JPS5844347A - 液体クロマトグラフイ方法及び装置 - Google Patents

液体クロマトグラフイ方法及び装置

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JPS5844347A
JPS5844347A JP56142090A JP14209081A JPS5844347A JP S5844347 A JPS5844347 A JP S5844347A JP 56142090 A JP56142090 A JP 56142090A JP 14209081 A JP14209081 A JP 14209081A JP S5844347 A JPS5844347 A JP S5844347A
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mobile phase
liquid chromatography
solvents
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JP56142090A
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JPH0119538B2 (ja
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Daido Ishii
大道 石井
Toyohide Takeuchi
竹内 豊英
Koichi Mochizuki
孝一 望月
Muneo Saito
斎藤 宗雄
Akio Wada
明生 和田
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Jasco Corp
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Japan Spectroscopic Co Ltd
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • G01N30/26Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient

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  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
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  • Pathology (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は液体クロマトグラフィ方法及びその装置に係り
、特に系における移動相の流れを円滑と為すと共に、移
動相溶媒の混合性を向上せしめ、またグラジェント比を
自由に且つ容易に調節し得るマイクロ高速液体クロマト
グラフィ方法並びにそのための装置に関するものである
従来より、移動相を流通せしめて、所定の試料を分離カ
ラムにて分離した後、その分離さnた試料成分を適当な
検出手段にて順次検出せしめるようにした液体クロマト
グラフィ手法において、該移動相として相異なる複数の
溶媒を用い、そtらを所定比率で混合せしめて分離カラ
ムに導く場合には、一般に、各溶媒の流路上に設けらn
た各パルプの開閉制御によって混合比率を時間的に制御
し、所定の混合比率となるような割合で複数の溶媒を交
互に乃至は順次にカラム側に導くようにしている。また
、勾配(グラジェント)溶出に際しては、複数の溶媒の
流通を規制する各パルプの開閉時間を経時的に変化せし
め、該溶媒の混合割合が経時的に所定の変化を為すよう
にしている。
しかしながら、従来の液体クロマトグラフィ方式には、
上記のように複数の溶媒の混合をパルプ制御で行なうよ
うになっているために、パルプ切換えの時間的遅nが必
然的に存在することは勿論、またそnぞれの溶媒が断続
的に導かれるために、そnらの混合性が悪く、そn故均
−々移動相と為すためには適当な混合手段が必要とさn
ているのであシ、しかも混合によって体積変化を来たす
溶媒の組合せにあっては、各パルプを通過した溶媒の和
が必らずしも系に流通せしめらnる移動相流量とならず
、その流量性にも問題を内在しているのである。また、
かかる従来の液体クロマトグラフィ手法では、系全体の
流路に高い圧力をかけることが困難であって、そのため
