JPS5872055A - 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 - Google Patents
血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法Info
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- JPS5872055A JPS5872055A JP17108681A JP17108681A JPS5872055A JP S5872055 A JPS5872055 A JP S5872055A JP 17108681 A JP17108681 A JP 17108681A JP 17108681 A JP17108681 A JP 17108681A JP S5872055 A JPS5872055 A JP S5872055A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は改良された血中グリコシレーテッドヘモグロビ
ン（１（ｂ Ａ□）の簡易測定法に関する。
ン（１（ｂ Ａ□）の簡易測定法に関する。
網状赤血球で生成された初期のヘモグロビンはグルコー
スを含んでいないが、赤血球のライフスパンである約４
ケ月の間にヘモグロビン分子は血中のグルコース分子と
シッフ塩基様の結合をしていわゆるグリコシノーテッド
ヘモグロビン（グリコヘモグロビンと略称することもあ
る）となる。この反応は非酵素的で緩慢であり、赤血球
の循環過程を通じてゆづり進行するものであるからその
生成量は血中の糖濃度を反映し、血糖値が高いほど、の
ぼる過去数ケ月間の血糖レベルを集積的に把握すること
が可能となるわけで、最近糖尿病患者の血糖値管理の指
標として極めて重要な意味が認められ、広く普及してい
る。またこのグリコシレーテッドヘモグロビンはヘモグ
ロビンＡＬ（：ｒ−１ｂＡ□）とも称され適当な手段に
よってヘモグロビンの１構成分であるヘモグロビンＡｎ
（Ｉ（ｂ Ａ、、）から区別される微少成分Ｈｂ Ａ
ｌａ ＋ Ｈｂ Ａ ｒ ｂ ＋ ＩＩｂ Ａ ＋ Ｃ
々どの総称である。
スを含んでいないが、赤血球のライフスパンである約４
ケ月の間にヘモグロビン分子は血中のグルコース分子と
シッフ塩基様の結合をしていわゆるグリコシノーテッド
ヘモグロビン（グリコヘモグロビンと略称することもあ
る）となる。この反応は非酵素的で緩慢であり、赤血球
の循環過程を通じてゆづり進行するものであるからその
生成量は血中の糖濃度を反映し、血糖値が高いほど、の
ぼる過去数ケ月間の血糖レベルを集積的に把握すること
が可能となるわけで、最近糖尿病患者の血糖値管理の指
標として極めて重要な意味が認められ、広く普及してい
る。またこのグリコシレーテッドヘモグロビンはヘモグ
ロビンＡＬ（：ｒ−１ｂＡ□）とも称され適当な手段に
よってヘモグロビンの１構成分であるヘモグロビンＡｎ
（Ｉ（ｂ Ａ、、）から区別される微少成分Ｈｂ Ａ
ｌａ ＋ Ｈｂ Ａ ｒ ｂ ＋ ＩＩｂ Ａ ＋ Ｃ
々どの総称である。
とのＨｂ Ａ ｒの測定法としてイオン交換カラムクロ
マトグラフ什、アガローズゲル電気泳動法、当電点電気
泳動法、比色法など各種の方法があるハ現在最も一般的
に普及しているのはミクロカラムを用いた簡易イオン交
換カラム法で、これによればわずかに１０μｍはどの血
液から約３０分はどの短時間でＨｂＡ＋ａ＋ｂ＋ｃを一
括して分げ１溶出することができ既にクイックセツプ（
アイソラボ社）。
マトグラフ什、アガローズゲル電気泳動法、当電点電気
泳動法、比色法など各種の方法があるハ現在最も一般的
に普及しているのはミクロカラムを用いた簡易イオン交
換カラム法で、これによればわずかに１０μｍはどの血
液から約３０分はどの短時間でＨｂＡ＋ａ＋ｂ＋ｃを一
括して分げ１溶出することができ既にクイックセツプ（
アイソラボ社）。
ＮＣロベット （日本ケミファ社）などの名称で市販の
製品もある。即ち、グリコヘモグロビンＩ−Ｉ ｂ Ａ
。
製品もある。即ち、グリコヘモグロビンＩ−Ｉ ｂ Ａ
。
はグロビン鎖に陰性荷電分子であるグルコースもしくは
グルコース隣酸塩などが伺加されているだめ電気化学的
特性としては正常ヘモグロビンＨｂ Ａｌ。
グルコース隣酸塩などが伺加されているだめ電気化学的
特性としては正常ヘモグロビンＨｂ Ａｌ。
よりわずかに陰性で、カルボキシル基（−ＣＯＯ■（）
などを交換基とする弱酸性陽イオン交換樹脂とリン酸塩
などからなる陰イオン性緩衝液の組合せによるイオン交
換カラムクロマトグラフィーで分離可能テあり、前記ミ
クロカラムにおけるカラム構成としては、ＨｂＡｌの分
離精度を損わない範囲の小型で簡単な構成のものが用い
られる。
などを交換基とする弱酸性陽イオン交換樹脂とリン酸塩
などからなる陰イオン性緩衝液の組合せによるイオン交
換カラムクロマトグラフィーで分離可能テあり、前記ミ
クロカラムにおけるカラム構成としては、ＨｂＡｌの分
離精度を損わない範囲の小型で簡単な構成のものが用い
られる。
第１図は前記ミクロカラムを用いてＨｂ Ａ＋ ａ ＋
ｂ ＋ｃを一括溶出する従来の方法（以下従来法１と記
す）であり、■はその中にバイオレックス（Ｂｉｏｒｅ
ｘ）７０ （バイオランド社製）あるいはアンパーラ・
イトアイアールシー（Ａｍｂｅｒｌｉ 、ｔｅ ＩＲ
Ｃ） ５０ （ロームアントノ・−ス社製）などの
弱酸性陽イオン交換樹脂２を充填１〜だいわゆるイオン
交換樹脂カラムである。該イオン交換樹脂２は例えば酸
性リン酸塩であるリン酸２水素１ナトリウム（Ｎ ａ
Ｈ２Ｐ ０４）０．０２９ Ｍ と塩基性リン酸塩で
あるリン酸ｌ水累２ナトリウム（Ｎ ａ ２ ＨＰ Ｏ
、ｉ ＞ ’ ０．０１５ Ｍからなるリン酸塩緩衝液
のような低イオン強度の陰イオン性緩衝液であって、平
衡状態に至るまで予め十分洗浄されている。測定時には
、まず肘静脈などより採取された血液に非イオン性界面
