JPS59196794A - 脱エンド・トキシン方法 - Google Patents
脱エンド・トキシン方法Info
- Publication number
- JPS59196794A JPS59196794A JP58068311A JP6831183A JPS59196794A JP S59196794 A JPS59196794 A JP S59196794A JP 58068311 A JP58068311 A JP 58068311A JP 6831183 A JP6831183 A JP 6831183A JP S59196794 A JPS59196794 A JP S59196794A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecular weight
- endotoxin
- aqueous solution
- semipermeable membrane
- membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
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- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、水溶液、特に高分子物質を含む水浴液中から
エンド・トキシンを除去する方法に１３１するものであ
る。
エンド・トキシンを除去する方法に１３１するものであ
る。
パイロジエンと総称される発熱性物質の実ｊπは必ずし
も充分明らかではないが、その主成分は微生物の破片で
あるエンド・トキシンとされている。
も充分明らかではないが、その主成分は微生物の破片で
あるエンド・トキシンとされている。
注射用医薬中にいったんエツト・トキシンが混入すると
その除去は困難であり、通常、その医薬は廃棄される。
その除去は困難であり、通常、その医薬は廃棄される。
従って、注射用液の成分は各々予め入念な脱エンドφト
キシン操作を受けるのが常である。しかしながら、注射
用に用いられる医薬品のうち、＜ＩＬ白質や多糖あるい
は合成高分子を主成分とするものは、脱エンド・トキシ
ンが比較的離しく、質重な医薬品が使用不可能になるこ
とが往々にしである。
キシン操作を受けるのが常である。しかしながら、注射
用に用いられる医薬品のうち、＜ＩＬ白質や多糖あるい
は合成高分子を主成分とするものは、脱エンド・トキシ
ンが比較的離しく、質重な医薬品が使用不可能になるこ
とが往々にしである。
エンド・トキシ／は膜分離法で分離・除去することが可
能であることは従来より知られておシ、実際には除エン
ド・トキシン用限外ｐ過膜が既に市販されている。この
限外濾過膜は公称分画分子量６Ｘ１０３［、ｉ度のもの
でらるが、この膜で例えば分子量１０４の蛋白質溶液を
濾過すると、膜透過液中にはエンド・トキシンは存在し
ないが、蛋白質も存在しない。すなわち、分子量１伊の
蛋白質はエンド・トキシンと共に除去されてしまう。従
ってこのような限外濾過ｊ摸では、蛋白質と工／ドφト
ギシンとの分離は望めない。
能であることは従来より知られておシ、実際には除エン
ド・トキシン用限外ｐ過膜が既に市販されている。この
限外濾過膜は公称分画分子量６Ｘ１０３［、ｉ度のもの
でらるが、この膜で例えば分子量１０４の蛋白質溶液を
濾過すると、膜透過液中にはエンド・トキシンは存在し
ないが、蛋白質も存在しない。すなわち、分子量１伊の
蛋白質はエンド・トキシンと共に除去されてしまう。従
ってこのような限外濾過ｊ摸では、蛋白質と工／ドφト
ギシンとの分離は望めない。
一般に限外濾過膜による沖過分離法では、巨大分子と低
分子の分、１７１′牡の場合の様に分子量の犬きく異な
った分子間では容易であるが、巨大分子間の分離はたと
えそれらの分子量がかなり異なっていても通常困難であ
る。例えば、血清アルブミンと血清グロブリンとの分Ｎ
ｌｒは１、単に両４の分子［＋［の中間にある限外濾過
膜を用いて濾過全行なっても実際上達成されず、傷一定
の条件で特定の限外沖過膜を用いたときはじめてＩ″Ｉ
］″［ｊヒであるとされている（％開昭５６−８１５２
１）。
分子の分、１７１′牡の場合の様に分子量の犬きく異な
った分子間では容易であるが、巨大分子間の分離はたと
えそれらの分子量がかなり異なっていても通常困難であ
る。例えば、血清アルブミンと血清グロブリンとの分Ｎ
ｌｒは１、単に両４の分子［＋［の中間にある限外濾過
膜を用いて濾過全行なっても実際上達成されず、傷一定
の条件で特定の限外沖過膜を用いたときはじめてＩ″Ｉ