に移動相として低沸点の溶媒を使用することが出来ず、
また系の温度を移動相の沸点以上に高めることも出来な
かったのである。
また、特に、マイクロ高速液体クロマトグラフィ方式に
あっては、装置の試料を取扱い、移動相の流量も少ない
故に、有効な溶媒の混合方式、更には有効な勾配溶出方
式は見い出さ扛ておらず、そのような複数の溶媒の無限
送液は望むべくもなかったのである。
ここにおいて、本発明は、かかる事情を背景にして為さ
扛たものであって、その要旨とするところは、液体クロ
マトグラフィ方式において移動相を構成する相異なる複
数の溶媒をそnぞn連続的に所定の分離カラムに導く一
方、該分離カラムにて分離された各試料成分を検出する
検出手段の下流側に設けたポンプ手段にて移動相流量を
制御せしめるようにしたことにある。
すなわち、かかる本発明に従えば、系の移動相流量が検
出手段よりも下流側に設けたポンプ手段にて制御される
ため、流量性がよくなり、混合によって容積変化する溶
媒の組合せであっても、常に所定の移動相流量を確保し
得るのであシ、また、該ポンプ手段に至るまでの流路全
体に移動相(溶媒)供給側から所定の圧力を加え得るの
で、系の圧力を高め得て、低沸点の溶媒の使用や、沸点
以上に系の温度を高めることが可能となり、より良好な
データを得ることが出来ることとなったのである。また
、各溶媒の供給が、パルプの開閉によることなく、連続
的に行なわれ、カラムに導か扛るので、バルブ切換えの
時間的遅nが全くないことは勿論、各溶媒が連続的な流
nにて混合せしめらnることとなるために、そnらの混
合性が良好となって、均一な移動相が容易に得らn、従
来の如く混合のための特別な機構、配慮も必要でなくな
ったのである。加えて、カラムに導か詐る一つの溶媒の
送液にポンプ手段を用い、該ポンプ手段による送液量を
変化せしめることにエリ、グラジェント比が自由に且つ
容易に変えられ得るのである。
特に、かかる本発明方式にInば、無限送液を行ないつ
つ複数の溶媒を任意の比率で混合せしめてマイクロ高速
液体クロマトグラフィ方式にて分析することが可能とな
ったのである。
以下、図面に示す実施例に基づいて、本発明を更に詳細
に説明することとする。
先ず、第1図において、1は、通常のマイクロ高速液体
クロマトグラフィで使用さnている吐出量可変の定流量
型ポンプ(例えば、特開昭51−!193号公報、特開
昭58−80890号公報などに開示さnているポンプ
シリンジタイプのもの)であって、内部に収容した溶媒
Aをポンプ作動によって所定割合で吐出するようになっ
ている。
また、2は、マイクロガスシリンジ8と荷重用の分銅4
からなる定圧型ポンプであって、該分銅4により系内に
所定の圧力をかけていると共に、マイクロガフシリンジ
8内に収容さnた溶媒Bをカラム側に送液し得るように
なっている。そして、これら二つのポンプ1.2から各
溶媒A、Bを導き、合流せしめ、更にカラム側に導くた
めに、送液流路5が設けらnている。また、各ポンプl
2の出口部分の流路上には、そtぞn、三方コツクロ、
6を介して溶媒Aの貯槽7、溶媒Bの貯槽8が設けられ
ており、各ポンプ内の溶媒が消費さnたときに、該三方
コツクロを介して各貯槽7゜8工りそnぞ几の溶媒A、
Bが各ポンプ1.2内に吸引され、補充さ扛る工うにな
っている。なお、9は、溶媒A、Bの合流点に設けらn
た1字管である。
また、前記送液流路5上には、分析さ扛るべき試料を系
内に導入するために試料導入機構としてのバルブインジ
ェクタ(特開昭55−144548号公報参照)10が
設けられ、更に該バルブインジェクタ10の下流側に、
該パルプインジェクタ10にて導入さnた試料を、前記
溶媒A及びBにて構成さnる移動相によって各成分に分
離せしめる公知の分離カラム11が配置さnている。
更にまた、公知のように、該分離カラム11に続いて、
該分離カラム11にて分離され、移動相と共に順次流出
せしめら扛る各試料成分を検出する、紫外分光光度計の
如き検出器12が配置されている。
そして、かかる検出器12の下流側には、前記ポンプ1
と同様な定流量型ポンプ13(但し、ポンプ1の吐出量
よりも大なる吸引量で吸引し得るものとなっている)が
設けられており、該ポンプ13によって該検出器12か
ら流出する流出液の・所定量を吸引せしめることにより
、前記ポンプ1及び2にて供給される溶媒A、Bを制御
された流量において分離カラム11.検出器12内に流
通せしめ得るのである。なお、14は、系内の圧力を検
