JPS5821426A - 細胞毒性物質を結合した重合体を活性成分とする抗腫瘍剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、制ガン剤等の細胞毒性物質を結合した重合体
及びその製造法に関する。 種々の薬剤を高分子（重合体）の担体に結合し、高分子
医薬とするととくより？、ｌｉ剤の親水性あるいは疎水
性を変化させ体内への吸収性あるいは標的機宜への移行
性が改良されることが考えられる。 また、体内ｔｃｔｄいて薬剤が高分子の担体から徐々に
解離・放出されるために、薬効の長時間にわたる徐放化
及び副作用の軽減が期待できる。 本発明者らは、抗腫瘍剤として用いることのできる高分
子＠薬を開発すべく、制ガン剤等の１／ｓＩ！毒性物質
の高分子化に関し鋭意研究を行ない１本発明に到達した
。 即ち１本発明は、式〔Ｉ〕で表わされる構成単位と ＣＯ，Ｚ 式（ＩＩ）で表わされる構成単位と、 （Ｃ％）ｎ＋ ０ ■ 式（ＩＩＩ）で表わされる構成単位 （ＣＨＩ）＊ ０ の合計が、全構成単位の少なくとも６０モルヂ。 好ましくは８０モルチ以上を占める、細胞毒性物質を結
合した重合体である。 式（１）において、２は水素原子又は１価の陽イオン、
例えばＮｍ　、　Ｋ　、　ＮＨ４である。…は１＾４の
整数な責わすが、好ましいのはａ−が１又は２の場合で
ある。なお１本発明の重合体としては１例えば、一層１
のものと自濁２のものが混在して−する様な重合体も含
む、好ましい重合度は１＠−２０００である。構成単位
（１）、　（ＩＩ）とである。 式〔璽〕におい

【、Ｙは分子中に７ミノ基又昏言イミノ
基を含む細胞毒性物質の７ミ一ノ基又＆言イミノ基反応
残基を表わす。 本発明における細胞毒性物質とは、そのままの状襲で細
胞に毒性を発揮する物質、ある（１６１そのままで番１
毒性を発揮しないが、生体内で細胞に毒性を発揮し得る
物質に転換し得る物質をいう。これらの例・とじては、 Ｐ−（ＫＮ−ビス（２−クロロエチル）〕フェニレンジ
アミン ｐ−（ビス（２−クロロエチル）７ミノ〕Ｌ−フェニル
アラニン（メルフ７ラン）ｆｉ　＋　７４ノーＮ−（ｐ
−ビス（２−りρロエチル）７ミノ〕フェニル−３−ヒ
トｐキシブーピオン７ミド 】−（β−Ｄ−７ラビノフラノシル）シトシンまたはそ
のモノホヌフエート ＮＨ。 υｈ ＞−（ｓ＃−（騰−７４ノアルキルホスホリル）−β−
Ｄ−７ラビノフラノシル〕シＦシン類（ｎ才２〜］２） Ｈ ］−（５’−（ｎ−７ミノフルキルホスホリル）−２−
デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル〕−５−フルオロウ
ラシル類 ＣＨ，Ｏ１’１ ２−アミノ−Ｎ−（ｐ−ビス（２−クローエチル）７ミ
ノ〕フェニル−３−ヒト−キシ−２−ヒドロキシメチル
プロピオン７！ド ｏｏｎ メトトレキセート ７クチノマイシンＤ マイトマイシンＣ Ｘ闘Ｈ，ダウノマイシン Ｘ層ＯＪアドリアマイシン 等が挙げられる。 本発明における１分子中に】級又は２級の７ミノ基を１
個含有し、且つ水酸基を１個又は複数偵含有する水溶性
