JPS58208237A - 免疫原活性を付与されたハプテンとムラムル―ペプチドとの組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 変性された低分子量の分子の化合物、、誘導体の新規な
範噴に関するものであり、この変性はこれらのムラミル
−ペプチドによるそれらの変性前には本質的に欠如する
免疫原特性をそれらの化合物、誘導体に付与するために
採用されるものである。

一般に６ムラミルーペプチドという名称で知られ、サツ
カリド単位を含有しく特にＮ−アセチル−ムラミル型の
もの）、このサツカリド単位にペプチド鎖が結合してい
る誘導体は、免疫学的補助作用（佐薬）特性を具有して
いるものとして知られている。これらのムラミル−ペプ
チドの数多くの例が技術文献に記載されている。

意図されるそれらの適用を可能としうる抗原に対する、
例えば免疫原作因を用いる種痘組成物に対する宿主の免
疫性応答を刺激増進するというムラミル−ペプチドが具
有する能力は、広範な精製により、特に毒性の存在ある
いは初期抗原における他の厄介な副作用により、天然に
おいては弱く、または弱められているかのいずれかであ
る。

ムラミル−ペプチドの補助作用的な免疫学的作用をさら
に増強するために，特にヨーロツノ々特許出願第３８３
３号には、これらのムラミル−ペプチド誘導体を研究下
の抗原に特に共有結合を通じて固定すること、換言すれ
ばこれらをコノような抗原に゛接合”　（　ｃｏｎｊｕ
ｇａｔｅ　）することも提案されている。幾つかの場合
には、このタイプの結合は、このよう一変性された抗原
の免疫原作用の増強をさらに可能としうる。しかしなが
ら、この接合は発熱特性及び別個の免疫原反応、さらに
詳細にはムラミル−ペプチド誘導体自体に向けられた免
疫原反応を伴なうということも観察された。これは、破
傷風トキシンとムラミル−ペプチド誘導体間に形成され
た接合体により観察されたものであり、その一例である
。

これらの技術と並行して、自然のもしくはパ天然″の抗
原の一部の構造を有すＡ断片と担体分子、特に天然のま
たは合成高分子との間の接合生成物からなる新しいタイ
プの免疫原抗原が開発された。例えば、前記断片は天然
のペプチド抗原においても存在する序列（シーケンス）
を具有するペプチドからなる。しかしながら、極めて弱
いが検出可能な免疫原活性を付与しうるに充分な多数の
アミノ酸をそれ自身既に具有する幾つかのペプチドを除
き、これら断片の免疫原活性は、一般に、上記支持体と
のその接合に従属される。

このような免疫原特性について記載する最近の出版物と
しては、例えば以下のものを参照されたい。

−　ＡＵＤＩＢＥＲＴ，　ＪＯＬＩＶＥＴ，　ＣＨＥＤ
ＩＤ，　ＡＩ刀ロ，胆表ＥＴ。

ＲＩＶＡＩＬＬＥａｎｄ　５ＩＦＥＥＲＴ、　”Ｎａｔ
ｕｒｅ”、　Ｖｏｌ、２８９゜Ｎｏ、５７９８．　ｐ、
５９３−５９４．　１２　Ｆｅｂｒｕａｒｙ　１９８１
゜−ＭＯＺＥＳ　、　５ＥＩＪＡ　ａｎｄ　ＣＨＨＤＩ
Ｄ、　”　Ｐｒｏｃ　、　Ｎ□ａｔ１．Ａｅａｄ＋８ｃ
ｉ。

