JPS58222026A - 抗ガン性物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本稀明汀新暁な抗ガン物質に関する。史に詳しくは溶血
性連鎖球菌の菌体溝底成分である抗ザン物質Ｖｃ嬶ｌす
る。

メロ血性連ｍｕｍ　（ｓｔｒｇｐｔｏａｏａａｘａ　ｐ
ｙｏｇａｎａａ　）に丹樽、敗血症、産褥熱等の病原菌
である。しかしながら溶血性連鎖球菌の一部が抗腫ｉｔ
ｉ＃ｉ性會有していることは古くから知られてお＃７、
今日％臨床的に屯抗ザン剤として用いられるようになっ
ている。

副本らは、溶血性連偵球菌の抗Ｉ！ｌ瘍活性に溶血性連
碩球１１１ｉ１　（１）　ＸトレゾトリジンＳ　（Ｓｔ
ｒａｐｔｏｌｙａｉｎＳ）の幸生能と密接な関係があり
、ストレフ’）ＩＪジンＳＯ搬生馳に７にする溶血性連
鎖球菌？ストレプトリジンＳ重生能倉維持した培養条件
で培養することにより、抗ｉ、ｅ、　ｉ物質が産生妊れ
ることｔ明らかにしている。（ＧＡＮＮ、５５．２２５
〜２３２、Ｊｕｎａ、１９６４　：Ｊａｒｐａｎ　Ｊ、
　ｂ；ｚｐ、　Ｍａｄ、、８４＋３７，１０９〜１１８
．１９６４：および金沢大学がん研究所年令臥　ｌ轡％
　１４１−１５３．１９６７参照１０ 筐た、溶血性連鎖球菌から抗軸喝物質分製造する方法と
しては、従来いくつかの方法が知られてイル（時分ａｓ
ａ　ｓ　−ｌｅ　４７号、幹公昭４８−４８８４１号お
よび特公昭４９−６０９６号公報、並びＶＣ英国特許第
１，１６亀１１３号明細書参照）。

このうち、特公昭４Ｂ−４１８４１号に、溶血性４鎖ゆ
に酌會俵械的手段により破砕して無細胞抽出液を製造し
、蝋ｆ俊アンモニウムで」Ｕ析し、６０〜８０チ扇和味
酸アンモニウム濃度で沈殿を析出せしめ、次いでイオン
交換体あるいはｒＡ／濾過削と接触せしめ、ｆ＃製され
ｔ抗肺瘍物質を製造する方法ｔｌ−開示している。同公
報の記載によれげ、この梢製嘔れた抗神瘍物質に蛋白質
であって糖を含１ず、セファデックスＧ−２００ＶＣよ
って測定し九分子粱はｚｏｘｔｏ”の分子ｔ？ｆ−示し
、そし１ｐＨ５で５℃ＶＣ保つと２４時間以内にかなり
失活する。

本Ｑ明の抗ガン物質に、溶血性庫蛙Ｒ＠の菌体（生国又
はペニシリン癖により処理して死滅させ九一体のいずれ
でもよい）を機械的に破砕し、得られた破伜物？ｐＨ約
７．５の媛１衡溶液で１出して抽出物？得、こ３月出出
物から未ｊ砕閲、破砕面の細１飢　りがシーム分画を分
類除去し、得られた）− 活性成分ケバむ画分ｖｃ、温度処理、ＤＮＡ除去、透析
、遠心分ｌａあるいは（メを安分画等の陳作會！布称し
、次いで得られｔ画分ｔ／・イＰロホピックインタラク
ションクｏ”ｖトメラフイー（ｈｙｄｒｏ′ｐｈｏｂｉ
ａｉｎｔｅｒａｃｔ　ｉｏｎ　ａｈｒｏｍａｔａｇｒａ
ｐｈｙ　）に付すことにより製造することができる。

１　　　　　　　かくして傳られｆｃ本発明の抗げン物
Ｗは、上記操作につづいてさらにイオン交換クロマトク
ラフィー、２ル濾過クロマトグラフイーに付すことがで
き、さらＶｃｍ留水に対し侍所すること４でき、それに
よって史に活性の茜められた状態で提供すって（伊記、
）臂ス染色の瑣（ｄ）および績分叶の項ω）ＱｊＨＬＨ
ｊつｒルＰｄｔ４カラムクロマトゲラフィーによれば十
血清アルゾミン、（平均分子所６７．０００）よりも大
きく牛ｒ−クロゾリン（平均分子鎗１６へ０００）より
も小さい分子ｆ？持っている（後記、ポリアクリルアン
ｐｒル電気泳勧法の項（６）参照）、） 本発明の活性ｆｔ、（分は例えは、第１表に示し友よう
ＶＣ順次分離、精製し、取得される。

・ト発明の活性成分は、等゛酸点が４より東高く、巨つ
５より本低い両性物餉゛であり、拗；祉白質の特性を示
し、ゲル濾過カラムクロマトクラフィーによれば、その
分子に＃は十面嘴アルゾミン（平均分子ＶＦ６７．００
０）より本大きく牛ｒ−ｚロブリン（平均分子量１６０
，０００）よりも小さい。ま友、ポリアクリルアミド（
７，５％）ケ゛ル宵、気氷勧法によれば０，５〜０，６
のｕｆ値金ホし、主たるアミノ酸成分としてアスノンラ
ギン飲、クルタミンＬｙ、ノでリン、ロイシン、イソロ
イシン、リジンおよびアルギニン紫バ有する。

本発明の活性成分に、ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよび１ｎＶｉ
ｖｏの試験で漬れた抗ガン活性余水し、そして毒性′？
ｒ４Ｅ有さないかあるいは有していても非電に小さい。

４：発明の活性ｂｚ分は、非経口的に父はｆ４口的に、
好１しくに非経口的に例えば静１賊内、皮下、腹腔内、
Ｍ＋１鳴内に（９与することができる。

本発明の活性成分は、患者の病状、年令、体重等によっ
てＪ１４なるが、通常約１啼〜約１００岬／Ｋｆ体市、
好ましくは約１〜約４０ａｐ／Ｋｙ体重の投与量で、１
日ｔ　ｌｒＪ〜数ＩＭに分けて患者に投与することがで
きる。

不・ｇ明の活ｌト１成分は導独で、又は薬学的に許容さ
れる相体あるいは希釈剤等と一緒【投与することができ
る。例えば、注射剤として用いる場合には、生理的食噌
水に溶解して用いることができる。

