JPS58212781A - 新種バクテリオフア−ジ及びその育種法 - Google Patents
新種バクテリオフア−ジ及びその育種法Info
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- JPS58212781A JPS58212781A JP57093062A JP9306282A JPS58212781A JP S58212781 A JPS58212781 A JP S58212781A JP 57093062 A JP57093062 A JP 57093062A JP 9306282 A JP9306282 A JP 9306282A JP S58212781 A JPS58212781 A JP S58212781A
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- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一新種バクテリオファージ及びその育種法に関
する。
する。
本発明者等は、先に−バクテリオファージＤＮＡ−の被
膜蛋白質生合成の遺伝情報の部分のみに一エンドヌクレ
了−ゼ切断部位を有する新種バクチリオフ了−ジを育種
することに成功した（特開昭ｊ３−／３３６ｇ１１号）
。
膜蛋白質生合成の遺伝情報の部分のみに一エンドヌクレ
了−ゼ切断部位を有する新種バクチリオフ了−ジを育種
することに成功した（特開昭ｊ３−／３３６ｇ１１号）
。
その後、本発明者等は一更に研究を′続けた結果、上記
バクテリオファージとは異なる新種バクチリオフ了−ジ
な育種することに成功し、本発明を完氏するに到−った
。
バクテリオファージとは異なる新種バクチリオフ了−ジ
な育種することに成功し、本発明を完氏するに到−った
。
すなわち２本発明は、バクテリオファージＤＮＡ上にお
いて一被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写に必要な後期
プロモーターより上流域でその付着末端に至るＤＮＡ部
分に、エンドヌクレアーゼ切断部位が全く存在しないか
−もしくはエンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ断
片を律だのち−この断片をＤＮＡＩ、ｌガーゼを用いて
再結合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレアー
ゼ切断部位を有し一更に後期プロモーターより下流域で
そ゛の付着末端に至るＤＮＡ部分に−１個所以上のエン
ドヌクレアーゼ切断部位を有する新種バクテリオファー
ジであり一１だ本発明は、エンドヌクレアーゼ抵抗性と
したλ系バクテリオファージ及び／又は被膜蛋白質生合
成の遺伝情報の転写に必要な後期プロモーターより上流
域でその付着末端に至るＤＮＡ部分に、エンドヌクレア
ーゼにより切断してＤＮＡ断片を得たのもこの断片をＤ
ＮＡＩＪガーゼを用いて再結合させた場合に再構成可能
な数ノエンドヌクレ了−ゼ切断部位を有するλ’ 系／
％ クテリオフ了−ジと一後期プロモーターより下流域
でその付着末端に至るＤＮＡ部分に−／個所以上のエン
ドヌクレアーゼ切断部位を有するλ系バクチリオフ了−
ジとを捌は合せることを特徴とする上記新種バクテリオ
ファージの育種法である。
いて一被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写に必要な後期
プロモーターより上流域でその付着末端に至るＤＮＡ部
分に、エンドヌクレアーゼ切断部位が全く存在しないか
−もしくはエンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ断
片を律だのち−この断片をＤＮＡＩ、ｌガーゼを用いて
再結合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレアー
ゼ切断部位を有し一更に後期プロモーターより下流域で
そ゛の付着末端に至るＤＮＡ部分に−１個所以上のエン
ドヌクレアーゼ切断部位を有する新種バクテリオファー
ジであり一１だ本発明は、エンドヌクレアーゼ抵抗性と
したλ系バクテリオファージ及び／又は被膜蛋白質生合
成の遺伝情報の転写に必要な後期プロモーターより上流
域でその付着末端に至るＤＮＡ部分に、エンドヌクレア
ーゼにより切断してＤＮＡ断片を得たのもこの断片をＤ
ＮＡＩＪガーゼを用いて再結合させた場合に再構成可能
な数ノエンドヌクレ了−ゼ切断部位を有するλ’ 系／
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でその付着末端に至るＤＮＡ部分に−／個所以上のエン
ドヌクレアーゼ切断部位を有するλ系バクチリオフ了−
ジとを捌は合せることを特徴とする上記新種バクテリオ
ファージの育種法である。
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の育種法に用ｒられるバクチリオフ了−ジトシて
は一λ系テンペレートファージであれば、如何なるもの
でも良（−例えば−λＩＦＯ２ｏｏｉに。
は一λ系テンペレートファージであれば、如何なるもの
でも良（−例えば−λＩＦＯ２ｏｏｉに。
’ｌ ３４’ ＩＦＯコ００／ｇ、ｇ ２ ＩＦＱ２０
０／９−φｇ。
０／９−φｇ。
ＩＦＯユ００ユＯ−φ）７０１ＦＱ２００コ１等が挙げ
られ−また−これらバクテリオファージのＤＮＡを含有
する溶原菌−例えば大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ ） ＶＯ
／ＩＣに溶原化されたφｇｏ（大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ
） Ｋ ／ ２ストレインＷ ３ ／ ／ ０ （φｇ
Ｏ）（ＡＴＣＣ，？／λ７７）〕大腸菌（Ｅ、 ｃｏ
ｌｉ ） Ｗ、？ 、７ ｊ Ｏに溶原化されたλ（，
１ｇ ｓ ７ ［大腸？１（Ｅ−ｃｏｌｉ）Ｋ／ｕスト
レイ７ＶＪ３３５０（λｃＩ ｇ ｓ ７ ）（ＡＴＣ
Ｃ３／−２７ｇ））等も用いることが出来ろ。
られ−また−これらバクテリオファージのＤＮＡを含有
する溶原菌−例えば大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ ） ＶＯ
／ＩＣに溶原化されたφｇｏ（大腸菌（Ｅ、 ｃｏｌｉ
） Ｋ ／ ２ストレインＷ ３ ／ ／ ０ （φｇ
Ｏ）（ＡＴＣＣ，？／λ７７）〕大腸菌（Ｅ、 ｃｏ
ｌｉ ） Ｗ、？ 、７ ｊ Ｏに溶原化されたλ（，
１ｇ ｓ ７ ［大腸？１（Ｅ−ｃｏｌｉ）Ｋ／ｕスト
レイ７ＶＪ３３５０（λｃＩ ｇ ｓ ７ ）（ＡＴＣ
Ｃ３／−２７ｇ））等も用いることが出来ろ。
°マタ、本発明でいうエンドヌクレアーゼとしては−Ｄ
ＮＡ鎖上の特定の部位を認識することが出来、その認識
部位のＤＮＡ二重ラセう鎖を千鳥足状の付着端を生じさ
せる如く切断を行なう特異性の極めて高いエンドヌクレ
アーゼが好丑しぐ一該酵素としては一制限酵素が好適で
あり一例えば−ＥｃｏＲＩ ＋ Ｂａｍ）ｊ Ｉ −Ｈ
ｉｎｄ ＩＩＩ等が挙けられる。
ＮＡ鎖上の特定の部位を認識することが出来、その認識
部位のＤＮＡ二重ラセう鎖を千鳥足状の付着端を生じさ
せる如く切断を行なう特異性の極めて高いエンドヌクレ
アーゼが好丑しぐ一該酵素としては一制限酵素が好適で
あり一例えば−ＥｃｏＲＩ ＋ Ｂａｍ）ｊ Ｉ −Ｈ
ｉｎｄ ＩＩＩ等が挙けられる。
なお、上記制限酵素は一生化学工業（株）、べ−リンガ
ー〇マンハイム山之内（株）、宝酒造Ｃ株〕等より入手
することが出来ろ。
ー〇マンハイム山之内（株）、宝酒造Ｃ株〕等より入手
することが出来ろ。
更に、本発明でいう後期プロモーター（ｌａｔｅｐｒｏ
ｍｏｔｅｒ）としては、例えば一般にＰＱあるいはＰ′
Ｒ等と呼称されているものが挙げられる。
ｍｏｔｅｒ）としては、例えば一般にＰＱあるいはＰ′
Ｒ等と呼称されているものが挙げられる。
本発明方法に使用されるエンドヌクレアーゼ抵抗性とし
たλ系バクテリオファージ及び被膜蛋白、 質生合成の
遺伝情報の転写に必要な後期プロモーターより上流域で
−かつその付着末端に至るＤＮＡ部分に、その部位のＤ
ＮＡをエンド′ヌクレ了−ゼにより切断してＤＮＡ断片
を得たのちこの断片なＤＮＡＩＪガーゼを用いて舌片−
合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切
断部位を有するλ系バクテリオファージｃ以下−再構成
可能なファージと略称する）の育種は−例えば次の如（
にして行なわれる。λ系バクチリオフ了−ジーより好贅
しくは一浴原化の遺伝情報の欠失を防止するために−λ
系バクテリオファージＤＮＡの中央部分で−かつ溶原化
に必要な遺伝情報をもたない部分を予めエンドヌクレア
ーゼとＤＮＡリガーゼを用いて除去して得られた欠失バ
クテリオファージを、エンドヌクレアーゼを有している
宿主と一有しない宿主に感染させて交互に培養すると一
エントヌクレ了−ゼの作用を受けるバクテリオファージ
は死滅し、エンドヌクレアーゼの作用を受は難い変異株
が次第に増加し一上記再構成可能な）了−ジが得られる
。そしてこのような微生物的濃縮法を続けることにより
、ついにはエンドヌクレアーゼの作用を全く受けないＤ
ＮＡを有するλ系バクチリオフ了−ジ（以下、エンドヌ
