JPS5860999A - 液体試料中の微生物抑制物質を検出する部材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物抑制物質を検出する部材に関する。

抗生物質及び他の微生物の生長を抑制する物質の検出は
、一般に寒天拡散（Ａｇａｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）の原
理（例えば薄片試験：　Ｂ１１１ｔｔｃｈｅｎｔｅｓｔ
　、寒天孔試験：　Ａｇａｒｌｏｃｈｔｅｓｔ）に従が
い実施される。

指示生体としては、一般に、その顕著な形態発會がノζ
イオーアツセイに利用される・々シルス属（Ｂａｃｉｌ
ｌａｃｅａｅ　）の微生物が使用される。この細菌の内
生芽胞形成能力は、それが環境の影響例えば熱、乾燥、
毒物及び−照射線に対する高い抵抗を示すので、生態学
的及び使用技術的に重要である。その隠匿状態で、胞子
発芽及び引続く植物生長が最適環境条件に達するまで内
生芽胞を持続する。他方、芽もしくは植物用の間の生長
抑制物質（抗生物質、界面活性剤、物質代謝拮抗物質等
）に対する比較的高い感度は１、これら物質の定性定量
検出に利用することができる。・ぐシルス属の細菌を生
長抑制物質の検出のための生体指示薬として使用するこ
とは、現在慣用されている。このために、これら細菌の
内生芽胞を栄養寒天中に埋め込み、被検物質を寒天拡散
原理により試験するも 医療において、体液中の細菌性伝染病の診断は、屡々、
抑制物質の存在により困難にされる。

抑制物質に基づ（誤まった陰性所見は、例えば、尿診断
では被検尿の３０％までも達しうろ。この理由から、慣
用の細菌検査に平行して、抑制物質の存在に関する試験
が必要になっているがこれは、そのきまりきった検査の
ための複雑な経過に基づき、一般に経費ががかり、従っ
て実施されることはまれである。この種の試験において
は、ペトリ皿中の栄養寒天中に内生芽胞を埋め込み、こ
の上に、試料を含浸し、乾燥されている濾紙薄片を置き
、低温で予備インキユペートシ、恒温保持する。抑制物
質の存在する場合には相応する濾紙薄片のまわりで細菌
の生長が停止する。この方法の使用は、複雑な取扱いと
共に、この種の方法における比較的困難な試料同定に基
づき問題があり、更に、この方法は、少ない試料数では
非能率的である。更に、胞子の加えられた寒天プレート
の非常に低い安定性もあり、これは冷蔵庫内でも数週間
貯蔵できるだけである。

乳製品及び肉製品中で、試料の抗生物質不含を検査する
ことは義務として規定されている。

このためには、指示微生物として特にパシルスステアロ
テルモフイルス・／ζ−ル・カリ１ラクチス（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ　ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｖ
ａｒ。

ｃａｌｉｄｏｌａｃｔｉｓ）が使用される。

試料の検査は、前記の尿試料に関する記載と同様に経費
のかがる方法で行なわれる。

本発明の課題は、細胞が封入法の間には害されず、その
発芽性及び分裂性が完全に保持され、発芽性胞子の抗生
物質に対する感度はあまり影響されず、封入された細胞
が封入マ）　ＩＪソックス技術的に問題なく加工するこ
とのできる１、生細胞の固定もしくは封入法を見つける
ことがある。

細胞は、封入された状態での貯蔵の間には潜在的に生長
可能のまま残り、その生長は、マトリックスの外から加
えられる刺激によってはじめて誘起されるべきである。

マトリックスのこの支持構造は、細胞生長をあまり限定
してはならない。この封入法のためには、細胞と反応す
る試薬又は、細胞の生長に害を及ぼすようなものを使用
してはならない。

微生物の担体固定のためには種々の方法が公知であり、
これらは次のカテゴリーに分けることができる二表面で
の吸着、表面への共有結合、細胞相互の網状化、細胞の
カプセル封入、多孔性マトリックス中への細胞の封入（
Ｊ、ＫＩｅｉｎ。

