JPS59175440A - グラム陰性バクテリアのワクチン - Google Patents
グラム陰性バクテリアのワクチンInfo
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- JPS59175440A JPS59175440A JP59045764A JP4576484A JPS59175440A JP S59175440 A JPS59175440 A JP S59175440A JP 59045764 A JP59045764 A JP 59045764A JP 4576484 A JP4576484 A JP 4576484A JP S59175440 A JPS59175440 A JP S59175440A
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- gram
- detoxified
- polysaccharide
- protein
- negative bacteria
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/104—Pseudomonadales, e.g. Pseudomonas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/802—Antibody or antigen-binding fragment thereof that binds gram-positive bacteria
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- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、グラム陰性バクテリアに対する新規な無毒性
の免疫組成物及び新規なその製造法に関する。本発明の
特別な目的は緑膿菌（Ｐ ｓｅｕｄｏｍｏ−ｎａｓ ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の感染に対して効果のある免疫組
成物を製造することである。本発明の更なる目的は以下
の記述から明らかになるであろう。ここに本明細書にお
いて、部及び百分率は断らない限り重量によるものとす
る。
の免疫組成物及び新規なその製造法に関する。本発明の
特別な目的は緑膿菌（Ｐ ｓｅｕｄｏｍｏ−ｎａｓ ａ
ｅｒｕｇｉｎｏｓａ）の感染に対して効果のある免疫組
成物を製造することである。本発明の更なる目的は以下
の記述から明らかになるであろう。ここに本明細書にお
いて、部及び百分率は断らない限り重量によるものとす
る。
グラム陰性バクテリアは、１つのペプチドグリカンの薄
層によって隔離された２つの細胞包囲膜を有する。内側
の、即ち細胞形質膜は、すべての公知の活性な輸送系及
び細胞包囲酵素の多くを含んでいる。外側の膜は、独特
な成分リボ多糖類（脂質Ａ＋多糖類〉及び独特な蛋白質
の組合せが特色である。０抗原−特異的多糖類は、ある
バクテリアに血清学的特異性を与える。また脂質成分（
脂質Ａ）に結合した中心多糖類もグラム陰性バクテリア
に共通に存在する。これらの脂質Ａ、多糖類及び蛋白質
の複合体は抗原であり、また人間において毒性反応を示
し、従って内毒素として考えられている。
層によって隔離された２つの細胞包囲膜を有する。内側
の、即ち細胞形質膜は、すべての公知の活性な輸送系及
び細胞包囲酵素の多くを含んでいる。外側の膜は、独特
な成分リボ多糖類（脂質Ａ＋多糖類〉及び独特な蛋白質
の組合せが特色である。０抗原−特異的多糖類は、ある
バクテリアに血清学的特異性を与える。また脂質成分（
脂質Ａ）に結合した中心多糖類もグラム陰性バクテリア
に共通に存在する。これらの脂質Ａ、多糖類及び蛋白質
の複合体は抗原であり、また人間において毒性反応を示
し、従って内毒素として考えられている。
グラム陰性バクテリアからのリポ多糖類（ＬＰＳ）を含
むワクチンは、人間の感染に対する免疫のために使用さ
れてきた。このワクチンは死んだ細胞、細胞溶解質、又
は精製ＬＰＳを含んでいてよいが、その多くは有毒であ
った。
むワクチンは、人間の感染に対する免疫のために使用さ
れてきた。このワクチンは死んだ細胞、細胞溶解質、又
は精製ＬＰＳを含んでいてよいが、その多くは有毒であ
った。
緑Ｓ菌での感染は一般的な固体群の中で普通のものでは
ないけれど、ａ膿菌の感染はある敏感な患者群の場合に
非常にしばしば観察される。火傷の被害者及び免疫の抑
制されたガン患者は、ひどい時には致命的な緑膿菌の感
染を受けるという異常なほど高い危険性をもったものと
されてきた。
ないけれど、ａ膿菌の感染はある敏感な患者群の場合に
非常にしばしば観察される。火傷の被害者及び免疫の抑
制されたガン患者は、ひどい時には致命的な緑膿菌の感
染を受けるという異常なほど高い危険性をもったものと
されてきた。
緑膿菌の感染は普通家庭ではなくて病院に居るときに受
ける。
ける。
緑膿菌感染の患者を処置するために、抗生物質が使用さ
れてきた。しかしながら、抗生物質での処置は費用がか
かり、効果がしばしば不確かであり、微生物は抗生物質
に耐えて生長しつづける。
れてきた。しかしながら、抗生物質での処置は費用がか
かり、効果がしばしば不確かであり、微生物は抗生物質
に耐えて生長しつづける。
緑膿菌を含めて多くの病原バクテリアに対し、多くのワ
クチンが製造されてきた。例えば米国特許第４１５７３
８９号は、抗原として、感染−保護に普通の抗原、緑膿
菌から得られる原形の内毒素蛋白質、緑膿菌から得られ
るエラスターゼ類毒素と緑膿菌から得られるプロテアー
ゼ類毒素を含んでなる、緑膿菌によって引ぎ起こされる
感染に対して３成分混合ワクチンを開示している。
クチンが製造されてきた。例えば米国特許第４１５７３
８９号は、抗原として、感染−保護に普通の抗原、緑膿
菌から得られる原形の内毒素蛋白質、緑膿菌から得られ
るエラスターゼ類毒素と緑膿菌から得られるプロテアー
ゼ類毒素を含んでなる、緑膿菌によって引ぎ起こされる
感染に対して３成分混合ワクチンを開示している。
緑膿菌によって引き起こされる感染を防ぐのに有効であ
る緑Ｉｌｓ菌のプロテアーゼ及びエラスターゼに由来す
る類毒素は米国特許第４１６００２３号に記述されてい
る。
る緑Ｉｌｓ菌のプロテアーゼ及びエラスターゼに由来す
る類毒素は米国特許第４１６００２３号に記述されてい
る。
米国特許第３９８７１６４号は、予防的製薬学的調顎剤
中に緑膿菌の細胞壁成分を活性成分として含んでなるワ
クチン調製剤を開示している。
中に緑膿菌の細胞壁成分を活性成分として含んでなるワ
クチン調製剤を開示している。
緑膿菌によって引き起こされるミンクの感染は、米国特
許第４０９６２４５号に従い、予防的調製剤を、有効成
分が主に蛋白質及び少量の緑膿菌に由来する脂質と糖か
らなるワクチンの形でミンクに投与することによって防
止することができる。
許第４０９６２４５号に従い、予防的調製剤を、有効成
分が主に蛋白質及び少量の緑膿菌に由来する脂質と糖か
らなるワクチンの形でミンクに投与することによって防
止することができる。
緑膿菌に由来する原形の内毒素蛋白質は米国特許第４０
７９１２６号に開示されている。特許の製造法において
は、原形の内毒素蛋白質を蛋白質分解酵素又は還元剤で
処理する、或いは更に還元剤で処理した後蛋白質分解酵
素で処理する。
７９１２６号に開示されている。特許の製造法において
は、原形の内毒素蛋白質を蛋白質分解酵素又は還元剤で
処理する、或いは更に還元剤で処理した後蛋白質分解酵
素で処理する。
蛋白質抗原に共有的に結合した活性の減ぜられたバクテ
リアの内毒素ＬＰＳは米国特許第４１８５０９０号に記
述されている。結合はへロアシルハライドとの反応で行
なう。三塩基性酸の無水物でアシル化したＬＰＳが解毒
される。蛋白質抗原に共有結合された内毒素多糖類との
組合せにおいて、それは相乗的免疫原（ｉｍｐｒｕｎｏ
ｇｅｎ）効果を発現する。
リアの内毒素ＬＰＳは米国特許第４１８５０９０号に記
述されている。結合はへロアシルハライドとの反応で行
なう。三塩基性酸の無水物でアシル化したＬＰＳが解毒
される。蛋白質抗原に共有結合された内毒素多糖類との
組合せにおいて、それは相乗的免疫原（ｉｍｐｒｕｎｏ
ｇｅｎ）効果を発現する。
米国特許第４２８５９’ ３６号においては、緑膿菌培
養物の粗粘液物から無毒性の高分子量多糖類抗原を分離
するための方法及び該生活微生物に対する宿主の免疫を
誘導するための方法が記述されている。最初に、バクテ
リア細胞を、粘液物から燐酸塩緩衝液に溶解して分離す
る。溶解した汚染核酸を除去した後、汚染ＬＰＳ成分の
脂質Δ部分を酢酸での加水分解により除去し且つ沈殿さ
せる。
養物の粗粘液物から無毒性の高分子量多糖類抗原を分離
するための方法及び該生活微生物に対する宿主の免疫を
誘導するための方法が記述されている。最初に、バクテ
リア細胞を、粘液物から燐酸塩緩衝液に溶解して分離す
る。溶解した汚染核酸を除去した後、汚染ＬＰＳ成分の
脂質Δ部分を酢酸での加水分解により除去し且つ沈殿さ
せる。
残りの脂質をクロロホルムで抽出する。次いで残存する
核酸の殆んどすべてを、ヌクレアーゼで消化することに
よって除去し、残りの蛋白質をフェノールで抽出する。
核酸の殆んどすべてを、ヌクレアーゼで消化することに
よって除去し、残りの蛋白質をフェノールで抽出する。
水性層及びフェノール層を分離し、水性層をゲルｒ過に
供して、カラムクロマトグラフィにより多糖類抗原を分
離する。この多糖類抗原は無毒性で宿主の微生物に対す
る免疫応答を減するのに非常に効果的である。
供して、カラムクロマトグラフィにより多糖類抗原を分
離する。この多糖類抗原は無毒性で宿主の微生物に対す
る免疫応答を減するのに非常に効果的である。
今回、グラム陰性バクテリアからの解毒された多糖類に
、炭素数４〜１２の残基によって共有結合された該グラ
ム陰性バクテリアに由来する解毒された蛋白質を含んで
なる免疫組成物が発見された。本発明の新規な免疫剤は
、最初にグラム陰性バクテリアに由来するリボ多糖類の
脂質Ａ部分を分離して、脂質Ａを含まない解毒された多
糖類を得、これを選択的に酸化してそれにアルデヒド基
を生成させるという方法によって製造される。選択的に
酸化した脂質Ａを含まない多糖類は、脂質Ａを含まない
多糖類のアルデヒド基及び解毒された蛋白質のカルボン
酸基に対して反応性のある官能基を含む炭素数４〜１２
の残基により、該アルデヒド基を通して該グラム陰性バ
クテリアに由来する蛋白質に共有結合される。本発明の
組成物は、バクテリア感染を防ぐための非経口投与に対
する及び供与体の、グラム陰性バクテリアの抗体値を増
大させる目的で該供与体に投与するためのワクチンとし
て有用である。そのような供与体から集められた血液を
集め且つ分画して、該抗体を非常に高い力価で有する免
疫血清グロブリンを得ることができる。この高力価の免
