JPS59154988A

JPS59154988A - 固定化酵素

Info

Publication number: JPS59154988A
Application number: JP3001783A
Authority: JP
Inventors: Yasuo Kihara; 木原　康夫; Takeshi Hibino; 健日比野; Takashi Kawasaki; 隆志川崎; Toshio Higuchi; 俊男樋口
Original assignee: Nitto Electric Industrial Co Ltd
Current assignee: Nitto Denko Corp
Priority date: 1983-02-23
Filing date: 1983-02-23
Publication date: 1984-09-04
Also published as: JPH0229312B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は水分散型高分子重合体粒子及びこれを水不溶性
担体とする固定化酵素に関し、詳しくは、グリシジル基
を多数有しながら安定な水分散性を有して、機能性高分
子として有用である水分散型高分子重合体粒子と、かか
る重合体粒子の有するグリシジル基に酵素を高密度に固
定化させた高活性で安定な固定化酵素に関する。

一般に反応性官能基を有する水分散型高分子重合体粒子
は、その重合体の有する特性に加えて、それが有する反
応性官能基によって、重合体を変性し、又は架橋剤とし
て機能させることができるので、例えば、水分散型粘着
剤や接着剤における粘着接着特性を改善するための高分
子架橋性充填材として、また、水分散型塗料における塗
膜強化のだめの高分子架橋性充填材等に用いることがで
きる。

また、既に水不溶性の担体に酵素や補酵素を固定化して
、酵素反応に用いる方法が知られているが、従来はかか
る担体として、セルロース、デキストラン、アガロース
等の多糖類の誘導体、ポリアクリルアミドゲル、多孔性
ガラス等の径ｌ　＊＊乃至数顛の粒子が用いられている
にすぎず、このような粒子に酵素が固定化された固定化
酵素番よ、通常、カラムに充填され、固定されて、基質
溶液と接触されるので、基質が高分子量の場合、固定化
酵素表面に拡散し難く、反応に長時間を要すると共に、
反応収率が低いという問題がある。このため、反応性官
能基を有する水分散型高分子重合体粒子に酵素を固定化
し、水性の反応系におし）で遊離の酵素と同様の挙動を
可能にして、反応性にすぐれる固定化酵素を得ることも
提案されてし）る。

しかし、一般に反応性官能基、特にグリシジル基を多数
有する水分散型高分子重合体粒子を製造することは、グ
リシジル基を有する単量体を多量に含有する単量体組成
を乳化共重合させる際の重合安定性が悪く、容易に凝集
を起こす等のために、従来、これを製造することは困難
であるとされていた。

本発明者らは、上記した種々の問題を解決するために鋭
意研究した結果、予期しないこと番こ、り゛リシジル基
を有する単量体をアクリロニトリル又はメタクリレート
リルと多官能性内部架橋用単量体と共に乳化共重合する
ことにより、単量体組成におけるグリシジル基含有単量
体を１０重量％以上としても、安定にこれらを共重合さ
せること力くできると共に、このようにして得られる水
分散型高分子重合体粒子は高密度にグリシジル基を有し
、且つ、その水分散液は機械的安定性にすぐれることを
見出して、本発明に至ったものである。

本発明による水分散型高分子重合体粒子は、（ａｌグリ
シジルアクリレート及び／又はグリシジルメタクリレー
ト１０〜６０重量％、（ｂ）この単量体と共重合し得る
第１のラフカル重合性単量体１０〜８８重量％、（Ｃ）
多官能性内部架橋用単量体１〜３０重量％、及び（ｄ）
第２のラジカル重合性単量体としてのアクリロニトリル
又はメタクリレートＩＪ　Ｊし１〜６０重量％とからな
る単量体組成を乳化共重合させｔなることを特徴とする
。

