JPS5836391A - 新生理活性物質アンジオスタチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明４アンジオテンシン変換酵素阻害作用、血圧降下
作用を有する新生理活性物質アンジオスタチン、その製
法およびそれを有効成分とする血圧降下剤に関する。

従来、血圧調節機構の一つの系列として、レニン−アン
ジオテンシン−アルドステロン系カ知られている。即ち
、血中蛋白であるアンジオテンシノーダンに酵素レニン
が作用してデカペグチドのアンジオテンシンＩ　（ＡＩ
）　が生ずる。

このＡＩにアンジオテンシン変換酵素が作用してオクタ
ペプチドのアンジオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）が生ずる一
Ａｌｌは強力な・血管収縮作用を有する物質であシ、腎
血管性高血圧症の主な原因となる物質である。

従って、アンジオテンシン変換酵素を抑制する物質線、
結果としてＡｌからＡｌｌへの変換を抑制するため、そ
の血液充進作用も抑制されると考えることができる。こ
の考えに基づいてクツシュマン（Ｃｕａｈｍａｎ　）ら
は種々の化合物を合成し、５Ｑ１４２２５が１−マ１ｔ
ｒｏにおいてアンジオテンシン変換酵素阻害作用の優れ
ていることを報告している〔バイオケミストリー（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　１６巻、５４８４頁、１９７
７年〕。

本発明者らは、アンジオテンシン変換酵素の抑制物質に
ついて鋭意研究の結果、血圧降下作用を有する新生理活
性物質アンジオスタチンを見出し本発明を完成した。

本発明の新生理活性物質アンジオスタチンは１デイヘテ
ロスポラ（Ｄｉｈ＠１ｅｒｏｓｐｏｒａ）属１１バーチ
シリウム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｌｕｍ）属またはネクト
リア（Ｎｅｃｔｒｌｍ）属に属する生理活性物質アンジ
オスタチン生産菌を培養し、培養液中に生理活性物質ア
ンジオスタチンを生成蓄積せしめ、これを採取すること
によって得られる。

本発明に使用されるディヘテロスポラ属、バーチシリウ
ム属またはネクトリア属に属するアンジオスタチン生産
菌のうち、特に有効と認められる菌株は例えば ディヘテロスポラ・カテヌラータ（Ｄｉｈｅｔｅｒｏ−
ａｐｏｒａ　ｅａｔｒｎｕｌａｔａ）　８ｋＮＫ　１０
４８１　。

ディヘテロスポラ・クラミドスポリア（Ｄｌｈａ−ｔｅ
ｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｉｄｏｓｐｏｒｉｍ）　５
ＡＮＫ　１２１８１　＋同５ＡＮＫ　１２２８１　。

同５ＡＮＫ　１２３８１　。

バーチシリウム・ニペオストラトサム（Ｖｅｒｔ−１ｅ
ｉｌｌｉｕｍ　ｎｉｖｅｏｓｔｒａｔｏｓｕｍ）　５Ａ
ＮＫ　１３３５８　ｒネクトリア・インペンタ（Ｎｅｃ
ｔｒｉａ　１ｎｖｅｎｔａ）ＳＡＮＫ　１６４７７であ
る。

これらの菌学的性質は、次の通夛である。

ｃａｔｅｎｕｌａｔａ）　５ＡＮＫ　１０４８１千葉県
市原市の山林の土壌から分離した真菌であり、その菌学
的性状は次に記載する通シである。

１）肉眼的観察 Ｉテトデキストロース寒天培地上での生育は比較的おそ
く、２６℃、ｌＯ日日間菌そうの直径は４０〜４５．に
達する。その集落表面は密な羊毛状菌糸体からなシ、は
じめ白色であるが、のちにやや黄色味を帯びてくる。菌
そうの裏面は無色ないし淡黄色である。可溶性色素は章
生ぜず、また、特別の匂いもない、３７℃では生育しな
い。

２）顕微鏡的観察 菌糸は無色で隔壁を有し、直径は１．５〜２μｍで、表
面線平滑である０分生子鉱アレウロ型とフイアロ型の２
種類を形成する。

１）アレウロ型分生子形成構造 分生子柄は１０〜２ｏｘ２〜３μｍであシ、隔壁を有し
、表面は平滑である０分生子の着生部に向ってふくらみ
幅は２．５〜４．５μｍである。分生子はその頂端に着
生する。分生子は大型で、無色ないし淡黄色のアレウロ
型であシ、縦横に隔壁を形成する。隔壁部分はややくび
れ、亜球形、楕円形、卵形などの不規則な形となる。分
生子の大きさは１５〜３５×８〜２５μｍである。

１１）フイアロ型分生子形成構造 分生子柄は無色で細長く、隔壁を有し、表面は平滑であ
る。その大きさは、８〜１２Ｘ１．５〜２．０μｍであ
る。単生または輪生状にフイアライドを形成する。フイ
アライドは細長く、基部はふくらみ先端は細くなシ、そ
の先端に分生子を形成する。分生子はフイアロ型で連鎖
し球形ないし亜球形で、表面はやや粗である。その大き
さは２〜３．５Ｘ１．５〜２．５μｍである。

上記の如き観察の結果を公知の真菌の中から検索すると
ディヘテロスポラ・カテヌラータ（Ｄｉｈｅｔｅｒｏｓ
ｐｏｒａ　ｃａｔｅｎｕｌａｔａ）の菌学的諸性状によ
く合致することがら本菌をディヘテロスポラ・カテヌラ
ータと同定した。

ディヘテロスポラ・カテヌラータの菌学的諸性状は次の
文献に詳しく記載されている。

Ｇ−Ｌ、Ｂａｒｒｏｎ　ａｎｄ　Ｈ−８＠０ｏｌｏｎｓ
著：　Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｂｏｔ
ａｎｙｓ第４４巻、８６１〜８６９頁、１９６６年発行
宇田川ら著；菌類図鑑（下）、９３６頁、講談社。

１９７８年発行 なお、デイヘテロスＩう・カテヌラータは研究者によっ
てはノぐ−チシリウム・カテヌラータム（ＶｅｒＬｉｅ
ｌｌｌｌｕｍ　ｃａｔ＠ｎｕｌａｔｕｍ　）とする意見
もあ、り　、ｔ　ｆｔ−’シロミセス・シンブレックス
（Ｐａｅｃ−ｉｌｏｍｙｃｅｓ　ｍｉｍｐｌｅｘ）、ま
たはスピカリア・シンブレックス（５ｐｌｅａｒｉａ　
ｓｊｍｐｌｓｘ　）と発表されたこともあるが（Ｗ、Ｇ
ａｎ＋ａ著：　Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｌｕｍ−ａｒｔ
ｉｇｅＳｅｈｌｎｕｎｅｌｐｉｌｚｅ　（Ｈｙｐｈｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ）　、　Ｇ、Ｆｉａｅｈｅｒ、　Ｓｔｕｔ
−ｔｇａｒｔ、　１９７１年発行：　Ｒ，Ａ、８ａｍｓ
ｏｎ著；　５ｔｕｄｌ＠ｓｉｎ　Ｍｙｅｏｌｏｇｙ−第
６巻、１０６頁、１９７４年発行参照）。

本発明者らはディヘテロスポラ・カテヌラータとして同
定した。

本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されており、その受託番号は微工研菌寄第６０８０号で
ある。

ｒｏｓｐｏｒａ　ｅｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉａ　）　
５ＡＮＫ　１２１８１岡山県苫田郡奥津町奥津温泉の土
壌から分離された真菌であシ、その菌学的性状は次に記
載する通シである。

１）肉眼的観察 ポテトデキストロース寒天培地上での菌そうの生育は２
６℃、１０日間で直径４５〜５０關に達する。その集落
表面は密な羊毛状菌糸体からカシ、はじめは白色である
が、のちにやや黄色味を帯びてくる。菌そうの裏面は無
色ないし淡黄色である。可溶性色素は産生せず、また、
特別の匂いもない。３７℃では生育しない。