クレアーゼ抵抗性）了−ジと略称する）を得ることが出
来る。
たλ系バクテリオファージ及び被膜蛋白、 質生合成の
遺伝情報の転写に必要な後期プロモーターより上流域で
−かつその付着末端に至るＤＮＡ部分に、その部位のＤ
ＮＡをエンド′ヌクレ了−ゼにより切断してＤＮＡ断片
を得たのちこの断片なＤＮＡＩＪガーゼを用いて舌片−
合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切
断部位を有するλ系バクテリオファージｃ以下−再構成
可能なファージと略称する）の育種は−例えば次の如（
にして行なわれる。λ系バクチリオフ了−ジーより好贅
しくは一浴原化の遺伝情報の欠失を防止するために−λ
系バクテリオファージＤＮＡの中央部分で−かつ溶原化
に必要な遺伝情報をもたない部分を予めエンドヌクレア
ーゼとＤＮＡリガーゼを用いて除去して得られた欠失バ
クテリオファージを、エンドヌクレアーゼを有している
宿主と一有しない宿主に感染させて交互に培養すると一
エントヌクレ了−ゼの作用を受けるバクテリオファージ
は死滅し、エンドヌクレアーゼの作用を受は難い変異株
が次第に増加し一上記再構成可能な）了−ジが得られる
。そしてこのような微生物的濃縮法を続けることにより
、ついにはエンドヌクレアーゼの作用を全く受けないＤ
ＮＡを有するλ系バクチリオフ了−ジ（以下、エンドヌ
クレアーゼ抵抗性）了−ジと略称する）を得ることが出
来る。
なお、上述の再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切断
部位の数は、バクチリオフ了−ジＤＮＡをエンドヌクレ
アーゼにより切断【２てＤＮＡ断片を得たのち一該断片
をＤＮＡ！Ｊガーゼを用いて再結合さ、せた場合に再構
成出来る数であれば一如何なる数でも良いが１例えば／
又は−個所である場合が特に好適であろ０ １だ一本発明の新種バクテリオファージの分離を容易に
するため一上把エンドヌクレ了−ゼ抵抗性フ了−ジ及び
再構成可能なファージには一上記した後期プロモーター
より上流域又は下流域に夫々異なるマーカーを付与して
ふ・〈ことが好１しく。
部位の数は、バクチリオフ了−ジＤＮＡをエンドヌクレ
アーゼにより切断【２てＤＮＡ断片を得たのち一該断片
をＤＮＡ！Ｊガーゼを用いて再結合さ、せた場合に再構
成出来る数であれば一如何なる数でも良いが１例えば／
又は−個所である場合が特に好適であろ０ １だ一本発明の新種バクテリオファージの分離を容易に
するため一上把エンドヌクレ了−ゼ抵抗性フ了−ジ及び
再構成可能なファージには一上記した後期プロモーター
より上流域又は下流域に夫々異なるマーカーを付与して
ふ・〈ことが好１しく。
このマーカーの付与は一後記するエンドヌクレアーゼ切
断部位を有するファージに付与するマーカーによって適
宜選択される。
断部位を有するファージに付与するマーカーによって適
宜選択される。
このマーカーとしては一如何なるものでも良いが−例え
ば後期プロモーターより下流域には、バクテリオファー
ジの溶菌に関与する遺伝子をサプレッサー遺伝子を有す
る宿主大腸菌のみを溶菌するように変異させること一一
方後期プロ・モーターより上流域には一免疫に関与する
遺伝子を変異させて免疫蛋白質の生合成能を失しなわせ
ること等が特に好適である。
ば後期プロモーターより下流域には、バクテリオファー
ジの溶菌に関与する遺伝子をサプレッサー遺伝子を有す
る宿主大腸菌のみを溶菌するように変異させること一一
方後期プロ・モーターより上流域には一免疫に関与する
遺伝子を変異させて免疫蛋白質の生合成能を失しなわせ
ること等が特に好適である。
【欠に−このようにして１尋たエンドヌクレアーゼ抵抗
性ファージ及び再構成可能なファージＤＮＡ上で、シカ
も、後ノｒ月プロモーターより下流域でその付着末端に
至るＤＮＡ４Ｂ分に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を付
与するために一上６己エンドヌクレ了〜ゼ抵抗性フ了−
ジ及び／又は再構成可能なファージと一上記した後期プ
ロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分
に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を有するλ系バクチリ
オフ了−ジ（以下−エンドヌクレアーゼ切断部位を有す
る）了−ジと略称する）とを掛は合せる。
性ファージ及び再構成可能なファージＤＮＡ上で、シカ
も、後ノｒ月プロモーターより下流域でその付着末端に
至るＤＮＡ４Ｂ分に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を付
与するために一上６己エンドヌクレ了〜ゼ抵抗性フ了−
ジ及び／又は再構成可能なファージと一上記した後期プ
ロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分
に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を有するλ系バクチリ
オフ了−ジ（以下−エンドヌクレアーゼ切断部位を有す
る）了−ジと略称する）とを掛は合せる。
なお１本発明の新種バクテリオファージの分離を容易Ｖ
Ｃするため−このエンドヌクレアーゼ切断部位を有する
ファ−ジにも一後期プロモーターより上流域又は下流域
にマーカーを付与Ｉ−でお（ことが好１しく−このマー
カーの付与は、前述のエンドヌクレアーゼ抵抗性）了−
ジ及び再構成可能なファージに付与するマーカーによっ
て適宜選択される。
Ｃするため−このエンドヌクレアーゼ切断部位を有する
ファ−ジにも一後期プロモーターより上流域又は下流域
にマーカーを付与Ｉ−でお（ことが好１しく−このマー
カーの付与は、前述のエンドヌクレアーゼ抵抗性）了−
ジ及び再構成可能なファージに付与するマーカーによっ
て適宜選択される。
このマーカーも如何なＺ）ものでも良−が−例えば−後
期プロモーターより下流域には一バクチリオフ了−ジの
溶菌に関与する遺伝子をサプレッサー遺伝子を有する宿
主大腸菌のみを溶菌するように変異させること、あＺ）
いは後期プロモーターより上流域には、免疫に関与１−
る遺伝ｆを変異させて免疫蛋白質の生合成能を失なわせ
ること等が特に好適である。
期プロモーターより下流域には一バクチリオフ了−ジの
溶菌に関与する遺伝子をサプレッサー遺伝子を有する宿
主大腸菌のみを溶菌するように変異させること、あＺ）
いは後期プロモーターより上流域には、免疫に関与１−
る遺伝ｆを変異させて免疫蛋白質の生合成能を失なわせ
ること等が特に好適である。
上６己のエンドヌクレアーゼ切断部位を有するファージ
としては−λ系バクチリオフ了−ジ例えばλ系テンペレ
ートフ了−ジが挙げられ−１だλ系テンペレートフ了−
ジのＤＮＡを有する的原菌等、あるいは上紀のエンドヌ
クレアーゼ抵抗性ファージ及び／又は再構成可能なファ
ージと上呂己のエンドヌクレアーゼ切断部位を有すＺ１
フ了−ジとを掛は合せて得られろ本発明の力「柱バクテ
リオファージを、前記微生物的濃縮法により処理を行な
う途中で得られるエンドヌクレアーゼ切断部位を有する
ファージ等が用いられろ。
としては−λ系バクチリオフ了−ジ例えばλ系テンペレ
ートフ了−ジが挙げられ−１だλ系テンペレートフ了−
ジのＤＮＡを有する的原菌等、あるいは上紀のエンドヌ
クレアーゼ抵抗性ファージ及び／又は再構成可能なファ
ージと上呂己のエンドヌクレアーゼ切断部位を有すＺ１
フ了−ジとを掛は合せて得られろ本発明の力「柱バクテ
リオファージを、前記微生物的濃縮法により処理を行な
う途中で得られるエンドヌクレアーゼ切断部位を有する
ファージ等が用いられろ。
また更に−これらのエンドヌクレアーゼ切断音す位を有
するファージのＤＮＡを一エンドヌクレ了−ゼを用いて
切断したのち、後期プロモーターの上流域でその付着末
端に至るＤＮＡ断片と一後期プロモニターの下流域でそ
の付着末端に至６ ＤＮＡ断片とに分離し一史に−その
うち後期フ゛ロモーターの下流域でその付着末端に至る
ＤＮＡ断片を上記の切断に用いたエンドヌクレアーゼと
しま５３１１のエンドヌクレアーゼを作用さ、せて切断
し−その切断部位に例えば目的とする数のエンドヌクレ
了−ゼの切ｖｇＴ部位をもつＤＮＡ断片をＤＮＡ １ノ
ガーゼなＪ４４いて結合したものと一上記後期プロモー
ターの上流域でその付着末端に′至ろＤＮＡ断片とを＋
ＤＮＡリガーゼを用いて再結合して得たＤＮＡな一常
法により宿主大腸菌に取り込ませて溶原化したのち一常
法により誘発して得られるノ（クチ１ノオフアージ等が
エンドヌクレアーゼ切断部位を有する）了−ジの例とし
て挙げられる０ なお−上Ｍ＋：、エンドヌクレ了−ゼ切断部イ立を有す
るファージの切断部位の数は、／個所以上、好１しくは
／〜λ個所存在することが望ましい０そして掛は合せの
方法としては一エンドヌクレ了−ゼ抵抗性ファージ及び
／又は再構成可能なファージ液（例えば／θ９〜ｉ ｏ
１ＬＩ／ ｍｉ ）とエンドヌクレアーゼ切断部位を有
するファージ（例えばｌθ９〜／ ０１０／’ｍｌ ）
とを混合し−これらファージに感受性のある大腸菌（例
えは１０８〜１０ＩＩ／ｍｌ ）に−これらファージを
同時に又は相前後して感染させる０ 又は、に／λ株に含なれろ大腸菌に溶原化されたエンド
ヌクレアーゼ抵抗性ファージ及び／又は再構成可能なフ
