JPS58222027A - 精製無毒化エンドトキシンを含有する抗腫瘍組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の背景） この発明は３成分を含んで成る医薬組成物に関する。第
１成分は、検出可能な量の２−ケト−３−デオキシオク
タノエートを含有すず、約３５０〜４７５ｎモル／ダの
燐及び約１７００〜２０００ｎモル／雫の脂肪１３１−
含有することを特徴とする精製無毒化エンドトキシン（
ＲＤＥ　）である。第２成分ｉｄ、）レバロースシミコ
レ−）　（ＴＤＭ）　？　あ、６゜第３成分は、クロロ
ホルム／メタノールで抽出されたエンドトキシン糖脂質
のアセトン沈澱副生物（ＡＣＰ）でらる。この組成物は
、動物及びヒトの癌性腫瘍の治療に有用な、扁い活性を
有する抗腫瘍□１□ 組成物でｂる。　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１、トドキシン抽出物が知られている。これらの
抽出物は、種々の免疫原性腫瘍の免疫療法に使用されて
きた〔リビ（ｒｔ＋ｂ＋寿、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎ
ｏＬＩｍｍｕｎｏｔｈａｒ、第７巻、４３〜５８頁（１
９７９この記載を引用によりこの明細書に組み入れる。

しかしながら、エンドトキシン抽出物は毒性が強く、こ
のため癌性腫瘍の治療に使用するには限界がめることが
知られている。エンドトキシンの腫瘍退化能を保持しな
がらエンドトキシンを無毒化する勢力が行われてきた。

リビ（Ｒｌｂり等により示されたように、アジュバント
活性を保持しながらエンドトキシンを無毒化することが
知られている化学的方法、例えはサクシニル化及び７タ
リリル化によっては、毒性及び腫瘍退化能の両者が矢、
われだ。従って、萬い肺鴫退化能を有し且つ毒性をほと
んど又は全く有しないエンドトキシン製品を得る試みは
まだ成功していない。

クロロホルム−メタノールで抽出したエンドトキシン糖
脂質のアセトン沈澱副生物（ＡＣＰ）は、単独で使用す
る場合、又はトレハロースノミコレートと組合わせて使
用する場合には、腫瘍退化能を有しない。ＡｅＰ及びそ
の性質、製造方法の詳細については、前ｄピのリビ等の
報告を参照のこと。

従って、この発明は、ＡＣＰ及びＴＤＭと共に精製無毒
化エンドトキシン標品を含んで成り、萬い腫瘍退化能を
有し、そしてエンドトキシン製品が通常有する毒性副作
用を有しない医薬組成物を対象とする。

この発明の他の目的は、前記の組成物により動物又はヒ
トを治療して腫瘍の増殖を退化せしめ又は鎮静する方法
を提供することでおる。

（発明の概要） この発明は、検出可能な量の２−ケト−３−デオキシオ
クタノエートを含有せず、約３５０〜４７５　ｎ　％／
ｌ／　／ｍｙの燐及び約１７００〜２０００ｎモル／〜
の脂肪酸を含有するＲＤＥを、ＴＤＭ及びＡＣＰと共に
含んで成る医薬組成物に関する。この組成物は、動物及
びヒトの癌性腫瘍の治療に効果的でるる。前記の精製無
毒化エンドトキシンを製造するための出発材料として使
用するタイプの工ｔ　　　　　　ンドトキシン抽出物は
、親株及び変異株を含む任欠の属の微生物すなわち、サ
ルモネラ を使用することができる。

Ｓ、ティピ（Ｓ、　　ｔｙｐｈｉ）、ｓ、　　マルセｙ
　セフ　ス出発材料として使用するエンドトキシン抽出
物は複数の公知の方法の１つを用いて製造することがで
きる〔例えば、ウェブスター（Ｗｅ　ｂ　ｓ　ｔ　ａ　
ｒ　）Ｍ、Ｅ、、サギン（Ｓａｇｉｎ）Ｊ、Ｆ、、ラン
デ４−　（Ｌａｎｄｙ）Ｍ、、及びジョンソン（Ｊｏｈ
ｏｓｏｎ）Ａ、Ｇ、、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１９
５５年、７４４，５５；ウェストパル（Ｗａｇ　ｔｐｈ
ａｌ　）Ｏ，、ルデリッッ（Ｌｕｄｅｒｉｔｚ）Ｏ，、
及びビスター（Ｂｉｓｔｅｒ）Ｆ、　。

