JPS59193360A - 食細胞の標識方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、食作用を有する通常は血流中にある細胞の標
識に係る。特に本発明は、表面アミノ基を１１する小胞
（ｖｅｓｉｃｌｅ）の如き適当に標識したミセル粒子に
対する細胞の食作用を利用することにより、該細胞を標
識する方法を提供する。本発明の方法では、標識が食細
胞まで運搬されて、食細胞がこれらのミセル粒子をエン
ドサイト−シスにより取り込み、その結果標識が食細胞
中に捕捉される。

細胞を生物体内で追跡し且つ位置決定し得るように特定
の種類の細胞を標識する問題に関しては広範な技術が知
られている。放射活性標識特にガンマ線放射体、インジ
ウム−ＩＩＩ（Ｉｎ−ＩＩＩ）に関する技術水準を示す
最近の情況は、“インジウム−ｌｌｌ標識好中球、血小
板及びリンパ球（Ｉｎｄｉｕｍ−ｌｌｌ　Ｌａｂｅｌｅ
ｄ　Ｎｅｕｔｒｏｎｈｉｌｓ，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ　ａ
ｎｄＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）″、Ｐｒｏｃｅｅｄｊｎ
ｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＹａｌｅＳｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｎ
ｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ｃｉｔｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１９７
９年９月１４日及び１５日、ＴｒｉｖｉｒｕｍＰｕｂｌ
ｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１
９８０）に要約されている。

細胞を標識するためにしばしば使用されている一方法は
、標識すべき所望の細胞を単離し次いで該細胞にのみ標
識物質を与える方法である。もちろんこの方法は、所望
の細胞とこれに関連のある他の成分とを充分に分離する
必要があるという固有の欠点を有し、とどのつまり余分
な処理段階を構成する。血液から赤血球及び血漿への比
較的簡単な分離でさえも、該技術がインビボ診断に使用
され得るとはいえ、その実施には体外に於ける細胞の長
い滞留時間が必須であるので、厄介な段階である。他の
分離は、更に敏感である。例えば、リンパ球からは勿論
であるが好中球から血中単球を分離するのは特に困難で
ある（前記文献、５ページ）。８−ヒドロキシ−キノリ
ン（オキシン）で錯体化したインジウムを使用して細胞
へＩｎ−ｌｌｌを導入するために今日常用されている技
術は該細胞に対して非特異的であり、１種の細胞がター
ゲツトである場合には予備単離が必要である。

他の方法は、特定の型の細胞に対して優先的であること
が知られている特異的標識化剤を用いる方法である。他
の血液成分よりむしろ好中球の特異的結合には、３２ｐ
標識ジイソプロピルフルオロホスフエート（ＤＦ３２ｐ
）を使用する例がある（前記文献、１ページ）。しかし
ながら、前記試薬はベータ線放射体であるので、該標識
を用いるトレーサー法はインジウム−ｌｌｌを用いるい
ずれの方法よりも本質的に感度が低い。他の通常使用さ
れている標識は、クロム−５１、ガリウム−６７及びヨ
ウ素の放射性同位体を含む。これらの標識の全てには、
これらの公知の化学的結合形態が示す非特異性並びに他
の問題がある。

