表わされる。

１昨酸およびグルコースの濃度は、高性能液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＯ）を使用して測定された。水素形
の陽イオン交換樹脂から０．００６ＮのＴ（２Ｓｏ、を
用いて＃離することによって各成分がクロマトグラフィ
ー分析された。溶離された成分は、示差屈折計によって
検出され、記録計上にプロットされ、そして電子式積分
器を用いて定量された。各成分の濃度を表わす曲線の下
の面積は、全面積の百分率として示されている。

一般的手順は″液体クロマトグラフィーによる炭水化物
混合物の分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｃａｒ’ｂｏ
ｈｙ−ｄｒａｔｅ　Ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｂｙ　Ｌｉｑｕ
ｉｄ、　Ｏｈｒｏｍａｔａｇｒａｐｈｙ）”なる論文（
Ａｍ、ＳｏＣ９Ｂｒｅｗ、Ｏｈｅｍ、Ｐｒｏｃ、、１９
７３゜ｐｐ、４５−４６参照）に記載されている。分離
は、バイオ−ラッド・ラボラドリース（Ｂｉｏ　−Ｒａ
ｄＬａ矛ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈｍｏｎａ、○ａ
’１ｉｆｏｒｎｉａ、、ＵＳＡ　）から市販されている
水素形の１フイートのＨＰＸ−８７カラム上で行なわれ
た。

本発明の手法も以下の例によって更に詳細に説明する。

例　　１ Ｃ５−２、Ａ’ｌＣ：０Ｎｏ３９．２８９の菌株を使用
した。この耐酸性の菌株は、５．８以下のｐＨを有する
培地中で生長するまで次第に低くなるｐＨにおける培地
中でウッド（Ｗｏｏｄ）菌株ＤＳＭ５２１を培養するこ
とによって得られた。後者の親株は、西ド・イツ国ゲッ
チンゲン（Ｇ５ｔｔｉｎｇ４）市のドイツチェ・ザムル
ング、７オン・ミクロオルガニスメン（Ｄｅｕｔｓｃｈ
ｅ　Ｓａｍｍ’ｌｕｎｇｖａｎ　Ｍｉ’ｋｒｏｏｒｐ；
ａ、ｎｉｓｍｅｎ　）からＤＳＭ５２１として入手しう
る。

微生物の培養に使用された培地は、次の組成を有するも
のであった： Ｂ　、ＮａＨＣＯ２１６，８ に２ＨＰ０．　　　　　　　　　　　７　、。

ＫＨ２ＰＯ４５，５ Ｃ９酵母エキス　　　　　　　　　　　　５．０トリプ
トン　　　　　　　　　　　　５・０（ＮＨ４）２Ｓ０
４　　　　　　　　　　　　１．０ＭｇＳＯ４，７８２
００，２５ Ｆ８（ＮＨ４）２　（ＳＯ４）２．６ＴｈＯＯ，ｏ　４
ｃｏ　（Ｎｏ　り２・６１（２００，０３ＮａＭＯＯ４
，２Ｈ２ｏ　　　　　　　　　　　　ｏ、ｏ　０２４レ
サズリン（０，２０／ｌ／１．００ｍ／’溶液）１，０
帷／ｅＡ、Ｂおよび０群の成分の溶液は、規定された組
成の培地をつくるために混合する前に別々に滅菌された
。次に培地１１当ジナトリウムチオグリコレート０゜５
ｇ、ニコチン酸５．６πりおよび痕跡塩の浴液１　？１
１’）、を添加した。上記の痕跡塩溶液は、次の組成を
有するものであった：痕跡塩溶液 エチレンジアミン四酢酸 ジナトリウム塩二水化物　　　　　　　　　　５・００
λ（ｎ　ＯＩ！　２４　Ｈ２０５。Ｃ１０Ｎ１３２Ｓｅ
０３　　　　　　　　　　　　　　　　０．２０Ｈ２Ｂ
Ｏ３０，１００ ＺｎＣ１２０，０５０ ＡＬＫ（ＳＯ２）　２・１２Ｈ２００，１０ＯＮｉ　０
４２．６Ｈ□ＯＯ，０２０ ＣｕＪ２−２Ｈ２００＋０１０ 培地の調製および試料の培養は、ノリス（、Ｔ、Ｒ，Ｎ
ｏｒｒｉｓ）およびリボンス（Ｄ、ＪＲ１’ｂｂｏｎｓ
）によって編集された６微生物学の方法”Ｐｒｅｓｓ、
Ｎｅｖｒ　Ｙｏｒｋ、１９６９　、、　ｐｐ、１　ｊ　
７−ｊ　３２１Ｃ記載されたハンゲート（Ｒ，Ｆｉ、Ｈ
ｕｎｇａｔｅ）の論文″′厳密な嫌気性菌の培養のだめ
のロール・チューブ法″（Ａ　Ｒｏｌｌ　Ｔｕｂｅ　Ｍ
ｅｔｈｏａ　ｆｏｒ　０ｕ１ｔ、１ｖａｔｉｏｎｏｆ　
５ｔｒｉｃｔ　Ａｎａｅｒｏｂｅｓ　）　’ｒｉｐよび
ミラー（Ｍｉコ−’１ｅｒ）およびウオリン（Ｗｏ’１
ｉｎ）により６応用微生物学”（ＡｐｐｌｏＭｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ、、２７．９８５（１９７４））に記載されて
いるような標準的な嫌気的技術を使用して実施された。