疫血清グロブリンは特別なグラム陰性バクテリアの感染
した患者に投与してよい。
、炭素数４〜１２の残基によって共有結合された該グラ
ム陰性バクテリアに由来する解毒された蛋白質を含んで
なる免疫組成物が発見された。本発明の新規な免疫剤は
、最初にグラム陰性バクテリアに由来するリボ多糖類の
脂質Ａ部分を分離して、脂質Ａを含まない解毒された多
糖類を得、これを選択的に酸化してそれにアルデヒド基
を生成させるという方法によって製造される。選択的に
酸化した脂質Ａを含まない多糖類は、脂質Ａを含まない
多糖類のアルデヒド基及び解毒された蛋白質のカルボン
酸基に対して反応性のある官能基を含む炭素数４〜１２
の残基により、該アルデヒド基を通して該グラム陰性バ
クテリアに由来する蛋白質に共有結合される。本発明の
組成物は、バクテリア感染を防ぐための非経口投与に対
する及び供与体の、グラム陰性バクテリアの抗体値を増
大させる目的で該供与体に投与するためのワクチンとし
て有用である。そのような供与体から集められた血液を
集め且つ分画して、該抗体を非常に高い力価で有する免
疫血清グロブリンを得ることができる。この高力価の免
疫血清グロブリンは特別なグラム陰性バクテリアの感染
した患者に投与してよい。
本発明の組成物が毒性又は内毒素活性を含まない高度の
免疫原性を示すということは該組成物の特別な利点であ
る。確かに本免疫薬剤の免疫原性は、元のリボ多糖類の
それに殆んど同等である。
免疫原性を示すということは該組成物の特別な利点であ
る。確かに本免疫薬剤の免疫原性は、元のリボ多糖類の
それに殆んど同等である。
ここに毒性又は内毒素活性を含まないとは、組成物がマ
ウスの体重低下を引き起こさず或いは体重増加に失敗せ
ず、またカプトカニ（ｌ ｉｍｕｌｔｌｓ）のアメーバ
様細胞の溶解質試験においてリボ多糖類の１０００分の
１以下の活性しか有さないことを意味する。脂質Ａを含
まない多糖類及び解毒された蛋白質がそれぞれ免疫原で
ないということを示すことは重要である。更に脂質Ａを
含まない多糖類及び解毒された蛋白質の混合物も不活性
である。
ウスの体重低下を引き起こさず或いは体重増加に失敗せ
ず、またカプトカニ（ｌ ｉｍｕｌｔｌｓ）のアメーバ
様細胞の溶解質試験においてリボ多糖類の１０００分の
１以下の活性しか有さないことを意味する。脂質Ａを含
まない多糖類及び解毒された蛋白質がそれぞれ免疫原で
ないということを示すことは重要である。更に脂質Ａを
含まない多糖類及び解毒された蛋白質の混合物も不活性
である。
上述のように本発明の免疫組成物は、グラム陰性バクテ
リアからの解毒された多糖類に、炭素数４〜１２の残基
によって共有結合されたグラム陰性バクテリアに由来す
る解毒された蛋白質を含んでなる。
リアからの解毒された多糖類に、炭素数４〜１２の残基
によって共有結合されたグラム陰性バクテリアに由来す
る解毒された蛋白質を含んでなる。
以下の記述においては、緑膿菌に力点が置かれよう。し
かしこれは単なる例示であって、制限を加えるものでは
ない。本発明は、その範囲において、グラム陰性バクテ
リア例えは大股菌、プロテウス種、セリシア（３ｅｒｒ
ｉｔｉａ ）種、クレブシェラ種などに対する免疫組成
物も含む。
かしこれは単なる例示であって、制限を加えるものでは
ない。本発明は、その範囲において、グラム陰性バクテ
リア例えは大股菌、プロテウス種、セリシア（３ｅｒｒ
ｉｔｉａ ）種、クレブシェラ種などに対する免疫組成
物も含む。
緑膿菌に対する免疫組成物の製造の第１工程では、緑膿
菌バクテリアのＬＰＳ−蛋白質複合体の蛋白質部分を複
合体の残りの部分から分離する。
菌バクテリアのＬＰＳ−蛋白質複合体の蛋白質部分を複
合体の残りの部分から分離する。
これは種々の公知の化学的及び物理的方法によって達成
することができる。例えは化学的方法例えばグアナシニ
ウムチオシアネート、双生イオン洗剤、リゾチーム−エ
チレンジアミン四酢酸、ドデシル硫酸ナトリウム、ジメ
チルホルムアミドなどを使用しうる。参照、例えばＭｏ
ｌｄｏｗ ６、史工Ｍｅｍｂｒａｎｅ １３ ｉｏｌ、
、１０，１３７−１５２ （１９７２）、 ）−１ａ
ｎｃｏｃｋら、 Ｊ、ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｔｏｌｏ
ｇｙ 。
することができる。例えは化学的方法例えばグアナシニ
ウムチオシアネート、双生イオン洗剤、リゾチーム−エ
チレンジアミン四酢酸、ドデシル硫酸ナトリウム、ジメ
チルホルムアミドなどを使用しうる。参照、例えばＭｏ
ｌｄｏｗ ６、史工Ｍｅｍｂｒａｎｅ １３ ｉｏｌ、
、１０，１３７−１５２ （１９７２）、 ）−１ａ
ｎｃｏｃｋら、 Ｊ、ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｔｏｌｏ
ｇｙ 。
１３６．３８１−３９０ （１９７８）、５ｔｉｎｎ−
ｅｔｔら、同上、１１４．３９９−４０７ ＜１９７３
〉、及びＲ０ｂｉｎＳＯｎら、Ｆ Ｅ Ｍ Ｓ Ｍ
１ｃｒｏｂｉｏｌ。
ｅｔｔら、同上、１１４．３９９−４０７ ＜１９７３
〉、及びＲ０ｂｉｎＳＯｎら、Ｆ Ｅ Ｍ Ｓ Ｍ
１ｃｒｏｂｉｏｌ。
Ｌｅｔｔ、、５．１３１−１３４ （ＩＣ）７９）、蛋
白質−ＬＰＳ複合体から蛋白質を抽出するための物理的
方法の例としては、滲透圧ショック及び超音波のような
手段を使用しうる。蛋白質の抽出は上述の方法の組合せ
によって達成してもよい。
白質−ＬＰＳ複合体から蛋白質を抽出するための物理的
方法の例としては、滲透圧ショック及び超音波のような
手段を使用しうる。蛋白質の抽出は上述の方法の組合せ
によって達成してもよい。
次いで抽出した又は分離した蛋白質を解毒する。
この目的のために、蛋白質を穏やかな水性アルカリ性加
水分解に供して酵素及び内毒素のような毒性成分を破壊
する。一般にアルカリの濃度及び温度及び処理の期間は
、蛋白質を解毒するのに、即ち蛋白質を人間に投与した
時に無毒性にするの十分なものである。アルカリとして
は、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムを水又は溶媒
溶液中なとで使用することができる。普通、蛋白質１部
を、０．１〜３．０Ｍアルカリの約０．１〜１０．０部
と混合する。加水分解は一般に約４５〜８０℃の温度で
約０．５〜５時間行なわれる。。加熱後、常法例えば超
濾過、凍結乾燥などにより、混合物から水を除去する。
水分解に供して酵素及び内毒素のような毒性成分を破壊
する。一般にアルカリの濃度及び温度及び処理の期間は
、蛋白質を解毒するのに、即ち蛋白質を人間に投与した
時に無毒性にするの十分なものである。アルカリとして
は、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムを水又は溶媒
溶液中なとで使用することができる。普通、蛋白質１部
を、０．１〜３．０Ｍアルカリの約０．１〜１０．０部
と混合する。加水分解は一般に約４５〜８０℃の温度で
約０．５〜５時間行なわれる。。加熱後、常法例えば超
濾過、凍結乾燥などにより、混合物から水を除去する。
約１００００よりも小さい分子量の物質を混合物から除
去することが望ましい。
去することが望ましい。
これは公知の方法により、例えは透析、超濾過などによ
って達成しうる。
って達成しうる。
ＬＰＳは公知の方法により、例えばＷｅｓｔｐｈａｌら
、Ｚ、 Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｂ、 ７９．１４８〜１
５５（１９５２）のフェノール−水抽出法、トリクロル
酢酸法（３ｔａｕｂ、 Ｍ ｅｔｈ、 Ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍ、。
、Ｚ、 Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｂ、 ７９．１４８〜１
５５（１９５２）のフェノール−水抽出法、トリクロル
酢酸法（３ｔａｕｂ、 Ｍ ｅｔｈ、 Ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍ、。
５巻、９２〜９３頁、１９６５年）、水性ブタノール法
（Ｌ ｅｉｖｅら、Ｍｅｔｈ、Ｅ ｎｚｙｍｏｌ、 ２
８巻、２５４〜２６２頁、１９７２年）などで緑膿菌バ
クテリアから分離できる。ＷｅＳｔｐｌ）ａｌらの方法
では、緑膿菌バクテリアをフェノール−水混合物で抽出
することによってＬＰＳを分離する。粗ＬＰＳを超音波
にかけ、リボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアー
ゼで消化する。プロナーゼでの消化後、ＬＰＳ調製物を
透析及び超濾過に供して低分子量の種を除去する。
（Ｌ ｅｉｖｅら、Ｍｅｔｈ、Ｅ ｎｚｙｍｏｌ、 ２
８巻、２５４〜２６２頁、１９７２年）などで緑膿菌バ
クテリアから分離できる。ＷｅＳｔｐｌ）ａｌらの方法
では、緑膿菌バクテリアをフェノール−水混合物で抽出
することによってＬＰＳを分離する。粗ＬＰＳを超音波
にかけ、リボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアー
ゼで消化する。プロナーゼでの消化後、ＬＰＳ調製物を
透析及び超濾過に供して低分子量の種を除去する。
続いてこのように分離したＬＰＳを穏やかな酸性加水分
解（［） ｒｅＷｒｙら、３ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ 、
、 １４９ 。
解（［） ｒｅＷｒｙら、３ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｊ 、
、 １４９ 。
９３〜１０６ （１９７５））に供して脂質Ａ残基を除
去する、即ち脂質Ａを含まない解毒された多糖類を製造
する。この目的のために、酢酸、塩酸などを使用しても
よい。一般に、ＬＰＳを水性媒体中においてＬＰＳ部当
り約１〜４部の割合で酸と混合する。例えばＬＰＳは、
ＬＰＳの′ａ度が約１〜５１１＋９／１Ｉｌｌであるよ
うに酸の０．５〜３％水溶液と混合すると良い。次いで
混合物をある温度に、ＬＰＳの脂質Ａ部分を除去するの
に十分な期間、普通６０〜１００℃に約１〜２４時間加
熱する。
去する、即ち脂質Ａを含まない解毒された多糖類を製造
する。この目的のために、酢酸、塩酸などを使用しても
よい。一般に、ＬＰＳを水性媒体中においてＬＰＳ部当
り約１〜４部の割合で酸と混合する。例えばＬＰＳは、
ＬＰＳの′ａ度が約１〜５１１＋９／１Ｉｌｌであるよ
うに酸の０．５〜３％水溶液と混合すると良い。次いで
混合物をある温度に、ＬＰＳの脂質Ａ部分を除去するの
に十分な期間、普通６０〜１００℃に約１〜２４時間加
熱する。
生成する沈殿は、ＬＰＳの脂質Ａ部分を含んでなり、常
法例えは遠心分離、傾斜、ｒ過などによって脂質△を含
まない多糖類から分離される。すべての脂質△の除去を