活性剤水溶液を加えるな（ どの方法で溶血せしめた溶血血液３の所定、を、カラム
内のイオン交換樹脂、上端に添加する（ａ）。次いで前
述と同一組成のリン酸塩緩衝液からなる溶離液４ａを少
量加えて血液を樹脂層２にしみ込ませたのち（ｂ）、該
溶離液４ａと同一組成の溶離液４ｂを所定量通液すれば
、順次（ｃ）の如く溶〃Ｃが進行してＨｂＡ■成分５が
樹脂層上端に吸着したまま下降せず、Ｔ（ｂＡｌａｌ
ｂ、 ｃ６は一つの帯のまま下降しくｄ）の如くカラム
下端より流出する。
ｂ ＋ｃを一括溶出する従来の方法（以下従来法１と記
す）であり、■はその中にバイオレックス（Ｂｉｏｒｅ
ｘ）７０ （バイオランド社製）あるいはアンパーラ・
イトアイアールシー（Ａｍｂｅｒｌｉ 、ｔｅ ＩＲ
Ｃ） ５０ （ロームアントノ・−ス社製）などの
弱酸性陽イオン交換樹脂２を充填１〜だいわゆるイオン
交換樹脂カラムである。該イオン交換樹脂２は例えば酸
性リン酸塩であるリン酸２水素１ナトリウム（Ｎ ａ
Ｈ２Ｐ ０４）０．０２９ Ｍ と塩基性リン酸塩で
あるリン酸ｌ水累２ナトリウム（Ｎ ａ ２ ＨＰ Ｏ
、ｉ ＞ ’ ０．０１５ Ｍからなるリン酸塩緩衝液
のような低イオン強度の陰イオン性緩衝液であって、平
衡状態に至るまで予め十分洗浄されている。測定時には
、まず肘静脈などより採取された血液に非イオン性界面
活性剤水溶液を加えるな（ どの方法で溶血せしめた溶血血液３の所定、を、カラム
内のイオン交換樹脂、上端に添加する（ａ）。次いで前
述と同一組成のリン酸塩緩衝液からなる溶離液４ａを少
量加えて血液を樹脂層２にしみ込ませたのち（ｂ）、該
溶離液４ａと同一組成の溶離液４ｂを所定量通液すれば
、順次（ｃ）の如く溶〃Ｃが進行してＨｂＡ■成分５が
樹脂層上端に吸着したまま下降せず、Ｔ（ｂＡｌａｌ
ｂ、 ｃ６は一つの帯のまま下降しくｄ）の如くカラム
下端より流出する。
第２図は以前に本発明者らが発明したＨ ｂ ＡＨａ−
）ｂ 。
）ｂ 。
ＨｂＡ、ｃ ２分画分離法（以下従来法２という）で
、カラム１の構成は前述と同様である。この従来法２に
おいては、従来法１と同様に溶血血液３を添したのち（
ａ）、低イオン強度、低ＰＭに調整されたリン酸塩緩衝
液でなる第１溶離液４Ｃを少量加えて血液を樹脂層にし
み込ませたのち（ｂ）、該溶離液４ｄを所定量通液する
。これによってＨｂａｎ成分５は樹脂上端にとどまる間
にＨｂＡ１ｃ６□は中間まで下降し、ＨｂＡ ａ、 ｂ
６．はほぼ一つの帯のままさらに先に下降してカラム下
端より流出する（ｃ） （（１） ｏ次いで溶離液４ｄ
よりイオン強度まだはＰＨにおいてやや高く調整された
ヘモグロビン溶離能力の高ｊバリン酸塩緩衝液でなる溶
離液４ｅの所定量を通液する。これにより （ｅ） （
ｆ）に示すようにカラム内にとどまっていたＨ ｂ Ａ
ＩＩ ５ 、 Ｈｂ Ａｔｃ６２層は脱離下降しＨｂＡ
ｌ５がカラム中間まで下がる間にＨｂＡ４ｃ％のみが下
端から流出し分けられるわけである。
、カラム１の構成は前述と同様である。この従来法２に
おいては、従来法１と同様に溶血血液３を添したのち（
ａ）、低イオン強度、低ＰＭに調整されたリン酸塩緩衝
液でなる第１溶離液４Ｃを少量加えて血液を樹脂層にし
み込ませたのち（ｂ）、該溶離液４ｄを所定量通液する
。これによってＨｂａｎ成分５は樹脂上端にとどまる間
にＨｂＡ１ｃ６□は中間まで下降し、ＨｂＡ ａ、 ｂ
６．はほぼ一つの帯のままさらに先に下降してカラム下
端より流出する（ｃ） （（１） ｏ次いで溶離液４ｄ
よりイオン強度まだはＰＨにおいてやや高く調整された
ヘモグロビン溶離能力の高ｊバリン酸塩緩衝液でなる溶
離液４ｅの所定量を通液する。これにより （ｅ） （
ｆ）に示すようにカラム内にとどまっていたＨ ｂ Ａ
ＩＩ ５ 、 Ｈｂ Ａｔｃ６２層は脱離下降しＨｂＡ
ｌ５がカラム中間まで下がる間にＨｂＡ４ｃ％のみが下
端から流出し分けられるわけである。
第３図の（局、翰はそれぞれ一ヒ記の従来法１，２によ
り溶出操作を行ったさいにカラム下端から流出してくる
液を一定液量に分取しださいに含まれるヘモグロビン濃
度を測定して得られたヘモグロビン溶出パターンである
０ ところで、このような従来のミクロカラム法代簡単な操
作で臨床指標としての目的にかなう結果を得ることがで
きるという点で優れたものであったが必ずしも十分満足
し得るものとまでは言えない難点があった。例えば、従
来法１では、分離後の濃度測定に供し得る十分な量のＨ
ｂＡｌａ、 ｂ、 ｃを短時間で分離溶出するため少量
のイオン交換樹脂に対して、比較的多量の血液を加え、
やや過大な溶離条件を採用しているのが特徴である。こ
のため、イオン交換樹脂へのヘモグロビンの吸着を左右
する要因即ち、緩衝液の塩濃度、Ｐ■■、溶出時の温度
などの影響を著；７く受けて測定値が不安定となること
が多かった。とりわけ温度の影響はこの方法にとって致
命的とも言える欠点であって、やむなく恒温施設の中で
行われるのが普通であんこの従来法１による場合に温度
の影響が大々なる理由について次に説明する。
り溶出操作を行ったさいにカラム下端から流出してくる
液を一定液量に分取しださいに含まれるヘモグロビン濃
度を測定して得られたヘモグロビン溶出パターンである
０ ところで、このような従来のミクロカラム法代簡単な操
作で臨床指標としての目的にかなう結果を得ることがで
きるという点で優れたものであったが必ずしも十分満足
し得るものとまでは言えない難点があった。例えば、従
来法１では、分離後の濃度測定に供し得る十分な量のＨ
ｂＡｌａ、 ｂ、 ｃを短時間で分離溶出するため少量
のイオン交換樹脂に対して、比較的多量の血液を加え、
やや過大な溶離条件を採用しているのが特徴である。こ
のため、イオン交換樹脂へのヘモグロビンの吸着を左右
する要因即ち、緩衝液の塩濃度、Ｐ■■、溶出時の温度
などの影響を著；７く受けて測定値が不安定となること
が多かった。とりわけ温度の影響はこの方法にとって致
命的とも言える欠点であって、やむなく恒温施設の中で
行われるのが普通であんこの従来法１による場合に温度
