JPS58212788A - 新規抗生物質ｏｍ−６７４およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗生物質０Ｍ−６７４およびその製造
方法に関するものである。

本発明者らは、放線菌の生産する抗生物質の探索の過程
において、新たに土壌より分離したー放線菌０Ｍ−６７
４が嫌気性細菌などに有効な新規抗生物質を生産するこ
とを見い出した。本生産菌株の同定および本物質を単離
した後、理化学的および生物学的性質を調べることによ
シ本発明を完成した。

本発明によって得られた抗生物質０Ｍ−６７４の理化学
的性状は、次のとおりである。

（１）元素分析：Ｃ６５，５９チ、Ｈ７，６８％、３１
　！１．５１チ（２）分子量：２５８、高分解能マスス
ペクトルでの分子イオンピーク、ｍ／ｚ２３８．１０２
３．および元素分析値から分子式Ｃ＋ｓＨ１＠０１３が
求められた。

（３）融点は６７〜７０℃である。

、　　　　　１♂、５ （４）比旋光度、〔α〕ｏ　＋８９　（Ｃ＝１、メタノ
ール）（５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中で２
３８ｎｍおよび３００　ｎｍに吸収極大を示し、分子吸
光係数はそれぞれＪ２７３７０．６６１６（第１図）。

（６）赤外線吸収スペクトル：第２図のとおりである。

（溶液法、クロロホへム） （７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：第５図のとおり
である。

（８）Ｃ−１３核磁気共鳴スペクトル：第４図のとおり
である。

（９）溶剤に対する溶解性は、メタノール、アセトン、
酢酸エチル、ベンゼンに可溶でアシ、水、石油エーテル
、ｎ−へキサンに不溶である。

Ｑｌ呈色反応は、塩化第二鉄、ブロムクレゾールグＩＪ
−ン、過マンガン酸カリに陽性、モーリッシュ、ドラー
ゲンドルフに陰性である。

Ｉ酸性物質である。

上記の理化学的性質および後述する生物活性を有する点
で、既知の抗生物質のうち類似するものとして、チオラ
クトマイシン（ジャーナル・オプ・アンチバイオテツク
ヌ、５５巻、５９１〜４１９％。

１９８２年）があけられる。しかし、チオラクトマイシ
ンは分子式Ｃ，，Ｈ１，０，Ｓ　、■子葉２１０であシ
、また、プロトン核磁気共鳴スペクトル、Ｃ−１３核磁
気共鳴スペクトルは、抗生物質０Ｍ−６７４と明らかに
相異する。以上より、本抗生物質ＯＭ−６７４は新規化
合物であることが明らかとなった。

本物質の生物学的性質は、次のとおりである。

（１）抗菌性 寒天希釈法による最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、第１表に
示すとおりである。

第　　１　　表 試験菌　　　ＭＩＣ（μ？鷹） スタフィロコッカス・アウレウスＡＴＣＣ６５５８９１
ＤＯ（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　
）バチルス・ズプチルスＰＣＩ　２１９　　　　　）１
００（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　）マイコ
バクテリ９ム・スメグマテス　ＡＴＣＣ６０７＞１００
（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｍｅｇｍａｔｉｓ　
　）ニジエリシアーコリＮＩＨＪ　　　　　　　　　　
２５（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　）プロテウ
ス・ミラビリス　ＩＦＯ３Ｂ４９　　　　　　：＞１０
０（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒａｂｉｌｉｓ　）シュード
モナス・エルギノーザＩＦ０３０８０　　　：＞１００
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　）
バクテロイデス・フラジリスＡＴＣＣ２５７４５６，２
５（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ　）ラ
ソパクテリウム・バリウム　ＡＴＣＣ８５０１，）１０
０（’Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｖａｒｉｕｍ　）
クロストリシクム・パーフリンゲンスＡＴＣＣ５６’１
４　　　：）１００（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒ
ｆｒｉｎｇｅｎｓ　）（２）毒性 本抗生物質をマウス腹腔内投与した場合のＬＤ、。

