JPS58210000A - リポ蛋白質コレステロ−ル濃度の測定方法 - Google Patents
リポ蛋白質コレステロ−ル濃度の測定方法Info
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- JPS58210000A JPS58210000A JP57092731A JP9273182A JPS58210000A JP S58210000 A JPS58210000 A JP S58210000A JP 57092731 A JP57092731 A JP 57092731A JP 9273182 A JP9273182 A JP 9273182A JP S58210000 A JPS58210000 A JP S58210000A
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- JP
- Japan
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- cholesterol
- electrophoresis
- nad
- lipoprotein cholesterol
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はリボ蛋白質コレステロ−ルミ度の測定方法に関
する。
する。
一般に、血清中リポ蛋白質コレステロール、就中高比重
リポ蛋白質コレステロール（ＨＤＬ−０）濃度の測定は
、冠状動脈症等の疾患の成因や診断の場−に於て有用で
ある。
リポ蛋白質コレステロール（ＨＤＬ−０）濃度の測定は
、冠状動脈症等の疾患の成因や診断の場−に於て有用で
ある。
而して、従来よりリボ蛋白質コレステロール濃度の測定
法としては種々の方法が報告せられているが、それぞれ
に難点があり、臨床上未だ充分満足し得るものはなかっ
た。
法としては種々の方法が報告せられているが、それぞれ
に難点があり、臨床上未だ充分満足し得るものはなかっ
た。
そこで、本発明者は斯かる従来の難点をｗｒ消し、信頼
性の高い、臨床上有効な測定方法を提供すべく種々研究
をｌねた結果、染色反応が速く、シャープで鮮明なパタ
ーンか得られる新規な染色試薬を開発し、本発明を完成
したものである。
性の高い、臨床上有効な測定方法を提供すべく種々研究
をｌねた結果、染色反応が速く、シャープで鮮明なパタ
ーンか得られる新規な染色試薬を開発し、本発明を完成
したものである。
すなわち、本発明は検体を′電気泳動に付してリポ蛋白
質コレステロールを分画した後、該リポ蛋白質コレステ
ロールにコレステロールエステラーゼ（以下ＯＫと略称
すン、好気性微生物由来のＮＡＤ依存性コレステロール
デヒドロデナーゼ（以下ＯＤＨと略称す）、ＭＡＤ、ジ
アフオラーセ゛（以下り工と略称す）及びＩＩＴＢを含
有する染色試薬を作用させて発色せしめることを特徴と
するリボ蛋白質コレステロール諷度の測定方法である。
質コレステロールを分画した後、該リポ蛋白質コレステ
ロールにコレステロールエステラーゼ（以下ＯＫと略称
すン、好気性微生物由来のＮＡＤ依存性コレステロール
デヒドロデナーゼ（以下ＯＤＨと略称す）、ＭＡＤ、ジ
アフオラーセ゛（以下り工と略称す）及びＩＩＴＢを含
有する染色試薬を作用させて発色せしめることを特徴と
するリボ蛋白質コレステロール諷度の測定方法である。
本発明を集流するには、まず血清等の体液を検体として
電気泳動に付してリポ蛋白質コレステロールを分画する
。而してここに電気泳動はリボ蛋１債コレステロールを
分画し得るものであれば、その具体的泳動法の如イＩ′
Ｉｊを問わないが、例えは泳動用支持体としては薄層ア
ガロースフィルムが、支持体緩衝液としてはバルビター
ル緩伽液が、泳動用緩衝液としてはトリシン−Ｌ１緩衝
液が好適であり、泳動条件としてはアガロースフィルム
−コーニングシステムで９０Ｖ、６０〜Ｚｏ分間泳動で
目的を達することかできる。
電気泳動に付してリポ蛋白質コレステロールを分画する
。而してここに電気泳動はリボ蛋１債コレステロールを
分画し得るものであれば、その具体的泳動法の如イＩ′
Ｉｊを問わないが、例えは泳動用支持体としては薄層ア
ガロースフィルムが、支持体緩衝液としてはバルビター
ル緩伽液が、泳動用緩衝液としてはトリシン−Ｌ１緩衝
液が好適であり、泳動条件としてはアガロースフィルム
−コーニングシステムで９０Ｖ、６０〜Ｚｏ分間泳動で
目的を達することかできる。