Ｚａ　Ｎａすｒｆｏｒｉ＋ｃｈ　、　　７旦　１４８　
（１９５２年）；（ケ９オルグ（Ｇｅｏｒｇｅパ、スプ
リンタ−（Ｓｐｒｉｎｔａｒ）編）、マジソン（Ｍａｄ
ｉａｏｎ）Ｎ、Ｊ、　７ジソンプリンテイング社、１９
５７年、１１５；ガラノス（Ｇａｌａｎｏｓ）Ｃ，、ル
アリッツｏ６　ウェストパル０゜Ｅｕｒ、　Ｊｅ　Ｂｌ
ｏｃｈｅｍ　９．２４５　（１９６９年）；ケン（Ｃｈ
ａｎ）Ｃ，Ｈ，、ノヨンノンＡ、Ｇ、、カサイＮ３、ケ
イ（Ｋｅｙ）Ｂ、Ａ、、レピン（Ｌａｖｊｎ）Ｊ、、ノ
ウオド＝−（Ｎｏｗｏｔｎｙ）Ａ、、　Ｊ、　Ｉｎｆｅ
ｃｔ、　Ｄ１ａ里５４３　（１９７３年）：ビリＥ１、
ハスキン（Ｈａａｋｉｎｓ）Ｗ、Ｔ、、ランデ（−Ｍ、
　、ミルナー（Ｍ目ｎｅｒ）Ｋ、Ｃ，−工垣ｓＪμ盟」
ヱ上」■−殿土す」部猥却ＪＭｅｄｉｃｉｎｅ　１１±
６４７　（１９６１年）；レイベ（Ｌｅｌｖｅ）Ｌ、、
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅａ　Ｃｏ
ｍｍ＋旦２９０　（１９６５年）；及び、リビＥ１、ミ
ルナーに、Ｃ，、ベリネ（Ｐｅｒｒｉｎｓ）Ｔ、、　Ｊ
ａ　Ｉｍｍｕｎｏｌ＋旦２　７５（１９５９年）を参照
のこと］。

エンドトキシン抽出物を得る好葦しい方法はケン（Ｃｈ
ｅｎ）等により開示された方法、′ｆなゎちメタノール
−クロロホルム沈澱法である。

メタノール−クロロホルム化＠（ＭＣＰ）を有機酸又は
無機酸と反応せしめ、そして凍結乾燥することにより、
出発エンドトキシン材料と比べて毒性及び発熱性が少な
い加水分解相脂質Ａｆｃ得る。次に、この生成物を、脂
肪酸及び他の不純物を溶解するが粗脂質Ａを溶解しない
溶剤で処理する。精製し、無毒化した脂質Ａの燐含量は
毒性エンドトキシンのそれに比べて約半分でおり、燐含
量がエンドトキシンの毒作用と関係るることが示唆され
る。

ＭＣＰと反応せしめるのに使用される好ましい無機酸は
塩酸、眺酸又は燐酸であり、そして好ましい有機酸はト
ルエンスルホン酸又はトリ２９口酢酸でるる。反応は、
約９０℃〜１３０℃において、加水分解を完結するのに
十分な時間、通常は約１５〜６０分間行なう。

粗無毒化エンドトキシンの調製は又、クロロホルム、メ
タノール及びエタノール又はこれらの組合わせのごとき
有機浴剤の存在下で、出発材料と酸を反応せしめること
によっても行うことができる。

得られた粗晶゛貿Ａを、脂肪酸を溶解するが粗脂質Ａを
溶解しない溶剤で処理する。このためにアセトンか特に
好ましい。次に溶剤を除去して粗無毒化エンドトキシン
ヲ得る。