の低分子化合物としては。 ２−エタノールアミン、３−プμパノール７Ｚン、４−
ブタノールアミン、λ３−ジヒドロキジープｐピルアミ
ン等が好ましく用いられるがこれらＫ１１ｌ！定されな
−１゜ 本発明の重合体中には、全構成単位の４０モルヂ未清の
範囲で、式（１）、　（ｎ）及び（ｍ）で衷わされる構
成単位以外の構成単位が含まれてい

【もよい。これらの
例としては、例えば、α位側鎖にカルボキシル基（又は
その塩）を有しないグリシン、７ラニン、フェニルアラ
ニン、セリン等のα−７ｉノ酸がある。かかるα−アミ
ノ酸からなる構成単位は、細胞毒物との結合には何ら関
与しないが、親水性重合体の水溶性や細胞毒物を結合し
て得られた重合体の脂溶性や水溶性を調節するのに役立
つ場合がある。従って脂溶性や水溶性の調節が格別に必
要ない場合には、かかるα−アミノ酸からなる構成単位
を含有しないものの方が実用的に有利である。 本発明の重合体のカルボキシル末端は、重合方法により
異る。例えばα−アミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物を重合
させる場合、用いる重合開始剤が水の場合は−ＣＯＯＨ
，７ンモニアの場合はなるが、生履的に無害なものなら
いずれでもよ％、１．ア１ン末端は過電７ミノ基である
。 本発明の細胞毒性物質を結合した重合体は。 全構成単位の少くとも６０モルチが式（Ｉ）ｏｏｚ 〔２及び−の定義は前述の場合と同じ。〕で表わされる
構成単位からなる重合体と、分子中に７ミノ基又はイミ
ノ基を含む細胞毒性物質を反応させることによって得ら
れる重合体に、分子中に１級又は２級のアミノ基を１個
含有し且つ水酸基を１個又は複数個含有する水溶性低分
子化合物を反応せしめることによって得られる。 本発明の重合体と分子中に７！ノ基又はイミノ基を含む
細胞毒性物質との反応は、通常、水又はジメチルホルム
７ミドやジメチルスルホキシド等の有機溶剤を反応＃１
１謀とする均一反応系で行なわれる。反応に際しては１
例えば１−エチＡ−３−（３−ジメチル７！ノブｐピル
）カルボジイミド塩酸塩やジシクロへキシルカルボシイ
ミドで重合体中のカルボキシル基な活性化してもよく、
あるいはカルボキシル基を混合酸無水物の形に活性化し
ておいてもよい０反応温度は−４０−１０・℃１反応時
間は１０分へ１０日間が適当である。用いられる重合体
と細胞毒性物質との割合は、所望される重合度によって
異なるが１通常重合体中の−ｃｏｏｚ基の５〜２０６％
［相当する量が適当である。 反応混合物から、透析、ゲルｒ過りｐマドグラフィー等
により、低分子物質を除き、凍結屹燥により水を除くと
目的とする重合体が得られる。次いで得られた重合体を
水又はジメチルホｋＡ７１ド等の均一溶液とし１分子中
に１級又は２級の７！）基を】個含有し、且つ水酸基を
ＩＩＩ又は複数個含有する水溶性低分子化合物を、例え
ば１−エチル−３−（３−ジメチ／４−７ミノプｐピル
）カルボジイミド塩酸塩や、ジシクＱへキシルカルボシ
イミド等の縮合剤の存在下に反応せしめる０反応温度は
一４０〜１００℃、反応時間は、１０分〜１０日間が過