注射剤は注射液として予めアンプルｖＣ結めておくこと
ができるが、７°１空４の直前ＶＣ本発明の活性成分Ｑ
）−車紘硯造丑凍結乾燥品？生理的灸珈水ＶＣ俗解して
開動することもできる。

以下ＶＣ実１勺列全−二白１ｉ’／し、本発明？更に詳
細に悦明する。

実　施　列 菌体の晴餐 浴面性連蹟球ｍｓｘ株をウラ伊およびガンザラス（Ｗｏ
ｏｄ　Ａ、　Ｊ、　ａｎｄ　Ｇｕｎａａｌｕａ　１．　
Ｃ）　（Ｄ％地（Ｊ、Ｂａｃｔａｒｉｏｌ　、、　４４
、［３〜３４１　（１９１２）参照）１８０を中で３７
℃で１２時間啼讐した。

繭体からの１ｆ＠構［ｉ２画分の分離 Ｊ（ｊ１降の培＊液１に連硬凶心分〜１シ麿攪（日立特
作所製２０　Ｐ　／＜凍心機、ｆｔＰＲｃ−１８０−タ
ーを使用）にかけ４８７．８９ＣＩ）湿菌体′に侍た。

泥状の湿菌体（調泥）１−４．（衝ｆｉＭｉ’−７５（
１０ｍＭ酢酸マグネシウムを含有するｘｏｒｎＭトリス
ハイＰロキシアミノメタン緩衝液金濃塩酸でｐ　Ｈ７，
５としたもの）の充分−で光分子Ｃ洗練した。由られ友
洗Ａ１画１１容にガラスピーズ４容およびＭｉ’−７ｓ
　　　。

ｌ谷をη１１えて泥倉し軟混合泥倉得た。この軟混廿西
独国、Ｅｄ　ｍａｎｄ　−Ｗａｈｌ　ｓｒ社製）を用イ
エ氷冷下、４．５　Ｑ　Ｏｒ、ｐ、ｍ、の東柱下で２０
分間機械的に洗滌し、繭破砕体液を分離した。この濾過
液に液にさらＶｃｌ　０５，０００ＸｉＦ、　２時間の
遠心を楕しテ（Ｂｅｏｋｒｎａｎｎ社ａＨ遠心分１１１
ｔ機Ｌ　３−５０　）リポゾーム分画を取り除き、黄慎
透明な超遠心上バを液（以下ＳＣＥという）　＆　Ｏｏ
　ｓ　ａｔを得皮。この５ＣＡ７全４ｆｉ℃で８θ分間
加熱処理し、生じた沈殿（ｌｌ−３１，２００Ｘｆ、３
０分間の遠心分轄で除去した。この上Ｍ１４［％　２０
畳ストレプトマイシン（明治製蛎→）殉）含有のＤＢＡ
−８５０＊壇化ｉ。

ナトリウム０．１４Ｍ、塩化カリウム？−７ｍＭ、リン
酸二ナトリウム１２水塩ａ　１ｍＭｈよびリン酸−カリ
ウム１．６１ルＭを宮む水浴鏝（以下、Ｄｕｔｈ・−ａ
ｃｃ・Ｏ−基礎液Ａ液という）−「組織培誉」２５〜２
７０．１９６４年朝倉剰店発行尽叫−會２０慢水酸化カ
リゆム水溶故で約ｐ　Ｈ８，０ＶＣ請節したもの〕を攪
拌しながら徐々に上４己上獣液の捧零添加し、−晩装置
して生成した沈殿（主として、ＤＮＡとストレノトマイ
シンとの結合’ｌ？Ｉ）ｆｆｉ。

’　　　　　　　　１７，５（１０Ｘｆ３０分間の峨心
分＃により除去せしめた。得られ几上ｉ枕淑會セルロー
ズチューブに入れ光分稙）Ｄ　Ｍ　Ａ　−７５（Ｄｕｌ
ｂｅｃｃｏ　−）Ｓ導液Ａα）を外液として透析を行′
）た。外液は数回交換した。この被涛祈沿に５５チ徊（
安砲和となるように細末錬安″Ｔ、除加した。（Ｄａｔ
ａ　ｆｏデＨｉｏｏｈｇ−ｒｎｉａａｌ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ、　ａｄｉｔａｄ　ｂｙ　Ｉｔ、　Ｍ、Ｃ，ＤＡ−
ＷＳＯＭ　ｅｔ、　ｃｌ、　　１９８９年、第２版、ｓ
ｌａｍの表躬照）。２時１％ｊ〜１晩放置後、この５５
優硫安皓和破珈＋Ｊｒ液を３１，２００Ｘｆ、　３０分
（…の遠心分離Ｖζ付し、上ｆｆＬ液を分子ｉｌｌした
。この上ｆ＆液に７０Ｓｆｌｌｌｅ安ｐＨ０１１へなる
ように細末硫安を再び脩加し、上記と市１様に遠心分１
ｌＩｌｔを行ない、その沈殿画分を社トた。この沈殿画
分會１０ｍ、Ｍリン酸カリウムＭ術液（ｐ　Ｈ７，０）
　２００　ｗｌＶｃ溶解ｅ　Ｌメ、同じ緩衝液に’？１
ｔ、てン岸析せしめた。仁こに、１８９ｍ１　（１）縫
包の被透析液葡得た。この１ｇ９ｍの被透析液（有効構
成両分）は、標準蛋白質として結晶午血隋了ルプミ７　
（ＡＲＭＯＵＲＰｈａｒｍａｏａｕｔｉ−ｃａｌ　Ｃｏ
、　ｙｙ）、ｐ　）　２用いＬＯ’ｕ）ｒ’ｊ／等の方
法（Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、　１９　：う、２ａｓ（ｔａ５ｔ）参照）に
従って含Ｍ飴蛋白債會副鴛したところ４．３　ｆ　ｆ、
）蛋白質（牛血７Ｐｌアルヲミンのせとして、以下１川
じ）會含有していた。