ァージを誘発したのち一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を
有するファージを感染させるか、或は大腸菌に７２株に
溶原化されたエンドヌクレアーゼ切断部位を有するファ
ージを誘発したのち一エンドヌクレ了−ゼ抵抗牲２了−
ジ及び／又は再構成可能なファージを感染させることに
よっても掛は合せることが出来るＯ つａで、上記のようにバクテリオファージを感染させた
大腸菌を培地（大腸菌の生育可能な培地であれば特に制
限されない）−例えは後記実施例に６己赦のトリプトン
培地に入れ、温度３７Ｃ″″Ｃ：２〜３時間振盪培養す
る。
するファージのＤＮＡを一エンドヌクレ了−ゼを用いて
切断したのち、後期プロモーターの上流域でその付着末
端に至るＤＮＡ断片と一後期プロモニターの下流域でそ
の付着末端に至６ ＤＮＡ断片とに分離し一史に−その
うち後期フ゛ロモーターの下流域でその付着末端に至る
ＤＮＡ断片を上記の切断に用いたエンドヌクレアーゼと
しま５３１１のエンドヌクレアーゼを作用さ、せて切断
し−その切断部位に例えば目的とする数のエンドヌクレ
了−ゼの切ｖｇＴ部位をもつＤＮＡ断片をＤＮＡ １ノ
ガーゼなＪ４４いて結合したものと一上記後期プロモー
ターの上流域でその付着末端に′至ろＤＮＡ断片とを＋
ＤＮＡリガーゼを用いて再結合して得たＤＮＡな一常
法により宿主大腸菌に取り込ませて溶原化したのち一常
法により誘発して得られるノ（クチ１ノオフアージ等が
エンドヌクレアーゼ切断部位を有する）了−ジの例とし
て挙げられる０ なお−上Ｍ＋：、エンドヌクレ了−ゼ切断部イ立を有す
るファージの切断部位の数は、／個所以上、好１しくは
／〜λ個所存在することが望ましい０そして掛は合せの
方法としては一エンドヌクレ了−ゼ抵抗性ファージ及び
／又は再構成可能なファージ液（例えば／θ９〜ｉ ｏ
１ＬＩ／ ｍｉ ）とエンドヌクレアーゼ切断部位を有
するファージ（例えばｌθ９〜／ ０１０／’ｍｌ ）
とを混合し−これらファージに感受性のある大腸菌（例
えは１０８〜１０ＩＩ／ｍｌ ）に−これらファージを
同時に又は相前後して感染させる０ 又は、に／λ株に含なれろ大腸菌に溶原化されたエンド
ヌクレアーゼ抵抗性ファージ及び／又は再構成可能なフ
ァージを誘発したのち一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を
有するファージを感染させるか、或は大腸菌に７２株に
溶原化されたエンドヌクレアーゼ切断部位を有するファ
ージを誘発したのち一エンドヌクレ了−ゼ抵抗牲２了−
ジ及び／又は再構成可能なファージを感染させることに
よっても掛は合せることが出来るＯ つａで、上記のようにバクテリオファージを感染させた
大腸菌を培地（大腸菌の生育可能な培地であれば特に制
限されない）−例えは後記実施例に６己赦のトリプトン
培地に入れ、温度３７Ｃ″″Ｃ：２〜３時間振盪培養す
る。
・なお−上ａｅ した感受性の大腸菌としては、一般的
なに／ユ株に含壕れろ大腸菌ならばいずれでもよ（、例
えば−Ｗ、？ ／１０ （ＡＴＣＣユ２３−ｊ）。
なに／ユ株に含壕れろ大腸菌ならばいずれでもよ（、例
えば−Ｗ、？ ／１０ （ＡＴＣＣユ２３−ｊ）。
Ｗ、？、？３０ （Ａ’ｆＣＣ２７０２０）−／ ／
００ （Ｍａｘ−Ｐｌａｎｋ −Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ、西
独−）１イデルベルク）等が挙げられる。
００ （Ｍａｘ−Ｐｌａｎｋ −Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ、西
独−）１イデルベルク）等が挙げられる。
また大腸菌は一培養液の状態で用いてもよいが、培養液
を遠心分離して得た菌体を１０ｍＭのＭｇＣ１２に懸濁
し、温度３７Ｃで１時間振盪したのち使用したほうが一
バクチリオフ了−ジの吸着感染が良好となる０ 以上の如（して、バクテリオファージＤＮＡ上において
一被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写に必要な後期プロ
モーターより上流域てその付着末端に至るＤＮＡ部分に
一エンドヌクレ了−ゼ切断部位が全く存在しないか−も
しくはエンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ断片を
得たのちこの断片をＤＮＡＩＪガ〜ゼを用いて再結合し
た場合に再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切断部位
を有し一更に後期プロモーターより下流域でその付□着
末端に至るＤＮＡ部分に一／個所以上のエンドヌクレア
ーゼ切断部位を有する新種バクテリオファージ、すなわ
ち本発明の新種バクテリオファージを／ ０’／ｍ６程
度含有する混合バクチリオフ了−ジを得ることが出来る
〇 このようにして得られた混合バクテリオファージから目
的とする本発明の新種バクテリオファージを分離するに
は２以下の方法によって行なうことが出来る。
を遠心分離して得た菌体を１０ｍＭのＭｇＣ１２に懸濁
し、温度３７Ｃで１時間振盪したのち使用したほうが一
バクチリオフ了−ジの吸着感染が良好となる０ 以上の如（して、バクテリオファージＤＮＡ上において
一被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写に必要な後期プロ
モーターより上流域てその付着末端に至るＤＮＡ部分に
一エンドヌクレ了−ゼ切断部位が全く存在しないか−も
しくはエンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ断片を
得たのちこの断片をＤＮＡＩＪガ〜ゼを用いて再結合し
た場合に再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切断部位
を有し一更に後期プロモーターより下流域でその付□着
末端に至るＤＮＡ部分に一／個所以上のエンドヌクレア
ーゼ切断部位を有する新種バクテリオファージ、すなわ
ち本発明の新種バクテリオファージを／ ０’／ｍ６程
度含有する混合バクチリオフ了−ジを得ることが出来る
〇 このようにして得られた混合バクテリオファージから目
的とする本発明の新種バクテリオファージを分離するに
は２以下の方法によって行なうことが出来る。
例えば、前述の如くして溶菌に関与する遺伝子を、サプ
レッサー遺伝子を有する宿主大腸菌のみを溶菌するよう
に変異させたエンドヌクレアーゼ切断音）了−ジ及び／
又は再構成可能なファージと免疫に関与する遺伝子を変
異させて免疫蛋白質の生合成能を失なわせたエンドヌク
レアーゼ切断部位を有するファージとを掛は合わせ、後
期プロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ
部分に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を有−ｊるファー
ジ由来のＤＮＡで、更に後期プロモーターより上流域で
その付着末端に至るＤＮＡ部分にエンドヌクレアーゼ抵
抗性ファージ又は再構成可能なファージ由来のＤＮＡよ
りなるＤＮＡを有する本発明の新種ファージを含有する
混合バクテリオファージを得る。
レッサー遺伝子を有する宿主大腸菌のみを溶菌するよう
に変異させたエンドヌクレアーゼ切断音）了−ジ及び／
又は再構成可能なファージと免疫に関与する遺伝子を変
異させて免疫蛋白質の生合成能を失なわせたエンドヌク
レアーゼ切断部位を有するファージとを掛は合わせ、後
期プロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ
部分に一エンドヌクレ了−ゼ切断部位を有−ｊるファー
ジ由来のＤＮＡで、更に後期プロモーターより上流域で
その付着末端に至るＤＮＡ部分にエンドヌクレアーゼ抵
抗性ファージ又は再構成可能なファージ由来のＤＮＡよ
りなるＤＮＡを有する本発明の新種ファージを含有する
混合バクテリオファージを得る。
ついで−この混合バクテリオファージをサプレッサー遺
伝子を有しない通常の大腸菌に感染させれば一透明な溶
菌斑及び不透明な溶菌斑が得られ。
伝子を有しない通常の大腸菌に感染させれば一透明な溶
菌斑及び不透明な溶菌斑が得られ。
そのうちの不透明な溶菌斑よりバクテリオファージを分
離すれば一本発明の新種ファージを濃厚に含有する混合
バクテリオファージが得られ、更に該ファーシカ・ら常
法により数珠分離−精°製して純粋なバクテリオファー
ジを得、この純粋なバクテリオファージから、常法によ
りＤＮＡを抽出し、該ＤＮＡをエンドヌクレアーゼを用
いて切断し、 ＤＮＡ断片を得−これをアガロ−スミ気
泳動法により分析し、目的とするＤＮＡ部位にエンドヌ
クレアーゼ切断部位を有するかどうかを識別することに
より１本発明の新種ファージを得ることが出来る〇捷た
更に、より簡便な方法としては一上記した不透明な溶菌
斑より分離した混合バクテリオファージ数をエンドヌク
レアーゼを有しない大腸菌及びエンドヌクレアーゼを有
する大腸菌を夫々用いて測定し、エンドヌクレアーゼを
有する大腸菌により測定したバクテリオファージ数／エ
ンドヌクレアーゼを有しない大腸菌により測定したバク
テリオファージ数の値が最も大きい値を示すバクチリオ
フ了−ジを分離することにより容易に目的とする本発明
の新種バクテリオファージを得ることが出来る。