］″［ｊヒであるとされている（％開昭５６−８１５２
１）。
本発明者達は、水（餐液、特に医薬用等に１史用される
高分子量物の水浴液の脱エンド・トキシンを限外ｐ過膜
法によって行なうことについて祝意研究した結果、エン
ド・トキシンが水ｆＧ？ｆｆ中、分画分子量１０５の膜
によって阻止されること及び意外にも、エンド・トキシ
の共存下において分子量１０５程度以下の高分子、特に
ｄオグロビノ等の蛋白質はこの膜全通過すること全発見
し、本発明を完成するに至った。
高分子量物の水浴液の脱エンド・トキシンを限外ｐ過膜
法によって行なうことについて祝意研究した結果、エン
ド・トキシンが水ｆＧ？ｆｆ中、分画分子量１０５の膜
によって阻止されること及び意外にも、エンド・トキシ
の共存下において分子量１０５程度以下の高分子、特に
ｄオグロビノ等の蛋白質はこの膜全通過すること全発見
し、本発明を完成するに至った。
本発明の方法で用いる限外ν過膜は分画分子ｈ４約１０
５のものである。
５のものである。
ここで分画分子量とは、その膜を用いて限外ｒ過を行な
ったとき、９５％以上が１５１１止される溶７１グ分子
の分子量の下限を意味する。この場合、標準物質として
蛋白質分子が用すられる。
ったとき、９５％以上が１５１１止される溶７１グ分子
の分子量の下限を意味する。この場合、標準物質として
蛋白質分子が用すられる。
分画分子量は決定法によって変化する場合が多いので、
ここでは標準物質として、ヒト血清アルブミン（分子ｇ
１６．７ Ｘ １０’ ）とヒト血清γ−グロプミ／
（分子１１（１，６ｘ １０’ ）を用い、膜性能を示
すことにする。
ここでは標準物質として、ヒト血清アルブミン（分子ｇ
１６．７ Ｘ １０’ ）とヒト血清γ−グロプミ／
（分子１１（１，６ｘ １０’ ）を用い、膜性能を示
すことにする。
ヒト血？ｉ￥アルブミンあるいはヒト血清γ−グロブミ
／の０．１俸生理食塩水浴液を用い、膜面ず多速度６
ｘ １０３ｓｅｃ−’前後で、膜透過速度が１５１７ｍ
２・ｈｒである時、ヒト血清アルブミンの阻止率５０〜
８０％、ヒト血清γ−グロブミ／の阻止率９７％以上を
示す膜は通常、分画分子量１×１０５を持つと考えて良
い。
／の０．１俸生理食塩水浴液を用い、膜面ず多速度６
ｘ １０３ｓｅｃ−’前後で、膜透過速度が１５１７ｍ
２・ｈｒである時、ヒト血清アルブミンの阻止率５０〜
８０％、ヒト血清γ−グロブミ／の阻止率９７％以上を
示す膜は通常、分画分子量１×１０５を持つと考えて良
い。
本発明で用いる限外ｐ過膜は、上述の分画分子量を示す
膜であれば格別の限定はないが、ポリエーテルスルホ／
、例えば反復単位 Ｈ３０ を有する重合体よりなる限外濾過膜が最も好ましい。
膜であれば格別の限定はないが、ポリエーテルスルホ／
、例えば反復単位 Ｈ３０ を有する重合体よりなる限外濾過膜が最も好ましい。
本発明の方法で脱エンド・トキシンを行なう除の水溶液
は、含有さ九る高分子量物、例えば蛋白質等の変性を起
こさない条件に調整される。またとの際の高分子量物の
濃度は、通常８ｔ／ｄｌ程度以下、好ましくは、ｓｒ／
ｄｇ程度以下である。本発明の方法はエンド・トキシン
以外の尚分子物質全台まない水溶液の脱エンド・トキシ
ン化にも適用できる。
は、含有さ九る高分子量物、例えば蛋白質等の変性を起
こさない条件に調整される。またとの際の高分子量物の
濃度は、通常８ｔ／ｄｌ程度以下、好ましくは、ｓｒ／
ｄｇ程度以下である。本発明の方法はエンド・トキシン
以外の尚分子物質全台まない水溶液の脱エンド・トキシ
ン化にも適用できる。
本発明の方法で脱エンド・トキシン化される水浴液の高
分子量物の分子量１は約１０Ｓ以下、好丑しくは６ ｘ
１０’程度以下である。よって例えば、合成高分子で
あれば、ポリエチレングリコールやデキストシンのうち
、この分子滑節ｔｉｌＪに入るものあるいは蛋白質であ
れば、α、β又はγ−型のインターフェロン、ウロキナ
ーゼ等注射用に多用される物質の水溶液の除エンド・ト
キシン化に適用可能である。
分子量物の分子量１は約１０Ｓ以下、好丑しくは６ ｘ
１０’程度以下である。よって例えば、合成高分子で
あれば、ポリエチレングリコールやデキストシンのうち
、この分子滑節ｔｉｌＪに入るものあるいは蛋白質であ
れば、α、β又はγ−型のインターフェロン、ウロキナ
ーゼ等注射用に多用される物質の水溶液の除エンド・ト
キシン化に適用可能である。
実際には、膜によって高分子量物は多少阻止されること
か一般的なので、膜透過液中の高分子量物濃度は原液に
比較して低くなる。しかし、これは例えば、分画分子量
の低い膜によって容易に濃縮できる。