の影響が大々なる理由について次に説明する。
イオン交換カラムクロマトグラフィーの原理はいうまで
も彦く分離しようとする溶質（複数のヘモグロビン成分
）の帯電状態のちがいがらくるイオン交換樹脂との相互
作用のちがいにもとすいてイル。ところが今対象とする
グリコヘモグロビンの特性を知る手がかシである等電点
をみてもＨｂ Ａ ＩＩ６．９５〜７．０、Ｈｂ Ａ
、 ｃはこれよシわずかに低く約６９５、Ｈｂ、Ａ＋ａ
、、ｂはそれぞれ６０．６８近辺という具合に極めてわ
ずかの違いでしかない。従ってこの系では、ヘモグロビ
ンゴイオン交換樹脂間の相斤作用を支配する要因として
特に系のＰＨ，塩濃度を至適範囲に保つことが極めて重
要となる。即ち、等電点の関係からＨｂＡｎとＨｂＡｌ
ａ 、 ｂ、 ｃをわけようとするならば、Ｈｂ Ａ
Ｕの６．９５〜７．０ 、！： Ｈｂ Ａ、ｃの６．９
５の間に設定しなければ々らず、少なくともＰＨを０．
０１のオーダーで正１〜く管理する必要がある。もしＰ
Ｈニゲ少しでも高ければ’、ＨｂＡｎの吸着が阻害され
、ＨｂＡ１成分の方に混入ｉ〜て来る。反対にＰＨが少
しでも低ければ、ＨｂＡｌｃを取り残す可能性がでてく
るというわけである。又塩濃度も同様で、特に陽イオン
（実施例においてはＮａ十）は、イオン交換基へのヘモ
グロビンの吸着に対して排除効果として働き、例えば塩
濃度が高いと、ＰＨが例えＨｂ 、Ａ ｎの等電点より
低い範囲でも、ＨｂＡＨの吸着が不充分のままＨｂ Ａ
ｒ成分との分離が不十分と々す、又塩濃度が過度に低
いと液の緩衝効果が不十分で安定した分離状態が得られ
ないということになる。このような事情により、このグ
リコヘモグロビンの分離のためのイオン交換クロマトグ
ラフィーでは、ＨｂＡｒｌを選択的に吸着させ得る条件
でＨｂ Ａ、ｌ成分だけ流１〜出すという、いわゆる吸
着クロマトグラフィーは厳密な意味においては事実上む
ずかしく、これらの成分の樹脂との相互作用にもとすく
移動度の差によって分離しようとするのが従来の方法で
ある。従って、例え系のＰＪ塩濃度などを厳格に設定し
たとしても、ヘモグロビンの移動度に関係するファクタ
ー、例えば温度がわずかにかわると至適条件が全くずれ
るという現象をきたす。従来法ｌで測定値の温度依存性
が著しく高いというのはこのような背景によるものであ
った。
も彦く分離しようとする溶質（複数のヘモグロビン成分
）の帯電状態のちがいがらくるイオン交換樹脂との相互
作用のちがいにもとすいてイル。ところが今対象とする
グリコヘモグロビンの特性を知る手がかシである等電点
をみてもＨｂ Ａ ＩＩ６．９５〜７．０、Ｈｂ Ａ
、 ｃはこれよシわずかに低く約６９５、Ｈｂ、Ａ＋ａ
、、ｂはそれぞれ６０．６８近辺という具合に極めてわ
ずかの違いでしかない。従ってこの系では、ヘモグロビ
ンゴイオン交換樹脂間の相斤作用を支配する要因として
特に系のＰＨ，塩濃度を至適範囲に保つことが極めて重
要となる。即ち、等電点の関係からＨｂＡｎとＨｂＡｌ
ａ 、 ｂ、 ｃをわけようとするならば、Ｈｂ Ａ
Ｕの６．９５〜７．０ 、！： Ｈｂ Ａ、ｃの６．９
５の間に設定しなければ々らず、少なくともＰＨを０．
０１のオーダーで正１〜く管理する必要がある。もしＰ
Ｈニゲ少しでも高ければ’、ＨｂＡｎの吸着が阻害され
、ＨｂＡ１成分の方に混入ｉ〜て来る。反対にＰＨが少
しでも低ければ、ＨｂＡｌｃを取り残す可能性がでてく
るというわけである。又塩濃度も同様で、特に陽イオン
（実施例においてはＮａ十）は、イオン交換基へのヘモ
グロビンの吸着に対して排除効果として働き、例えば塩
濃度が高いと、ＰＨが例えＨｂ 、Ａ ｎの等電点より
低い範囲でも、ＨｂＡＨの吸着が不充分のままＨｂ Ａ
ｒ成分との分離が不十分と々す、又塩濃度が過度に低
いと液の緩衝効果が不十分で安定した分離状態が得られ
ないということになる。このような事情により、このグ
リコヘモグロビンの分離のためのイオン交換クロマトグ
ラフィーでは、ＨｂＡｒｌを選択的に吸着させ得る条件
でＨｂ Ａ、ｌ成分だけ流１〜出すという、いわゆる吸
着クロマトグラフィーは厳密な意味においては事実上む
ずかしく、これらの成分の樹脂との相互作用にもとすく
移動度の差によって分離しようとするのが従来の方法で
ある。従って、例え系のＰＪ塩濃度などを厳格に設定し
たとしても、ヘモグロビンの移動度に関係するファクタ
ー、例えば温度がわずかにかわると至適条件が全くずれ
るという現象をきたす。従来法ｌで測定値の温度依存性
が著しく高いというのはこのような背景によるものであ
った。
一方、従来法２は、臨床指標として特に鋭敏なＨｂ 、
Ａ、ｃを分画測定し得ると同時に上記のような従来法１
の欠点が改良されたもので、カラム内の緩衝液およびＨ
ｂ 、Ａｌａ 、 ｂを溶出する溶離液４ ｄ ｉｉｊ
： リン塩酸濃度、ＰＨともに低く調整されている。従
ってＨｂＡｌａ、 ｂ、 ｃいずれも単にカラム内を移
動する速度によってわけられる（従来法Ｉがこれに相当
する）ということでなく、いったん樹脂層に吸着された
後、溶出にあたって再び脱離されるか呟分離が完全であ
シかつ塩濃度、ＰＨ，温度などの影響を受けにくいわけ
である。ところが、この従来法２を実施するには、２段
にわたる溶出が必要で、必然的拠操作も所要時間も従来
法１０２倍を要し、測定精度とともに簡便性が優先され
る日常の臨床検査としてあまり得策とは言えない。即ち
Ｈｂ、Ａ、をＨｂ 、Ａ、ａ 、 ｂ とＨｂＡ、ｃ
に分離して測定できることは、疾患との関連において双
方が比例的に増減するか、あるいは、特異的に解離する
可能性はどうかというよう々基礎的な情報を得る場合に
極めて有効であるものの、対象疾患を糖尿病と限って血
糖管理の指標とするには、むしろそのような詳細な情報
よりも１り簡便であった方がよいという要望も少なくな
いのである。
Ａ、ｃを分画測定し得ると同時に上記のような従来法１
の欠点が改良されたもので、カラム内の緩衝液およびＨ
ｂ 、Ａｌａ 、 ｂを溶出する溶離液４ ｄ ｉｉｊ