Ｋｏｎｔａｋｔｅ　３／８０　Ｆｉｒｍｅｎｚｅｉｔｓ
ｃｈｒｉｆｔ　ｄｅｒ　ＦｉｒｍａＥ、Ｍｅｒｃｋ、Ｄ
ａｒｍｓｔａｄｔ参照）。

これらの方法はすべて、細胞の酵素的潜在能力をできる
だけ狭い空間に集約し、酵素活性が種々な変換反応に関
するある種のケージ（ＫｊＬｆｉｇ）を供給できるよう
に固定することを意図している。

この目的は、ポリマー組曲に固定及び／又は封入するこ
とにより達成される。従来公知の方法を、前記文献から
取り出し次表に示す：第１表 全細胞をポリマー網中に封入する１工程法第２表 ポリマー網中へ全細胞を封入する２工程法この課題の評
価のもとで、従来公知のいずれの方法も、解決法として
は適当ではない。それというのも、公知のプレバレージ
ョン法は、細胞の必要量を封入することのできない攻撃
的な試薬を必要とするか又はマトリックスから技術的に
問題なく加工できるフィルムを製造することができない
からである。試薬としてのプレバレージョン法の使用に
とって、フィルムの製造は、唯一の実際的可能性である
。それというのも、他のすべての変法は大きい容量を必
要とし、従って取扱いが困難であるからである。

この課題は次のようにして解決される：細胞を水性プラ
スチック分散液及びオープナ−（０ｆｆｎｅｒｎ　）の
水溶液よりなる混合物（この中になお添加物が入れられ
ていてもよい）中に攪拌導入する。こげフィルム原料を
常法でベース材上に例えば注ぐか、塗布するか又はドク
ター塗布し、引続き乾燥させる。こうして製造したフィ
ルム中に細胞を大きな機械的負荷によってのみ取り出す
ことができるように、堅固に固定する。乾燥フィルムは
、微生物をｌＯ〜１０９個／ｇの量でかつ水溶性又は水
膨潤性の巨大分子量のオープナ−並びに場合により他の
添加物を含有し、この際、プラスチック対オーシナ−の
門比は１０００：１〜１：１０である。

分散粒子及びオープナ−の機能は次のように説明するこ
とができるニ オ−ブナ−即ち、水溶性又は水膨潤性の巨大分子量の物
質を、分散液フィルム中に封入することにより、このフ
ィルムの特性を、それが、オープナ−を有しないフィル
ムよりも著るしく多−くの水を吸収するように変える。

水を良好に吸収する能力を、フィルム中への水溶性物質
例えば栄養物もしくは抑制物質を困難な（拡散導入する
ことができる事実も結合している。オープナ−は、分散
粒子の球包装中に開放位置を穿孔し、この中に細胞が入
り貯蔵されるが、フィルム構造はフィルムの形成がもは
やできない程、度まで害されることはない。

フィルムの外側から湿らせると、細胞上へ生長刺激作用
が及び、細胞はフィルムの開放部から充分に生長しはじ
める。栄養物質と同時に抑制物質も細胞に近づくと、コ
ロニー形成の生長は停止する。生じたコロニーは公知方
法で指示薬例えばｐＨ−指示薬、トリフェニルテトラゾ
リウム塩等を用いて眼に見えるようにすることができる
。

これに反して、細胞をプラスチック分散液（これにはオ
ーシナ−は混入されていない）中に導入し、フィルムを
形成すると、細胞は気密に封入される。水吸収能を有す
るフィルムを形成する分散液を使用すると、栄養物質も
しくは抑制物質の侵入は、この種のフィルムには開放位
置が存在しないので著るしく害されるから゛、僅かな発
芽及びコロニー生長が観察されるだけである。