確めるために、脂質Ａを含まない多糖類を含む上澄液を
凡そ中性に調節し、クロル炭化水素−アルコールで抽出
する。
法例えは遠心分離、傾斜、ｒ過などによって脂質△を含
まない多糖類から分離される。すべての脂質△の除去を
確めるために、脂質Ａを含まない多糖類を含む上澄液を
凡そ中性に調節し、クロル炭化水素−アルコールで抽出
する。
脂質Ａを含まない多糖類を含有する水性層を濃縮し、そ
して脂質Ａを含まない多糖類を常法により、例えばゲル
ｒ過、カラムクロマトグラフィーなどにより精製し、次
いで例えば回転蒸発及び凍結乾燥で乾燥する。
して脂質Ａを含まない多糖類を常法により、例えばゲル
ｒ過、カラムクロマトグラフィーなどにより精製し、次
いで例えば回転蒸発及び凍結乾燥で乾燥する。
次いで、脂質Ａを含まない多糖類を選択的に酸化して、
解毒した多糖類上にアルデヒド基を生成させる。これは
公知の方法により、例えば３ ａｎｄ−ｅ ｒ Ｓ ０
１１ら、ｔｍ＋ｎｕｎｏｌｏｇｙ、２’ｏ、 １０６１
〜１０６５（１９７１）に記述されている如き過ヨウ素
酸酸化によって行なうことができる。従って脂質Ａを含
まない多糖類を過ヨウ素酸イオン源、例えば過ヨウ素酸
ナトリウム、過ヨウ素酸カリウムなどの、解毒された多
糖類にアルデヒド基を選択的に発生させるのに十分な母
で処理する。一般に、解毒された多糖類１〜２０ｍｇ／
ｍｌを含有する水溶液を、暗所中室部下に１０〜２４時
間過ヨウ素酸塩１〜１００１１１Ｍで混合する。反応を
エチレングリコールの添加によって停止し、選択的に酸
化された脂質Ａを含まない多糖類を、例えばカラムクロ
マトクラフィー又はゲル）ｒ過によって精製し、次いで
蒸発、凍結乾燥など［こよって処理して水を除去する。
解毒した多糖類上にアルデヒド基を生成させる。これは
公知の方法により、例えば３ ａｎｄ−ｅ ｒ Ｓ ０
１１ら、ｔｍ＋ｎｕｎｏｌｏｇｙ、２’ｏ、 １０６１
〜１０６５（１９７１）に記述されている如き過ヨウ素
酸酸化によって行なうことができる。従って脂質Ａを含
まない多糖類を過ヨウ素酸イオン源、例えば過ヨウ素酸
ナトリウム、過ヨウ素酸カリウムなどの、解毒された多
糖類にアルデヒド基を選択的に発生させるのに十分な母
で処理する。一般に、解毒された多糖類１〜２０ｍｇ／
ｍｌを含有する水溶液を、暗所中室部下に１０〜２４時
間過ヨウ素酸塩１〜１００１１１Ｍで混合する。反応を
エチレングリコールの添加によって停止し、選択的に酸
化された脂質Ａを含まない多糖類を、例えばカラムクロ
マトクラフィー又はゲル）ｒ過によって精製し、次いで
蒸発、凍結乾燥など［こよって処理して水を除去する。
選択的に酸化された脂質Ａを含まない多糖類は、この多
糖類のアルデヒド基に対して及び解毒された蛋白質のカ
ルボン酸基に対して反応性の官能基を有する炭素数４〜
１２の残基によって解毒された蛋白質に結合せしめられ
る。従って解毒された蛋白質は少くとも２つのアミノ基
を含有する炭素数４〜１２の残基と結合する。一般に過
剰のアミンを使用する。即ち例えば約３〜２０部のアミ
ンを、緩衝媒体（＋１）−１５，０〜７．０）巾約２０
〜４０℃の温度下に約１〜５０ケ間、解毒された蛋白質
１部と混合することができる。好ましくは、この結合反
応は、アミノ基の、解毒された蛋白質上のカルボン酸基
への結合を促進する試剤の存在下に行なうことが望まし
い。この一般的に好適な試剤は、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａ
ｓ、 Ｊ 、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、 ２４５ 。
糖類のアルデヒド基に対して及び解毒された蛋白質のカ
ルボン酸基に対して反応性の官能基を有する炭素数４〜
１２の残基によって解毒された蛋白質に結合せしめられ
る。従って解毒された蛋白質は少くとも２つのアミノ基
を含有する炭素数４〜１２の残基と結合する。一般に過
剰のアミンを使用する。即ち例えば約３〜２０部のアミ
ンを、緩衝媒体（＋１）−１５，０〜７．０）巾約２０
〜４０℃の温度下に約１〜５０ケ間、解毒された蛋白質
１部と混合することができる。好ましくは、この結合反
応は、アミノ基の、解毒された蛋白質上のカルボン酸基
への結合を促進する試剤の存在下に行なうことが望まし
い。この一般的に好適な試剤は、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａ
ｓ、 Ｊ 、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、 ２４５ 。
３０５９〜３０６５ （１９７０）に記述されているよ
うなカルボジイミドである。普通、カルボジイミドはア
ミン量の約０．５〜２部の量で存在する。上述のカルボ
ジイミドで促進されたアミド結合反応の後、混合物を通
常の手段、例えば透析又は透析ｒ過で処理して、未反応
のアミン化合物及びカルボジイミドを除去する。好まし
くは、上記反応混合物を、続く口の誘導体化された解毒
済み蛋白質の、上述の如く調製した脂質Ａを含まない多
糖類への結合反応における反応媒体と親和性のあるＭ衝
系に対して透析する。普通、緩衝系のｐＨは約７．０〜
９．０である。
うなカルボジイミドである。普通、カルボジイミドはア
ミン量の約０．５〜２部の量で存在する。上述のカルボ
ジイミドで促進されたアミド結合反応の後、混合物を通
常の手段、例えば透析又は透析ｒ過で処理して、未反応
のアミン化合物及びカルボジイミドを除去する。好まし
くは、上記反応混合物を、続く口の誘導体化された解毒
済み蛋白質の、上述の如く調製した脂質Ａを含まない多
糖類への結合反応における反応媒体と親和性のあるＭ衝
系に対して透析する。普通、緩衝系のｐＨは約７．０〜
９．０である。
選択的に酸化した脂質を含まない多糖類は、この脂質を
含まない多糖類のアルデヒド基と反応するために存在す
るアミン基を含む炭素数４〜１２の残基で誘導体化され
た解毒済み蛋白質に、シッフ塩基反応で結合せしめられ
る。この結合反応では、反応を還元剤の存在下に行なう
ことが望ましい。この目的のために好適な）！元側はＢ
Ｏ，ｒｃｈら、Ｊ 、 Ａ ｍ、 Ｃｌ１ｅｌｎ、ＳＱ
Ｃ，、史３，２８９７〜２９０４（１９７１）に記述さ
れているようなシアノボロヒドリドである。一般に乾燥
した脂質Ａを含まない多糖類約１〜５部及びシアノボロ
ヒドリド２〜２０部を、ｌ）Ｈ約７．０〜９．０の緩衝
系において誘導体化された解毒済み蛋白質０．５〜３部
と混合する。次いで反応混合物を約２４〜１６８時間約
２０〜５０℃に保つ。生成物は炭素数４〜１２の残基に
よって、解毒された脂質Ａを含まない多糖類に共有結合
された解毒済み蛋白質を含んでなる。この時解毒された
蛋白質はアミド結合によって炭素数４〜１２の残基に結
合し、また脂質Ａを含まない多糖類はアミン結合によっ
て炭素数４〜１２の残基に結合する。この生成物はカラ
ムクロマトグラフィー、ゲル）濾過などによって１青製
することができる。
含まない多糖類のアルデヒド基と反応するために存在す
るアミン基を含む炭素数４〜１２の残基で誘導体化され
た解毒済み蛋白質に、シッフ塩基反応で結合せしめられ
る。この結合反応では、反応を還元剤の存在下に行なう
ことが望ましい。この目的のために好適な）！元側はＢ
Ｏ，ｒｃｈら、Ｊ 、 Ａ ｍ、 Ｃｌ１ｅｌｎ、ＳＱ
Ｃ，、史３，２８９７〜２９０４（１９７１）に記述さ
れているようなシアノボロヒドリドである。一般に乾燥
した脂質Ａを含まない多糖類約１〜５部及びシアノボロ
ヒドリド２〜２０部を、ｌ）Ｈ約７．０〜９．０の緩衝
系において誘導体化された解毒済み蛋白質０．５〜３部
と混合する。次いで反応混合物を約２４〜１６８時間約
２０〜５０℃に保つ。生成物は炭素数４〜１２の残基に
よって、解毒された脂質Ａを含まない多糖類に共有結合
された解毒済み蛋白質を含んでなる。この時解毒された
蛋白質はアミド結合によって炭素数４〜１２の残基に結
合し、また脂質Ａを含まない多糖類はアミン結合によっ
て炭素数４〜１２の残基に結合する。この生成物はカラ
ムクロマトグラフィー、ゲル）濾過などによって１青製
することができる。
本発明の免疫組成物は、検知しうる内毒素活性及び毒性
を有さず、非常に免疫原性である。ある組成物は、人間
のような宿主に、微生物に対する免疫応答を誘導するの
に効果的な量で投与することができる。またある組成物
は、組成物が関係するダラム陰性バクテリアによる感染
を防止するのに効果的な量で宿主に投与することができ
る。本組成物は単独で又は組合せて投与してもよい。投
与は皮下、筋肉内又は皮膚内に助剤を用いて又は用いず
に行ないうる。
を有さず、非常に免疫原性である。ある組成物は、人間
のような宿主に、微生物に対する免疫応答を誘導するの
に効果的な量で投与することができる。またある組成物
は、組成物が関係するダラム陰性バクテリアによる感染
を防止するのに効果的な量で宿主に投与することができ
る。本組成物は単独で又は組合せて投与してもよい。投
与は皮下、筋肉内又は皮膚内に助剤を用いて又は用いず
に行ないうる。
本免疫組成物は、人間及び他の動物に対するワクチンを
製造するための普通の方法で製造することができる。例
えば免疫組成物を助剤の有無下に適当な溶媒に溶解する
。溶媒としては蒸溜水、生理的食塩水及び燐酸塩で緩衝
された水性塩化ナトリウム溶液を用いてよい。助剤の例
は水酸化アルミニウム、燐酸アルミニウム、燐酸カルシ
ウム、ミョウバン及びフロイドの不完全助剤である。助
剤の量は必要とされる且つ免疫活性を増大させるのに十
分である量の範囲から適当に選択される。
製造するための普通の方法で製造することができる。例
えば免疫組成物を助剤の有無下に適当な溶媒に溶解する
。溶媒としては蒸溜水、生理的食塩水及び燐酸塩で緩衝
された水性塩化ナトリウム溶液を用いてよい。助剤の例
は水酸化アルミニウム、燐酸アルミニウム、燐酸カルシ
ウム、ミョウバン及びフロイドの不完全助剤である。助
剤の量は必要とされる且つ免疫活性を増大させるのに十
分である量の範囲から適当に選択される。
本物質のマウスにおける免疫投薬量は、子牛の血清アル
フミン又はバクテリア蛋白質１５〜５２μｇに配合した
低分子量（５Ｘ１０３〜４Ｘ１０’）の多糖類５μＱで
ある。
フミン又はバクテリア蛋白質１５〜５２μｇに配合した
低分子量（５Ｘ１０３〜４Ｘ１０’）の多糖類５μＱで
ある。
本免疫組成物は、関係するダラム陰性バクテリアに対す
る抗血清を製造するためにも使用することができる。抗
体は抗血清から集めうる。抗血清と抗体は特別なダラム
陰性バクテリアによって引き起こされる感染を防止する
ために使用できる。
る抗血清を製造するためにも使用することができる。抗
体は抗血清から集めうる。抗血清と抗体は特別なダラム
陰性バクテリアによって引き起こされる感染を防止する
ために使用できる。
更に本免疫組成物を接種した供与体から集められた血液