次に粗無毎化エンドトキシンを溶剤に溶解し、そしてモ
レキュラーエクスクレーシプクロマトダ５フィーカラム
のごとき適当なりロマトグラフィーカラムを通過せしめ
ることによりＲＤＥ分画を分離し、浴剤を除去した後に
これを一緒にする。一つの態様においては、粗無毒化エ
ンドトギシンＨ液ヲ、りＯＵホルム、メタノール、アセ
トン、ピリジン、エーテルもしくは酢酸、又はこれらの
組合わせのごとき溶剤の存在下でセファデックスカラム
をｉ！１遇せしめる。カラムの圧は変えることができる
が、典型的には大気圧〜１００　ｔｂａ／　ｉｎ２の範
囲であり、流速は約０．１〜１０ｍ１！／分の範囲であ
る。

他の態様ＶＣおいては、粗無毒化エンドトキシンｍ液を
、セファデックスカラムについて上記したのと同様の圧
力条件の下で、　ＤＥＡＥ　−セルロースカラムを通過
せしめる。流速は約２〜１５ゴ／分に維持する。セファ
デックスカラムの場合と同じ溶剤を使用することができ
る。但し、いずれの混合物にも約１％以下の＃度で水又
はジエチルアミンを加えることができる。

粗無毒化エンドトキシンからＲＤＥ　ｔ−調製するため
の他の方法には、溶液を、粒子サイズが約１５〜６３ミ
クロンであるシリカゲル６ｏの低圧カラム金通過せしめ
、そして容量比が約５０：２５：４：２のクロロホルム
、メタノール、水及び水酸化アンモニウムからなる溶剤
を使用する方法が含まれる。

この発明の組成物の第２成分であるトレハロースゾミコ
レート（ＴＤＭ）は、例えばＭ、アビウム（凪−粒土四
）・ル１］」（ルー曲シ」）・Ｍ、ラベル　ロシス（Ｍ
＠　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）　（Ｈ３７ＲＶ株及び
Ａｙｏｍａ　Ｂ株）、Ｍ、ボビスＢＣＧ（Ｍ、　ｂｏｖ
ｉｔｓ　ＢＣＧ）、Ｍ、スメグマチス生物から得られる
。

せしめ、集菌し、そして熱殺菌する。菌体をいくつかの
溶剤で抽出し、そして活性を有し溶剤に可溶な分画を抽
出する。この抽出物を、一連の溶剤抽出によりさらに精
製して粗ＴＤＭを得る〔アズマ等、　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　ｔｈａ　Ｎａ目ｏｎａｌ　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ
ｉｔｕｔｅ　ｊ第５２巻、９５〜１０１頁（１９７４）
　、　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ　ＡｃｔｉｖｅＣｏｍ
ｐｏｎｅｎｔａ　ｆｒｏｍ　Ｍｙｃｏｂａｅｔｅｒｉａ
ｌ　Ｃａ１ｌＷａｌｌｓ、　１．　ｌ５ｏｌａ目ｏｎ　
ａｎｄ　Ｃｏｒｎｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆＣｅｌｌ　Ｗ
ａｌｌ　５ｋｅｌｅｔｏｎ　ａｎｄ　Ｃｏｍｐｏｎｅｎ
ｔ　Ｐ　３を１照のこと〕。この記載全引用によりこの
明細書に組み入れる。アズマ等により開示されたようＫ
、ｍＴｏＭを、微粒シリカダル遠心クロマトグラフィー
によりさらに精製し、精製ＴＤＭを得ることができる。

以下金白 この発明の組成物の第３成分はクロロホルム−メタノー
ルで抽出したエンドトキシン糖脂質のアセトン沈澱副生
物（ＡＣＰ　）である。前記のごとく、このものの組成
及び調製方法は、ビリ等の発表においてさらに詳細に開
示されている。この記載を引用によりこの明細書に組入
れる。