当である。 用いられる重合体と細胞毒性物質との割合は、所望され
る重合度によって異なるが、通常重合体中の−ｃｏｏｚ
基の５−２００％に相当する量が適当である。 以上の逐次反応において、中間生成物（重合体）は必ず
しも単離する必要は無い。即ち、７ミノ基又はイミノ基
を含む細胞毒性物質を反応せしめたのち、引きつづき同
じ反応系に、分子中Ｋ１級又は２級の７ミノ基を１個有
し、且つ水酸基を１個又は置数個含有する、水溶性低分
子及び縮合剤を添加することによっても反応を進行させ
ることが出来る。 以下実施例によって本発明を詳述する。 実施例り 本爽施例は、下記の反応と生成物（細胞毒性物質を結合
した重合体）の抗腫瘍効果を示すものである。 、４ ｃｍ−ｃｍ、ｃ鳥ｃｏｏｎ ＣＨ−Ｃ％Ｃ１ｉ＠ＣＯＮＨ−ＣＭ、ＣＭ、ＯＨＯ ″″　　　　　　　　−１５＝ （１）　　ポリーＬ−グルタミン酸ナトリ９ム塩（分子
量！１００６１重合度１４０）フｏｓｑと、３−（Ｓ’
−（ｇ−７１ノエチルホスホリル）−β−Ｄ−７ラビノ
フラノミル〕シトシン（以下ＡｒａＣＭＰＩＩ導体と称
す）ｓｏｇｑ（Ｌ　４　（１ｎｘａ＋ａ７ｓ　）を水５
ｏＷｔＨ溶解し。 Ｉ　ＮＮａＯＨを加えて溶液の　ｐＨな７．５０とした
。 次いで、１−・ニーチル−３−（３−ジメチル７ξノブ
−ピル）カルボジイミド塩酸塩（縮合剤）！６８３ｐ（
１４０／ａ＋ｍｏｊ＊）を加え、１７ｓ時間攪拌した。 この閏、溶液の　ｐＨが上昇する傾向にあるのでＩ　Ｎ
ＨＣｊを滴下して、ｐＨ−γ〜？、　＠　Ｋ調節をつづ
けた。度広＃ＩＴ後、４０６　で減圧濃縮して約４０−
とし、４℃で純水に対して４１時間セロファンチェープ
中で透析した。ＷＡ収液を凍結乾燥すると、綿状内包固
体１１１４ｊが得られた。＊られた重合体中に結合して
いるムｒａｃＭＰ残基量は、その分子吸光係数を便宜上
−？’！ａｅ　−＠　ｏｏｏ（電ｈ＠　Ｍｅｒｃｋ　　
１ｍｄａ寞、　　９　　ｔｈ　　ｅｄ。 −１ｇ＋＋ ２１１８買参照）としズ、上配サンプルについて定量し
たところ、　　Ｌ、０４１１　ｍｒｍｏｌ＊含有されて
（することが判明した。Ａｒｍ　ＣＭ　Ｐの反応牢番１
丁４７ヂであった。 （２）　　どの物を水ｇｏ−にとかし、２−ヒトーキシ
＄＋４７ｊン５６１４１１１Ｐ（１２６ａａｅ７＊）を
ＩＮ−ＩＩＣｊ　　ＩＬ　！　Ｓ　ｓｍ　Ｋ熔解してｍ
え、ＩＤＣｌ−’ＭＣＩ　ｌ　１　＠　ｊｌ　（１ｔ　
Ｓ　ｅｎｎｏｊｓ　）を加え。 ＩＮＨＣｊで溶液の　ｐＨを７．０として４時間攪拌し
た。 この間、ｐＢが上昇する傾向にあるのでｙｍｃＩを加え
て、ｐＨ７，Ｏへ７．Ｓで反応させた。反応を終えたら
、減圧濃縮して２０−とし、４℃で純水に対して４１１
　ｂｒ　　透析した。 ＠収液な凍結乾燥して綿状固体７４２ダを得た。得られ
た重合体中に含有されるムｒｍｃＭＰ残基の量は、２７
３ｎｍ　での吸光度測定により、＆＠６４−巾・ｊ＠で
あった。 ポリ□−Ｌ−グルタミン階ナトリワム塩は、シＨ−４０
で水溶液から析出を生ずるが、一方、上記の得られた重
合体は　ｐＨ１ｔｏでも水溶性であった。このことより
、ポリ−Ｌ　−グルタミン酸の多くの＠鎖力＾ボキシル