ＵＳＡ”、　ｖｏｌ・７７、　Ｎｏ−８，ｐ−４９３３
−４９３’ｌ、　Ａｕｇｕｓｔ１９８０゜ −ＡＲＮＯＮ、　５ＥＬＡ、　ＰＡＲＡＮＴ　ａｎｄ　
ＣＨＥＤＩＤ、　”　Ｐｒｏｅ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　８ｃｉ、ＵＳＡ”、　ｖｏｌ
−７７、Ｎｏ・Ｉｌ、ｐ・６７６９−６７７２．　Ｎｏ
ｖｅｍｂｅｒ　　１９８０゜−ＬＥＲＮＦ３Ｒ，ＧＲＰ
ＪＥＮ、　ＡＬＥＸＡＮＤＢＲ，ＬＩＵ、　５ＵＴＣＬ
ＩＦＦ’Ｅａｎｄ　８ＨＩＮＮＩＣＫ、　”Ｐｒｏｃ、
　Ｎａｔｌ　、　Ａｃａｄ、　８ｃｉ、ＵＳＡ”ｖｏｌ
、７ｇ、　Ｎｏ、６．９．３４０３−３４０７．　Ｊｕ
ｎｅ　１９８１゜−Ａｔ（ＮＯＮ　、　ＭＡＲＯＮ　、
　８ＥＩＡ　ａｎｄ　ＡＮＦＩＮ８Ｆｎ　、　−Ｐｒｏ
ｃ　。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ”、　ｖｏ
ｌ、６ｇ、　Ｎｏ、７．　ｐ−１４５０−１４５５，Ｊ
ｕｌＹ　　１９８１．ａｎｄ−８１（ＵＪＩ　Ａ４ＡＴ
８ＵＵＲＡ、　ＭＡＳＡＮＯＢＵ　０ＨＡ８ＨＩ　、　
ＨＡＯ−ＣＨＩＡ　Ｃ■へａｎｄ　Ｇａｒｙ　Ｄ、　Ｈ
ＯＤＧＲＮ、　”Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ’、　ｖ
ｏｌ、１０４．　Ｎｏ、２．　１９７９゜何人かの著者
は、支持高分子との全ゆる先行カップリングが存在して
いない場合において抗体の生成を惹起する幾つかのペプ
チドの能力なすでに試験している。例えば、上述した書
籍のアール、エイ、レルナー（Ｒ，Ａ、　ＬＥＥ（Ｎｈ
ｉＲ）ら及びジー・アール・ドリースマン（Ｑ、　Ｒ，
Ｄｉ（ＥＢ８ＭＡＮ　）　（”Ｎａｔｕｒｅ”、　ｖｏ
ｌ、　２９５．１９８２年１月１４日、　＋５Ｅｓ　−
１６０頁）は、ＨＢｓＡｇ抗原と同じようなシーケンス
を有する幾つかのペプチドは、マウスにおいて検出可能
な抗体生成を生ずるということを観察した。ドリースマ
ンによれば、これらのペプチドと佐薬（ａｄｊｕｖａｎ
ｔ　）、さらに詳細には完全７ｏインド（Ｆｒｅｕｎｄ
）抗原（ＦＣＡ　）、ミョウバン、リボシーＡ　（ｌｉ
ｐｏｓｏｍｅｓ　）　、これと共にＮ−アセチル−ムラ
ミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イングルタミン（ＭＤＰ　）
を添加することも可能、の協会は、この槓のタイプのペ
プチドにより惹き起こされた一次免疫原応答を著しく増
大する効果を有しなかった。

本発明者らは、本質的に担体高分子の不存在下での、Ｍ
ＤＰまたはその類似体、同族体もしくは誘導体、特に抗
原について免疫原応答の補助作用特性を有するものとし
て知られている全てのムラミル−ペプチド誘導体または
類似体の共有結合による、少なくとも一つの”抗原部位
”（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ　５ｉｔｅ）を具有する低分子
量のハプテンまたはハプテン断片へのカップリングによ
り、予期せざる生体内免疫原応答作用を有する免疫原化
合物が得られるということを見い出し、本発明を完成す
るに至ったものである。

これらの免疫原は、先に述べたようなＭＤＰと高分子量
の抗原（これは天然抗原、または分子、特に抗原部位を
有するペプチドと支持高分子との接合体からなる）との
接合体とは逆に１さらに生体内発熱作用が実際上あるい
は全くないという予期せざる特性を有する。この生体内
発熱作用がないということは、発熱性であるＭＤＰの誘
導体または類似体について、これらが単独で投与されそ
の発熱性°が小さくなり、さらになおさらハプテンとの
カップリング後に消失することＫより、また発熱作用を
有しないＭＤＰの誘導体または類似体について、これら
が単独で投与されその無発熱性が接合後に維持されてい
ることによって、いずれについても観察される。