有効ｍ或向分からの有効構成成分の分離・精製ＩＩ）　
；・・イドロホピックインタラクションクロマトｚラフ
イー（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉａ　　１ｎｔｔｔｒａｏｔ
　ｉｎｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｌ　　：上記有
効横ｂｙ画分倉蛋白創融１〆が１５〜／−となるように
希釈し、これに５０％鎗安１１１１口となるようＶｃ細
末硫安會肴拌しながら徐々に２時間を要して離別し、−
便静＋ＩｔＬだ。この板金３１．２００Ｘｆ、２０分間
の遠心分離に付し、上澄液＠　７　ａｊ（Ｌｔ壜白餉１
＋ｔｌ、ＧｏＯ〜）余得た。この上す成金、５０％飽和
の睦安紮含有したｌｏｒｎＭ１７ン酸カリウムＰｉ備Ｍ
（ｐＨ７，０３で予め平衡化しておいたオクチル−セフ
７ｏ　−、ＺＣＬ　−４８（Ｏｃｔｙｌ　−８ａｐｈａ
ｒｏａｅ　ＣＬ　−４Ｂ　、　　Ｐんａｒｍａｅｉａ　
ＦｉｎｅＣｈ＠ｍ１ｏａｌｓ社丁輪）のカラム（エクセ
ルクロマトカラム；　２．６　Ｘ　４０　ｃｍ　）上Ｖ
Ｃ？！５加し、硫安＋７’ｌｉ　Ｍ　を下げ、一方エチ
レンクリコール（和光紬薬社製）−東金１けるいわゆる
グラリエント溶出法［４％噛度は硫安０優、エチレンＪ
　ＩＪコール５０％、総容噴２１）で塔出した。流速に
ハ？ン７’（１０ｇ００ＦＡ′ＲＰＡ’Ｘ　　Ｐｈ：１
ｔｌＳＴＡＬ１’ｌＣＰＵＭＰ、　　。

ＬＫＢ社製）でｌ＆５ｓ＋＃／Ａｒ／−にｉｌ＋４節し
、溶出液にｌＯｄずつに分！罰した。（ＵＬＴＲＯＲＡ
ＣＦＲＡＣＴ’ｌＯＮ　Ｃ０ＬＬＥＣＴＯＲ７００Ｇ、
ＬＫＢ社ｔ＃＞。

溶出終了後、各画分の２８０ａｍにおける吸光ｅｉＤＢ
＆−’ｔｏ　５ＰＥＣ７’ＲＯＰＨＯＴＯ−ＭＥ　Ｔ　
Ｅ　ＲＢｅａｋｒｎａｎ−Ｔｏｓｈｉｂａ社製、１ｃｒ
Ｒセル閘用）と伝導度ｇＥＸＩＪＡＮＤＯＭＡＴＩＣＳ
８２、Ｈａｃｋｒｎａｎ−Ｔｏｓｈｉｂａ社製便用）を
測定しｆｃ、また、適宜に溶出試鹸管を取りその内容の
一部をＤＢＡ−’１５に対して透析し、被透析液につい
て、Ｌｏｗｒｙ法による蛋白ＷＶ、および組織培書法に
よる抗カン活性’（＋−測定した。その結果を添付図面
の第１（シ１に示ｔｆｔ、、比較的高い活性を示した両
分（フラクション番号８４〜９０）を東め、限界ｐ過器
（ＵｌｌＰ−６２Ｒ１，東洋ろ紙社製）と東洋ウルトラ
フィルターＵＫ−１Ｏｆ用い３す／−の′、４累カス加
圧下で濃縮した。礒縮中Ｖζできた蛾かの浮遊物ｋ　１
　？、　５００　Ｘ　ＩＦ、２０分間の遠心分離によっ
て取り除き、得られｆＣ浴敵會１０ｒｎＭリン酸カリウ
ム緩衝液（ｐ　Ｈ７，０）に対して透析した。かくして
、上記１　Ｂ　９　ａｊの有効構成画分（（舶蛍白質葉
４３２）から被透析液（１膜種製画分）４６．５ｄ（総
蛋白質匍１０？ｌ１ｌｉｌｌｌが得られた。

なお、ギＩ峨＠ニーによる抗ガン活性は次のようにして
求め７５．：Ａ’αｇｌａ　Ｍｂ’ｈｉＪ＠地（白水製
薬−一）に　、ｔ、１４血清及び牛胎児血清（いずれも
ＧＩＢＣＵ社夷）を加えｔＪ＠地を用い、′２＊細胞と
しては、・・ムスター賭児ｌＩｌ勧閘由来の株化Ｔ　Ｉ
Ｉ　＃　Ｌ細胞ｒ用いた。試験液（各画分の涛ぜｆ液１
１７ン酸緩価塩翰浴液１ＰＢｓ）ＶＣ＠解させた後孔僅
０．２２μのミリポアフィルタ−で−過除セし、５Ｉｄ
の培地とＩ　Ｘ　１０　’　ＩＴ／１ｌ（１）４＋＋１
１；４トを入し７ｔ−／ヤ−Ｖ　（ｉ”ａｔｃｏｎＰｌ
ａｓｔｉｃ　ｄｉｓｈ）　Ｋ：、ｉ白質ノ終１１［カ０
．５４　ｆ／−となるように加えた。別ＶＣ対照のため
試験液を加えず１ｌｌｌ胞のみｔ入れたシャーレも用意
した。

これらのシャーレを炭酸カス＠曹器（池杢理化工業〔…
製１、Ｂ型）中に入れ、３７℃で約７２時間培傅した。

培＃終了後、トリグシン処理によって細胞忙はかし、ｌ
Ｏｓ＋ｊのＰＢＳ！Ｉｃ懸濁させて、コールタ−カウン
ター（Ｃｏ１Ｌｔｅｒ　ＥＬａｃｔｒｏｎｉｏａＩｎｏ
、製）で細胞数を唱傭１１シた。対照クヤー７の細胞数
からｊｖ４殖阻止軍（％）として結肇を表示した。

２）イオンｑ換Ｄｆｉｊ　ｚｌ　Ｅ−セルローズクロマ
トグラフィー： ＤＩ！；−５２セルｏ−ズ（Ｗａｔｔｍａｎ社製）ツカ
ラム（１，５Ｘ２　ａｍ）ｔ−１０ｍＭのリン酸カリウ
ム媛負液（７）＃７．０３で充分に平衡化せしめた。

このカラム上に、ＩＲ＃Ｉ！製画分２０〜２５ｄ；蛋白
′冴ｔｌ？９〜２２４η：約５９蛋白″祷／ｌｙゲル）
才陥１川し、ｌＯｍＭ　〜ｏ、　ｓ　Ｍ　ＩＪ　ンｒ貸
ＭＩＩＱ（ｐ　Ｈ７，０３のグラジェント１ｉ＋Ｊｊ法
で浴出せしめた。６Ｉｔ速？］ｌ−１５ｍ１／ｈｒ／−
とし、５ｄずつニ分１曲した。全７答出液は６　（１０
ｖ＋ｌであった。