活性炭上に吸着されたＣ、テルロ８ｍｌの全容積を有す
るジャケット付きのカラム内に保持された微生物の細胞
と活性炭との混合物上に脱ガスされた発酵培地が連続的
に通された。

細菌細胞のための担体は、カルボン社（Ｏａｌｇ−Ｏｎ
　０Ｏｒｐｏｒａｔ　ｉｏｎ　、Ｐｉｔ　ｔｓｌ）ｕｒ
ｇｈ　、Ｐｅｎｎ　ｅｙｌｖａｎｉａ　）から市販され
ている１２〜１４メツシユ（１，６Ｂ闘ないし０．４２
曲の篩目の開きを有する米国標準篩の寸法）のＣＰＧビ
ツンバーグ活性炭であった。反応器には活性炭１１ｇが
充填されておシ、この活性炭は、蒸留水で湿１ｊ＋され
、そして反応器は次にオートクレーブ内で１２１℃およ
び１５ｐｓ１において２時間加熱することによって滅菌
された。滅菌嫌気性培地は、カラムを上方に向って通し
て活性炭を培地で飽和せしめた。すべての液体は、二酸
化炭岩の雰囲気下に訝かれた。

カラムがすべての培地成分で胞７ｆ１１されるまでに約
４５床容積の培地がカラムに通された。

５６℃で培養された培地中でＣ，テルモアセチクムの菌
株を６日間の引続り継代培養してよって活性炭床のため
の接種物を調製した、次に、２４時間培培養れた３代目
の継代培養基１２懺、を床の基体の中に注入した。ヒ記
培梼基を入れたカラムをとのカラムの・ンヤケットを循
環する温水によって５８℃に性情した。１２時間の培養
の後、カラムの頂部室にある培地の混濁度は、増殖の起
ったことを、示していた。次に、無菌の培地を２’、５
ｑΩ／ｈｒめ初期流量においてカラムを上方に向って通
した。担体に接触している細胞が担体に付着し、それに
よってそれらの急速な流出を防いでいることが観察され
た。流出液の５４０ｎｍにおける光学密度（０，Ｄ）　
、−ｘ　−ｐＨ、グルコース濃度および酢酸濃度を監視
した。実験の掃過中、種々の希釈率を得るために、培地
の流量を変えた。

種々の流量ておける容潰生産率を第１表に要約して示す
。Ｑ　、　５／ｈｒの希釈率において観察された６、０
．！９／１−ｈｒの最大容積生産実は、ＯＪルモアセチ
クムを用いた固定細胞反応器についての従来報告された
最良の容積生産率のほとんど３倍であった。その方法（
Ｗａ、ｎｇおよびＷａｎｇによる方法）においては、細
胞は、寒天またはカラギーナンのゲル中に固定されてい
た。

第１表 活性炭担体を使用した酢酸の生産率 ５．２５　　　７゜４　　　０．０９　　　１６．９　
　　　１．５５．３０　　　５．６　　　０．１４　　
　１６．１　　　　２．３５．８５　　　６．１　　　
　肌２８　　　１５，４　　　５．８４ｓ、４０　　　
４．２　　　０．５０　　　１１，９　　　　６．０例
　　２ 活性炭担体をトウ早ロコシ穂軸粒に換えたことを除いて
は、例１の一般的方法に従った。使用されたトウモロコ
シ穂軸粒は、アンダーソン社（Ｔｈｅ　Ａｎａｅｒｓｏ
ｎ’ｓ、Ｍａｕｍｅｅ、０ｈｉｏ、ＵＳＡ　）からグリ
ダトーオカブ、ｘ　（Ｇｒｉｔ　−ＯＣａｂｓ　）グレ
ード１４２゜として市販されている１４−２０メツシユ
（米国標漁篩の寸法）のものであった。実績の結果を第
′Ｍ表に示す。この固定細胞発酵のための担体としてト
ウモロコシ穂軸粒を使用した場合には、２．１／ｈｒの
希釈率において１４ｇ／１−ｈｒを超える容積生産率が
得られた。そのような容積生産率は、単−酸産生閾によ
る固定細胞発酵反応について従来観察されたいか々る容
積生産率をもはるかに超えている。

第■表 トウモロコシ穂軸粒担体を使用した酢酸の生産率５．６
　　　　４．２　　　　０．２９　　１３．４　　　　
３．９６．０　　　　　５．８　　　　　０．７４　　
　１０．２　　　　　　７．５５．９　　　　３，９　
　　１０．７５　　１０．４　　　　７．８６．４　　
　　　５．５　　　　　１，２　　　　　１０．２　　
　　１２．２６．９　　　　　２．８　　　　　２．１
　　　　　　７，１　　　　　１４．５比較試験１ 比較の目的で、担体として作用する他の固体物質を有し
ない細胞および培地のみを含有する撹拌機付き反応器に
おいて連続的発酵を行なった。発酵は、５８℃において
実施され、実験の経過中に例１におけると同様に流惜を
変えた。