は４００　ｍ９７に９以上でｌる。

上記のとおり抗生物質０Ｍ−６７４は、毒性が低く、主
としてダラム陰性菌に活性を示す。したがって、本物質
はヒトおよび動物の微生物感染症に対する治療薬、予防
薬としての使用が期待される。

本発明の抗生物質０Ｍ−６７４を生産するために使用さ
れる微生物の実用的な例は、本発明者によって土壌から
分離されたストレプトミセス・エスピー０Ｍ−６７４株
があけられる。この菌は、工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号、機工研菌寄第６５１０号として寄託さ
れている。その菌学的性状は、次のとおりである。

（Ｉ）　　形態的性質 栄養菌糸は、各種寒天培地上でよく発達し、通常は隔壁
を有しない。気菌糸は、グリセロール・す／ゴ酸カルシ
ウム寒天以外では中程度もしくは豊富に着生し、ビロー
ド状あるいは粉状を呈する。

顕微鏡下の観察では、胞子柄は直線状を呈し、１０ケ以
上の胞子の連鎖が認められる。胞子の大きさは０，６０
　Ｘ　Ｏ１８８ｐｍで卵形である。

胞子の表面は平滑である。菌核、胞子めうおよび遊送子
は見出されない。

■　各種培地上での性状 イー・ビー・シャーリング（Ｅ、Ｂ、８ｈｌｒｌｉｎｇ
　）とディー・ゴツトリープ（Ｄ、ＧＯｔｔｌ；ｅｂ　
）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オプ・シ
スティマチック・バクテリオロジー、１６巻、３１３頁
。

１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性′状を次
表に示す。色調は標準色として、カラーハーモニー・マ
ニュアル〆４ｍ（コンテナー・コーポレーション・オブ
・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定し、色
票基とともに括弧内にそのコ、−ドを併せて記した。以
下は特記しない限り２７℃、２週間口の各培地における
観察の結果である。

（凹生理的諸性質 （１）　　メラニン色素の形成 （イ）チロシン寒天　　　　　　　　陰性（ロ）ペプト
ン・イースト鉄寒天　　　　　　　　凝陽性に）トリプ
トン・イースト液　　　　　　　　　　陰　　性（２）
　　チロシナーゼ反応　　　　　　陰　性（３）硫化水
素の生産　　　　　　　凝陽性（４）硝酸塩の環元　　
　　　　　　陰　性（６）スターチの加水分解　　　　
　陽　性（力　脱脂乳の凝固（３７℃）　　　　陰　性
（８）　　脱脂乳のペプトン化（５７℃）　　　陽　性
（９）生育温度範囲　　　　　　　１５℃〜４０℃ａυ
　セルロースの分解　　　　　　陰　性（［Ｖ）細胞壁
組成 ディアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、アラビノース
、ガラクトースは認められない。以上、本菌の菌学的性
状を要約すると、次のとおりになる。

細胞壁組成はＬＬ−ディアミノピメリン酸を有する。ま
た形態的には、直線状の胞子鎖を形成し、胞子の表面は
平滑である。培養上の諸性質としては、栄養菌糸はオリ
ーブ色あるいはデュールゴールドの色調を呈し、気菌糸
はライトオリーブグレイあるいはライトプラウニッシュ
グレイの色調を呈する。可溶性色素はわずかに黄色系の
色素を生産し、メラニン色素は生産してもわずかである
。

これらの結果から、本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、プリドハムとトレスナーの分類（バージ
ズ・マニュアル・メプ・デタミネーテイプ・バクテリオ
ロジー第８版、７４８〜８２９頁、１９７４年）による
グリーンあるいはグレイシリーズに属する菌種と考えら
れる。