： リン塩酸濃度、ＰＨともに低く調整されている。従
ってＨｂＡｌａ、 ｂ、 ｃいずれも単にカラム内を移
動する速度によってわけられる（従来法Ｉがこれに相当
する）ということでなく、いったん樹脂層に吸着された
後、溶出にあたって再び脱離されるか呟分離が完全であ
シかつ塩濃度、ＰＨ，温度などの影響を受けにくいわけ
である。ところが、この従来法２を実施するには、２段
にわたる溶出が必要で、必然的拠操作も所要時間も従来
法１０２倍を要し、測定精度とともに簡便性が優先され
る日常の臨床検査としてあまり得策とは言えない。即ち
Ｈｂ、Ａ、をＨｂ 、Ａ、ａ 、 ｂ とＨｂＡ、ｃ
に分離して測定できることは、疾患との関連において双
方が比例的に増減するか、あるいは、特異的に解離する
可能性はどうかというよう々基礎的な情報を得る場合に
極めて有効であるものの、対象疾患を糖尿病と限って血
糖管理の指標とするには、むしろそのような詳細な情報
よりも１り簡便であった方がよいという要望も少なくな
いのである。
本発明は 以上のような事情にかんがみ、従来法の内で
もより簡便な従来法１ （Ｈｂ Ａ＋ａ 十ｂ ＋ｃ
一括溶出力に従来法２の原理をとり入れて従来法１の最
大の欠点とも言える温度依存性を向上せしめんとするも
のである。
もより簡便な従来法１ （Ｈｂ Ａ＋ａ 十ｂ ＋ｃ
一括溶出力に従来法２の原理をとり入れて従来法１の最
大の欠点とも言える温度依存性を向上せしめんとするも
のである。
本発明は陽イオン濃度０．１ Ｍ以下、ＰＩ−１７，０
以下であるところの酸性リン塩酸と塩基性リン酸塩から
なるリン酸塩緩衝液で平層↑化した弱酸性陽イオン交換
樹脂を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、然るの
ち前記リン酸塩緩衝液よりもヘモグロビン溶離効果の弱
いリン酸塩緩衝液でなる展開液の所定量を通液してヘモ
グロビンＡ１成分をヘモグロビンＡ成分から分離展開し
、次いで前記展開液よりもヘモグロビン溶離効果の強い
リン酸塩緩衝液でなる溶離液の所定量を通液してヘモグ
ロビンＡ１成分を溶離せしめ、得られた流出液について
吸光度を測定してヘモグロビン濃度を求めることを特徴
とする。
以下であるところの酸性リン塩酸と塩基性リン酸塩から
なるリン酸塩緩衝液で平層↑化した弱酸性陽イオン交換
樹脂を充填してなるカラムに溶血血液を添加し、然るの
ち前記リン酸塩緩衝液よりもヘモグロビン溶離効果の弱
いリン酸塩緩衝液でなる展開液の所定量を通液してヘモ
グロビンＡ１成分をヘモグロビンＡ成分から分離展開し
、次いで前記展開液よりもヘモグロビン溶離効果の強い
リン酸塩緩衝液でなる溶離液の所定量を通液してヘモグ
ロビンＡ１成分を溶離せしめ、得られた流出液について
吸光度を測定してヘモグロビン濃度を求めることを特徴
とする。
以−ト本発明を実施例により説明する。第４図は本発明
による測定法を説明するものであり、本発明においては
、従来法と同様に、酸性リン酸塩と塩基性リン酸塩から
なるリン酸塩緩衝液で平Ｊテ化］７た弱酸性陽イオン交
換樹脂２を充填［２てなるカラム１を用いる。そして捷
ず（ａ）に示すカラム１のギヤツブ乙８をとり、カラム
１の緩衝液を流１〜出す。次いで（）１）に示すように
溶血血液：３を５０ ｔｔ ｅ樹脂の中心に滴下した。
による測定法を説明するものであり、本発明においては
、従来法と同様に、酸性リン酸塩と塩基性リン酸塩から
なるリン酸塩緩衝液で平Ｊテ化］７た弱酸性陽イオン交
換樹脂２を充填［２てなるカラム１を用いる。そして捷
ず（ａ）に示すカラム１のギヤツブ乙８をとり、カラム
１の緩衝液を流１〜出す。次いで（）１）に示すように
溶血血液：３を５０ ｔｔ ｅ樹脂の中心に滴下した。
そして、溶血血液が樹脂内にしみ込むのを待って前記イ
オン交換樹脂のコンデショニングに用いた緩衝液と同系
であってかつ該緩衝液よりもヘモグロビン溶離効果の弱
い展開液９を７５０μｌ加えて流出させ、溶血血液中の
ヘモグロビンをカラム１内に展開した（ｃ）ｏそしてカ
ラム下端からの流出液を全て捨てた後、試験管をカラム
ｌの下にセントし、前記展開り、９よシもヘモグロビン
溶離効果の強い溶離液１０を８ｍ１通液してＨｂＡ、ａ
、 ｂ、 ｃを溶出させた。
オン交換樹脂のコンデショニングに用いた緩衝液と同系
であってかつ該緩衝液よりもヘモグロビン溶離効果の弱
い展開液９を７５０μｌ加えて流出させ、溶血血液中の
ヘモグロビンをカラム１内に展開した（ｃ）ｏそしてカ
ラム下端からの流出液を全て捨てた後、試験管をカラム
ｌの下にセントし、前記展開り、９よシもヘモグロビン
溶離効果の強い溶離液１０を８ｍ１通液してＨｂＡ、ａ
、 ｂ、 ｃを溶出させた。
なお、実施例にて用いたカラム１は従来法１，２と同様
の構成で、内径５．５ ｎｍ５ｇのガラス管に陽イオ
１ン樹脂樹脂としてのバイオレックス７０を約１
ｎＪ（高さ４０ｍｍ）に充填ものである。バイオレック
ス７：０は例えばリン酸２水素ｌナトリウム０ＶＩＪｅ
ｌ Ｈ２ＰＯ、、−Ｂρ０．３Ｍ、 リン酸１水素２
ナトリウム的ＦＬ２ＨＰＯ４） ０．２Ｍから成る陰
イオン性緩衝液で予め平１’７化されている。なお、こ
のようなリン酸塩緩衝液の組成ではＰＨ６，７０を示す
。
の構成で、内径５．５ ｎｍ５ｇのガラス管に陽イオ
１ン樹脂樹脂としてのバイオレックス７０を約１
ｎＪ（高さ４０ｍｍ）に充填ものである。バイオレック
ス７：０は例えばリン酸２水素ｌナトリウム０ＶＩＪｅ
ｌ Ｈ２ＰＯ、、−Ｂρ０．３Ｍ、 リン酸１水素２
ナトリウム的ＦＬ２ＨＰＯ４） ０．２Ｍから成る陰
イオン性緩衝液で予め平１’７化されている。なお、こ
のようなリン酸塩緩衝液の組成ではＰＨ６，７０を示す
。
また、試料（溶血血液）も従来法１．２と同様にトライ
トソエックス−１００（Ｔｒｅｔｏｎｘ−１００） ５
％水溶液４００μｅを試験管に分取し、Ｅｌ）ＴＡ加
血液１００μｅを加え、回転攪拌器で激シ、＜混和し溶
血させて５分間（装置することにより準備した。
トソエックス−１００（Ｔｒｅｔｏｎｘ−１００） ５