２）顕微鏡的観察 菌糸は無色で隔壁を有し、直径は１．５〜２μｍで、表
面は平滑である。分生子はアレウロ型とフイアロ型の２
種類を形成する。

Ｉ）アレウロ型分生子形成構造 分生子柄は１０〜２０×２〜３μｍであシ、隔壁を形成
し、表面は平滑である。分生子の着生部に向ってふくら
み、幅は２〜４μｍである。分生子はその頂端に着生す
る０分生子は大型で無色ないし淡黄色のアレウロ型であ
り、縦横に隔壁を形成する。隔壁部分はややくびれ、亜
球形、楕円形などの不規則な形となる０分生子の大きさ
は１５〜３０Ｘ１０〜２０μｍである。

＋０　　フィアロ型分生子形成構造 分生子柄扛無色で細長く、隔壁を有し、表面は平滑であ
る。その大きさ社８〜１５Ｘ１．５〜２．５μｍである
。半生または輪生状にフィアライドを形成する。フィア
ライドは細長く、基部はふくらみ先端は細くなシ、その
先端に分生子を形成する。分生子はフイアロ型で亜球形
ないし楕円形である。基部はやや裁断状、表面はやや粗
である。その大きさは２〜５Ｘ１．５〜２μｍである。

連鎖することなく分生子頭を形成する。

以上の観察結果を基に公知の真菌の中で該当するものを
検索すると、デイヘテロスＩう・クラミドスポリア（Ｄ
ｉｈｅｔｓｒｏｇ＋ｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏ
ｒｉａ　）の菌学的諸性状によく合致することがら本面
を。

ティへテロスポラ・クラミドスポリアと同定した。

ディヘテロスポラ・クラミドスポリアの菌学的諸性状は
次の文献に詳しく記載されている。

Ｇ＊Ｌ、Ｂａｒｒｏｎ　ａｎｄ　Ｈ，Ｓ、０ｎｉｏｎｓ
著；　−Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕ−ｒｎａｌ　ｏｆ　
Ｂｏｔａｎｙ、第４４巻、８６１〜８６９頁、１９６６
年発行。

Ｗ＠Ｇａｍ５著：　Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ−ａ
ｒｔｉｇｅ　Ｓｃｈｉｍｍｅｌｐ’１−１ｚ＊（ＩＩｙ
ｐｈｏｍｙｅｅｔｅｇ）　＋　１９０貫、　Ｇ、Ｆｉｓ
ｃｈｅｒ＋　Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ＋１９７１年発行。

なお、ディヘテロスポラ・クラミドスポリアは研究者に
よってはバーチシリウム・クラ〜ミドスポリウム（Ｖｅ
ｒｔｉｅｉｌｌｉｕｍ　ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｉｕ
ｍ）　とする意見もあり、また、ステンフイリオゾシス
・オゴラム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｏｐｓｉｓ　ｏｖｏｒ
ｕｒｎ）として発表されたこともある。しかし、本発明
者らはデイヘテロスＩう・クラミドスポリアとして同定
し−た。

本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されており、その受託番号は微工研菌寄第６０８１号、
である。

米国ハワイ州オワフ島の土壌から分離された真菌であシ
、その菌学的性状は次に記載する通シである。

１）肉眼的観察 ポテトデキストロース寒天培地上での菌そうの生育は２
６℃、１０日間で直径５０〜６０ｍに達する。その集落
表面は密な羊毛状菌糸体からな９、はじめは白色である
が、のちにやや黄色味な帯びてくる。菌そうの裏面は無
色ないし淡黄色である。可溶性色素は産生ぜず、また、
特別の匂いもない。３７℃では生育しない。

２）顕微鏡的観察 菌糸は無色で隔壁を有し、直径は１．５〜２μｍで、表
面は平滑である。分生子はアレウロ型とフイア・口型の
２種類を形成する。

１）アレウロ型分生子形成構造 分生子柄は８〜１５×２〜３μｍであり、隔壁を形成し
、表面は平滑である。分生子の着生部に向ってふくらみ
、幅鉱２〜４μｍである。分生子はその頂端に着生する
。分生子は大型で無色ないし淡黄色のアレウロ型であシ
、縦横に隔壁を形成する。隔壁部公社ややくびれ、亜球
形、楕円形などの不規則な形となる。分生子の大きさは
１０〜３０Ｘ１０〜２０μｍである。

１１）フイアロ型分生子形成構造 分生子柄は無色で細長く、隔壁を有し、表面は平滑であ
る・その大きさは８〜１５Ｘ１．５〜２．５μｍである
拳早生または輪生状にフィアライドを形成する。フィア
ライドは細長く、基部はふくらみ先端社細くなシ、その
先端に分生子を形成する０分生子はフイアロ型で亜球形
ないし楕円形である。基部はやや裁断状、表面はやや粗
である。その大きさは２〜ｓｘｉ、ｓ〜２μｍである。

連鎖することなく分生子頭を形成する。

以上の観察結果を基に公知の真菌の中で該当するものを
検索すると、ディヘテロスポラ・クラミドスポリア（Ｄ
ｉｈ＠ｔ＠ｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒ
ｉａ）ディへテロスポラ・クラミドスＩリアと同定した
。

ディヘテロスＩう・クラミドスＩリアの菌学的諸性状は
次の文献忙詳しく記載されている。

Ｇ−Ｌ、Ｂａｒｒｏｎ　　ａｎｄ　Ｉ’１．８．Ｑａｉ
ｏｎｓ　　著　；　　Ｃａｎａｄｉａｎ　　Ｊｏｕ−ｒ
ｔｎｌ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙｓ第４４巻、８６１〜８６
９頁、１９６６年発行。

Ｗ、Ｇａｍ５著：　Ｃ＠ｐｂａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ−ａ
ｒｔｌｇｅ　８ｃｈｉｍｍｅｌｐｉｌｚｅ（１１ｙｐｈ
ｏｍｙｅ＊ｔｅｓ）　＃　１９０頁ａ　Ｇ、Ｆｆｓｃｈ
ｅｒｅ　ｓｔｕｔｔｇａｒｔ＃１９７１年発行。

本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所忙寄託
されておシ、その受託番号は微工研菌寄第６０８２号で
ある。

静岡県賀茂郡南伊豆町青野の土壌から分離された真菌で
あ多、その菌学的性状は次に記載する通夛である。

ｌ）肉眼的観察 ポテトデキストロース寒天培地上での菌そうの生育は２
６℃、１０日間で直径４５〜５０１１１１に達する。そ
の集落表面紘密な羊毛状菌糸体からなシ、はじめは白色
であるが、のちにやや黄色味を帯びてくる。菌そうの裏
面は無色ないし淡黄色である。可溶性色素は産生ぜず、
また、特別の匂いもない。３７℃では生育しない。

２）顕微鏡的観察 菌糸は無色で隔壁を有し、直径は１．５〜２μｍで、表
面は平滑である。分生子はアレウロ型とフイアロ型の２
種類を形成する。

１）アレウロ型分生子形成構造 分生子柄は１０〜２０×２〜３μｍであシ、隔壁を形成
し、表面は平滑である０分生子の着生部に向ってふくら
み、幅は２〜４μｍである。分生子はその頂端に着生す
る。分生子は大型で無色ないし淡黄色のアレウロ型であ
り、縦横に隔壁を形成する。隔壁部分はややくびれ、亜
球形、楕円形などの不規則な形となる。分生子の大きさ
は１５〜２５×８〜２０μｍである。

１１）フィアロ型分生子形成構造 分生子柄は無色で細長く、隔壁を有し、表面は平滑であ
る。その大きさは８〜１５Ｘ１．５〜２．５μｍである
。単化または輪生状にフィアライドを形成する。フ、イ
アライドは細長く、基部はふくらみ先端は細くなシ、そ
の先端に分生子を形成する。分生子はフィアロ型で亜球
形ないし楕円形である。基部はやや裁断状、表面はやや
粗である。その大きさは２〜４Ｘ１．５〜２μｍである
。連鎖することなく分生子頭を形成する。

以上の観察結果を基に公知の真菌の中で該当するものを
検索す−ると、ディヘテロスポラ・クラミドス４リア（
Ｄｉｈｅｔ＠ｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏ
ｒｉａ）の菌学的諸性状によく合致することがら本面を
ディヘテロスポラ・クラミドスポリアと同定した。