多かれ少なかれ疎水性フィルムを形成する分散液の場合
には、一般にコロニー生長はもはや認められない。

本発明方法にとって多くの原料が使用可能である。

原料を後に詳述する。これらには、使用細胞に対する抑
制物質ではなく、抑制物質で不純化されておらず、かつ
抑制物質の作用を排除しないことが重要な前提となる。

原料管埋にとって必要である抑制物声不含に関する試験
は、公知の典型的方法例えば寒天稀釈試験で困難な〈実
施することができる。

フィルム形成剤としては、実際に、すべての水性プラス
チック分散液例えば酢酸ビニル力・らノホモポリマー、
アクリル酸エステル力）らのホモポリマー、酢酸ビニル
とゾロピオン酸ビニルとからのコポリマー、ゾロピオン
酸ビニル、アクリロニトリル及びアクリル酸エステル力
・らのコポリマー、酢酸ビニルとマレイン酸エステルか
らのコポリマー、ブタジェンとスチロールとからのコポ
リマー、塩化ビニルとゾロピオン酸ビニルとからのコポ
リマー等が挙げられる。

オープナ−としては原則的にすべての巨大分子量の水溶
性物質が使用可能である。これにしま、例えば水溶性の
全合成高分子ポリマー例え（イポリビニルぎ口１）　）
ＩＩン、ポリビニルアルコτル、部分鹸化された酢酸、
ｔ？　ＩＪビニル、酢酸ビニルとビニルピロリＰンとか
らのコポリマー、ボ１ノエチレングリコール、ポリエチ
レンオキシド樹脂、アクリル酸ポリマー、メチルビニル
エーテルと無水マレイン酸とからの共重合体等が挙げら
れる。同様に水溶性の半合成生成物及び純粋な天然物例
えばメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
ヒドロキシゾロビルセルロース、カルゼキシメチルセル
ロース、アルギン酸塩、ゼラチン、多糖類、デンプン等
並びにこれら物質の混合物も挙げられる。添加物として
は、緩衝塩、中性塩、糖、蛋白質、湿潤剤、顔料、軟化
剤、例えばグリセリン、ポリグリコール等並びに微生物
の生長４示す指示薬、例えばｐＨ指示薬、トリフェニル
テトラゾリウム誘導体等を使用することができる。

フィルム原料は、１容器中にプラスチック分散液な準備
し、これにオ、−シナ−の溶液及び添加物を加え、攪拌
下にホモゲナイズしてフィルム原料にすることにより製
造する。この場合、分散液からの固体成分とオープナ−
及び添加物の固体成分との間の混合割合な犬ぎい【凹円
で選択することができる。混合比は次の観点により決め
るべきである： ａ）フィルム原料から生じるフ、イルムは、それ自体閉
じられた単位を形成すべきである。即ち、フィルムは亀
裂を示してはならず、充分に物質特異性及び分散液及び
オープナ−の交換作用により決められる現象を示す。

ｂ）フィルムは、栄養物質及び場合によっては抑制物質
が充分に細胞へ入ることが可能であるように開放されて
いるべきであり、即ち同様に充分に物質特異性及び分散
液とオープナ−並びに添加物の交換作用により決められ
る現−像を示す。

Ｃ）ある程度、混合割合は、分散液及びオープナ−溶液
の粘度によっても決められる。この場合にはフィルム原
料の粘度は、もちろん、工業的に更に加工可能であるよ
うに調節されるべきことのみに注意すべきである。即ち
、例えば低粘度物質のものよりも高粘度オープナ−場合
により少なく使用することができる。

前記のすべての事実を考慮して、分散液固体対オープナ
−固体の混合比を１０００：１〜１：１０に選択するこ
とができる。

添加物の濃度は、その都度の個々の要求に応して選択さ
れる。指示薬、軟化剤及び湿潤剤は、これら物質が細胞
に抑制作用を及ぼすか、もしくはフィルムを軟かすぎる
か又は脆すぎるようになる時に合せて比較的低い濃度で
使用されることは明白である。選択すべき塩濃度及び糖
及び蛋白質の濃度は細胞の生長能力に負の影響を及ぼし
てはならない。同様に、助剤によりフィルムの安定性に
負の影響があってはならない。

即ち、その濃度は一定上限を越えてはならない。

フィルム原料からフィルムに加工する前に、細胞を１０
〜１０８個／、７（原料）の濃度でこの中に攪拌導入す
る。フィルムの形成は公知方法で、例えば型への注入、
担体の被覆、フィルム材料中に封入される支持組織の被
覆などにより行なわれる。