％水溶液４００μｅを試験管に分取し、Ｅｌ）ＴＡ加
血液１００μｅを加え、回転攪拌器で激シ、＜混和し溶
血させて５分間（装置することにより準備した。
またヘモグロビン濃度測定は次のように行なった。第４
図に示した測定に供する溶血血液とは別に、溶血血液５
０μｅを別の試験管に分取し、蒸留水を加えて全量８ｍ
ｇとした（この液をＡ液と呼ぶ）まだ第４図の操作にお
ける溶出液をＢ液とし、Ａ液、Ｂ液の缶液について分光
光度河１により波長４１５ｎｍ における吸光度を測定
し、次式によりＩ−Ｉ ｂ Ａの濃度を算出した。
図に示した測定に供する溶血血液とは別に、溶血血液５
０μｅを別の試験管に分取し、蒸留水を加えて全量８ｍ
ｇとした（この液をＡ液と呼ぶ）まだ第４図の操作にお
ける溶出液をＢ液とし、Ａ液、Ｂ液の缶液について分光
光度河１により波長４１５ｎｍ における吸光度を測定
し、次式によりＩ−Ｉ ｂ Ａの濃度を算出した。
」−２の操作においてヘモグロビンの分〃ｔは第４図及
び第５図のように進行した。即ち、イオン交換樹脂上端
に添加された溶血血液３中の一＼モグロビンは約数■の
幅にとどまっており （ｂ） 、展開液９が通液される
とカラム上端にはＨｂＡＩ＋５が吸音状態のまま下降せ
ず、一方Ｈｂ Ａ、６はａ、 ｂ、 ｃの順に１つの広
い帯となってＨｂＡＩＴ５から分離して下降する。然し
ながら展開液９はカラム内液に比してヘモグロビン溶離
効果が弱く、塩濃度、ＰＨの少なくともいずれか一方が
低くおさえられていることから、ヘモグロビンの移動度
は著しく制限されカラム下端から流出するまでには至ら
ない。次いで溶離液１０が通液されると、樹脂２の上端
に吸着していたＨｂＡＩＴ５もわずかに脱離して下降す
るが、既に先に下降していたＨｂＡ、ａ 、 ｂ、 ｃ
６は下端から流出しくｄ） （ｅ） 、分離回収され
るわけである。
び第５図のように進行した。即ち、イオン交換樹脂上端
に添加された溶血血液３中の一＼モグロビンは約数■の
幅にとどまっており （ｂ） 、展開液９が通液される
とカラム上端にはＨｂＡＩ＋５が吸音状態のまま下降せ
ず、一方Ｈｂ Ａ、６はａ、 ｂ、 ｃの順に１つの広
い帯となってＨｂＡＩＴ５から分離して下降する。然し
ながら展開液９はカラム内液に比してヘモグロビン溶離
効果が弱く、塩濃度、ＰＨの少なくともいずれか一方が
低くおさえられていることから、ヘモグロビンの移動度
は著しく制限されカラム下端から流出するまでには至ら
ない。次いで溶離液１０が通液されると、樹脂２の上端
に吸着していたＨｂＡＩＴ５もわずかに脱離して下降す
るが、既に先に下降していたＨｂＡ、ａ 、 ｂ、 ｃ
６は下端から流出しくｄ） （ｅ） 、分離回収され
るわけである。
本発明は、原理的に説明すれば移動度の差によってＨｂ
Ａ＋ａ 、 ｂ 、 ｃとＨｂＡＩＴが分離していく
過程で同時にカラム内にＰＨも１〜くけ塩濃度の連続的
な勾配を作シ出すことによって分離効果を拡大し、いわ
ゆる吸着クロマトに近い溶出状態を得ることができる如
くしだもので、第６図はその原理を図解したものである
。即ちカラム内は予めＨｂＡｒｒがゆるく吸着し得る程
度の例えばＰＨ６，７０、（Ｎ ａ ＋）０．０７Ｍ
！Ｊン酸緩衝液で平衝化されておりこの条件ではＨｂＡ
、ａ、 ｂ、 ｃは吸着せず動き得る条件（ｌこある。
Ａ＋ａ 、 ｂ 、 ｃとＨｂＡＩＴが分離していく
過程で同時にカラム内にＰＨも１〜くけ塩濃度の連続的
な勾配を作シ出すことによって分離効果を拡大し、いわ
ゆる吸着クロマトに近い溶出状態を得ることができる如
くしだもので、第６図はその原理を図解したものである
。即ちカラム内は予めＨｂＡｒｒがゆるく吸着し得る程
度の例えばＰＨ６，７０、（Ｎ ａ ＋）０．０７Ｍ
！Ｊン酸緩衝液で平衝化されておりこの条件ではＨｂＡ
、ａ、 ｂ、 ｃは吸着せず動き得る条件（ｌこある。
即ち、リン酸緩衝液の組成は、第６図（ｅ）の線りに示
すように、陽イオン濃度（塩１震度）−！たはＰＨがＨ
ｂ Ａ Ｉｆの吸着、非吸着の境界ラインｌの値よりも
やや低くなるように選択される。
すように、陽イオン濃度（塩１震度）−！たはＰＨがＨ
ｂ Ａ Ｉｆの吸着、非吸着の境界ラインｌの値よりも
やや低くなるように選択される。
このカラムに第６図（８）のように溶面血液３を加えた
のち一定量の展開液９を通液させるのであるがこの展開
液９は例えばＰ Ｈ６，６０、（Ｎａ ＋） ０．０３
の如く、前記カラム内緩衝液よりもＰＩ−Ｉ、塩濃度の
少なくともいずれかが低く、従ってヘモグロビンの吸着
効果をより強くする（即ちヘモグロビンの溶離効果を弱
くする）傾向にあり、展開液９を通液し終った段階では
カラム内に（ｆ）の曲線ｌのような濃度勾配を生じるこ
ととなる。予め吸着していなかつ＊ＨｂＡ、ａ、ｂ、ｃ
６は展開液９とともに下方におしやられるが予めゆるく
吸着していたＨ ｂ Ａ Ｉｆ ５はそとにとどまるの
みならずいっそう強く吸着することに々る。そして次に
溶離液】０を通液するのであるが、これはＰＨ６，６０
、（Ｎａ ＋） ０．０１ Ｍ という塩濃度が著し
く高く、従って前段階で生じた濃度勾配（カラム内の上
方はどＰＨ、塩濃度が高くなっている）を、（ｇ）の曲
線ｊのように除々に逆転させつつＨｂ八へ８．ｂ、Ｃを
下方におし下げる。当然この階段ではＨｂ ＡＩＩも脱
着してわずかながら下降を示すほどになるがこの時既に
ＨｂＡｌａ、 ｂ、 ｃ６は下端より流出し、ＨｂＡＩ
Ｉがカラム中央に至る段階では流出を完了しているので
ある。
のち一定量の展開液９を通液させるのであるがこの展開
液９は例えばＰ Ｈ６，６０、（Ｎａ ＋） ０．０３
の如く、前記カラム内緩衝液よりもＰＩ−Ｉ、塩濃度の
少なくともいずれかが低く、従ってヘモグロビンの吸着
効果をより強くする（即ちヘモグロビンの溶離効果を弱
くする）傾向にあり、展開液９を通液し終った段階では
カラム内に（ｆ）の曲線ｌのような濃度勾配を生じるこ
ととなる。予め吸着していなかつ＊ＨｂＡ、ａ、ｂ、ｃ
６は展開液９とともに下方におしやられるが予めゆるく