本発明は、さらに詳細には、接合体のムラミル−ペプチ
ド部分に対し向けられる抗体の生成を惹き起こさないハ
プテンームラミルペプチド接合体に関するものである。

前記において、用語パハプテン”は非常に広範な意味を
有する。これは、その製造方法如何に拘らず、また分離
、解重合、合成または遺伝再結合の如何に拘らず、低分
子量のあらゆるハプテンまたはハプテン断片を意味する
。

また前記において、表現“抗原部位”とは、このハプテ
ンと同じような部位を有する抗原について、予め形成さ
れた抗体により確認可能なハプテ／のあらゆる構造、特
に表面構造を意味する。その立体配座が本発明に従って
ＭＤＰタイプの生成物への接合により変性されうるハプ
テンは、それ自体に対してだけでな（、さらに−ハプテ
ンが天然抗原と同じような構造要素を有する場合には一
天然抗原自体に対しても、あるいはハプテンと高分子支
持体とのカップリングによりおそらく形成されうる抗原
に対しても、生体内抗体または特異細胞媒介反応を惹き
起こす。例えば、わずかな数のアミノ酸を有するシーケ
ンスからなるハプテンは、ムラミル−ペプチドとカップ
リングされたときに、ポリペプチドまたはハプテンと同
じように同一アミノ酸シーケンスを有する抗原タンパク
質に対し活性な生体内抗体形成を惹き起こすことができ
る。

このことはまた、排他的にペプチド的というものではな
いハプテンについても同様にして適用される。この点に
おいて、ノルブテンは、例えば、モノサツカリドまたは
例えばグリコシドタイプの結合により互いに連結された
幾つかのモノサツカリドにより構成されうる低分子量の
オシド構造からなる。これらのオリゴサツカリドは直鎖
状または分岐状のいずれでもよい。これらは、ヘキソー
スまたはペントースの族に属するものでよく、また中性
でもよく、あるいはアミノ化されたものでもよく、ウロ
ン酸または唾液酸単位を含有するものでもよい。これら
は、アセチル、サルフェートまたはホスフェートなど、
天然構造に通常含有される置換基を有するものでもよい
。上記の内容は単に例を示すものであってこれらに伺ら
限定されるものでないことはもとよりであり、また一般
に、高分子量の抗原に含有される構造要素に相当する構
造要素を含む全てのペプチドハプテンまたはオシドハプ
テンが含まれ、このハプテンは鎖中含まれるか、末端位
置に配置されるかは問わない。

本発明は、さらに詳細には、生体内投寿されたときに、
関連するタイプのハプテンに存在する構造要素を含有す
る天然抗原に関して、免疫性反応（抗体または細胞媒介
反応の生成）を惹き起こすような、既に前記した範躊に
属するハプテンとムラミル−ペプチドとの接合体に関す
るものである。以下において、抗体の生成を惹き起こす
本発明に係るハプテンの能力について側照する場合、こ
れは用語の単純化に等しくその性質が何ら限定されるも
のではないと理解される。一般に、この表現は、ここで
は細胞媒介反応を含むあらゆる免疫性反応を包含するで
あろうと自然に理解されるべきである。

一般に、本発明に係る接合体の構成に採用されうるハプ
テンは、前述した条件下であらゆるタイプの公知の抗原
または種痘成分として有用な抗原と同じような構造要素
を有する。関連する抗原の例としては、感染性微生物か
ら抽出された有効成分または感染性微生物自体が挙げら
れる（弱化もしくは死滅させたワクチン）。さらに詳細
には、本発明の範囲内で採用できるノーブテンは、これ
らの病原性作因（細菌、寄生ビールス、リケッチア、原
生動物など）の構成分に存在する構造要素を有するもの
でよい。その例としては、Ｂビールス性肝炎、インフル
エンザ、ビールス性庖疹などのビールスの範躊に属する
抗原タンパク質あるいはまた例えば連鎖球菌など細菌壁
のタンパク質と同じような構造要素を有するハプテンが
挙げられる。ペプチドあるいは非ペプチド的かに限定さ
れることなく抗原と同じような構造要素を有するノ１ブ
テンとしては、オリゴサツカリド、グリコペプチド、リ
ボペプチド、糖脂質、脂質、ステロイド、などが挙げら
れる。さらに一般には、ヨーロッパ特許出願第３８３３
号に提供されている情報も参照されたい。