ＡＣＰは、ＲＤＩについての記載において言及した任意
のエンテロバクテリアッセ〜から調製することができる
。

ＲＤＥＸＴＤＭ及びＡＣＰを混合して強力な抗腫瘍活性
を有する組成物を形成する。ＲＤＥ　−ＡＣＰ　−ＴＤ
Ｍ組成物により治療することができる癌には、ウシ扁平
細胞癌、線維肉腫、ウマ類肉腫、ウマ黒色腫、ウマ扁平
細胞癌、イヌ乳癌、イヌ腺腫、及びイヌ黒色腫のごとき
動物の腫瘍、並びに、乳癌、肺癌、腔−直腸腫瘍、悪性
黒色腫、扁平細胞癌及び卵巣癌のごとをヒトの腫瘍が含
まれる。

この発明の組成物は、油滴乳前のごとき医薬として許容
される媒体の形で注射によシ投与され、そして好ましく
は、以下に詳述する方法によシ直接腫瘍中に投与する。

組成物は、例えば凍結乾燥によ多安定化し、そして活性
を失うことなく再調製することができる。動物を治療す
る場合、注射におけるＲＤＥの譬は約６．２５〜２５０
マイクログラム／ａである。ＡＣＰの童は約３７５〜７
５０マイクログラム／ｄであシ、そしてＴＤＭの童は約
１２５〜２５０マイクログラム／ｒｔｔｌである。

腫瘍に注射する薬剤のｍｅ数は次の表に従って腫瘍の大
きさによシ決定する。

注射当たりの最大投与量はＲＤＥは約４５０θマイクロ
ダラム、ＡＣＰは約４５００マイクログラム、そしてＴ
ＤＭは約１５００マイクログラムである。

治療の過程は、１週間の間隔で５回以下の注射から成る
。

油滴乳剤のごとき適当な注射用媒体中のＲＤＥ　−ＡＣ
Ｐ　−ＴＤＭは、ヒト腫瘍に直接投与することかできる
。１回の注射におけるＲＤＥ及びＡＣＰの量は、それぞ
れ約５０〜１０００マイクログラムである。

１回の注射におけるＴＤＭの量は約５０〜３００マイク
ログラムである。ＲＤＥ及びＴＤＭの好ましい１投与レ
ベルは約１２５〜１７５マイクログラムであり、ＡＣＰ
の好ましい１投与レベルは２７５〜３２５マイクログラ
ムである。これらの数値は典型的な７０時の成人患者に
対するものである。注射は毎週１回行い、合計１５回以
下とする。一般に、注射の場合約５０〜５００マイクロ
グラム／ｒｎｌ　（Ｑ　ＲＤＥ　、約５０〜５００マイ
クロクラム／ＩＩＬｌ）ＡＣＰ　、及び約５０〜１５０
マイクログラム／ＩｎｌのＴＤＭを含有する組成、物が
好ましい。

１・Ｉ 前記のごとく、温血動物及びヒトの治療に用いる組成物
は油滴乳剤の形で使用することができる。

油の使用盪は組成物の合計容積に対して約０．５〜３．
０容量チとする。約０．７５〜１．５谷蓋チの油を用い
るのが好ましい。このような油の例には、軽鉱油、スク
ワレン、７−ｎ−へキシルオクタデカン、コノコスーノ
９−オイル（Ｃｏｎｏｏｏ　ａｕｐｅｒｏｉｌ）及びド
ラケオール（Ｄｒａｋｅｏｌ）　６　Ｕ　Ｒ鉱油〔ぺ／
レコ（Ｐｅｎｎｒｅｏｏ　）社、ペンシルバニア〕が含
まれる。

混合物を含有する均質化油を、場合によっては混合に先
立って塩溶液に溶解した洗剤と混合する。

洗剤の菫は、組成物の合計接値に対して約０．０２〜０
，２０谷−ｉチ、好ましくはｏ、ｉｏ〜０．２０容輩チ
である。トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）　−８０、及びアル
ラセル（Ａｒ１ｏｃｅｌ）（アトラス・ケミカル（Ａｔ
１ａｓ　Ｃｈ、ｍＩｃ＆ｌ）社製〕を含む任意の常用の
洗剤を使用することができる。

