JPS5915862A - 高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法 - Google Patents
高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法Info
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- JPS5915862A JPS5915862A JP12555182A JP12555182A JPS5915862A JP S5915862 A JPS5915862 A JP S5915862A JP 12555182 A JP12555182 A JP 12555182A JP 12555182 A JP12555182 A JP 12555182A JP S5915862 A JPS5915862 A JP S5915862A
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- analysis
- hexane
- moving phase
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、高速液体クロマトグラフによる簡便な脂質の
分析方法に関する。
分析方法に関する。
従来、血清中の脂質を高速液体クロマトグラフで分析す
る場合には、試料血清を前処理した後、塩化メチレン又
はヘキサン可溶画分をサンプリングしているが、これに
含まれている種々の未知成分によって分析結果の再現性
が低下するため、上記サンプルを更に繰返し分配抽出し
、未知成分を除去してから逆相カラムに注入するように
している。したがって、これまでの分析には、かなりの
時間と労力を要し、また、目的成分の損失が多いという
問題があった。
る場合には、試料血清を前処理した後、塩化メチレン又
はヘキサン可溶画分をサンプリングしているが、これに
含まれている種々の未知成分によって分析結果の再現性
が低下するため、上記サンプルを更に繰返し分配抽出し
、未知成分を除去してから逆相カラムに注入するように
している。したがって、これまでの分析には、かなりの
時間と労力を要し、また、目的成分の損失が多いという
問題があった。
本発明は、このような問題に鑑み、分析工程全体の簡素
化と目的成分の収率向上を図り、もって夢分析時間の短
縮を可能とし得る脂質の分析方法を提案することを目的
とする。
化と目的成分の収率向上を図り、もって夢分析時間の短
縮を可能とし得る脂質の分析方法を提案することを目的
とする。
すなわち、本発明は、試料血清を温メタノール処理後、
ｎ−へキサンに可溶な両分をサンプルとして逆相カラム
に注入して目的とする脂質成分を得、この後、移動相の
送液を中止し、代って有機溶媒を含む洗浄液を前記カラ
ムに送液するようにしたことを特徴とするもので、以下
に本発明の詳細を実施例に基づいて説明する。
ｎ−へキサンに可溶な両分をサンプルとして逆相カラム
に注入して目的とする脂質成分を得、この後、移動相の
送液を中止し、代って有機溶媒を含む洗浄液を前記カラ
ムに送液するようにしたことを特徴とするもので、以下
に本発明の詳細を実施例に基づいて説明する。
試料血清を温メタノール内に滴下して血清タンパクを変
成させて除タンパクした後、ｎ−ヘキサンｔ 加して血
清中の温メタノール及びｎ−ヘキサンに可溶な両分をサ
ンプルとして採取する。そして、このサンプルを、例え
ばメタノール−水（体積比６／４）に第１リン酸ナトリ
ウム（Ｎａ Ｈ２ＰＯ４）を５ｍＭ添加し、特級リン酸
でＰＨ２，４に調製した移動相を使用する逆相クロマト
グラフにかける。
成させて除タンパクした後、ｎ−ヘキサンｔ 加して血
清中の温メタノール及びｎ−ヘキサンに可溶な両分をサ
ンプルとして採取する。そして、このサンプルを、例え
ばメタノール−水（体積比６／４）に第１リン酸ナトリ
ウム（Ｎａ Ｈ２ＰＯ４）を５ｍＭ添加し、特級リン酸
でＰＨ２，４に調製した移動相を使用する逆相クロマト
グラフにかける。
この際、例えば波長２１０ ｎｍの紫外光を使用し゛て
カラムからの溶出液の吸光度を測定すると、サンプル注
入時から所定のリテンションタイムＴ、 ノ経過後に
目的成分であるテストステロンのピークｐｔ（第１図）
を独立味として検出できる。この注入されたサンプルに
対する脂質の分析は、」二記工程で終了するが、さらに
引続き上記移動相をカラム洗送液し続けると、目的成分
のピークＰＩから約５４分経過後、及び１００分経過後
に未知成分のピークｐ、、ｐｓ が出現する。つｔｂ
、上述した前処理によるサンプ・ルには、目的成分以外
にこれよりかなりの時間経過後に溶出する未知成分を含
有しているから、目的成分であるテス）・ステロンのピ
ークＰ１が検出された段階で、移動相の送液を中止し、
代ってイソプロパツールと水を等量混合した洗浄液をカ
ラム内に送液する。この洗浄液によるカラムからの溶出
物質の紫外線の吸光度をモニターすると、洗浄液の送液
から１０．１分及び１２．５分経過後に大きなピークＰ
’２＋ ｐ／３（第２図）が検出されるから、これによ
って前記未知成分（Ｐ＋、Ｐｇ）が溶出したことがわか
る。この段階で洗浄液の送液を停止し、代って前述した
移動相をカラムに送液してその内部に残留している洗浄
液を排除する。
カラムからの溶出液の吸光度を測定すると、サンプル注
入時から所定のリテンションタイムＴ、 ノ経過後に
目的成分であるテストステロンのピークｐｔ（第１図）
を独立味として検出できる。この注入されたサンプルに
対する脂質の分析は、」二記工程で終了するが、さらに
引続き上記移動相をカラム洗送液し続けると、目的成分
のピークＰＩから約５４分経過後、及び１００分経過後
に未知成分のピークｐ、、ｐｓ が出現する。つｔｂ
、上述した前処理によるサンプ・ルには、目的成分以外
にこれよりかなりの時間経過後に溶出する未知成分を含
有しているから、目的成分であるテス）・ステロンのピ
ークＰ１が検出された段階で、移動相の送液を中止し、
代ってイソプロパツールと水を等量混合した洗浄液をカ