は、公知の方法で分画して、本発明の組成物を投与して
ない供与体から得た血液から分画された免疫血清グロブ
リンと比較した場合に特別なダラム陰性バクテリアに対
する抗体を高い力価を有する超免疫血清グロブリンを与
える。そのような免疫血清グロブリンは、患者に筋肉内
投与でき、或いは公知の方法により静脈内注射ができる
ように処理してもよい。例えば緑膿菌に由来する免疫組
成物を供与体に投与し、それから血液を集め、分画して
超免疫カンマグロブリンを得ることができる。このよう
にして得た免疫血清グロブリン又はガンマクロプリンは
緑膿菌の感染を防ぐために筋肉内投与できる。他に、超
免疫血清グロブリンは、技術的に十分公知の方法に従っ
て静脈内注射ができるようにすることができる。そのよ
うな超免疫ガンマグロブリンは、酵素の結合した免疫吸
着評価法（ＥＬＩＳＡ）で決定して約１：８０００〜≧
１：６４０００の緑膿菌に対する抗体力価を有する。こ
れらの超免疫血清グロブリンは今まで存在しなかった。
は、公知の方法で分画して、本発明の組成物を投与して
ない供与体から得た血液から分画された免疫血清グロブ
リンと比較した場合に特別なダラム陰性バクテリアに対
する抗体を高い力価を有する超免疫血清グロブリンを与
える。そのような免疫血清グロブリンは、患者に筋肉内
投与でき、或いは公知の方法により静脈内注射ができる
ように処理してもよい。例えば緑膿菌に由来する免疫組
成物を供与体に投与し、それから血液を集め、分画して
超免疫カンマグロブリンを得ることができる。このよう
にして得た免疫血清グロブリン又はガンマクロプリンは
緑膿菌の感染を防ぐために筋肉内投与できる。他に、超
免疫血清グロブリンは、技術的に十分公知の方法に従っ
て静脈内注射ができるようにすることができる。そのよ
うな超免疫ガンマグロブリンは、酵素の結合した免疫吸
着評価法（ＥＬＩＳＡ）で決定して約１：８０００〜≧
１：６４０００の緑膿菌に対する抗体力価を有する。こ
れらの超免疫血清グロブリンは今まで存在しなかった。
従って本発明は、ダラム陰性ハタテリア、例えば緑膿菌
に対するＥＬＩＳＡ抗体力価が約１ ：８０００〜≧１
：６４０００ｆ７）免疫血清グロブリンを含む製薬学
的調製剤も包含する。
に対するＥＬＩＳＡ抗体力価が約１ ：８０００〜≧１
：６４０００ｆ７）免疫血清グロブリンを含む製薬学
的調製剤も包含する。
ここに１製薬学的調製剤」とは、広い意味において、治
療の目的ばかりでなく、技術的に公知の如き薬剤の目的
に、或いは組織培養に使用される本発明の組成物を含む
調製剤を包含する。治療用が意図される製薬学的調製剤
は、本組成物を治療的量で、即ち予防又は治療の健康的
尺度に対して必要な量で含有すべきである。製薬学的ｉ
１１製剤を薬剤として用いる場合には、それは組成物を
薬剤量で含有すべきである。同様に、組織培養又（よ培
養媒体に用いる場合には、組成物は所望の生長を得るの
に十分な量で本組成物を含有すべきである。
療の目的ばかりでなく、技術的に公知の如き薬剤の目的
に、或いは組織培養に使用される本発明の組成物を含む
調製剤を包含する。治療用が意図される製薬学的調製剤
は、本組成物を治療的量で、即ち予防又は治療の健康的
尺度に対して必要な量で含有すべきである。製薬学的ｉ
１１製剤を薬剤として用いる場合には、それは組成物を
薬剤量で含有すべきである。同様に、組織培養又（よ培
養媒体に用いる場合には、組成物は所望の生長を得るの
に十分な量で本組成物を含有すべきである。
次の例示である実施例は本発明を更に説明する。
緑膿菌免疫種３号（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ ｃｕ
ｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ） ２７
３１４番）を、グルコースークルタミンー塩培地で生長
させた。細胞を０．５％ホルマリンで死亡させた。この
死んだ細胞を、５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ
ＴＡ）及び５ｍＭのβ−メルカプトエタノールを含む吐
７．８のＯ，ＯＩＭＩ−リスしヒドロキシメチルコアミ
ノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ ＞緩衝液に懸濁さ
せ、次いで超音波処理した。破壊された細胞及び可溶性
物質を、室温下に１８時間６Ｍグアニジウムチオシアネ
−１〜で抽出した。次いでグアニジニウムチオシアネー
トを、６Ｍ尿素に対して透析することによって除去した
。食塩水に溶解する画分は蛋白質を含有した。
ｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ） ２７
３１４番）を、グルコースークルタミンー塩培地で生長
させた。細胞を０．５％ホルマリンで死亡させた。この
死んだ細胞を、５ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤ
ＴＡ）及び５ｍＭのβ−メルカプトエタノールを含む吐
７．８のＯ，ＯＩＭＩ−リスしヒドロキシメチルコアミ
ノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ ＞緩衝液に懸濁さ
せ、次いで超音波処理した。破壊された細胞及び可溶性
物質を、室温下に１８時間６Ｍグアニジウムチオシアネ
−１〜で抽出した。次いでグアニジニウムチオシアネー
トを、６Ｍ尿素に対して透析することによって除去した
。食塩水に溶解する画分は蛋白質を含有した。
上述の食塩水に可溶な蛋白質を５６°Ｃで２時間、１Ｍ
Ｎａ ＯＨで処理した。アルカリを酢酸で中和した。こ
の工程では、脂質Ａに結合した脂肪酸エステル、即ち汚
れたＬＰＳの毒性残基か除去された。この解毒した蛋白
質をＰＭ１０フィルター（Ａ ｍ１ｃｏｎ、 Ｌ ｅｘ
ｉｎｇｔｏｎ、 Ｍ Ａ ）を用いる超ｒ過によって濃
縮した。この工程により、低分子量、即ち＜１００００
の物質を除去した。
Ｎａ ＯＨで処理した。アルカリを酢酸で中和した。こ
の工程では、脂質Ａに結合した脂肪酸エステル、即ち汚
れたＬＰＳの毒性残基か除去された。この解毒した蛋白
質をＰＭ１０フィルター（Ａ ｍ１ｃｏｎ、 Ｌ ｅｘ
ｉｎｇｔｏｎ、 Ｍ Ａ ）を用いる超ｒ過によって濃
縮した。この工程により、低分子量、即ち＜１００００
の物質を除去した。
解毒した蛋白質は次の如く特徴づけられる＝１、ＬＰＳ
内毒素活性なし。
内毒素活性なし。
２、マウスにおいて最小毒性。
３、カブトガニのアメーバ様細胞の溶解質評価において
元の蛋白質の活性の１０００分の１以下。
元の蛋白質の活性の１０００分の１以下。
４、元の及び解毒したバクテリア蛋白質の双方に対する
抗血清と反応。
抗血清と反応。
５、ＨＰＬＣ（ＴＳＫ Ｇｅ１３００ＳＷ）によると
、解毒された蛋白質の８０％が１０〜３００００ＭＷの
範囲にあり、２０％が≧１０１００Ｏ００である。
、解毒された蛋白質の８０％が１０〜３００００ＭＷの
範囲にあり、２０％が≧１０１００Ｏ００である。
０．０５Ｍ燐酸塩で緩衝した食塩水（ｐＨ７゜２＞５０
ｍ１中の解毒されたバクテリア蛋白質（１４ｍ（１）を
、１−〈３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチル
カルボジイミド３００ｍ１ｌｌの存在下に１．４−ジア
ミノブタン（３００ｍ（］）と結合させた。２１°Ｃで
２時間穏やかに攪拌した後、反応混合物を、ｐＨ８，３
の０．０５Ｍ炭酸塩緩衝液４１に対して４℃で４回透析
することにより過剰の試薬を除去し。アミノブチルで誘
導体化された解毒済み蛋白質はＨＰＬＣ（、ＴＳＫ
Ｇｅ１４０００ＳＷ）によると８５０００ＭＷの蛋白質
を約９４％含有するものとして特徴づけられた。
ｍ１中の解毒されたバクテリア蛋白質（１４ｍ（１）を
、１−〈３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチル
カルボジイミド３００ｍ１ｌｌの存在下に１．４−ジア
ミノブタン（３００ｍ（］）と結合させた。２１°Ｃで
２時間穏やかに攪拌した後、反応混合物を、ｐＨ８，３
の０．０５Ｍ炭酸塩緩衝液４１に対して４℃で４回透析
することにより過剰の試薬を除去し。アミノブチルで誘
導体化された解毒済み蛋白質はＨＰＬＣ（、ＴＳＫ
Ｇｅ１４０００ＳＷ）によると８５０００ＭＷの蛋白質
を約９４％含有するものとして特徴づけられた。
実施例 ３
緑膿菌からの脂質Ａを含まない他糖類の製造実施例１に
おける如く準備した緑膿菌の細胞から、上述のＷｅｓｔ
ｐｂ、ａｌらのフェノール−水抽出法゛によってＬＰＳ
を分離した。粗しＰＳを含有する水層を蒸留水に対して
３〜４日間透析し、フェノールと低分子量のバクテリア
物質を除去した。この粗ＬＰＳを１５分間超音波処理し
てＬＰＳミセルを溶解し、次いで０．１Ｍ酢酸塩（ｐＨ
５，０）中３５℃で１８〜２４時間、リボヌクレアーゼ
及びデオキシリボヌクレアーゼで消化してＲＮＡ及びＤ
ＮＡの不純物を除去した。ＬＰＳにおけるバクテリア蛋
白質、リボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼ
の汚染物を、ｐＨ７，０で２４時間、プロナーゼの消化
に供した。このＬＰＳを、Ａｍ１ｃｏ＠中空繊維カート
リツジ（ＨＩＸ５０）中を通して透析ｒ過及び超ｒ過す
ることにより低分子量の核酸、ペプチド、及びアミノ酸
を除去し、精製した。
おける如く準備した緑膿菌の細胞から、上述のＷｅｓｔ
ｐｂ、ａｌらのフェノール−水抽出法゛によってＬＰＳ
を分離した。粗しＰＳを含有する水層を蒸留水に対して
３〜４日間透析し、フェノールと低分子量のバクテリア
物質を除去した。この粗ＬＰＳを１５分間超音波処理し
てＬＰＳミセルを溶解し、次いで０．１Ｍ酢酸塩（ｐＨ
５，０）中３５℃で１８〜２４時間、リボヌクレアーゼ
及びデオキシリボヌクレアーゼで消化してＲＮＡ及びＤ
ＮＡの不純物を除去した。ＬＰＳにおけるバクテリア蛋
白質、リボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼ
の汚染物を、ｐＨ７，０で２４時間、プロナーゼの消化
に供した。このＬＰＳを、Ａｍ１ｃｏ＠中空繊維カート
リツジ（ＨＩＸ５０）中を通して透析ｒ過及び超ｒ過す
ることにより低分子量の核酸、ペプチド、及びアミノ酸
を除去し、精製した。
この精製したＬＰＳを２．５ｍｇ、／ｍｌの８１度にお
いて１％酢酸中で処理し、次いて８７℃に１８時間加熱
した。脂質Ａの沈殿を遠心分離によって除去した。酢酸
の上澄液をＮａ ＯＨでｐＨ７，０に調節し、ＣＨＣｌ
５：メタノール（容量比２：１）混合物の２容量で３〜
５回抽出して残存する脂質Ａを除去した。多糖類を含む
水性層を真空下に回転蒸発させて濃縮した。更に１３１
ｏＧｅｌ−Ａ ５ｍ＜ ２ 、６ｃｍｘ １Ｑ Ｑｃｍ
）のカラムクロ’？トゲ−７フイーにより脂質△を含ま
ない多糖類（ＰＳ）を分画した。ＢｉｏＧｅｔ −Ａ
