JPS59196794A - 脱エンド・トキシン方法 - Google Patents
脱エンド・トキシン方法Info
- Publication number
- JPS59196794A JPS59196794A JP58068311A JP6831183A JPS59196794A JP S59196794 A JPS59196794 A JP S59196794A JP 58068311 A JP58068311 A JP 58068311A JP 6831183 A JP6831183 A JP 6831183A JP S59196794 A JPS59196794 A JP S59196794A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecular weight
- endotoxin
- aqueous solution
- semipermeable membrane
- membrane
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、水溶液、特に高分子物質を含む水浴液中から
エンド・トキシンを除去する方法に１３１するものであ
る。
エンド・トキシンを除去する方法に１３１するものであ
る。
パイロジエンと総称される発熱性物質の実ｊπは必ずし
も充分明らかではないが、その主成分は微生物の破片で
あるエンド・トキシンとされている。
も充分明らかではないが、その主成分は微生物の破片で
あるエンド・トキシンとされている。
注射用医薬中にいったんエツト・トキシンが混入すると
その除去は困難であり、通常、その医薬は廃棄される。
その除去は困難であり、通常、その医薬は廃棄される。
従って、注射用液の成分は各々予め入念な脱エンドφト
キシン操作を受けるのが常である。しかしながら、注射
用に用いられる医薬品のうち、＜ＩＬ白質や多糖あるい
は合成高分子を主成分とするものは、脱エンド・トキシ
ンが比較的離しく、質重な医薬品が使用不可能になるこ
とが往々にしである。
キシン操作を受けるのが常である。しかしながら、注射
用に用いられる医薬品のうち、＜ＩＬ白質や多糖あるい
は合成高分子を主成分とするものは、脱エンド・トキシ
ンが比較的離しく、質重な医薬品が使用不可能になるこ
とが往々にしである。
エンド・トキシ／は膜分離法で分離・除去することが可
能であることは従来より知られておシ、実際には除エン
ド・トキシン用限外ｐ過膜が既に市販されている。この
限外濾過膜は公称分画分子量６Ｘ１０３［、ｉ度のもの
でらるが、この膜で例えば分子量１０４の蛋白質溶液を
濾過すると、膜透過液中にはエンド・トキシンは存在し
ないが、蛋白質も存在しない。すなわち、分子量１伊の
蛋白質はエンド・トキシンと共に除去されてしまう。従
ってこのような限外濾過ｊ摸では、蛋白質と工／ドφト
ギシンとの分離は望めない。
能であることは従来より知られておシ、実際には除エン
ド・トキシン用限外ｐ過膜が既に市販されている。この
限外濾過膜は公称分画分子量６Ｘ１０３［、ｉ度のもの
でらるが、この膜で例えば分子量１０４の蛋白質溶液を
濾過すると、膜透過液中にはエンド・トキシンは存在し
ないが、蛋白質も存在しない。すなわち、分子量１伊の
蛋白質はエンド・トキシンと共に除去されてしまう。従
ってこのような限外濾過ｊ摸では、蛋白質と工／ドφト
ギシンとの分離は望めない。
一般に限外濾過膜による沖過分離法では、巨大分子と低
分子の分、１７１′牡の場合の様に分子量の犬きく異な
った分子間では容易であるが、巨大分子間の分離はたと
えそれらの分子量がかなり異なっていても通常困難であ
る。例えば、血清アルブミンと血清グロブリンとの分Ｎ
ｌｒは１、単に両４の分子［＋［の中間にある限外濾過
膜を用いて濾過全行なっても実際上達成されず、傷一定
の条件で特定の限外沖過膜を用いたときはじめてＩ″Ｉ
］″［ｊヒであるとされている（％開昭５６−８１５２
１）。
分子の分、１７１′牡の場合の様に分子量の犬きく異な
った分子間では容易であるが、巨大分子間の分離はたと
えそれらの分子量がかなり異なっていても通常困難であ
る。例えば、血清アルブミンと血清グロブリンとの分Ｎ
ｌｒは１、単に両４の分子［＋［の中間にある限外濾過
膜を用いて濾過全行なっても実際上達成されず、傷一定
の条件で特定の限外沖過膜を用いたときはじめてＩ″Ｉ
］″［ｊヒであるとされている（％開昭５６−８１５２
１）。
本発明者達は、水（餐液、特に医薬用等に１史用される
高分子量物の水浴液の脱エンド・トキシンを限外ｐ過膜