ディヘテロスポラ・クラミドスポリアの菌学的諸性状は
次の文献に詳しく記載されている。

Ｇ、Ｌ、Ｂｍｒｒｏｎ　ａｎｄ　Ｈ，８，Ｑａｉｏｎｓ
著：　Ｃ１ａａｄ１ａｎ　Ｊｏｕｒ−ｎａｌ　ｏｆ　Ｂ
ｏｔａｎｙｓ第４４巻、８６１〜８６９頁、１９６６年
発行。

Ｗ、Ｇａｍ５著：　Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｌｕｒｏ−
ａｒｔｉｇａ　Ｓｃｈｉｍｍｅｌｐｉｌｚａ（Ｈｙｐｈ
ｏｍｙｃ＠ｔｅａ）、　１９０頁＋　Ｇ、Ｆｉ＠ｅｈｅ
ｒ＊　８ｔｕｔｔｇａｒｔ。

１９７’１年発行。

本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
されており、その受託番号は微工研菌寄第６０８３号で
おる。

公知の菌株であり、ＣＭ）発酵研究所にＩＦ０６６２５
として保存されている。その菌学的諸性質については、
次の文献に記載されている。

Ｋ０丁ｕｂａｋｉ著；　Ｎａｇａｏａ＋　５巻、３３頁
、１９５５年。

本菌株はＩＦＯよシ容易に入手し得る。

ネクトリアｅインペンタ（Ｎｅｃｔｒｌａ　１ｎｖｅｎ
ｔａ　）公知の菌株であり、（ｊＩｔ）発酵研究所にｒ
Ｆ０９３９１として保存されている。その菌学的諸性質
については、次の文献に記載されている。

Ｔ、Ｐｅｔｃｈ著；　丁ｒａｎｓａｃｔｉｏｎｇ　　ｏ
ｆ　　Ｂｒ１ｔｉｓｈ　Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａ１８ｏｃ
ｉｅｔ７＋　２１巻、２５７頁、１９３８年。

本菌株はＩＦＯよシ容易に入手し得る。

なお、ネクトリア・インペンタの不完全世代は、上記の
文献によればアクロスタラグ、ムス・シンナパリナス（
Ａｅｒｏｓｔａｌａｇｍｕｓ　ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕ
ｓ）と記載されているが、アクロスタラグムス・シンナ
パリナスは現在ではバーチシリウム・テネラム（Ｖｅｒ
ｔｉｃｌｌｌ、ｉｔｘｍ　ｔ＊ｎ＠ｒｕｍ）といわれて
いる（Ｊ、Ａ。

ｗｏｎ　Ａｒｘ著ａ、　Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａ　ｏｆ　
ｆｕｎｇｉ　ｓｐｏｒｕｌａｔｉｎｇ　１ｎｐｕｒｅ　
ｃｕｌｔｕｒｅ＋　２０１頁、１９７４年発行ｅ　Ｊ、
Ｃｒａｒｎｅｒ参照）。

以上、アンジオスタチンの生産菌について説明したが、
真菌の諸性質は一定したものではなく、自然的、人工的
に容易に変化することは周知の過多であシ、本発明で使
用しうる菌株はデイヘテロス４う属、バーチシリウム属
またはネクトリア属に属す石、アンジオスタチンを生産
する菌株すべてを包含するものである。

本発明の方法における培養は、一般真菌における培養方
法に準じて行なわれる０例えば培地昧液状でも固体状で
もよいが、通常は液体培地による振盪培養または通気攪
拌培養力；好ましい。

培地成分は、カビの生育に適し、アンジオスタチンを生
産しうるちのであれば特に限定はなく、真菌の栄養源と
して公知のものが使用される。

例えば炭素源としてグルコース、ラクトース。

マンニトール、グリセリン＋　Ｂ、粉、　シュー　りＯ
−ス、デキス）　９ン、糖鵞、有機酸類（例えば、酢酸
、酒石酸）など、窒素源としてペプトン。

カサミノ酸、Ｎ−ＺアミンＡなどの蛋白カロ水分解物、
酵母エキス、麦芽エキス、大豆粉、コーン・ステープリ
カー、アミノ識類（例えば、アスΔラギン酸、グルタミ
ン酸）、各種アンモニウム塩（例えば、硫酸アンモニウ
ム、塩イヒアンモニウム）、各種硝酸塩（例えば、硝酸
す）　ＩＪウム、硝酸アンモニウム）、その他の有機６
るいは無機窒素化合物（例えば、尿素、亜硝酸ナトリウ
ム）が用いられる。無機塩として各種１ノン酸塩（例え
ば、第一リン酸ナト１ノウ゛ム、第二り／酸カリウム）
、硫酸マグネシウム、塩イヒナトリウム、＊１ｍ第一鉄
などの金属塩、重金属（例えば、硫酸マンガン、硫酸亜
鉛）などを添加してもよく、ま−ｆｃＩの生育を促進す
る目的でビタミン類（例えば、ビタミンＢ１　、　／臂
ントテン酸カルシウム）１、核酸関連化合物（例えば、
アデニ／、ウラシル）などを添加してもよい。

また培養方法および培養条件によっては、シリコン油、
植物油、界面活性剤などの消泡剤を培地に添加すること
Ｋよシアンジオスタチンの生産を増大鳴せるのに効果的
な場合がある。培養温度、培養期間、培地の液性などの
培養条件は使用する微生物の種類、培地組成などによっ
て変−動するが、最終的にはアンジオスタチンの生産量
が最大となるように適当に選択調節されればよく、多く
の場合好気的条件下に約２０〜３３℃でおよそ１〜１０
日間培養し、この間培地の液性を一約４〜９付近に保つ
のが好ましい。

本物質の性状に基づいて、種々の方法を適当に組み合わ
せることによって容易に行いうる。例えば、培養液をフ
ィルターブレスを用いて濾過し、得られたＦ液をイオン
交換樹脂に吸着させ、アルカリ溶液で溶出させる。次い
で得られた溶出液を濃縮し、これを適宜組み合わせたイ
オン交換樹脂（付することＫよシ、アンジオスタチンは
培養物から結晶あるいは結晶性粉末として単離される。

このようにして得られたアンジオスタチンの諸性質社以
下のようである。

Ａ）理化学的性質 １）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：２１５〜２２０℃（分解） ３）比施光度：〔α発’＝＋７．８３°（Ｃ＝０．２３
．水〕４）元素分析値： 実測値；　Ｃ，４０，２６＊　Ｈ，５，３７ｑｂＮ、１
０．２４チハロｒン原子、硫黄原子、燐原子は含まれて
いない。

５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０　ｖ、ａ以下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒｃＩＬ−１ａｘ １４００　、１６４０　、１７３０　、３０３０　、３
４５０７）分子量＝２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでＶ
・＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、工゛タ
ノール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセト
ン、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベ
ンゼン、エチルエーテル、クロロホルム、ｌ−ヘキサン
に難溶。

９）呈色反応： 田−ド反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・パー
プル（ＰＨ指示薬）反応に陽性、ナフトレゾルシ／−硫
酸反応＃Ｒ１ｉ；性。

１０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
トリメチルシランを用いて測定； （１）Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）１７９．５７
（−重線）、１７７．９９（−重線）１７６．３７（−
重線）、１７５．７５（−重線）６１．８８（二重線）
、　　５０．７１（三′ｉｉ線）４８．０６（三重線）
、　　３９．４３（三重線）（ｌｉ）　　Ｈ’核磁気共
鳴スペクトル（ｐｐｎ＋）２．９５（複二重線、　Ｊ＝
１６．０　、８．２　）３．２０（複二重線、　Ｊ＝１
６．０　、４．０）３．６０（二重線、Ｊ＝６．０．） ３．９１（−重線） ４．０２（三重線、Ｊ＝５．０） ４．０９（複二重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　）Ｂ）
生物学的性質 １）アンジオテンシン夏変換酵素阻害作用阻害活性の測
定は、Ｃｕｓｈｍａｎらの方法に準じて行った（　Ｄ、
Ｗ、Ｃｕｓｈｍａｎ　ａｎｄ　Ｈ，Ｓ、Ｃｈｅｕｎｇ＋
Ｂｉｏｅｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　
２０　ｒ　　１６３７−１６４８　＋１９７１）。即ち
、酵素液は、ウサギ肺臓アセトン粉末（シグマ製）１０
ｉを１００　ｍＭホウ酸緩衝液（ＰＨ１，３）１００−
中でホモｒナイズして、４０．０００Ｘｇで４０分間超
遠心を行い、得られた上澄液を用いた。基質としては、
Ｈｌｐｐｕｒｙｌ　−Ｌ−Ｈｌａｔｉｄｙｌ−Ｌ−Ｌ＠
ｕｃｉｎｅ　（Ｈｌｐ−Ｈｌｓ−Ｌａｕ）を用いた。

Ｈｌｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ　（１２，５ｍＭ　）　２５μ
ｔ、酵素液２５　ｐＬ　。

１００ｍＭホウ酸緩衝液（３００ｍＭ　ＮａＣｔ含有）
および阻害剤溶液２５μｔを用い全容を３００μｔとし
た。これを３７℃で３０分間反応させた後、ＩＮＨＣ４
３００ｇを加えて反応を停止した。次いで酢醗エチル２
−を加えて攪拌し、遠心分離に付した。得られた馬尿酸
を含む酢酸エチル層１ｗｔを別の試験管−に採取し、沸
騰水中で酢酸エチルを留去後、蒸留水１−を加えて溶解
した。ムへ溶液の紫外部２２８ｍμにおける吸収値（Ｙ
）を測定した。

一方、上記において阻害剤溶液の代シに蒸留水を用いて
同様に試験を行い、紫外部２２８ｍμにおける吸収値（
Ｘ）を測定し、この値を対照とした。

阻害率は、下記の式から算出した。

５０％阻害活性は、阻害剤をに希釈で５段階希釈した値
から阻害曲線を作成して求めた。

本方法から、アンジオテンシン■変換酵素を５０俤阻害
するに必賛なアンソオスタチｙの濃度は、２〜５Ｘ１０
＝Ｍであった。

２）アンジオテンシンＩ投与ラットに対する血圧上昇抑
制作用 無麻酔の雄性ウィスター今道系ラット（体重３５０〜４
２０ｉ）の大腿部静脈より薬物を投与し、大腿部動脈の
血圧を測定する方法で、アンジオテンシン■投与による
血圧上昇の抑制率を求めた。

即ち、アンジオテンシンＩを０．３μ？殉靜脈内投与し
た後の血圧上昇度（Ａ）を対照にした・任意濃度の阻害
物質を静脈内投与し、次いで２分後に１アンジオテンシ
ン■を０．３μカ均投与して血圧の上昇度（Ｂ）を測定
Ｑ１抑制率を算出した。

抑制率（イ）＝　−ｘ　ｉ　ｏ　。

この方法から、アンジオテンシンＩ投与による血圧上昇
を５０％抑制する、アンジオスタチンの濃度は１０〜５
０Ｗｖｋｇであった。

３）急性毒性 マウスに対して本物質１０００ｍ９７に９を静注投与し
たが、死亡するマウスはいなかった。

アンジオスタチンを血圧降下剤として用いる場合、それ
自体、あるいは適宜の薬理的に許容される担体、賦形剤
、希釈剤と混合し、粉末。

顆粒２錠剤、カプセル剤、注射剤などの剤型で経口的ま
た社非経口的に投与することが出来る。

投与量は対象疾患、症状、投与対象、投与方法などによ
って異なるが、例えば成人に対しては１日約５０〜５０
０　Ｑｌｌｌｐ程゛度を３回に分けて投与するのが好ま
しい。

次にアンジオスタチンの製法を実施例を４げて説明する
が、本発明はこの方法によって製造されたアンジオスタ
チンに限定されるものではない。

実施例１ ディヘテロスポラ・カテヌラータ５ＡＮＫ　１０４８１
を、マンニトール２．０係および大豆粉２．０チからな
る液体培地（ＰＨ６，５）　１ｏ　ｏ　ｍｔを含む５０
０−容フラスコ２本に接種し、次いで２６℃で３日間振
盪培養を行なった。得られた培養液２００−を、上記と
同一の組成の培地１５１および消泡剤（ディスホームＣ
Ｂ−４４２：日本油脂（株）製）０．０２％を含む３０
！／容ジヤーフアーメングーに移し、２６℃で４日間、
通気攪拌培養した。得られ、た培養液約１２！を、セラ
イト５００？を濾過助剤として用いて濾過し、次いで水
洗するとｐｇ１５ｉが得られた。得られたｐ液をＣｔ型
デュオライトＡ−２樹脂（Ｃｈｅｍｌｅａｌ　Ｐｒｏｃ
ｅｓｓＣｏ、　＄１！：米国）４Ｉ／を用いてカラムク
ロマトグラフに付し、０．５Ｎ水酸化アンモニウムで溶
出した。約３！の活性区分が得られた。これを約３００
ｍ／まで減圧濃縮し、次いで凍結乾燥に付すと粗粉末約
３８？が得られた。得られた粗粉末１５Ｆを蒸留水５０
−に溶解した後、水酸化アンモニウムでｐＨ９，０に調
整した。次いでこの溶液を遠心分離に付し、沈殿物を除
去した後、セファデックスＧ−１５樹脂（Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ　ＦｉｎｅＣｈ＠ｍ１ｃａｌｓ製；スウェーデン
）２Ｊを用いてカラムクロマトグラフに付し脱塩を行な
うと、活性区分約３００ｄが得られた。得られた活性区
分をＤＥＡＥ、−セファデックスＡ−２５樹脂（Ｐｈａ
ｒｍｉｃｉａＦｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｅａｌｇ、製；スウ
ェーデン）　（０，Ｉ　Ｍ酢酸ナトリウム（ＰＨ６，０
）緩衝液で緩衝化したもの〕２００ｍを用いテ０．１　
Ｍ酢酸ナトリウム（ｐｉ−１６，０）〜０．４Ｍ酢酸ナ
トリウム（ｐ）′Ｉ６．ｆｌ）で濃度勾配クロマトグラ
フに付すと活性区”分が得られた。得られた活性区分を
凍結乾燥に付し、次いでセファデックスＧ−１０樹脂（
Ｐｈａｒｍａｅｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ。

製；スウェーデン）（φ４；５Ｘ１４５＝２３００ａｄ
）を用いてカラムクロマトグラフに付し脱塩を行なった
。次いで活性区分を再び凍結乾燥に付すとアンジオスフ
チン５０ダが白色粉末として得られた。

実施例２ ガイへテロスポラ・カテヌラータ５ＡＮＫ　１０４８１
を、マンニトール２．０９１および大豆粉２．０９６か
らなる液体培地（ｐＨ６，５）　５００　ｄを含む２！
容フラスコ６本に接種し、次いで２６℃で３日間振盪培
養を行なった。得られた培養液３！を、上記と同一組成
の培地３００ノおよび消泡剤（ディスフオームＣＢ−４
４２：日本油脂（株）製）０．０２チを含む６００！容
タンクに移し、２６℃で４日間、通気攪拌培養した。得
られた培養液約２５０Ｊを、セライト１０に９を濾過助
剤として用いてフィルタープレスで濾過し、次いで水洗
すると炉液３００！が得られた。得られたｒ液をＣｔ型
デュオライトＡ−２樹脂（Ｃｈｅｒｏｉｃａｌ　Ｐｒｏ
−ｃｅｓａ　Ｃｏ、製；米国）１２．＃を用いてカラム
クロマトグラフに付し、０．５Ｎ水酸化アンモニウムで
溶出した。約３０！の活性区分が得られた。

これをセントリサーモ（Ａｌｆａ−１ａｖａｌ　Ｃｏ−
製；スウェーデン）を用いて濃縮し、次いで凍結乾燥に
付すと粗粉、末的６００）が得られた。得られた粗粉末
の中２０ｐを蒸留水５ｏ−に溶解した後、水酸化アンモ
ニウムでｐＨ９，０に調整した。次いでこの溶液を遠心
分離（９，０００ｘｇ、、１５分間）（付すと、上溌液
約６０−が得られた。得られた上澄液をセファデックス
Ｇ−２５樹脂（Ｐｈａｒｍ−ａｅｉａ　Ｆｌｎｅ　Ｃｈ
ｅｙｎｉｃａｌｍ、　裂：スウェーデン）（φ４．５Ｘ
１５０）を用いてカラムクロマトグラフに付し脱塩を行
なうと、活性区分約４００−が得られた。得られ次活性
区分をギ酸でＰＨ３，ｓに調整し、次いでアセトン６０
０−を加えて５℃で一夜放置すると粗結晶が得られた。