０．２３／ｈｒの希釈率において１，７６ｊｉ／１−ｈ
ｒの最大容積生産率が観察された。約０．３以上の希釈
＊は、そのような系においては不可能である。

伺故ならば、より高い希釈率においては、細胞が反応器
から流出するからである。第■表に示された試験の結果
は、細胞支持体を有しない連続的反応器を使用する方法
は、本発明による方法におけるよりもずっと低い容積生
産率しかもたらさないととを示している。

第　■　表 細胞担体を有しないト祉拌俵付き反応器を使用した酢酸
の生産率 ６．７　　　７．４　　　０．２０　　　８，２　　　
　１．６６６、Ｂ　　　　７，０　　　０．２３　　　
７，６　　　　１．７６７．０　　　３＋４　　　０．
５０　　　４，９　　　　１．５０比較試験２ カラム内に面金するように切断された網状ポリウレタン
フォームで活性炭支持体を置換えたことを除いては、例
１の一般的方法に従った６使用したフオームは、長さ１
インチ当り２０個の小孔を有するスコツト・フィルター
・フオーム（Ｓｃｏｔｔ　Ｆｉｌｔｅｒ　Ｆｏａｍ）で
あった。それはスコツト・ペーパー・カンパニー社（Ｓ
Ｃｏｔｔ　ＰａｐθｒＣｏｍｐａｎｙ、Ｆｏａｍ　Ｄｉ
ｖｉｓｉｏｎ、Ｃｈｅｓｔｅｒ、Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎ
ｉａ。

ＵＥＩＡ’ｌから市販されている。試験の結果を第■の
細胞が吸着されている場合には、それらは、本発明の方
法において使用された担体上に吸着されている場合に比
較して酢酸のかなり低い容積生産率しかもたらさない、 第■表 楔状ポリウレタンフォーム担体を使用した酢酸の生産率
５．８　　４＋９　　　０＋１２　　１３．３　　　　
１．６６．４　　５，４　　　０．２８　　１０，１　
　　　２．８＆９　　２．５　　　　０．９６　　　４
，４　　　　４．２７．０　　２．４　　　　１．０　
　　　５．９　　　　３．９７．０　　２ｊ　　　　１
．１　　　　５．４　　　　３．７７．２　　１．４　
　　　’１９　　　　１．８　　　　３．４以上のよう
に、本発明疋従えば、従来技術による方法よりもすぐれ
ている単−酸家生反応によって有機酸の連続的製造の改
善された方法が捉供されたことは明らかである、特定の
具体例に関連して本発明を記載したが、以上の記述に基
づいて当簗者にとっては多くの選択、修正および改変が
可能であることは明らかであるや従って、そのような選
択、・多面および改変は、本発明の範囲内に包含される
ものである。

６１３−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　単−酸産生発Ｒ，反応（ｈｏｍｃａｃｉｄｏｇｅ
   ｎｉｃｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｒｅａ、ｃｔｉｏｎ
   　’）によって有機酸を連続的に製造する方法において
   、活性炭およびトウモロコシ穂軸粒からなる群から選択
   された支持体物質の表面上で生長する単一酸産生微生物
   の細胞上に炭水化物溶液を、上記酸を少くとも約５ｊｊ
   ／１．ｈｒＯ客積生産率においてＮ　Ｍするのに有効な
   ｐＨ１温度および希釈率の条件下で卸すことにより上記
   炭水化物溶液を発酵させることによって上記酸を製造す
   ることを特徴とする前記有機酸の連続的製造方法。 ２、　単一酸産生微生物がクロストリジウム・テルモア
   セチクＡ　（Ｃｏｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃｕｍ　）の
   １菌株であり酸が酢酸である特許請求の範囲第１項記載
   の方法。 ３、　クロストリジウム・テルモアセチクムの菌株がＡ
   Ｔ（！ＯＮｏ、３９．２’８９である特許請求の範囲第
   ２項記載の方法。 ４、　炭水化物溶液がグルコースの溶液である特許請求
   の範囲第６項記載の方法。 ５、　　ｐＨが約４．０と約７．５の間に保たれる特許
   請求の範囲第６項記載の方法。 ＆　温度が約４５℃と約７０℃との間に保たれる特許請
   求の範囲第３項記載の方法。 ｌ　希釈率が約０．４／ｈｒと約３／ｈｒとの間である
   特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８　炭水化物溶液を微生物の細胞上に通す前に脱ガス室
   を通過せしめる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、　４−酸産生微生物がラクトバシルス・デルプルエ
   キ−（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃ
   ’ｋｉｉ　）の１菌株でありそして酸が乳酸である特許
   請求の範囲第１項記載の方法。