JPS59133460A - 生物学的染料としてのピリリウム又はチアピリリウム化合物 - Google Patents
生物学的染料としてのピリリウム又はチアピリリウム化合物Info
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- JPS59133460A JPS59133460A JP58241095A JP24109583A JPS59133460A JP S59133460 A JPS59133460 A JP S59133460A JP 58241095 A JP58241095 A JP 58241095A JP 24109583 A JP24109583 A JP 24109583A JP S59133460 A JPS59133460 A JP S59133460A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は生物学的染料に関する。
従来技術
あるものを他のものと区別する為にか、又は単に顕微鏡
もしくは他の検出手段での観察全一層容易にする為の、
生物細胞及び組織の染料による染色、特に螢光色素によ
る染色は業界でよく知られている。これらの染料の多く
は細胞のＤＮＡもしくはＲＮＡ 、又はこれらの両方と
反応し、種々の波長で螢元金発する生成物？生成するこ
とによって区別するようにすることができるものである
。このような手段によりたとえば５種類の末梢血白血球
のなかで、好中球、好酸球、好塩基球、リン・９球及び
嗅球の区別が可能になり、更に癌細胞と正常細胞、並び
に成熟細胞と未成熟細胞との区別が可能になる。εのよ
うな区別により、サイトロシストがある疾病の状態全診
断することが可能になるＯ米国特許第３，６８４，３７
７号には白血球全数えあげ、セして識別する組成物が記
載されている。
もしくは他の検出手段での観察全一層容易にする為の、
生物細胞及び組織の染料による染色、特に螢光色素によ
る染色は業界でよく知られている。これらの染料の多く
は細胞のＤＮＡもしくはＲＮＡ 、又はこれらの両方と
反応し、種々の波長で螢元金発する生成物？生成するこ
とによって区別するようにすることができるものである
。このような手段によりたとえば５種類の末梢血白血球
のなかで、好中球、好酸球、好塩基球、リン・９球及び
嗅球の区別が可能になり、更に癌細胞と正常細胞、並び
に成熟細胞と未成熟細胞との区別が可能になる。εのよ
うな区別により、サイトロシストがある疾病の状態全診
断することが可能になるＯ米国特許第３，６８４，３７
７号には白血球全数えあげ、セして識別する組成物が記
載されている。
人間の血液にとって正常な生理的範囲内の浸透性と一因
子と？有するアクリジンオレンジ（カラーインデックス
４６００５）のｍ液中の新鮮全血の懸濁液にブルーレー
ザーからの輻射線をあびせる。
子と？有するアクリジンオレンジ（カラーインデックス
４６００５）のｍ液中の新鮮全血の懸濁液にブルーレー
ザーからの輻射線をあびせる。
ホワイトセルは白血球の染色核により発せられた生成緑
色螢光を検出することにより区別され、そして発せられ
た赤色螢光の振幅により識別される。
色螢光を検出することにより区別され、そして発せられ
た赤色螢光の振幅により識別される。
Ｂｌｕｍ、 Ｒ，Ｓ、、 Ｇ１ａｄｅ＋ Ｐ、 Ｒ，、
及びＣｈｅｓｓｉｎ＋Ｌ、Ｎ、、による＠Ｅｕｅｈｒｙ
ａｉｎｅ、 Ａ ５ｕｐｒａｖｌｔａｌＦｌｕｏｒｓａ
ｃａｎｔ Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ５ｔａｉｎ： Ｔｅｃ
ｈｎｉｃａｎｄ ＡｐｐＨｃａｔ％ｏｎ ｆｏｒ ）（
ｅｍａｔｏｌｏｇｉｅＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、”
Ｒ１ｏｏｄ＋ ３３（１）：８７〜９９ ｅ１９６９
年には、ニークリシン（Ｅｕｅｈｒｙｓ １ｎｅ）（カ
ラーインデックス４６０４０ ）、アミノアクリジン螢
光超生体染色染料の製法、血液学的研究に適する形への
転換及び人間の末梢血、骨髄及び確立されたリンパ球細
胞系統におけるリンソーム（ｌｙｓ□ｓｏｍｅ）の特徴
における七の使用（試験管内に保持）が記載てれている
。
及びＣｈｅｓｓｉｎ＋Ｌ、Ｎ、、による＠Ｅｕｅｈｒｙ
ａｉｎｅ、 Ａ ５ｕｐｒａｖｌｔａｌＦｌｕｏｒｓａ
ｃａｎｔ Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ５ｔａｉｎ： Ｔｅｃ
ｈｎｉｃａｎｄ ＡｐｐＨｃａｔ％ｏｎ ｆｏｒ ）（
ｅｍａｔｏｌｏｇｉｅＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、”
Ｒ１ｏｏｄ＋ ３３（１）：８７〜９９ ｅ１９６９
年には、ニークリシン（Ｅｕｅｈｒｙｓ １ｎｅ）（カ
ラーインデックス４６０４０ ）、アミノアクリジン螢
光超生体染色染料の製法、血液学的研究に適する形への
転換及び人間の末梢血、骨髄及び確立されたリンパ球細
胞系統におけるリンソーム（ｌｙｓ□ｓｏｍｅ）の特徴
における七の使用（試験管内に保持）が記載てれている
。
前記文献に用いた染料、即ちアクリジンオレンジ又はニ
ークリシンは望ましくない背景螢光を生成するという欠
点を有する。
ークリシンは望ましくない背景螢光を生成するという欠
点を有する。
ある種のスチリル染料の生物学的染料としての使用は、
英国公開出願第２，０７４，３４０Ａ号及びヘレイター
ーハムによる＠＠Ｄ１ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ｓｔｙ
ｒｙ１ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｌｄｉｎｉｕｍｉｏｄｌｎｓ
（ＤＡＳＰＭＩ） ａＩＩａＦｌｕｏｒｅｓｅｅｎｔ