得られた粗結晶をガラスフィルターでＦ取すると、粗結
晶的４？が得られた。このようにして得られた粗結晶８
？を蒸留水２００−に溶解し、次いでこれをＤＥＡＥ−
セファデックスＡ−２５樹脂（ＰｈａｒｍａｅｉａＦｉ
ｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｇ、製；スウェーデン）　（０
，Ｉ　Ｍ酢酸ナトリウム（ＰＨ５，０）緩衝液で緩゛衝
化したもの〕（φ２．２　Ｘ　４７．５　）、を用いて
０．１Ｍ酢酸ナトリウムＣＰ＋−’５．０）〜０．４Ｍ
酢酸ナトリウム（ＰＨ５，０）で濃度勾配クロマトグラ
フに付すと、活性区分が得られた。得られた活性区分を
凍結乾燥に付し、次いでセファデックスＧ−１０樹脂（
ｐｌ＋ａｒｍａｃｉ鳳Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｍ、
製；スウェーデン）（φ４．５×１４５＝２３００ｓｇ
）を用いてカラムクロマトグラフに付し脱塩を行なった
０次いで活性区分を再び凍結乾燥゛に付すと粉末的１０
０■が得られた・得られた粉末を蒸留水１０−に溶解し
、アセトンを加えて５℃で一夜放置すると結晶が析出し
た。析出した結晶をガラスフィルターを用いてＦ取する
とアンジオスタチン約５０■が無色針状結晶として得ら
れた。

実施例３ バーチシリウム・ニペオストラトーサム５ＡＮＫ１３３
５８を、マｙ　＝）　−ｋ　２．０　％および大豆粉２
．０％からなる液体培地（ｔＪ（ａｓ）　１００−を含
む５０〇−容フラスコ２本に接拙し、次いで２６℃で４
日間振盪培養を行なった。得られた培養液を上記と同一
組成の培地１５ノおよび消泡剤（ディスフオームＣＢ−
４４２；日本油脂（株）製）ｏ、　０２チを含む３０７
容ジャーファーメンタ−に移し、２６℃で５日間通気攪
拌培養した。

得られた培養液約１２！を、セライ）５００％を濾過助
剤として用いて涙過し、次いで水洗するとＰ＠１５７が
得られた。得られたｐ液をＣｔ型デュオライトＡ−２樹
脂（Ｃｈｅｒｎｉｃａｌ　ＰｒｏｃｅｓｓＣｏ、製；米
国）４！を用いてカラムクロマトグラフに付し、０．５
Ｎ水酸化アンモニウムで溶出した。約３ｊの活性区分が
得られた。これを約３００ｍまで減圧濃縮し、次いで凍
結乾燥に付すと粗粉末的３ｏｙが得られた。得られた粗
粉末１５ｙ−を蒸留水５０ｗｔに溶解した後、水酸化ア
ンモニウムでｐＨ９，０に調整した。次いでこの溶液を
遠心分離に付し、沈殿物を除去した後、セファデックス
Ｇ−２５樹脂（Ｐｈａｒｍａｅｉａ　ＦｉｎｅＣｈ＠ｍ
ｉｃａ１ｍ、製；スウェーデン）２７を用いたカラムク
ロマトグラフに付し、脱塩を行なうと、活性区分約３０
０−が得られた。得られた活性区分をＤＥＡＥ−セファ
デックスＡ−２５樹脂（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、製：スウェーデン）（：０．１
Ｍ酢酸ナトリウムＣＰ’５．０）緩衝液で緩衝化したも
の〕２００ゴを用いて０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ｙＪ（
５，０）〜０．４Ｍ酢酸ナトリウム（ＰＩ１５．（＋）
でａ度勾配クロマトグラフに付すと、活性区分が得られ
た。得られた活性区分を凍結乾燥に付し、次いでセファ
デックスＧ−１０樹脂（Ｐｈａｒｍ−ａｃｉａ　Ｆｉｎ
ｅ　Ｃｈａｍｉｃａｌｓ−製；スウェーデン）（φ４．
５Ｘ１４５＝２３００ｍ）を用いてカラムクロマトグラ
フに付し、脱塩を行なった。次いで活性区分を再び凍結
乾燥に付すとアンジオスタチン３０■が白色粉末として
得られた。

実施例４ ネクトリア・インペンタ５ＡＮＫ１６４７７を、マンニ
トール２．０チおよび大豆粉２．０％からなる液体培地
（ｐｔ１５．５　）　１００−を含む５００　ｔａｇ容
フラスコ２本に接種し、次いで２６℃で４日間振盪培養
を行なった。得られた培養液を、上記と同一組成の培地
１５Ｊおよび消泡剤（ディスホームＣＢ−４４２：日本
油ＷＩ（株）製）０．０２％を含む３０！容ジャーファ
ーメンタ−に移し、２６℃で５日間、通気攪拌培養した
。得られた培養数的１２１を、セライ）５００グを濾過
助剤として用いて濾過し、次いで水洗するとＦ液１５！
が得られた。得られたＦ液をＣｔ型デュオライトＡ−２
樹脂（Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｃｏ−製；
米国）４メを用いてカラムクロマトグラフに付し、０．
５Ｎ水酸化アンモニウムで溶出した。約３！の活性区分
が得られた。これを約３００７まで減圧濃縮し、次いで
凍結乾燥に付すと粗粉末的２０）が得られた。得られた
粗粉末１０）を蒸留水５０ｄＫ溶解した彼、水酸化アン
モニウムで−１９．０に調整した０次いでこの溶液を遠
心分離に付し、沈殿物を除去した後、セファデックスＧ
−２５樹脂（Ｐｈａｒｍａｅｉａ　Ｆｉｎｓ　Ｃｈｓｍ
ｉｃａｌ＠、製；スウェーデン）２ｊを用いてカラムク
ロマトグラフ罠付し脱塩を行なうと、活性区分約３００
−が得られた。得られた活性区分’（ＨＤＥＡＥ−セフ
ァデックｘ　Ａ　−２５樹脂（Ｐｈａｒｍａｅｉａ　Ｆ
ｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｇ・製；スウェーデン）［０
，１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ）（５，０）で緩衝化
したもの：］２００７！を用いて０．１Ｍ酢酸ナトリウ
ム（ｔ４５．０）〜０．４Ｍ酢酸ナトリウムＣＰ）（５
，０）で濃度勾配クロマトグラフに付すと活性区分が得
られた。得られた活性区分を凍結乾燥に付し、次いでセ
ファデックスＧ−１０樹脂（ＰｈａｒｍａｃＬａ　Ｆｉ
ｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、製；スウェーデン）（φ４
．５Ｘ１４５＝２３００ｄ）を用いてカラムクロマトグ
ラフに付し脱塩を行なった。

次いで活性区分を再び凍結乾燥に付すとアンジオスタチ
ン２０■が白色粉末として得られた。

この発明の製剤例をいくつかあける。

製剤例１．注射剤 アンジオスタチンの滅菌したもの５００〜を含有するよ
うにバイアルに無菌的に分配し、無菌的に凍結乾燥し、
密封した。使用面に生理食塩水５−を添加して注射剤と
する。

製剤例２．経口用カプセル アンジオスタチン　　　　　　　２５０ｑ乳　　　糖　
　　　　　　　　　　　　　　　　　７５ダステアリン
醸マグネシウム　　　　　　１５１ｎ９計　　　　　　
　　　　　　　　３４°■上記処方の粉末を混合し、６
０メツシユのふるいを通した後、この粉末３４（［１を
１号ゼラチンカプセルに入れカプセル剤とした。