本発明はまた、特に合成的に得られる低分子量のハプテ
ンまたはハプテン断片にまで及ぶものである。

本発明はまた、ホルモン、特にペプチドホルモン、例え
ば低血圧、性腺など血圧を調節しあるいは各種内分泌腺
の活性を調節しうるホルモン、ステロイドホルモンマタ
はニューロペプチドを含む神経中間部などの分子の、あ
るいは例えば血液型の抗原決定因子、リムフオキン（Ｊ
ｙｍｐｈｏｋｉｎｓ　）または細胞受容体など、生体内
に自然に存在しまたこれにより免疫学的に許容される組
織抗原決定因子の、他の分子または断片とムラミル−ペ
プチドの接合体に関するものである。

本発明は、それ故、さらに詳細には、このような特定の
分子または分子断片とＭＤＰ誘導体と′の接合体に関し
、これにより、得られた接合体により獲得される免疫原
特性がそれらにこれらの分子が投与される生体の免疫性
挙動における変性を惹き起こせしめ、さらに詳細にはこ
れら生体において上記特定分子または分子断片自体に対
し活性な抗体の生成を促進せしめる。特定の分子または
分子断片は、天然の分子からなり、または天然の分子か
ら誘導されうる。このような変性が例えば生存様の再生
産に干渉するホルモンのレベルで調査されるという領域
があることは知られている。この点において、本発明は
避妊手段としておそらく使用される変性ホルモンに適用
される。

プロセスによってもまた、例えば成長ホルモン、ＡＣＴ
Ｈ、ＴＳＨ、並びに下垂体後葉のホルモンなど、生体の
生命機能にとって極めて重要性を有する脳下垂体のホル
モンをそのまま残す選択的免疫学的下垂体摘除術の成果
が許容される。

この選択的、非外科的下垂体摘除術の使用は、（財） 重要な臨床的適応を有し、特に幾つかの依存性の脳下垂
体または向性腺ホルモン腫瘍の場合に重要な臨床的適応
を有する。

本発明は、さらに直接的にはなお、免疫学的去勢により
食肉生産を増大させうる獣医のワクチンとして有用な、
本発明に従って変性されたホルモンに関するものである
。

プロセスの興味はまた、依存性のＬＨ−ＲＨホルモンが
動物の適当な育成及び何ケ月（６〜９ケ月）かまでのそ
の重量増加にとって重要であるということにあり、この
年令では、実際、通常３ケ月前に行なわれる効果的な外
科的去勢を行なうことはもはや不可能となる。免疫学的
去勢は、食肉生産にとって最も好都合な時期に、激烈な
方法を用いることなく、停止される脳下垂体ホルモンの
分泌を可能とする。

本発明は、□従って、ハプテン部分が、同じムラミル−
ペプチドと高分子量の抗原とのカップリングの場合に観
察される発熱作用を消去できる程に充分な低分子量を有
する、ハプテンとム（財） ラミルーペプチドの接合体に関するものである。

ハプテン部分は、さらになお、予測せざる免疫原特性に
加えて、接合体のムラミル−ペプチド部分自体に対して
向けられる抗体の生成を惹き起こさないように、得られ
た接合体に対し充分に低分子量を有さねばならない。

特に、本発明は、ムラミル−ペプチドと約５．０００以
下、有利には３．０００未満の分子量を有するハプテン
との接合体に関する。有利な場合には、免疫原性及び無
発熱性接合体の分子量はせいぜい２，０００のオーダー
である。幾つかの著しい例外（特にＬＨ−ＲＨ）を除き
、本発明の係る範噂にある７％ブテンは、未接合状態に
おいては検出されうる免疫原性を欠如し、このことは■
甲との損金においてさえもそうであるということが観察
される。

本発明が係るノ・ブテンは、接合体に対して充分に低い
分子量を有するものからなり、（４）Ｐと形成可能であ
り、キロ当り１００μｆの服用量割合で、さらに３００
、またさらにキロ当り接合体５００μＶの割合でさえも
、静脈内投与で兎に投与されたときに、０．６℃の温度
上昇の生体感応を超える発熱反応を生じないようなもの
に特定することもできる。