次に示す文献は、本発明の背景を示しており、これらを
引用することにより本明細書中に包含する： １、Ｂｕｒｌｅｓｏｎ．　Ｒ．　Ｉ．，　Ｊｏｈｎｓｏ
ｎ．　Ｍ．　Ｃ．　＆　Ｈｅｃａｄ．　Ｈ．　（１９７
３）Ａｎｎ．　Ｓｕｒｇ．，１７８，　４４６．Ｓｃｉ
ｎｔｉｇｒａｐｈｉｃ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ　
ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｂｓｃｃｓｓｅｓ　
ｗｉｔｈ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　Ｇａ　ｃｉｔｒａ
ｔｅ　ａｎｄ　Ｇａ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｂｌｏｏｄｌｕ
ｃｋｅｃｙｌｅｓ． ２．Ｂｕｒｌｅｓｏｎ．　Ｒ．　Ｉ．，　Ｊｏｈｎｓｏ
ｎ．　Ｍ．　Ｃ．　＆　Ｈｅｃａｄ．　Ｈ．　（１９７
４）Ｊ．Ｎｕｃｌ．　Ｍｃｄ．，１５，９８　Ｉｎｖｉ
ｔｒｏ　ａｎｄ　ｖｉｖｏ　ｌａｂｅｌｉｎｇ　ｏｆ　
ｒａｂｂｉｔｂｌｏｏｄ　ｌｕｃｋｅｃｙｌｅｓ　ｗｉ
ｔｈ　Ｇａ　ｃｉｔｒａｔｅ．３．Ｆｏｒｓｔｏｒｍ，
　Ｉ．，Ｉ．Ｇｏｍｅｚ，Ｂ．Ｗｅｉｂｌｅｎ，Ｄ．Ｈ
ｏｏｇｌａｎｄ，Ｊ．Ｍｃ　Ｃｕｌｌｏｕｇｈ　，　＆
　Ｍ．Ｌｏｋｅｎ（１９７８）Ｊ．Ｎｕｃｌ．　Ｍｅｄ
．，１９．６７２．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　
ｉｎｄｉｕｍ−１１１ｏｘｉｎｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｌ
ｕｃｋｅｙｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｒ　ａｂｓｃｃｓｓ
．４．Ｚａｋｈｉｒｃｈ，Ｂ．，Ｍ．Ｌ．Ｔｈａｋｕｒ
，Ｈ．Ｌ．Ｍａｌｃｃｈ．Ｍ．Ｓ．Ｃｏｈｅｎ，Ａ．Ｇ
ｏｔｔｓｃｈａｋ．＆　Ｒ．Ｋ．Ｒｏｏｔ（１９７０）
Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２０．７４１．Ｉｎｄｉｕｍ
　１１１　ｌａｂｅｌｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｐｏｌｙｍｏ
ｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　ｌｕｃｋｅｃｙｔｅｓ：　Ｖ
ｉａｂｉｌｉｔｙ，ｒａｎｄｏｍ　ｍｉｕｒａｔｉｏｎ
，ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ，ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　
ｃａｐａｃｉｔｙ，ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕ
ｒｅ．５．　Ｄｕｔｃｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｃ．Ａ．Ｓｃ
ｈｉｆｆｅｒ　＆　Ｇ．Ｓ．Ｊｏｈｏｎｓｏｎ（１９３
１）Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３０４，５８６．Ｒａ
ｐｉｄ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｄｉｕｍ−１
１１−ｌａｂｅｌｅｄｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ　ｔｏ
　ｓｉｔｅｓ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．６．　Ａｌ
ａｖｉ，Ｊ．Ｂ．，Ｍ．Ｍ．Ｓｔａｕｍ　＆　Ａ．Ａｔ
ａｖｉ（１９８０）“Ｉｎ　１１１　ｆｏｒｇｒａｎｕ
ｌｏｃｙｔｅ　ｌａｂｅｌｉｎｇ　ｉｎ　ｎｅｕｔｒｏ
ｐｅｎｉｃ　ｐａｔｉｅｎｔｓ”Ｉｎｄｉｕｍ−１１１
　ＬａｂｅｌｅｄＮｅｕｔｒｏｐｈｉｓ．　Ｐｔａｔｅ
ｔｅｔｓ　ａｎｄ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｅｄｓ．
　Ｍ．Ｌ．Ｔｈａｋｕｒ　＆ Ａ．Ｇｅｔｔｓｃｈａｌ
ｋ（Ｔｒｉｖｉｒｕｍ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．
，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）ｐｐ．４１−５０．７．　Ｆｏｒ
ｓｔｒｏｍ，　Ｌ．Ａ．，Ｂ．Ｊ．Ｗｅｉｂｌｅｎ，Ｌ
．Ｇｏｍｅｚ，Ｎ．Ｌ．Ａｓｃｈｅｒ，Ｄ．Ｒ．Ｈｏｏ
ｇｌａｎｄ，Ｍ．Ｋ．Ｌｏｋｅｎ，＆　Ｊ．Ｍｃ　Ｃｕ
ｌｌｏｕｇｈ　（１９８０）“Ｉｎｄｉｕｍ−１１１−
ｏｘｉｎｅ−ｌａｂｅｌｅｄ　ｌｕｃｋｅｔｅｓ　ｉｎ
　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｃｃｕｌｔｉ
ｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｄｉｓｃａｓｅ”ｉｎ　Ｉｎ
ｄｉｕｍ−１１１　Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｎｅｕｔｒｏｐｈ
ｉｓ，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓａｎｄ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔ
ｅｓ，ｅｄｓ．Ｍ．Ｌ．Ｔｈａｋｕｒ　＆　Ａ．Ｇｏｔ
ｔｓｃｈａｌｋ（ＴｒｉｖｉｒｕｍＰｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ　Ｃｏ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）ｐｐ．１２３−１４０
．８．　Ｇｏｏｄｗｉｎ．Ｄ．Ａ．，Ｐ．Ｗ．Ｄｏｈｅ
ｒｔｙ　＆　Ｉ．Ｒ．Ｍｃ　Ｄｏｕｇａｌｌ（１９８０
）“Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　Ｉｎ−１１１−
ｌａｂｅｌｅｄ　ｗｈｉｔｅ　ｃｅｌｌｓ：　Ａｎ　ａ
ｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　３１２ｃａｓｃｓ“ｉｎ　Ｉｎ
ｄｉｕｍ−１１１　Ｌａｂｅｌｅｄ　Ｎｅｕｔｒｏｐｈ
ｉｌｓ　Ｐｌａｔｅｔｓ　ａｎｄＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
ｓ，　ｅｄｓ，Ｍ．Ｌ．Ｔｈａｋｕｒ　＆　Ａ．Ｇｏｔ
ｔｓｃｈａｌｋ（ＴｒｉｖｉｒｕｍＰｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ　Ｃｏ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）ｐｐ．１３１−１５０
．９．　Ｔｈａｋｕｒ，Ｍ．Ｌ．，Ｊ．Ｐ．Ｌａｖｅｎ
ｄｅｒ　＆　Ｒ．Ｎ．　Ａｒｏｎｔ（１９７７）Ｊ．Ｎ
ｕｃｌ．Ｍｅｄ．，１８，１０１４．　Ｉｎｄｉｕｍ−
１１１−ｌａｂｅｌｅｄ　ａｕｔｏｌｏｇｕｓ　ｌｕｃ
ｋｏｃｙｔｅｓ　ｉｎｍａｎ． １０．　Ｍａｕｋ．Ｍ．Ｒ．，Ｒ．Ｃ．Ｇａｍｂｌｅ　
＆　Ｊ．Ｄ．Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｉｅｉｅｒ（１９８０
）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０７，３０９．Ｖｅｓｉｃｌｅ　
ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：Ｔｉｍｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ａｎ
ｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌｅｕｋ
ｏｃｙｔｅｓ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｂｙ　ｓｕｂｃｕ
ｔａｎｅｏｕｓ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．１１．　Ｍａｕ
ｋ．Ｍ．Ｒ．，Ｒ．Ｃ．Ｇａｍｂｌｅ　＆　Ｊ．Ｄ．Ｂ
ａｌｄｅｓｃｈｗｉｅｉｅｒ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７，４４３０．
Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄｖｅｓｉｃｌｅ
ｓ：Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｃａｒｈｏｈｙｄ
ｒａｔｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ　ｆ
ｏｒ　ｌｕｃｋｏｃｙｔｅｓｉｎ　ｍｉｃｅ． １２．　Ｗｕ．Ｐ．Ｓ．，Ｇ．Ｗ．Ｔｉｎ　＆　Ｊ．Ｄ
．Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｉｅｉｅｒ（１９８１）Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７８，２０３
３．Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｐｈｅｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｖ
ｅｓｉｃｌｅ　ｂｙ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．以後、前
記文献の引用は、括弧内に引用文献の番号を記載するこ
とにより行なう。

食細胞の追跡は、該細胞が感染及び膿瘍の部位に蓄積す
る傾向にあるので、特に重要である。現在では、毎年多
数の様々な腹部手術が創傷を修復するために及び矯正用
に行なわれているが、これは隼中治療を必要とする潜在
性感染を生起する。

また、移植臓器界面に於ける微細腫瘍の形成は、組織拒
絶の第一段階の指標である。もちろん、成る種の白血球
がこれらの感染部位に集積することは公知であり、また
これらの集積の検知を可能にするために白血球標識を使
用する試みもなされている（１，２）。公知技術は非特
異的であるので、潜在的感染を検出するために上記の如
き放射性標識技術を使用するには、患者から採血し、遠
心法により赤血球から白血球に富む血漿を分離し、該血
漿を例えばＩｎ−１１１オキシンと共にインキユベート
し、次いで標識血漿を患者に再注入することによる白血
球の予備分離を必要とする。患者のガンマ線画像化（ｉ
ｍａｇｉｎｇ）を使用して、感染部位に引き寄せられる
標識白血球の凝集を捜し出す（３，４，５）。