特許出願人　三共株式会社 代理人　弁理士樫出庄治 第１頁の続き ０発　明　者　小池博之 東京部品用区広町１丁目２番５８ 号三共株式会社中央研究所内 手続袖正書（自発） 昭和５６年β月２４１．１ 特許庁長官　島　１）春　樹殿 １、・特許請求の範囲を次の通シ訂正する。

「１．下記の理化学的性状を有する生理活性物質アンジ
オスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ　）。

１）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：２１５〜２２０℃（分解） ３）比旋光度：〔α〕。＝　＋７．８３°（Ｃ＝０．２
３．水）４）元素分析値： 実１１１値：　Ｃ、３８，４９＊　　Ｈ、５，５１１−
一一隔一關曙騨１１−■―−−１−−自■■−一一−■
−−Ｎ　、９．８３憾 ゛ハロゲン原子、硫黄源、子、燐原子は含まれていない
。

−５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアリカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０ｍＰ以−下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトル、ν　α １４００　、１６４０　、１７３０　、３０３０　、３
４５０７）分子量＝２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
／ｅ＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
、ジオキサン、酢ばエチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、エチルエーテル、クロロホルム　ｎ−ヘキサンに
難溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール場パー
プル（ｐＨ指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
酸反応に陰性。

１０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎ＆ＯＤで中和した後、外部標準として
トリノチルシランを用いて測定； （ｉ）　　Ｃ”核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ　）１７
９．５７　（−皿！り １７７．９９（−重縁） １７６．３７　（−重線） １１７５　（−重線） ６１．８８（二重！り ５０．７１　（三重Ｍ） ４８．０６　（三重１１！１１） ３９．４３　（三重量） （ｉｉ）　　Ｈ”核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）２．
９５（抜工重Ｍ、　　Ｊ＝１６．０．　８．２　）３．
２０　（抜工重線、　　Ｊ−１６，０，４，０）ａ、ａ
Ｏ（二重線、Ｊ−６，０） ３．９１（−重線） ４．０２　（三重線、Ｊ−６，０） ４．０９（抜工重量、　Ｊ−８，２，４，０）２、　デ
ィヘテロスポラ属、バーチシリウム属またはネクトリア
属に属するアンジオスタチン生産菌を培養して、アンジ
オスタチンを単離することよ）なるアンジオスタチンの
製造法。

こζに、アンジオスタチンは次の特性を有する。

１）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：　２１５〜２２０℃（分解）３）比旋光度：
　（ｇ）２：＝　＋７．８３°（Ｃ＝０．２３．水）４
）元素分析値： 実＃Ｊ＊　：　Ｃ、３８，４９９６Ｈ、５，５１１Ｎ、
　９．８３％ハロゲン原子、硫黄原子、燐原子は含まれ
ていない。

５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいず九において
測定しても、２２０ｍｐ以下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトルニジ”’　ｔｘ”’１４００
　、１６４０　、１７３０　、３０３０　、３４５０７
）分子量二２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
／・＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、エチルエーテル、クロロホルム、゛ｎ−ヘキサン
に難溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・パー
プル（ｐＨ指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
酸反応に陰性。

１０）　　核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
トリメチルシランを用いて測定； （１）　　Ｃ”核磁気共鳴スペクトル（ＰＰｍ　”）１
７９．５７（−重Ｉり １７７．９９（−重線） １７６．３７　（−重線） １７！Ｌ７５　（−重線） ６１．８８（二重線） ５０．７１（三重ｌ１Ｉ） ４８．０６（三重線） ３９．４３　（三重線） （ｉｔ）　　Ｈ”核磁気共鳴スペクトルｃ　ｐｐｍ　）
２．９５（抜工重縮、　　Ｊ＝１６．０．　８．２　）
３．２０　（抜工重線、　Ｊ＝１６．０．４．０　）３
．６０　（二重線、Ｊ＝６．０） ３．９１　（−重線） ４．０２　（三重線、Ｊ＝６．０） ４．０９（抜工重ｉ、　Ｊ＝８．２．４．０　）３、テ
ィヘテロスポラ属、バーチシリウム柄またはネクトリア
属Ｋｊ！するアンジオスタチン生産菌が、ディヘテロス
ポラ・、カテヌラータＳ　Ａ　Ｎ　Ｋ　１０４８１　（
Ｄｉｈｅｔｅｒｏａｐｏｒａ　ｃａｔｅｎｕｌａｔａＳ
ＡＮＫ　１０４８１、微工研菌寄嬉６０８０号）、デイ
ヘテロスボラークラミドスボリア５ＡＮＫ１２１８１　
（Ｄｉｈｅｔ＠ｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｉｄｏｓｐ
ｏｒｉａ　５ＡＮＫ１２１８１　、微工研菌寄第６０８
１号）、ディヘテロスポラ・クラミドスポリア５ＡＮＫ
　１２２８１（Ｄｉｈｅｔｅｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａ
ｒｎｉｄｏｓｐｏｒｉａ　５ＡＮＫ　　１２２８Ｌ微工
研菌寄第６０８２号）、ディヘテロスポラ・クラミドス
ボリア５ＡＮＫ　１２３８１　（Ｄｉｈｅｔｅ＝ｒｏｓ
ｐｏｒａ　　ｃｈｌａｍｉｄｏｓｐｏｒｉａ　　８°ム
ＮＫ　　１２３８１　、微工研薗寄第６０８３号）、バ
ーチシリウム・ニベオストラトサム　５ＡＮＫ　１３３
５ｇ　（’Ｖｅｒｔｉｃｉ−１１ｉｕｍ　　ｎ１ｖ＊ｏ
ｓｔｒａｔｏｓｕｍ　　５ＡＮＫ　　１３３５８　　）
”またはネクトリア噛インペンタ５ＡＮＫ　１６４７７
（Ｎｅｃｔｒｉａ　１ｎｖｅｎｔａ　５ＡＮＫ　１６４
７７　）である特許請求の範囲第２項記載の製造法。

４、生理活性物質アンジオスタチンを有効成分とする血
圧降下剤。ζζに、アンジオスタチンは次の特性を有す
る。

ｌ）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点二２１５〜２２０　’Ｃ（分解）３）比旋光度
：　［ｆ）Ｄ−＋７．８３°’　（Ｃ＝０．２３　、水
）４）元素分析値： 実測値；Ｃ，３８，４９５６Ｈ，５，５１チＮ、９．８
３％ハロゲン原子、硫黄原子、燐原子は含まれていない
。

５）ｗ：外銀吸収スペクトルニ 販性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。

、　　Ｋ訃　−１ ６）赤外線吸収スペクトル、ν１．ｘ３１４００　、１
６４０　、１７３０　、３０３０　、３４５０７）分子
量：２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
／・＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフオキｔイド、アセトン
、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、エチルエーテル、クロロホルム、ｎ−ヘキサンに
難溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・パー
プル（ｐ■指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
酸反応に陰性。

１０）　　核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、ＮＪＬＯＤで中和した後、外部標準とし
てトリメチル７ランを用いて測定； 中　Ｃ１ｍ核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ　）１７９゜
５７（−重線） １７７．９９　（−重線） １７６．３７　（−重線） １７ｓ、７ｓ（−重線） ６１．８８（二重線） ５０．７１（三重線） ４８．０６　（三重線） ３９．４３（三重線） （１）　　Ｈ’核磁気共鳴スペクトルＣｐｐｍ　）２．
９５（抜工重＠、　Ｊ−１６，０，８，２）３．２０　
（抜工重線、　Ｊ＝１６．０．４．０　）３．６０　（
二重１１．Ｊ−６，０） ３．９１　（−重量） ４．０２　（三重線、Ｊ＝６．０） ４．０９（抜工重！、Ｊ＝８．２．４．０）　　　　Ｊ
２、明細書第２７頁１７行の 「実測値；　Ｃ、４０，２６チＨ，５，３７チＮ　、　
１０．２４チ」を 「実測値：　Ｃ、３８，４９チＨ、５，５１％　Ｎ　、
　９．８３係　」と訂正する。