知するための圧力計であり、また15は、三方コック1
6を介して、該ポンプ13内に吸引された流出液が排出
せしめられる廃液部である。
従って、かかる構成において、系内を流通せしめられる
移動相の流量は、定流量型ポンプ13の吸引量のみによ
って決定されることとなり、ポンプ1,2の吐出量の影
響を受けないので、流量性が著しく向上され、また混合
にて容積変化を惹起する溶媒の組合せであっても、ポン
プ13の吸り1量が一定であれば常に一定の流量が確保
され得るのである。そして、かかる移動相流量は、ポン
プ13の吸引量を変化せしめることにより自由に変化せ
しめ得るのである。
また、下流側のポンプ13にて移動相流量が制御されて
いるので、系内の圧力は、定圧型ポンプ2により、より
具体的には分銅4の重さにより、任意に変化せしめ得る
こととなり、以て系の圧力を効果的に高め得て、n−プ
ロパンの如き低沸点の溶媒の使用をも可能として良好な
ピーク(クロマトグラム)を描き得るようにし、また沸
点以上の高温度下の分析をも可能としたのである。因み
に、第2図には、本実施例の装置を用いて計測された、
分銅4の重さに対する発生圧力の関係が、シリンジ3の
容量に応じて示されているが、そこには分銅4の重さが
重くなるほど、またシリンジ8の容量が小さいほど、発
生する圧力が大きくなることが明らかとされているので
ある。従って、分銅4の重さやシリンジ3のサイズを変
えることにより、系内に所望の圧力をかけて移動相を流
し、分析する手法が有利に採用され得ることとなったの
である。
さらに、溶媒Aと溶媒Bの混合比は、ポンプ3の流量(
吸引量)が一定の際に、ポンプlの流量(吐出量)によ
って変えることが出来、また組成比は、A、Hの溶媒の
種類によっても変えることが可能である。従って、ポン
プ3の流量を一定ニ保ったまま、ポンプ1の流量を段階
的に変えることにより1、定流量階段状勾配溶出が可能
となったのであり、更にはポンプ1の流量を連続的に変
化せしめることにより、直線状勾配溶出を初め、種々の
勾配溶出も可能となったのであり、それ故このようにバ
ルブを用いることなく、連続的に同時に各溶媒を流しつ
つ、混合比を変え得るところから、バルブ切換えの時間
的遅れもなく、それら溶媒の混合性を著しく向上せしめ
得たのであって、また溶媒混合のための特別の手段や機
構も必要でなくなったのである。
また、かかる例示の装置を用いて得られたクロマトグラ
ムが第8図及び第4図にそれぞれ示されている。第3図
は芳香族炭化水素試料の分離、第4、図はフタレート試
料の階段状勾配溶出の結果である。なお、ポンプlがら
アセトニトリルが流され、またポンプ2は500μlの
容量で、3kgの分銅を用いて、内部に収容した水を圧
送するようにされた。それぞれの分析条件は以下の通り
である。
a)第3図分析条件 カラム: 10.1anX0.85mm1. D、、充
填剤:”5O−01(シリカ系) 移動相:CH3CN/■20=64/86試料:1=ベ
ンゼン、2=ナフタレン。
3=ビフエニル、4=フルオレン。
5=7エナントレン、6=アント ラセン、7=フルオランテン。
8=ピレン 試料量:0.02μl 検出器:紫外分光検出器(UVIDEO−100;日本
分光工業株式会社)、2540m。
Q、Q4AUFS ポンプ1流量: 1.5 p l/ min、ポンプ3
流量: 4.2 p l/ m1nb)第4図分析条件 カラム: 10.8cmX O,85an1. D。
充填剤ニジリカー〇 D 8 8 C(11(51”’
 )移動相: CH3CN/H20= 64/B 6 
(A )−76/24(B)→88/12(0) 試 料:1=ジメチルフタレート 2=ジエチル7タレート 3=ジイソプロピルフタレート 4=ジーn−ブチルフタレート 5=ジヘプチルフタレート 6=ジエチルへキシルフタレート 7=ジノニル7タレート 試料量:0.02μl 検出器:UVIDEC−100,285nmポンプ3流
量:8.3μl 第8図及び第4図のクロマトグラムから明らかなように
、本発明に従って各試料の良好な分離、分析が可能であ
ることが理解されよう。
このように、本発明に゛よれば、無限送液手法にて、マ
イクロ高速液体クロマトグラフィ、一般に略1mφ以下
、特に0.5 anφ程度以下の内径のカラムを用いて
、数十μl以下、特に略10μl以下の移動相流速下に
行なわれるマイクロ高速液体クロマトグラフィによる連
続的な勾配溶出を効果的に実施し得るのである。
なお、本発明は、上側の構成のみに限定されるものでは
決してなく、例えば3種以上の溶媒の混合にも応用する