Ｐｒｏｂｅ ｆｏｒ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ Ｉ
ｎ ５ｉｔｕ”＋Ｂｉｏｅｈｉｍｉｃａ ａｔ Ｒｌｏ
ｐｈｙｓＩｃａ Ａｃｔａ、 ４２３：１〜１４＋１９
７６年に記載されている・ 更に米国特許第４，２３２，１２１号には細胞の増殖を
抑えるメチン染料、特にシアニン染料の選択法が記載さ
れている。とりわけピＩＪ ＩＪウム核を含む染料は有
用なものとして述べられている。この文献の中に、本明
Ｍ書記載の化合物が細胞の増殖、特に体細胞の増殖會抑
えることができることも記載されている。
英国公開出願第２，０７４，３４０Ａ号及びヘレイター
ーハムによる＠＠Ｄ１ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ−ｓｔｙ
ｒｙ１ｍｅｔｈｙｌｐｙｒｌｄｉｎｉｕｍｉｏｄｌｎｓ
（ＤＡＳＰＭＩ） ａＩＩａＦｌｕｏｒｅｓｅｅｎｔ
Ｐｒｏｂｅ ｆｏｒ Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ Ｉ
ｎ ５ｉｔｕ”＋Ｂｉｏｅｈｉｍｉｃａ ａｔ Ｒｌｏ
ｐｈｙｓＩｃａ Ａｃｔａ、 ４２３：１〜１４＋１９
７６年に記載されている・ 更に米国特許第４，２３２，１２１号には細胞の増殖を
抑えるメチン染料、特にシアニン染料の選択法が記載さ
れている。とりわけピＩＪ ＩＪウム核を含む染料は有
用なものとして述べられている。この文献の中に、本明
Ｍ書記載の化合物が細胞の増殖、特に体細胞の増殖會抑
えることができることも記載されている。
発明の目的４
本発明の目的は業界で知られているものに代わる生物学
的染色組成物を提供することである。
的染色組成物を提供することである。
発明の構成
本発明は染色剤としてビリリウム又はチアピリリウム化
合物？含む新規な生物学的染色組成物を提供する。
合物？含む新規な生物学的染色組成物を提供する。
発明の効果
ビリリウム及びチアピリリウム化合物は生体細胞染色及
び固定細胞染色の両方に有用であり、セして洗浄工程ケ
行うことなしに用いることができる。それらｔ／′ｉ、
特に生物細胞及び組織の識別に有用である。これらの染
料は可視の範囲内で広範囲の最大吸収を与え、それらの
多くは螢光であり、そして励起及び発光に使用しうる広
範囲の波長を示す。これらの化合物のなかで好凍しいも
のは、メタクロマチン螢光色票であり、そして細胞核及
び細胞質を独特に染色する（それぞれ赤色及び緑色に染
色）。
び固定細胞染色の両方に有用であり、セして洗浄工程ケ
行うことなしに用いることができる。それらｔ／′ｉ、
特に生物細胞及び組織の識別に有用である。これらの染
料は可視の範囲内で広範囲の最大吸収を与え、それらの
多くは螢光であり、そして励起及び発光に使用しうる広
範囲の波長を示す。これらの化合物のなかで好凍しいも
のは、メタクロマチン螢光色票であり、そして細胞核及
び細胞質を独特に染色する（それぞれ赤色及び緑色に染
色）。
発明の作用
有用なビリリウム及びチアピリリウム染料は次式で表わ
すことができる。
すことができる。
３
一
式中ＧｌｄＯ又はＳであり：
Ｒ、Ｒ及びＲは独立に、水素、アルキル、アリール、ア
ラルΦル、アミノ、スチリル、ビス（ジアリール）ビニ
μ≠ン及ヒ （式中Ｒは水素又はアルキルであシ； （５） −り７゜
Ｚはシアニン染料に用いる型の塩基性複素環系全完成す
るのに必要な元素を表わし； ｎはＯ又は１である）から成る群から選んだものであり
； Ｒ２は水素であるか又はＲ１もしくはＲ３のいずれかと
共に芳香族もしくは炭素同累環 （ｅａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｎｇ ）系を完成する
のに必要な元素を表わし： Ｒ４は水素であるか又は’ Ｂ ５もしくはＲ５のいず
れかと共に芳香族もしくは炭素同累猿系を完成するのに
必要な元素を表わし； セしてＸ−はアニオンである。
ラルΦル、アミノ、スチリル、ビス（ジアリール）ビニ
μ≠ン及ヒ （式中Ｒは水素又はアルキルであシ； （５） −り７゜
Ｚはシアニン染料に用いる型の塩基性複素環系全完成す
るのに必要な元素を表わし； ｎはＯ又は１である）から成る群から選んだものであり
； Ｒ２は水素であるか又はＲ１もしくはＲ３のいずれかと
共に芳香族もしくは炭素同累環 （ｅａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ｒｉｎｇ ）系を完成する
のに必要な元素を表わし： Ｒ４は水素であるか又は’ Ｂ ５もしくはＲ５のいず
れかと共に芳香族もしくは炭素同累猿系を完成するのに
必要な元素を表わし； セしてＸ−はアニオンである。
本発明の実施に用いるビリリウム及びチアピリリウム染
料並びにその製造法は業界で知られておシ、たとえば米
国特許第３，１４１，７７０号：同第３．１４８，０６
７号；同第３，２５０，６１５号；同第３．５７９，３
４５号；同第３，８２２，２７０号−同第３．９３８，
９９４号；及び同第４，１７３，４７３号に記載されて
いる。
料並びにその製造法は業界で知られておシ、たとえば米
国特許第３，１４１，７７０号：同第３．１４８，０６
７号；同第３，２５０，６１５号；同第３．５７９，３
４５号；同第３，８２２，２７０号−同第３．９３８，
９９４号；及び同第４，１７３，４７３号に記載されて
いる。
前述のごとく、前記式中のＲ１、Ｒ５及びＲ５は（６）
同じであっても異なっていてもよく、そしてそれぞれ、
水素、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アミノ
基、スチリル基、ビス（ジアリール）ビニン〒ン基又は
式 （式中Ｒは水素又はアルキルであり： ２はシアニン染料に用いる型の塩基性複素環系を完全す
るのに必要な元素を表わし： セしてｎは０又は１である）で表わされる基を表わすこ
とができる。