次に、洗剤の添加によって得られた混合物を均質化し、
！ｌｉＩ微疏観祭において高いノ！−センテノの油滴が
ＲＤＥ及びＣＷＳにより被覆されている懸濁液を形成す
る。

次に、例によりこの発明をさらに詳細に説明する。但し
これによりこの発明の範囲を限界するものではない。

５４３　１９７３　　年の方法によシ調製したメタノー
ル−クロロホルム沈澱の試料６５０〜ヲ、凝縮器が装着
されそして超音波発生機中に浸漬されたミロ丸底フラス
コ中で、０．　Ｉ　ＮＨＣｌ　１５０Ｒ１に懸濁した。

超音波処理の後、ｆラス装置を１２０℃に保持された油
浴に入れ、フラスコの内部温度を溶液の沸点に近い温度
又はそれを超える温度とした。口の１つを通して窒素ガ
ス源に連結した毛細管をフラスコに装着することにより
過熱を最小限にした。原水分解中窒素を流し続けた。加
水分解金３０分間継続し、この後溶液を水浴中で冷却し
、超音波処理することにより固形物を分肢せしめ、そし
て試料管に分注した。フラスコを蒸留水で洗浄すること
によυ、フラスコ壁に付着しているすべての固形物を取
シ出し、洗液を試料管中のＭＭ液に加えた。１２．００
　Ｏｒｐｍにて８０分間遠心分離を行った。上澄液をデ
カントし、そして廃棄した。固体残渣を蒸留水に再懸濁
し、懸濁物が十分に分散するまで超音波処理し、そして
再度遠心分離した。さらに遠心分離工８を反復した。残
渣を蒸留水にとり出し、凍結し、そして凍結乾燥して３
８２〜の粗脂質Ａを得た。この１５０ｍ９を冷アセトン
（０℃）で処理することにより脂肪酸を除去し、超音波
処理し、そして、５℃において、ワットマン（Ｗｈａｔ
ｍａｎ）　Ａ　１重力濾過器により涙過した。乾燥後、
１００〜の粗無毒化エンドトキシンを得た。

例２．粗無毒化エンドトキシンの調製 ＭＣＰ　（メタノール−クロロホルム沈＃）の試料１２
０Ｉｎ９’ｋ１２解の無水メタノールに懸濁し、超音波
処理ｅこよう固形物を分散せしめ、そして螺着ビン（ｌ
　Ｘ　１０　ｍ　）　６本に分注した。各ビンに０、２
　ＮＨＣｌを２ｍｌずつ刀１ｊえ、そしてこうして得た
懸１１４液を沸騰水浴中で４５分間インキュベートした
。力０本分解後、ビンを氷水浴中で冷却し、そして約１
０分間２５０　Ｏｒｐｍで遠心分離した。上澄液を廃棄
し、残渣に２：１クロロホルム／メタノ一ル混合液５ｔ
ｎｌを加え、溶解した。ビン当たり２ｒｎｌの水を加え
、そして溶液を混合した。２相浴液を２５０　Ｏｒｐｍ
にて１０分間、再度遠心分離した。

上層の水相を廃棄し、そして各ビンに４＝１クロロホル
ム／メタノ一ル混合液ｌａｇを加え、透明な浴液を得た
。溶液を集め、そしてロー°タリーエノ４ボレーターに
より浴剤を蒸発せしめた。残渣を高真空下で乾燥し、そ
して凍結乾燥して４５＋１１９の粗脂買Ａを得た。この
物の２０〜を冷却アセトン（０℃）で処理し、超音波処
理し、そして５℃にてワットマンノに１重力濾過器で沖
遇した。乾燥後、１３　ｍｙの粗無毒化エントドキシ／
を得た。