本発明によれば、上記のような単量体組成を用いること
により、グリシジルアクリレート及び／又はグリシジル
メタクリレニド（以下、り゛＋７シジル（メタ）アクリ
レートと称する。）を単量体組成の１０重量％以上とし
ても、安定に乳化共重合させることができ、かくして、
得られる水分散型高分子重合体粒子は高密度にグリシジ
ル基を有すると共に強度にすくれ、しかも、粒子相互に
粘着性をもたず、また、グリシジル基を高密度に有しな
がら、機械的安定性にすぐれるのである。

特に好ましい単量体組成は、グリシジル（メタ）アクリ
レート１５〜４５重量％、この単量体と共重合し得る第
１のラジカル重合性単量体２０〜７８重量％、多官能性
内部架橋、用単量体２〜２０重量％、及びアクリロニト
リル又はメタクリレートリル（以下、（メタ）アクリロ
ニトリルと称する。）５〜４０重量％とからなる。

本発明において、グリシジル（メタ）アクリレートと共
重合される第１のラジカル重合性単量体としては、（メ
タ）アクリロニトリルを除いて、これらと共重合性を有
する限りは特に制限されるものではないが、好ましくは
、酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル、アクリル酸エステ
ル、メタクリル酸エステル、スチレン、メチルスチレン
、ビニルトルエン、ブタジェン、イソプレン、アクリル
アミド、メタクリルアミド等の１種又は２ｆｔ以上が用
いられる。特に、アクリル酸及びメタクリル酸の炭素数
１〜３のアルキルエステルやスチレンが好ましく用いら
れる。尚、得られる重合体粒子が、その用途に応じた所
要のガラス転移点を有するように、これらが選ばれるの
は当然である。

また、内部架橋用多官能性単量体としては、多価アルコ
ールのポリアクリレート又はポリメタクリレート（以下
、ポリ　（メタ）アクリレートと称する。）が好ましく
、具体的には、エチレングリコールジメタクリレート、
ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレン
グリコールジメタクリレート、ジプロピレングリコール
ジメタクリレート、１，３−ブチレングリコールジメタ
クリレート、トリエチレングリコールジアクリレート、
トリメチロールプロパントリメタクリレート、トリメチ
ロールプロパントリアクリレート、テトラメチロールメ
タンテトラアクリレート等が用いられる。ジビニルベン
ゼンも好ましく用いられる。

更に、本発明においては、水分散性高分子重合体粒子を
得条ための第２のラジカル重合性単量体成分として、（
メタ）アクリロニトリルを含有することが必須である。

グリシジル（メタ）アクリレートとこれに共重合性を有
する第１のラジカル重合性単量体のみを乳化共重合させ
ると、重合が不安定であって、安定な水分散性高分子重
合体粒子を得ることが困難である。しかしながら、本発
明に従って、グリシジル（メタ）アクリレートと第１の
ラジカル重合性単量体と（メタ）アクリロニトリルと多
官能性内部架橋用単量体とを乳化共重合させることによ
り、重合の安定性が確保される。このような結果が得ら
れる理由は必ずしも明らかではないが、（メタ）アクリ
ロニトリルと内部架橋用単量体とが上記組成範囲におい
てグリシジル（メタ）アクリレートに有効に共重合し、
これを水不溶化して、重合を安定化するのであろう。

従って、（メタ）アクリロニトリルと多官能性内部架橋
用単量体の量が上記範囲よりも少ないとき、又は多す９
ぎるときは、重合の安定性が損なわれ、また、得られる
重合体粒子水分散液が機械的安定性に劣る。

上記単量体組成の乳化共重合反応においては、ｐＨを７
付近に保つことが望ましい。反応時のｐＨが酸性又はア
ルカリ性に偏っていると、グリシジル基が開裂すると共
に、水溶性重合体が生じる傾向が大きいからであり、ま
た、グリシジル基の開裂によって、得られる重合体粒子
が多くのグリシジル基を有さす、架橋性能やこれに固定
化し得る酵素量が十分でなくなるからである。