上記菌株の変異株も本発明の方法に使用することができ
る。その他本抗生物質生産能カを有するストレプトミセ
ス属に属する菌株も使用することができる。

培地として鉱、ストレプトミセス属の微生物の培養に適
する炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄
養物を程良く含有する合成培地または天然培地を使用す
ることができる。

培地に使用される炭素源、窒素源は、使用菌株の利用可
能なものならばいずれの種類でもよい。すなわち炭素源
としては、たとえばグルコース、グリセロール、フラク
トース、マルトース、マンニット、キシロース、ガラク
トース、リボース、澱粉またはその加水分網等の穐々の
炭水化物が使用できる。その濃度は通常、培地に対して
０．１〜５チ（グルコース換Ｘ）が好ましい。またグル
コン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機酸、グリ
シン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ　　　□
酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール類
やノルマルパラフィン等各種の非芳香族系炭化水素、あ
るいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用可能で
ある。

窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、ＮＺ−７ミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物
、フィツシュミールあるいはその消化物、大豆粉あるい
はその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、踊加水分
解物等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。

無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグネシウム、食塩等
、さらに微量の重金属塩が使用される。

また栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は、天然物を含む培地を使用す
る場合にはとくに添加を必要としない場合がある。

醗酵は振盪培養またけ通気攪拌深部培養等の好気的条件
下で行なう。培養温度は通常２０〜４０℃である。培養
期間は通常１〜８日で、菌体内外に著量の抗生物質ｏＭ
−６７４が生成蓄積する。

培養終了後に培養物より抗生物質０Ｍ−６７４を、たと
えば次の方法で採取する。培養物を遠心分離によシ沖液
と沈澱物とに分離する。ｐ液からは活性炭、多孔性合成
高分子樹脂、イオン交換樹脂等に吸着させ、溶出させる
こと忙より抽出する。沈澱物からは酢酸エチルまたはノ
ルマルブタノールや含水アセトン等の有機溶媒で抽出す
る。抽出物を適宜濃縮乾固することにより、０Ｍ−６７
４の粗物質を得る。粗物質はさらＫ、脂溶性物質の精製
において通常用いられる公知の方法、たとえばソリカゲ
ル力ラムクロマトグラフィー等の濃縮法などを適宜組合
わせることにより精製される。これらの精製方法で得ら
れる活性画分を濃縮乾固することにより、抗生物質０Ｎ
−６７４の粉末を得ることができる。

本発明において、抗生物質０Ｍ−６７４の検出および定
置は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（メルク社製
シリカゲル６０ＦｔＢい厚さ０．２１１１１゜展開溶媒
；ベンゼン／アセトン＝７　：　１、抗生物質０Ｍ−６
７４のＲｆ値０．４８　）およびバクテロイデス・フラ
ジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ　
）　ＡＴＣＣ２５７４５を用いる生物学的検定法によっ
た。

次に本発明の抗生物質０Ｍ−６７４の実施例を示すが、
この実施例は単なる一例を示すものであって、本発明を
限定するものではない。

実施例 ストレプトミセス・エスピー０Ｍ−６７４株（機工研菌
寄第６５１０号）の斜面培養から１白金耳を、１００−
の種培地（グルコース１．０％、澱粉１．０チ、酵母エ
キス０．５％、ペプトン０．５％、炭酸カルシウム０．
４　％　）を入れた５０〇−容の坂ロフラスコに接種し
、２７℃で２日間振盪培養して種培養を得た。この種培
養１５０　ｍｌを１５ｔの生産培地〔クルコース０．５
％、コーンスチープリカー（Ｃ，Ｓ、Ｌ、）　　１．０
　％、オートミール（Ｏａｔ　ｍｅａｌ　）１．０チ、
ファーマメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ　）　１．
０チ、第ニリン酸カリ０．５％、硫酸マグネシウム７水
塩０．５チ、硫酸第一鉄７水塩１１ｎ９／ｌ、塩化マン
ガン４水塩１ｍ９／ｌ、硫酸亜鉛７水塩１＃；ｌ／ｌ、
硫酸銅５水塩１ｒｎ９／ｌ、塩化コバルト２水塩Ｉ　Ｉ
ｎＬｉ／ｌ）を入れた３０を容ジャーファーメンタ−に
接種し、２７℃で５日間通気攪拌培養（通気量１０ｔ／
順、攪拌３００　ｒ、ｐ６ｍ、）を行々つだ。

