JPS5915859A - 凝集試験用水性溶媒 - Google Patents
凝集試験用水性溶媒Info
- Publication number
- JPS5915859A JPS5915859A JP12652782A JP12652782A JPS5915859A JP S5915859 A JPS5915859 A JP S5915859A JP 12652782 A JP12652782 A JP 12652782A JP 12652782 A JP12652782 A JP 12652782A JP S5915859 A JPS5915859 A JP S5915859A
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- JP
- Japan
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- flocculation
- aqueous solvent
- red blood
- cell membrane
- sheep
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- Granted
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、凝集試験用水性溶媒に関するものである〇
抗原抗体反応や、ある種の動植物菌体、又はウィルス由
来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球との凝集反応全追跡
することにより、それらの一方が又は両者を定量的に測
定する方法は、赤血球凝集反応（ＰＨＡ法）、逆受身赤
血球凝集反応（ＲＰＨＡ法）、細菌の凝集反応、又はラ
テックス凝集反応などとして広く臨床検査の分野でオＵ
用されている。
来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球との凝集反応全追跡
することにより、それらの一方が又は両者を定量的に測
定する方法は、赤血球凝集反応（ＰＨＡ法）、逆受身赤
血球凝集反応（ＲＰＨＡ法）、細菌の凝集反応、又はラ
テックス凝集反応などとして広く臨床検査の分野でオＵ
用されている。
背景技術
例えばＰＨＡ法について説明すれは、ｔＩｔ製したＨＢ
ｓ抗原會凝集試験用担体（以下担体と略す）であるヒツ
ジ赤血球に感作せしめてＨＢ ａ抗原感作ヒツジ赤血球
金得、このものと血液検体と全混合した時に水性溶媒中
で凝集反応がみられるか否かによって検体中にＨ）３ａ
抗体が存在していたか否かを判定できる。
ｓ抗原會凝集試験用担体（以下担体と略す）であるヒツ
ジ赤血球に感作せしめてＨＢ ａ抗原感作ヒツジ赤血球
金得、このものと血液検体と全混合した時に水性溶媒中
で凝集反応がみられるか否かによって検体中にＨ）３ａ
抗体が存在していたか否かを判定できる。
また凝集反応がみられた場合は、その検体ｆ：更に段階
的に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍
数全求めることにより、その検体中のＨＢｓ抗体全定童
的に測定することができる。
的に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍
数全求めることにより、その検体中のＨＢｓ抗体全定童
的に測定することができる。
ま＊ＲＰＨＡ法では、精製しｆｃ ＨＢ ａ抗体全担体
である４ｍｍ赤球に感作してＨＢｓ抗体感作赤血球を製
し、このものと検体と會混合した時に水性溶媒中で凝集
反応がみられるか否かによって、検体中にＨＢｓ抗原が
含まれているか否かを検知することができる。
である４ｍｍ赤球に感作してＨＢｓ抗体感作赤血球を製
し、このものと検体と會混合した時に水性溶媒中で凝集
反応がみられるか否かによって、検体中にＨＢｓ抗原が
含まれているか否かを検知することができる。
更にある種のウィルスと鳥類の赤血球とはウィルスの有
する凝集素の作用によシ赤血球會水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中での凝集反応の有無、強弱によってウ
ィルスの濃度を定量的に測定することができる。これら
多くの水性溶媒中での凝集反応全利用した分析方法は、
簡便でかつ測定感度も高いので各柚抗原や抗体の検査に
広く利用されていることは周知の通やである。
する凝集素の作用によシ赤血球會水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中での凝集反応の有無、強弱によってウ
ィルスの濃度を定量的に測定することができる。これら
多くの水性溶媒中での凝集反応全利用した分析方法は、
簡便でかつ測定感度も高いので各柚抗原や抗体の検査に
広く利用されていることは周知の通やである。
しかし、これら水性溶媒中での凝集試験に共通した欠点
として、担体に対する抗体全含む検体においては、非特
異的な凝集反応がおこシ刊定を誤まるという問題がある
。従って、検体全測定する場合には、これらの疑似反応