吸着していたＨ ｂ Ａ Ｉｆ ５はそとにとどまるの
みならずいっそう強く吸着することに々る。そして次に
溶離液】０を通液するのであるが、これはＰＨ６，６０
、（Ｎａ ＋） ０．０１ Ｍ という塩濃度が著し
く高く、従って前段階で生じた濃度勾配（カラム内の上
方はどＰＨ、塩濃度が高くなっている）を、（ｇ）の曲
線ｊのように除々に逆転させつつＨｂ八へ８．ｂ、Ｃを
下方におし下げる。当然この階段ではＨｂ ＡＩＩも脱
着してわずかながら下降を示すほどになるがこの時既に
ＨｂＡｌａ、 ｂ、 ｃ６は下端より流出し、ＨｂＡＩ
Ｉがカラム中央に至る段階では流出を完了しているので
ある。
第７図はこのようにして行った本発明になる方法の温度
と測定値との関係を従来法１，２に対比して示したもの
である。まだ第８図は作業温度２３°Ｃにおける本発明
になる方法と従来法ｌとの測定値の相関を示したもので
ある。このように本発明になる方法は、従来法と全く一
致する結果が得られるのみならず温度特性においても２
０〜２８°Ｃでは全く影響を受けない優れた方法である
ことがわかる。
と測定値との関係を従来法１，２に対比して示したもの
である。まだ第８図は作業温度２３°Ｃにおける本発明
になる方法と従来法ｌとの測定値の相関を示したもので
ある。このように本発明になる方法は、従来法と全く一
致する結果が得られるのみならず温度特性においても２
０〜２８°Ｃでは全く影響を受けない優れた方法である
ことがわかる。
発明者らは−Ｆ記の方法を実現する過程でカラム内緩衝
液、展開液、溶離液をリン酸２水素１ナトリウム、リン
酸ｌ水素２ナトリウムからなるリン酸緩衝液とし、両者
の比率でＰ Ｈ（Ｎａ十）をかえ、各種組合わせにおい
て試みた結果、最も基本的な条件を与えるのはカラム内
緩衝液であって、これに対するＰＨ，、（Ｎａ＋）が決
定されれば、展開液、溶離液組成がそれにともなって二
次的に決定された。そしてそのカラム内緩衝液の条件は
、Ｐ■■と塩濃度の相対的な関係で決定されるもののそ
の上限が重要であって、基本的にはＰ Ｉ−ＩがＨｂ
Ａ、 ｆｆの等電点７．０ 以下であること、又（Ｎ
ａ−１−）は旧５Ｍ以下であることが以後の展開液、溶
離液組成の条件設定を容易にした。また展開液に関して
はカラム内緩衝液の関係で決められるＰ Ｈ、（Ｎａ＋
）の他に通液量を規定することが必要であった。即ち目
的とするところのＩ（ｂ Ａ、ａ ＋ ｂ ＊ ｃをＴ
−Ｉ ｂ Ａ ＩＩから分離しカラム内に農産勾配を作
り出すという点で七分な結果を期待するためには、展開
液量を多くすることが条件設定を容易にするが、できる
だけ少ない量で目的を達することは溶出時間のむだを省
くことになり、また最も早く下降するＩ（ｂＡ、ｑを失
うおそれも少ない。基本的には該展開液自身の構成によ
って二次的に決定され、実施例の条件によれば、カラム
内の樹脂層の中で緩衝液がしめる容積即ちボイドボリュ
ームに等しい量約０５ｍｅからこの２倍量１ｍｌまでの
範囲で十分目的に適った。
液、展開液、溶離液をリン酸２水素１ナトリウム、リン
酸ｌ水素２ナトリウムからなるリン酸緩衝液とし、両者
の比率でＰ Ｈ（Ｎａ十）をかえ、各種組合わせにおい
て試みた結果、最も基本的な条件を与えるのはカラム内
緩衝液であって、これに対するＰＨ，、（Ｎａ＋）が決
定されれば、展開液、溶離液組成がそれにともなって二
次的に決定された。そしてそのカラム内緩衝液の条件は
、Ｐ■■と塩濃度の相対的な関係で決定されるもののそ
の上限が重要であって、基本的にはＰ Ｉ−ＩがＨｂ
Ａ、 ｆｆの等電点７．０ 以下であること、又（Ｎ
ａ−１−）は旧５Ｍ以下であることが以後の展開液、溶
離液組成の条件設定を容易にした。また展開液に関して
はカラム内緩衝液の関係で決められるＰ Ｈ、（Ｎａ＋
）の他に通液量を規定することが必要であった。即ち目
的とするところのＩ（ｂ Ａ、ａ ＋ ｂ ＊ ｃをＴ
−Ｉ ｂ Ａ ＩＩから分離しカラム内に農産勾配を作
り出すという点で七分な結果を期待するためには、展開
液量を多くすることが条件設定を容易にするが、できる
だけ少ない量で目的を達することは溶出時間のむだを省
くことになり、また最も早く下降するＩ（ｂＡ、ｑを失
うおそれも少ない。基本的には該展開液自身の構成によ
って二次的に決定され、実施例の条件によれば、カラム
内の樹脂層の中で緩衝液がしめる容積即ちボイドボリュ
ームに等しい量約０５ｍｅからこの２倍量１ｍｌまでの
範囲で十分目的に適った。
上述で明らかな如く本発明は、従来法の中では最も簡便
であると考えられる従来法１１即ちミクロカラムによる
ＨｂＡ＋ａ 、 ｂ、 ｃ一括溶出法を基本とし、予め
カラム内に満されている緩衝液より塩濃度まだはＰＨに
おいて低い展開液を通液してカラム内に連続的な濃度勾
配（塩濃度またはＰＨによる勾配）を作り出すことによ
って通常の操作温度２０″Ｃ〜２８°Ｃの間では温度の
干渉を全く受けない゛という優れた性能を実現し得たも
のであり、同時に臨床検査として必須の簡便性において
も従来法１のそれを全くそこなうことのない実用性の極
めて大なる新しい方法を提供するものである。
であると考えられる従来法１１即ちミクロカラムによる
ＨｂＡ＋ａ 、 ｂ、 ｃ一括溶出法を基本とし、予め
カラム内に満されている緩衝液より塩濃度まだはＰＨに
おいて低い展開液を通液してカラム内に連続的な濃度勾
配（塩濃度またはＰＨによる勾配）を作り出すことによ
って通常の操作温度２０″Ｃ〜２８°Ｃの間では温度の
干渉を全く受けない゛という優れた性能を実現し得たも
のであり、同時に臨床検査として必須の簡便性において
も従来法１のそれを全くそこなうことのない実用性の極
めて大なる新しい方法を提供するものである。
第１図および第２図はそれぞれ従来の測定方法を説明す
る図、第３図（５）（Ｂ）はそれぞれ第１図、第２図に
示した従来方法による場合の−＼モグロビン溶出パター
ン図、第４図は本発明による測定方法を説明する図、第
５図はそのヘモグロビン溶出パターン図、第６図は本発