次に、該電気泳動により分離せられたリポ蛋白質コレス
テロール、すなわち高地ｌリボ蛋白質コレステロール（
ＨＤＬ−０）、超低比重リポ蛋白質コレステロール（Ｖ
ＬＤＬ−０） 、低比重リボ蛋白質コレステロール（Ｌ
ＤＬ−０）に、０ＪＯＤＨ，ＮＡＤ、ＤＩ及び射ＴＢを
含肩する染色試薬を作用させる。
テロール、すなわち高地ｌリボ蛋白質コレステロール（
ＨＤＬ−０）、超低比重リポ蛋白質コレステロール（Ｖ
ＬＤＬ−０） 、低比重リボ蛋白質コレステロール（Ｌ
ＤＬ−０）に、０ＪＯＤＨ，ＮＡＤ、ＤＩ及び射ＴＢを
含肩する染色試薬を作用させる。
ここに染色試薬は、例えば０．１Ｍ）＋７シンＮａ（ｐ
Ｈ７，６〜９．６ ） ３ ｍｌ中、０Ｋ１０〜１５ｕ
。
Ｈ７，６〜９．６ ） ３ ｍｌ中、０Ｋ１０〜１５ｕ
。
ＣＤＩ（５〜ｉ ５ ｕ、 Ｄｌｌｏ 〜１５ｕ、１’
ＮＡＤ１０〜１５ ｍＭ、 Ｎ Ｔ Ｂ Ｏ，５〜１
ｍＭを配合することによって？Ａ製される。
ＮＡＤ１０〜１５ ｍＭ、 Ｎ Ｔ Ｂ Ｏ，５〜１
ｍＭを配合することによって？Ａ製される。
尚、本発明に用いられるＯＤＨは、前述の如く好気性微
生物由来のＮＡＤ依任性のものであることが必須である
が、斯かるＯＤＨとしては天野↓業株式会社より提供さ
れているものが好適である。
生物由来のＮＡＤ依任性のものであることが必須である
が、斯かるＯＤＨとしては天野↓業株式会社より提供さ
れているものが好適である。
而して、斯かる染色試薬をリボ蛋白質コレステロールに
作用させる方法としては所謂浸漬法、サンドインチ法の
何れをも採用し得るものであって、通常６５〜６８°Ｃ
で２０〜４０分間程度インキュペイジョンすることによ
ってリポ蛋白質コレステロールを発色せしめることがで
きるものである。
作用させる方法としては所謂浸漬法、サンドインチ法の
何れをも採用し得るものであって、通常６５〜６８°Ｃ
で２０〜４０分間程度インキュペイジョンすることによ
ってリポ蛋白質コレステロールを発色せしめることがで
きるものである。
この発色原理は次式の辿りである。
エステル型コレステロール□遊離型コレステロール↑
↑ ＣＤＨＤＩ 次いで、斯かる発色反応を発色反応停止液（１０％酢酸
）を用いて停止せしめた後、精製水にて洗浄後乾燥し、
濃度計（ａｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ ） 等により、
）ＩＤＬ−０，ＶＬＤＬ−０，ＬＤＬ−Ｃの各分画チを
伸１定する。そして、常法により求めた総コレステロー
ルに各饅を乗じてＨＤＬ−０゜ＶＬＩＪＬ −０及ヒＬ
Ｄ Ｌ −Ｃ（７）５度ヲ＋１１１１ 定ｆ ル。
↑ ＣＤＨＤＩ 次いで、斯かる発色反応を発色反応停止液（１０％酢酸
）を用いて停止せしめた後、精製水にて洗浄後乾燥し、
濃度計（ａｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ ） 等により、
）ＩＤＬ−０，ＶＬＤＬ−０，ＬＤＬ−Ｃの各分画チを
伸１定する。そして、常法により求めた総コレステロー
ルに各饅を乗じてＨＤＬ−０゜ＶＬＩＪＬ −０及ヒＬ
Ｄ Ｌ −Ｃ（７）５度ヲ＋１１１１ 定ｆ ル。
以上の如く本発明は構成されるので、本発明方法を用い
れは、迅速な染色反応により、シャープかつ鮮明なパタ
ーンを得ることができ、極めて正確なリボ゛缶白賀コレ
ステロール＃度の測定を行い得るものである。しかも本
発明によるときは非特異反応も全く認められず、臨床上
極めて有利な測定法である。
れは、迅速な染色反応により、シャープかつ鮮明なパタ
ーンを得ることができ、極めて正確なリボ゛缶白賀コレ
ステロール＃度の測定を行い得るものである。しかも本
発明によるときは非特異反応も全く認められず、臨床上
極めて有利な測定法である。
以下実施例を挙げて本発明を更に説明する。
実施例
（１） 電気泳動条件
泳動用支持体：＃層アガロースフィルム支持体緩衝欣二
６ Ｑ ｍＭバルビタール緩衝液泳動用緩衝液： ５０
１ｎＭ トリシン−Ｌ１緩衝ｉ（ｌ （ｐ１４８．６
） 泳動条件：アガロースフィルム−コーニングシステム、
９０Ｖ、７０分間泳動 （２Ｊ 試薬の調製 ■染色試薬組成 ０．１ Ｍ ）リシンＮａ （ｐｌｉ３．６）
ろｒｎｌａｍ
１ ［］ｕＣＤＨ６ｕ Ｄ工 １０ｕＮＡＤ
１ＱｍＭＮＴＢ
Ｏ，７１＋ｍＭ■染色反応停止液：１０％
酢酸 ゛ ■洗浄液：鞘製氷 （３） 測定例 試料として血清６μｔを上記電気泳動条件により電気泳
動後、アガロースフィルムをセルから除去し、上記組成