水素、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アミノ
基、スチリル基、ビス（ジアリール）ビニン〒ン基又は
式 （式中Ｒは水素又はアルキルであり： ２はシアニン染料に用いる型の塩基性複素環系を完全す
るのに必要な元素を表わし： セしてｎは０又は１である）で表わされる基を表わすこ
とができる。
当業者は、これらの基が望オしい場合には化合物の染色
能を妨害しない別の基と置換しうろことを理解しよう。
能を妨害しない別の基と置換しうろことを理解しよう。
たとえばこれらの基には、アルキル、アリール、アルコ
キシ、アリールオキシ、アミノ、置換アミ７等のような
置換基が含まれてもよい。一般にこのような置換基を用
いる場合、強電子吸引性でないものを選ぶことが好まし
い。
キシ、アリールオキシ、アミノ、置換アミ７等のような
置換基が含まれてもよい。一般にこのような置換基を用
いる場合、強電子吸引性でないものを選ぶことが好まし
い。
Ｒ、Ｒ及び／又はＲがアルキルである場合、それらは炭
素数１〜２０のアルキル、即ちメチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル
、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル
、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタ
デシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシル又はヤ
れらの異性体であるのが好ましい。より好ましくはアル
キル基金炭素数１・〜４の基の中から選ぶ。このような
アルキル置換基はメチルであるのが最も好ましい。
素数１〜２０のアルキル、即ちメチル、エチル、プロピ
ル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル
、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル
、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタ
デシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシル又はヤ
れらの異性体であるのが好ましい。より好ましくはアル
キル基金炭素数１・〜４の基の中から選ぶ。このような
アルキル置換基はメチルであるのが最も好ましい。
前記基が了リールである場合、炭素数６〜２０のアリー
ル基が好壕しく、友とえば、１）フェニル、２）４−ビ
フェニル、３）ナフチル、４）４−エチルフェニル、４
−プロピルフェニルのようなアルクフェニル、５）アル
コキシフェニル、タトえば４−エトキシフェニル、４−
メトキシフェニル、４−アミルオキシフェニル、２−ヘ
キソキシフェニル、２−メトキシフェニル、２−アミル
オーｌ！−’ｉ フェニル、３．４−ジメトキシフェニ
ル、６）ω−ヒトａキシアル□コキシフェニル、’ｒｃ
トエば２−ヒドロキシエトキシフェニル、３−ヒドロキ
シエトキシフェニル、７）４−ヒトミキシフェニル、ハ
ロフェニル、たと、ｔば３．４−ジクロロフェニル、３
ｅ４−ジブロモフェニル、４−１０ロフエニル、２．４
−ジクロロフェニル、８）アミノフェニル、たとえば４
−ジエチルアミノフェニル、４−ジメチルアミノフェニ
ル、４−ジブチルアミノフェニル、４−ジオクチルアミ
ノフェニルである。
ル基が好壕しく、友とえば、１）フェニル、２）４−ビ
フェニル、３）ナフチル、４）４−エチルフェニル、４
−プロピルフェニルのようなアルクフェニル、５）アル
コキシフェニル、タトえば４−エトキシフェニル、４−
メトキシフェニル、４−アミルオキシフェニル、２−ヘ
キソキシフェニル、２−メトキシフェニル、２−アミル
オーｌ！−’ｉ フェニル、３．４−ジメトキシフェニ
ル、６）ω−ヒトａキシアル□コキシフェニル、’ｒｃ
トエば２−ヒドロキシエトキシフェニル、３−ヒドロキ
シエトキシフェニル、７）４−ヒトミキシフェニル、ハ
ロフェニル、たと、ｔば３．４−ジクロロフェニル、３
ｅ４−ジブロモフェニル、４−１０ロフエニル、２．４
−ジクロロフェニル、８）アミノフェニル、たとえば４
−ジエチルアミノフェニル、４−ジメチルアミノフェニ
ル、４−ジブチルアミノフェニル、４−ジオクチルアミ
ノフェニルである。
前記基がアラルキルである場合、アリール基がフェニル
もしくは置換フェニルであシ、そしてそれを介してピリ
リウムもしくはチアピリリウム環へ結合するアルキレン
基の炭素数は１〜４個であり、そしてこのよりなアルキ
レン基はたとえばメチレン、エチレン、デａピシン又は
ブチレンである。最も好ましくはこのようなアラルキル
基はベンジルである。
もしくは置換フェニルであシ、そしてそれを介してピリ
リウムもしくはチアピリリウム環へ結合するアルキレン
基の炭素数は１〜４個であり、そしてこのよりなアルキ
レン基はたとえばメチレン、エチレン、デａピシン又は
ブチレンである。最も好ましくはこのようなアラルキル
基はベンジルである。
前記基がアミン基である場合、それは第一級、第二級も
しくは第三級アミン基のいずれであってもよい。
しくは第三級アミン基のいずれであってもよい。
である場合、Ｒは水素又はアルキルのいずれであっても
よい。それがアルキルである場合、炭素数１〜４のアル
キル、即チメチル、エチル、プロピル、ブチル又はこれ
らの異性体であるのが好ましい。２けシアニン染料に用
いる型の塩基性複素環系を完成するのに必要な元素を表
わす。複累環系の複累原子は、核を形成する窒素、酸累
、硫黄又はセレンである。これらは、たとえば、１）チ
アゾール核、たとえばチアゾール、４−メチルチアゾー
ル、４−フェニルチアゾール、５−メチルチアゾール、
５−フェニルチアゾール、４．５−ジメチルチアゾール