しかしながら、前記方法は、望ましくない位置でのＩｎ
−ｌｌｌの蓄積によるバツクグラウンド放射能があるの
で、他の試薬でみられたような非特異性の問題を解決し
ていない（６，７，８）。このように望ましくない位置
での蓄積が起こるのは。

Ｉｎ−ｌｌｌは第一の場で白血球のみに結合するわけで
はない（例えば赤血球にも結合する）ため、及び／又は
、前記分離もしくは標識工程でおこるキヤリア白血球の
損傷によりＩｎ−ｌｌｌの一部が肝、牌及び他の器官に
沈積するためである。更に、損傷した白血球による非標
的部位へのＩｎ−ｌｌｌのダンピング（集積）により、
これらの位置に放射能が保持されることになり、その結
果患者の放射能暴露が増加する（９）。

他の困難も在る。標識するために使用する試薬にさらさ
れた白血球の貧食能及び走化能の減少もまた、該方法の
有効性を減少させる（４，５）。

更に、血漿分離が必要であるので、患者の体外に於ける
白血球の２〜３時間の滞留時間という一般的欠点もある
。

本発明の方法は、患者の体外または注入のどちらによつ
ても、標識用キャリアとして小胞の如きミセル粒子を使
用して白血球を特異的に標識するためのより有用な方法
を提供することにより、前記困難を解消する。重要なこ
とに、本発明の方法は、部分もしくは完全分離が本発明
方法と相客れないわけではなく且つ或る場合には有利で
あり得るとしても、血液の種々の細胞型への分離を必要
としない。

本発明は、皮下接種した場合の多形核白血球の凝集を生
起し（１０，１１）且つインビトロでの腹腔マクロフア
ージによる貧食を増強する（１２）ためにミセル表面に
伸張アミン（ｅｘｔｅｎｄｅｄａｍｉｎｅ）を組み入れ
ることにより観察される性質を利用し且つ拡大する。

本発明の方法では、オキシンを使用するのではなく、ｌ
ｎ−ｌｌｌ（又は他の標識）を、白血球により貧食され
得るが他の細胞には結合もしくは他の方法で固定されな
いミセル粒子中に封入するか又は他の方法で該粒子と結
合させる。そうすることにより、食細胞内への標識の導
入が可能となり且つ促進されて、該食細胞は次に潜在性
感染部位を探し出しそこに集積する。小胞はミセル粒子
であるのが特に好ましい。

一態様によれば本発明は、標識を担持するミセル粒子を
与えることにより食作用を有する細胞を特異的に標識す
る方法に係り、キヤリアであろ該ミセルは食細胞に特異
的である。このようにして標識すると、これらの細胞は
潜在性感染の検知に特に有用である。他の態様によれば
本発明は、食細胞の標識、被検体への標識食細胞の注入
、及び集積部位に於ける標識細胞の存在の検知に係る。

本発明の特に好ましい実施態様によれば、表面上にアミ
ノサツカライドもしくは他の伸張アミンもしくはアミノ
部分（ａｍｉｎｏ　ｍｏｉｅｔｙ）を含有する小胞は、
放射線放出性カチオン例えばＩｎ＋３−ｌｌｌもしくは
他のガンマ怨放射体をもつており、これは小胞内への標
識の捕捉を可能にするカプセル化技術により得られる。

次いでこの処理済小胞を、インビトロ又は注入により、
白血球もしくは全血と共に、又はもちろん食細胞を含有
する適当な細胞もしくは細胞画分と共にインキユベート
する。キヤリアである小胞の走化性により白血球（ｌｅ
ｕｋｏｃｙｔｅｓ）の充分な特異性が得られ、他の成分
を犠牲にして白血球（ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌ
ｓ）の凝集を増強する。更に重要なことは、これらは所
望の食細胞により取り込まれて媒質中から除去される。

次いで、他の細胞に対する望ましくないいずれの会合を
も、高濃度の擬似アミン（ｍｉｍｉｃｉｎｇ　ａｍｉｎ
ｅｓ）を用いて平衝移動させることにより破壊すること
ができる。

本明細書で使用するとき、用語“食細胞”は、侵入物を
取り込むことのできる白血球（ｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄ　
ｃｅｌｌｓ，ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ）を表わす。白血球
に対しては、完全に相互に分けられたカテゴリーをもた
らす厳密な分類システムはないようである。

しかしながら、食作用を有するこれらの細胞は、好中球
、単球及び他のマクロフアージを含む。食細胞が、リン
パ球、血小板もしくは赤血球を含むとは思われていない
。本明細書では、食細胞が血流中を循環していてもまた
は特定臓器に於いてかなりの長さの実質的滞留時間を有
するにしても、外来物質を食い尽し得るいずれの細胞を
も包含させて“食細胞”という用語を使用する。

“ミセル粒子”及び“ミセル”は、両親媒性分子の凝集
に起因する粒子を意味する。本発明では、好ましい両親
媒性物質は生物学的脂質である。

“Ｎ小胞”は、一般に球型であり、二重層膜を形成する
脂質からしばしば得られ、“リボシーム”と呼ばれるミ
セルな意味する。これらの小胞を形成する方法は、現在
では同業者には極めて良く知られている。典型的には、
前記小胞はリン脂質例えばジステアロイル　ホスフアチ
ジルコリンもしくはレシチンから製造され、中性脂質の
如き他の物質並びに陽性もしくは陰性に帯電した化合物
の如き表面調節剤を含有し得る。これらの小胞製造の技
術によつて、エンベロープは、単純な二重層球型殻（中
層小胞．ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅ）で
あり得又はエンベロープ内に多重層を有し（多層小胞，
ｍｕｌｔｉ−１ａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅ）得る
。

“伸張アミン”は、小胞もしくは他のミセルの表面内に
組込もしくは会合出来る。アミン部分を有する分子を表
わし、これが該表面に組み込まれると、ミセルの表面か
ら約５〜１５Å好ましくは約１０Å伸びているアミン官
能基が得られる。適当な分子デザインは、小胞の二重層
内部に分子を固定するのに役立つ疎水性部と、少なくと
も温和な親水性であり且つ疎水性領域とアミン官能基と
の間の必要距離にわたつている結合部とから成るであろ
う。親水性は結合部が二重層内部に入つてしまうことを
防ぐために明らかに必要であり、このようにして表面か
らアミンが“伸張する”のに役立つ。本発明で満足のゆ
く伸張アミンの例は、例えば６−（５−コンステン−３
−イルオキシ）ヘキシル　６−アミノ−６−テオキシー
１−チオ−Ｄ−マンノ−ピラノシドの如き６−アミノマ
ンノース　コレステロール誘導体である。前記例では、
コレステロール部は疎水性部分を提供し、一方アミノマ
ンノースは比較的親水性である。他の実施態様もまた確
かに可能である：例えば、他のコレステロール誘導体に
結合した他のアミノ糖が、疎水性部及び親水性部の他の
実施態様として同様に適している。小胞もしくは他のミ
セルの表面に共有結合もしくは会合出来るポリアミン及
びポリアミノ酸もまた使用し得る。