５ ｍクロマトグラフィーからの遅い両分をＳ ａ ｐ
ｌ］ａ ｄ ｅ ｘ■Ｇ−２５（２，６ｘ１００Ｃｍ
）カラムで更に精製した。Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ＠Ｇ −
２５からの主たる流出容量を一緒にし、回転蒸発又は凍
結乾燥で濃縮した。
いて１％酢酸中で処理し、次いて８７℃に１８時間加熱
した。脂質Ａの沈殿を遠心分離によって除去した。酢酸
の上澄液をＮａ ＯＨでｐＨ７，０に調節し、ＣＨＣｌ
５：メタノール（容量比２：１）混合物の２容量で３〜
５回抽出して残存する脂質Ａを除去した。多糖類を含む
水性層を真空下に回転蒸発させて濃縮した。更に１３１
ｏＧｅｌ−Ａ ５ｍ＜ ２ 、６ｃｍｘ １Ｑ Ｑｃｍ
）のカラムクロ’？トゲ−７フイーにより脂質△を含ま
ない多糖類（ＰＳ）を分画した。ＢｉｏＧｅｔ −Ａ
５ ｍクロマトグラフィーからの遅い両分をＳ ａ ｐ
ｌ］ａ ｄ ｅ ｘ■Ｇ−２５（２，６ｘ１００Ｃｍ
）カラムで更に精製した。Ｓ ｅｐｈａｄｅｘ＠Ｇ −
２５からの主たる流出容量を一緒にし、回転蒸発又は凍
結乾燥で濃縮した。
この多糖類は次のように特徴づけられる：１、内毒素（
ＬＰＳ）活性がない。
ＬＰＳ）活性がない。
２、マウスにおける毒性なし。
３、カブトガニのアメーバ様細胞の溶解質評価において
Ｌ Ｐ Ｓの活性の１０００分の１以下。
Ｌ Ｐ Ｓの活性の１０００分の１以下。
４、寒天ゲル中、ＬＰＳに対する抗血清と反応。
５、マウスにおいて抗体或いは耐感染性を誘導しない。
６．５Ｘ１０３〜４Ｘ１０４のＭＷ０
実施例３からの多糖類（２，５ｍｇ／ｍｌ）を、暗所中
室部下に１９時間Ｎａ ＩＯ４（３２ｍ Ｍ＞で酸化し
た。反応の終りにエチレングリコールを添加して過剰の
Ｎａ Ｔ○４を分解し、溶液を室温で更に３〜４時間放
置した。選択的に酸化した多糖類をゲルｒ過（３ｅｐｈ
ａｄｅｘ■Ｇ−２５カラム、１゜Ｑｃｍｘ １００ｃｍ
＞で更に精製した。主たる炭水化物含有の両分を一緒に
し、凍結乾燥した。
室部下に１９時間Ｎａ ＩＯ４（３２ｍ Ｍ＞で酸化し
た。反応の終りにエチレングリコールを添加して過剰の
Ｎａ Ｔ○４を分解し、溶液を室温で更に３〜４時間放
置した。選択的に酸化した多糖類をゲルｒ過（３ｅｐｈ
ａｄｅｘ■Ｇ−２５カラム、１゜Ｑｃｍｘ １００ｃｍ
＞で更に精製した。主たる炭水化物含有の両分を一緒に
し、凍結乾燥した。
選択的に酸化した多糖類は次のように特徴づけられる：
１、元の多糖類よりもアルデヒド基の数か増加。
２、ＬＰＳに対する抗血清と反応。
３、ＭＷ範囲の変化なし。
実施例 ５
実施例４からの凍結乾燥した、選択的に酸化されたＰＳ
（１０ｍ９）及びナトリウムシアノホロヒドリド２５ｎ
ｕ＋を、誘導体化された解毒済み蛋白質４．４ｍＱを含
有するｐＨ８，３の０．０５ＭＮａＨＣＯ３２，２ｍ
ｌ中に溶解し、反応を３７℃で７４時間行な・た。この
反応混合物をＳ ｅｐｈａｄｅｘ＠Ｇ−１００カラム＜
１００ｃｍＸ １ 、 Ｑｃｎ＋）でのゲル）ｒ過に
よって更に精製した。
（１０ｍ９）及びナトリウムシアノホロヒドリド２５ｎ
ｕ＋を、誘導体化された解毒済み蛋白質４．４ｍＱを含
有するｐＨ８，３の０．０５ＭＮａＨＣＯ３２，２ｍ
ｌ中に溶解し、反応を３７℃で７４時間行な・た。この
反応混合物をＳ ｅｐｈａｄｅｘ＠Ｇ−１００カラム＜
１００ｃｍＸ １ 、 Ｑｃｎ＋）でのゲル）ｒ過に
よって更に精製した。
このようにして得た生成物は次の如く特徴づけられる：
１、精製された多糖類が無毒性蛋白質に共有結合。
２、マウスにおける毒性なし。
３、カプトカニのアメーバ様細胞の溶解質評価において
ＬＰＳの活性の１０００分の１以下。
ＬＰＳの活性の１０００分の１以下。
４、ＬＰＳ及び解毒された蛋白質に対する抗血清と反応
。
。
５、マウスにおいて血清抗体及び耐感染性を誘導。
６．６０００００ＭＷの範囲に約９０％ＬＬＬ 緑膿
菌免疫種１の多糖類：蛋白質配合体ワクチンの成分の免
疫原性 ３日日の累積死亡０ ＥＬＩＳＡ’ Ｊに駆注順− 投薬量 力 価 免Ｊ二１１ を窯へ −ロ」Ｌ 鵬馴返澹 営軸連
所２Ｍ離の多糖類 ５．０ ＜１
： ４００ １０／１０ １０／１０アミ
ノブチル−牛 の血清アルブミン ３８．４ ＜１ ：
４００ ８．／１０ ８／１０多Ｍ 類
５．０ １ ：２３１９ ３／１０ｅ１／６’アル
ブミン配合体 ３８．４ 多糖類及び ５．０ アルブミン混合物 ３８．４ ＜１ ：
４００ １０／１０ ８／１０塩
＜１ ： ４００
８／１０ １０／１０ａ、１．７．１
４及び２１１回目皮下注射で免疫にしたマウス。
菌免疫種１の多糖類：蛋白質配合体ワクチンの成分の免
疫原性 ３日日の累積死亡０ ＥＬＩＳＡ’ Ｊに駆注順− 投薬量 力 価 免Ｊ二１１ を窯へ −ロ」Ｌ 鵬馴返澹 営軸連
所２Ｍ離の多糖類 ５．０ ＜１
： ４００ １０／１０ １０／１０アミ
ノブチル−牛 の血清アルブミン ３８．４ ＜１ ：
４００ ８．／１０ ８／１０多Ｍ 類
５．０ １ ：２３１９ ３／１０ｅ１／６’アル
ブミン配合体 ３８．４ 多糖類及び ５．０ アルブミン混合物 ３８．４ ＜１ ：
４００ １０／１０ ８／１０塩
＜１ ： ４００
８／１０ １０／１０ａ、１．７．１
４及び２１１回目皮下注射で免疫にしたマウス。
ｂ、ｏ、１０のＡ’４０５ｎｍを与エル血ｍ ４７）
８ 釈。
８ 釈。
Ｃ１緑膿菌免疫種１−１３６９の５０％致死量の１０倍
を腹腔的投与したマウス。
を腹腔的投与したマウス。
ｄ、第４回目の免疫から３日後に得た血清。腹腔的投与
により０．１ｍ＋血清で受動的に免疫されたマウス。
により０．１ｍ＋血清で受動的に免疫されたマウス。
０１食塩水対象物と比べての統計学的重要性（Ｐ＜０
、０５− Ｆ １ｓｃｈｅｒ確度試験。）乳１：多糖類
：蛋白質配合体で免疫にしたマウスだけに、受動的な保
護抗体の、感染及び刺激に対する耐性が生じた。
、０５− Ｆ １ｓｃｈｅｒ確度試験。）乳１：多糖類
：蛋白質配合体で免疫にしたマウスだけに、受動的な保
護抗体の、感染及び刺激に対する耐性が生じた。
（１友 緑膿菌免疫種１の配合体ワクチンによる受動
的保護抗体の誘導 側＆ユ囮Ｊ乙遺 免疫日ｏＬ ＥＬＪＳＡ
受動的免疫すく多糖類５．０ １回目の免疫
力 価 正常の 火傷した（ｐｒｅｉｍｍ
ｕｎｅ ） −１＜１ ： ４００ ９／
１０ １０．／１０１ ６
＜：ｉ ： ４００ ９／１０ １０／１０
７ １３ １：１３１３ ６
／１０ ６／１０ｄ１４ ２０
１：２４８１ ０／’１０’−３／１０ｄ２１
２９ １ ：３８０８ １／１０’
１．／１０ｅ３７ １ ：２４８２ ４／
１０ｄ３／１０’ａ、１７匹のマウスを表示の日にワク
チンで免疫にし、そしてそれが出血した。免疫にしたマ
ウスには４回目の免疫から７２日後に緑膿菌１−１３６
９の５０％致死量の１０倍を投与した。累積死亡は食塩
水で免疫にした対照において１７の１及び８の９であっ
た（Ｐ＜０．０００５＞。
的保護抗体の誘導 側＆ユ囮Ｊ乙遺 免疫日ｏＬ ＥＬＪＳＡ
受動的免疫すく多糖類５．０ １回目の免疫
力 価 正常の 火傷した（ｐｒｅｉｍｍ
ｕｎｅ ） −１＜１ ： ４００ ９／
１０ １０．／１０１ ６
＜：ｉ ： ４００ ９／１０ １０／１０
７ １３ １：１３１３ ６
／１０ ６／１０ｄ１４ ２０
１：２４８１ ０／’１０’−３／１０ｄ２１
２９ １ ：３８０８ １／１０’
１．／１０ｅ３７ １ ：２４８２ ４／
１０ｄ３／１０’ａ、１７匹のマウスを表示の日にワク
チンで免疫にし、そしてそれが出血した。免疫にしたマ
ウスには４回目の免疫から７２日後に緑膿菌１−１３６
９の５０％致死量の１０倍を投与した。累積死亡は食塩
水で免疫にした対照において１７の１及び８の９であっ
た（Ｐ＜０．０００５＞。
ｂ、正常の及び火傷したマウスに、感染の３時間前に血
清０．０５ｍ１を与えた。受動的免疫の正常のマウスに
はしＤ５ｏの１０倍量を投与した。
清０．０５ｍ１を与えた。受動的免疫の正常のマウスに
はしＤ５ｏの１０倍量を投与した。
Ｃ，ベンドパルビタールで麻酔をかけたマウスに、ガス
炎で１０％の背中の全厚さの火傷をさせ、次いで火傷部
分に０．５ｍ１食塩水中６８０個の細胞を皮下注射した
。
炎で１０％の背中の全厚さの火傷をさせ、次いで火傷部
分に０．５ｍ１食塩水中６８０個の細胞を皮下注射した
。
ｄ、前免疫血清に比べての統計学的に重要な保護（Ｐ＜
０．０５）。
０．０５）。
ｅ、（Ｐｒｏ、００１）
１１： １．非常に保護的な抗体が配合体ワクチンの３
回の注射後に生成した。
回の注射後に生成した。
２、活性免疫性が免疫から少くとも２＋ケ月間持続した
。
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、解毒された多糖類に炭素数４〜１２の残基によって
共有結合された、グラム陰性バクテリアに由来する解毒
された蛋白質を含んでなることを特徴とする毒性と内毒
素をもたない、グラム陰性バクテリアに対して有効な免
疫組成物。 ２、該解毒された蛋白質がアミド結合によって炭素数４
〜１２の残基に共有結合されており、そしてこの残基は
解毒された多糖類にアミン結合によって共有結合されて
いる特許請求の範囲第１項記載の免疫組成物。 ３、グラム陰性バクテリアが緑膿菌である特許請求の範
囲第１項記載の組成物。 ４、助剤を更に含んでなる特許請求の範囲第１項記載の
組成物。 ５、特許請求の範囲第１項記載の免疫組成物を含んでな
る製薬学的調製剤。 ６、特許請求の範囲第１項記載の組成物の有効量を人間
及び他ｑ、動物に投与することを特徴とする、宿主のグ
ラム陰性バクテリアによる感染を防止する方法。 ７、グラム陰性バクテリアが緑膿菌である特許請求の範
囲第６項記載の方法。 ８、特許請求の範囲第１項記載の組成物の有効量を宿主
に投与することを特徴とする宿主の微生物に対する免疫
応答を誘導する方法。 ９、（ａ）特別なグラム陰性バクテリアに由来する特許
請求の範囲第１項記載の組成物のある量を供与体に投与
し、その際核間は該グラム陰性バクテリアに対する抗体
を該供与体の血液中に通常見られるよりも高い値まで増
大させるのに十分な量であり、 （ｂ）該供与体の血液が該グラム陰性バクテリアに対す
る抗体を正常よりも高い力価で示す期間の間に該供与体
から血液を得、そして（Ｃ）該血液を分画して、特許請
求の範囲第１項記載の組成物を投与してない供与体から
得られる血液から分画した免疫血清グロブリンと比較し
た時に該グラム陰性バクテリアに対する抗体を高い力価
で有する免疫血清グロブリンを得る、 ことを含んでなる、該グラム陰性バクテリアに対する抗
体を高力価で有する超免疫血清グロブリンの製造法。 １０、グラム陰性バクテリアが緑膿菌である特許請求の
範囲第９項記載の方法。 １１、該グラム陰性バクテリアに対する抗体を約１：８
０００〜≧１：６４０００の力価で有する特許請求の範
囲第９項記載の超免疫血清グロブリン。 １２、特許請求の範囲第９項記載の組成物の有効量を、