明の原理説明図、第７図は本発明方法と従来方法との温
度特性対比図、第８図は本発明方法と従来方法との測定
値対比図である。 ■・・カラム、２・・陽イオン交換樹脂、３・拳溶面血
液、５・・Ｈｂ Ａ＋ｒ１層、６・・ＦＩ ｂ Ａｉ、
’蕾、９・・展開液、１０・・溶離液 特許出願人 株式会社 相互生物医学ＤＩ究所代理
人弁理士 若 １）勝 −（１９） 第１図 第２図 （ａ） （ｂ） （Ｃ） （ｄ） （ｅ）
（↑）手続補正書（方式） 昭和５７年９月３日 特許庁 長官 殿 １ 事件の表示 昭和５６年 特許 類纂 １７１０８６号２、発明の
名称 血中ヘモグロビンＡ、の簡易測定法３、 補正
をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 東京都中野区中央４丁目２５番１０号４、
代理人 ８６ 補正の内容 「血中へモゲロビンＡ１の簡易測
定法」を「血中ヘモグロビンＡ１の簡易測定法」と訂正
する。
る図、第３図（５）（Ｂ）はそれぞれ第１図、第２図に
示した従来方法による場合の−＼モグロビン溶出パター
ン図、第４図は本発明による測定方法を説明する図、第
５図はそのヘモグロビン溶出パターン図、第６図は本発
明の原理説明図、第７図は本発明方法と従来方法との温
度特性対比図、第８図は本発明方法と従来方法との測定
値対比図である。 ■・・カラム、２・・陽イオン交換樹脂、３・拳溶面血
液、５・・Ｈｂ Ａ＋ｒ１層、６・・ＦＩ ｂ Ａｉ、
’蕾、９・・展開液、１０・・溶離液 特許出願人 株式会社 相互生物医学ＤＩ究所代理
人弁理士 若 １）勝 −（１９） 第１図 第２図 （ａ） （ｂ） （Ｃ） （ｄ） （ｅ）
（↑）手続補正書（方式） 昭和５７年９月３日 特許庁 長官 殿 １ 事件の表示 昭和５６年 特許 類纂 １７１０８６号２、発明の
名称 血中ヘモグロビンＡ、の簡易測定法３、 補正
をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 東京都中野区中央４丁目２５番１０号４、
代理人 ８６ 補正の内容 「血中へモゲロビンＡ１の簡易測
定法」を「血中ヘモグロビンＡ１の簡易測定法」と訂正
する。
Claims (1)
- １、陽イオン濃度０．１Ｍ以下、ＰＨ７，０以下である
ところの酸性リン酸塩と塩基性リン酸塩からなるリン酸
塩緩衝液で平衡化した弱酸性陽イオン交換樹脂を充填し
てなるカラムに溶血血液を添カロし、然るのち前記リン
酸塩緩衝液よりもヘモグロビン溶離効果の弱いリン酸塩
緩衝液でなる展開液の所定量を通夜してヘモグロビンＡ
１成分をヘモグロビンＡ成分から分離展開し、次いで前
記展開液よシもヘモグロビン溶離効果の強いリン酸塩緩
衝液でなる溶離液の所定量を通液してヘモグロビンへ成
分を溶離せしめ得られた流出液について吸光度を２、
カラムに通液する展開液の容量をカラムのボイドボリュ
ームの２倍以下とすることにょシ展開されたヘモグロビ
ンＡ１層をカラム下端ｊ ｈ流出せしめるごと々くカラ
ム内にとどめおくことを特徴とする特許請求の範囲第１
項記載の血中ヘモグロビンＡＩの簡易測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17108681A JPS5872055A (ja) | 1981-10-26 | 1981-10-26 | 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17108681A JPS5872055A (ja) | 1981-10-26 | 1981-10-26 | 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5872055A true JPS5872055A (ja) | 1983-04-28 |
| JPH0231350B2 JPH0231350B2 (ja) | 1990-07-12 |
Family
ID=15916736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17108681A Granted JPS5872055A (ja) | 1981-10-26 | 1981-10-26 | 血中ヘモグロビンａ↓１の簡易測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5872055A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58191968A (ja) * | 1982-04-26 | 1983-11-09 | バイオ−ラツド・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレイテツド | ヘモグロビンＡ↓１↓ｃの分離方法 |
| JPS6459063A (en) * | 1987-08-28 | 1989-03-06 | Shimadzu Corp | Method for adjusting ph of fluid |
| US4810391A (en) * | 1987-11-06 | 1989-03-07 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Separation of hemoglobin A2 from hemoglobin mixture |
| JPH01199166A (ja) * | 1988-02-04 | 1989-08-10 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 |
| JPH01297554A (ja) * | 1988-05-25 | 1989-11-30 | Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd | グリコヘモグロビン測定法 |