“潜在性感染（ｏｃｃｕｌｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）
”は、体内に穏されていて表面検査では明らかにされな
い感染部位を意味する。

簡単にするために、ほとんどは常用されている次の略語
を本明細書中で使用する。便宜上、これらを次に示す： 化学物質名 ＤＳＰＣ＝ジステアロイル　ホスフアチジルコ　　　　
　リン； Ｃｈ＝コレステロール； ＡＭＳ＝６−アミノマンノース＝６−（５−コ　　　　
レステン−３−イルオキシ）へキシル　　　　−６−ア
ミノ−６−デオキシ−１−チ　　　　オ−Ｄ−マンノピ
ラノシド； ＡＭＬ＝６−アミノマンニトール、ＡＭＳの還　　　　
元型に対応する； Ａ２３１８７＝イオン透過担体（ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）
、　　　　〔６Ｓ−（２Ｓ＊３Ｓ＊，），８−（Ｒ＊，
９，１１〕−５−メチル　アミノ−２
−３，９，１１−トリメチル−８− 〔１−メチ
ル−２−オキソ−２− （１Ｈ−ビロール−２−
イル）３，９， １１−エチル〕−１，７−シオ
キサス ポロ（５，５〕ウンデス−２−イル〕
メチル−４−ベンゾキサゾールカルボ
ン酸； ＮＴＡ＝ニトリロ三酢酸； ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸； 粒子 ＰＭＮ＝多形核白血球； ＳＵＶ＝小さな単層小胞； 一般試薬 ＰＢＳ緩衝液＝５〜１０ｍＭ　ホスフエートから　　　
　　　　成り０．９係塩化ナトリウムを含有し特　　　
　　　　定のｐＨ通常は７．４に緩衝させたリン　　　
　　　　酸緩衝生理食塩水溶液。

前記の如く、本発明は、標識用キヤリアとして機能し特
異的作用を可能にするミセル粒子による食細胞の標識に
広く向けられている。リン脂質小胞が、本発明で使用す
るのに特に好ましい。小胞の製造方法及び使用について
は、次の本発明の好ましい実施態様に於いて示す。

本発明で使用するのに適する表面結合アミンを有する小
胞は、米国特許第４３１０５０５号明細書（引用して本
明細書中し包含する）中にも示されている様な同業者に
は公知の方法により製造される。基本的な小胞は、ＤＳ
ＰＣ、Ｌ−ジパルミトイルホスフアチジルコリン（ＤＰ
ＰＣ）もしくはあまり好ましくないがレシチンの如き他
のリン脂質、及び多くの場合はＣｈである中性脂質から
構成されている。小胞調製媒質中に含有される伸張アミ
ンは好ましくはＡＭＳもしくはＡＭＬであるが、伸張ア
ミンに対する前記基準を満足する他の化合物も使用し得
る。典型的調製では、ＤＳＰＣ　２０ｕｍｏｌ、Ｃｈ７
．５μｍｏｌ、Ａ２３１８７０．０４μｍｏｌ及びＡＭ
Ｓ２．５μｍｏｌを含有するクロロホルム溶液を窒素下
で蒸発乾固させ、更に真空下で一晩乾燥させる。次いで
得られた脂質フイルムをＰＢＳ緩衝液０．６ｍｌ（ＥＤ
ＴＡ　１ｍＭ含有、ｐＨ７．４）により水和し、チタン
のマイクロチツプを具備するヒートシステムソニケータ
−（Ｈｅａｔ　ＳｙｓｔｅｍＳｏｎｉｃａｔｏｒ）を用
いて１０分間窒素下で超音波処理をする。次いで生成物
を６０℃で１０分間アニールし、３００×Ｇに於ける遠
心により清澄化ずろ・残渣を捨て、小胞を含有する上澄
を３０×１．５ｃｍのＳｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ−５０カラ
ムを用いるクロマトグラフイにより未カプセル化ＥＤＴ
Ａから分離する。この様にして調製した小胞は１０００
Å未満の平均直径を有する。ＥＤＴＡ以外の錯化剤も使
用出来る。

本明細書中に引用して包含する米国特許第４３１０５０
６号明細書中に示されている方法により、小胞にＩｎ−
ｌｌｌを充填する。典型的には、インキユベーシヨン混
合物は、ＰＢＳ中の小胞５００μｌ、１０４ｍＭ　クエ
ン酸ナトリウム中の３．４μＭＩｎｃｌ３　３５ｕｌ（
ｐＨ７．４）及び２ｍＭＨＣｌ中のＩｎ３＋−ｌｌｌ　
１〜５０μｌから成る。（Ｉｎ３＋−ｌｌｌ溶液による
希釈は、等容量の二倍濃度のＰＢＳにより行なう。）Ｅ
ＤＴＡを添加して、取り込まれていないＩｎ＋３−ｌｌ
ｌを捕捉することにより充填を終了させる。

前記の如く好ましい実施態様では、本発明は、表面上に
取り込まれた伸張アミンを有する小胞好ましくはＳＵＶ
を用いる食細胞の特定的標識に係る。

伸張アミンを含有する表面を有する小胞を食細胞の標識
に適する物質を担持させるために充填し、次いで標識す
べき所望の食細胞を含有する溶液と混合する。小胞内に
取り込ませるために適する標識物質には、放射性物質特
にＩｎ−ｌｌｌ、Ｇａ−６７、Ｔｃ−９９Ｍ、Ｃｒ−５
１、ｌ−１２５の如きガンマ線放射体及び螢光を発する
もしくはインビトロで食細胞に適用して検知し得る物質
がある。食細胞は、全血の如き混合物中もしくは所望の
場合には血漿の如きより濃縮された形態で供給され得る
。

例えば血液をクエン酸デキストロースもしくはヘパリン
緩衝溶液と混合し、２５〜３９°好ましくは約３４〜３
７°で約３分〜１時間好ましくは約３０分インキユベー
トする。次いで、得られた標識食細胞は、所望の場合に
は、遠心により回収される。