上記のような単量体組成は、水媒体中にて従来より知ら
れている通常の方法にて乳化共重合させることができる
が、本発明による水分散型高分子重合体粒子を水分散型
粘着剤、接着剤、塗料等における高分子架橋剤や、固定
化酵素のための担体として用いる場合、乳化剤が混在す
ると、例えば、接着剤や塗膜の耐水性を劣化させ、或い
は酵素の固定化の際に酵素が失活する等の有★な影響が
現れることがあるので、乳化共重合に際しては乳化剤を
用いないのが好ましい。本発明による上記単量体組成に
よれば、特に乳化剤を要せずして安定に共重合させるこ
とができる。しかし、得られる水分散型高分子重合体粒
子の用途が、乳化剤によって有害な影響を有しなければ
、上記組成の単量体を共重合させるに際して、乳化剤を
必要に応じて用いてもよい。

前記のような単量体組成の乳化共重合によって得られる
水分散型高分子重合体粒子の平均粒径は０．０３μ〜２
μ、通常、０．０７μ乃至１μである。

この範囲の粒径は、特にこれを固定化酵素の担体として
用いる場合、水中に分散させるのが容易であるので好ま
しい。

以下に、本発明による水分散型高分子重合体粒子を担体
とする固定化酵素の製造について説明する。尚、本発明
において酵素の代わりに補酵素を固定化し得ることは明
らかであり、一本発明においては、酵素には補酵素も含
まれるものとする。

本発明による固定化酵素は、上に説明したような水分散
型高分子重合体粒子に、その有するグリシジル基を介し
て酵素が固定化されている。

水分散性高分子重合体粒子の有するグリシジル基を介し
て酵素を共有結合にて固定化する方法は特に制限されず
、従来より知られている方法が適宜に採用される。

例えば、一つの方法として、グリシジル基に直接に酵素
を固定化する場合は、重合体粒子の有するグリシジル基
にｐＨが７〜９付近で酵素を反応させればよい。この際
、よく知られているように、酵素が失活しないように、
低温で数十時間反応させるのが望ましい。また、別の方
法として、重合体粒子の有するグリシジル基にポリエチ
レンイミンやｍ−キシリレンジアミンのように分子内に
アミノ基を２以上有するポリアミンをスペーサ基として
反応させ、新たに形成されたアミノ基末端に酵素を結合
させることもできる。即ち、例えば、ｐ）＋　９〜１３
、温度２０〜４０℃の範囲でジアミンを重合体粒子に反
応させればよく、かくして重合体粒子に導入されたアミ
ノ基に酵素を固定化するのである。このアミノ基に酵素
を共有結合にて固定化するには、従来より知られている
通常の方法によることができ、例えば、ジアゾニウム法
、カルボジイミド法、チオシアネート法、ジアルデヒド
法等を採用することができる。

以上のようにして、酵素を重合体粒子に共有結合させた
後、用いた反応試薬や固定化されていない酵素を遠心分
離、膜分離等の適宜の手段によって除去すれば、本発明
の固定化酵素を得る。

本発明による固定化酵素は水分散液として用いられ、基
質と接触される。固定化酵素の使用量は、固定化酵素の
粒径や酵素の固定化量、必要とする反応速度、基質濃度
等により適宜に決定される。

本発明において固定化される酵素は菌体内酵素でもよく
、菌体外酵素でもよい。また、酵素は必ずしも高度に精
製されている必要はなく、抽出液や部分精製品も用いら
れる。更に、本発明に従って、単一の酵素を固定化して
もよいが、複数の酵素を同時に固定化してもよい。