基がヒドロキシエチル化されたことがわかる。 又、得られた重合体中のＡｒａＣＭＰ残基の結合重は下
記のごとくに算出された。 ムｒａ　ＣＭ　Ｐ残基量ｚ　０．６　Ｓ　４　ａ＋ｆｆ
１ａ／＊　（紫外線吸光度測定により定量）１重合体重
量−７４！岬であるから、またムｒａ　ＣＭ　Ｐの結合
したユニット（式（ＩＩＩ））の分子量は４６９で、２
−ヒトルキシエチルアミンの結合したユニット（式（Ｉ
Ｉ））の分子量は】７２であるから、４６１ＸＩＬ＠Ｓ
４＋］　　フｆｉｘ−７４２となる。 これからＸ　Ｗ　Ｉ　Ｓ　３　ｍｃｎｏｊｅ　（ｋ＝ト
ーキジエチル化二１ット量）。 Ｘ１００−２ａ５％ （３）　　挟震瘍試験 （ＩＩＬＩ！１＠細胞の１×１０　個をＣＤ　Ｆ＋マウ
ス（！１−５）Ｋｉ、ｐ、移植し、！４時間後Ｋｉ、ｐ
、で被験集を１回投与し、生存日数を調定した。 半生１食塩水→ａ、１ｍＫｔｌＺ解して投与本発明の重
合体はムｒａＣの場合よりも延命効果が大であることが
わかる。 （１）Ｌ３２１０細胞の１×１６　個をＣＤ　Ｆ。 マウス（Ｎ−ｓ）ｒｃｓ、ｃ、移植し、２４時間後に、
被験集を１．マ、で１回投与し、生存日数をａｌｌ定し
た。 率住ｍ＊塩水　０．１　−に溶解して投与この場合にも
本発明の重合体重すぐれた延命効果を示している。 実施例１ 本実施例は、下記の反応と生成物を示すものである。 Ｈ ＣＭ−ＣＢＩＣＨ，Ｃ０ＮＨＣ鵬ＣＨ４０ＨＯ ψ ポリーＬ−グルタミンｗｉ＜分子量３１．０００：重合
度２４０）のナトリウム塩１Ｇ０４１とタイトマイシン
ｃｓｓｑを（１０１２１Ｍリン酸ナト９ウム緩負液（ｐ
Ｈ７，２４）２０ｍｌＣ溶解した。 次いでこれに１−エチル−３−（３−ジメチル７Ｚノブ
ロビル）カルボジイミド塩酸塩２６４ダを添加溶解し、
暗所で一夜撹拌した。次いで反応液を（Ｌ９％ＮｍＣ１
Ｋ対して２４９間、純水に対して２４時間４℃にて透析
したのち、凍結乾蜂することにより、中間生成物である
マイＦマイシンＣ−ポリ−Ｌ−グルタミン酸結合体の綿
状一体１１１１７１ｉｐが得られた。この物を水２０−
に港解し、２−ｋＦｐキシエチル７４ンｓ１ダを１Ｎ・
ｉｌｃｊｕ１１ｍＫ溶解して加え、鳶ＤＣＩ−ＨＣＪ　
Ｓ　（１１＃を加え、４時間攪拌した。この間ｐＨが上
昇する傾向にあるのｆ、　ＩＭＨＣＪでｐＨ７、Ｏ〜ｙ
、　ｓ　６ｃ調節した。次いで反応液を４℃で純水に対
して４ｓ時間透析し、闘収液を凍結乾燥して１ｍ状器体
１（１１ダを得た。 ポリーＬ−グルタミン酸ナトリウ＾塩は。 ９１１ｍ４０で水溶液から析出するが、一方、上記で得
られた重合体は　ｐｇ　−ｔ　ｏでも水溶液であった。 このことよりポリ−Ｌ−グルタミン酸の多くの側鎖カル
ボキシル基がｔｙ−キシエチル化されたことがわかる。 又、得られた重合体に結合している！イトマイシンＣ残
基量は１重台体の紫外線吸収スペクトル（水中）を一定
して定量した。即ち、紫外線吸収スペクトルは３６０１
自　にマイトマイシンＣ＠基にもとずく１収極大を有し
ており１本発明の目的物が形成されていることが確認さ
れ、又、ｉイトマイシンＣ残基の分子吸光係数を便宜上
ａ　Ｍ　＠　Ｏａａ＋諺鵞亀ｅ・うとし？　（Ｊ、　Ｉ