試料溶液が食作用のない細胞を含有する場合、非特異的
、非貧食性のいずれの標識も、前記小胞の表面で使用さ
れたものと同一もしくは同様の性質を有する他の分子で
ある伸張アミンの溶液中の濃度を０．５〜３Ｍ好ましく
は約１Ｍにすることにより除去され得る。前記処理によ
り、食作用の無い細胞の表面に結合しており且つ小胞に
よつて取り込まれなかつたいずれの小胞をも、会合小胞
及び解離小胞との間の平街をシフトさせることにより解
離させ得る。次いで溶液は、標識食細胞を回収するため
に遠心沈降させる。可溶性物質と遊離小胞な含有する上
澄みを捨てる。

他の態様によると、本発明は潜在性感染を検知するため
に標識食細胞を使用することに係る。本発明方法に於い
ては、上記の如くして調製された小胞又は仙の標識され
たミセル粒子は食細胞を含有する溶液と混合されて、上
記の如くして標識食細胞が回収される。

次いで回収された細胞を再懸濁し、被検哺乳類に注入す
る。数時間径、被検体を、好ましくはガンマ放射線であ
る放射線を検知するようにデザインされた全身スキヤナ
ーを用いて検査する。全身像もしくは体の個々の部分を
走査することにより得られた像は、診断目的に使用し得
る。次いで感染部位を、高レベルの放射能を示す領域を
検知することにより捜し出す。

ターゲツトである食細胞に標識ミセルを組み込む他の方
法では、ミセルの等張緩衝懸濁液を静脈内へ注入する。

小胞の場合には、この方法は非貧食細胞表面に結合した
小胞な解離させるために平衡移動の使用を可能とはしな
い。しかしながら、表面の伸張アミンが付与する特異性
によつてバツクグラウンドは満足するレベルにまで充分
低くできる。

次の実施例は本発明を説明するためのものであり、本発
明を限定するものではない。

実施例Ｉ 放射標識小胞を表１に示す種々の血液製剤及びコントロ
ール溶液と共にインキユベートすることにより、白血球
による放射能の還択的摂取が示された。

本質的に小胞は、米国特許第４３１０５０５号及び第４
３１０５０６号明細書（これらの開示内容を本明細書中
に包含する）に記載の如くして、モル比：２：０．５：
０．５：０．００４のＤＳＰＣ、Ｃｈ、ＡＭＳ及びＡ２
３１８７から調製して充填した。小胞は１ｍＭＥＤＴＡ
の存在するＰＢＳ（ｐＨ７．４）中で超音波処理により
形成し、次いで脂質１０ｍｇ肖たり１ミリキユーリーの
Ｉｎ３＋−ｌｌｌを充填した。

ヒト血液（１０ｍｌ）を新たに抜き取り、ＰＢＳ中のヘ
パリン（１０００ＩＵ／ｍｌ）０．５ｍｌで安定化した
。洗浄した赤血球（ＲＢＣ）を、あらかじめ形成した７
０％Ｐｅｒｃｏｌｌ密度勾配装１０ｍｌを用いる分画遠
心法（８００×Ｇ）により調製した。洗浄した細胞を等
容量のＰＢＳ中に再懸濁した。血漿は単に遠心した全面
の上澄であつた。

インキユベーシヨン混合物の各々は、放射能標識小胞（
ＰＢＳ約０．１　ｍｌ中脂質１ｍｇ）及びＡ）ＰＢＳ　
２ｍｌ Ｂ）全血　　２ｍｌ Ｃ）洗浄し再懸濁したＲＢＣ　２ｍｌ Ｄ）血漿　　２ｍｌ のいずれかを含有していた。３７℃で３０分インキユベ
ーシヨンの後、各テスト混合物を予じめ形成した７０％
Ｐｅｒｃｏｌｌ密度勾配置１０ｍｌに入れ、８００×Ｇ
で遠心した。分画の後、ＲＢＣもしくは白血球を含有す
ると認められる両分（これらの細胞が現に存在していよ
うとなかろうと）を、ガンマ線活性について検定した。

結果を表１に示す。

　　　　　　　　表　　１ Ａ）ＰＢ８中小胞　　　　　　　　　　１．６Ｂ）小胞
＋全血　　　　　　　　　　３０．０Ｃ）小胞＋洗浄Ｒ
ＢＣ　　　　　　　　１．２Ｄ）小胞＋血漿　　　　　
　　　　　　２．７Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配が白血球画分（
Ａ）に活性の偏り（ｂｉａｓ）をもたらすことを、デー
タは示している。

（拡散効果の可能性があるけれども小胞は一様に分布す
る筈であるので、１．０の値が期待される。）小胞を洗
浄ＲＢＣ（Ｃ）もしくは血漿（Ｄ）と共にインキユベー
トすると、この偏りがより少なくなつた。

重要なことは、小胞が白血球（Ｂ）により容易に取り込
まれたことである。

実施例ＩＩ イヌの全血中に於ける白血球による小胞の取り込みを示
す。取り込まれた放射能レベルが高いだけでなく標識効
率も高い。

放射能標識小胞を実施例Ｉの如くして調製した。

新たに採取しヘパリンを添加したイヌ血液（２ｍｌ試料
）を、１０〜２５０ｕｇ脂質の範囲の種々の量の小胞と
共に３７℃で６０分間インキユベートした。続いて混合
物を遠心して、ベレツト中の細胞に結合した小胞を血漿
中の結合していない小胞から分離して、後者は捨てた。

新鮮血漿で再懸濁した細胞を、ピペツトで１ｇＵＳＰコ
ツトンで満たされている５ｃｃのシリンジに加えた。Ｐ
ＢＳ３０ｍｌで洗浄すると、寄食白血球は結合し、一方
ＲＢＣはカラムから溶出される。各画分におけるガンマ
線活性を測定した。結果は表２に示す。

　　　　　　　　表　　２ Ａ）　２５０　　３８　　３９ Ｂ）　１００　　３３　　６５ Ｃ）　　５０　　６７　　６８ Ｄ）　　１０　　２６　　４３ 選択的標識及び絶対的高レベルの標識の両方が、白血球
に対して可能であることが容易に明らかとなる。Ｉｎ−
オキシン標識法で現在使用されている容量である４０ｍ
ｌの血液を標識するために使用する脂質小胞が１ｍｇに
等しいことを条件（ｃ）が表わしていることに注意すべ
きである。典型的には。

１〜３ｍＣｉのＩｎ−ｌｌｌがガンマ綜画像化に使用さ
れる。脂質１ｍｇ当たり１ｍＣｉの特異活性レベルで小
胞は充填され、感染部位を画像化するために放射能標識
小胞を有する白血球の使用を可能にするには、前記量が
適当である。