染色試薬５ ｍｌをデル表面に均一に広げ、６７°Ｃで
６０分間反応させたところ、シャーシな赤紫色のコレス
テロール分画が得られた。
６ Ｑ ｍＭバルビタール緩衝液泳動用緩衝液： ５０
１ｎＭ トリシン−Ｌ１緩衝ｉ（ｌ （ｐ１４８．６
） 泳動条件：アガロースフィルム−コーニングシステム、
９０Ｖ、７０分間泳動 （２Ｊ 試薬の調製 ■染色試薬組成 ０．１ Ｍ ）リシンＮａ （ｐｌｉ３．６）
ろｒｎｌａｍ
１ ［］ｕＣＤＨ６ｕ Ｄ工 １０ｕＮＡＤ
１ＱｍＭＮＴＢ
Ｏ，７１＋ｍＭ■染色反応停止液：１０％
酢酸 ゛ ■洗浄液：鞘製氷 （３） 測定例 試料として血清６μｔを上記電気泳動条件により電気泳
動後、アガロースフィルムをセルから除去し、上記組成
染色試薬５ ｍｌをデル表面に均一に広げ、６７°Ｃで
６０分間反応させたところ、シャーシな赤紫色のコレス
テロール分画が得られた。
反応後１０チ酢酸に約１時間、次いで精製水に約１時間
浸した後１．ｏ ｙｉｔグリセロールを含ムロ％酢酸中
に約２分間浸した。
浸した後１．ｏ ｙｉｔグリセロールを含ムロ％酢酸中
に約２分間浸した。
然る後、７０℃で２０分間ドライヤーにて乾燥峰、分画
リポタンパク中のコレステロール分画チな５７０ ｎｍ
にてデンシトメトリー（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅ −ｔｒｙ
） （、、）ＩＤＬ−０，ＶＬＤＬ−Ｇｌｌ Ｌ＋Ｄ
Ｌ−０各々６５％、５％、６０％を得た。そして、常法
によって得た総コレステロール値１９５ｍ９／ａｚを乗
じ、）ＩＤＩＪ−０：６Ｆ３ｍｇ／ｄ１．ＶｂＤＬ−０
：１０ｍｇ／ｄｔ、Ｌ Ｄ Ｌ −ＣＪ ： ｉ ｉ
７ｍｑ／ｄｔを得た。
リポタンパク中のコレステロール分画チな５７０ ｎｍ
にてデンシトメトリー（ｄｅｎｓｉｔｏｍｅ −ｔｒｙ
） （、、）ＩＤＬ−０，ＶＬＤＬ−Ｇｌｌ Ｌ＋Ｄ
Ｌ−０各々６５％、５％、６０％を得た。そして、常法
によって得た総コレステロール値１９５ｍ９／ａｚを乗
じ、）ＩＤＩＪ−０：６Ｆ３ｍｇ／ｄ１．ＶｂＤＬ−０
：１０ｍｇ／ｄｔ、Ｌ Ｄ Ｌ −ＣＪ ： ｉ ｉ
７ｍｑ／ｄｔを得た。
（４）非特異反応
染色試薬からＯＤＨだけ抜いた血清シラ／り用試液を作
り、アガロースフィルムにて泳動した血清分画上及びア
ガロースフィルム全面に対する非特異反応を検討したと
ころ伺ら非特異反応を認めなかった。
り、アガロースフィルムにて泳動した血清分画上及びア
ガロースフィルム全面に対する非特異反応を検討したと
ころ伺ら非特異反応を認めなかった。
以上
Claims (1)
- 検体な電気泳動に付してリポ蛋白質コレステロールを分
画した後、該リポ蛋白質コレステロールにコレステロー
ルエステラーゼ、好気性微生物由来のＮＡＤ依存性コレ
ステロールデヒドロゲナーゼ、ＮＡＤ、ジアフォラーゼ
及びＮＴＢを含有する染色試薬を作用させて発色せしめ
ることを％徴とするリボ蛋白質コレステロール濃度の測
定方九
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57092731A JPS58210000A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | リポ蛋白質コレステロ−ル濃度の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57092731A JPS58210000A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | リポ蛋白質コレステロ−ル濃度の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58210000A true JPS58210000A (ja) | 1983-12-07 |
Family
ID=14062557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57092731A Pending JPS58210000A (ja) | 1982-05-31 | 1982-05-31 | リポ蛋白質コレステロ−ル濃度の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58210000A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3640349A1 (de) * | 1986-11-26 | 1988-06-09 | Johannes Dr Aufenanger | Verfahren zur quantitativen bestimmung der verteilung von cholesterin in proteinfraktionen |