物の影響が出てこない程度ｖこまで予め希釈した後に測
定を行うか、もしくは適当な確認試験法を用いて水性溶
媒中での凝集反応の真Ｐ’に確かめる必要がある。
として、担体に対する抗体全含む検体においては、非特
異的な凝集反応がおこシ刊定を誤まるという問題がある
。従って、検体全測定する場合には、これらの疑似反応
物の影響が出てこない程度ｖこまで予め希釈した後に測
定を行うか、もしくは適当な確認試験法を用いて水性溶
媒中での凝集反応の真Ｐ’に確かめる必要がある。
また、水性溶媒中でのこれら非特異的凝集反応を少なく
する方法として、測定に用いる水性溶媒の中に少量の動
物蛋白やアクリノール會加える方法が既に知られている
。しかしこれらの方法においてもある程度の非特異凝集
反応全防止しうるが、尚多くの非特異反応が残るので更
に優れた方法の出現が待望されている。
する方法として、測定に用いる水性溶媒の中に少量の動
物蛋白やアクリノール會加える方法が既に知られている
。しかしこれらの方法においてもある程度の非特異凝集
反応全防止しうるが、尚多くの非特異反応が残るので更
に優れた方法の出現が待望されている。
また、非特異反応全消去する別の方法として検体中の疑
似反応物質を感作していない担体で予め吸着除去する方
法もあるが、多数の検体全同時に短時間に処理するには
あまりにも煩雑である。
似反応物質を感作していない担体で予め吸着除去する方
法もあるが、多数の検体全同時に短時間に処理するには
あまりにも煩雑である。
従って、本発明の目的は非特異反応を消去し極めて検出
感度の優れた凝集試験用水性溶媒全提供せんとするにあ
る。
感度の優れた凝集試験用水性溶媒全提供せんとするにあ
る。
発明の開示
発明者等は永年この凝集反応における非特異反応全消去
するため測定方法の改良研究を続け、担体とは異種の動
物由来の細胞膜成分を測定系に存在させることにより測
定感度が顕著に改善されること、さらに当該細胞膜成分
を特定濃度に存在させた場合に、特に好ましい結果が得
られることを見出し、本発明全完成した。
するため測定方法の改良研究を続け、担体とは異種の動
物由来の細胞膜成分を測定系に存在させることにより測
定感度が顕著に改善されること、さらに当該細胞膜成分
を特定濃度に存在させた場合に、特に好ましい結果が得
られることを見出し、本発明全完成した。
即ち、本発明は凝集試験用担体と異種の動物由来の血球
膜成分ｉｏ、ｏｏｌ〜０．４％（Ｗ／Ｖ）の濃度に含有
することを特徴とする凝集試験用水性溶媒に関する。
膜成分ｉｏ、ｏｏｌ〜０．４％（Ｗ／Ｖ）の濃度に含有
することを特徴とする凝集試験用水性溶媒に関する。
この水性溶媒を各種凝集反応試験用試薬の調整に用いる
ことによｐ上記測定感度の改善全達成することができる
。
ことによｐ上記測定感度の改善全達成することができる
。
水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試験用水性
溶媒が利用でき、例えは水、生理食塩水、各種緩衝液（
リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、アル
ブミン溶液、デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血清
溶液、合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶液、
およびこれらの組み合せからなる溶液が例示される０当
該水性溶媒のｐＨは、約６．０〜８．５が好ましく、か
かるｐＩ（への調整は緩衝液でおこなわれることが好ま
、しい０水性溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であること
が好ましく、よシ好ましくは、生理的等張な溶液である
。
溶媒が利用でき、例えは水、生理食塩水、各種緩衝液（
リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、アル
ブミン溶液、デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血清
溶液、合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶液、
およびこれらの組み合せからなる溶液が例示される０当
該水性溶媒のｐＨは、約６．０〜８．５が好ましく、か
かるｐＩ（への調整は緩衝液でおこなわれることが好ま
、しい０水性溶媒の塩濃度は、比較的低濃度であること
が好ましく、よシ好ましくは、生理的等張な溶液である
。
なお、さらにこの溶液に上記の従来既知の非特異的凝集
反応阻止物質を混合してもよい。担体としては、自体既
知のものが使用され、具体的には、たとえばヒツジ、モ
ルモット、０型の人、ニワトリなどの赤血球をホルマリ
ン、グルタルアルデヒドなどで固定したものなどがあげ
られ、これらのうちでも特に好ましいものはヒツジ赤血
球である。
反応阻止物質を混合してもよい。担体としては、自体既
知のものが使用され、具体的には、たとえばヒツジ、モ
