JPS59154983A - 微生物同定用装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 定するだめの装置に係わる。さらに詳述すれば、本発明
は、それぞれ微生物を同定するための試薬を収容すると
ともに７つの支持体上に取付けられた／セットをなす複
数個の容器を包含し、この支持体上には、さらに、敵生
物を同定するに充分なすべての生化学的テストが行なわ
れるすべての蓉器に関連する一連のマークが伺されてい
る微生物同定用装置に係る。この場合、マークは異なっ
た長さ、色および／まだはグラフ形状をもち、部分的に
符号および／丑たけ数字で交換されうる。

この装置は好ましくは環状の外形をもち、容器は好まし
くは試験管形である。装置の使用をより簡便なものとす
るために、同定される微生物の名称が同定用マークに沿
って記載され仝。

容器内に収容される生化学的テスト用の試薬は、乾燥法
、凍結乾燥状、固形または圧縮形、もしくは溶液状であ
ってもよい。

容器はこの装置自体の一体部分であってもよく、また接
着または挿入によりこの装置の上面に同定される。この
装置には、好ましくは環状の中央孔が形成されてい−で
もよい。

本発明を限定することなく単に説明するために、本発明
の装置をカンジダ（　Ｏａｎｄｊ．ｄａ　）属の病原菌
の同定に応用した場合について述べる。

多くのカンジダ属、その中でも病原性の菌は、人体の体
腔内にしばしば共生する。このような菌は体系内におい
て素因条件下では内因メカニズムにより多くの病変を生
ずる。

カンジダ・アルビカンス（　ｃａｎａｉｄａ　ａｌｂｉ
ｃａｎｓＪ（最も頻繁に単離される種である）に加えて
、少なくとも６種、すなわちカンジダ・ステラトイデア
（　Ｊｓｔｅ］．ｌａｔｏｉｄｅａ　）　、カンジダ・
クルセイ（Ｃ。

ｋｒｕｓｅｌ）　、カンジダ・トロピカリス（　ｃ。

ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　　）　、カンジダ・プンイドト
ロビヵリス（　Ｊｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　
）、　カンジダーギレルモンテイ（　Ｃ，ｇｕｉｌＬｅ
ｒｍｏｎｄｊ．ｉ　）、カンジダ・パラグシロシス（　
Ｃ，ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　）　　については、特
定の病原特注が認められる。したがって、カンジダ属の
菌が単離された場合には、診断上、人に対して病原性を
もつ種であるが否かを決定する必要がある。

この微生物が属する種を同定することは、以下の如き生
化学的テスト参ニ会＋寺含により行なわれる。　　。

（ａ）他の炭素源を欠く培地における特定の糖の同化（
Ｃ−オキサノブラム） （ｂＪ　　特定の塘の発ｌ酵 （ｃ）　　特定基質の存在下における生育同化テストは
、同定される菌株のスラリおよび特殊な培地Ｃーオキサ
ノグラムでｇｅｒｍ　−　ａ’ｇａｒ　　を調製するこ
とにより行なわれる。鏡者の上に、使用直前に、異なる
糖溶液が浸透されたペーパーディスク、乾燥法の糖を担
持するペーパーディスクまたは糖溶液を収容する磁器製
小皿（　ｗｅｌｌ）が置かれる。特別には、その低表面
に扇形の仕切をもつグレートを使用することができる。

この特殊なグレートを使用する場合には、扇形への分画
は前もって実確しておき、オペレータがそれをする必要
はなく、アソセイされる糖を表わす符号を付することの
み要求されるようにしておく。

同化テストの結果は、、２左ないし３２°Ｃでコグない
しｙｇｒ寺間ｌ＠養した後列）析される。同化する７１
唐の周囲には生育を輪が観察されるが、これらの受輪の
存在はプラスのテスト結果に係わｐ、符号（＋９で表示
され、逆に景埃が存在しない場合には符号（一ノで表示
される。

発酵テストは、通常、オキザノグラムテストが実行され
たのち行なわれる。事実、同化されなかった塘は発酵さ
れない。このようにして、同化された麩のみテストされ
る。゛テストは、予め選゛択された濃度でビタミン類を
含有しかつテストする塘を適当濃度含有する酵母水性液
または＠液中で行なわれる。ガスの発生を確認するため
、ダーシムバブルキャップまたはパラフィンワックスお
よび石油ゼリーの混合物が使用される。

これらテストの実行にあたっては、テストするスラリを
Ｕ＆ないし３７°Ｃで培養し、培養７０日まで毎日測定
を行なう必要がある。

つづいて、多数の文献に報告されている如き特に作製さ
れた表を参照することによって検体の菌株が決定される
。これらの文献の中でも、　Ｊ　、Ｌｏｄｄｅｒ「酵母
（Ｔｈｅ　Ｙｅａｓｔ　）　Ｊ’７９７０版、Ｎｏ　ｒ
　ｔｈ　Ｈｏ１ｌａｎｄ川版（株）、アムステルダムが
指摘できる。