培養液２０１をシャープレス型遠心分離機を用いて遠心
分離し、菌体と培養上演に分離する。菌体に７０チアセ
トン溶液５ｔを加え攪拌抽出し、これを戸別して、抗生
物質０Ｍ−６７４を含む含水アセトン抽出液を得た。こ
の抽出液を減圧下で５０ＯＮｔまで濃縮し、塩酸でｐＨ
４１ｃ　したのち、酢酸エチル５００−を加え攪拌し再
抽出を行なった。

培養上清１５ｔを塩酸でｐＨ４に調節し、６ｔの酢酸エ
チルで２回抽出した。２回の酢酸エチル抽出液と菌体由
来の酢酸抽出液を合わせ、減圧下で濃縮乾固することに
より抗生物質０Ｍ−６７４の油状　　　□物質４ｆを得
た。

油状物質４ｙを１０Ｍｔベンゼンに溶解し、あらかじめ
ベンゼンに懸濁させたシリカゲル（１２０２、メルク社
製、ａｒｔ　７７３４　）を充てんしたカラム上端に添
加した。カラムをベンゼン／アセトン（２０：１）で溶
出し、１０−づつ分画した。活性画分（Ａ５１〜７４）
を集めて減圧下−：ｒ！濃縮すること罠より抗生物質０
Ｍ−６７４を無色針状晶１８０ｍ９として単離した。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質０Ｍ−６７４の紫外線吸収スペクトル
（メタノール中の測定）、第２図は赤外線吸収スペクト
ル（クロロホルム中で測定）、第３図はプロトン核磁気
共鳴スペクトル（重クロロホルム中で測定）、第４図は
Ｃ−１３核磁気共鳴スペクトル（重クロロホルム中で測
定）を示す。 手続補正書 昭和５８年１月１８日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 特願昭５７−９６２８７号 ２　発明の名称 新規抗生物質０Ｍ−６７４およびその製造法３　補正を
する者 事件との関係・特許出願人 北里研究所（社団法人） ４代理人 東京都港区虎ノ門−丁目２番２９号虎ノ門産業ビル５階
明細書の発明の詳細な説明の欄 ６　補正の内容 明細書の記載を次のとおり補正する。 （１）第３頁１１行と１２行の間に下記の記載を挿入す
る。 「ａ２　　構造式は下記のとおシである。 」 （２）第１５頁１７行の 「１５０ｍ／Ｊを 「１００ｗ／Ｊと訂正する。 （３）第１６頁８行の 「２０ｔｊを 「１５ｔｊと訂正する。 （４）第１６頁１５行の 「１５Ｌ」を 「１２ｔ」と訂正する。 （５）第１図を別紙添付の第１図のとおり訂正する。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）次の理化学的性質を有し、分子式Ｃ１１ＨＩｌＩ
   Ｏ２Ｓであられされる新規抗生物質０Ｍ−６７４：■比
   旋光度−”−１−８９（Ｃ＝１．メタノール）■第１図
   に示される紫外線吸収スペクトル■第２図に示される赤
   外線吸収スペクトル■第５図に示されるプロトン核磁気
   共鳴スペクトル ■第４図に示されるＣ−１３核磁気共鳴スペクトル
2. （２）ストレプトミセス属に属し、新規抗生物質０Ｍ−
   ６７４を生産、する能力を有する菌株を培地に好気的に
   培養し、培地中または菌体中に抗生物質０Ｍ−６７４を
   蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする新規抗生
   物質０Ｍ−６７４の製造法。