、４．５−ジフェニルチアゾール、４−（２−チェニル
）チアゾール、ベンゾチアゾール、４−りａａベンゾチ
アゾール、５−りａロペンゾチアゾール、６−りａロペ
ンゾチアゾール、７−クロロベンゾチアソール、４−メ
チルベンゾチアゾール、５−メチルベンゾチアゾール、
６−メチルベンゾチアゾール、５−ブロモベンゾチアゾ
ール、６−ブロモベンゾチアゾール、５−フェニルベン
ゾチアゾール、６−フェニルベンゾチアゾール、４−メ
トキシベンゾチアゾール、５−メトキシベンゾチアゾー
ル、６−エトキシベンゾチアゾール、５−ヨードベンゾ
チアゾール、６−ヨードベンゾチアゾール、４−エトキ
シベンゾチアゾール、５−エトキシベンゾチアゾール、
テトラヒトミベンゾチアゾール、５，６−シメトキシペ
ンゾチアゾール、５．６−シオキシメチレンペンゾチア
ゾール、５−ヒドロキシベンゾチアゾール、６−ヒドロ
キシベンゾチアゾール、ナフトール（２，１−ｄ）チア
ゾール、ナフトール〔１゜２−ｄ〕チアゾール、５−メ
トキシナフト〔２゜３−ｄ〕チアゾール、５−エトキシ
ナンド〔２゜３−ｄ〕チアゾール、８−メトキシナフト
〔２゜３−ｄ〕チアゾール、７−メトキシナフト（２゜
３−ｄ）チアゾール、又は４′−メトキシチアナフチノ
ー７’、 ６’、 ４ 、５−チアゾール、２）オキサ
ゾール核、たとえば４−メチルオキサゾール、４−フェ
ニルオキサゾール、４．’ｓ−ｙフェニルオキサゾール
、４−エチルオキサゾール、４．５−ジメチルオキサゾ
ール、５−フェニルオキサゾール、ベンゾキサゾール、
５−クロロベンゾキサゾール、５−メチルベンゾキサゾ
ール、５−フェニルベンゾキサゾール、６−メチルベン
ゾキサゾール、５，６−シメチルペンゾキサゾール、４
，６−シメチルペンゾキサゾール、５−メトキシベンゾ
キサゾール、５−エトキシベンゾキサソール、５−クロ
ロベンゾキサゾール、６−メトキシベンゾキサゾール、
５−ヒドロキシベンゾキサゾール、６−ヒドロキシベン
ゾキサゾール、ナンド〔２゜１−ｄ〕オキサゾール、又
はナフト［１，２−ｄ］オキサゾール、３）セレナゾー
ル核、たとえば４−メチルセレナゾール、４−フェニル
セレナゾール、ベンゾセレナゾール、５−クロロベンゾ
セレナソール、５−メトキシベンゾセレナゾール、５−
ヒトミキシベンゾセレナゾール、テトラヒドロベンゾセ
レナゾール、ナフ）（２，１−ｄ）セレナゾール又はナ
フｌ（１，２−ｄ）セレナゾール、４）チアゾリン核、
たとえばチアゾリン又は４−メチルチアゾリン、５）ピ
リジン核、たとえば２−ピリジン、５−メチル−２−ピ
リジン、４−ピリジン又は３−メチル−４−ピリジン、
６）キノリン核、りとえば２−キノリン、３−メチル−
２−キノリン、５−エチル−２−キノリン、６−クロロ
−２−キノリン、８−クロロ−２−キノリン、６−メド
キシー２−キノリン、８−エトキシ−２−キノリン、８
−ヒトａキシ−２−キノリン、４−キノリン、６−メド
キシー４−キノリン、７−メチル−４−中ノリン、８−
りｏｏ−４−キノリン、１−インキノリン、３，４−ジ
ヒド０−１−イソキノリン又は３−イソキノリン、？）
３．３−ジアルキルインドレニン核又ａ３．３．５−ト
リアルキルインドレニン核、たとえば３．３−−／メチ
ルインドレニン又は３，３．５−トリメチルインドレニ
ン、８）又はイミダゾール核、たとえばイミダゾール、
１−アルキルイミダゾール、１−アルキル−４−フェニ
ルイミタソール、】−Ｔルキシー４．５−ジメチルイミ
ダゾール、ペンズイミグゾール、１−アルキルベンズイ
ミダゾール、１−アリール−５，６−シクロロペンズイ
ミダゾール、】−アルキル−ＩＨ−ナフト（１，２−ｄ
）イミダゾール、ｌ−了り一ルー３Ｈ−ナフト〔１゜２
−ｄ、）イミダゾール及び１−アルキル−５−メトキシ
−ＩＨ−ナンド（１，２−ｄ）イミダゾール（式中アル
キル基の炭素数は１〜４で了リール基の炭素数は６〜２
０である）。
よい。それがアルキルである場合、炭素数１〜４のアル
キル、即チメチル、エチル、プロピル、ブチル又はこれ
らの異性体であるのが好ましい。２けシアニン染料に用
いる型の塩基性複素環系を完成するのに必要な元素を表
わす。複累環系の複累原子は、核を形成する窒素、酸累
、硫黄又はセレンである。これらは、たとえば、１）チ
アゾール核、たとえばチアゾール、４−メチルチアゾー
ル、４−フェニルチアゾール、５−メチルチアゾール、
５−フェニルチアゾール、４．５−ジメチルチアゾール
、４．５−ジフェニルチアゾール、４−（２−チェニル
）チアゾール、ベンゾチアゾール、４−りａａベンゾチ
アゾール、５−りａロペンゾチアゾール、６−りａロペ
ンゾチアゾール、７−クロロベンゾチアソール、４−メ
チルベンゾチアゾール、５−メチルベンゾチアゾール、
６−メチルベンゾチアゾール、５−ブロモベンゾチアゾ
ール、６−ブロモベンゾチアゾール、５−フェニルベン
ゾチアゾール、６−フェニルベンゾチアゾール、４−メ
トキシベンゾチアゾール、５−メトキシベンゾチアゾー
ル、６−エトキシベンゾチアゾール、５−ヨードベンゾ
チアゾール、６−ヨードベンゾチアゾール、４−エトキ
シベンゾチアゾール、５−エトキシベンゾチアゾール、
テトラヒトミベンゾチアゾール、５，６−シメトキシペ
ンゾチアゾール、５．６−シオキシメチレンペンゾチア
ゾール、５−ヒドロキシベンゾチアゾール、６−ヒドロ
キシベンゾチアゾール、ナフトール（２，１−ｄ）チア
ゾール、ナフトール〔１゜２−ｄ〕チアゾール、５−メ
トキシナフト〔２゜３−ｄ〕チアゾール、５−エトキシ
ナンド〔２゜３−ｄ〕チアゾール、８−メトキシナフト
〔２゜３−ｄ〕チアゾール、７−メトキシナフト（２゜
３−ｄ）チアゾール、又は４′−メトキシチアナフチノ
ー７’、 ６’、 ４ 、５−チアゾール、２）オキサ
ゾール核、たとえば４−メチルオキサゾール、４−フェ
ニルオキサゾール、４．’ｓ−ｙフェニルオキサゾール
、４−エチルオキサゾール、４．５−ジメチルオキサゾ