離すれば一本発明の新種ファージを濃厚に含有する混合
バクテリオファージが得られ、更に該ファーシカ・ら常
法により数珠分離−精°製して純粋なバクテリオファー
ジを得、この純粋なバクテリオファージから、常法によ
りＤＮＡを抽出し、該ＤＮＡをエンドヌクレアーゼを用
いて切断し、 ＤＮＡ断片を得−これをアガロ−スミ気
泳動法により分析し、目的とするＤＮＡ部位にエンドヌ
クレアーゼ切断部位を有するかどうかを識別することに
より１本発明の新種ファージを得ることが出来る〇捷た
更に、より簡便な方法としては一上記した不透明な溶菌
斑より分離した混合バクテリオファージ数をエンドヌク
レアーゼを有しない大腸菌及びエンドヌクレアーゼを有
する大腸菌を夫々用いて測定し、エンドヌクレアーゼを
有する大腸菌により測定したバクテリオファージ数／エ
ンドヌクレアーゼを有しない大腸菌により測定したバク
テリオファージ数の値が最も大きい値を示すバクチリオ
フ了−ジを分離することにより容易に目的とする本発明
の新種バクテリオファージを得ることが出来る。
以上の如くして得られた本発明の新種バクテリオファー
ジのＤＮＡは一エンドヌクレアーゼにより後期プロモー
ターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分が切断
され−この切断部位に、目的とする遺伝情報を挿入させ
ることを効率良くしかも著しく容易に可能にする。
ジのＤＮＡは一エンドヌクレアーゼにより後期プロモー
ターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分が切断
され−この切断部位に、目的とする遺伝情報を挿入させ
ることを効率良くしかも著しく容易に可能にする。
また１本発明の新種バクテリオファージの醜上の後期プ
ロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分
に目的とするＤＮＡ断片を挿入し。
ロモーターより下流域でその付着末端に至るＤＮＡ部分
に目的とするＤＮＡ断片を挿入し。
得られた組み換え体ＤＮＡを宿主に感染させて宿主のＤ
ＮＡＫ組み込１せたのち保存し−その宿主細胞を２例え
ばトリプトン培地（後記実施例に記載）を用いて培養す
ることにより増幅された情報及び後期プロモルタ−の効
果に基づいて特定の蛋白質（酵素蛋白質−ホルモン２抗
原、抗体等）を大量に生合成せしめることが出来るので
１本発明の新種バクテリオファージは産業上極めて意義
深いものといえる。
ＮＡＫ組み込１せたのち保存し−その宿主細胞を２例え
ばトリプトン培地（後記実施例に記載）を用いて培養す
ることにより増幅された情報及び後期プロモルタ−の効
果に基づいて特定の蛋白質（酵素蛋白質−ホルモン２抗
原、抗体等）を大量に生合成せしめることが出来るので
１本発明の新種バクテリオファージは産業上極めて意義
深いものといえる。
以下一実施例を挙げて本発明を具体的に説明する０
なお、実施例において用いられる各培地は１次のとおり
である。
である。
■トリプトン寒天平板培地
トリプトン（Ｄｉｆｃｏ （社）製：） ／ ’Ａ、
ＮａＣ１ｏ−２ｓ係、５１１天／、λ係で一加圧滅菌し
たのち、Ｊｏｍｔずつ直径９ｃｒｎのシャーレに分注し
たものである。
ＮａＣ１ｏ−２ｓ係、５１１天／、λ係で一加圧滅菌し
たのち、Ｊｏｍｔずつ直径９ｃｒｎのシャーレに分注し
たものである。
■Ｂ、−ノット了ガー
トリプトｙ 〔Ｄｉｆｃｏ （社）製） ／ ％、−Ｎ
ａＣ１ｏ、ｓｓｌ、 ＭｇＣｌ２！ ｍＭ−ビタミンＢ
ｌ／、−ｔμノ／ｍｂ、寒天０−１４で−ｊ ｍｌずつ
小試験管に分注し一加圧滅菌したものである。
ａＣ１ｏ、ｓｓｌ、 ＭｇＣｌ２！ ｍＭ−ビタミンＢ
ｌ／、−ｔμノ／ｍｂ、寒天０−１４で−ｊ ｍｌずつ
小試験管に分注し一加圧滅菌したものである。
■トリプトン培地
トリプトン［Ｄｉｆｃｏ （社）製） ／ ’６− Ｎ
ａＣ１０−ｘｓ係で−）ＪＤ圧滅菌したものである。
ａＣ１０−ｘｓ係で−）ＪＤ圧滅菌したものである。
■Ｔ−Ｙ培地
トリプトン［Ｄｉｆｃｏ （社）製〕／係−酵母エキス
ｏ 、 ｓ ％−ＮａＣ１Ｏ−ｊ係−ｐＨ２，０で一加
圧滅菌したものである。
ｏ 、 ｓ ％−ＮａＣ１Ｏ−ｊ係−ｐＨ２，０で一加
圧滅菌したものである。
■ＥＭＢ−ラクトース培地
トリプトン［Ｄｉｆｃｏ （社）製］７係−酵母エキス
０ 、 ／ ４． ＮａＣ１Ｏ、ｊ ％−Ｋ２Ｉ（ＰＯ
４θ、−係、乳糖／係、メチレンブルーｔｏｍｇ／、ｌ
−エオシン５イエロー’ｌ ００ ｍ９ ／ ｐ−寒天
１．り係で一加圧滅菌したのち−２！ｍｔずつ直径９ｍ
のシャーレに分注したものである。
０ 、 ／ ４． ＮａＣ１Ｏ、ｊ ％−Ｋ２Ｉ（ＰＯ
４θ、−係、乳糖／係、メチレンブルーｔｏｍｇ／、ｌ
−エオシン５イエロー’ｌ ００ ｍ９ ／ ｐ−寒天
１．り係で一加圧滅菌したのち−２！ｍｔずつ直径９ｍ
のシャーレに分注したものである。
実施例
後期プロモーターＰＱより下流域でその付着末端に至る
Ｄ Ｎ Ａ ｇＩＩ分にのみ／個所のＥｃｏＲＪ切断部
位を有するλｇＩ ｇ、ｆ７１１２１バクチリオフ了
−ジの育オ重（１）λｃＩ ｇｉ７ｐ）ａｃ 、ｆジ凹
、バクチリオフ了−ジよりクリアー変異株λ９ｐしＬｃ
’ Ｓａｍｙバクチリオフ了−ジの分離 λｃｌ ｇ ５７ｐｌａｃ ６ Ｓａｍ７バクテリオフ
了−ジ〔光用大学より入手−Ｃｏｌｄ ＳＰｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ、。
Ｄ Ｎ Ａ ｇＩＩ分にのみ／個所のＥｃｏＲＪ切断部
位を有するλｇＩ ｇ、ｆ７１１２１バクチリオフ了
−ジの育オ重（１）λｃＩ ｇｉ７ｐ）ａｃ 、ｆジ凹
、バクチリオフ了−ジよりクリアー変異株λ９ｐしＬｃ
’ Ｓａｍｙバクチリオフ了−ジの分離 λｃｌ ｇ ５７ｐｌａｃ ６ Ｓａｍ７バクテリオフ
了−ジ〔光用大学より入手−Ｃｏｌｄ ＳＰｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ、。
ＮＹ、 Ｕ、Ｓ、Ａ−より入手可能（５ｔｒａｉｎ Ｎ
ｏ Ｃ８Ｈに乙）〕＊ （／ ０”／ｍｌ ） ０ 、
／ ｍｌ；を大腸菌ＱＤ諜。０３（光用大学より入手
）を指示菌としてトリプトン寒天培地上に撒き一温度、
ｊＯｃで／６時間培養したのち一生した溶菌炎中の透明
な溶菌斑からバクチリオフ了−ジを分離し−クリアー変
異株λｃ ｐｌａｃＳ影凹ｔ ハクテリオフ了−ジヲ得
り。
ｏ Ｃ８Ｈに乙）〕＊ （／ ０”／ｍｌ ） ０ 、
／ ｍｌ；を大腸菌ＱＤ諜。０３（光用大学より入手
）を指示菌としてトリプトン寒天培地上に撒き一温度、
ｊＯｃで／６時間培養したのち一生した溶菌炎中の透明
な溶菌斑からバクチリオフ了−ジを分離し−クリアー変
異株λｃ ｐｌａｃＳ影凹ｔ ハクテリオフ了−ジヲ得
り。
なお−このバクテリオファージは−これと後Ｂピのλ（
Ｂ（ｇｊ７に１ｇ０Ｂｌｐ ／Ｓバクチリオフ了−ジと
掛は合せてλｃＩｇｊ７ｐ襞！控、８ｏ４バクチリオフ
了−ジを育種するための親株の７つであり。
Ｂ（ｇｊ７に１ｇ０Ｂｌｐ ／Ｓバクチリオフ了−ジと
掛は合せてλｃＩｇｊ７ｐ襞！控、８ｏ４バクチリオフ
了−ジを育種するための親株の７つであり。
目的を達成子るために選ばれた株である。
（２）λｄ ｇ！７ １） 乙Ｑｌｌ一旦ｙｍ７バ
クテリオフアージの晋種宿主細菌が溶菌しないように一
溶菌に関与するＳ遺伝子が変異したバクテリオファージ
ＤＮＡλｃＩ ＆ｊ７Ｓａｍ、 （米国ワシントン社よ
り入手〕をＣａＣｌ２法により大腸菌ＱＤ〜ｐ００．３
に取り込ませたのち一培養して得たバクチリオフ了−゛
ジＱ（１０’／ｍｌ ） ０−２ ｍｌと、λ９■ざ！
７ＲＩｒｈｇＯバクチリオフ了−ジ（ＡＴＣＣＪ ／
２ｇ ｊ ） 液（／ ０９／ ｖｒｔ ）０ 、２ｍ
ｔ、及び大腸菌／ ／ ００ （Ｍａｘ −Ｐｌａｎｋ
−Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ西独−ハイデルベルクより入手）
（ｕＸ ／ ０８／ｍ１）０、コｍ６を混合したのち
、温度Ｊ７ｃで７５分間り口部処理し−そのｏ−７ｍ（
、をｉｏｍｔのトリプトン培地に温潤し一温度３２ｃで
３時間振盪培養してバクテリオファージの掛は合わせを
行ない培養液を得た。
クテリオフアージの晋種宿主細菌が溶菌しないように一
溶菌に関与するＳ遺伝子が変異したバクテリオファージ
ＤＮＡλｃＩ ＆ｊ７Ｓａｍ、 （米国ワシントン社よ
り入手〕をＣａＣｌ２法により大腸菌ＱＤ〜ｐ００．３
に取り込ませたのち一培養して得たバクチリオフ了−゛
ジＱ（１０’／ｍｌ ） ０−２ ｍｌと、λ９■ざ！
７ＲＩｒｈｇＯバクチリオフ了−ジ（ＡＴＣＣＪ ／
２ｇ ｊ ） 液（／ ０９／ ｖｒｔ ）０ 、２ｍ
ｔ、及び大腸菌／ ／ ００ （Ｍａｘ −Ｐｌａｎｋ
−Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ西独−ハイデルベルクより入手）
（ｕＸ ／ ０８／ｍ１）０、コｍ６を混合したのち
、温度Ｊ７ｃで７５分間り口部処理し−そのｏ−７ｍ（
、をｉｏｍｔのトリプトン培地に温潤し一温度３２ｃで
３時間振盪培養してバクテリオファージの掛は合わせを
行ない培養液を得た。
次に、この培養液にクロロホルム数滴を添刀口し充分混
合し、そのｏ−１１ｎ６を大腸菌ＱＤ３００Ｊ／λ株を
指示菌としてＢ１−ソフト７ガーと共にトリプトン寒天
