JPS5853918B2 - 微生物によるミコフエノ−ル酸の製造法 - Google Patents
微生物によるミコフエノ−ル酸の製造法Info
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- JPS5853918B2 JPS5853918B2 JP4592080A JP4592080A JPS5853918B2 JP S5853918 B2 JPS5853918 B2 JP S5853918B2 JP 4592080 A JP4592080 A JP 4592080A JP 4592080 A JP4592080 A JP 4592080A JP S5853918 B2 JPS5853918 B2 JP S5853918B2
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- Japan
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- mycophenolic acid
- penicillium
- strain
- clofibrate
- microorganisms
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法によるミコフェノール酸の製造法に関
する。
する。
ミコフェノール酸は、種々の有用な生物学的活性を有す
る化合物である。
る化合物である。
即ち、ミコフェノール酸は、抗ウィルス、抗腫瘍剤、抗
かび剤および抗菌剤であり、更に乾癖の治療にも有用で
あると報告されている。
かび剤および抗菌剤であり、更に乾癖の治療にも有用で
あると報告されている。
ミコフェノール酸は、ペニシリウム属に属する数多くの
菌株、例えばペニシリウム・プレビーコンバクタム（Ｐ
ｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉ−ｃｏｍｐａｃｔｕ
ｍ） 。
菌株、例えばペニシリウム・プレビーコンバクタム（Ｐ
ｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉ−ｃｏｍｐａｃｔｕ
ｍ） 。
ペニシリウム・ストロニフエルム（Ｐ、 ｓｔｏｌｏｎ
ｉ−ｆｅｒｕｍ） ｙペニシリウム・スカブルム（Ｐ、
ｓｃａ−ｂｒｕｍ）、ペニシリウム・ナゲミ（Ｐ、
ｎａｇｅｍｉ ） ｙペニシリウム・スツアフエ’）
（Ｐ、 ５ｚａｆｅｒｉ ） 。
ｉ−ｆｅｒｕｍ） ｙペニシリウム・スカブルム（Ｐ、
ｓｃａ−ｂｒｕｍ）、ペニシリウム・ナゲミ（Ｐ、
ｎａｇｅｍｉ ） ｙペニシリウム・スツアフエ’）
（Ｐ、 ５ｚａｆｅｒｉ ） 。
ペニシリウム・パトウスーメイ（Ｐ、 ｐａｔｕｓ−ｍ
ｅｉ）。
ｅｉ）。
ペニシリウム・グリスコブルネウム（Ｐ、 ｇｒｉｓｃ
ｏ−ｂｒｕｎｎｅｕｍ ） 、およびペニシリウム・ビ
リジカトウム（Ｐ、 ｖｉｒｉｄｉｃａｔｕｍ ）等に
よって生産されることが知られている。
ｏ−ｂｒｕｎｎｅｕｍ ） 、およびペニシリウム・ビ
リジカトウム（Ｐ、 ｖｉｒｉｄｉｃａｔｕｍ ）等に
よって生産されることが知られている。
又、生産菌株の改良によって、ミコフェノール酸生産性
の向上を計る方法として、ポリエン系抗生物質耐性変異
株を用いる方法（特開昭５３−１１５８８０）も知られ
ている。
の向上を計る方法として、ポリエン系抗生物質耐性変異
株を用いる方法（特開昭５３−１１５８８０）も知られ
ている。
本発明者等は、ペニシリウム属に属するミコフェノール
酸生産株の改良を進めているうちに、脂肪酸生合成系の
３−（ハイドロキシ）−３−メチル−グルタリル−Ｃｏ
Ａからメバロン酸に至る反応を触媒する酵素（３−（ハ
イドロキシ）−３−メチルーダルタリルーＣｏＡ−レダ
クターゼ）活性を阻害するクロフィブレートに対して耐
性を有する変異株が培地中に著量のミコフェノール酸を
蓄積することを見出し、本発明を完成するに至った。
酸生産株の改良を進めているうちに、脂肪酸生合成系の
３−（ハイドロキシ）−３−メチル−グルタリル−Ｃｏ
Ａからメバロン酸に至る反応を触媒する酵素（３−（ハ
イドロキシ）−３−メチルーダルタリルーＣｏＡ−レダ
クターゼ）活性を阻害するクロフィブレートに対して耐
性を有する変異株が培地中に著量のミコフェノール酸を
蓄積することを見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、ペニシリウム属に属するミコフェノー
ル酸生産菌のクロフィブレート耐性株を培地に培養し、
これを採取することを特徴とするミコフェノール酸の製
造法である。
ル酸生産菌のクロフィブレート耐性株を培地に培養し、
これを採取することを特徴とするミコフェノール酸の製
造法である。
本発明で用いられる菌は、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃ
ｉｌｌｉｕｍ ）に属するクロフィブレート耐性のミコ
フェノール酸生産菌であるが、親株としてはペニシリウ
ム属に属するミコフェノール酸生産菌であれば種や菌株
を問わず使用することができるが、好適な例としては、
ペニシリウム・プレビーコンパフトラム（Ｐ、 ｂｒｅ
ｖｉ−ｃｏｍｐｒｃｔｕｍ） ＱＭ８４０６ ＡＴＣ
Ｃ１６０２４又はペニシリウム・ストロニフエルム（Ｐ