ール、５−フェニルオキサゾール、ベンゾキサゾール、
５−クロロベンゾキサゾール、５−メチルベンゾキサゾ
ール、５−フェニルベンゾキサゾール、６−メチルベン
ゾキサゾール、５，６−シメチルペンゾキサゾール、４
，６−シメチルペンゾキサゾール、５−メトキシベンゾ
キサゾール、５−エトキシベンゾキサソール、５−クロ
ロベンゾキサゾール、６−メトキシベンゾキサゾール、
５−ヒドロキシベンゾキサゾール、６−ヒドロキシベン
ゾキサゾール、ナンド〔２゜１−ｄ〕オキサゾール、又
はナフト［１，２−ｄ］オキサゾール、３）セレナゾー
ル核、たとえば４−メチルセレナゾール、４−フェニル
セレナゾール、ベンゾセレナゾール、５−クロロベンゾ
セレナソール、５−メトキシベンゾセレナゾール、５−
ヒトミキシベンゾセレナゾール、テトラヒドロベンゾセ
レナゾール、ナフ）（２，１−ｄ）セレナゾール又はナ
フｌ（１，２−ｄ）セレナゾール、４）チアゾリン核、
たとえばチアゾリン又は４−メチルチアゾリン、５）ピ
リジン核、たとえば２−ピリジン、５−メチル−２−ピ
リジン、４−ピリジン又は３−メチル−４−ピリジン、
６）キノリン核、りとえば２−キノリン、３−メチル−
２−キノリン、５−エチル−２−キノリン、６−クロロ
−２−キノリン、８−クロロ−２−キノリン、６−メド
キシー２−キノリン、８−エトキシ−２−キノリン、８
−ヒトａキシ−２−キノリン、４−キノリン、６−メド
キシー４−キノリン、７−メチル−４−中ノリン、８−
りｏｏ−４−キノリン、１−インキノリン、３，４−ジ
ヒド０−１−イソキノリン又は３−イソキノリン、？）
３．３−ジアルキルインドレニン核又ａ３．３．５−ト
リアルキルインドレニン核、たとえば３．３−−／メチ
ルインドレニン又は３，３．５−トリメチルインドレニ
ン、８）又はイミダゾール核、たとえばイミダゾール、
１−アルキルイミダゾール、１−アルキル−４−フェニ
ルイミタソール、】−Ｔルキシー４．５−ジメチルイミ
ダゾール、ペンズイミグゾール、１−アルキルベンズイ
ミダゾール、１−アリール−５，６−シクロロペンズイ
ミダゾール、】−アルキル−ＩＨ−ナフト（１，２−ｄ
）イミダゾール、ｌ−了り一ルー３Ｈ−ナフト〔１゜２
−ｄ、）イミダゾール及び１−アルキル−５−メトキシ
−ＩＨ−ナンド（１，２−ｄ）イミダゾール（式中アル
キル基の炭素数は１〜４で了リール基の炭素数は６〜２
０である）。
本発明の実施に用いるビリリウム及びチアピリリウム染
料の前記構造式において Ｒ２は水垢であるか又はＲ又
はＲのいずれかと共に、未置換もしくは置換芳香族又は
炭素同素環系を完成するのに必要な元素ｖｌ−表わすこ
とができる。Ｒは水垢であるか又はＲ又はＲのいずれか
と共に未置換もしくは置換芳香族又は炭素同素環系、た
とえばベンゼン、ナフタレン、ジヒドロナフタレン、テ
トラリン、インデン、ベンゾシクロへブタジェン、シク
ロヘキサン及びシクロペンタン全完成するのに必要な元
素’ｔ−表わすことができる。
料の前記構造式において Ｒ２は水垢であるか又はＲ又
はＲのいずれかと共に、未置換もしくは置換芳香族又は
炭素同素環系を完成するのに必要な元素ｖｌ−表わすこ
とができる。Ｒは水垢であるか又はＲ又はＲのいずれか
と共に未置換もしくは置換芳香族又は炭素同素環系、た
とえばベンゼン、ナフタレン、ジヒドロナフタレン、テ
トラリン、インデン、ベンゾシクロへブタジェン、シク
ロヘキサン及びシクロペンタン全完成するのに必要な元
素’ｔ−表わすことができる。
前記構造式においてＸ−はベルクロレート、テトラフル
オロがレート、パラトルエンスルホネート、スルホネー
ト、被ルヨーデート、クロリド、プロミド、フルオリド
、ヨーシト、サルフェート、ピサルフェート、ビサルフ
ァイト、りＱＯアルミネート及びりａロフェレートのよ
うなアニオンのようなアニオン機能を果たすものである
＠以下の構造式は本発明の実施に特に有用であることが
判明した化合物の例示である。これらの化合物及びそれ
らを用いて得た結果は以下の例において更に詳述する。
オロがレート、パラトルエンスルホネート、スルホネー
ト、被ルヨーデート、クロリド、プロミド、フルオリド
、ヨーシト、サルフェート、ピサルフェート、ビサルフ
ァイト、りＱＯアルミネート及びりａロフェレートのよ
うなアニオンのようなアニオン機能を果たすものである
＠以下の構造式は本発明の実施に特に有用であることが
判明した化合物の例示である。これらの化合物及びそれ
らを用いて得た結果は以下の例において更に詳述する。
化合物Ａ】：
化合物Ａ２：
化合物Ａ３：
（Ｊｂ）
化合物扁４：
化合物屋５：
化合物Ａ６：
（１６）
化合物Ａ７：
化合物Ａ８：
化合物Ａ９：
化合物Ｊ１６．１０ ：
／ ＋ ｎ Ｘ
化合物産１１：
化合物Ａ１２：
化合物Ａ１３：
（１ブノ
化合物Ａ１４：
化合物墓］５：
化合物Ａ１６：
（２０）
化合物扁１８：
化合物扁１９：
化合物Ａ２０：
化合物Ａ２１：
化合物Ａ２２：
化合物Ａ２３：
化合物溜２４：
化合物Ａ２５：
化合物Ａ２６：
（６０）
化合物＆２７：
化合物４２８：
化合物溜２９：
（２４）
化合物Ａ３０：
化合物Ａ３】：
化合物Ａ３２：
化合物Ａ３３：
化合物Ａ３４：
化合物Ａ３５：
化合物Ａ３６：
化合物Ａ３７：
化合物Ａ３８：
（２７）
Ａ、材料
以下の例において、デキストランＴ７０゜Ｆｉｃｏｌｌ
−Ｐａｃｑｕｅ及びＰｅｒｅｏｌｌはニューシャーシー
州、ピスカタウェイ（Ｐｉｓｅａｔａｖｒａｙ ）のフ
ァーマシアファインケミカルズから購入した。ＡＣＤ（
酸、シトレート、デキストランヌＢ−Ｄ４６０４）予備
充填血液収集管はニーーヨーク州ａチェスターのＶＷＲ
サイエンティフィックから購入した。胎児の子牛血清、
エイ類細胞（Ｂｕｒｋｌｔｔのリンフ４腫）、Ｌ−グル
タミン、及びロスウェルノや一りメモリアルインスチチ
ュート１６４０培地［ＲＰＭＩＩ６４０（フローラプラ
トリーズ社、プロダクトカタログ■、１２６−１！−ジ