培地上に撒き一温度３０Ｃで７ｇ時間培養したのち、生
じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑て−かつ大腸菌Ｗ、？
／１０ （ＡＴＣＣニア３ユｊ）株を指示閑としたトリ
プトン寒天培地上で溶菌斑を形成【−ないバクチリオフ
了−ジを分離し、λｃＩｇ ｊ ７ ｈ ｇ ＯＳａｍ
。バクテリオファージを得た。
合し、そのｏ−１１ｎ６を大腸菌ＱＤ３００Ｊ／λ株を
指示菌としてＢ１−ソフト７ガーと共にトリプトン寒天
培地上に撒き一温度３０Ｃで７ｇ時間培養したのち、生
じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑て−かつ大腸菌Ｗ、？
／１０ （ＡＴＣＣニア３ユｊ）株を指示閑としたトリ
プトン寒天培地上で溶菌斑を形成【−ないバクチリオフ
了−ジを分離し、λｃＩｇ ｊ ７ ｈ ｇ ＯＳａｍ
。バクテリオファージを得た。
なお−大腸菌ＱＤＪＯ０，３７λ株は、大腸菌ＱＤｊ０
０３の中力）らλｖｉｒ存在下で生育する変異株として
分離したλ耐性株である。
０３の中力）らλｖｉｒ存在下で生育する変異株として
分離したλ耐性株である。
なおまたーλｖｉｒは一λバクチリオフ了−ジが溶原化
された宿主細菌〔大腸菌Ｗ ３３ ｊ ＯλｃＩｇｓ７
（ＡＴＣＣ３ｉ ２２ｇ ））馨培養し一変異処理（例
えば紫外線処理等）をしたλバクテリオファージを感染
させ−ｍ菌斑を形成するバクテリオファージを分離する
ことにより得られる。
された宿主細菌〔大腸菌Ｗ ３３ ｊ ＯλｃＩｇｓ７
（ＡＴＣＣ３ｉ ２２ｇ ））馨培養し一変異処理（例
えば紫外線処理等）をしたλバクテリオファージを感染
させ−ｍ菌斑を形成するバクテリオファージを分離する
ことにより得られる。
次に−得られたλｃＩｇＪ７ｈｇＯ８＆ｍ７ｉＺクテリ
オフ了−ジとλｃｂ ｔ Ｏｕ ２ＲＩｌ”バクテリオ
ファージを上記と全く同様の方法で掛は合わせを行い一
該培養液にクロロホルム数滴を添７１０し充分混合し、
その０−／ｍＬを大腸菌ＱＤｊ ００ Ｊ ／φｇｏｃ
φｇ。
オフ了−ジとλｃｂ ｔ Ｏｕ ２ＲＩｌ”バクテリオ
ファージを上記と全く同様の方法で掛は合わせを行い一
該培養液にクロロホルム数滴を添７１０し充分混合し、
その０−／ｍＬを大腸菌ＱＤｊ ００ Ｊ ／φｇｏｃ
φｇ。
ｖｉｒ存在下で生育可能な大腸菌ＱＤｊ００．３の変異
株）を指示菌としてＢ、−ソフトアガーと共にトリプト
ン寒天培地上に撒き一温７１３０ Ｃて／乙時間培養後
、生じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑で一大腸菌ＷＪｌｌ
Ｏ株を指示閑としたトリプトン寒天培地上で溶菌斑を形
成しないファージを分離し。
株）を指示菌としてＢ、−ソフトアガーと共にトリプト
ン寒天培地上に撒き一温７１３０ Ｃて／乙時間培養後
、生じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑で一大腸菌ＷＪｌｌ
Ｏ株を指示閑としたトリプトン寒天培地上で溶菌斑を形
成しないファージを分離し。
λｃＩｇＪ７ｂ６０１ｔユ声四７バクテリオフ了−ジを
Ｋｎ だ。
Ｋｎ だ。
得られた該ファージよりＤＮＡを常法により′抽出し−
これをＥｃｏＲＩ Ｃ宝酒造（株）より入手〕により切
断してＤＮＡ断片を得−該断片を７ガロース電気泳動法
により分析した結果−該ファージのＤＮＡは分子の右端
にユ個所のＥＣＯＲＩ切断部位を有するＤＮＡであった
。
これをＥｃｏＲＩ Ｃ宝酒造（株）より入手〕により切
断してＤＮＡ断片を得−該断片を７ガロース電気泳動法
により分析した結果−該ファージのＤＮＡは分子の右端
にユ個所のＥＣＯＲＩ切断部位を有するＤＮＡであった
。
なお−λｃｂ乙Ｏｌｌｘ ＲＩ’バタテリオファージは
λｃＩｇｓ２ｂ乙０１２ ＲＩバクテリオファージを温
度、３０Ｃで−トリプトン寒天平板培地上で大腸菌Ｗ３
ｉｉｏ株を指示菌として培養し透明な溶菌斑をつ（る）
了−ジを分離することにより得た。
λｃＩｇｓ２ｂ乙０１２ ＲＩバクテリオファージを温
度、３０Ｃで−トリプトン寒天平板培地上で大腸菌Ｗ３
ｉｉｏ株を指示菌として培養し透明な溶菌斑をつ（る）
了−ジを分離することにより得た。
ナオ’Ｅ タ、λｃＩｇ、５７ｂ６０１１２ｆｔＩ”ｉ
Ｚり７．、’）オファージの分離は特開昭３３−６／７
９ｇ号公報−畝の方法により行なった。
Ｚり７．、’）オファージの分離は特開昭３３−６／７
９ｇ号公報−畝の方法により行なった。
（３〕 λ３Ｉｇｊ７ｂ３才ｔｌユＳａｍ７／ＲＩｉ’
ｌｉリオフ了−シ→分離項目（２）で得られたλＣＩｇ
ｊ７ｂ６０”−ＩＳａｒｎ−□７ バクテリオフ了−ジを、大腸菌ＱＤ１００３株及び大腸
菌ＱＤ ｊ ００３ （ＲＩ’）を用いて微生物的濃縮
法で濃縮することによりＥｃｏＲＩ切断部位を全くもた
ないλ（＝工ｇＪ７ｂ乙０’１２を四７／ＲＩバクチリ
オフ了−ジを得た。
ｌｉリオフ了−シ→分離項目（２）で得られたλＣＩｇ
ｊ７ｂ６０”−ＩＳａｒｎ−□７ バクテリオフ了−ジを、大腸菌ＱＤ１００３株及び大腸
菌ＱＤ ｊ ００３ （ＲＩ’）を用いて微生物的濃縮
法で濃縮することによりＥｃｏＲＩ切断部位を全くもた
ないλ（＝工ｇＪ７ｂ乙０’１２を四７／ＲＩバクチリ
オフ了−ジを得た。
なお、大腸菌ｑＤｒ００ｊ（ＲＩ）株は一薬剤耐性因子
ＲＩ（アンビシリンに耐性〕をもつ大腸菌ＲＹ−／、？
（カリフォルニア大学、Ｈ，Ｗ Ｂｏｙｅｒより入手）
と大腸菌ＱＤ−ｔθ０３を混合培養【−薬剤耐性因子を
もつ大腸菌Ｑｌ）ｊ００３（ＲＩ）を分離して得た株で
ある。
ＲＩ（アンビシリンに耐性〕をもつ大腸菌ＲＹ−／、？
（カリフォルニア大学、Ｈ，Ｗ Ｂｏｙｅｒより入手）
と大腸菌ＱＤ−ｔθ０３を混合培養【−薬剤耐性因子を
もつ大腸菌Ｑｌ）ｊ００３（ＲＩ）を分離して得た株で
ある。
すなわち、大腸菌ＱＤ！００．３をトリプトン培地で温
度ｊ７Ｃ−／ｇ時間靜置培養して得た培養液０、ユＪ−
ｍｌ； （／ ０９／ｍｌ ）とλＣＩ ｇ ｊ ７ｂ
６０ Ｑ ２３Ｂｐ ７バクテリオ７了−ジ液０ 、
／ ｍＬ （、／ ０’／ｍｌ ）とを温度ｑ乙Ｃにｈ
０温１７たＢ１−ンフト了ガー３ ｍｌ中で混合し−ト
リプトン寒天平板培地上に撒き一温度３２Ｃで４−ｇ、
５時間培養したのち−これによリス−Ｍｇ Ｆ＜衝ｒｉ
ｕ ｍｊとクロロホルム３滴を添加し一温度３２′ｃに
７１分間放置し−その上澄をピペットでゴム栓付の小試
験管に移してバクテリオファージ液を得た。
度ｊ７Ｃ−／ｇ時間靜置培養して得た培養液０、ユＪ−
ｍｌ； （／ ０９／ｍｌ ）とλＣＩ ｇ ｊ ７ｂ
６０ Ｑ ２３Ｂｐ ７バクテリオ７了−ジ液０ 、
／ ｍＬ （、／ ０’／ｍｌ ）とを温度ｑ乙Ｃにｈ
０温１７たＢ１−ンフト了ガー３ ｍｌ中で混合し−ト
リプトン寒天平板培地上に撒き一温度３２Ｃで４−ｇ、
５時間培養したのち−これによリス−Ｍｇ Ｆ＜衝ｒｉ
ｕ ｍｊとクロロホルム３滴を添加し一温度３２′ｃに
７１分間放置し−その上澄をピペットでゴム栓付の小試
験管に移してバクテリオファージ液を得た。
次に、大腸菌ＱＤ６００３（ＲＩ）をトリプトン培地で
温度、７７Ｃ，／、ｇ時間静置培誉して得た培養液０−
−２３ｍｂと、上呂己で得られたバクテリオファージを
大腸菌ＱＤｓｏｏａｃＲＩ）で測定した場合に１０７／
ｍｌになるように稀釈し−そのｏ−ｉｍｂを用いて上記
と全く同様に操作を行ないバクテリオファージ液を得た
。
温度、７７Ｃ，／、ｇ時間静置培誉して得た培養液０−
−２３ｍｂと、上呂己で得られたバクテリオファージを
大腸菌ＱＤｓｏｏａｃＲＩ）で測定した場合に１０７／
ｍｌになるように稀釈し−そのｏ−ｉｍｂを用いて上記
と全く同様に操作を行ないバクテリオファージ液を得た
。
そして上記の大腸菌ＱＤ３００．３と大腸１１ＱＤｓｏ
ｏ３ｃＲＩ）を用いる方法を交互に７０回繰り返し、最
後に大腸菌ＱＤ３０θ３の方法で処理したバクテリオフ
ァージ液のバクテリオファージ液を大腸菌ＱＤ！００ｊ
ＣＲ，Ｉ）を用いて測定したところ。
ｏ３ｃＲＩ）を用いる方法を交互に７０回繰り返し、最
後に大腸菌ＱＤ３０θ３の方法で処理したバクテリオフ
ァージ液のバクテリオファージ液を大腸菌ＱＤ！００ｊ
ＣＲ，Ｉ）を用いて測定したところ。
大腸菌Ｑｆ）６００．３で測定した数と変らなＡ値を示
したＯ このバクテリオファージ液を１０３／ｍｔに稀釈し、そ
のｏ−ｉｍｂを大腸菌ＱＤＪＯＯ，ｊ培養液の０．２才
ｍｌに混合１−トリプトン寒天平板上で互に車ならな％
溶菌斑をつくらせ、そこからＥｃ ｏＲＩの作用を全（
受けないバクテリオファージλｃＩｇｊ７ｂ乙０＜／コ
シ包、 ／ ＲＩ株を単離した。
したＯ このバクテリオファージ液を１０３／ｍｔに稀釈し、そ
のｏ−ｉｍｂを大腸菌ＱＤＪＯＯ，ｊ培養液の０．２才
ｍｌに混合１−トリプトン寒天平板上で互に車ならな％
溶菌斑をつくらせ、そこからＥｃ ｏＲＩの作用を全（
受けないバクテリオファージλｃＩｇｊ７ｂ乙０＜／コ
シ包、 ／ ＲＩ株を単離した。
（４）λｇＩ ｇ！７ｈｇＯ’ｃ、 ｌ ｐ ／ Ｓバ
クチリオファ−ジの育種λｃＩｇｓ２ｈｇｏａｔｔ ｓ
ＲＩλ３ ＳＲＩλ２ ｓＲＩλ１バクテリオ７ 了−
シ液０．／ｍＬを大腸ｉ ／ ／ ００ （／ ＯＱ／
ｍＬ、０．ｉｍｂ、）’ｌｉ指示菌としてトリプトン寒
天上に撒き一温度３’ＯＣで１６時間培養したのち。
クチリオファ−ジの育種λｃＩｇｓ２ｈｇｏａｔｔ ｓ
ＲＩλ３ ＳＲＩλ２ ｓＲＩλ１バクテリオ７ 了−