ｌ、Ｗ＠ｂｂ　　ら、Ｊ、　Ａ、　Ｃ，Ｌ　。 １１４＋％、１１５１５頁（１１１１１２）参１ｉｔ）
、得られたマイトマイシンＣ−高分子結合体］０１＊ｌ
１ｌｌＪに含まれる。マイトマイシンと残基量を求めた
ところ、２１７μ５ｏｒｅ　（１９３１９相当）であっ
た、又１ＭＭＣの結合率は、実施例１と同様な方法で算
出すると、翫３チであった。 実施例龜 本実施例は、下記の反応と生成物（細胞毒性物質を結合
した重合体）を示すものである。 ｈ Ｈ ＣＨ−ＣＢ、Ｃ１ｌ、Ｃ０ＮｉＩＣ１ｌ、Ｃ鵬ＯＨＯ ’−４−／ ポリーＬ−ダルタξン酸すＦリワ＾塩（分子量！１００
＠１重合度１４（１）３０６ｍ＋ＩＰとｐ−（にＮ−ビ
ス（２−りｍ−エチル））フェニレンジアミン塩蒙塩）
フｓｓｙを水２ｏｍＫｔｌ解しＲＤＣＩ−ＨＣＩ　　１
１０　即を添」して−夜攪拌した。 次いで反応液を純水に対して４℃で４１１透析したのに
、連結乾燥すると、中間体の綿状白色固体９！即がＳら
れた。この物を水２０―に溶解し、亀３−ジヒドロキジ
ブｐビルアミン６０ｍｊｐをＩＮ＠ＨＣＩ　　（１６１
１ｍ　Ｋ溶解して添加し。 さらＫ　ＩＤＣｌ−１１Ｃｊ　　１　ｍ　０１１１１Ｐ
’に加えズ、−夜攪拌した６反応液を、純水に対して４
℃で４８時間透析したのち、凍結乾燥すると、目的物で
あるｐ−（にＮ−ビス（２−りｍ−エチル）〕フェニレ
ンジアミンの高分子結合体１２２■が得られた。 ポリーＬ−グルタミン酸ナトリタム塩は、ＰＲ−ｔ　ｏ
で水溶液から析出するのに対し、上記で得られた重合体
は　ｐＨ、＝　ｔ　ｏでも水溶性であった。このことよ
り、ポリ−Ｌ−グルタミン酸の多くの＠鎖カルボキシル
基が亀３−ジヒドａｍ？シブｐビル７ミノ化さねたこと
がわかる。 又、得られた重合体に結合している、Ｉ）−（Ｎ、Ｎ−
ヒス（２−りｐｐエチル）〕フェニレンジ７ξン残基量
は、重合体の紫外線吸収スペクトルを測定して定量した
。即ち、紫外線吸収スペクトルは、２７５ｎｍＫ同残基
にもとずく吸収極大を示しており、本発明の目的物が形
成されていることが確認され、又、同残基の分子吸光係
数をａ　２　？　５　ｎｍ　　−１６２００として（便
宜上酢酸とｐ　−ＣＫＮ−ビス（２−りＲ９エチル）〕
フェニレンジアミンの結合体の吸光係数を採用した）、
得られた結合体１２２■に含まれる、ｐ−ＣＮ、Ｎ−ビ
ス（２−りｐ−エチル）〕フェニレンジ７４ン残基量を
求めたところ、４０μｍｏｌ＠（ｘａ、ｓ＋ｙ相当）で
あった。又、結合率は、実施例１と同様に算出するとＬ
Ｏチであった。 手続補正書 昭和５７年８り／６日 特許庁長官殿 １、事件の表示 特願昭　５６　−　１１８４７７　　号２、発明の名称 細胞毒性物質１結合した重合体及びその製造法３　補正
をする者 事件との関係　　特許出願人 大阪市東区南本町１丁目１１番地 （３００）帝人株式会社 代表者　徳　末　知　夫 ５、補正の対象 （１＞　　明細書の第２７頁の第１８行目と第１９行目
の間に、下記の実施例４を追加そう入する。 「実施例４ （１）　　ポリ−も一グルタミン酸（分子量ｓｏ、ｏｏ
ｏ　）　１２９岬を乾燥したジメチルホルムアミド３０
−に溶解し、水冷下塩化ビバーイル１２１１９とトリエ