、１９７７年、培地組成に関する記載）〕は、バージニ
ア州、マクリーン（Ｍａｌｅａｎ ）のフローラがラド
リーズから購入した。ＰｓｒｍｏｕｎｔＴＭ封入剤はニ
ューヨーク州、ａチェスターのフィッシャーサイエンテ
ィフィックから購入した。グンタミシンはニューシャー
シー４Ｌユ＝オンのＳｅｈｓｒｉｎｇ社から購入した。
−Ｐａｃｑｕｅ及びＰｅｒｅｏｌｌはニューシャーシー
州、ピスカタウェイ（Ｐｉｓｅａｔａｖｒａｙ ）のフ
ァーマシアファインケミカルズから購入した。ＡＣＤ（
酸、シトレート、デキストランヌＢ−Ｄ４６０４）予備
充填血液収集管はニーーヨーク州ａチェスターのＶＷＲ
サイエンティフィックから購入した。胎児の子牛血清、
エイ類細胞（Ｂｕｒｋｌｔｔのリンフ４腫）、Ｌ−グル
タミン、及びロスウェルノや一りメモリアルインスチチ
ュート１６４０培地［ＲＰＭＩＩ６４０（フローラプラ
トリーズ社、プロダクトカタログ■、１２６−１！−ジ
、１９７７年、培地組成に関する記載）〕は、バージニ
ア州、マクリーン（Ｍａｌｅａｎ ）のフローラがラド
リーズから購入した。ＰｓｒｍｏｕｎｔＴＭ封入剤はニ
ューヨーク州、ａチェスターのフィッシャーサイエンテ
ィフィックから購入した。グンタミシンはニューシャー
シー４Ｌユ＝オンのＳｅｈｓｒｉｎｇ社から購入した。
Ｃｏ５ｔａｒ９６−完全プレートはニューヨーク州、ロ
チニス（２８） ターのロチニスターサイエンティフィックから購入した
。Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ （ＧＭ １３８１ ）はニ
ューシャーシー州カムデンのセルレボジトリ−１又はア
メリカンタイゾカルチャーコレクション、ロクビレ（Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌａ ）、医薬部門から購入した。シャン
トンシトスピンＴＭシトセントリフユージはペンシルバ
ニア州Ｓｅｗｉｃｋｌｅｙのシセンダンサウサーンイン
ストルメンツ社から購入した・すべでの他の化学薬品は
特にことわらない限り試薬グレードであり、そしてニー
ーヨーク州ロチェスターのイーストマンコダック社から
入手した。
チニス（２８） ターのロチニスターサイエンティフィックから購入した
。Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ （ＧＭ １３８１ ）はニ
ューシャーシー州カムデンのセルレボジトリ−１又はア
メリカンタイゾカルチャーコレクション、ロクビレ（Ｒ
ｏｃｋｖｉｌｌａ ）、医薬部門から購入した。シャン
トンシトスピンＴＭシトセントリフユージはペンシルバ
ニア州Ｓｅｗｉｃｋｌｅｙのシセンダンサウサーンイン
ストルメンツ社から購入した・すべでの他の化学薬品は
特にことわらない限り試薬グレードであり、そしてニー
ーヨーク州ロチェスターのイーストマンコダック社から
入手した。
Ｂ、方法
細胞精製及び生体染色
白血球リッチの層（軟層）は健康な成人供給者の血液（
ＡＣＤ管に採取）から、デキストランＴ７０（平衡塩溶
液、 ８８８９６％）ｔ５ｍｚ２血液の１０ｍ／管へ添
加することにより精製した。これを約１時間沈降させ、
その後細胞ｆ ＢＳＳ中で３回洗浄した。細胞を計測し
、そして最終濃度細胞１０７ｍｌになるように合わせた
。
ＡＣＤ管に採取）から、デキストランＴ７０（平衡塩溶
液、 ８８８９６％）ｔ５ｍｚ２血液の１０ｍ／管へ添
加することにより精製した。これを約１時間沈降させ、
その後細胞ｆ ＢＳＳ中で３回洗浄した。細胞を計測し
、そして最終濃度細胞１０７ｍｌになるように合わせた
。
白血球を更に０１ｏｆｓｓｏｎ （スヵンジナビアンジ
ャーナルオブヘマトロジー、第２４巻、第２５４頁、１
９８０年）による操作に従って分画し、この分画によっ
て細胞の少ない（１ｅｓｓ ａｂｕｎｄａｎｔｃｅｌｌ
） クラスが顕著に富化した。分画は以下のごと〈
実施した。Ｐｅｒｃｏｌｌ （コロイドシリカ、生物相
容性ポリビニルピロリドンｔｉｆるクラッド）及び平衡
塩溶液（ＢＳＳ ） １種々の割合で混合し、そして管
中に積層して】】段階の濃度勾配（１，（１１〜１．１
２９／Ｃｒ、）’ｒうみだした。白血球の懸濁液（軟Ｒ
）ｌｋ管管部部適用し、そして１６００Ｘ、９で２０分
間沈降させた。各細胞クラスはその特有の濃度段階にお
いて検出可能であった。
ャーナルオブヘマトロジー、第２４巻、第２５４頁、１
９８０年）による操作に従って分画し、この分画によっ
て細胞の少ない（１ｅｓｓ ａｂｕｎｄａｎｔｃｅｌｌ
） クラスが顕著に富化した。分画は以下のごと〈
実施した。Ｐｅｒｃｏｌｌ （コロイドシリカ、生物相
容性ポリビニルピロリドンｔｉｆるクラッド）及び平衡
塩溶液（ＢＳＳ ） １種々の割合で混合し、そして管
中に積層して】】段階の濃度勾配（１，（１１〜１．１
２９／Ｃｒ、）’ｒうみだした。白血球の懸濁液（軟Ｒ
）ｌｋ管管部部適用し、そして１６００Ｘ、９で２０分
間沈降させた。各細胞クラスはその特有の濃度段階にお
いて検出可能であった。
エイ類細胞も染色の為に調製した。了りコート全連続培
養から取り出しそして遠心分離して古培地を除いた。胎
内子牛血清１０％、Ｌ−グルタミツ及Ｕグンタミシンを
補足したフレッシュ自スウェルパークメモリアルインス
ティチュートメディウＡ １６４０ （ＲＰＭＩ １６
４０）’Ｔｈ添加シタ。細胞を計測し、そして生育性細
胞１０ ’ ／ｍｌの濃度に合ゎせた。
養から取り出しそして遠心分離して古培地を除いた。胎
内子牛血清１０％、Ｌ−グルタミツ及Ｕグンタミシンを
補足したフレッシュ自スウェルパークメモリアルインス
ティチュートメディウＡ １６４０ （ＲＰＭＩ １６
４０）’Ｔｈ添加シタ。細胞を計測し、そして生育性細
胞１０ ’ ／ｍｌの濃度に合ゎせた。
軟層細胞２００マイクＱ １３ツトル、分画白血球、又
は細胞１０６７ｍ１におけるエイ類細胞ｔ？１０−５モ