本発明方法の有利な用途は、微生物の貯蔵及び搬送装置
の製造のためにこの方法を使用することである。このた
めに、細胞をフィルムマトリックス中に封入し、これを
乾燥貯蔵する。微生物が必要元なったら、そこでフィル
ムに栄養ブイヨンを塗布するがこの中に入れ、恒温保持
し、薇生物を増殖させる。もう１つの使用可能性は、医
学、獣医学及び食品管理等の検査の分野における生物学
的物質中の抑制物質の検出のための胞子フィルムの使用
である。このために、抑制物質に対して特に敏感な微生
物の胞子例えばパシルス・スブチリス又はパシルス・ス
テアロテルモフィルムからの胞子をフィルム原料９炉導
入する。この原料から、透明な担体上にフィルムを塗布
し、乾燥させ、かつフィルムを取扱いに便利な大きさに
切断する。この胞子フィルムを栄養厚紙と共に被験溶液
例えば尿、ミルク、肉汁等中に漬け、恒温保持する。抑
制物質の不存在時には、この胞子は発門し、引続く生長
を指示薬で検出することができる。指示薬としては、コ
ロニーを着色する物質、例えばトリフェニルテトラゾリ
ウム化合物又は芽の生長によるＩ）Ｈ−変化を指示す・
るｐＨ−指示薬が使用される。

有利な工業的実施形は、試験片で慣用であると同様な構
造を選択することである。このために、担体上に栄養厚
紙及びその上にある透明担体上に形成される胞子フィル
ムを網を用いて、胞子フィルムのフィルム側が栄養厚紙
の担体と反対側の上に゛くるように固定する。

栄養厚紙としては、それぞれ微生物にとうて好適な栄養
物質で含浸された吸着性材料、有利に濾紙、ガラス繊維
又はプラスチックフリース又は乾燥状態で充分に安定な
ゲルを使用することができる。乾燥した寒天母層又は類
似物質は、それらが徐々に液体を再吸収するので使用で
きない。

次に本発明の方法を実゛施例につき詳述する。

例　　１ この例では、使用プラスチック水性分散液の広く平面状
にする可能性を示す： 担体マトリックス（この中に細胞が封入される）の製造
は次のように行なう： １容器中にプラスチック分散液６０ｇを準備する。この
分散液は例えば次の慣用の水中の５０〜６０％分散液を
使用することができる：酢酸ビニルよりなるホモポリマ
ー、アクリル酸エステルよりなるホモポリマー、酢酸ビ
ニルとプロピオン酸ビニルとからのコポリマー、プロピ
オン酸ビニル、アクリロニトリル及びアクリル酸エステ
ルからなるコポリマー、酢酸ビニルとマレイン酸エステ
ルとのコポリマー、シタジエンとスチロールとのコポリ
マー、塩化ゼニルとプロピオン酸ビニルとの゛コポリマ
ー等。

こｂら分散液を１／１５Ｍ燐酸塩゛緩衝液（ｐＨ６，５
）中のポリビニルピロリドンの４０％溶液３古と共に攪
拌し、ｐＨ値を検査し、場合によっては後調節する。次
いで、混合物を無菌の蒸留水２００ｍ１で稀釈し、例え
ば、Ｆシルス・スブ、チリスの胞子１０３〜１０７細胞
を、分散液−オープナー混合物ＩＩ当りに加え、攪拌す
る。こうして得たフィルム原料０．５　ｍｌを一辺の長
さ２１の立方体容器中にピペット導入し、乾燥させる。

こうして製造したフィルム上に、トリフェニルテトラゾ
リウムクロリド（Ｔ、ＴＣ）　０．０２％を含有する栄
養ブイヨン１　ｍｌを置き、閉じた容器中で恒温保持す
ると、容器の下側に生長したコロニーが、微生物の濃度
に応じて赤色点〜濃い均一な赤色領域として生じる。