炭水化物の同化および発酵テストは、市販のキットを使
用して行なわれる。これらの中では、［’　ＡＰＩ　、
：ｉｏ　　ｃ　Ｙｅａｓｔ　Ｓｙｓｔｅｍ　Ｊ　　（Ａ
ｎａｌｙｔａｂＰｒｏｄｕｃｔｓ　社、ニューヨーク少
および「Ｕｎｉ　−Ｙｅａｓｔ　Ｔｅｋ　Ｓｙｓｔｅｍ
　ｌ　（Ｆｌｏｗ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　）が使用
できる。

ＡＰＩ２０Ｇは２ｏセルチヤネル は同化および発酵テスト用の脱水炭水化物を収容する。

前もって溶解させ、左ｏ°ｃに冷却しかつ前記キットを
力ｎえたａｇａｒ　　中に懸濁させておいた真菌のスラ
リを各セルに充填する。３０°Ｃにおいて／Ｉｇないし
７２時間培養したのち、指示薬の色の変化によって表示
される：塘の発酵を観察するとともに、気泡の発生によ
って表示されるガスの発生を観察する。炭水化物の同化
はセルにおける菌株の生育によって表示される。

これに対して、Ｕｎｉ　−　Ｙｅａｓｔ　Ｔｅｋ　Ｓｙ
ｓｔｅｍは一つの試験管と多区画に区分されたペトリ皿
とて構成される。試験管は発芽性仮性細管（ｇｅｒｍｊ
．ｎａｔｉｖｅｐｓｅｕｄｏｔ．ｕｂｕ］．ｅ　）　　
を検出するための培地およびショ糖の同化のだめの培地
を収容し、カンジダ・ステラトイデ鳳ア（　Ｃ．、ｓｔ
ｅｌｌａｄｏｊ．ｄｅａ　）　　の同定を可能にする。

ペトリ皿は周囲に／／の区画を有し、それぞれ炭水化物
の発酵用、ウレアーゼ検出用および炭水化物および硝酸
塩の同化用の固形培地を収容する。ペトリ皿の中心には
菌糸および厚膜胞子を検出するだめのコーン・ミール・
寒天培地を収容する小さなセルがある。このペトリ皿に
、テストする真菌の蒸留水７２９７滴を接種し、Ω５°
Ｃでコないし７日間培養する。

発明者らは、検体の微生物が属する種を、特にカンジダ
属に属する微生物の場合、ＫＮＯ，　　およびシクロヘ
キシミドの存在下における生育性およびウレアーゼの生
産性とともに・いくつかの′ａ類の同化性および発酵性
についての≠ストに基いて、簡単にかつ効果的に同定す
ることを可能にする装置を見出し、本発明に至った。

本発明による装置は、好ましく／′ｉ環状の外形を有す
るものであって、その上面には、好ましくは試験管形の
／セットをなす複数個の容器または／セットをなす中空
空間（特にカンジダ属の場合には、これらの数は少なく
とも／乙である）を具備する。各容器は、前述の如き形
状の生化学的テスト用の試薬を収容する。さらに、この
上面には、微生物を同定するに充分な生化学的テストが
行なわれる容器に関連する異なった長さ、色および／捷
たけグラフ形状（一部は符号および／または数字で交換
されていてもよい）のマークが付されている。マークに
泊って、同定するカンジダ属の名称を表示しておいて＼
い。

このような装置では、糖類を同化および発酵させてテス
トするとともに、同時にＫＮＯ３　　およびシクロヘキ
シミドの存在下における生育性およびウレアーゼの生産
性を確認できる。

このようにして、属の同定を迅速にかつ有効に実施でき
る。

添付図面は、カンジダベの病原菌を同定するための装置
の／具（４）例を示す。

この装置にでは、長さおよび色の異なる７つの円弧／７
ないし２３が記載されている。この場合、色の種類はラ
ンダムに選定し６たもの（以Ｆに例示する）で、色はい
くつかの同定される種を表示する。

黄　　　　　　　カンジダ・ギレルモンディ　　　　０
η赤　　　　　　　カンジダ・アルビカンス　　　　　
（２ｏ）緑カンーシダ・バラグシロシス　　　　（２１
）白　　　　　　　カンジダ・プソイドトロピカリス　
ａ（ト）スカイブルー　　カンジダ・トロピカリス　　
　　　０８１紫　　　　　　　カンジダ・クルセイ　　
　　　　　（Ｊ３）オレンジ　　　　カンジダ・ステラ
トイデア　　　　０りさらに、マークが実腺の場合には
テスト結果はプラスであり、マークが不連続線の場合に
はテスト結果は不定であり、マークがない場合にはテス
ト結果はマイナスである。