シ液０．／ｍＬを大腸ｉ ／ ／ ００ （／ ＯＱ／
ｍＬ、０．ｉｍｂ、）’ｌｉ指示菌としてトリプトン寒
天上に撒き一温度３’ＯＣで１６時間培養したのち。
生ずる透明な溶菌斑を採取し−そこ刀）らλｃＩｈｇＯ
ａｔｔ ｓＲＩλ３ｓＲＩλ２ ｓＲＩλ、バクテリオ
ファージを分離１７た。
ａｔｔ ｓＲＩλ３ｓＲＩλ２ ｓＲＩλ、バクテリオ
ファージを分離１７た。
なお− λすｇ ｓ；ｐｈｇ ０ａｔｔ ｓＲＩλ３ｓ
ＲＩλ２ｓＲ■λ、は、例えば特開昭ｊオーオｇ０９６
号公報に記載の方法により得ることができる。
ＲＩλ２ｓＲ■λ、は、例えば特開昭ｊオーオｇ０９６
号公報に記載の方法により得ることができる。
次に−λすｈｇ ｏ ａｔ？ ｓＲＩλ；ｓＲＩλ２ｓ
ＲＩλ７バクテリオフアージ液（／ ０９７ ｍｌ；
） ０−２ｍｂと項目（３） テ得られたλすｇＪ７ｂ
乙ＱｌｌλＳａｍ−ｔ／ ＲＩバクテリオファージ液（
／ ０９７ｍ１ ） ０− Ａｍε−大腸菌／１００（
λＸ ／ ０８／ｍｔ ） ０−２７１４６を２昆合し
たのち−これを温度、７７Ｃでｌ１分間力０温し−その
ｏ−ｉｍｂを／Ｄｍεのトリプトン培地に添加し一温度
３２Ｃで３時間振盪培養し、バクテリオファージの掛は
合わせを行ない培養液を得た。
ＲＩλ７バクテリオフアージ液（／ ０９７ ｍｌ；
） ０−２ｍｂと項目（３） テ得られたλすｇＪ７ｂ
乙ＱｌｌλＳａｍ−ｔ／ ＲＩバクテリオファージ液（
／ ０９７ｍ１ ） ０− Ａｍε−大腸菌／１００（
λＸ ／ ０８／ｍｔ ） ０−２７１４６を２昆合し
たのち−これを温度、７７Ｃでｌ１分間力０温し−その
ｏ−ｉｍｂを／Ｄｍεのトリプトン培地に添加し一温度
３２Ｃで３時間振盪培養し、バクテリオファージの掛は
合わせを行ない培養液を得た。
次に、該培養液にクロロホルム数滴を添加し充分混合し
、その０．ｉｍｂを大腸ｍＱＤｓｏｏ３／λ株を指示菌
としてトリプトン寒天培地上に撒き一温度３０、Ｃで７
６時間培養したのち一生した＠菌斑中の不透明な溶菌斑
で一大腸％Ｗ３／１０株を指示菌としたトリプトン寒天
培地上で溶菌斑を形成しないファージを分離し− λｓ
Ｉｇｓ２ｈｇｏＳｌｐ／Ｓバクテリオファージを得た。
、その０．ｉｍｂを大腸ｍＱＤｓｏｏ３／λ株を指示菌
としてトリプトン寒天培地上に撒き一温度３０、Ｃで７
６時間培養したのち一生した＠菌斑中の不透明な溶菌斑
で一大腸％Ｗ３／１０株を指示菌としたトリプトン寒天
培地上で溶菌斑を形成しないファージを分離し− λｓ
Ｉｇｓ２ｈｇｏＳｌｐ／Ｓバクテリオファージを得た。
（５）λ旦Ｉ Ｌｔ７ｐｌａｃ−ｔむ匹、８０４バクテ
リオフアージの育種項目（１）で得られたλｃｐ（１）
’ Ｓａｍｙバクテリ、ｔ７了−ジ液（／ ０”ｉｍｂ
） ０−２ｍｌと項目（４）で得られたλｃＩｇ！７
ｈｇＯｓｌｐ ／Ｓバクチリオフ了−ジ液（／ ０９／
ｍｌ ） ０ 、２ｍｔ−大腸菌／ １００（２ｘ ／
０８／ｒｎｂ ） ０ 、２ｍｂを混合したのち−こ
れを温度、７７Ｃで７５分間加温し−そのｏ、／ｍｌ、
を１０ｍ６のトリプトン培地に添７１ＬＩ Ｌ一温度、
？７Ｃで３時間振甑培養し、フ了〜ジの掛は合わせを行
ない培養液を得た。
リオフアージの育種項目（１）で得られたλｃｐ（１）
’ Ｓａｍｙバクテリ、ｔ７了−ジ液（／ ０”ｉｍｂ
） ０−２ｍｌと項目（４）で得られたλｃＩｇ！７
ｈｇＯｓｌｐ ／Ｓバクチリオフ了−ジ液（／ ０９／
ｍｌ ） ０ 、２ｍｔ−大腸菌／ １００（２ｘ ／
０８／ｒｎｂ ） ０ 、２ｍｂを混合したのち−こ
れを温度、７７Ｃで７５分間加温し−そのｏ、／ｍｌ、
を１０ｍ６のトリプトン培地に添７１ＬＩ Ｌ一温度、
？７Ｃで３時間振甑培養し、フ了〜ジの掛は合わせを行
ない培養液を得た。
次に一該培養液にクロロホルム数滴を加えて充分混合し
−その０−／ｍｌを大腸３ＱＤＪＯ０，３／φｇ。
−その０−／ｍｌを大腸３ＱＤＪＯ０，３／φｇ。
株を指示菌としてＢ、−ソフトアガーと共にトリプトン
寒天培地上に撒き一温度３０Ｃで１６時間培養したのち
、生じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑からバクテリオファ
ージを分離しλｃＩ ｇ ４７ ｐｌａｃ −ｔＳａｍ
８０４バクテリオファージヲ得た。
寒天培地上に撒き一温度３０Ｃで１６時間培養したのち
、生じた溶菌炎中の不透明な溶菌斑からバクテリオファ
ージを分離しλｃＩ ｇ ４７ ｐｌａｃ −ｔＳａｍ
８０４バクテリオファージヲ得た。
□７
なお−λすｇ ｓ ７ ｐｌａｃ 、ｔ Ｓａｍ、８０
４バクテリオフアージからＤＮＡを抽出しこれを常法に
よりＥｃｏＲＩ （全酒造（株）より入手〕で切断して
７ガロース電気泳動を行なったところ、ＤＮＡの中央部
分に３個所のＥｃｏＲＩ切断部位を有していることが確
かめられた。
４バクテリオフアージからＤＮＡを抽出しこれを常法に
よりＥｃｏＲＩ （全酒造（株）より入手〕で切断して
７ガロース電気泳動を行なったところ、ＤＮＡの中央部
分に３個所のＥｃｏＲＩ切断部位を有していることが確
かめられた。
（６）λｃＩｇｊ７ｓａｍ ８０４２バクテリオフアー
ジの育種−□７ 項目（５）で得られたλｃＩ＆ｊ？ｐ頭！陰７８０４バ
クテリオ７了−ジを大腸菌／１００とＴ−Ｙ培地を用い
て太址培養し−ＣｓＣ１密度こう配遠心を用いてバクチ
リオフ了−ジを精製した。得られた精製バクチリオフ了
−ジをユ乙Ｏｍμにおける吸光度がｇになる様に０．０
／ Ｍ Ｔｒｉｓ −ＨＣＩ（ｐＨｇ、０ ）−／
ｍＭ ＭｇＣｌ２．及び０−／ｍＭエチレンジ了ミンチ
トラ酢酸よりなる緩衝液で希釈し−その０．ｊ〜／ ｍ
Ａをｈｏ＃Ｉホルム了ミド及ヒ１０ｍＭエチレンジアミ
ンテトラ酢酸を含む０．／Ｍトリス緩衝ａ（ｐＨｇ−ｓ
）１００〜／ｓｕｍ乙に対して温度ユ４（Ｃで／６時間
透析１−ることによりＤＮＡを抽出した。これを更にｏ
、ｉｍｙ１エチレンジ了ミンチトラ酢酸を含むＯ，１Ｍ
トリス緩衝液（ｐＨ７，３）／５Ｏｒｒｔに対して温度
ｌＩＣで９回透析してＤＮＡ標品を得た。
ジの育種−□７ 項目（５）で得られたλｃＩ＆ｊ？ｐ頭！陰７８０４バ
クテリオ７了−ジを大腸菌／１００とＴ−Ｙ培地を用い
て太址培養し−ＣｓＣ１密度こう配遠心を用いてバクチ
リオフ了−ジを精製した。得られた精製バクチリオフ了
−ジをユ乙Ｏｍμにおける吸光度がｇになる様に０．０
／ Ｍ Ｔｒｉｓ −ＨＣＩ（ｐＨｇ、０ ）−／
ｍＭ ＭｇＣｌ２．及び０−／ｍＭエチレンジ了ミンチ
トラ酢酸よりなる緩衝液で希釈し−その０．ｊ〜／ ｍ
Ａをｈｏ＃Ｉホルム了ミド及ヒ１０ｍＭエチレンジアミ
ンテトラ酢酸を含む０．／Ｍトリス緩衝ａ（ｐＨｇ−ｓ
）１００〜／ｓｕｍ乙に対して温度ユ４（Ｃで／６時間
透析１−ることによりＤＮＡを抽出した。これを更にｏ
、ｉｍｙ１エチレンジ了ミンチトラ酢酸を含むＯ，１Ｍ
トリス緩衝液（ｐＨ７，３）／５Ｏｒｒｔに対して温度
ｌＩＣで９回透析してＤＮＡ標品を得た。
ついで、得られたλｃＩｇｔ２ｐ塗ｊ繻三、８０４バク
チリオフ了−ジＤＮＡ／ 、ｇμノをＥｃｏＲＩ （全
酒造（株）より入手〕で切断したのち−Ｔ”ＤＮＡＩＪ
ガーゼ〔全酒造（株）より入手〕を添加し、温度６Ｃで
ｔｔｇ時間保持し組換え体ＤＮＡの混合物を作表した。
チリオフ了−ジＤＮＡ／ 、ｇμノをＥｃｏＲＩ （全
酒造（株）より入手〕で切断したのち−Ｔ”ＤＮＡＩＪ
ガーゼ〔全酒造（株）より入手〕を添加し、温度６Ｃで
ｔｔｇ時間保持し組換え体ＤＮＡの混合物を作表した。
このようにして得た組換え体ＤＮＡの混合物０．０９μ
ノを、？Ｘ１０１０（個）の大腸菌ＱＤｊ００．：ｔに
ＣａＣｌ２法（： Ｍ、 Ｍａｎｄｅｌ ａｎｄ Ａ、
Ｈｉｇａ、 ＪｏＭｏｌ。
ノを、？Ｘ１０１０（個）の大腸菌ＱＤｊ００．：ｔに
ＣａＣｌ２法（： Ｍ、 Ｍａｎｄｅｌ ａｎｄ Ａ、
Ｈｉｇａ、 ＪｏＭｏｌ。
Ｂｔｏｌ−＋第３．３巻、／ｊ９頁（１９７０年）〕に
よって取り込１せたのち−Ｂ１−ンフト了ガーと共にト
リプトン寒天培地上に撒き一温度ｊ７Ｃで培養し約２０
０個の溶菌斑を傅た。次いで、夫々の溶菌斑〃為らファ
ージを分離し、その中からｌａｃ遺伝子部位を欠失し−
その結果としてＥｃ ｏＲＩ切断部位を／個所減少した
λｃＩ ｇ ｊ ７Ｓａｍ、 ８０４２バクテリオフア
一ジ株を得た。
よって取り込１せたのち−Ｂ１−ンフト了ガーと共にト
リプトン寒天培地上に撒き一温度ｊ７Ｃで培養し約２０
０個の溶菌斑を傅た。次いで、夫々の溶菌斑〃為らファ
ージを分離し、その中からｌａｃ遺伝子部位を欠失し−
その結果としてＥｃ ｏＲＩ切断部位を／個所減少した
λｃＩ ｇ ｊ ７Ｓａｍ、 ８０４２バクテリオフア
一ジ株を得た。
上６己の大遺伝子を有しないバクテリオファージの選択
は次の様にして行った。すなわち大遺伝子を有しない大
腸［ｉ 、２０８９株（ＡＴＣ（ｊＪ７ｘコ）をＥＭＢ
−ラクトース−頃培地上に撒き−その上に上記溶菌斑か
ら分離したバクチリオフ了−ジ液（／ ｏ７／ｍｌ ）
’ｌスポットして温度３０Ｃでｔｔｇ時間いバクテリ
オファージでは赤くならないので、赤くならないスポッ
トを与えるバクテリオファージを分離することにより里
遺伝子を有しないバクチリオフ了−ジを得た。
は次の様にして行った。すなわち大遺伝子を有しない大
腸［ｉ 、２０８９株（ＡＴＣ（ｊＪ７ｘコ）をＥＭＢ
−ラクトース−頃培地上に撒き−その上に上記溶菌斑か
ら分離したバクチリオフ了−ジ液（／ ｏ７／ｍｌ ）
’ｌスポットして温度３０Ｃでｔｔｇ時間いバクテリ