この例は使用可能なオープナ−の可能性に関する： ２ａ）１容器中に、例えば酢酸ビニルとプロピオン酸ビ
ニルとの共重合体の分散液６２９を水２００　ｍｌと共
に入れる。これに、オープナ−の溶液３７ｐを加え充分
に攪拌する。ノーブナ−溶液は、１／１５Ｍ燐酸塩緩衝
液（Ｉ）Ｈ６，５）中に、表中に記載の濃度省オープナ
−を溶かして製造する。酸性反応をするオープナ−では
、苛性ソーダで溶液を調節する。

第３表は、緩衝液中のオープナ−の可能な濃度及びこれ
ら混合物から膜状で生じるプラスチック分散液からの固
体とオープナ−からの固体との混合割合を記載している
： 第３表 オープナ−緩衝液中の使用溶　分散液からの固体液中の
オープナ−とフィルム中のオ の濃度　　　　　　−ブナ−の固体と の混合比 デンプン　　　　　　　１　％　　　８ｏ：１デキスト
ラン　　　　４３　％　　　　２：１アルギン酸塩　　
　　　２３５％　　　３６：１メチルセルロース　　　
　　１，５％　　　　５７．：］メチレンヒドロキシ　
　　　　　２．５−％　　　　　３４：Ｉエチにセルロ
ース メチレンヒＰロキシ　　　　　　４０％　　　　　２１
：１ゾロビルセルロース ヒドロキシゾロビル　　　　　　４．０％　　　　　２
Ｉ：１−セルロース　　　　　　　　　０５％　　　　
１２０：１ヒドロキシエチルセルロース　　　４０％　
　　　　２１：１ポリビニルアルコール°　　　　　８
０％　　　　　１０：１ポリエチレングリコール樹脂１
５．０％　　　　　５５：１５０％　　　　　１７：１ ポリアクリル酸　　　　　　　　１．７％　　　　　５
０：１メチルビニルエタント無水マレ２３　　％　　　
　　３７：１イン酸とからのコホリマー ビニルピロリドンと酢酸　　　　Ｌ５％　　　　　　５
．５：１ビニルとからのコポリマー ２ｂ）例２ａを変更して、比較的に高濃度のオープナ−
溶液から出発してもよく、これは、常にオープナ−が比
較的低粘度の溶液を生じる際に可能である。

第４表にこの可能性を示す。

第４表 オープナ−水性分散液対オー　　分散液からの固体シナ
−溶液の重量　　対フィルム中のオ比　　　　　　　　
　−ブナ−の固体の混合比 ポリエチレングリコール　　５０９：４５０ｆｉ　　　
１：９〜９：１５０％溶液　　　　　　　〜４５ｏ１／
：５１ポリビニルピロリ゛戸ン　　１０ｇ：９０９　　
　１ニア〜１１：１４２つ９溶液　　　　　　　〜９０
．ｌｉｌ：１０．！ｉ’カルボキンメチルセル　　８１
１０１　　　　２：］ロース２％溶液 ２ｃ）例２ａを変更して、種々異なるオーノナ−物質の
混合物も使用できる。

酢酸ビニルとプロピオン酸ビニルとの共重合体の水性分
散液４６．１７．１／１５Ｍクエン酸塩緩衝液（ｐＨ６
，５）中のポリエチレングリコールの４％溶液４．２，
９，１１５Ｍクエン酸塩緩衝液（ｐＨ６，５）中のポリ
ビニルピロリドンの４０％溶液１６、ｏｙ、グリセリン
０．４．！ｉ’及び水２００ｍ１を攪拌して均一物質に
する。

前記のフィルム原料中に１、ノζシルス・スブチリスの
胞子をフィルム原料ＩＩ当り１０６個、の濃度で導入す
る。こうして製造した胞子フィルム原料から各０．５　
ｍｌを一辺の長さ２ｃｍの容器中にピペット導入し、乾
燥させる。このように製造したフィルム上にトリフェニ
ルテトラゾリウムクロリド０，０２％を含有する栄養ブ
イヨンｌ　ｍｌを施こし、閉じた容器を恒温保持すると
、生長したコロニーは赤色点として現われる。栄養溶液
に抑制物質例えば抗生物質を相応する濃度で含有する試
料を混入する際にこの生長は止まる。