チルアミン１ＯＯＩＩＦＩｋ加え、４０分間攪拌した。 次いで、１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン
２４３ｑをジメチルホルムアミド３−に溶解した溶液と
、トリエチルアｉン１０　ｎｑｌを加え攪拌した。 ２０分後に氷槽をのぞき、室温で１γ時間反応させた。 次いで、２−ヒドロキシエチルアミン６１ｑを加えて、
２時間反応させた。その後１反応液を氷水１ｏ−に滴下
し、得られた水溶液をセルフアン膜により水に対して４
℃で２４時間透析した。透析液を凍結乾燥して、下記式
の綿状囲体２０５１ｑｆ得た。 Ｈ 上記の得られた重合体はｐＨ＝４．０　　でも水溶性で
あった。このことより、ポリ−Ｌ−グルタミン酸の多く
の側鎖カルボキシル基がヒドロキシエチル化されたこと
がわかる。 紫外ＩＩ吸収スペクトル（ＵＶ）Ｋて、２４７１１！ｌ
と２９８　！１１１１に今Ｎ位りシル化＾ｒａＣの特性
吸収極大を示すことより、４Ｎアミノ基でＡｒａ　Ｃが
ポリマーに結合していることが確認された。　（Ｍ、　
Ａｋｌｙ−等。 Ｃｈｅｗ、　Ｐｋａｎｎ、　Ｂｕｌｌ　、＋　２６９．
１１８１頁（１９７ｇ）参照）。 重合体中のＡｒａ　Ｃ残基量は、３００　！ｌ！！１０
分子吸光係数を、便宜上８０００として（上記文献参照
）定量したところ０．１８鵬ｍｏｌ・であった。従って
、重合体中のムｒａｃｌｌｔ＆の結合率は下記のごとく
に算出された。 Ａｒａ　Ｃ残基量＋ｅｅ　０．１８　ｍｍｏｌｅ　（索
外紗吸光度測定により定量）、重合体重量＝２０５１９
であるから、またＡｒａ　Ｃの結合したユニット（式〔
璽〕）の分子量は３５４で、２−ヒトルキシエチルアミ
ンの結合したユニット（式〔厘〕）の分子量は１７２で
あるから、３５４Ｘ０．ＩＦ＋＋１７２ＩＩ寞２０５と
なる。これから＃　−０，８２ｍｍ・１・（ヒドロキシ
エチル化ユニツ）ｆ）。 ｘｘｏｏｘｘｓｌ！である。 偉）　抗腫瘍試験 Ｌ１２１０細胞のＩ　Ｘ　１０’ｌｌ　ｋ　ＣＤ　Ｆ＋
マウス（１１）に１．−０移植し、２４時間後に１．ｐ
、で被験薬な１回投与し、生存日数を測定した。 本生理食塩水神０．２ｄＫ溶解して投与本発明の重合体
はＡｒａ　Ｃの場合よりも鴬命効釆が大であることがわ
かる。　」以　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　式（１）で表わされる構成単位と ｏｏｓ 式（ｎ）で表わされる構成単位と、 式（Ｉｆ）で表わされる構成単位 （Ｃ山）− Ｏ 丁 の合計が、全構成単位の少なくとも６０モル−を占める
   、細胞毒性物質を結合した重合体。 ２　全構成単位の少なくとも６０モルチカ；式（４）％
   式％） 〔２及びｍの定義は前記式〔！〕の場合と同じ〕で麦わ
   される構成単位からなる重合体と、分子中に７１ノ基又
   はイミノ基を含む細胞毒性物質とを反応させて得られる
   重合体に、分子中に１級又け２級の７ミノ基を１個含有
   し、且つ水酸基を１個又・１複数個含有する水溶性低分
   子化合物を反応せしめることを特徴とする、細胞毒性物
   質を結合した重合体の製造法。