合成または天然のペプチドが関係するときは、本発明に
おいて用いられるハプテンは、好ましくは５０未満のア
ミノアシル残基（β−ｈＣＧのＣ−末端エイコサペプチ
ドを除＜）、特に３０未満、好ましくは２０未満のアミ
ノアシル、有利には１５未満のアミノアシルからなる。

本発明はまた、オリゴマーが前述した他の条件を満足す
る限り、免疫原を形成するのに接合しうるハプテンとし
てオリゴマー化されたノ・ブテンを用いることができる
。

本発明に係る接合体を製造するのに利用可能なハプテン
の例としては、まず第一にホルモン、特にペプチドまた
はグリコペプチドホルモンの［８のホルモンが挙げられ
る。後者の中には、名称Ｌ　Ｈ−ＲＨとして知られるル
テオトロフィン遊離構成分、ペプチド断片あるいは同様
の特性を付与された合成ペプチド、例えばＱＬｕ　−Ｈ
ｌｓ−Ｔｒｐ　−８ｅｒ　−Ｔｙｒ　−Ｇｌｙ　−Ｌｅ
ｕ　−Ａｒｔ　−Ｐｒ。

−ｃｉｔｙ　−ＮＨ２タイプのデカペプチドあるいは相
当する遊離酸ｐ　Ｑｌｕ　−Ｈｉｓ　−Ｔｒｐ　−Ｓｅ
ｒ　−Ｔｒｙ−Ｇｌｙ　−Ｌｅｕ　−Ａｒｆ−Ｐｒｏ　
−Ｇｌｙが挙げラレル。

これに加えて、さらに詳細には、エイコサペプチドを除
き、ヒト絨毛ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のＣ−末端ペプ
チドが挙げられる。例としては、ｈＣＧの副単位のＣ−
末端ペプチド、特にｈＣＧ　−β中のものに相当するア
ミノアシル残基な含有するトリアコンタペプチドまたは
ニス、マツウラ（８，ＭＡＴＳＩＪＵＲＡ　）ら（既に
述べた刊行物）により述べられているタイプの末端合成
誘導体、Ｆ８Ｈ断片など、あるいはアミノアシル、ジエ
イ　　、　　リ　−　（Ａｒｔｈｕｓ　　Ｃ，Ｊ、　　
ＬＥＥ　　）　　ら　゛　　ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｒｒ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ　’　ｖｏｌ　、　１７．　ｐ−７４
９−７５６に記載の本質的にｈＣＨ−βのＣ−末端側単
位の１０９−１４５及びＩＩ＋　−１４５シーケンスか
らなるペプチドが挙げられる。ムラミル−ペプチドとの
カップリングによるこれらのホルモンの変性により、関
連する天然ホルモンに対する抗体の生体内生成しうる免
疫原性成分を生じ、このようにして得られたハプテン−
変性免疫原が著しく低い分子量を有するほどなおさら免
疫原性は顕著になる。

同様に挙げられるのは、既に述べた刊行物に同定されて
いるような、特にその端末アミノアシルが以下の配置：
　４ｇ−８１；２−１６；２２−３５　；９５−１０９
　；　１１７−１３７　；　１２２−１３７：　１１７
　１３５　（パセク＜　ＰＡ８ＥＫ　）らにより与えら
れている構造に従う。またレルナー（ＬＥＲＮＥＲ）の
文献に再生されている）を占めるＨＢｓＡｆのシーケン
ス中のそれに相当するものであるようなものなど、ＨＢ
ｓＡｆ抗原の有効構成分ペプチドと共にアミノアシル残
基の共通のシーケンスを有する各種合成ペプチドとムラ
ミル−ペプチドとの間のカップリングを働かせている接
合体である。さらに、ムラミル−ペプチドとカップリン
グしたときに、化膿連鎖球菌の表面のタンパク質Ｍに対
して活性な抗体を形成しうる、イー。

エイチ、ビーチエイ（Ｅ、　Ｈ，Ｂ堤、Ｇ化Ｙ）らによ
り述べられているタイプの合成ペプチドが挙げられる。

また同様に、米国特許第４，２８４，５３７号に特定さ
れているペプチドシーケンス、特に略号ＣＢ６及びＣＢ
、とじて特定されているものを参照されたい。

サツカリドもしくはオシトノ八ブテンの例としては、例
えば、ダプリュ、エフ、ジョーベル（Ｗ、　Ｆ、　ＧＯ
ＥＢＥＬ　）　”　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
　’　。