本発明において酵素は特に制限されず、種々の酵素が用
いられる。具体例として、アミノ酸オキシダーゼ、カタ
ラーゼ、キサンチンオキシダーゼ、グルコースオキシダ
ーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グル
タミン酸デヒドロゲナーゼ、チトクロムＣオキシダーゼ
、チロシナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ペルオキシダ
ーゼ、６−ホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼ、リンゴ
酸デヒドロゲナーゼのような酸化還元酵素、アスパラギ
ン酸アセチルトランスフェラーゼ、アスパラギン酸アミ
ントランスフェラーゼ、グリシンアミノトランスフェラ
ーゼ、グルタミン酸−オキザロ酢酸アミントランスフェ
ラーゼ、グルタミン酸−ピルビン酸アミノトランスラエ
ラーゼ、タレアチンボスホキナーゼ、ヒスタミンメチル
トランスフェラーゼ、ピルビン酸キナーゼ、フラクトキ
ナーゼ、ヘキソキナーゼ、δ−リジジアセチルトランス
フエラーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼのような転移
酵素、アスパラギナーゼ、アセチルコリンエステラーゼ
、アミノアシラーゼ、アミラーゼ、アルギナーゼ、Ｌ−
アルギニンデイミナーゼ、インベルターゼ、ウレアーゼ
、ウリカーゼ、ウロキナ−ゼ、エステラーゼ、β−ガラ
クトシダーゼ、カリクレイン、キモトリプシン、トリプ
シン、トロンビン、ナリンギナーゼ、ヌクレオチダーゼ
、パパイン、ヒヤウロニダーゼ、プラスミン、ペクチナ
ーゼ、ヘスペリジナーゼ、ペプシン、サーモリシン、ペ
クチナーゼ、ペニシリンアミダーゼ、ホスホリパーゼ、
ホスファターゼ、ラクターゼ、リパーゼ、リボヌクレア
ーゼ、レンニンのような加水分解酵素、アスパラギン酸
デカルボキシラーゼ、アスパルターゼ、クエン酸リアー
ゼ、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ヒスチジンアン
モニアリアーゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ
、フマラーゼ、フマール酸ヒドラターゼ、リンゴ酸シン
テターゼのようなりアーゼ、アラニンラセマーゼ、グル
コースイソメラーゼ、グルコースホスフェートイソメラ
ーゼ、グルタミン酸ラセマーゼ、乳酸ラセマーゼ、メチ
オニンラセマーゼのような異性化酵素、アスパラギンシ
ンターゼ・グルタチオンシンターゼ、ピルビン酸シンタ
ーゼのようなりガーゼ等を挙げることができる。

また、補酵素として、例えば、ＮＡＤ、ＮＡＤＰ、ＡＴ
Ｐ、、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＦＡＤ、補酵素Ａ１補酵素Ｑ等
を挙げることができる。尚、この場合、補酵素に予めス
ペーサ基を結合させた補酵素を好ましく用いることがで
き、具体例として、例えばＮ−（（６−アミノへキシル
）カルバモイルメチル〕６ −ＮＡＤ、Ｎ　　−スクシニル−ＮＡＤ、Ｎ　　−゛〔
（６−アミノヘキシル）カルバモイルメチル〕−ＮＡＤ
Ｐ等を挙げることができる。

本発明による固定化酵素は、グリシジル基を高密度に有
する水分散型置１分子重合体粒子上にそのグリシジル基
を介して共有結合にて固定化されており、従って、酵素
もまた、高密度に固定化されているため、非常に酵素活
性の高い固定化酵素が得られ、しかもこの固定化酵素は
酵素の失活が少なく、長期の使用によっても高い酵素活
性を維持する。更に、従来のセルロース誘導体粒子等を
担体とする場合と異なり、これら自体が遊離の酵素や補
酵素と同様に反応系内を自由に移動できるため、基質の
拡散が反応に殆ど影響を与えず、従って、高分子量の基
質の場合にも遊離の酵素反応系と同様の高い反応速度で
酵素反応を行なわせることができる。

また、本発明による固定化酵素は水不溶性の担体に固定
化されているため、酵素反応後には遠心分離、塩析、凝
集剤を用いる凝集沈殿、多孔性膜による膜分離等によっ
て容易に回収でき、かくして、長期間にわたって高い酵
素活性を保持させつつ、繰返して使用することができる
。