グラム陰性バクテリアによって誘発された感染を有する
人間に投与することを含んでなる該感染の処置法。 １３、＜ａ）グラム陰性バクテリアに由来するりポ多糖
類の脂質Ａ部分を分離して、解毒された脂質Ａを含まな
い多糖類を得、 （ｂ ）解毒された多糖類を選択的に酸化して、それに
反応性のアルデヒド基を生成させ、（Ｃ）該グラム陰性
バクテリアに由来する蛋白質を解毒し、そして （ｄ）該蛋白質に対して及び該選択的に酸化した多糖類
に対して反応性を有する炭素数４〜１２の残基を用いて
、該解毒された蛋白質を該選択的に酸化した解毒された
多糖類に共有結合させる、 ことを含んでなる特許請求の範囲第１項記載の組成物を
製造する方法。 １４、炭素数４〜１２の残基が少くとも２つのアミノ基
を含有し、そして解毒した蛋白質がアミド結合によって
それに結合され、しかも脂質Ａを含まない多糖類がアミ
ン結合によってそれに結合される特ｇ′Ｆ−請求の範囲
第１３項記載の方法。 １５、グラム陰性バクテリアが緑膿菌である特許請求の
範囲第１３項記載の方法。 １６、緑膿菌に対する抗体を少くとも約１：８０００〜
≧１：６４０００の力価で有する超免疫血清グロブリン
。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US475415 | 1983-03-14 | ||
| US06/475,415 US4663160A (en) | 1983-03-14 | 1983-03-14 | Vaccines for gram-negative bacteria |
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|---|---|
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| JPH0577657B2 JPH0577657B2 (ja) | 1993-10-27 |
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| EP (2) | EP0118831B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59175440A (ja) |
| AT (1) | ATE44238T1 (ja) |
| DE (1) | DE3478789D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986005396A1 (en) * | 1985-03-11 | 1986-09-25 | Teijin Limited | E87ag antigen of pseudomonas aeruginosa, monoclonal antibody against it, and hybridoma |
| JPS6289632A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-24 | シユウアイツエリツシエス・ゼル−ム−ウント・イムプフインステイトウト・ウント・インステイトウト・ツ−ル・エルフオルシユング・デル・インフエクツイオンスクランクハイテン | グラム陰性菌による感染に対する接合ワクチン及びその使用法 |
Families Citing this family (107)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5360897A (en) * | 1981-08-31 | 1994-11-01 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad |
| IT1187753B (it) * | 1985-07-05 | 1987-12-23 | Sclavo Spa | Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente |
| US4755381A (en) * | 1986-03-27 | 1988-07-05 | Swiss Serum And Vaccine Institute Berne | Klebsiella capsular polysaccharide vaccine |
| US4789544A (en) * | 1986-05-23 | 1988-12-06 | Midcon Labs. Inc. | Co-vaccination using non-O-carbohydrate side-chain gram-negative bacteria preparation |
| DE3727987A1 (de) * | 1987-08-21 | 1989-03-02 | Sleytr Uwe B | Pharmazeutische struktur |
| US5043158A (en) * | 1987-08-21 | 1991-08-27 | Chembiomed, Ltd. | Immunogenic compositions containing ordered carriers |
| US5063054A (en) * | 1988-04-18 | 1991-11-05 | Joseph Chang | Microbial products used for treatment of hepatitis |
| NZ239643A (en) * | 1990-09-17 | 1996-05-28 | North American Vaccine Inc | Vaccine containing bacterial polysaccharide protein conjugate and adjuvant (c-nd-che-a-co-b-r) with a long chain alkyl group. |
| US5153312A (en) * | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
| FR2682388B1 (fr) * | 1991-10-10 | 1995-06-09 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal. |
| WO1993013797A2 (en) * | 1992-01-16 | 1993-07-22 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Detoxified lps-cholera toxin conjugate vaccine for prevention of cholera |
| US5554730A (en) * | 1993-03-09 | 1996-09-10 | Middlesex Sciences, Inc. | Method and kit for making a polysaccharide-protein conjugate |
| US5866132A (en) * | 1995-06-07 | 1999-02-02 | Alberta Research Council | Immunogenic oligosaccharide compositions |
| US5695768A (en) * | 1995-06-07 | 1997-12-09 | Alberta Research Council | Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides |
| US6477464B2 (en) | 2000-03-09 | 2002-11-05 | Donnelly Corporation | Complete mirror-based global-positioning system (GPS) navigation solution |
| US6693517B2 (en) | 2000-04-21 | 2004-02-17 | Donnelly Corporation | Vehicle mirror assembly communicating wirelessly with vehicle accessories and occupants |
| US6329925B1 (en) | 1999-11-24 | 2001-12-11 | Donnelly Corporation | Rearview mirror assembly with added feature modular display |
| ATE395931T1 (de) | 1998-07-15 | 2008-06-15 | Brigham & Womens Hospital | Polysaccharid-impfstoff gegen staphylokokken infektionen |
| EP1109576B1 (en) * | 1998-08-19 | 2009-10-21 | Baxter Healthcare SA | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide |
| US7167796B2 (en) | 2000-03-09 | 2007-01-23 | Donnelly Corporation | Vehicle navigation system for use with a telematics system |
| US7370983B2 (en) | 2000-03-02 | 2008-05-13 | Donnelly Corporation | Interior mirror assembly with display |
| ATE363413T1 (de) | 2001-01-23 | 2007-06-15 | Donnelly Corp | Verbessertes fahrzeugbeleuchtungssystem |
| US7255451B2 (en) | 2002-09-20 | 2007-08-14 | Donnelly Corporation | Electro-optic mirror cell |
| US7581859B2 (en) | 2005-09-14 | 2009-09-01 | Donnelly Corp. | Display device for exterior rearview mirror |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| WO2003094961A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-20 | Massimo Porro | Improved polysaccharide and glycoconjugate vaccines_____________ |