ことが可能である。また、ポンプlの吐出量は、ポンプ
2側への逆流を阻止するためにも、ポンプ3の吸引量よ
りも小さくなるように設定されるべきである。更に、本
発明は、特にマイクロ高速液体クロマトグラフィに好適
に適用されるものであるが、その他の液体クロマトグラ
フィにも適用可能である。
また、その他、本発明の趣旨を逸脱しない限りにおいて
、本発明には、当業者の知識に基づいて種々なる変形、
修正などを加えることが可能である。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明の一実施例を示す系統図であり、第2図
は分銅の重さと発生圧力の関係を示すグラフであり、第
3図及び第4図はそれぞれ本発明に従って得られたクロ
マトグラムの一例を示す図である。 1:定流量型ポンプ  2:定圧型ポンプ3:マイクロ
ガスシリンジ 4:分銅       5:送液流路 10:バルブインジェクタ 11:分離カラム   12:検出器 13:定流量型ポンプ 出願人  日本分光工業株式会社 第2図 分鋼の重で (kg) 5 時間(min)

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 (1)移動相を流通せしめて、所定の試料を分離カラム
    にて分離した後、その分離さnた試料成分を検出手段に
    て順次検出せしめるようにした液体クロマトグラフィ方
    法において、 該移動相を構成する相異なる複数の溶媒をそれぞれ連続
    的に該分離カラムに導く一方、前記検出手段の下流側に
    設けたポンプ手段にて移動相流量を制御せしめるように
    したことを特徴とする液体クロマトグラフィ方法。 (2)  移動相を構成する相異なる溶媒を供給するた
    めの複数の溶媒供給手段と。 該溶媒供給手段にて供給される複数の溶媒を連続的に導
    いて合流せしめ、更にカラム側へと導く送液流路と、 分析されるべき試料を導入するための試料導入機構と。 該試料導入機構にて導入さnた試料を、前記複数の溶媒
    にて構成さnる移動相によって、各成分に分離せしめる
    分離カラムと。 該分離カラムにて分離さnた各試料成分を検出する検出
    手段と。 該検出手段の下流側に設けられ、該検出手段から流出す
    る流出液を所定の割合で吸引することによシ、移動相流
    量を制御するようにした定流量型ポンプとを、 含むことを特徴とする液体クロマトグラフィ装置。 (8)前記複数の溶媒供給手段が、定流量型ポンプと定
    圧型ポンプとの組合せからなる特許請求の範囲第2項記
    載の装置。 (4)前記溶媒供給手段を構成する定流量型ポンプの吐
    出数が、前記検出手段の下流側に設けられる定流量型ポ
    ンプの吸引量よりも小である特許請求の範囲第8項記載
    の装置。 (6)前記液体クロマトグラフィ装置が、マイクロ高速
    液体クロマトグラフィ装置である特許請求の範囲第2項
    乃至第4項のいず庇かに記載の装置。
JP56142090A 1981-09-09 1981-09-09 液体クロマトグラフイ方法及び装置 Granted JPS5844347A (ja)

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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS61149064A (ja) * 1984-12-22 1986-07-07 Meiji Milk Prod Co Ltd クリ−ム状水中油型乳化油脂組成物の製造法
US4715216A (en) * 1984-11-19 1987-12-29 Kernforschungsanlage Julich Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung Process and apparatus for the chromatographic determination of components in specimens
JPS6455155A (en) * 1987-06-01 1989-03-02 Unilever Nv Artificial cream and method of manufacturing the same

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