浴出終了後、上記（１）のクロマトグラフィーの場合と
同様にして、各両分について２８０ｎｍＶｃあ・ける吸
′＃Ｓ畦と伝導度ｋ　１ｌｌｌｌ定し、適宜の分自試験
雷の内容の一部ｐＤＢＡ−１５ＹＣ幻してＴ１析し、破
ｊ改析液について、　Ｌｏｗｒｙ法による蛋白′ぼ蛸゛
および４織培暫法ＶＣよる抗力゛ン活性ｒ測゛相し友。

なお、抗カン活性は試嶋Ｙ汐の晰白誓蜂嬉度が０．１μ
２／ｓＩｌとなるようにし１癌ネ（ｂ胞に作用させ比。

その結、采ｒ際付図面の・ｕ２図に承した。

比較的高活性？示した１矧分（フラクション番号４３〜
４９）を果め、上記（１１のクロマト夛ラフイーの場合
と同様にして、嬢闇し、１７，５００ＸＳ’１５分間の
１４へ心分離ケ行なう九。

かくして、１段精製両分４５．５　ｍｌ　（総蛋白宵曽
４０７キ）から、２段精製（面分７．４　ｄ　（総蛋白
質Ｌｔ６７Ｌｎｆ）が１４÷られた。

（，３）　　ゲルミ戸Ａクロマトクラフィー：０、ｔＡ
ｆｌＪンｔ’Ｐ、′力ｌＪウム暖Ｑｌｆｉ（ｐ＃７．０
　）テ予め、ｉＶ−食自ヒづせたセファ１ツクスＧ　−
２００（５ｔｔｐｈａｄｅｚ　Ｃ；　−２００、Ｐｈａ
ｒｍａｏｉａ　ＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ　）のカラ
ム（Ｚ６Ｘ９７ｃｒｎ）ＦＣ１上ｉ己２段戸＃　１＃　
ｕ、ｉ！１分７．４　ｄ全１市１嶋させ、同じ緩衡漱で
７゛ｄ出、忙しめ１こ。浴出に上昇法で行ない、帽、速
を３、４　ａｔ　／　ｈ　ｒ　／　□、ｒｌとし、ｒｍ
浴出　ｆ　５　ｔｒｉずつに分画した。

浴出終了後、各画分の２８０ｎｍにおける（及光ｅを佃
定した。また前回同様に１１の分画浴液の　　　　　　
　、１一部をとり、１）ＢＡ−７５Ｙｃ灼して透析し、
得られた被透昨液Ｖこついて、Ｌｏｌｌ）ｒ’ｌｌ法に
よる蛋白誓鋪および、組試培婆法による抗ガン活性全測
定し皮。なお、抗〃ゝン活性に試験液の屓白・碕終譲験
が０．０５μｆ　／　ｍｌとなる工うＶＣシて癌細哨ｒ
ζ作用ぜしめた。その結果全添付図面の第３図に不した
。

比較的高活性金示した画分（フラクション番号４６〜５
６）ｉＶめ、上記ｆｌｌのクロマトクラフィーと同様Ｖ
Ｃして一縮した。

カくシテ、２　段梢製画分７．　ａ　ａｔ　（ｐ＋ｓ蛋
白’ｗｉｔ６７〜）から、３段留製暉分５．　”ｌ　ｍ
ｌ　（←を任白’Ｍ’　−ＩＪ３３８〜）が得られた。

（４）蒸貿水に対するＩη析： ３段精製画分５．２　ｍｌケ、−α貿水會外液とし、数
回これケ交喚しながら４２〜４８時間青析ぜしぬ友。生
ｆノｙした白色沈殿を１７，５００Ｘｆ、２０分間の遠
心分離ＶＣより除去した。かくしｔ１哄色、ｌ明の最高
精製浴液（４段梢゛凋両分）５．０ｍｊ（総を妖臼′Ｗ
炉１５ツ）紮伺た。

本発明の有効リイυｙ成分の物理的、化学的性質（α）
　ラウリル（〆ｃ酸ナトリウム（ＳＤＳ）−肩リアクリ
ルアばトゲゝル電、気泳動法 上記（４）の！・ψ作で肖られた最終精製溶液に、５Ｄ
Ｓ−ＩリアクリルアミＦ″（７，５％）ゲル電気を水仙
法に従ってシー・アイ・アシッドブルーａａ（Ｃ。

１、　　　ＡＬｄ　　Ｈｌｕｔｔ　　８　３　　、Ｃ，
）、　　　４２　６６０　＋Ｃｏｏｍａａ−ｓｉｅ　Ｂ
ｒ１ｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｗａ　Ｉｔ、以下同じ）　ＶＣ
より染色しり際、０．４〜０．５　ノ間ノＲｆ　（＋＃
、　４　＜　ｃｌ）　Ｈ％台約０．４６の／＜　／債金
示す１本のみのノｔンドゲ与える。

分子精吐知のｅｌｆ白′ＲすなわちチトクロームＣ（分
子＄１２，４００）、ミオ７ｏビン（分子１１７．８０
０１、キモトリゾシノーゲン、４（分子卵２４．７０（
Ｎ、オノ負ルブミン（分子−４５，０’００）および牛
１［ル消アルヲミン（分子噴６７．　ｏ　ｏ　ｏ　）　
ｃついてＲｆ　ＩＦ／１金同じ方法で求め、分子積とＲ
／　＋ｕｌとの関係を示す倹噴相（片λ１数グラフ）を
作成しこの検事＃線ケ用いて上記０４６υＲｆ＋直を示
すノ々ンＰのＴｙ’Ｚ分の分子Ｖｔ求めると約５０．０
００であった。