ラム内に送液する。この洗浄液によるカラムからの溶出
物質の紫外線の吸光度をモニターすると、洗浄液の送液
から１０．１分及び１２．５分経過後に大きなピークＰ
’２＋ ｐ／３（第２図）が検出されるから、これによ
って前記未知成分（Ｐ＋、Ｐｇ）が溶出したことがわか
る。この段階で洗浄液の送液を停止し、代って前述した
移動相をカラムに送液してその内部に残留している洗浄
液を排除する。
この洗浄液排除の過程を紫外線吸光度によりモニターす
ると、移動相の送液開始から４．６分経過後に大きなピ
ークＰ４が検出され、その後はなだらかにベースライン
に漸近してゆき、２６分経過後にはベースラインに落着
くようになる。
ると、移動相の送液開始から４．６分経過後に大きなピ
ークＰ４が検出され、その後はなだらかにベースライン
に漸近してゆき、２６分経過後にはベースラインに落着
くようになる。
最後に、このようにしてクリーンな状態となったカラム
に、前述したのと同様の前処理を経て得たサンプルをカ
ラムに再注入すると、所定のリテンションタイムＴＩ経
過後にテストステロンのピークＰ′ｌが明瞭に検出でき
る。
に、前述したのと同様の前処理を経て得たサンプルをカ
ラムに再注入すると、所定のリテンションタイムＴＩ経
過後にテストステロンのピークＰ′ｌが明瞭に検出でき
る。
なお、上述の実施例では、テストステロンヲ分析対象と
したが、他の脂質成分に対しても同様の手法が適用でき
、さらに洗浄液にイソプロパツールを使用しだが、第３
ブタノール等の他の有機溶媒を使用することもできる。
したが、他の脂質成分に対しても同様の手法が適用でき
、さらに洗浄液にイソプロパツールを使用しだが、第３
ブタノール等の他の有機溶媒を使用することもできる。
以上、説明したように本発明によれば、血清試料の内、
温メタノール及びｎ−ヘギサンに可溶な両分をサンプル
として、これを逆相カラムに注入した後、目的脂質成分
の溶出が終った段階で移動相の送液を中止し、代って有
機溶媒を含んだ洗浄液でカラム内を直ちに洗浄するよう
構成したので、要分性時間の短縮が図れると同時にサン
プルの採取が簡単で目的成分の収率が向上するばかりで
なく、カラム内に残留する未知成分が殆どないから、分
析結果の再現性が高く、かつカラムの寿命を延長するこ
とができる。また、ステップグラジェント溶出が行なえ
る装置にあっては、移動相溶媒タンクの一個に上記した
洗浄液を貯蔵すれば、カラムの洗浄工程を含めた自動化
が実施できる。
温メタノール及びｎ−ヘギサンに可溶な両分をサンプル
として、これを逆相カラムに注入した後、目的脂質成分
の溶出が終った段階で移動相の送液を中止し、代って有
機溶媒を含んだ洗浄液でカラム内を直ちに洗浄するよう
構成したので、要分性時間の短縮が図れると同時にサン
プルの採取が簡単で目的成分の収率が向上するばかりで
なく、カラム内に残留する未知成分が殆どないから、分
析結果の再現性が高く、かつカラムの寿命を延長するこ
とができる。また、ステップグラジェント溶出が行なえ
る装置にあっては、移動相溶媒タンクの一個に上記した
洗浄液を貯蔵すれば、カラムの洗浄工程を含めた自動化
が実施できる。
第１，２図は、本発明方法による分析データの一例を示
す図である。 ブ 第１凹 竿２図 ３５３−
す図である。 ブ 第１凹 竿２図 ３５３−
Claims (1)
- 血清試料から温メタノール及びｎ−ヘキサンに可溶な画
分をサンプリングする工程、該サンプリングされたもの
を逆相カラム洗注入して目的とする脂質成分を溶出する
工程、該脂質成分が溶出し終った段階で移動相送液を中
止し、代って有機溶媒を含む洗浄液を送液する工程から
成る高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12555182A JPS5915862A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12555182A JPS5915862A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5915862A true JPS5915862A (ja) | 1984-01-26 |
Family
ID=14912997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12555182A Pending JPS5915862A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 高速液体クロマトグラフによる脂質の分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5915862A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63218858A (ja) * | 1987-03-09 | 1988-09-12 | Kusano Hiroshi | 脂溶性化合物の抽出分画法およびその装置 |
| CN113049719A (zh) * | 2021-03-24 | 2021-06-29 | 安徽歆智生物科技有限公司 | 一种检测游离睾酮的方法及试剂盒 |
-
1982
- 1982-07-19 JP JP12555182A patent/JPS5915862A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63218858A (ja) * | 1987-03-09 | 1988-09-12 | Kusano Hiroshi | 脂溶性化合物の抽出分画法およびその装置 |
| JP2578421B2 (ja) * | 1987-03-09 | 1997-02-05 | 草野 博 | 脂溶性化合物の抽出分画法およびその装置 |
| CN113049719A (zh) * | 2021-03-24 | 2021-06-29 | 安徽歆智生物科技有限公司 | 一种检测游离睾酮的方法及试剂盒 |
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