この装置には、以下の意味をもつ符号が記載されている
。

ｆ　　発１酵 ａ　　版性化 ｆ、／ａ　　発酵または酸性化 ）へ　マイナスまたは酸性化 ｆ乙　発酵またはマイナス ■　　不定 酸および二酸化炭素が生成すれば、糖類が発酵されたこ
とになる。酸のみが生成する場合には、糖類は酸性化さ
れたことになる。

装置の中央には中央孔２’ｌがあり、ここにペトリ皿が
配置されるが、中央孔は一定量の水を保留して同書を湿
７閏させる作用をもつ。

生化学的テスト用の試薬は、上述のいずれかの形状で、
それぞれの対応する符号が付された／６個の容器／ない
し／乙に収容される。

／６個の容器は以下の試薬を収容する。

発酵テスト： グルコース（（）ＬＵ　）　　　　　θ３）マルトース
（ＭＡＬ）　　　　（１４）ショＩ端　　（ＳＡＣ）　
　　　０■ ラクトース（ＬＡＴ）’　　４１６） 生育テスト： ＫＮＯｓ　　　　　　　　　（Ｉｔ ヅクロヘキ／ミド＋グルコース （０，ＥＸ、　）　　　　　　　０２１ウレアーゼ 生理件　： １永　素　（ＵＲＥ）　　　　　　　（３）同化テスト
： イノシトール　　　　（４） マルトース　　　　　（５） トレ／叩−ス（ＴＨＥ）ｔ６１ グルコース（ＯＬ　Ｕ　）　　　　　（７１シ　　ヨ　
　ｊ病（ＳＡＣ）　　　　　　　（８）セロビオース（
（、ＥＬ）’　、　　　　（９）ラフィノース（ＲＡＦ
）　　　　　ＧＯ＋ラクトース（Ｌ　Ａ　Ｔ、）　　　
　　ｔｌｌｌコントロールテスト （望索同化テストについて）： 試薬添加せず　　　　（２） 反応を明イ准に判断でさるようにするためにｐ＋−＋　
、Ｉ′ｇ示楽を添加できる。′ カンジダ属の病原菌の同定についての操作は以下のとお
りである。

すなわち、図面に記載の装置をペトリ皿に入れ、上述し
た同化テスト用の糖を収容するｇ個の容器およびシクロ
ヘキシミド°を収゛各スる容器に、他の炭素源を全く含
有しない固化可能な培地を充填する（この場合、ｐＨ指
示薬を添加してもよいン。

窒素源同化テスト用の容器およびコントロール用の容器
には、ｐＨ指示薬を添加しまたは添力日することなく、
かつ窒素源を全く含まない他の固化可能な培地を充填す
る。ついて、単離用プレート（たとえば５ａｂｏｕｒａ
ｎｄ　）から採取した検体微生物のスラリを調製し、上
述の発酵テスト用容器のすべてに接種するとともに、尿
素収容容器にも接種し、さらに、すでに固化した培地を
収容する容器にもスラリ／滴を滴下する。

ついで、発酵テスト用の容器を、前もって溶融させてお
いた石油ゼリーで閉止する。その暖、装置全体を２汐な
いし、７０°Ｃで培産する。培養後、糖発酵テストを評
価する。テストサンプル中に期待された微生物が存在す
れば、生育が観察され、指示薬を添カロした場合には色
の変化が見られ、逆の場合には、何らの変化も見られな
い。

次にグラスの結果を示した同化テストないし／クロヘキ
シミド生育テストに係わるマークの色を観察して、カン
゛シダ属の種を決定する。

ｋ　トエＩｒ！　、マルトース（ＭＡＬ、ｌ、トレハロ
ース（ＴＨＥ入グルコース（ＧＬＵ）についての同化テ
ストおよびシクロヘキシミド中での生育性についてのテ
ストがプラスの結果を示す場合には、カンジダ・ステラ
トイデア（オレンジの実線）が存在することを意味する
。その周囲に沼って着色された線を追うことにより、同
定するだめの生化学的テストの結果を知ることができる
。カンジダ・ステラトイテアの場合には、グルコース（
Ｇ’ＬＵ）およびマルトース（ＭＡＬ）についての発１
酵テストがプラス（ｆ）で、ショ糖（ｓＡりについての
発酵テストはマイナス（／ａつ　であろう。なお、コン
ＩＤ　−ルＢ窒素源同化テスト（ＫＮＯ２）についての
対照として機能する。