ルモット、０型の人、ニワトリなどの赤血球をホルマリ
ン、グルタルアルデヒドなどで固定したものなどがあげ
られ、これらのうちでも特に好ましいものはヒツジ赤血
球である。
このような担体は約２０μ以下、特に５〜１５μ程度の
粒状のもの全使用するのが有利である。このような担体
に抗体又は抗原全感作させる処理は自体公知の方法に準
じて行うことができる。
粒状のもの全使用するのが有利である。このような担体
に抗体又は抗原全感作させる処理は自体公知の方法に準
じて行うことができる。
本発明にて使用される細胞膜成分とは、たとえは細胞膜
を微細に分解したもの（ｆｃとえは、細胞の１，５μ以
下の超微細分解物など）などであり、かかる超微細分解
物は、たとえは細胞を超音波処理することなどによって
得られる。超音波処理における条件は、通常３０℃以下
、ｌＯ〜２０ＫＨ。
を微細に分解したもの（ｆｃとえは、細胞の１，５μ以
下の超微細分解物など）などであり、かかる超微細分解
物は、たとえは細胞を超音波処理することなどによって
得られる。超音波処理における条件は、通常３０℃以下
、ｌＯ〜２０ＫＨ。
１０〜６０分間であり、超音波処理後２μの膜全通過し
たものを用いることが好ましい。細胞としては、が血球
、白血球などの血球、リンパ球、株化リンパ球などがあ
げられる。
たものを用いることが好ましい。細胞としては、が血球
、白血球などの血球、リンパ球、株化リンパ球などがあ
げられる。
実施例
モルモットに精製ＨＢｓ抗原を免疫してＨＢａ抗血清金
得た。この抗血清を硫安分画法とイオン交換クロマトグ
ラフィー法とで処理し精製ＨＢ叔体を得、このｆＩｉｌ
製ＨＢａ抗体葡クルタルアルデヒドにより固定されたヒ
ツジ赤血球に感作してＨＢｓ抗体感作ヒツジ赤血球全得
全書 他方、本発明からなる水性溶媒としてＯ，１μリン酸緩
衝液（ｐＨ７，５）に正常動物血清およびウシ又はヤギ
の赤血球膜成分を終濃度が０．００１及び０．４％（Ｗ
／Ｖ）になる様に加え、コントロールとして無添加のも
のを用意した。確認試験の結果非特異凝集をおこすこと
が分っているクエン酸塩加入血漿の２検体（表中１及び
２）ｉＲＰＨＡ法に従いこの５種類の溶媒を用いてマイ
クロプレート上でそれぞれ２倍数希釈を行い、この希釈
列へ上記で得たＨＢａ抗体感作ヒツジ赤血球を混合した
。
得た。この抗血清を硫安分画法とイオン交換クロマトグ
ラフィー法とで処理し精製ＨＢ叔体を得、このｆＩｉｌ
製ＨＢａ抗体葡クルタルアルデヒドにより固定されたヒ
ツジ赤血球に感作してＨＢｓ抗体感作ヒツジ赤血球全得
全書 他方、本発明からなる水性溶媒としてＯ，１μリン酸緩
衝液（ｐＨ７，５）に正常動物血清およびウシ又はヤギ
の赤血球膜成分を終濃度が０．００１及び０．４％（Ｗ
／Ｖ）になる様に加え、コントロールとして無添加のも
のを用意した。確認試験の結果非特異凝集をおこすこと
が分っているクエン酸塩加入血漿の２検体（表中１及び
２）ｉＲＰＨＡ法に従いこの５種類の溶媒を用いてマイ
クロプレート上でそれぞれ２倍数希釈を行い、この希釈
列へ上記で得たＨＢａ抗体感作ヒツジ赤血球を混合した
。
別にＨＢｓ抗原が陽性の検体（３）につき同様に処理、
試験した。なお混合液量は検体希釈液２５．ＡｔζＰｉ
抗体感作ヒツジ赤血球２５μｔであり室温で２時間後の
凝集の強さく凝集度）を４．８，２．１の評価とし、非
凝集を評価０として表現した時第１表の成績を得た。
試験した。なお混合液量は検体希釈液２５．ＡｔζＰｉ
抗体感作ヒツジ赤血球２５μｔであり室温で２時間後の
凝集の強さく凝集度）を４．８，２．１の評価とし、非
凝集を評価０として表現した時第１表の成績を得た。
尚赤血球膜成分はそれぞれの洗浄赤血球浣腸の１０倍量
の水にて溶血せしめた後、ｐＨ８，０のリン酸すトリウ
ム溶液に懸濁し、超音波処理し１．２μの膜を通過した
Ｐ液を用いた。
の水にて溶血せしめた後、ｐＨ８，０のリン酸すトリウ
ム溶液に懸濁し、超音波処理し１．２μの膜を通過した
Ｐ液を用いた。
（以下余白）
表 １
表１に示した結果より、ウシ赤血球膜成分、ヤギ赤血球
膜成分又はヒツジ組織成分を０．００１〜０．４％（ｗ
／ｖ）の濃度に添加することにより非特異反応はｌ：
６４〜１：１２８から樟ｌ ：４〜１：１６にまで抑え
られている。また陽性検体ではこれらのものを添加して
も影響はないことが判る。
膜成分又はヒツジ組織成分を０．００１〜０．４％（ｗ
／ｖ）の濃度に添加することにより非特異反応はｌ：
６４〜１：１２８から樟ｌ ：４〜１：１６にまで抑え
られている。また陽性検体ではこれらのものを添加して
も影響はないことが判る。
以上の如く本発明からなる凝集試験用水性溶媒は、著る
しく凝集反応の感度を上昇させるものであって、すぐれ
た凝集試験を可能とするものである。
しく凝集反応の感度を上昇させるものであって、すぐれ
た凝集試験を可能とするものである。
以下に本発明を実施例によって示す。
実施例１
ヒツジ赤血球をグルグルアルデヒドで固定し、公知の方
法で抗ＨＢｓ抗体を感作して担体を得た。
法で抗ＨＢｓ抗体を感作して担体を得た。