同業者には、本発明が食細胞の検出を可能にするためま
たは他の目的のために使用出来るＩｎ−ｌｌｌ以外の試
薬で小胞もしくは他のミセルな充填することも包含する
ことは理解されよう。例えば、ベータ線放射体も治療学
的適用に使用できる。インビボで適用するだめの他の標
識には、好ましくは食細胞濃縮部位に達する抗体又は他
の生理的に活性な試薬が含まれる。また、本発明の方法
により得られる標識細胞は炎症性用損傷例えば移植拒絶
、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患及び腸感染、腎疾患
、同質性肺線維症、骨髄炎の治療に有用である。

第１頁の続き ■発　明　者　ローレンス・アーネスト・ウイリアムス アメリカ合衆国カリフオルニア ９１７７３サン・デイマス・ハンチ　　１イントン・ド
ライヴ２２４ （７）出　願　人　シテイ・オヴ・ホープ・ナシヨナル
・メデイカル・センター アメリカ合衆国カリフオルニア ９１０１０デユアート・イースト・ デユアート・ロード１４５０ ／ 手続補正書（方式） ％式％［］ ？　発明の名称　　　食細胞の樅１識１ノ法３　補止を
ηる者 事１！１との関係　　Ｊ’ｒ　；’Ｉ出願人名　称　　
　　ウ−［スター・リリーＪ・イン〕−ボレイデツド　
　　（（ｊ、か１ン′１）１、代　理　人　　　東京都
新宿区新宿月−口１′？ｒ１１４２シ　　山［１］ビル
（郵便番８１Ｇｏ）電話（０３）　　３．５７ｔ　　１
３Ｇ２３〕、補ｉＪ三指令σ）　Ｅｌ　（Ｊ　　１１ｒ
！和５９　イｔ４．　Ｊ］’Ｉ　ｌ］１、　　パ・−ル
ソン、アール、エル１．ジヨンソン、　エム。

シー、及びヘツド、エイチ、（１９７３）アンヌ、ザー
ク−１１７８、４４６，ｒ静脈内クエン（Ｈ６７Ｇ　ａ
及び６７Ｇａラベル血中白血球による実験的膿瘍のシン
チグラフイツクデモンストレーシヨンＪ　（Ｂｕｒｌｅ
ｓｏｎ。

Ｒ，Ｌ、、　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｍ、　Ｃ，＆　Ｈｅａ
ｄ、　Ｈ，（１９７３）ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ　ａｂｓｃｅｓｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｆｎｔｒａｖｅｎ
ｏｕｓ”Ｇａ　ｃｉｔｒａｔｅ　ａｈｄ　　Ｇａ　１ａ
ｂｅｌｅｄ　ｂｌｏｏｄｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　）。

２、ハールソン、アール、エル。ジヨンソン、エム。

シー及びヘツド、エイチ、（１９７４）９エイ、ヌクル
。

メト、、　１５．９８１−ウサギ血中白血球のクエン酸
６７Ｇａによるインヒドロ及びインビボラベル化」（Ｂ
ｕｒｌｅｓｏｎ＋　Ｒ，Ｌ、、　Ｊｏｈｎｓｏｎ、　Ｍ
、　Ｃ，＆　Ｈｅａｄ。

Ｈ，（１９７４）　Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、、　１
５．９８．　Ｉｎ　ｖｉｔｒ。

ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｌａｂｅｌｉｎｇ　ｏｆ　ｒ
ａｂｂｉｔ　ｂｌｏｏｄ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓｗｉｔ
ｂ　　　Ｇａ　ｃｉｔｒａｔｅ　）。

（′１）明到円中、第１ｏ頁ノシび第１１頁を別に］（
のｊ１力リン１１ｉ　ｉｔりる。

（２）出ムツ°）人の代表者を１．１；戟した崩ｊ１な
願７１：及σ、ワ汗状につぃ（゛は、本地１に関りる昭
和５９　イ１−３３月２ε３　［−１１ｆｊｌ″ｆ−絖
油ｊ［出（自発）゛に（ｉｒ’ｉ’出致しＪ、　し　）
、二　。

３ヤ　フオルストロム、エル０．エル、ゴメ：ｙ：、ヒ
−。

パイブレン、デイー、フツグランド、：）エイ。

マツカラー、及びエム、ロケン（１９７８）　：）エイ
。

に於けるインジウム−１１１オキシンで２−＜　／Ｉ−
した白血球の臨床用途Ｊ　（Ｆｏｒｓｔｒｏｒｎ＋　Ｉ
、、、　Ｌ、　Ｇｏｍｅｚ。

Ｂ、　Ｗｅｉｂｌｅｎ、Ｄ、　Ｈｏｏｇｌａｎｄ、　Ｊ
、　Ｍｃ　Ｃｕｌｌｏｕｇｈ、　＆Ｍ、　Ｌｏｋｅｎ　
（１，９７８）　Ｊ、　Ｎｕｃｌ、　Ｍｅｄ、、　１９
．６７２゜Ｃ１１ｎｉｃａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｉｎｄｉ
ｕｍ−１１１ｏｘｉｎｅ　１ａｂｅｌｅｄ］ｅｕｋｏｃ
ｙｔｃｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　
ｉｎｆｌａｍａｔｉｏｎｏｒ　ａｂｓｃｅｓｓ　）。

４、　ツアツギレー、ビー、ｌエム、エル、タクール。

工・イブ−、エル、マレツク、エム、ニス、コーエン。

エイ、ゴソチヨーク、及びアール、ケイ、ルート（１９
７９））エイ、ヌクル、メト、、２０，７４１「インジ
ウム−１１１−ラベルヒト多形核白血球：生存能力、ラ
ンダム遊走、走化性、殺菌能力及びＮｉ　ｆｉ改＃ＩＩ
目２°′＃造　Ｊ　　（ｚａｌｃｈｉｒｅｈ、　　Ｂ、
、　　Ｍ、Ｌ−Ｔｈａｋｕｒ。

Ｈ−Ｌ、Ｍａｌｅｃｈ、Ｍ−Ｓ−Ｃｏｈｅｎ、Ａ−Ｇｏ
ｔｔｓｃｈａｌｋ。

＆　Ｒ，Ｋ、　Ｒｏｏｔ　（１９７９）　　Ｊ、　Ｎｕ
ｃｌ、　Ｍｅｄ、、　　２０゜７４］、、Ｉｎｄｉｕｍ
　−１１２−１ａｂｅｌｅｄ　　ｈｕｍａｎｐｏｌｙｍ
ｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　：
　　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ。