１９３９、３５３−３６３頁、に記載されているような
、血液型Ａ及びＢ１連鎖球菌ＣのポリサツカリドＣ，セ
ロピウロン酸（ｃｅｌｌｏｂｉｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ
　）（ｐｈｅｕｍｏ　　タイプ■）などが挙げられる。

本発明に係るカップリングを行なわしめうるタイプの各
種ノ・ブテンに関しては、有利にはトーマス、ビー、ホ
ップ（Ｔｈｏｍａｓ　Ｐ、　ＨＯＰＰ）らにより”　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　８ｃｉ、　ＵＳＡ
”、ｖｏｌ。

１ｇ、　Ｎｏ、　６　、３８２４−３８２８頁に記載の
ペプチドシーケンスを参照されたい。ここでは、支持高
分子とのカップリングにより抗原性が付与されうる他の
ペプチドシーケンスが見られるが、これも本発明の範囲
内であり、ムラミル−ペプチド誘導体とのカップリング
により同様に免疫原性が付与される。

当然のこと乍ら、各種ペプチド及び文献に考察されてい
るようなタイプの他のノ１ブテンも、またこの点におい
て、本発明で規定されているような免疫原作因を構成す
るのに用いることができるものも使用することのできる
各種ハプテンの例として挙げられる。本発明の条件に合
致し所定の抗原に相当するハプテンが、常に直ちに入手
可能というわけでないのは、自ら明らかである。抗原の
構成が公知でありあるいは知ることができるときには、
特にこれがそのシーケンスが知られまたは決定できるポ
リペプチドからなるときには、先に指示した条件下で免
疫原部位を担持することのできるこの抗原の構造のシー
ケン要素を探究することは専門家にとっては可能であろ
う。この問題に対する幾つかの試みが、既に先行刊行物
の主題となっている。これを思い出すには、例えば前述
したレルナー（ＬＥＲＮＥＲ）とホップ（ＨＯＰＰ　）
の文献を挙げることができ、ここでの調査方法は、ペプ
チド構造の抗原に含有され免疫原部位を担持しうるシー
ケンスのマーキング（付印）を行なうことが提案されて
おり、関係シーケンスは次いで合成可能であり、また本
発明の技法によるときに、すなわちそれらの免疫原性能
力のための、さらに詳細には天然抗原に対して活性な抗
体の生体内生成を惹き起こすそれらの能力のためのムラ
ミル−ペプチドとのカップリングにより、特に簡便に試
験可能である。

本発明に係る接合体におけるハプテンは、免疫学的佐薬
特性を有するあらゆるムラミル−ペプチド誘導体にカッ
プリングされうる。

ハフテンに接合されるムラミル−ペプチド部分は、有利
には下記一般式（１）に相当するムラミル−ペプチドか
ら誘導される。

以下余白 （３１） ＲＣ０−Ｘ−開−ＣＨ−Ｒ。

晶２ ＣＨ２−Ｙ ここで、（関係基がハプテンに共有結合的に結合してい
る場合を除き） 塊は遊離のカルボキシル基もしくはアミド基、または１
〜１０の炭素原子を有する脂肪族アルコールによりエス
テル化されたカルボキシル基、あるいはそれ自身遊離の
カルボキシル基、アミド化されたカルボキシル基もしく
は１〜１０（Ｄ炭素原子を有する脂肪族アルコールによ
りエステル化されたカルボキシル基を有するアミノ酸に
より置換されたカルボキシル基であり、Ｒは水素または
メチル基であり、 ＲＱはアセトアミドまたはグリコリル−アミド（３２） 基であり、 瓜は−ＮＨ２，ＯＨ，または場合によってはヒドロキシ
ル、アミン、カルボキシアミド、スルホンアミド、エー
テル、チオエーテル、エステルまたはチオエステル置換
基を有し、アルキル、アリール、アリールアルキルまた
はアルキルアリール基に相当するせいぜい１０の炭素原
子を有するラジカルであり、 瓜はヒドロキシルまだは１〜４の炭素原子を有スるオキ
シアシル基、特にオキシアセチル基であり、 Ｘはアラニル、アルギニル、アスパラギル、アスパルチ
ル、システイニル、クルタミニル、グルタミル、グリシ
ル、ヒスチジル、ヒドロキシ−プロリル、イソロイシル
、ロイシル、リシル、メチオニル、フェニルアラニル、
プロリル、セリル、スレオニル、トリプトファニル、チ
ロシル、バリル及びアミノブチリルからなる群のアミノ
アシル残基であり、 Ｚは下記一般式（ＩＩ）を有し、ムラミル酸のＣ−６の
位置を置換する基であり、 −ｌｅａ　−（１ｔ１）ｘ　　　　　　　　　　　（１
）ここで、ｘ　＝　Ｏまたは１であり、 ｘ　＝　Ｑのとき、 掲はヒドロキシルまたはアミン基であり、ｘ　＝　ｌの
とき、 塊はヒドロキシルもしくはアミノ基、カルボキシアミド
、スルホンアミドエーテルもしくはチオエーテル、エス
テルもしくはチオエステルであり、 鴇はそのとき−ＣＨ２、−ＣＨ＝　ＣＨ−、−８−。