| US7310177B2 (en) | 2002-09-20 | 2007-12-18 | Donnelly Corporation | Electro-optic reflective element assembly |
| CA2501812C (en) | 2002-10-11 | 2012-07-10 | Mariagrazia Pizza | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| ES2411080T3 (es) | 2003-01-30 | 2013-07-04 | Novartis Ag | Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| RU2378010C2 (ru) | 2003-10-02 | 2010-01-10 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. | Жидкие вакцины для множественных серогрупп менингококков |
| WO2005044861A1 (en) * | 2003-10-31 | 2005-05-19 | Wyeth Holdings Corporation | Polysaccharides of helicobacter pylori |
| JP2007519746A (ja) * | 2004-01-29 | 2007-07-19 | バイオシネクサス インコーポレーティッド | ワクチン調製におけるアミノ−オキシ官能基の使用 |
| GB0406013D0 (en) | 2004-03-17 | 2004-04-21 | Chiron Srl | Analysis of saccharide vaccines without interference |
| GB0408977D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins |
| BRPI0510315A (pt) | 2004-04-30 | 2007-10-16 | Chiron Srl | integração de vacinação com conjugado meningocócico |
| GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
| GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
| GB0411387D0 (en) | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Chiron Srl | Analysis of saccharide length |
| US8246993B2 (en) * | 2004-06-10 | 2012-08-21 | Cytogel Pharma, Llc | Advantageous hydrogel composition |
| GB0413868D0 (en) | 2004-06-21 | 2004-07-21 | Chiron Srl | Dimensional anlaysis of saccharide conjugates |
| US20060013886A1 (en) | 2004-06-28 | 2006-01-19 | Daqing Wu | Injectable microspheres |
| CA2581330A1 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-30 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods and compositions relating to mannuronic acid specific binding peptides |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| SI2004225T1 (sl) | 2006-03-22 | 2012-08-31 | Novartis Ag | Reĺ˝imi za imunizacijo z meningokoknimi konjugati |
| GB0605757D0 (en) | 2006-03-22 | 2006-05-03 | Chiron Srl | Separation of conjugated and unconjugated components |
| GB0612854D0 (en) | 2006-06-28 | 2006-08-09 | Novartis Ag | Saccharide analysis |
| MX2009002560A (es) | 2006-09-07 | 2009-03-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna. |
| GB0700562D0 (en) | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
| EA201490303A1 (ru) | 2007-05-02 | 2014-05-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина |
| GB0713880D0 (en) * | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
| US8017898B2 (en) | 2007-08-17 | 2011-09-13 | Magna Electronics Inc. | Vehicular imaging system in an automatic headlamp control system |
| US8446470B2 (en) | 2007-10-04 | 2013-05-21 | Magna Electronics, Inc. | Combined RGB and IR imaging sensor |
| CA2702871A1 (en) | 2007-10-19 | 2009-04-23 | Novartis Ag | Meningococcal vaccine formulations |
| GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
| EP2245048B1 (en) | 2008-02-21 | 2014-12-31 | Novartis AG | Meningococcal fhbp polypeptides |
| HUE029265T2 (en) | 2008-10-27 | 2017-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Method of purifying carbohydrates from the group streptococci |
| GB0822633D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Formulation |
| GB0822634D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Meningitis vaccines |
| CN102300585A (zh) | 2008-12-17 | 2011-12-28 | 诺华有限公司 | 包含血红蛋白受体的脑膜炎球菌疫苗 |
| WO2010109324A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates |
| WO2010109323A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Adjuvanting meningococcal factor h binding protein |
| SG175092A1 (en) | 2009-04-14 | 2011-11-28 | Novartis Ag | Compositions for immunising against staphylococcus aerus |
| WO2011017101A2 (en) | 2009-07-27 | 2011-02-10 | Fina Biosolutions, Llc | Method for producing protein-carbohydrate vaccines reduced in free carbohydrate |
| AU2010288240B2 (en) | 2009-08-27 | 2014-03-27 | Novartis Ag | Hybrid polypeptides including meningococcal fHBP sequences |
| US20120237536A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-09-20 | Novartis | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
| WO2011039631A2 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Novartis Ag | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| JP2013506651A (ja) | 2009-09-30 | 2013-02-28 | ノバルティス アーゲー | Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ．ａｕｒｅｕｓ５型および８型莢膜多糖の結合体 |
| AU2010310985B2 (en) | 2009-10-27 | 2014-11-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fHBP polypeptides |
| PT2493498T (pt) * | 2009-10-30 | 2017-05-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Purificação de sacáridos capsulares de staphylococcus aureus tipo 5 e tipo 8 |
| GB0919690D0 (en) | 2009-11-10 | 2009-12-23 | Guy S And St Thomas S Nhs Foun | compositions for immunising against staphylococcus aureus |