ｒａｎｄｏｍ　ｍｆｇｒａｔｆｏｎ、　ｃｈｅｍｏｔａ
ｘｉｓ、　ｂａｃｔｅｒｆｃｉｄａｌｃａｐａｃｉｔｙ
、　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　）。

５、タツチャー、ジエイ、ピー９．シー、エイ、シツフ
ア−及びジー、ニス、：）ヨンソン（１９８１）メジウ
ム−１１１−ラベル顆粒球の感染部位への急速な遊走Ｊ
　（Ｄｕｔｃｈｅｒ、　Ｊ、　Ｐ、、　Ｃ，Ａ、　５ｃ
ｈｉｆｆｅｒ＆　Ｇ、　Ｓ、　Ｊｏｈｎｓｏｎ　（１９
８１）　Ｎ、　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、＋３０４、５
８６．　Ｒａｐｉｄ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎ
ｄｉｕｍ−１１１−１ａｂｅｌｅｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃ
ｙｔｅｓ　ｔｏ　５ｉｔｅｓ　ｏｆ　１ｎｆｅｃｔｉｏ
ｎ）。

６、　アラビ、ジエイ、ビー０．エム、エム、スタウム
エム、エル、タクール及びエイ、ゴツチヨーク編（トリ
ビルム　パブリツシング社、ニユーヨーク）４１〜５０
頁の［好中球減少症患者の顆粒球’ｉ　ヘ／Ｌ、用Ｉｎ
　−１１１Ｊ　（Ａｌａｖｉ　、　Ｊ、　Ｂ、、　Ｍ、
　Ｍ−Ｓｔｎｕｍ　＆　Ａ、　Ａｌａｖｉ　（１９８０
）　”　Ｉｎ　−１１３ｆｏｒｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ
　ｌａｂｅｌｉｎｇ　ｉｎ　ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉｃ　
ｐａｔｉｅｎｔｓ’　１ｎＧｏｔ、ｔＳｃｈａｌｋ　　
（’ｌ’ｒｉｖｉｒｕｍ　　Ｉ）ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　
（Ｊ：ｏ、、ＮｅｗＹｏｒｌｃ　）　ｐｐ、　４１−５
（１）。

７、　７−ｄルストロム、エル、エイ、ビー、シエイ。

パイブレン、工刀１．ゴメズ、エヌ、エル、アツシャ−
、デイー、アール、フツグランド、エム、ケイ、ロツク
ン及びジエイ、マツカラー（１９８０）。

及びリン／（到；、エム、エル、タクール及びエイ。

ゴソチー１−り編（トリビルム　／？パブリツシング社
ニユーヨーク）　１．２３−１４ｏ頁の［沿在性炎ｌｊ
′口：１のＦｔｌ（ｊ＋に於けるインジウム−１月−オ
キシ７−７４ル白血球Ｊ　（１；’ｏｒｓｔｒｏｎｉ＝
、　　Ｌ、　Ａ、、　Ｂ、　Ｊ。

Ｗｅｉｂｌｅｎ、Ｌ、Ｇｏｍｅｚ、Ｎ、Ｌ、Ａｓｃｈｅ
ｒ、Ｄ、Ｒ。

Ｈｏｏｇｌ、ａｎｄ、　Ｍ、　Ｋ、　Ｌｏｋｅｎ、　　
＆　　Ｊ、　ＭＣＣｕｌｌｏｕｇｈ（１９８０）　　”
　Ｉｎｄｊｕｍ−１１１−ｏｘｉｎｅ　−１ａｂｅｌｅ
ｄ１ｅｕｋｏｃｙｔ、ｅｓ　　ｉｎ　ｔｌｌｅ　ｄｉａ
ｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｏｃｃｕｌｔｅｄｓ、　　Ｍ、　
Ｌ、　Ｔｈａｋｕｒ　　＆　　Ａ、　ＧｏｔｔＳＣｈａ
ｌｋ（ＴｒｉｖｉｒｕｍＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、
、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）　ｐｐ、　１２３−１４０　
）。

８、　グツドウイン、デイー、エイ、、　ｌｔ！′−、
ダブリユー。

ドハテイ及びアイ、アール、マクドウガル（１９８０）
。

インジウム−１１１でラベルした好中球、血小板及及び
９７７８球、エム、エル　タクール及ヒエイ。

ボツチヨーク編（トリビルム　／Ｒブリツジング社、ニ
ユーヨーク）’　１３］　−１５０頁のｒＩｎ−１１１
−ラベル白血球の臨床上使用二３１２例の角′１′析」
（Ｇｏｏｄｗｉｎ、　Ｄ、　Ａ、ｌ　ｐ、　ｗ、　Ｄｏ
ｈｅｒｆ；ｙ　＆　　１．　Ｒ。

Ｍｅ　Ｄｏｕｇａｌｌ　（１９８０）　”　Ｃｌ１ｎｊ
ｃａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　Ｉｎ−１１１−１ａｂｅｌｅｄ
　　ｖ、ｒｈｉｔｅ　ｃｅｌｌｓ：　Ａｎ　ａｎａｌｙ
ｓｉｓ　ｏｆｅｄｓ、　Ｍ、　Ｌ、　Ｔｈａｋｕｒ　＆
　　Ａ、　　Ｇｏｔｔｓｃｈａｌｋ（Ｔｒｉｖｉｒｕｍ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ、、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　
）　ｐｐ、　１３］　−１５０）。

９、　タク＝−ル、エム６エル、ｌ：）エイ、ビー、　
ラベンダー及びアール、エヌ、アーノツト（１９７７）
ノウムー月１−ラベル自涼性白血球Ｊ　（Ｔｈａｋｕｒ
。

Ｍ、　Ｌ、＋　Ｊ、　］、’、　Ｌａｖｅｎｄｅｒ　＆
　Ｔ、＜、、　Ｎ、　Ａｒｎｏｔ−ｌｉｌ　　１ａｂｅ
ｌｅｄ　ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ　１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ
　１ｎｊｌｌａ、＋１　）。

１０、マウク、エム、アール０．アール、シー、キャン
プル及びジエイ、デイー、パルプシユピーラ−重化゛皮
下注射による白血球系に対するタイムリリース及び特異
性Ｊ　（Ｍａｕｋ、　Ｍ、　Ｒ，、Ｒ，Ｃ。