以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこ
れら実施例により限定されるものではない。

実施例１（１１水分散型高分子重合体粒子の調製グリシジルメタ
クリレート１８ｇ１メチルメタクリレート２６ｇ１テト
ラエチレングリコールジメタクリレート４ｇ及びアクリ
ロニトリル１２ｇを蒸留水３００ｇに加え、過硫酸カリ
ウム０．３ｇを水４０ｍ１に溶解した重合開始剤水溶液
を７０℃の温度で窒素気流下に加え、ｐＨを７．０に維
持しつつ２０　Ｏｒｐｍで攪拌して４時間重合させ、更
に、温度を８０℃゛に高めて１時間重合させて、固形公
約１５％、平均粒径０．４μの重合体粒子の水分散液を
得た。重合は非常に安定に行なわれて、凝集物は０．０
３％であった。この重合体粒子を遠心分離し、蒸留水３
４０ｍ１に再分散させて、重合体粒子の水分散液を得た
。

（２）　　固定化酵素の調製トリプシン１５０■を０．０５Ｍ炭酸塩−重炭酸塩緩衝
液（ｐＨ８，０）　　１０ｍｌに溶解した酵素水溶液を
上記重合体粒子水分４散液３０ｍｒに加え、１０℃で４
８時間反応させた。−反応終了後、遠心分離し、沈降し
た重合体粒子を０．２　Ｍ　トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８
，０）で、洗滌して、未固定のトリプシンを除去すると
共に、未反応のグリシジル基をブロックした。再び、０
．１Ｍのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）に分散させて
、固定化酵素を得た。

この固定化酵素のトリプシン固定化量は、重合体粒子１
ｇ当り２０■であり、また、１％カゼイン水溶液を基質
として測定した活性収率は６０％であった。

尚、活性収率とは、固定化された酵素の活性の理論量に
対する実際の活性の割合として定義される。ここでは、
１％カゼイン水溶液を基質として、酵素を３５℃で１０
分間反応させた後、５％トリクロル酢酸により高分子量
タンパク質を沈殿させ、遊離の非タンパク性分解質量を
２８０ｎｍの吸光度から求め、この吸光度を１分間に１
．０増加させる活性を１単位として、酵素固定化量と同
じ活性を有する遊離の酵素量で除して求めた。

また、反応後の上記固定化酵素を遠心分離し、緩衝液で
洗滌して再び基質と反応させる操作を２回繰返したとき
、固定化酵素は最初の活性の８５％を保持していた。

比較例１多官能性内部架橋用単量体を用いないほかは、グリシジ
ルメタクリレート１８ｇ１メチルメタクリレート３０ｇ
及びアクリロニトリル１２　ｇを実施例１と同じ条件下
で乳化共重合させたところ、凝集物が１．５％も生じて
、固形公約１３％、平均粒径０．５μの重合体粒子の水
分散液を得た。

この重合体粒子に実施例１と同様の方法によりトリプシ
ンを固定化したところ、トリプシンの固定化量は重合体
粒子１ｇ当り１０■であり、活性収率は実施例１と同じ
条件下で６０％であった。

また、この反応後に遠心分離して沈降した重合体粒子を
緩衝液で洗滌した後、再び基質と反応させる操作を２回
繰返したとき、その活性は最初の５４％にまで低下した
。

比較例２アクリロニトリルを用いることなく、グリシジルメタク
リレート、１８ｇ、メチルメタクリレート３８ｇ及びテ
トラエチレングリコールジメタクリレー）４ｇを実施例
１と同じ条件下に乳化共重合させることを試みたが、は
ぼ全体が凝集し、重合を安定に行なうことができなかっ
た。

実施例２（１）　　水分散型高分子重合体粒子の調製グリシジル
メタクリレート１８ｇ１スチレン１５ｇ１メチルメタク
リレ−１−１３ｇ、ジビニルベンゼン２ｇ及びアクリロ
ニトリル１２ｇを蒸留水３００ｍ１に加え、実施例１と
同じ条件下で乳化共重合して、固形分１５％、平均粒径
０．３８μの重合体粒子の水分散液を得た。重合は非常
に安定に行なわれて、凝集物は０．０４％であった。こ
の重合体粒子を遠心分離し、沈降した重合体粒子を蒸留
水で洗滌する操作を３回繰返した後、再び蒸留水に分散
させた。