以上 手続補正書Ｃ自発） 昭和５７年１０月７日 特許庁長官若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１２３６１９号 ２、発明の名称 新生理活性物質アンジオスタチン ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　〒１０３東京都中央区日本橋本町３丁目１番地の
６名称　　　（１８５）三共゛株式会社 代表者　取締役社長　　河村喜典 ４、代理人 居所　〒１４０東京部品川区広町１丁目２番５８号三共
株式会社内 ６、補正の対象　　明細書の特許請求の範囲の欄及び発
明特開昭５８−　３６３９１（１５） １、特許請求の範囲を次の通シ訂正する。

［１，下記の理化学的性状を有する生理活性物質アンジ
オスタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｔ＋　）。

ｌ）物質の色と形状； 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点二２１５〜２２０℃（分解） ４）元素分析値： 実測値；Ｃ，３８，４９チ　Ｈ，５，５１９１Ｎ、９．
８３１６ ハロダン原子、硫黄原子、燐原子は含まれていない。

５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトルニジＫＢｒｃＩＬ−１ｍＸ １４００．１６４０．１７３０，３０３０．３４５０７
）分子量：２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
／・＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、エチルエーテル、クロロホルム、ｎ−ヘキすンＶ
ｃｉｌｌ溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・／４
−ｆル（ＰＨ指示薬）反応に陽性。ナツトレゾルシン−
硫酸反応に陰性・ １０）　　核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
トリメチルシランを用いて測定； （＋）　　（１：”核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）１
７９．５７（−１線） １７７．９９（−重線） １７６．３７（−１ｍ） １７５．７５（−重線） ５０．７１（三重！ｉり ４８．０６（三重線） ３９．４３（三重線） （ＩＤ　　Ｅ核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）２．９５
（機工重線、　Ｊ−１６，０、８，２）３．２０（機工
重線、　Ｊ−１６，０、４，０）３．６０（二１線、Ｊ
＝６．０） ３．９１（−］［重線 ４．０２（三重線、Ｊ＝６．０） ４．０９（機工重線、　Ｊ−８，２、４，０）２、　デ
ィヘテロスポラ属、バーチシリウム属またはネクトリア
属に属するアンジオスタチン生産菌を培養して、アンジ
オスタチンを単離することよシなるアンジオスタチンの
製造法。

ここに、アンジオスタチンは次の特性を有する。

１）物質の色と形状： 無色針状結＆ま九は結晶性白色粉末 ２）融点＝２１５〜２２０Ｃ（分解） ３）比論光ｔｔ　：　（ｃ！発’＝−ｔｓｏ（Ｃ−２，
３、０，６７Ｍ燐酸ナトリクム緩衝液、ｐｉ４７．０）
４）元素分析値： 実測値；　Ｃ、３８，４９４Ｈ，５，５１−Ｎ、９．８
３１八ロｒン原子、硫黄原子、燐原子は含まれていない
。

５）紫外！吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトル；シＫＢｒＣＩＬ７１ｍ＆ｘ １４００．１６４０．１７３０，３０３０．３４５０７
）分子量＝２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｒ
ｒｙ’ｅ　＝５６　ｓが得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン）エチルエーテル、クロロホ゛ルム為　ｎ−ヘキサ
ンに難溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・パー
ゾルＣＰ）ｌ籟示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−
硫酸反応に陰性。

１０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
トリメチルシランを用いて測定： （＋）　　Ｃ１５核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）１７
９．５７（−重線） １７７．９９（−重線） １７６．３７（−重＆） １７５．７５　（−ｆＬ騙） ６２．６０（二重線） ５０．７１　（三ｉｌり ４８．０６（三重Ｍ） ３９．４３（三重ｆ１） （１）Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）２．９５（抜
工１線、　Ｊ＝１６．０　、　＆２　）３．２Ｇ（抜工
重線、Ｊ零１６．０　、４．０　）３．６０（二重線、
Ｊ−６，０） ３．９１（−重線） ４．０２（三重線、　Ｊ＝６．０　） ４．０９（機工重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　）３、
　ディヘテロスポラ属、パッチシリウム属またはネクト
リア属に属するアンジオスフチン生産菌が、ディヘテロ
スポラ・カテヌラータ５ＡＮＫ　１０４８１（Ｄｉｈ＠
ｔｓｒｏｓｐｏｒａ　ｃａｔｅｎｕｌａｔａＳＡＮＫ　
１Ｇ４８１．微工研菌寄第６０８０号）、デイヘテロス
Ｉう・クラミドスポリア５ＡＮＫ１２１８１（Ｄｉｈ＠
ｔ＠ｒｏｓｐｏｒａ　　ｃｈｌａｍｉｄｏ−ｐｏｒｉａ
　　５ＡＮＫ１２１８１、微工研菌寄第６０８１号）、
ディヘテロス４う・クラミドスボリア５ＡＮＫ　１２２
８１（Ｄｉｈ＠ｔ＠ｒｏｓｐｏｒａ　ｃｈｌａｍｉｄｏ
ｓｐｏｒｉａ　５ＡＮＫ　１２２８Ｌ微工研菌寄第６０
８２号）、ディヘテロスポラ・クラミドスポリア５ＡＮ
Ｋ　１２３８１（Ｄｉｈｅｔｅｒｏｉ−ｐｏｒａ　ａｈ
ｌｍｍｉｄｏｓｐｏｒｉａ　５ＡＮＫ　１２３８１、微
工研菌ＩＦ　１１６０８３号）　、バーチシリウム・ニ
ベオストラトサム５ＡＮＫ　１３３５８（Ｖｅｒｔｉｅ
１１１１ｕｍｎ１ｖ＠ｏ−＠ｔｙｒａｔｏｓｕｍ　５Ａ
ＮＫ　１３３５８　）またはネクトリア・インペンタ５
ＡＮＫ　１６４７７　（Ｎ＠ｃｔｒｉａ　１ｎｖｅｎｔ
ａＳＡＮＫ　１６４７７）である特許請求の範囲第２項
記載の製造法。

４、生理活性物質アンジオスタチンを有効成分とする血
圧降下剤。こむに、アンジオスタチンは次の特性を有す
る。

１）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：２１５〜２２０℃（分解） ３）　　比ｔｔＪｉ光ｔ＝　：　（ａ〕：０＝−＋５°
（Ｃ＝２．３．０．６７Ｍ４）元素分析値； 実測値：　Ｃ，３８，４９１Ｈ，５，５１％　Ｎ、９．
８３％ハロｙｙ原子、硫黄原子、燐原子は含まれていな
い。

５）紫外線吸収スペクトルニ 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。

６）赤外線吸収スペクトル、νｒｎ１ｘｃｒｒＬ１４０
０．１６４０．１７３０．３０３０．３４５０７）分子
量：２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
／・＝５６６が得られた〕８）溶解性二 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、エチルエーテル、クロロホルム、ｎ−ヘキサンに
難溶。

９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およヒフレゾール・・母
−プル（−指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
酸反応に陰性。

１０）　　核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
トリメチルシランを用いて測定； 中　Ｃ１５核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）１７９．５
７（−重線） １７７．９９（−重線） １７６．３７（−重１１１ｉり １７５．７５（−重線） ５０．７１（三！ｉｉｉり ４８．０６（三重線） ３９．４３（三重線） （ＩＩ）　　Ｈ’核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）２．
９５（抜工重線、　Ｊ＝１６．０　、８．２　）３．２
０（抜工重線、　Ｊ＝１６．ｏ　、　４．０　）３．６
０（二重線、　Ｊ＝５．Ｑ　） ３．９１（−重線″） ４．０２（三重線、Ｊ＝６．０） ４．０９（抜工重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　’）　
　　　　　Ｊ２　明細書第２７頁１５行の 「３）比旋光度；〔α北０＝＋７．８３°（Ｃ＝２．３
．水）」を ［３）比旋光度：〔α発’＝−１５°（Ｃ＝２．３　、
０．６７Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７，０）Ｊと訂
正する。