本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、０．１Ｍ
ＩＪン酸緩衝液ｐ Ｈ７，８にウシ赤血球膜成分Ｏ１％
（ｗ／ｖ）およびヤギ赤血球膜成分０．１％（ｗ／ｖ）
を加えた。なお、ウシ赤血球膜成分及びヤギ赤血球膜成
分はそれぞれ、実験例における膜成分の調製と同様にし
て調製したものである。
ＩＪン酸緩衝液ｐ Ｈ７，８にウシ赤血球膜成分Ｏ１％
（ｗ／ｖ）およびヤギ赤血球膜成分０．１％（ｗ／ｖ）
を加えた。なお、ウシ赤血球膜成分及びヤギ赤血球膜成
分はそれぞれ、実験例における膜成分の調製と同様にし
て調製したものである。
実施例２
ニワトリ赤血球をグルタルアルデヒドで固定し公知の方
法でＨＢｓ１５’を原を感作した。
法でＨＢｓ１５’を原を感作した。
本担体を用いた凝集試験用水性溶媒として、０．９％塩
化ナトリウム溶液にヒトリンパ球膜成分およびガチョウ
赤血球膜成分をそれぞれ０．１％濃度に加えた。
化ナトリウム溶液にヒトリンパ球膜成分およびガチョウ
赤血球膜成分をそれぞれ０．１％濃度に加えた。
実施例８
実施例１及び２において、適当な保存剤（例えばＮａＮ
５）を加えた。
５）を加えた。
Claims (2)
- （１）凝集試験用担体と異種の動物由来の細胞膜成分’
ｉｏ、００１〜０．４％（ｗ／ｖ）の濃度に含有するこ
とを特徴とする凝集試験用水性溶媒。 - （２）担体が抗体感作ヒツジ赤血球であシ、細胞膜成分
がウシ及び／又はヤギ赤血球膜成分である特許請求の範
囲第（１）項記載の溶媒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12652782A JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12652782A JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5915859A true JPS5915859A (ja) | 1984-01-26 |
| JPH0377461B2 JPH0377461B2 (ja) | 1991-12-10 |
Family
ID=14937406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12652782A Granted JPS5915859A (ja) | 1982-07-19 | 1982-07-19 | 凝集試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5915859A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0762121A1 (en) * | 1995-08-09 | 1997-03-12 | Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. | Antigen for enzyme immunoassay and method of measuring anti-erythrocyte antibody |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5523402A (en) * | 1978-03-24 | 1980-02-19 | Yatoron:Kk | Manufacture of reagent for indirect red corpuscle agglutination which absorbs simultaneously heterogenetic antibody |
-
1982
- 1982-07-19 JP JP12652782A patent/JPS5915859A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5523402A (en) * | 1978-03-24 | 1980-02-19 | Yatoron:Kk | Manufacture of reagent for indirect red corpuscle agglutination which absorbs simultaneously heterogenetic antibody |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0762121A1 (en) * | 1995-08-09 | 1997-03-12 | Nippon Zoki Pharmaceutical Co., Ltd. | Antigen for enzyme immunoassay and method of measuring anti-erythrocyte antibody |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0377461B2 (ja) | 1991-12-10 |
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