（２）固定化酵素の調製この分散液３０ｍ１をｍ−キシリレンジアミンの１０重
量％水溶液３０ｍ１に分散させ、４０℃の温度で２４時
間反応させた。次に、残存するｍ−キシリレンジアミン
を除くために０．１　Ｍリン酸二カリウム及び０．１　
Ｍリン酸二水素・カリウムから鋼製した緩衝液（ｐＨ６
，０）で３回洗滌し、同じ緩衝液３０ｍ１に再分散させ
た。

この分散液に１−シクロへキシル−３−（２−モルホソ
ノエチル）カルボジイミド−メト−ｐ　−トルエンスル
ホネート０．５ｇを加え、攪拌しつつ、ｐｔ＋を５．０
に調整した。次に、α−アミラーゼ５００ｍｇを水３０
ｍ１に溶解させ、ｐＨを５．０に調整した酵素水溶液を
上記重合体粒子分散液に加え、攪拌下、ｐＨを５．０に
調整しつつ、５℃で２４時間反応させて、α−アミラー
ゼを重合体粒子に固定化した。反応後、遠心分離により
沈降した重合体粒子を緩衝液にて洗滌して、未固定のα
−アミラーゼを除去し、再び緩衝液に分散させて、固定
化酵素を得た。

この固定化酵素のα−アミラーゼ固定化量は、重合体粒
子１ｇ当り５２■であり、活性収率は３５％であった。

活性収率は、ここでは、１％デンプン水溶液を基質とし
て、固定化酵素を３５°Ｃで３０分間反応させ、ヨウ素
デンプン反応からデンプンの分解量を求めることにより
、固定化酵素の活性、即ち、デンプン分解速度（■／分
）を得、これと等しい活性を有する遊離の酵素量を酵素
固定化量で除して求めた。

実施例３実施例１で得た重合体粒子水分散液３０ｍ１にポリエチ
レンイミン（日本触媒化学工業■製Ｐ−１０００）の３
重量％水溶液１００ｍ１を加え、４０℃で２４時間反応
させた。この後、遠心分離、水洗し、更に遠心分離し、
０．　Ｉ　Ｍ　Ｆリス緩衝液（ｐＨ６，５）で洗滌し、
遠心分離した。これを更に水洗し、蒸留水に分散させて
、重合体粒子分散液３０ｍ１とした。

この分散液に５重量％グルタルアルデヒド水溶液６０ｍ
１を加え、室温で２時間反応させた後、水洗した。この
ようにして、重合体粒子に結合されたポリエチレンイミ
ンのアミノ基とシッフ塩基を形成させて、重合体粒子に
アルデヒド基を導入し、これにトリプシン１５０■を実
施例１と同様にして反応させて固定化した。この後、未
反応のトリプシンを除去すると共に、未反応のアルデヒ
ド基をブロックし、再び、０．０１Ｍトリス塩酸緩衝液
に分散させて、固定化酵素を得た。

この固定化酵素におけるトリプシンの固定化量は重合体
粒子１ｇ当り２５ｍｇであり、また、実施例１と同様に
して求めた活性収率は６８％であった。

実施例３で得たポリエチレンイミンをスペーサ基として
結合し、グルタルアルデヒド処理した重合体粒子水分散
液を用いて固定化酵素を調製した。

即ち、ジメチルスルホキシド５ｍｌと酢酸カルシウム’
ｌ　Ｑ　ｍｍｏｌを含む水溶液５ｍｌにサーモリシン４
５■を熔解し、この水溶液に上記重合体粒子分散液３０
＋１１！（固形分４．５ｇ）を加えて、７℃で一夜攪拌
した。次に、重合体粒子を遠心分離し、ジメチルスルホ
キシド５ｍｌと酢酸カルシウム’ｌ　Ｑ　ｍｍｏｌを含
む水溶液で十分に洗滌５した後、同じ水溶液に再分散さ
せて、固定化酵素を得た。