か一般的なので、膜透過液中の高分子量物濃度は原液に
比較して低くなる。しかし、これは例えば、分画分子量
の低い膜によって容易に濃縮できる。
以下、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。
実施例１
エシェリヒア・コリ（像９里主裏組咀ｎ）ｏｌｌｌ：Ｂ
４及びザルモ不う・アボルスタ・エクイ（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ） （いずれも和
光紬薬■製のエンド・トキシン）各１ｍ９ｆそれぞれ無
エンド・トキシン水２００ ｍｌＫ’ＲＩ解し、エンド
・トキシンの水浴液全調製した。寸だ、水道水（エンド
・トキシンテスト＋各種エンド・トキシンの混合物を含
むと考えられる）２００ゴをも試料とした。
４及びザルモ不う・アボルスタ・エクイ（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ） （いずれも和
光紬薬■製のエンド・トキシン）各１ｍ９ｆそれぞれ無
エンド・トキシン水２００ ｍｌＫ’ＲＩ解し、エンド
・トキシンの水浴液全調製した。寸だ、水道水（エンド
・トキシンテスト＋各種エンド・トキシンの混合物を含
むと考えられる）２００ゴをも試料とした。
エンド・トキシンテストはリムルステストニよった。
これらのエンド・トキシンを含む試料を高密度ポリエチ
レンで裏打しブこポリエーテルスルポン製限外濾過膜（
分画分子量１ｘ１０５．東洋■Ｊ■工宅■製ＴＳ−１０
０）全通し濾過し、Ｉｉ’λ透過液１２〇−を回収した
。
レンで裏打しブこポリエーテルスルポン製限外濾過膜（
分画分子量１ｘ１０５．東洋■Ｊ■工宅■製ＴＳ−１０
０）全通し濾過し、Ｉｉ’λ透過液１２〇−を回収した
。
この膜はヒト血清アルブミン（０，１％生、１１！１！
Ｓ：粒を水浴液）に対する阻止率７０係、ヒト血７Ｈγ
−グロブミン（Ｉ］、１係生理食塩水浴液）に対する阻
止率は９８％であった。
Ｓ：粒を水浴液）に対する阻止率７０係、ヒト血７Ｈγ
−グロブミン（Ｉ］、１係生理食塩水浴液）に対する阻
止率は９８％であった。
濾過条件は、濾過膜面積６４ｃｍ２．ｆｉ過過圧０８ｋ
淑淑７ｍ”であった。得られた＋ｐｉ＞−ｓ過液からは
いずれもエンド・トキシンは検出されなかった。
淑淑７ｍ”であった。得られた＋ｐｉ＞−ｓ過液からは
いずれもエンド・トキシンは検出されなかった。
実施例２
ミオグロビン（分子量、１．８ Ｘ １０’、シグマ社
製）７５７ψとエシェリヒア・コリ０１１１：Ｂ４．１
ηと−ｉｉ７２００ｍｌの無エンド・トキシン水に箔解
し、試料とした。この溶液を実施例１と同様にして限外
濾過し膜透過液１２０ｍ１を得た。この液のミオグロビ
ン濃度は０．３６ ＋＋ｉｙ ／ ｍｅであり、−！だ
、この溶液からはエンド・トキシンは検出されなかった
。
製）７５７ψとエシェリヒア・コリ０１１１：Ｂ４．１
ηと−ｉｉ７２００ｍｌの無エンド・トキシン水に箔解
し、試料とした。この溶液を実施例１と同様にして限外
濾過し膜透過液１２０ｍ１を得た。この液のミオグロビ
ン濃度は０．３６ ＋＋ｉｙ ／ ｍｅであり、−！だ
、この溶液からはエンド・トキシンは検出されなかった
。
比較例１
ポリエーテルスルホンよりなる分画分子量１×１０５の
限外濾過膜に代えて、アクリロニトリルと塩化ビニルと
の共重合体からなる分画分子量６ｘ１０’の限外濾過膜
を用いて実施例２を繰り返した。得られた透過液からは
エンド・１キシンもミオグロビンも検出されなかった。
限外濾過膜に代えて、アクリロニトリルと塩化ビニルと
の共重合体からなる分画分子量６ｘ１０’の限外濾過膜
を用いて実施例２を繰り返した。得られた透過液からは
エンド・１キシンもミオグロビンも検出されなかった。
比較例２
分画分子量が１ ｘ １０’ であるほかは実施例１で
用いたと同様の膜（東洋留達工業（９）ａｉＡ、 Ｔ
Ｓ −１０ｏｏ）を用いて実施例２金繰り返しだ。透過
液はミオグロビンの他、エンド・トキシンを含んでいた
。
用いたと同様の膜（東洋留達工業（９）ａｉＡ、 Ｔ
Ｓ −１０ｏｏ）を用いて実施例２金繰り返しだ。透過
液はミオグロビンの他、エンド・トキシンを含んでいた
。
特許出願人 東洋會達工業株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１エンド・トキシンを含む水溶液を半透膜で濾過し
て、エンド・トキシンを除去する方法において、分画分
子量約１０Ｓの半透膜を用いて濾過を行なうことを特徴
とする脱エンド・トキシン方法。 （２） 用いる半透膜のヒト血清アルブミン（濃度０