例３．精製無毒化エントドキシ／の調製Ｌ）Ｉ−２０−
１００のファルマシア（Ｐｈａｒｍａａｉａ）（粒子サ
イズ２０〜１００ミクロン）１１０．！ｉＪをクロロホ
ルム／メタノール２　：　１０ｉ−合液６００ｒｎｌと
混合し、これを３０分分間−た。こうして得たスラリー
を、加圧装置を装着した２５Ｘ１０００園のガラス製ク
ロマトグラフィーカラム（ＢＲＬラボラトリーズ製）に
入れた。充填した後、テフロン製耐圧チューブにより、
このカラムをｌ５ＣＯポンプによりカラムを通過せしめ
た。例１の方法に従って調製した粗無毒化エンドトキシ
ン１００■をクロロホルム／メタノール４　：　Ｉ　Ｙ
ｍ　合Ｙｆ＆　２．５ｍｌに入れ、これをサンプルルー
ツを通してカラムに適用した。流速をｌ　ｍｅ　７分に
下げ、そして１５０ａｌｌの解離液を集めた仮、流出液
をフラクションコレクターに供給した。４ｒｎｌずつ分
画し、分画を薄層クロマトグラフィー分析（メルク社製
０．２５＋＋＋ｍｊ−厚の薄層板を使用；溶離液として
クロロホルｌ）り／−ル／Ｈ２０／ＮＨ４０Ｈ（５０：
　２５　：　４　：　２）を使用〕することにより精製
無毒化エンドトキシン分画を確認した。

精製無毒化エンドトキシン分画を一緒にし、浴剤を蒸発
せしめ、３０１ψの精製無毒化エンドトキシンを白色粉
末として得た。

以下余白 例４．精製無毒化エンドトキシンの調製ＤＥＡＥ　−セ
ルロース〔ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＤＥ−３２１
３３，！ｉ’を１５０ｍ１の氷酢酸に懸濁し、そして１
０分間ゆっくυと攪拌することによりスラリーを得た。

この混合物を一夜放置した。

スラリーを２５Ｘ４００ｍｍＯカラムに注入し、軽くた
たきながら沈降せしめ、その後過剰の酸を流去せしめた
。カラムを２０００ｍ１のメタノールで洗浄し、次にク
ロロホルム／メタノール４：１混合液２００ｍ１で洗浄
した。例１の方法に従って調製した粗無毒化エントドキ
シ／試料１ｏＯＩｎ９を、クロロホルム／メタノール４
：１混合液又はクロロホルム／メタノール／水８０：２
０：１混合液３ｍｌに入れてカラムに加えた。カラムを
、クロロホルム／メタノール４：１混合液３５（１＋ｇ
で溶出し、続いてメタノール／水９９：１混合液３００
ｍ１ｌで溶出した。線形勾配装置を使用し、１００％メ
タノールで始−ま、９０．２Ｍ酢酸を含有するメタノー
ルで終る２００ｍｅの溶離液を用いて線形勾配溶出を行
った。溶出速度を６ｍ１１分とし、１５ｆｆｉｇずつ分
画した。バートレット（Ｂａｒｔｌｅｔｔ　）　Ｇ、Ｒ
。

Ｊ、　Ｂｌｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２３４　、４６６〜４
７１（１９５９年）の方法に従って、他のすべての分画
の全燐含蓄を分析した。分画を集め、ロータリーエバホ
レータ上でほとんど乾燥する−まで蒸発せしめ、そして
分液漏斗中のクロロホルム／°メタノ−／ｌ／２：１混
合ｉｆ１０ｍｌ及び０．００１Ｍ酢１１１４０ｍｌ中に
溶解した。下層を分離し、ワットマン通２ｐ紙で濾過し
、蒸発乾燥し、１９．２．＋＋夕のｎ製無毒化エンドト
キシンを得た。

例５゜ 約９閤に増殖した系統−１（ｌ賜金担持した系統−２モ
ルモット８匹の腫瘍組織に、ＲＤＥ及びＡＣＰをそれぞ
れ１５０マイクログラムとＴＤＭ５０マイクログラムを
注有するｄ　Ｑ、　４　ｍｌを直接注射した。

投与期間の経時において、谷モルモットを検査ず心こと
によりＭｉ鴎の増殖に対する注射治療の効果を測定した
。１５実験動物中１４動物において）Ｉ；ｆｉ、場増殖
の完全な退化が見られた。