Ｑａｍｂｌｅ　＆　Ｊ、　Ｉ）、　Ｂａｌｄｅｓｃｈｗ
ｉｅｌｅｒ　　（］　９８０　）Ｓｃｉｅｎｃｅ、　　
２０７．　３０９．　　Ｖｅｓｉｃｌｅ　　ｔａｒｇｅ
ｔｉｎｇ　：Ｔｉｍｅ　　ｒｅｌｅａｓｅ　ａｎｄ　５
ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌｅｕｋｏｃ
ｙｔｅｓｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｂｙ　５ｕｂｃｕｔａｎ
ｅｏｕｓ　　１ｎｊｅｃｔｔｏｎ　）。

１１、マウク、エム、アール０．アール、シー、キャン
プル及びジエイ、デイー、パルデシピーラ−（１９８０
；ｌ、　　プロツ久ナトル、アカド、サイ。

米国、７７、４４３’０．　ｒ脂質小胞の標的化：マウ
スでの炭水化物受容体アナログの白血球に対する特異性
Ｊ　（Ｍａｕｋ、　Ｍ、　Ｒ，、Ｒ，Ｃ，Ｇａｍｂｌｅ
＆　Ｊ、　Ｄ、　Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｉｅｌｅｒ　（１
９８０）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　７７、
４４３０．　Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｏｆ　１ｉｐｉｄ　ｖ
ｅｓｉｃｌｅｓ　：　５ｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　
ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｎａｌ
ｏｇｕｅｓ　ｆｏｒ　１ｅｕｋｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍ
１ｃｅ　）。

１２、ブー、ビー、ニス、′、フジ−ダブリユー、チン
及びジエイ、デイー、パルデシピーラ−（１９８］）。

ブロツク、ナトル、アカド、ザイ、、米国、７８゜２０
３３、　ｒ炭水化物修飾リン脂質小胞のマクロフアーク
による食作用ｊ　（Ｗｕ、　Ｐ、　Ｓ、、　Ｇ、　Ｗ。

Ｔｉｎ　　＆　　Ｊ、　Ｄ、　Ｅａｌｄｅｓｃｈｗｉｅ
ｌｅｒ　（］９８１）　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ、　
　７８，２０３３．Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓｏｆ　ｃ
ａｒｌｉｏｈｙｄｒａｔｃｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｐｈｏｓ
ｐｈｏｌｉｐｉｄ　ｖｅｓｉｃｌｅｂｙ　ｒｎａｃｒｏ
ｐｈａｇｅ　）。

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. （１）食作用を有する細胞を、該細胞が標識ミセル粒子
   を取込むのに充分な時間、該標識ミセル粒子とインキユ
   ベートすることより成る食細胞の標識方法。
2. （２）細胞が白血球であることを特徴とする特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。
3. （３）ミセル粒子が小胞であることを特徴とする特許請
   求の範囲第２項に記載の方法。
4. （４）小胞がリボゾーム小胞であることを特徴とする特
   許請求の範囲第３項に記載の方法。
5. （５）ミセル粒子が該粒子の表面に伸張アミンを有する
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項乃至第４項のい
   ずれかに記載の方法。
6. （６）伸張アミンがアミノサツカライドであることを特
   徴とする特許請求の範囲第５項に記載の方法。
7. （７）アミノサツカライドが６−アミノマンノースであ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第６項に記載の方法
   。
8. （８）６−アミノマンノースが６−（５−コレスデン−
   ３−イルオキシ）ヘキシル６−アミノ−６−デオキシ−
   １−チオ−Ｄ−マンノピラノシドであることを特徴とす
   る特許請求の範囲第７項に記載の方法。
9. （９）標識が放射性元素であることを特徴とする特許請
   求の範囲第８項に記載の方法。
10. （１０）放射性元素がガンマ綜放射体であることを特徴
    とする特許請求の範囲第９項に記載の方法。
11. （１１）ガンマ線放射体がカチオンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第１０項に記載の方法。
12. （１２）カチオンがＩｎ＋３−ＩＩＩであることを特徴
    とする特許請求の範囲第１１項に記載の方法。
13. （１３）白血球が全血中にあることを特徴とする特許請
    求の範囲第２項乃至第４項のいずれかに記載の方法。
14. （１４）白血球が赤血球から分離されていることを特徴
    とする特許請求の範囲第２項乃至第４項のいずれかに記
    載の方法。
15. （１５）哺乳類被検体に於ける感染部位を検知する方法
    であつて、 ａ）食作用により放射標識ミセル粒子を取込むのに充分
    な時間白血球が食し得る該ミセル粒子と共にインキユベ
    ートすることにより標識した同種白血球を該哺乳類の血
    流中に入れ、 ｂ）ミセル粒子が放出する放射能の部位を検知する手段
    により前記被検体を走査することから成る前記の方法。
16. （１６）白血球が全血中にあることを特徴とする特許請
    求の範囲第１５項に記載の方法。
17. （１７）白血球が赤血球から分離されていることを特徴
    とする特許請求の範囲第１５項に記載の方法。
18. （１８）白血球が被検体から採血することにより得られ
    ることを特徴とする特許請求の範囲第１５項乃至第１７
    項のいずれかに記載の方法。
19. （１９）ミセル粒子が小胞であることを特徴とする特許
    請求の範囲第１８項に記載の方法。
20. （２０）小胞がリポゾーム小胞であることを特徴とする
    特許請求の範囲第１９項に記載の方法。
21. （２１）小胞が該小胞の表面に伸張アミンを有すること
    を特徴とする特許請求の範囲第２０項に記載の方法。
22. （２２）伸張アミンがアミノサツカライドであることを
    特徴とする特許請求の範囲第２１項に記載の方法。
23. （２３）アミツサツカライドが６−アミノマンノ−スで
    あることを特徴とする特許請求の範囲第２２項に記載の
    方法。
24. （２４）６−アミノマンノースが６−（５−コンステン
    −３−イルオキシ）ヘキシル　６−アミノ−６−デオキ
    シ−１−チオ−Ｄ−マンノピラノシドであることを特徴
    とする特許請求の範囲第２３項に記載の方法。
25. （２５）放射標識がガンマ線放射体であることを特徴と
    する特許請求の範囲第１５項乃至第１７項のいずれかに
    記載の方法。
26. （２６）放射標識がカチオンであることを特徴とする特
    許請求の範囲第２５項に記載の方法。
27. （２７）カチオンがＩｎ＋３−Ｉｌｌであることを特徴
    とする特許請求の範囲第２５項に記載の方法。
28. （２８）放射標識がガンマ線放射体であることを特徴と
    する特許請求の範囲第２１項に記載の方法。
29. （２９）ガンマ線放射体がカチオンであることを特徴と
    する特許請求の範囲第２８項に記載の方法。
30. （３０）カチオンがＩｎ＋３−ＩＩＩであることを特徴
    とする特許請求の範囲第２９項に記載の方法。