例　　３ 牛乳中の抗生物質の検出法 酢酸ビニルとゾロピオン酸ビニルとのコポリマーの分散
液５０ｇ、水１７ｍ／中のポリビニルピロリドン１２．
ｉ９の溶液２０ｇ、グルコース１９及びパシルス・ステ
アロテルモフィルス・ノＳ−ル・カリドラクチス（Ｂａ
ｃｉｌｌｎｓ　５ｔｅａｒｏｔｈｅｒ　−ｍｏｐｈｉ　
Ｉｕｓ　ｖａｒ、、ｃａｌｉｄｏｌａｃｔｉｓ　’）の
胞子１０８個を均一に攪拌し、引続き水１５０　ｍｌで
稀釈し、苛性ソーダでｐＨ’Ｑ　７．０に調節する。こ
うして作ったフィルム材料から、それぞれ０．１　ｍｌ
を平底を有する直径１σの円筒容器中にピペット導入し
、乾燥させる。牛乳中の抗生物質の試験のために、指示
薬ブロムクレゾールブルーな含有する牛乳媒体で作った
栄！厚紙を試料中に浸漬させ、このフィルム上にのせ、
容器を密閉し、６０°Ｃで恒温保持する。抑制物質が不
在の際には、栄養厚紙はオリーブ緑色を示し、抑制物質
が存在する際には、恒温保持の後にも青色のまま残る。

この方法では、抗生物質が抑制物質としてのその作用に
関して検出できる。重要な抗生物質例えばペニシリン、
テトラサイクリン及びクロラムフェニコールはこの方法
で次の濃度以上で測定できる。ペニシリン０．００２μ
ｇ／　ｍｌ、テトラサイクリン０１μ９　／　ｍｌ　、
クロラムフェニコール４μｉ／ｒｔ。

例　　４ 液体中の抗生物質を検出する部材 酢酸ビニルとゾロピオン酸ビニルとからの分子１１２０
０１１、ポリビニルピロリドン３０Ｉの溶液９０ｇ、０
．２モルのクエーン酸塩緩衝液（ｐＨ６，５５ｘｏｏｍ
／中のポリエチレングリコール１０＆、グルコ−ス５１
１．ＩＩ）オキシエチレンソルビタンモノオレエート７
、２．９　、パシルス・スブチリスＡＴＣＣ６０５１の
胞子１０９個を攪拌して均一物質にする。

このフィルム原料を１０μの厚さで透明シート上に塗布
し、乾燥させ、引続き幅１ｃＷＬの帯状物に切断する。

この帯状フィルムを、抗生物質試薬媒体用栄養物質及び
トリフェニルテトラゾリウムクロリドで含浸した栄養厚
紙と一緒に、公知方法で栄養厚紙が担持シート上に存在
し、フィルム側を有する胞子フィルムが栄養厚紙上に存
在し、双方が、栄養厚紙と並んでこのシート」二に固定
されている網で固定されるように１ぼ幅の試験片に加工
する。

こうして製造した試験片で、後記の濃度以上の抗生物質
が、その抑制作用に関して検出できる。このために、試
験すべき水性溶液中にこの試験片を浸漬し、３′７℃゛
で恒温保持する。抑制物質の不存在時には、試験部位に
深赤色に着色し、抑制物質が存在する際には、後に記載
の濃度までに脱色が現われる。高い抑制濃度では、胞子
の生長を完全に抑制し、試験領域は呈色しない。