５１）Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法にウエー
ノは−およびオス択ゝ−ン（ＷｅｂｅｒαｎｄＯａｂ’
ｏｒｎ　）　ノ方法ｖｃ’＊ｌ；　／）　テ行ツ＊　（
Ｊ−Ｂ　＊　ｏ　ｔ＊Ｃｈｇｍ、、　２４４．４４０６
　（１９８９）’；５ｉｊｆりｃ＋す４わち、５ＤＳｆ
Ｋ：０．１％の割合で含むＨ（’ｆ＝　５　ｃｍの７５
係アクリルアミＰ！ル力ラム紮作成した。別に一ヒ１己
Ｃ＃終４＃軸７谷液の希釈液金１　係ＳＤＳ　と　５　
チメルカゾトエタノールの存在下で、１００’Ｃで３分
間加熱処理し、０．０１％のプロムフェノールヲルー１
偽紮加オ、た。この枳セ（〆α５０μｌ　ｖ　上’４ｒ
２　カラムトｌ／ｃ＋ＪＮ青しｔ（。このガ゛ラムｅ　
？４１、気泳拗装置（ミッミイＣ）学ζ１項目で取り付
け、そして泳＠槽［ｆ）、　１％Ｓ　ＯＳ　−０，１Ｍ
りン師ナトリウム’４？ｔ！ｒＭ（Ｔ）　Ｈ７，２）　
’に一’・均７’（し、カラム１本アタリＬｍＡで３０
分間続いて８　ｍ　Ａで泳動せしめ友。ブロムフェノー
ルゾル−の）くンＰがノル下万０．６　ｃｍの位置に達
した時点で泳動を終了した。泳勧終了喰カラムからゲル
柱（ｒ　ｆ４Ｖ、り出し、ｏ、　０２　ｑｂ　ｃｏｏｍ
ａｓｓｉａＢｒｉｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ　！＜により
よく知られた方法で染ｇ　Ｌ　タ（Ｃｈａｒａｍｂａａ
ルａｔ　ａｌ　　Ａｎａｌ　　Ｂｉｏｃル８ｍ−４０，
１５０（１９６７）参照）。

（ｂ）　　ポリアクリルアミドゲル箪気泳・助法上配（
α）で用いたと川じ帰終梢Ｉ＃溶液は、ｙｌ？リアクリ
ルアｆ）′１７．５慢）ゲル電気線切法に従ってＣｏｏ
ｍａｓａｉａ　　Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ　　Ｂｌｕａ　Ｒ
Ｖｃより染色しｆｃ際、０，５〜０．６の間のｔｇ嘴Ｉ
Ｌ渋くの喘合約０５４のＲｆ　：ｒ＃全示す１本のノ之
ンドと０，６５〜０．７５の間のｉｔ　／　！、♂Ｃ，
多くノ場合約０．７０ノ／ｌ’／＜ｉＭ　ｋ示す１本の
・雫ンドとの台Ｆｔｆ２本のノくンｆｅ与える。

一方、泳勧終了樺、ゲル拝金取出しＰライアイスで直ち
ｖｃ凍結させ、ノル・スライサーで２１１１１間隔に細
断し７ｊ、各１個のゲル切片について０．６−の〇ＢＡ
−’１５緩衝ｌＬ＆倉用いて脛ゲルから蛋白質を抽出し
、ｎｂｔＪｉ欣について絹峨焙憂法による抗ガン活Ｆｔ
をｆ＋、’、ｌべ九。０，５〜ｆ）、６の間のＲｆＯ口
称すバンドのＦＪｚ分が優れた抗、ガン活性を示した。

このＷ輪（ｂ）ｖζおける０、５〜０．６の間のＲ／’
：への・ミントは、上記（α）の実−結゛赳會台せ考に
、るとき、０、６５〜０．７５（１）ＩＩ４’Ｈ（１）
Ｒ’ｆ　Ｉｌｊ＆ｌ”ンＰノ！ｊ’ｉ分ノ二すと考えら
れた。

ポリアクリル了ミドゲル沖、気ｒＫ＃Ｊ法はオルンスタ
嘗υｒｎａｔｅｉｎ）の方法（Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、Ａ６ａ
ｄＳＯｉ　　ｌｌ’ｌ、３２１　（１９６４）削）＠）
および丁なわち、５ｗ＋Ｘ７Ｃ１ｎのガラス肯に先ず７
，５チアクリルアミ１分畑用ゲルｌｐＨ＆９）會６ｍ高
さまで充填し、その上Ｖ（さらＶｃ！　６％アクリルア
ミＰ濃縮用ゲル（ｐ　Ｈ６，８７’ｔ　１　ｃｍの高さ
で充填し、４？リアクリルアミＰゲルカラムを作製した
。上記酸終哨１ｉｌＪ！浴液の希釈液に同各の５０チサ
ツ力ロース溶沿竹１ｔ１．象陳劾；曹にｐ　ＩＩ　８．
９のトリス・クリシン１７’ｒｉａ−ＧＬｙｃｉｎ）（
０，３８Ｍ　）緩＜Ｊｉｌｔ−１Ｍ７ｊＬ、、カラム１
本あたり２　ｖｎ　Ａの９宵１流で２〜３時間泳ｉ力せ
しめｆｃ、泳、−坊蓼冬了＜−１，カラムからクル住全
１１スリＩＬ１シ、０．　（１２％（１）　Ｃｏｏｍａ
ｓｓｉａ　Ｂｒ１ｇ　ｌ　ｉａｎｔＢｔｕｇ、Ｒｖ（よ
り染色した。余分な染色は、２５チエタノールおよび１
０％酢醒混液を用いて脱色した。

一方、活性ｂＶ、分の分子駅は、セファデツ゛クスＧ−
２００ｉ−用いるゲルｆＦ’　１１４クロマトグラフイ
−（上記した有効構成画分からの有効構成画分の分Ｐ！
ｌ！−ｆ＃　失の１３）参照）によれは、牛血清アルブ
ミン（平均分子量１７，０００）と十−一グロゾリン（
平均分子４ｐ＃ｔａｏ、ｏｏｏ）との間の分子量、多く
の場せ、約ｔ　４ｏ、ｏ　ｏ　ｏの分子量ヶ示すことが
明らかにされた。

すなわち、チトクロームＣ（平均分子１１１２．４００
）、牛血清アルブミンおよび十ｒ−グロブリンの分子量
！関知のｔに白質の混欣會セファデックスＧ−２ｏｏｔ
曲過させて溶出し、それぞれ蛋白質の分子−トｒｔｌ出
＋ｈｃｏｆ＆ｉｔ　ｔ　ｖ　ｅ　＞　トノ関係？を喚袢
線（＃！ｒ対斂ＶＣゾロット）として作Ｆｉｔ（した。

活性成分（１）　Ｖ　ａ　ｎ　２６０　Ｔ　＃＋　ｔ）
　（？Ｊ！、　３図滲１州）、コレから上記分子銅が求
められ友。

（６）　　等′帛；点分ｌｌ１ｌｌ法 松尾らの方法（「化学の頒１１月増刊８８号、別（１１
ト、町しい液体クロマトグラフィー＃照）ＶＣ従りて行
った。その結果、３段精製画分の活性成分の等電点はｐ
Ｈ４〜５のｊｌｌｌ、多くノ場合ｖｃ　ｐ　Ｈ約４３で
あることが明らかとなった。