、 ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒｕｍ ）ＡＴＣＣ１０１１１
等が挙げられる。
ｉｌｌｉｕｍ ）に属するクロフィブレート耐性のミコ
フェノール酸生産菌であるが、親株としてはペニシリウ
ム属に属するミコフェノール酸生産菌であれば種や菌株
を問わず使用することができるが、好適な例としては、
ペニシリウム・プレビーコンパフトラム（Ｐ、 ｂｒｅ
ｖｉ−ｃｏｍｐｒｃｔｕｍ） ＱＭ８４０６ ＡＴＣ
Ｃ１６０２４又はペニシリウム・ストロニフエルム（Ｐ
、 ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒｕｍ ）ＡＴＣＣ１０１１１
等が挙げられる。
本発明においていうクロフィブレート耐性株とは、上記
親株（ペニシリウム属に属するミコフェノール酸生産菌
）のクロフィブレートに対する生育限界濃度の１．２倍
以上の濃度に耐性を示す変異株、即ち、最小発育阻止濃
度が親株の１．２倍以上である変異株を意味する。
親株（ペニシリウム属に属するミコフェノール酸生産菌
）のクロフィブレートに対する生育限界濃度の１．２倍
以上の濃度に耐性を示す変異株、即ち、最小発育阻止濃
度が親株の１．２倍以上である変異株を意味する。
該クロフィブレート耐性変異株の分離に当っては、通常
の変異誘発法、例えば紫外線照射あるいはＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、メチルメタン
スルホネートの如き化学的薬剤により該ミコフェノール
酸生産菌に変異を誘起せしめ、最小発育阻止濃度よりも
高い濃度のクロフィブレート を５００〜２，０００μ？／ｍｌ含有する液体もしくは
寒天培地に増殖させて、生育の良好な菌株を取得する方
法による。
の変異誘発法、例えば紫外線照射あるいはＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、メチルメタン
スルホネートの如き化学的薬剤により該ミコフェノール
酸生産菌に変異を誘起せしめ、最小発育阻止濃度よりも
高い濃度のクロフィブレート を５００〜２，０００μ？／ｍｌ含有する液体もしくは
寒天培地に増殖させて、生育の良好な菌株を取得する方
法による。
本発明において、使用されるクロフィブレートに対して
耐性を有する変異株としては、ペニシリウム・プレビー
コンパフトラムＡＴＣＣ１６０２４の誘導株であるペニ
シリウム・プレビーコンパフトラム ＡＪ １１７０
９０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５４７４が挙げられる。
耐性を有する変異株としては、ペニシリウム・プレビー
コンパフトラムＡＴＣＣ１６０２４の誘導株であるペニ
シリウム・プレビーコンパフトラム ＡＪ １１７０
９０ ＦＥＲＭ−Ｐ ５４７４が挙げられる。
本発明を実施する際に用いられる発酵用培地としては、
通常のミコフェノール酸生産に用いられる公知の培地、
例えばＷ、 Ｌ、 Ｍｕｔｈ ｅｔ ａｌ、 Ａｎｔｉ
−ｍｉｃｒｏｂ 、 Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｔｈｅｒ
ａｐ、、 ８３２１′３２７（１９７５）記載の培地等
が使用される。
通常のミコフェノール酸生産に用いられる公知の培地、
例えばＷ、 Ｌ、 Ｍｕｔｈ ｅｔ ａｌ、 Ａｎｔｉ
−ｍｉｃｒｏｂ 、 Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｔｈｅｒ
ａｐ、、 ８３２１′３２７（１９７５）記載の培地等
が使用される。
培養条件は従来法と同様に好気的条件下に深部培養ある
いは静置培養を行えば良く、温度は、２００〜３０℃、
好ましくは２５°〜２７℃であり、■は２〜１０好まし
くは３〜８であり、培養時間は１００〜５００時間、好
ましくは７０〜４００時間である。
いは静置培養を行えば良く、温度は、２００〜３０℃、
好ましくは２５°〜２７℃であり、■は２〜１０好まし
くは３〜８であり、培養時間は１００〜５００時間、好
ましくは７０〜４００時間である。
かくして得られた培養液からミコフェノール酸を分別採
集するには、公知の方法が使用出来る。
集するには、公知の方法が使用出来る。
又、培養液中のミコフェノール酸の蓄積量は、高速液体
クロマトグラムにより簡単に分析定量される。
クロマトグラムにより簡単に分析定量される。
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、
これにより本発明が限定されるものではない。
これにより本発明が限定されるものではない。
実施例 １
ペニシリウム・プレビーコンパフトラム ＱＭ８４０６
をツアペック・ドックス（Ｃｚａｐｅｃ−Ｄｏｘ）氏寒
天培地を用い２７℃でルーピン培養し、１０日間培養し
て得られた胞子をかきとり、０．０５％ラウリル硫酸ナ
トリウム水溶液に懸濁させた。
をツアペック・ドックス（Ｃｚａｐｅｃ−Ｄｏｘ）氏寒
天培地を用い２７℃でルーピン培養し、１０日間培養し
て得られた胞子をかきとり、０．０５％ラウリル硫酸ナ
トリウム水溶液に懸濁させた。
メンブレンフィルター（Ｍｉ ＩＩ １ｐｏｒｅ Ｃｏ
ｒｐ、 、Ｂｅｄｆｏｒｄ 。
ｒｐ、 、Ｂｅｄｆｏｒｄ 。