法によって行なうことについて祝意研究した結果、エン
ド・トキシンが水ｆＧ？ｆｆ中、分画分子量１０５の膜
によって阻止されること及び意外にも、エンド・トキシ
の共存下において分子量１０５程度以下の高分子、特に
ｄオグロビノ等の蛋白質はこの膜全通過すること全発見
し、本発明を完成するに至った。
高分子量物の水浴液の脱エンド・トキシンを限外ｐ過膜
法によって行なうことについて祝意研究した結果、エン
ド・トキシンが水ｆＧ？ｆｆ中、分画分子量１０５の膜
によって阻止されること及び意外にも、エンド・トキシ
の共存下において分子量１０５程度以下の高分子、特に
ｄオグロビノ等の蛋白質はこの膜全通過すること全発見
し、本発明を完成するに至った。
本発明の方法で用いる限外ν過膜は分画分子ｈ４約１０
５のものである。
５のものである。
ここで分画分子量とは、その膜を用いて限外ｒ過を行な
ったとき、９５％以上が１５１１止される溶７１グ分子
の分子量の下限を意味する。この場合、標準物質として
蛋白質分子が用すられる。
ったとき、９５％以上が１５１１止される溶７１グ分子
の分子量の下限を意味する。この場合、標準物質として
蛋白質分子が用すられる。
分画分子量は決定法によって変化する場合が多いので、
ここでは標準物質として、ヒト血清アルブミン（分子ｇ
１６．７ Ｘ １０’ ）とヒト血清γ−グロプミ／
（分子１１（１，６ｘ １０’ ）を用い、膜性能を示
すことにする。
ここでは標準物質として、ヒト血清アルブミン（分子ｇ
１６．７ Ｘ １０’ ）とヒト血清γ−グロプミ／
（分子１１（１，６ｘ １０’ ）を用い、膜性能を示
すことにする。
ヒト血？ｉ￥アルブミンあるいはヒト血清γ−グロブミ
／の０．１俸生理食塩水浴液を用い、膜面ず多速度６
ｘ １０３ｓｅｃ−’前後で、膜透過速度が１５１７ｍ
２・ｈｒである時、ヒト血清アルブミンの阻止率５０〜
８０％、ヒト血清γ−グロブミ／の阻止率９７％以上を
示す膜は通常、分画分子量１×１０５を持つと考えて良
い。
／の０．１俸生理食塩水浴液を用い、膜面ず多速度６
ｘ １０３ｓｅｃ−’前後で、膜透過速度が１５１７ｍ
２・ｈｒである時、ヒト血清アルブミンの阻止率５０〜
８０％、ヒト血清γ−グロブミ／の阻止率９７％以上を
示す膜は通常、分画分子量１×１０５を持つと考えて良
い。
本発明で用いる限外ｐ過膜は、上述の分画分子量を示す
膜であれば格別の限定はないが、ポリエーテルスルホ／
、例えば反復単位 Ｈ３０ を有する重合体よりなる限外濾過膜が最も好ましい。
膜であれば格別の限定はないが、ポリエーテルスルホ／
、例えば反復単位 Ｈ３０ を有する重合体よりなる限外濾過膜が最も好ましい。
本発明の方法で脱エンド・トキシンを行なう除の水溶液
は、含有さ九る高分子量物、例えば蛋白質等の変性を起
こさない条件に調整される。またとの際の高分子量物の
濃度は、通常８ｔ／ｄｌ程度以下、好ましくは、ｓｒ／
ｄｇ程度以下である。本発明の方法はエンド・トキシン
以外の尚分子物質全台まない水溶液の脱エンド・トキシ
ン化にも適用できる。
は、含有さ九る高分子量物、例えば蛋白質等の変性を起
こさない条件に調整される。またとの際の高分子量物の
濃度は、通常８ｔ／ｄｌ程度以下、好ましくは、ｓｒ／
ｄｇ程度以下である。本発明の方法はエンド・トキシン
以外の尚分子物質全台まない水溶液の脱エンド・トキシ
ン化にも適用できる。
本発明の方法で脱エンド・トキシン化される水浴液の高
分子量物の分子量１は約１０Ｓ以下、好丑しくは６ ｘ
１０’程度以下である。よって例えば、合成高分子で
あれば、ポリエチレングリコールやデキストシンのうち
、この分子滑節ｔｉｌＪに入るものあるいは蛋白質であ
れば、α、β又はγ−型のインターフェロン、ウロキナ
ーゼ等注射用に多用される物質の水溶液の除エンド・ト
キシン化に適用可能である。
分子量物の分子量１は約１０Ｓ以下、好丑しくは６ ｘ
１０’程度以下である。よって例えば、合成高分子で
あれば、ポリエチレングリコールやデキストシンのうち
、この分子滑節ｔｉｌＪに入るものあるいは蛋白質であ
れば、α、β又はγ−型のインターフェロン、ウロキナ
ーゼ等注射用に多用される物質の水溶液の除エンド・ト
キシン化に適用可能である。
実際には、膜によって高分子量物は多少阻止されること
か一般的なので、膜透過液中の高分子量物濃度は原液に
比較して低くなる。しかし、これは例えば、分画分子量
の低い膜によって容易に濃縮できる。
か一般的なので、膜透過液中の高分子量物濃度は原液に
比較して低くなる。しかし、これは例えば、分画分子量
の低い膜によって容易に濃縮できる。