次のようにして等電点分画を行った。

；碑短点分画カラムにＦｉｌｌＯｍ用分画カラム８１０
０へＩＪ□（ＬＫＢ社製）を使用し７ｔ、充填液は、王
朝の如くして調製し友−溶液および炭浴蔽を用い、両性
相体１ＬＫＢ社製、Ａｒｒｐｈｏｌｉｎａ　（４０％ｗ
、Ａｔ）使用）の一度が１％となるように調製した。

濃溶液：両性担体の篩渣（ｐＨλ５〜ａ、　ｏ　（１）
　４のとｐＨ３，５〜１Ｏ１０のものとをこの頓で６対
ｌの割合で混会して個有し’ｆｔ−）Ｌ２５ｄに蔗糖水
溶液（５０％Ｗ／Ｖ％Ｅａｓｔｍａｎ　Ｏｒｇａｎｉｏ
　Ｃｈａｍｉａａｌａ社製）を０口えて６０ｘ／とし友
もの。

淡偶液二上記と同じ両性担体混液０．７５ｍｚｌｙ水紫
児えて６Ｏａ＋ｔｌＣ１，たものと、上記８段精製画分
を築留水で１督析して得７？：聯液２０ｄ（蛋白質含睦
７＃ｖ）に上＠ｄ　ｐ　Ｈ３，５〜ＦＳ、　０のＡｍｐ
んｏｌｉｎｍ（（ＡＤＯ，２Ｂ　ｗＪを加えた本のとの
２１１４幀。

上記濃溶液と２俺類の炎杉液と倉用いて、公知の密゛度
勾配の胴製法に従って、帳礪について乙横度の異なる２
４種の混液（いずれ４ｓ４．６ｄ）ｔ−２４本の試験管
内に作った。咋１４１ｒＩｋ度の高い方から低い方へ１
幀次試験管ｖｃ扁１〜属２４を付した。試験管ｌにｌは
噴浴欣そのものであり、試験管屋２４は淡溶液そのもの
であり、試験管ム２〜應７および４１７〜．廠２４にば
淡盾欣としてａ段ｖＷ坂（１９１分を合まない上昭炎俗
液？粗い、試験肯應８〜１６にに淡浴液として３膜種製
画分を含む上記淡溶液金用いた。その能、試Ｖ！管７瓢
０（−リン酸０．０５１１４を婚前した５０％閾砿溶液
Ｂ　ａｊ）、／に２５　（磯リンｍＯ，０５ａｌｆ添ｊ
）８した１植溶液５．０　Ｍ　）および、偏２６（水＠
　ｍｌ　）勿嘴製し友。

分画カラムに、＋帽１　（ｔｉｌｌから１１八次試験賃
点０〜２４までｆｒ、重層し、陽極側から嘔次試験育４
２５および２６葡重１＠シ、７００Ｖの定電圧で冷却下
に４８時曲浦亀した。　Ａ［４％了後、２ｍｉ／ｍｉｎ
の流速で２ｍｌ又は１．Ｏａｇずつに分取し、直ちに氷
冷下でｐＨｉ　ｊｌｌｌ定しｆＣｇＢａｅルｍａｎ　Ｅ
ＸＰＡＮＤＯ−ＭＡＴＩＣ５Ｓ−２、複合＠應：　Ｒａ
ｄｉｏｍａｔｅｒａＬｅｃｔｒｏｄｅ　ＧＫ２　ａ　Ｏ
２Ｃ’（ｉ１更用）。ｐＨ測定後、各両分の２８　（ｌ
　ｎ　ｍにおける吸光間を測定し、またＡｍｐｈｏｌｉ
ｎｅを除去するため各両分を蒸留水に対して置所し、こ
の被透析液についてｓ　ＬＯ’ｌＤｔ”ｐ法による蛋白
’Ｍ　＃と組織培養法による抗ガン活性全測定した。

（ｒ４　　Ａｘ　（Ｊ’　、４　Ｓ　ＨＰｅｒｉｏｄｉ
ｃ　ａｏｉｄ　Ｓｏｈｉｆｆｓｔａｉｎｉｎｇ　）　９
色、４段精製両分ｋ　（６）　ｉｃ　ＭＭＳ述したと１
１１じ方法で、ポリアクリルアミド電気泳動法に付し、
泳ｄＭのゲル柱２本を得た。項中≠ｉ晩り牡肩→→瞳−
１４峨〒これらのケル柱會それぞれＰＡＳおよび、Ｃｏ
ｏｍａｓａｉａ　Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ　Ｂｌｕｅ　Ｈチ
ル色Ｌ７ｊ。Ｃｏｏｍａａａｉａ　ｔｉｒｉｌｌｉａｎ
ｔ　Ｂｌｕｅ　Ｉｔでｔ色に染色され次バンドの６”ｌ
　噴と、ＰＡＳ染色法で紅色に染色されたバンドの位＋
ｔ’ｔｔとか一致した。この結果から、本発明の活性成
分は、種蛋白質でああことが６偵沼された。

（−）アスパライナー−＋！（Ａ　ｓＩｐａｒａｇｉｎ
ａａａ　）活性Ｊ、　Ｒｏｂｅｒｔｓらの方ｇ、　（、
／、　Ｂａｇ、９５．２１１７（ｌｅ、６８）＃照）　
ＶＣ従い、上記の如くして得友檎々の活性画分Ｖこつい
てアスパライナーぜ活性ｒ調べ友。その結束、５ＣＥｉ
＃４体からの有効構成画分の分離、＃照４、り献シーム
會除いた超遠心分祷上篩渣）４体からの有効構成画分り
分離で得られｆｃ有有溝構成１１１１１分よび４段端製
画分のいずれにもアス・セライナーゼ活性ｔ−藺めるこ
とにできなかつ１〔。

アスパラギナーゼ活性は、Ｌ−アスノ々ラギナ−ぜ（Ｓ
　ｉｇｍａ　Ｃｈｅｔｎｉｃａ１社製）ｉｎｒｌｌとし
て（ｔｉｌｌ定した。すなわち試験液とＬ−アスパライ
ナーぜｌ〜５μｙ　ト＠　含む（１，ｌ　ｔｒｉに、ｌ
嘩Ｌ−アスノ奇う４ン（Ａａｐａｒａｇｔｎｇ　）溶液
ａａｄｔ−７１１１，ｆ−１３７℃で１５分間インキュ
よ一トした。