| US4980058A (en) * | 1987-11-06 | 1990-12-25 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Separation of hemoglobin A2 from hemoglobin mixture |
| JPH055730A (ja) * | 1990-11-30 | 1993-01-14 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフ装置 |
| JP2010237110A (ja) * | 2009-03-31 | 2010-10-21 | Sekisui Medical Co Ltd | ヘモグロビン類の分析方法及び蛋白質の分析方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55101052A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55101050A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple dispensation measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55101051A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55162060A (en) * | 1979-06-04 | 1980-12-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Measuring method for glycosyl hemoglobin |
-
1981
- 1981-10-26 JP JP17108681A patent/JPS5872055A/ja active Granted
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55101052A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55101050A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple dispensation measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55101051A (en) * | 1979-01-26 | 1980-08-01 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | Simple measuring method for hemoglobin glucoside in blood |
| JPS55162060A (en) * | 1979-06-04 | 1980-12-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Measuring method for glycosyl hemoglobin |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58191968A (ja) * | 1982-04-26 | 1983-11-09 | バイオ−ラツド・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレイテツド | ヘモグロビンＡ↓１↓ｃの分離方法 |
| JPS6459063A (en) * | 1987-08-28 | 1989-03-06 | Shimadzu Corp | Method for adjusting ph of fluid |
| JP2555624B2 (ja) * | 1987-08-28 | 1996-11-20 | 株式会社島津製作所 | 流体のｐｈ調整法 |
| US4810391A (en) * | 1987-11-06 | 1989-03-07 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Separation of hemoglobin A2 from hemoglobin mixture |
| US4980058A (en) * | 1987-11-06 | 1990-12-25 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Separation of hemoglobin A2 from hemoglobin mixture |
| JPH01199166A (ja) * | 1988-02-04 | 1989-08-10 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 血中糖化ヘモグロビンの簡易精密分画測定法 |
| JPH01297554A (ja) * | 1988-05-25 | 1989-11-30 | Nippon Zoki Pharmaceut Co Ltd | グリコヘモグロビン測定法 |
| JPH055730A (ja) * | 1990-11-30 | 1993-01-14 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフ装置 |
| JP2010237110A (ja) * | 2009-03-31 | 2010-10-21 | Sekisui Medical Co Ltd | ヘモグロビン類の分析方法及び蛋白質の分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0231350B2 (ja) | 1990-07-12 |
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