オファージでは赤くならないので、赤くならないスポッ
トを与えるバクテリオファージを分離することにより里
遺伝子を有しないバクチリオフ了−ジを得た。
（７） ２ｃＩ ｇｓｓ曇江ｍ、８０４２／ＲＩバクテ
リオフア一ジＤ分離項目（６）で得られたλ旦工ｇ！７
影■７８０４２バクテリオフアージは中央部分に一個所
の−ＲＩ切断部位を有しているので一該ファージから項
目（３）に記載されている方法と全（同様にしてＥｃ
ｏＲＩ切断部位を全くもたないλ（−■ｇｊ７ジ匹、８
０４２／ＲＩバクテリオファージを得た。
リオフア一ジＤ分離項目（６）で得られたλ旦工ｇ！７
影■７８０４２バクテリオフアージは中央部分に一個所
の−ＲＩ切断部位を有しているので一該ファージから項
目（３）に記載されている方法と全（同様にしてＥｃ
ｏＲＩ切断部位を全くもたないλ（−■ｇｊ７ジ匹、８
０４２／ＲＩバクテリオファージを得た。
（８）λＣＩ ｇ！７１１２１の育種
項目（７）で得られたλＱ■ｇｊ７ジ四７８０４２／Ｒ
Ｉバクテリオファージ液（／ ０９７ｍる）ｏ、ｘｍｔ
＝λＳバクテリオファージ液（／ ０”７ｍる）０．−
ｍる及び大腸菌／ ／ ００ （２’ Ｘ ／ ０８／
ｍｌ ） ０−２１７１６を混合したのち一温度、？
７Ｃで７５分間加温し−その０、／ｍｔをｉｏｍｔのト
リプトン培地に添ノ几し、温度、７７Ｃで３時間振盪培
養してバクテリオファージの掛は合わせを行ない培養液
を得た。
Ｉバクテリオファージ液（／ ０９７ｍる）ｏ、ｘｍｔ
＝λＳバクテリオファージ液（／ ０”７ｍる）０．−
ｍる及び大腸菌／ ／ ００ （２’ Ｘ ／ ０８／
ｍｌ ） ０−２１７１６を混合したのち一温度、？
７Ｃで７５分間加温し−その０、／ｍｔをｉｏｍｔのト
リプトン培地に添ノ几し、温度、７７Ｃで３時間振盪培
養してバクテリオファージの掛は合わせを行ない培養液
を得た。
次に、該培養液にクロロホルム数滴を添加し−充分混合
し、そのｏ、ｉｍｔを大腸菌１ｉｏｏ株を指示菌として
Ｂ１−ソフトアガーと共にトリプトン寒天培地上に撒き
一温度３０Ｃで／４時間培養したのち一生じた溶菌炎中
の不透明な溶菌斑ｌＯ個刀）ら７０株のバクテリオファ
ージを分離した。
し、そのｏ、ｉｍｔを大腸菌１ｉｏｏ株を指示菌として
Ｂ１−ソフトアガーと共にトリプトン寒天培地上に撒き
一温度３０Ｃで／４時間培養したのち一生じた溶菌炎中
の不透明な溶菌斑ｌＯ個刀）ら７０株のバクテリオファ
ージを分離した。
このようにして得られたバクテリオファージの数を大腸
菌／１００株と大腸菌１ｌＯＯ（ＲＩ）株を用いて測定
し、大腸菌／１００（ＲＩ）で測定したバクテリオファ
ージ数／犬腸閑１１００で測定したバクテリオファージ
数が最も大きい値を示すバクテリオファージを分離しλ
ｃ工ｇ！７１１２１バクチリオフ了−ジを得た。
菌／１００株と大腸菌１ｌＯＯ（ＲＩ）株を用いて測定
し、大腸菌／１００（ＲＩ）で測定したバクテリオファ
ージ数／犬腸閑１１００で測定したバクテリオファージ
数が最も大きい値を示すバクテリオファージを分離しλ
ｃ工ｇ！７１１２１バクチリオフ了−ジを得た。
なお、λＣバクテリオファージはλｃＩｇ！７バクテリ
オフアージ（ＡＴＣＣ，？ ／ニアｇＬり伜られる）か
ら項目（１〕の方法と同様にして分離して得たバクテリ
オファージであって−Ｅｃ ｏＲＩによる切断部位が、
後記プロモーターＰＱより下流域に７個所有するファー
ジである。
オフアージ（ＡＴＣＣ，？ ／ニアｇＬり伜られる）か
ら項目（１〕の方法と同様にして分離して得たバクテリ
オファージであって−Ｅｃ ｏＲＩによる切断部位が、
後記プロモーターＰＱより下流域に７個所有するファー
ジである。
以上のようにして傅た新種バクテリオファージλｃＩｇ
１７１１２１の性質は次のとおりである。
１７１１２１の性質は次のとおりである。
宿主：λバクテリオファージの宿主域と全く同様であっ
た。
た。
免疫：λバクテリオファージの免疫を示し、かつ温度感
受性であった。
受性であった。
溶原化：λバクテリオファージのアタッチメントサイト
を有し一宿王大腸閑に単独で溶原化可能であった。
を有し一宿王大腸閑に単独で溶原化可能であった。
Ｅｃ ｏＲＩによる制限：この新種バクテリオファージ
より常法によりＤＮＡを抽出し−これをＥｃｏＲＩ［全
酒造Ｃ株）より入手〕で切断し一７ガロース電気泳動法
により分析したところ、後期プロモーター ＰＱ部位よ
り下流域で−かつ付着末端に至るＤＮＡ部分に、唯一の
ＥｃｏＲＩ切断部位を有することが確認された。
より常法によりＤＮＡを抽出し−これをＥｃｏＲＩ［全
酒造Ｃ株）より入手〕で切断し一７ガロース電気泳動法
により分析したところ、後期プロモーター ＰＱ部位よ
り下流域で−かつ付着末端に至るＤＮＡ部分に、唯一の
ＥｃｏＲＩ切断部位を有することが確認された。
なお−λｃＩｇｊ７１１２１バクテリオフアージは。
このファージを常法により大腸菌（Ｅ、ｃ（＋ｌｉ ）
／１００（Ｍａｘ −Ｐｌａｎｋ −Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ
西独−ハイデルベルクより入手）に溶原化して得られる
溶原菌−すなわちＥ、 ｃｏｌｉ ／ ／ ｏ ｏ （
λｃＩ ｇｊ７１１２１）Ｃ機工 −研条寄第１３３
号（ＦＥＲＭ ＢＰ−ｉ ３．？ ））として工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されている。
／１００（Ｍａｘ −Ｐｌａｎｋ −Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ
西独−ハイデルベルクより入手）に溶原化して得られる
溶原菌−すなわちＥ、 ｃｏｌｉ ／ ／ ｏ ｏ （
λｃＩ ｇｊ７１１２１）Ｃ機工 −研条寄第１３３
号（ＦＥＲＭ ＢＰ−ｉ ３．？ ））として工業技
術院微生物工業技術研究所に寄託されている。
出願人 財団法人野田産業科学研究所
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）バクテリオファージＤＮＡ上において一被膜蛋白
質生合成の遺伝情報の転写に必要な後期プロモーターよ
り上ηε域でその付着末端に至るＤＮＡ部分に、エンド
ヌクレアーゼ切断部位が全（存在しないか−もしくはエ
ンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ断片を得たのち
この断片をＤＮＡＩＪガーゼを用いて再結合させた場合
に再構成可能な数のエンドヌクレアーゼ切断部位を有し
、更に後期プロモーターより下流域でその付着末端に至
るＤＮＡ部分に−／個所以上のエンドヌクレアーゼ切断
部位が／又はコ個所である特許請求の範囲外／項記載の
新種バクテリオファージ。 （３）エンドヌクレアーゼ抵抗性としたλ系バクテリオ
ファージ及び／又は被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写
に必要な後期プロモーターより上流域でその付着末端に
至るＤＮＡ部分に、エンドヌクレアーゼにより切断して
ＤＮＡ断片を得たのちこの断片をＤ Ｎ Ａ 、 ＩＪ
ガーゼを用いて再結合させた場合に再構成可能な数のエ
ンドヌクレアーゼ切断部位を有するλ系バクチリオフ了
−ジと、後期プロモーターより下流域でその付着末端に
至るＤＮＡ部分に、１個所以上のエンドヌクレアーゼ切
断部位を有するλ系バクテリオファージとを掛は合せる
ことを特徴とする− λ系バクチリオフ了−ジＤＮＡ上
において２被膜蛋白質化合成の遺伝情報の転写に必要な
後期プロモーターより上流域でその付着末端に至るＤＮ
Ａｇ分に一エンドヌクレアーゼ切断部位が全く存在しな
い刀・−もしくはエンドヌクレアーゼにより切断してＤ
ＮＡ断片を得たのちこの断片をＤＮＡＩＪガーゼを用い
て再結合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレア
ーゼ切断部位を有し、更に後期プロモーターより下流域
でその付着末端に至るＤＮＡ部分に−／個所以上のエン
ドヌクレアーゼ切断部位を有する新種バクテリオファー
ジの育種法。 （４）エンドヌクレアーゼ抵抗性としたλ系バクテリオ
ファージ及び被膜蛋白質生合成の遺伝情報の転写に必要
な後期プロモーターより上流域でその付着末端に至るＤ
ＮＡ部分に、エンドヌクレアーゼにより切断してＤＮＡ
断片を得たのちこの断片をＤＮＡ１．ｌガーゼを用いて
再結合させた場合に再構成可能な数のエンドヌクレアー
ゼ切断部位を有するλ系バクテリオファージに、措遺伝
子が存在する特許請求の範囲第３項記載の新種バクチリ
オフ了−ジの育種法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57093062A JPS58212781A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 新種バクテリオフア−ジ及びその育種法 |
| US06/498,802 US4865979A (en) | 1982-06-02 | 1983-05-27 | Novel bacteriophage and method for breeding thereof |
| EP83303125A EP0095934B1 (en) | 1982-06-02 | 1983-06-01 | Novel bacteriophage and method for breeding thereof |