／具体例として図面に記載した本発明の装置は、他の病
原性酵母の同定用としても有効である。同定にあたって
は、同様の方法で行なう同様のテストに基いて、かっこ
のようなテストの結果がすでに記載されている表を参照
して判断される。このような表は、たとえばＪ、Ｌｏｃ
ｌｄｅｒ　　「酵母」７９７０版の如き多数の文献に記
載されている。

実栴例 添付図面に示す装置において、循回化テスト用試薬はポ
リビニルアルコール（／ないし０．３　％）を含有する
各種の糖の蒸留水溶液（２０ないしｌＩ０％）である。

硝酸カリウム同化テストの試薬は／ないし０．Ｓ％ポリ
ビニルアルコール中ＫＫＮ○、を濃度１０％で含有する
溶液である。窒素同化テスト用のコントロール溶液中に
は試薬は含まれていない。シクロヘキ箋ミド感応テスト
用の試薬は、ポリビニルアルコール（／ないし０．５％
）およびシクロへキシミド（０，３％）を含有する２０
％グルコース蒸留水溶液である。ウレアーゼ生産性テス
ト用の試薬はｐＨ指示薬を含む特殊なＯｈｒ　ｉ　ｓ　
ｔｅｎｓ　ｅｎタイプのブロスである。発諦テスト用の
試薬は、肉汁、塩化ナトリウムおよび蒸留水をベースと
する普ａのブロスであって、別に各種の糖を濃度２％お
よびブロモチモールブルー（指示薬）を含む。各溶液は
１０θμβずつ各容器内に収容される。

この段階で、装置を乾燥機に入れ、たとえば真空下で試
薬を乾燥させる。乾燥後、装置を適当な利科、／ことえ
はグラスチック材料の袋に単独で捷たはペトリ皿の上に
載せて入れ、封をする。

酸化エチレンまたはγ線を使用して殺菌する。

その後、装置（単独またはペトリ皿に載せたまま）を湿
気の作用に対して充分な安全性をもつ材質の袋に移す。

このようにして調製した装置は、微生物の同定に使用さ
れるまで、コないしｇ″Ｃで長時間保存されつる。

循回化テスト用の培地ばＹ、Ｂ、Ｎ、（ディフコ）、＋
２％ａｇａｒ　−ａｇａｒ　　およびブロムクレゾール
パープル（ｐＨ指示薬）をベースとするものである。

窒素源同化テスト用の培地は、　ｙ、ｃ、ｓ、（テイフ
コン１．２％ａｇａｒ　−ａｇａｒ　　およびブロムチ
モールブルー（ｐｌ（指示薬９　をベースとするもので
ある。

【図面の簡単な説明】

図面は本発明による微生物同定用装置の／具体例を示す
図である。 （

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／　生化学的テストに基いて微生物を同定するための装
   置において、それぞれ微生物の同定用試薬を収容すると
   ともに７つの支持体上に取付けられた／セットをなす複
   数個の容器を包含し、前記支持体の上面には、微生物を
   同定するに充分なすべての生化学的テストが行なわれる
   容器に関連する一連のマークが付されていることを特徴
   とする、微生物同定用装置。 ユ　前記微生物を同定するだめの試薬が乾燥状、凍結乾
   燥法、固形または圧縮形である特許請求の範囲第７項記
   載の装置。 ３　前記マークが異なった長さ、色および／またはグラ
   フ形状をもち、部分的に符号および／または数字で［１
   換られている特許請求の範囲第１項記載の装置。 ダ　前記′容器が該装置の一体部分として形成されるか
   、または接Ｍ＝またけ挿入により装置の上面に固定され
   ている特許請求の範囲第１項記載の装置。 ５　＠記支持体に、これを貫通して中央孔が形成されて
   なる特許請求の範囲第１項記載の装置。 乙　微生物が酵母である特許請求の範囲第１項記載の装
   置。 ７　°微生物がカンジダ属の病原菌である特許請求の範
   囲第１項記載の装置。 ｇ　カンジダ属の病原菌が、カンジダ・アルビカンス、
   カンジダ・ステラトイデア、カンジダ・クルセイ、カン
   ジダ・トロピカリス、カンジダ・ギレルモンデイ、カン
   ジダ・バラブシロシスおよびカンジダ・グツイドトロピ
   カリスである特許請求の範囲第１項記載の装置。 ９　前記装置における容器の数が／乙である特許請求の
   範囲第７項または第８項に記載の装置。 １０　各容器はＫＮＯ３，シクロヘキシミド士グルコー
   ス、尿素、グルコース単独、シヨ、塘、ラクトース、ン
   ルトース、ラフィノース、セロビオース、イノシトール
   、トレハロースヲ収容している特許請求の範囲第７項ま
   たは第３項記載の装置。