Ｎ−ヘンシルオキシカルボニル−し−フェニルアラニン
１　ｍｍｏｌとＬ−バリンメチルエステル塩酸塩Ｑ、　
ｌ　ｍｍｏｌを）　ＩＪス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）　
２０ｍｌに加え、硫酸アンモニウム３ｇ、ＩＮ力性ソー
ダ水溶液１ｍｌを添加し、よく攪拌した。これに上記固
定化酵素の分散液５ｍｌを添加し、４０℃で一夜震とう
した。このようにして析出した生成物、Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−し−バリンメ
チルエステルを酢酸エチルで抽出し、７重量％アンモニ
ア水、０．５Ｍクエン酸、水の順序で洗滌し、減圧乾燥
して、融点１０７〜１０８℃の精製物を得た。収率は７
２％であった。

尚、上記固定化酵素を分離し、再び同じ反応に使用した
とき、高い活性を示した。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）　（ａｌグリシジルアクリレート及び／又はグリ
シジルメタクリレート１０〜６０重量％、（ｂｌこの単
量体と共重合し得る第１のラジカル重合性単量体ｌＯ〜
８８重量％、（Ｃ１多官能性内部架橋用単量体１〜３０
重量％、及び（ｄ）第２のラジカル重合性単量体として
のアクリロニトリル又はメタクリコニトリル１〜６０重
量％とからなる単量体組成を乳化共重合させてなること
を特徴とする水分散型高分子重合体粒子。
（２）第１のラジカル重合性単量体がアクリル酸又はメ
タクリル酸のアルキルエステルであることを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載の水分散性高分子重合体粒子
。
（３）多官能性内部架橋用単量体が多価アルコールのポ
リアクリレート又はポリメタクリレートであることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の水分散性高分子重
合体粒子。
（４）水分散型高分子重合体粒子が０．０３〜２μの平
均粒径を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の水分散型高分子重合体粒子。
（５）（ａｌグリシジルアクリレート及び／又はグリシ
ジルメタクリレート１０〜６０重量％、（ｂ）この単量
体と共重合し得る第１のラジカル重合性単量体１０〜８
８重量％、（Ｃ）多官能性内部架橋用単量体１〜３０重
量％、及び（ｄ＋第２のラジカル重合性単量体としての
アクリロニトリル又はメタクリコニトリル１〜６０重量
％とからなる単量体組成を乳化共重合させてなる水分散
型高分子重合体粒子のグリシジル基を介して酵素が固定
化されていることを特徴とする固定化酵素。
（６）第１のラジカル重合性単量体がアクリル酸又はメ
タクリル酸のアルキルエステルであることを特徴とする
特許請求の範囲第５項記載の固定化酵素。
（７）多官能性内部架橋用単量体が多価アルコ−ルのポ
リアクリレート又はポリメタクリレートであることを特
徴とする特許請求の範囲第５項記載の固定化酵素。
（８）水分散型高分子重合体粒子のグリシジル基にスペ
ーサ基を介して酵素が固定化されていることを特徴とす
る特許請求の範囲第５項記載の固定化酵素。
（９）スペーサ基がジアミン又はポリエチレンイミンで
あることを特徴とする特許請求の範囲第８項記載の固定
化酵素。
（１０）水分散型高分子重合体粒子が０．０３〜２μの
平均粒径を有することを特徴とする特許請求の範囲第５
項記載の固定化酵素。
（１１）酵素がタンパク分解酵素であることを特徴とす
る特許請求の範囲第５項記載の固定化酵素。
（１２）タンパク分解酵素がサーモリシンであることを
特徴とする特許請求の範囲第１１項記載の固定化酵素。