以下、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。
実施例１
エシェリヒア・コリ（像９里主裏組咀ｎ）ｏｌｌｌ：Ｂ
４及びザルモ不う・アボルスタ・エクイ（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ） （いずれも和
光紬薬■製のエンド・トキシン）各１ｍ９ｆそれぞれ無
エンド・トキシン水２００ ｍｌＫ’ＲＩ解し、エンド
・トキシンの水浴液全調製した。寸だ、水道水（エンド
・トキシンテスト＋各種エンド・トキシンの混合物を含
むと考えられる）２００ゴをも試料とした。
４及びザルモ不う・アボルスタ・エクイ（Ｓａｌｍｏｎ
ｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ） （いずれも和
光紬薬■製のエンド・トキシン）各１ｍ９ｆそれぞれ無
エンド・トキシン水２００ ｍｌＫ’ＲＩ解し、エンド
・トキシンの水浴液全調製した。寸だ、水道水（エンド
・トキシンテスト＋各種エンド・トキシンの混合物を含
むと考えられる）２００ゴをも試料とした。
エンド・トキシンテストはリムルステストニよった。
これらのエンド・トキシンを含む試料を高密度ポリエチ
レンで裏打しブこポリエーテルスルポン製限外濾過膜（
分画分子量１ｘ１０５．東洋■Ｊ■工宅■製ＴＳ−１０
０）全通し濾過し、Ｉｉ’λ透過液１２〇−を回収した
。
レンで裏打しブこポリエーテルスルポン製限外濾過膜（
分画分子量１ｘ１０５．東洋■Ｊ■工宅■製ＴＳ−１０
０）全通し濾過し、Ｉｉ’λ透過液１２〇−を回収した
。
この膜はヒト血清アルブミン（０，１％生、１１！１！
Ｓ：粒を水浴液）に対する阻止率７０係、ヒト血７Ｈγ
−グロブミン（Ｉ］、１係生理食塩水浴液）に対する阻
止率は９８％であった。
Ｓ：粒を水浴液）に対する阻止率７０係、ヒト血７Ｈγ
−グロブミン（Ｉ］、１係生理食塩水浴液）に対する阻
止率は９８％であった。
濾過条件は、濾過膜面積６４ｃｍ２．ｆｉ過過圧０８ｋ
淑淑７ｍ”であった。得られた＋ｐｉ＞−ｓ過液からは
いずれもエンド・トキシンは検出されなかった。
淑淑７ｍ”であった。得られた＋ｐｉ＞−ｓ過液からは
いずれもエンド・トキシンは検出されなかった。
実施例２
ミオグロビン（分子量、１．８ Ｘ １０’、シグマ社
製）７５７ψとエシェリヒア・コリ０１１１：Ｂ４．１
ηと−ｉｉ７２００ｍｌの無エンド・トキシン水に箔解
し、試料とした。この溶液を実施例１と同様にして限外
濾過し膜透過液１２０ｍ１を得た。この液のミオグロビ
ン濃度は０．３６ ＋＋ｉｙ ／ ｍｅであり、−！だ
、この溶液からはエンド・トキシンは検出されなかった
。
製）７５７ψとエシェリヒア・コリ０１１１：Ｂ４．１
ηと−ｉｉ７２００ｍｌの無エンド・トキシン水に箔解
し、試料とした。この溶液を実施例１と同様にして限外
濾過し膜透過液１２０ｍ１を得た。この液のミオグロビ
ン濃度は０．３６ ＋＋ｉｙ ／ ｍｅであり、−！だ
、この溶液からはエンド・トキシンは検出されなかった
。
比較例１
ポリエーテルスルホンよりなる分画分子量１×１０５の
限外濾過膜に代えて、アクリロニトリルと塩化ビニルと
の共重合体からなる分画分子量６ｘ１０’の限外濾過膜
を用いて実施例２を繰り返した。得られた透過液からは
エンド・１キシンもミオグロビンも検出されなかった。
限外濾過膜に代えて、アクリロニトリルと塩化ビニルと
の共重合体からなる分画分子量６ｘ１０’の限外濾過膜
を用いて実施例２を繰り返した。得られた透過液からは
エンド・１キシンもミオグロビンも検出されなかった。
比較例２
分画分子量が１ ｘ １０’ であるほかは実施例１で
用いたと同様の膜（東洋留達工業（９）ａｉＡ、 Ｔ
Ｓ −１０ｏｏ）を用いて実施例２金繰り返しだ。透過
液はミオグロビンの他、エンド・トキシンを含んでいた
。
用いたと同様の膜（東洋留達工業（９）ａｉＡ、 Ｔ
Ｓ −１０ｏｏ）を用いて実施例２金繰り返しだ。透過
液はミオグロビンの他、エンド・トキシンを含んでいた
。
特許出願人 東洋會達工業株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１エンド・トキシンを含む水溶液を半透膜で濾過し
て、エンド・トキシンを除去する方法において、分画分
子量約１０Ｓの半透膜を用いて濾過を行なうことを特徴
とする脱エンド・トキシン方法。 （２） 用いる半透膜のヒト血清アルブミン（濃度０
．１％、生理食塩水溶液）に対する阻止率が５０ないし
８０チで、ヒト血清γ−グロプリ／（濃度０．１％、生