こｎに、１．５　Ｍ　）リクロル酢酸ｍ液を加え、生じ
た沈殿をａ、ｏｎｏｒｐｍ、ｌａ分１…の遠心分熱で除
去し、上Ｍ液のαｌｄＫ＃菫水４．７　ｍｌと、ネスラ
ー試薬（和光紬薬■製）α２ｄを加えｔ０１５分後、４
５０ｎｍの吸光度（１ｃｍセル）全測定し、アスノソラ
ギナ−ぜ活性の有無倉調べた。

（１）アミノｆ＃分叶 上記（α）の５ＤＳ−ｓＰＩ）アクリルアミ）ｖ嘱気泳
動法により一本の７９ンＰとして隋認された等電点分離
後の活性画分（上記（（１）参照）について、アミノ　
　　　　　、［順分析を行りた。試料１．６岬會３分し
、それぞれ、２４時間、４ｇｎ存間および７２時：…、
６Ｎ−塩酸で１１０℃で刀０水分博し、イ替らｔ’Ｌ７
を試早＋につ＠−ｒミノ醸分析慎（日立製作改装、日立
ＫＬＡ−５）ｖｃより分樹し比。（カラムｌ：日立＠晴
、５０×０、　＆Ｉｃｍ　；開始＝ｐ）１３．２５．０
．２０　ＮクエンｒｖＩＭｋｏ、　ａ　５　ＮクエンＣ
浚ｌｙ＆　＋ｍ液、温就６５℃）。結果ｔ４４２表Ｖζ
示した。

、、、、／” ／″ ヒを己のとおり、アスノぞラギン酸、グルタミン酸の含
計が特に高く、その他、バリン、イソロイシン、ロイシ
ン、リソンおよびアルギニン含ｔも高い。アミノ酸の回
収率が低いのけ等電点分離時のＡｍｐｈ、ｏｌｉｎｅの
除去が充分でなかったためであるう。

（（７）　　構成糖および糖含量の分析！ ４段精製画分について、ガスクロマトグラフィー法によ
って構成糖の同定および糖含量の分析を行った。この両
分には構成糖としてアロース（ａｌｔｏｓｅ　）　　が
約１．５　重ｉ１％含有されていることが明らかとなっ
た。

ガスクロマトグラフィーによる分析のための試料の調製
は次のようにして行った。４段精製画分０）　Ｍ　圧乾
燥（Ｐ、Ｏ，、ＫＯＨ存在下）品２５０ｐ？に２Ｎ−Ｍ
ＣＩ　　を１ｄ加えた試験管を用意し、減圧下封管し、
１００Ｃで３時間加熱した。放冷後開封し、得られた試
料を減圧下で濃縮し、こねに水１＃＋７！を加えて再び
濃縮した。この水を加えて濃縮する操作をさらに２回（
全部で３回）くりかえし、塩酸を留去した。濃縮液に、
ｒＡ和炭酸水素ナトリウム２００μｔと無水酢酸１００
μｌを加え。

３時間室温に放置したあとＤｏｗｅｚ　５０　　（＃　
　）（０，５Ｘ３ｍ）に通過させ、樹脂をＨ，０１０ｍ
１で洗った。溶出液を減圧濃縮し、０．０５７Ｖ　　Ｎ
αＯＨ１００μｍ、　ＮａＢＨ，０，５Ｗを加え、３時
間室温に放置した。次に酢酸数滴を添加し、この液をＤ
ｏｗｅｘ　５０　　（Ｈ）　　（０，５Ｘ３ｃｒｎ）に
通過させ、樹脂を１０−のＨ，Ｏで洗った。溶出液を減
圧濃縮し、メタノール１ｄを加えて濃縮することを３回
くりかえし、減圧乾燥品を得た。このものにビリシン１
００μｔ、無水酢酸５０μｔを加え８０ｔｒで２時間加
熱したのち、トルエン１ｓ＋／を加えて濃縮した。トル
エンを加えて濃縮する操作を３回繰り返し、その濃縮残
渣に酢酸エチルエステル３０μｔを加え、その５μｔを
ガスクロマトグラフィーに付した。

１）−アｏ　−、；ｒ、　（ａｌｌｏｓｅ）　　２０，
１　について上記と同様にして調製したガスクロマトグ
ラフィー用試料について得られたがスクロマトグラフと
比較することによシ、上記本発明の４段精製画分はアロ
ースについてのピークと同じ位置（同じ保持時間）にピ
ークを有していたことからアロースを構成糖として含有
していることが明らかとなった。

また、Ｄ−マンノースを内部標準物質として４段精製画
分中のアロースの定量を、上記と同様にして試料を調製
しそして実施した。その結果、４段精製画分中のアロー
スの含値は約１．５重量％であった。

なお、ガスクロマトグラフィーは、島津製作所製Ｇ（、
ニー７．４型機器により、ガスクロムＱ　（Ｇα８ｃｈ
ｒｏｍ　Ｑ、担体）に液相としての０Ｖ−１’ｌを１％
担持した充填剤（８０〜１００メツシユ）を　。

充填したカラム（直径３ｍｍ、長さ１５ｍ）を用い、キ
ャリヤーガスとしての窒素を５２ｍｅ１分で通じて行っ
た。

カラムは１６０Ｃで１６分間保持したのち、３Ｃ／分で
昇温し、２１０ｔｌ’に到達した後はこの温度に保持し
た。検出器の温度は２４０Ｃに保持した。

（イ）組織培養法による各画分のｉｎ　Ｖｉｔｒｏ抗ガ
ン活性、すでに前述した方法に従い、各画分に適当な終
濃度で細胞増殖阻止率＠）を求め、その結果を活性曲線
に表わし、そしてその活性曲線から５０％増殖阻止率（
ＩＤ、。＜ｐｆ／１ｎｌ）　）を求め１ １こ。結束？Ｉ菖３表に示した。

第　　　３　　　衣 （ｏ）ＳＣＩ！Ｊ’および３段精製画分子ｒ）ｉｎＶｉ
ＶＯ抗カン活性、 動物は、体軍約２５ｆのＩＣＲ碓マウマウスいた。試験
数は、ＳＣＥおよび３段ｔげ製（１６１分全ＤＢ、４−
７６ＶＣ対して透析したものケ用いた。