| JPS63243878A (ja) * | 1987-03-31 | 1988-10-11 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 脂質代謝異常の検出方法 |
| US4892816A (en) * | 1984-10-31 | 1990-01-09 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for the determination of cholesterol |
| US5385828A (en) * | 1988-05-25 | 1995-01-31 | "Immuno" Aktiengesellschaft Fur Chemisch-Medizinische Produkte | Method for determining the relative amounts of all cholesterol-containing lipoproteins in body fluids |
| WO1998003675A1 (en) * | 1996-07-24 | 1998-01-29 | Helena Laboratories Corporation | Cholesterol separation and fluorescent analysis |
| US6963822B1 (en) | 1998-02-18 | 2005-11-08 | K.K. Helena Kenkyujo | Method and apparatus for separation, analysis and evaluation of data |
-
1982
- 1982-05-31 JP JP57092731A patent/JPS58210000A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4892816A (en) * | 1984-10-31 | 1990-01-09 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for the determination of cholesterol |
| DE3640349A1 (de) * | 1986-11-26 | 1988-06-09 | Johannes Dr Aufenanger | Verfahren zur quantitativen bestimmung der verteilung von cholesterin in proteinfraktionen |
| JPS63243878A (ja) * | 1987-03-31 | 1988-10-11 | Nippon Koutai Kenkyusho:Kk | 脂質代謝異常の検出方法 |
| US5385828A (en) * | 1988-05-25 | 1995-01-31 | "Immuno" Aktiengesellschaft Fur Chemisch-Medizinische Produkte | Method for determining the relative amounts of all cholesterol-containing lipoproteins in body fluids |
| WO1998003675A1 (en) * | 1996-07-24 | 1998-01-29 | Helena Laboratories Corporation | Cholesterol separation and fluorescent analysis |
| US6963822B1 (en) | 1998-02-18 | 2005-11-08 | K.K. Helena Kenkyujo | Method and apparatus for separation, analysis and evaluation of data |
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