ル染料２００μｌと混合した。細胞を室温で１５分間放
置し、次いでシャンドンシトスピンシトセントリフユー
ジ内で１５０ ＯＲＰＭにおいて５分間遠心分離するこ
とによりスライドを調製した。遠心分離後スライドを取
シ出し乾燥させた。カバーグラスを被ルマウント（Ｐｅ
ｒｍｏｕｎｔ ）培地を用いた細胞上に載置した。
は細胞１０６７ｍ１におけるエイ類細胞ｔ？１０−５モ
ル染料２００μｌと混合した。細胞を室温で１５分間放
置し、次いでシャンドンシトスピンシトセントリフユー
ジ内で１５０ ＯＲＰＭにおいて５分間遠心分離するこ
とによりスライドを調製した。遠心分離後スライドを取
シ出し乾燥させた。カバーグラスを被ルマウント（Ｐｅ
ｒｍｏｕｎｔ ）培地を用いた細胞上に載置した。
繊維芽細胞全組織培養培地含有組織培養プレート（３５
酎２）中のカバーグラス（２２ｍｍ２）上に播種しＴｈ
、 ３〜４日生育させた後、繊維芽細胞の単層が合体し
ｆＣ時、培地をプレートから取シ出し、そして１０
モル染料溶液（ａＳＳで希釈した染料１０−５モル／メ
タノール溶液）２ｍ／と置き換えた。
酎２）中のカバーグラス（２２ｍｍ２）上に播種しＴｈ
、 ３〜４日生育させた後、繊維芽細胞の単層が合体し
ｆＣ時、培地をプレートから取シ出し、そして１０
モル染料溶液（ａＳＳで希釈した染料１０−５モル／メ
タノール溶液）２ｍ／と置き換えた。
プレート全３７℃で１０分間インキュベートした。
力・マーグラスを除き、ＢＳＳで丁すぎそして空気乾燥
した。次いでカバーグラスをグリセリン−ＢＳＳ（９：
１１：用いてグラススライド上に載せた。
した。次いでカバーグラスをグリセリン−ＢＳＳ（９：
１１：用いてグラススライド上に載せた。
（細胞側下）。
細胞精製及び固定染色
精製多形核白血球調爬物は、前記軟層全ＦＩｃｏｌｌ−
Ｐａｅｑｕｅ 上に積層し、４００ ＲＣＦ （回転
遠心力）で３０分間遠心分離し、そしてＢｓｓで３回洗
浄することによシ得た。細胞を計測しそして細胞１０’
／ｒｎＪ！の濃度に合わせた。
Ｐａｅｑｕｅ 上に積層し、４００ ＲＣＦ （回転
遠心力）で３０分間遠心分離し、そしてＢｓｓで３回洗
浄することによシ得た。細胞を計測しそして細胞１０’
／ｒｎＪ！の濃度に合わせた。
前記工程からの洗浄細胞懸濁液２ｏｏマイクロリツトル
をシャンドンシトスビンシトセントリフユージの試料溜
め中に装入し、そして最高速度で１０分間遠心分離した
。固定細胞調製物を空気乾燥し、１０−’モル染料（メ
タノール中）で１〜２分間染色し、そして蒸留水で洗浄
した。
をシャンドンシトスビンシトセントリフユージの試料溜
め中に装入し、そして最高速度で１０分間遠心分離した
。固定細胞調製物を空気乾燥し、１０−’モル染料（メ
タノール中）で１〜２分間染色し、そして蒸留水で洗浄
した。
マイクロ分光螢光測定法
染色細胞調製物はツェイスユニバーサルエピ螢光顕微鏡
のもとで調べた。生体染色細胞を評価するのに用いたフ
ィルターは以下に表にし、そして：！ｉｉ：Ｉｏ！（Ｅ
＝″に８６１社・ 以下余白（３３）
鼎ｒ励 起 ／二色ビームスプ
リッター／発 党４８０ｎｍ（青色） ／ ５
１＋１ ｎｍ ／ＷＲ１５”５２０ｎｍ（緑色）
／ ５９０ ｎｍ ／ ５８０ ｎｍ細胞
全識別する為の本発明方法は慣用の実験室ガラス器具、
たとえば試験管又はガラススライドを用いて簡便に実施
することができる。別法としては染料を含浸又は他の方
法により濾紙ストリップ又は多孔性プラスチック単層の
ような吸収剤材料のマトリックス中へ組み入れて細胞試
料？適用しうる試験要素を製造することができる。この
ような方法は当業者によく知られている。
のもとで調べた。生体染色細胞を評価するのに用いたフ
ィルターは以下に表にし、そして：！ｉｉ：Ｉｏ！（Ｅ
＝″に８６１社・ 以下余白（３３）
鼎ｒ励 起 ／二色ビームスプ
リッター／発 党４８０ｎｍ（青色） ／ ５
１＋１ ｎｍ ／ＷＲ１５”５２０ｎｍ（緑色）
／ ５９０ ｎｍ ／ ５８０ ｎｍ細胞
全識別する為の本発明方法は慣用の実験室ガラス器具、
たとえば試験管又はガラススライドを用いて簡便に実施
することができる。別法としては染料を含浸又は他の方
法により濾紙ストリップ又は多孔性プラスチック単層の
ような吸収剤材料のマトリックス中へ組み入れて細胞試
料？適用しうる試験要素を製造することができる。この
ような方法は当業者によく知られている。
例１ ピリリウム及びチアピリリウム化合物の生体染色
特性 軟層調制物及び組織系統、たとえばリンパ腫及び繊維芽
細胞系統からの細胞は、表■及び■に記載のピリリウム
及びチアピリリウム化合物により前述のごとく生体染色
した。染色結果も表Ｉ及び■に記載する。
特性 軟層調制物及び組織系統、たとえばリンパ腫及び繊維芽
細胞系統からの細胞は、表■及び■に記載のピリリウム
及びチアピリリウム化合物により前述のごとく生体染色
した。染色結果も表Ｉ及び■に記載する。
ビＩＪ １７ウム塩＃、著しい染色変性を示す好ましい
化合物、即ち白面球核及び細胞質染色がそれぞ（３４） れ〜６２０ ｎｍ （赤）及び〜５５０ ｎｍ （緑）
において見られた。繊維芽細胞の小板及び糸状体細胞質
は緑色に染色された◎ ”ＷＲ１５は５３０ｎｍ’（ｚ超える最大の透過を有す
る。
化合物、即ち白面球核及び細胞質染色がそれぞ（３４） れ〜６２０ ｎｍ （赤）及び〜５５０ ｎｍ （緑）
において見られた。繊維芽細胞の小板及び糸状体細胞質
は緑色に染色された◎ ”ＷＲ１５は５３０ｎｍ’（ｚ超える最大の透過を有す
る。
ｐＩ下余白
図１２．染料としてピリリウム塩＃ｌを用いた細胞の区
別 人間の白血球を識別する為の染料としてピリリウム塩＃
１を評価した。前述のごと（Ｐｅｒｃｏｌｌ濃度勾配上
で分離したこれら細胞の画分は前記化合物で染色しそし
てマイクロ分元螢元測定法及び流れ血球計算により評価
した。
別 人間の白血球を識別する為の染料としてピリリウム塩＃