マウスＶＣ１０６１１，１４のエールリッヒ覆水ガンａ
胞全腹腔内Ｓ植し、その２４時間鏝から試験液を１日１
回０．５１１ｊ又ｒま０．３　ａｌずつ連続４日１川１
夏腔内に投与し皮。対照９ｖＣは同体ＭＲ１ｉ１１の生
理貴堪水金与え友。細胞移＋Ｉｊｉ後６０日間鳩祭した
。結果を第４表に示した。

／″ ／′ ７／ 上記のとおり、不発明の活性成分は明らかに抗ガン活性
を示す。

（／う　毒性 ６匈令、坏亀約２３〜２５ｆのＤＤＹ、雌マウス’ｉ　
１＋１いた。４段梢！Ｉｌ＋！画分の凍結乾燥粉末２０
岬’１ＤＨＡ−７５、ａ、　ＯａＪＶｃ浴１９％し友。

除菌のためこの浴ｆ＆に０．２０μメンシランフイルタ
ー（東洋Ｐ紙札製）倉出いて一過し友。マウスへの注射
に際しては上記凍結乾燥品として１００雫／にｆとなる
ようｒこ注射液イ６°（ｏ、７ｏ−０，７６ｄ３に決め
ｆｃ０１２匹のマウスｔ４匹ずつ８峠に分け、各群を腹
腔内注射用、＃線内注射用および皮下注射用とした。各
解４匹のマウスのうち２匹に汀１濾過ｆｉＲ酒したＤＢ
Ａ−’１５液を江射しく対照用］、他の２匹には上記試
料面を注射し友。注射後のマウスの状暢ｉ、ｍ１日目は
経時的に、第２日１以１坤は１日１１！’！Ｉ定時に説
察し、また体重の両足を行った。

７日後間検を行った。６解の実−粂件０い表に示した。

／ ／ ／ ／ ／ ／ 、／ ／ 上記Ａ、Ｂ％Ｃ４！ｒ群は、注射後７日間の親察中試料
処置金受けたマウスに対照マウスと全く同様の＃ｉ勅を
示し例等の異常も示嘔なかった。

゛また、４群およびＢｎでは試料処置ケシけたマウスに
いずれ本（債かに体重の減少を示したが、Ａ解では６日
目に、ＢｉＦ３では４日目に王宮の体重に戻り、Ｃ解の
試料処置を受けたマウスは体重減少を何ら示さなかった
。

さらに、各群のマウスを解剖した結東、姉、肝、腎１＃
！および冑、１腸管等並びに胸、腹腔内臓器等の様子は
、試料処１ばを受けたマウスと対照マク人とで異なると
ころば例ら認められなかつｆｃ。

【図面の簡単な説明】

を 箔付図面の第１図、第２図および第３図は、それぞれ、
オクチル−セファローズクロマトクラフィー、１）ｔｎ
Ａｈ−セルローズカラムクロマトクラフィーおよびセフ
ァデックスＧ　−２００クロマトクラフイーによる各溶
出曲線を示している。 ｌＡ１図、第２図および第３図において、横軸はフラク
ション番号であり、線αは２８０　ｎｍにお１ｍ ける吸′＃、匿（／ｉ　　　）！ｌｂに蛋白質愉（μＶ
／−）、８０ 綽Ｃは抗ガン活性（チ）である。ま皮、繊１図および第
２図において＠ｄは伝導ｊｌｌ−（ｍひ）である。 曲２名 手続補正書 昭和５７年７　月２８日 特許庁ｋｋ目゛　　看　多相　夫　　　殿■事件の表示 ％　　　　　　　　　　　　＋ｉｊ　［１１ｂ　７年−
Ｔ・ｌ’ｕｉ　＋ａ１１．Ｊ４１０３．９０５　Ｑ２、
イ＾明の名称 仇カン１）吻、− ３補正をする渚 事例との関係　　特許出願人 ｌＪ：　　所り川水ｐ＋勾し＋ｉｌり内Ｖト明大学１査
３号名　　　称　台　　牛づ　　ノッ　弘 （氏　名） ４代　理　人〒１０７ 住　　所　　　東京都港区赤坂１丁目９番１５号（１）
　　明細書鉤目３貞１１行目の「１９３．２１」」を、
ｒ１主３．２６５Ｊと訂正する。 （２）　　同第２１頁７行目の１１．Ａｉｄ　Ｂｌｕｅ
　Ｊを、ｒ　１．　Ａｃ１ｄ　Ｂｌｕｅ　Ｊ　（！：　
Ｗ］　正スｂ。 （３）同第２３両７行目の［Ｃｈａｒａｒｎｂａｃｈ　
ａｔ　ａｌＡｎａｌ　ＨｉｏｃｈｇｍＪｆ、ｒ　Ｃｈａ
ｒａｍｂａｃｈ　ａｔ　ａｔ。 ＡｎａＬ、Ｈｉｏｃｈｇｔｎ、　　Ｊと訂正する。 （４）同第２４頁１３−１４行目の［ＡｃａｄＳｃｉｊ
を、「Ａｃａｄ、　Ｓｏｉ、　ｊと訂正する。 （５）　　同、１２４負１５行目の［Ａｃａｄ　ｊを、
ｒＡａａｄ、Ｊと訂正する。 以上 ２−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、溶血性連鎖球菌の菌体の會１４戒的破伜物勿抽出し
   て得られるｍ’　１１１体の構成１＋ｌＥ分であって、
   Ａ）ゲル濾過カラムクロマトグラフィーによる分子畑が
   十ＴＩＩ渭アルゾミン（・ト均鋒子Ｍ６７．０（１０）
   よりも大で珪り牛ｒ−グロブリン（モ均分子ｉ＃′１６
   ０，０００）よりも小１い値？示し、 Ｂ）等重点が４より尚く、目、り５よりも低い１直全示
   し、 Ｃ）ＰＡＳ染色法に従って紅色ｒｃ染色される糖蛋白質
   の特性金督し、且つ １））７．５％シ１ｔリアクリルアミドゲル電気泳動法
   ＶＣ従ってシーｅ了イ・了シツｒ−１を次−８８東色を
   施して測定し九場曾にα５〜α６の間のＲｆ値を本す こと金特徴とする抗がン物質。 ２　上記菌体のｍ酸成分がアミノ酸分析によってアスノ
   奢う−ン酸、クルタミン戚、ノ塗りン、イソロイクン、
   ロイシン、リジンおよび了ルーニンｔ、王たるアミノ酸
   成分として官有する特許哨求の一１ａ囲第１項の記載に
   よる抗ガン物質。