前記と同じ大きさの系統１〇−腫瘍を担持する系統−２
モルモアトロ匹ずつの２群を用いて対照実験を行った。

６匹のモルモットから成る第１群にはＲＤＥ及びＴＤＭ
をそれぞれ５０マイクログラムずつ含有する０、　４　
ｍｌの液を１回注射した。６匹のモルモットから成る第
２群には、ＲＤＥのみ全５０マイクロダラム含有する液
６．４　ｍｌを１同注射した。

試験の終了時に各モルモットをｉ査して腫瘍の増殖に対
する対照の効果を測定した。１２匹のモルモットすべて
において、腫瘍の増殖の退化又は鎮静の証拠が示されな
かった。

特許出願人 リビイミューノテエム　リサーチ、イスシ刊ｅレイティ
ド特許出願代理人 弁理士　育　木　　　朗 弁理士　西　舘　和　之　　　　　　　　　　　、［弁
理士　福　本　　　積 弁理士　山　口　昭　之

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、（ａ）　　検出可能な量の２−ケト−３−デオキシ
   オクタノエートを含有せず、３５０〜４７５ｎモに／Ｉ
   Ｒ９の燐及び１７００〜２０ｏｏｎモル／ダのＪ脂肪酸
   を含有するＷＩ製無襟化エンドトキシン、 （ｂ）　　クロロホルムとメタノールとの混合物で抽出
   したエンドトキシン糖脂質のアセトン沈澱副生物、 （ｃ）トレハロースジミコレート、 のそれぞれを治療上有効な蓋含有し、そして（ｄ）　　
   医薬として許容される担体、を含んで成る医薬組成物。 ２、　　′ｎ１１！！！無毒化エンドトキシンの治療上
   有効な童が約４５００マイクログラム以下であり、前記
   アセトン沈澱副生物の治療上有効な量が約４５００マイ
   クロダラム以下でらり、そしてトレー・ロースシミコレ
   ートの治療上有効な量が約１５００マイクログラム以下
   である特許請求の範囲第１項記載の組成物。 ３、凍結乾燥物の形又は油滴乳剤の形でろる特許請求の
   範囲第１項又は第２項記載の組成物。 ４、（幻　検出可能な量の２−ケト−３−デオキシオク
   タノエートを含有せず、３５０〜４７５ｎモル／ＩＡ９
   の燐及び１７００〜２００Ｑｎモル／ダの脂肪酸を含有
   する精製無毒化エンドトキシン、 （ｂ）　　クロロホルムとメタノールとの混合物で抽出
   したエンドトキシン糖脂質のアセトン沈澱副生物、 （ｃ）トレハロースシミコレート、 のそれぞれを治療上有効な量含有し、そして（ｄ）　　
   医薬として許容される担体、を含んで成る医薬組成物を
   温血動物に投与することを特徴とする該温血動物のガン
   の治僚方法。 ５、約６．２５〜２５０マイクログラム／−の稍製無毒
   化エンドトキシン、約３７５〜７５０？イクログラム／
   −のアセトン沈澱副生物、及び約１２５〜２５０マイク
   ログラム／ｒｎｌのトレハロースノミコレートを含んで
   なる前記組成物を、１週間間隔で５回以下の注射により
   腫瘍組織に直接注射することにより前記温血動物に投与
   することを特徴とする特許請求の範囲第４項記載の方法
   。 ６　約５０〜１０００マイクログラム、好マしくは１２
   ５〜１７５マイクログラムの精製無毒化エンドトキシン
   、約５０〜１０００マイクログラム、好ましくは約２７
   ５〜３２５マイクｐグラムのアセトン沈澱副生物、及び
   約５０〜３００マイクログラム、好ましくは約１２５〜
   １７５マイクロダラムのトレハロースジミコレートを含
   んで成る組成物をヒトに投与することを特徴とするヒト
   のガンの治療方法。 ７、約５０〜５００マイクログラム／−の精製無毒化エ
   ンドトキシン、約５０〜１０００イクログラム／−のア
   セトン沈澱副生物、及び約５０〜１５０マイクログラム
   ／ｒＩＬｔのトレハロースジミコレートを含んでなる組
   成物を、１週間の間隔で１５回以下の注射により腫瘍組
   織に直接注射することにより投与することを特徴とする
   特許請求の範囲第６項記載の方法。