１を評価した。前述のごと（Ｐｅｒｃｏｌｌ濃度勾配上
で分離したこれら細胞の画分は前記化合物で染色しそし
てマイクロ分元螢元測定法及び流れ血球計算により評価
した。
画分２は異なった二つの細胞集団、即ち好酸球及び好中
球を含んだ。好酸球は好中球より相当低い緑色螢光會示
した。画分３は好中球のみ全含んだ。
球を含んだ。好酸球は好中球より相当低い緑色螢光會示
した。画分３は好中球のみ全含んだ。
Ｐｅｒｃｏｌｌ細胞画分７及び８もマイクロ針元螢光測
定法により評価した。螢光強度の分配により画分７が純
粋なリン・９球であることが示され、一方画分８はリン
パ球集団を含みセして単球がかなりリッチであった・ 分画していない人間の白血球はビＩＪ ＩＪウム塩＃］
で染色し、流れ血球計算により測定した時それぞれ以下
の３つのピークの分配金得た。緑色（〜５５０ ｎｍ
）対赤色（〜６２０ｎｍ）、赤色灯光散乱及び緑色対光
散乱領域 例３． ピリリウム塩＃１を用いたうさぎの網赤血球の
区別 うさぎの血液を前記Ｐｅｒｃｏｌｌ濃度勾配上で分画し
た。細胞の細胞遠心分離調製物のＷｒ ｉ ｇｈ ｔの
染色により示されるように、１．０９５９／ｒ：、にお
いて得られた画分２は条桑性細胞（正常赤血球に関して
）に富んだ。細胞濃度は前述のごとく細胞１０’／ｍｌ
に合わせ、そして細胞ｆｃａ＋＋及びＭｇ＋＋？含まぬ
平衡塩溶液中の１０ モルビリリウム塩＃１で１５分
間、室温で染色した。染色細胞の細胞遠心分離調製物の
顕微鏡による調査により、４８０ ｎｍにおける光で励
起する時緑色螢光を発する糸状体突起を示す非有核細胞
の集団が示された。
定法により評価した。螢光強度の分配により画分７が純
粋なリン・９球であることが示され、一方画分８はリン
パ球集団を含みセして単球がかなりリッチであった・ 分画していない人間の白血球はビＩＪ ＩＪウム塩＃］
で染色し、流れ血球計算により測定した時それぞれ以下
の３つのピークの分配金得た。緑色（〜５５０ ｎｍ
）対赤色（〜６２０ｎｍ）、赤色灯光散乱及び緑色対光
散乱領域 例３． ピリリウム塩＃１を用いたうさぎの網赤血球の
区別 うさぎの血液を前記Ｐｅｒｃｏｌｌ濃度勾配上で分画し
た。細胞の細胞遠心分離調製物のＷｒ ｉ ｇｈ ｔの
染色により示されるように、１．０９５９／ｒ：、にお
いて得られた画分２は条桑性細胞（正常赤血球に関して
）に富んだ。細胞濃度は前述のごとく細胞１０’／ｍｌ
に合わせ、そして細胞ｆｃａ＋＋及びＭｇ＋＋？含まぬ
平衡塩溶液中の１０ モルビリリウム塩＃１で１５分
間、室温で染色した。染色細胞の細胞遠心分離調製物の
顕微鏡による調査により、４８０ ｎｍにおける光で励
起する時緑色螢光を発する糸状体突起を示す非有核細胞
の集団が示された。
Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ Ｇｉａｍａａ染料による同じスライ
ドの対比染色により灰色−紫色一染色綱赤血球が判明し
、前記観察が確認された。
ドの対比染色により灰色−紫色一染色綱赤血球が判明し
、前記観察が確認された。
例４． ビリリウム及びチアピリリウム塩の固定細胞染
色特性 多形核白血球は前述のごとく１方法”により分画し、固
定し、次いでビリリウム及びチアピリリウム塩で染色し
た。
色特性 多形核白血球は前述のごとく１方法”により分画し、固
定し、次いでビリリウム及びチアピリリウム塩で染色し
た。
これら化合物の染色特性は表■に要約する。少なくとも
３つのビリリウム！（＃３．２８及び１１）は非常に明
るくそして特異的な核螢光染色を示した。化合物＃２９
及び＋３０は弱い核螢光を示した。一般に明るい核染色
を示すビＩＩ ＩＪウム塩はメトキシフェニル基全含ん
だ。核染色に加えて、ビＩＪ リウム塩のあるものけ、
細胞全体（＋３１及び１４）か又は細胞質（＋３２．１
５゜１２．３３．３４及び３５）のいずれかを染色する
。′ 試験したチアピリリウム塩のあるものも明るくそして選
択的な核螢光染色を示した（＋２６及び２７）。他のチ
アピリリウム塩は弱いがこれも選択的な核染色（＋２２
及び３６）、並びに全体的な核染色（＋３７及び３８）
ｖｉ−示した。
３つのビリリウム！（＃３．２８及び１１）は非常に明
るくそして特異的な核螢光染色を示した。化合物＃２９
及び＋３０は弱い核螢光を示した。一般に明るい核染色
を示すビＩＩ ＩＪウム塩はメトキシフェニル基全含ん
だ。核染色に加えて、ビＩＪ リウム塩のあるものけ、
細胞全体（＋３１及び１４）か又は細胞質（＋３２．１
５゜１２．３３．３４及び３５）のいずれかを染色する
。′ 試験したチアピリリウム塩のあるものも明るくそして選
択的な核螢光染色を示した（＋２６及び２７）。他のチ
アピリリウム塩は弱いがこれも選択的な核染色（＋２２
及び３６）、並びに全体的な核染色（＋３７及び３８）
ｖｉ−示した。
以下余白 ・、も
表 ■
１３ 間該螢光
２８ 間該螢光
１１ 間該螢光
２９ 核螢光
３０ 核螢光
３１ 全体細胞間螢光
１４ 間該螢ｆｔ、：細胞質螢光（フェードする傾向
）３２ 細胞質螢光（急速にフェードする）１５
明細脂質螢光 １２ 細胞質螢光 ３３ 細胞質螢光 ３４ 細胞質螢光 ３５ 弱細胞質螢光 チアピリリウム塩 ２６ 間該螢光 ２７ 間該螢光 ２２ 核螢光 ３６ 核螢光：細胞質螢光フェード３７ 細胞
質、核及び粒子螢光 ３８ 細胞質及び核螢光
）３２ 細胞質螢光（急速にフェードする）１５
明細脂質螢光 １２ 細胞質螢光 ３３ 細胞質螢光 ３４ 細胞質螢光 ３５ 弱細胞質螢光 チアピリリウム塩 ２６ 間該螢光 ２７ 間該螢光 ２２ 核螢光 ３６ 核螢光：細胞質螢光フェード３７ 細胞
質、核及び粒子螢光 ３８ 細胞質及び核螢光
Claims (1)
- る染色組成物。
Applications Claiming Priority (2)
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