Ｍａｓｓ、 ０１７３０ 、ポアーサイズ８．０μｍ）
で無菌的に濾過し、胞子を集めた。
で無菌的に濾過し、胞子を集めた。
この胞子集団（５〜１０×１０６胞子／ｍｌ）をＮ−メ
チル−Ｎ′−ニトロＮ−ニトロソグアニジン（最終濃度
１０００μ？／ｒｕｌ）で１０分間変異させた。
チル−Ｎ′−ニトロＮ−ニトロソグアニジン（最終濃度
１０００μ？／ｒｕｌ）で１０分間変異させた。
この変異処理によりおよそ９９％が死滅した。
薬剤処理した胞子を０．０５％ラウリル硫酸ナトリウム
水溶液で洗浄し、変異誘発剤を除去した。
水溶液で洗浄し、変異誘発剤を除去した。
洗浄した胞子は、クロフィブレートを１５００μｆ／ｍ
ｌ含有する下記（表）の組成の寒天平板培地に塗布した
。
ｌ含有する下記（表）の組成の寒天平板培地に塗布した
。
このプレートをコロニーが形成されるまで２６℃で培養
した。
した。
これらのコロニーは、同−組成からなる斜面に保持し、
５４株についてクロフィブレート耐性塵とミコフェノー
ル酸生産能をテストし、親株に比較して明らかに高いミ
コフェノール酸生産菌株ＡＪ １１７０９０ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ５４７４株を得た。
５４株についてクロフィブレート耐性塵とミコフェノー
ル酸生産能をテストし、親株に比較して明らかに高いミ
コフェノール酸生産菌株ＡＪ １１７０９０ ＦＥＲ
Ｍ−Ｐ５４７４株を得た。
次にこのＡＪ１１７０９０株を下表の組成の培地５０ｍ
１（５００ｒａｌ容の坂ロフラスコに注入し１２０℃１
０分間滅菌した）に−白金耳づつ接種し、２７℃で１４
４時間振盪培養した。
１（５００ｒａｌ容の坂ロフラスコに注入し１２０℃１
０分間滅菌した）に−白金耳づつ接種し、２７℃で１４
４時間振盪培養した。
得られた培養液の声を８．０に調整した後、遠心分離し
て菌体を除去し、上清液中のミコフェノール酸含量を高
速液体クロマトグラフィーにより測定し、同様の実験を
親株についても実施し、ミコフェノール酸の蓄積量を比
較した。
て菌体を除去し、上清液中のミコフェノール酸含量を高
速液体クロマトグラフィーにより測定し、同様の実験を
親株についても実施し、ミコフェノール酸の蓄積量を比
較した。
その結果、親株が１３０ｍ９７ｄｔ蓄積するのに対しク
ロフィブレート耐性株ＡＪ１１７０９０株では１７ ｏ
ｍｙ／ｄｉであり、同条件下で１４日間静置培養した時
のミコフェノール酸の蓄積量は親株が１７０ｍ９／ｄｔ
であるのに対しＡＪ１１７０９０株は２５０ｍ？／ｄｔ
であった。
ロフィブレート耐性株ＡＪ１１７０９０株では１７ ｏ
ｍｙ／ｄｉであり、同条件下で１４日間静置培養した時
のミコフェノール酸の蓄積量は親株が１７０ｍ９／ｄｔ
であるのに対しＡＪ１１７０９０株は２５０ｍ？／ｄｔ
であった。
Claims (1)
- １ ペニシリウム属に属するミコフェノール酸生産菌の
クロフィブレート耐性株を栄養培地で培養し、ミコフェ
ノール酸を培地中に蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とするミコフェノール酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4592080A JPS5853918B2 (ja) | 1980-04-08 | 1980-04-08 | 微生物によるミコフエノ−ル酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4592080A JPS5853918B2 (ja) | 1980-04-08 | 1980-04-08 | 微生物によるミコフエノ−ル酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56144094A JPS56144094A (en) | 1981-11-10 |
| JPS5853918B2 true JPS5853918B2 (ja) | 1983-12-01 |
Family
ID=12732678
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4592080A Expired JPS5853918B2 (ja) | 1980-04-08 | 1980-04-08 | 微生物によるミコフエノ−ル酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5853918B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2583310A1 (en) * | 2004-10-05 | 2006-04-13 | Biocon Limited | Process for producing mycophenolic acid using penicillium arenicola bicc7673 |
-
1980
- 1980-04-08 JP JP4592080A patent/JPS5853918B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS56144094A (en) | 1981-11-10 |
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