３、同＄２９頁８行乃至９行の ｒ６１．８８（二Ｔｉ線）、５０．７１（三重線）４ｇ
、０６（三重線）、３９．４３（三重線）」をｒ６２．
６０（二重線）、６１．９９（二重線）５０．７１（三
ｌ線）、４８．０６（三１線）３９．４３（三重Ｊり　
　　　　　　　　　　Ｊと訂正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性状を有する生理活性物質アンジオ
   スタチン（Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ　）。 １）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：２１５〜２２０℃（分解） ３）比旋光度：〔α）：’＝＋７．８３°（Ｃ＝０．２
   ３．水）４）元素分析値： 実測値；Ｃ，４０，２６チ　Ｈ，５，３７９６Ｎ、１０
   ．２４１ ハロゲン原子、硫黄原子、燐原子は含まれていない。 ５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
   測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。 ６）赤外線吸収スペクトルニジＷ！’、：　ａｍ”−’
   １４００．１６４０．１７３０，３０３０．３４５０７
   ）分子量＝２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでＶ
   ・＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
   ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
   、ジオキサン、酢駿エチル、テトラヒドロフラン。 ベンゼン、エチルエーテル、クロロホルムａｍ−ヘキサ
   ンに難溶。 ９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・ノ譬
   −デル（ＰＭ（指示薬）反応に陽性、す７トレゾルシン
   一硫酸反応に陰性。 １０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
   トリメチルシランを用いて測定； 中　Ｃ１３核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ）１７９．５
   ７（−重線）、１７７．９９（−重線）１７６．３７（
   −重線）、１７５．７５（−重線）６　Ｌ、Ｓ　８　（
   二重、＠）、　　５０．７１（三重線）４８．０６（三
   重線）、　　３９．４３（三重Ｉｆり（ｉｉ）　　Ｈ’
   核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｒｎ　）２．９５（複二重
   線、　Ｊ＝１６．０　、８．２　＞３．２０（複二重線
   、　Ｊ＝１６．０　、４．０　）３．６０（二重線、Ｊ
   ＝６．０） ３．９１（−重ｉｌｉり ４．０２（三重線、Ｊ＝６．０） ４．０９（複二重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　）２、
   ディヘテロスポラ属、バーチシリウム属またはネクトリ
   ア属に属するアンジオスタチン生産菌を培養して、アン
   ジオスタチンを単離することよシなる、アンジオスタチ
   ンの製造法・ここに、アンジオスタチンは次の特性を有
   する□。 １）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点：２１５〜２２０℃（分解） ３）比旋光度：〔α〕二’＝＋７．８３°（Ｃ＝０．２
   ３．水）４）元素分析値： 実測値：　Ｃ，４０，２６％　Ｂ、５．３７１　Ｎ、１
   ０．２４％ハロゲン原子、硫黄原子、燐原子線含まれて
   いない。 ５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
   測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。 ６）赤外−吸収スペクトルニジＫＢｒ！−１ａｗ １４００．１６４０，１７３０１３０３０．３４５０７
   ）分子量＝２７８ 〔トリメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルでｍ
   ｙ／ｅ＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
   ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
   、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン。 ベンゼン、エチルエーテル、クロロホルム、ｎ−ヘキサ
   ンに離溶。 ９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・パー
   グル（ＰＨ指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
   酸反応に陰性。 １０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
   トリメチルシランを用いて測定； 中　Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ　）１７９．５７
   （−重線、）　、　１７７．９９　（−重線）１７６．
   ３７（−重線）、１７５．７５（−重線）６１．８８（
   二重線）、　　５０．７１（三重Ｉり４８．０６（三重
   ＠）、　　３９．４３（三重線）（ｌｉ）　Ｈ’核磁気
   共鳴スペクトルＣｐｐｍ）２．９５（複二重線＃　Ｊ＝
   １６．０１８．２　）３．２０（複二重線、　Ｊ＝１６
   ．０　、４．０　）３．６０（二重線、Ｊ＝６．０） ３．９１（−重！り ４．０２（三重線、　Ｊ＝６．０　） ４．０９（複二重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　）３、
   ディヘテロスポラ属、バーチシリウム属また昧ネクトリ
   ア属に属するアンジオスタチン生産菌が、ディヘテロス
   ポラ・カテヌラータ５ＡＮＫ　１０４８１　（Ｄｉｈｅ
   ｔｅｒｏａｐｏｒａ　ｃａｔ＠ｎｕｌａｔａ　５ＡＮＫ
   １０４８１、微工研菌寄第６０８０号）、デイヘテロス
   Ｉう・クラミドスＩリア８ＡＮＫ１２１８１（Ｄｉｈ＠
   ｔ＊ｒｏｍｐｏｒａ　　ｃｈｌａｍｉｄｏｓｐｏｒｉａ
   　　５ＡＮＫ　　１２１８１’ｅ微工研菌寄第６０８１
   号）、デイヘテロスＩう・クラミドスボリア５ＡＮＫ　
   １２２８１　（Ｄｉｂｓｔｅｒ−ｏｓｐｏｒａ　ｅｈｌ
   ａｍｉｄｏｓｐｏｒｉａ　５ＡＮＫ　１２２８１　ｅ微
   工研菌寄第６０８２号）、ディヘテロスポラ・クラミド
   スポリア５ＡＮＫ　１２３８１　（Ｄｉｈｅｔｅｒｏａ
   ｐｏｒａ　ｅｈｌ−ａｍｉｄｏａｐｏｒｉａ　８ＡＮＫ
   　１２３８１　ｅ微工研菌寄第６０８３号）、バーチシ
   リウム・ニペオストラトサム５ＡＮＫ　１３３５８　（
   Ｖｓｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｎｉｖｓｏｓｔｒａｔｏｓ
   ｕｍＳＡＮＫ　１３３５８　）　ｔたはネクトリア・イ
   ンペンタ５ＡＮＫ　１６４７７　（Ｎｅｃｔｒｉａ　１
   ｎｖｅｎｔａ　５ＡＮＫ　１６４７７）である特許請求
   の範囲第２項記載の製造法。 ４．生理活性物質アンジオスタチンを有効成分とする血
   圧降下剤。ここに、アンジオスタチンは次の特性を有す
   る。 ｌ）物質の色と形状： 無色針状結晶または結晶性白色粉末 ２）融点＝２１５〜２２０℃（分解） ３）比施光度：〔α〕二’＝＋７．８３°（Ｃ＝０．２
   ３．水）４）元素分析値： 実測値：　Ｃ，４０，２６１Ｈ，５，３７俤Ｎ、１０．
   ２４％ハロｒン原子、硫黄原子、燐原子は含まれていな
   い。 ５）紫外線吸収スペクトル： 酸性、中性およびアルカリ性の水溶液のいずれにおいて
   測定しても、２２０ｍμ以下の末端吸収のみ。 ６）赤外線吸収スペクトルニジＬ’；ｃＩＩＬ−’１４
   ００．１６４０，１７３０，３０３０．３４５０７）分
   子量＝２７８ 〔ト、リメチルシリル化体の高分解能質量スペクトルで
   ｍ／ｅ＝５６６が得られた〕８）溶解性： 水、特にアルカリ性水溶液に易溶。メタノール、エタノ
   ール、ピリジン、ジメチルスルフォキサイド、アセトン
   、ジオキサン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン。 ベンゼン、エチルエーテル、クロロホルム−ね−ヘキサ
   ンに難溶。 ９）呈色反応： ヨード反応、ニンヒドリン反応およびクレゾール・エー
   テル（ｐＨ指示薬）反応に陽性。ナフトレゾルシン−硫
   醗反応に陰性。 １０）核磁気共鳴スペクトル： 重水に溶解し、Ｎａ０Ｄで中和した後、外部標準として
   トリメチルシランを用いて測定； （１）　　Ｃ”核磁気共鳴スペクトル（ｐｐｍ　）１７
   ９．５７（−重４り、１７７．９９（−重Ｉり１７６．
   ３７（−重＠）、ｔ７ｓ−７５（−重線）６１．８８（
   二重線）、　　５０．７１（三重線）４８．０６（三重
   ＠）、　　３９．４３（三重Ｉｍ）（ｉｉ）　　Ｈ１核
   磁気共鳴スイクトル（ｐｐｍ　）２．９５（複二重線、
   　Ｊ＝１６．０　、８．２　）３．２０（複二重線、　
   Ｊ＝１６．０　、４．０　）３．６０（二重線、Ｊ＝６
   ．０） ３．９１（−重Ｉり ４．０２（三重線、Ｊ＝６．、Ｑ） ４．０９（複二重線、　Ｊ＝８．２　、４．０　）