| BR122022002136B1 (pt) | 2009-12-17 | 2022-08-23 | Fina Biosolutions, Llc | Processo de conjugação de carboidratos na preparação de vacinas conjugadas e suas respectivas vacinas |
| EP2519265B1 (en) | 2009-12-30 | 2018-11-14 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Polysaccharide immunogens conjugated to e. coli carrier proteins |
| GB201003333D0 (en) | 2010-02-26 | 2010-04-14 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| GB201005625D0 (en) | 2010-04-01 | 2010-05-19 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| EP2574172A4 (en) | 2010-05-21 | 2013-10-30 | Cytogel Pharma Llc | MATERIALS AND METHOD FOR TREATING INFLAMMATION |
| EP2585106A1 (en) | 2010-06-25 | 2013-05-01 | Novartis AG | Combinations of meningococcal factor h binding proteins |
| WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
| CA2860331A1 (en) | 2010-12-24 | 2012-06-28 | Novartis Ag | Compounds |
| US20140112950A1 (en) | 2011-03-02 | 2014-04-24 | Manmohan Singh | Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant |
| GB201114923D0 (en) | 2011-08-30 | 2011-10-12 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| CA2854934A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Novartis Ag | Carrier molecule comprising a spr0096 and a spr2021 antigen |
| DK2788023T3 (en) | 2011-12-06 | 2016-12-19 | Valneva Austria Gmbh | Aluminum compounds for use in therapeutics and vaccines |
| GB201121301D0 (en) | 2011-12-12 | 2012-01-25 | Novartis Ag | Method |
| JP2015505309A (ja) | 2011-12-29 | 2015-02-19 | ノバルティス アーゲー | 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質のアジュバントされた組み合わせ |
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| EA201590427A1 (ru) | 2012-10-02 | 2015-09-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Нелинейные сахаридные конъюгаты |
| EP3620172A1 (en) | 2012-10-12 | 2020-03-11 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines |
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| EP2950819B1 (en) | 2013-02-01 | 2018-03-28 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Intradermal delivery of immunological compositions comprising toll-like receptor agonists |
| WO2015082501A1 (en) * | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Virometix Ag | Proline-rich peptides protective against s. pneumoniae |
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| BR112019027387A8 (pt) * | 2017-06-23 | 2022-12-06 | Univ Maryland | Composições imunogênicas |
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Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH396316A (de) * | 1960-07-12 | 1965-07-31 | Wander Ag Dr A | Verfahren zur Herstellung von Impfstoffen |
| US3987164A (en) * | 1970-10-20 | 1976-10-19 | Yuzuru Homma | Method for prevention of pseudomonas aeruginosa infections |
| US4185090A (en) * | 1972-02-02 | 1980-01-22 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| AU8180175A (en) * | 1974-06-04 | 1976-12-09 | Wellcome Found | Biological reagent |
| JPS51106714A (ja) * | 1975-03-12 | 1976-09-21 | Tokyo Daigaku | |
| JPS5296729A (en) * | 1976-02-05 | 1977-08-13 | Shionogi & Co Ltd | Mixed vaccin for cyanomycosis |
| FR2460139A1 (fr) * | 1979-06-29 | 1981-01-23 | Pasteur Institut | Fraction antigenique glycopeptidique vaccinante a tres grande immunogenicite isolee de cultures de germes pathogenes, procedes d'isolement de cette fraction et vaccins contenant ladite fraction |
| JPS5639022A (en) * | 1979-09-05 | 1981-04-14 | Hayashibara Biochem Lab Inc | Preparation of vaccine |
| US4285936A (en) * | 1979-12-10 | 1981-08-25 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Method for producing a vaccine against bacterial infections caused by pseudomonas aeruginosa |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4459286A (en) * | 1983-01-31 | 1984-07-10 | Merck & Co., Inc. | Coupled H. influenzae type B vaccine |
-
1983
- 1983-03-14 US US06/475,415 patent/US4663160A/en not_active Expired - Fee Related
-
1984
- 1984-02-29 EP EP84102119A patent/EP0118831B1/en not_active Expired
- 1984-02-29 AT AT84102119T patent/ATE44238T1/de not_active IP Right Cessation
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- 1984-02-29 EP EP88105929A patent/EP0306607A1/en not_active Withdrawn
- 1984-03-12 JP JP59045764A patent/JPS59175440A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986005396A1 (en) * | 1985-03-11 | 1986-09-25 | Teijin Limited | E87ag antigen of pseudomonas aeruginosa, monoclonal antibody against it, and hybridoma |
| JPS6289632A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-24 | シユウアイツエリツシエス・ゼル−ム−ウント・イムプフインステイトウト・ウント・インステイトウト・ツ−ル・エルフオルシユング・デル・インフエクツイオンスクランクハイテン | グラム陰性菌による感染に対する接合ワクチン及びその使用法 |
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