理食塩水浴液）に対する阻止率が９５チ以上でらる特許
請求の範囲第１項記載の脱エンド・トキシン方法。 （３） エンド・トキシンを含む水浴液が分子量６
ｘ １０’以下の筒分子の水浴液でアシ、半透膜によっ
て脱工７ド・トキノン化されたこの高分子の水溶液を得
るものである特許請求の範囲第１項又は第２項記、成の
脱工／ド・トキシン方法。 （４）分子量６ ｘ １０”以下の高分子が水浴性蛋白
質である特許請求の範囲第３ ｊｊｌ記載の脱エンド・
トキシン方法。 （５） ポリエーテルスルホンからなる半’ａ ｉＭ
’ｘ用いろ咎於獄り火の七づシ灼第１．雰に７ハし與
４Ｚの２ずれかの項記載の脱エンド・トキシン方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58068311A JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58068311A JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59196794A true JPS59196794A (ja) | 1984-11-08 |
Family
ID=13370135
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58068311A Pending JPS59196794A (ja) | 1983-04-20 | 1983-04-20 | 脱エンド・トキシン方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59196794A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0312104A2 (en) * | 1987-10-16 | 1989-04-19 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for removing pyrogens |
| JPH02102A (ja) * | 1987-09-11 | 1990-01-05 | Ares Serono Nv | 精製方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52102414A (en) * | 1976-02-25 | 1977-08-27 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Removement of endotoxin from biological fluid |
| JPS5681521A (en) * | 1979-12-10 | 1981-07-03 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Separation of blood serum and protein |
-
1983
- 1983-04-20 JP JP58068311A patent/JPS59196794A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52102414A (en) * | 1976-02-25 | 1977-08-27 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Removement of endotoxin from biological fluid |
| JPS5681521A (en) * | 1979-12-10 | 1981-07-03 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Separation of blood serum and protein |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02102A (ja) * | 1987-09-11 | 1990-01-05 | Ares Serono Nv | 精製方法 |
| EP0312104A2 (en) * | 1987-10-16 | 1989-04-19 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for removing pyrogens |
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