第５表 寒天稀釈試験法（ＡＶＴ）及び本発明の方法におけるパ
シルス・スブチリスＡＴＣＣ６０５１に関する抗生物質
の最小抑制濃度値 抗生物質　　　　ＡＶＴ　　　　　　試験片（μｇ／ｍ
ｌ）　　　　（μｇ／ｍｌ）ベニシリアＧ　　　　Ｏ，
００２０，００２カ−ナマイシン　　　　４４ テトラサイクリン　４１ ポリミキシン　　　３２　　　　　１６エリスロマイシ
ン　　　　０．１２５　　　　　　０．３２ゲンタマイ
シン　　　　　０．１２５　　　、　　　　０．２クロ
ラムフエニコール　　２２ コトリモキサゾール　　　８８ （Ｃｏｔ　ｒ　ｉｍｏｘａｚｏυ 例　　５ 液体中の抗生物質を検出する部材 酢酸ビニルとプロピオン酸ビ三ルとからの分散液４５０
．、ｌ水１５５ｍ１中のデキストラン８０ｇ、クエン酸
５．６ｇ、ＮａＯＨ３，８ｇ、１゜２−プロノξンジオ
ール４．５ｇの溶液２３０ｐ、グルコース１０Ｉ、ノ々
シルス・スゾチリスの胞子２ＸＩ０９個を有する懸濁液
２　ｍｌを均一に攪拌する。

このフィルム原料を透明なシート上に１２０μの厚さで
塗布し、乾燥させ、引続き幅１ｃｒｎの帯状物に切断す
る。

濾紙厚紙を２−（Ｎ−モルホリノ）−工、タンスルホン
酸の１／１５Ｍ緩衝液（１）Ｈ６，５）より成り、慣用
の組成の栄養物質及びトリフェニルテトラゾリウムクロ
リド０．０４％を溶解含有する栄養ブイヨンで含浸する
ことにより栄養厚紙を作る。

この栄養厚紙を同様に幅１ｃ１ｎの帯状物に切断する。

胞子フィルム及び栄養厚紙を公知方法で、栄養厚紙が担
持シート上に存在し、胞子膜が栄養厚紙のフィルム側に
存在し、双方が、栄養厚紙と隣接してシート上に固定さ
れている網で固定するように加工して幅１ｃＩＬの試験
片にする。

前記の緩衝液は常法で使用される緩衝液と比べて、尿の
高い滲透圧に帰因する胞子の生長に対する障害が著るし
く低下される利点を有する。

こうして作った試験片で、後に記載の濃度以上の抗生物
質をその抑制作用に関して検出することができる。この
ために、試験片を被検体液中に浸漬し、３７℃で恒温保
持する。抑制物質不含の際には試験領域は深赤色に着色
し、抑制物質が存在する際には、後に記載の濃度までで
、脱色する。より高い抑制物質濃度では、胞子の生長は
完全に抑止され、試験領域の呈色は現われない。

第６表 本発明方法及び文献公知の比較法〔薄片試験Ｂ、ＩＭｔ
ｔｃｈｅｎｔｅｓｔ　、　ＸｒｚｆＬ、Ｌａｂ、　　１
０巻、２０８〜２１０頁（１９７０年）〕により尿から
検出される抗生物質の最小抑制濃度

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ　栄養基質及び微生物含有基材よりなる、液体試料中
   の微生物抑制物質を検出する部材において、この微生物
   含有基材は、微生物な１０〜１０９個／ｇの量で、かつ
   水溶性又は水膨潤性の巨大分子量のオープナ−並びに場
   合によっては他の添加物を含有するプラスチック分散液
   から製造した乾燥フィルムであり、ことでプラスチック
   とオープナ−の量比は１００００ ：１〜１：斗％１．であることを特徴とする、液体試料
   中の微生物抑制物質を検出する部材。 ２　分散液フィルムが透視性担持材上に固定されている
   、特許請求の範囲第１項記載の部材。 ３゜担持材は、その底部又は壁にフィルムが固定されて
   いる、特許請求の範囲第２項記載の部材。 ４　栄養基質を無菌の乾燥ゲルもしくは凍結乾燥物とし
   て含有する、特許請求の範囲第３項記載の部材。 ５、栄養基質は、層状で、栄養物質で含浸され、担体上
   に固定され、かつ被覆している担体に固定されている分
   散液フィルムで被われている吸着性物質よりなる、特許
   請求の範囲第１項又は第２項記載の部材。 ６、　吸着性材料は濾紙又はフリースである、特許請求
   の範囲第５項記載の部材。