| DE8383303125T DE3381989D1 (de) | 1982-06-02 | 1983-06-01 | Bakteriophage und verfahren zur zuechtung. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57093062A JPS58212781A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 新種バクテリオフア−ジ及びその育種法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58212781A true JPS58212781A (ja) | 1983-12-10 |
| JPH0149479B2 JPH0149479B2 (ja) | 1989-10-24 |
Family
ID=14072023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57093062A Granted JPS58212781A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | 新種バクテリオフア−ジ及びその育種法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4865979A (ja) |
| EP (1) | EP0095934B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58212781A (ja) |
| DE (1) | DE3381989D1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61274683A (ja) * | 1985-05-29 | 1986-12-04 | Kikkoman Corp | ベクタ− |
| JPH03502886A (ja) * | 1988-02-26 | 1991-07-04 | バイオソース・ジェネティクス・コーポレイション | 非核染色体形質転換 |
| US6054305A (en) * | 1996-10-03 | 2000-04-25 | Kikkoman Corporation | Pyruvate orthophosphate dikinase gene, recombinant DNA, and process for producing pyruvate orthophosphate dikinase |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5316931A (en) * | 1988-02-26 | 1994-05-31 | Biosource Genetics Corp. | Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes |
| US6284492B1 (en) | 1988-02-26 | 2001-09-04 | Large Scale Biology Corporation | Recombinant animal viral nucleic acids |
| US6054566A (en) | 1988-02-26 | 2000-04-25 | Biosource Technologies, Inc. | Recombinant animal viral nucleic acids |
| US5427908A (en) * | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
| WO1995027043A1 (en) * | 1994-04-05 | 1995-10-12 | Exponential Biotherapies, Inc. | Antibacterial therapy with genotypically modified bacteriophage |
| US20010043924A1 (en) * | 1994-04-05 | 2001-11-22 | Exponential Biotherapies, Inc. | Antibacterial therapy with bacteriophage physico-chemically altered to delay inactivation by the host defense system |
| US5741697A (en) * | 1995-11-30 | 1998-04-21 | University Of Rochester | Bacteriophage of chlamydia psittaci |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53133684A (en) * | 1977-04-26 | 1978-11-21 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Novel bacteriophage and fabricating same |
| FR2422685A1 (fr) * | 1978-04-14 | 1979-11-09 | Pasteur Institut | Vecteurs, derives du bacteriophage lambda, permettant l'insertion et l'expression d'un gene, procaryote ou eucaryote, sous le controle du promoteur et de l'operateur de l'operon lactose de la bacterie escherichia coli |
| JPS5558096A (en) * | 1978-10-25 | 1980-04-30 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Method of making novel recombined dna |
| JPS5561798A (en) * | 1978-10-30 | 1980-05-09 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | Preparation of novel recombination dna |
| JPS5835198A (ja) * | 1981-08-28 | 1983-03-01 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 新規ベクター |
| JPS5869898A (ja) * | 1981-10-23 | 1983-04-26 | Noda Sangyo Kagaku Kenkyusho | 新規なテンペレ−トフア−ジｄｎａ |
-
1982
- 1982-06-02 JP JP57093062A patent/JPS58212781A/ja active Granted
-
1983
- 1983-05-27 US US06/498,802 patent/US4865979A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-06-01 EP EP83303125A patent/EP0095934B1/en not_active Expired
- 1983-06-01 DE DE8383303125T patent/DE3381989D1/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61274683A (ja) * | 1985-05-29 | 1986-12-04 | Kikkoman Corp | ベクタ− |
| JPH03502886A (ja) * | 1988-02-26 | 1991-07-04 | バイオソース・ジェネティクス・コーポレイション | 非核染色体形質転換 |
| US6054305A (en) * | 1996-10-03 | 2000-04-25 | Kikkoman Corporation | Pyruvate orthophosphate dikinase gene, recombinant DNA, and process for producing pyruvate orthophosphate dikinase |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4865979A (en) | 1989-09-12 |
| JPH0149479B2 (ja) | 1989-10-24 |
| DE3381989D1 (de) | 1990-12-20 |
| EP0095934A2 (en) | 1983-12-07 |
| EP0095934B1 (en) | 1990-11-14 |
| EP0095934A3 (en) | 1985-08-14 |
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