．１％、生理食塩水溶液）に対する阻止率が５０ないし
８０チで、ヒト血清γ−グロプリ／（濃度０．１％、生
理食塩水浴液）に対する阻止率が９５チ以上でらる特許
請求の範囲第１項記載の脱エンド・トキシン方法。 （３） エンド・トキシンを含む水浴液が分子量６
ｘ １０’以下の筒分子の水浴液でアシ、半透膜によっ
て脱工７ド・トキノン化されたこの高分子の水溶液を得
るものである特許請求の範囲第１項又は第２項記、成の
脱工／ド・トキシン方法。 （４）分子量６ ｘ １０”以下の高分子が水浴性蛋白
質である特許請求の範囲第３ ｊｊｌ記載の脱エンド・
トキシン方法。 （５） ポリエーテルスルホンからなる半’ａ ｉＭ
’ｘ用いろ咎於獄り火の七づシ灼第１．雰に７ハし與
４Ｚの２ずれかの項記載の脱エンド・トキシン方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58068311A JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58068311A JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59196794A true JPS59196794A (ja) | 1984-11-08 |
Family
ID=13370135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58068311A Pending JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59196794A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0312104A2 (en) * | 1987-10-16 | 1989-04-19 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for removing pyrogens |
| JPH02102A (ja) * | 1987-09-11 | 1990-01-05 | Ares Serono Nv | 精製方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52102414A (en) * | 1976-02-25 | 1977-08-27 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Removement of endotoxin from biological fluid |
| JPS5681521A (en) * | 1979-12-10 | 1981-07-03 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Separation of blood serum and protein |
-
1983
- 1983-04-20 JP JP58068311A patent/JPS59196794A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52102414A (en) * | 1976-02-25 | 1977-08-27 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Removement of endotoxin from biological fluid |
| JPS5681521A (en) * | 1979-12-10 | 1981-07-03 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Separation of blood serum and protein |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02102A (ja) * | 1987-09-11 | 1990-01-05 | Ares Serono Nv | 精製方法 |
| EP0312104A2 (en) * | 1987-10-16 | 1989-04-19 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for removing pyrogens |
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