−ｃｏ−またはＮＨ基、−ＣＨ２−；　−ＣＨ＝ＣＨ−
ｔまたはＮＨ基の鎖であり、該基は任意的にアリール基
好ましくはフェニル基により、または以下に示す複素環
基、またはカルボキシル、アミノ、スルホヒドリルもし
くはヒドロキシル基により、または５以下の炭素原子を
有するアルキル基により、または８以下の炭素原子を有
するアルキルアリール、アリールアルキル基により、ま
たは６以下の炭素原子及び１または２の酸素、窒素もし
くはイオウ原子を有する複素環基により置換されている
ものであり、上記アルキルアリールまたはアリールアル
キル基はさらに任意にカルボニル基を含有し、または任
意的にカルボキシル、アミノ、スルホヒドリルもしくは
ヒドロキシル基により置換されているものであり、また
前記複素環基はそれ自身任意的に５以下の炭素原子を有
するアルキル基、カルボキシル、アミン、スルホヒドリ
ルもしくはヒドロキシル基により置換されているもので
あり、また前記ル基はそれにも拘らずｎ−デシル炭化水
素鎖の長さを超えない長さを有するものであり、Ｙは遊
離のもしくはアミド化されたカルホキ゛　　　シル基、
または１０以下の炭素原子を有するエステル基またはア
ミノ酸好ましくはりシン、オルニチン、グルタミン酸、
アスパラギン酸もしくはチロシンからなる三官能アミノ
酸により置換されたエステル基、すなわちカルボキシル
基及びアミノ基の他にさらにカルボキシルアミノもしく
はヒドロキシル基を゛含有するエステル基、（３５） またはＹは下記一般式（ＩＩＩ）に相当する基である。

ａｓ　　（ＩＲｅ）ｘ　　　　　　　　　　（Ｉｌｌ）
ここでＸはＯまたは１であり、また塊はＸが０のときＫ
はアミドもしくはエステル結合であり、ＸがＯでないと
きけ、山はカルボキシアミド、エステルもしくはチオエ
ステル基であり、几はそのとき馬と同じである。

上記一般式に相当する好ましいクラスのムラミル−ペプ
チドは、Ｘがグリシル、セリル、バリル、ロイシル、ア
ミノブチリル残基、またはさらに好ましくはアラニルで
あるものである。

これら全てのアミノアシル基は、好ましくは（グリシン
を除き）左旋性のアミノアシル基である。

前記クラスのそれぞれにおいて、前記式に相当する好ま
しいサブクラスはしかしながらＸがゼロに等しいもので
あり、この場合Ｚは有利にはヒドロキシルまたはアミン
官能基である。

先に規定したクラスのそれぞれにおいて、前記一般式（
ＩＩ）に相当する他の好ましいサブクラ（３６） スは ｘ　＝　ｌであり、 鳥がカルボキシアミド結合またはスルホンアミドエーテ
ルもしくはチオエーテル、エステルもしくはチオエステ
ルであり、また 場が下記に示すような基の一つを表わすものである。

−（ＣＨｇ）ｎ−ＣωＨ，特にｎ＝１，２．３または４
−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２、特にｎ＝１，２．３または４
（ＣＨ２）ｎ　　ＣａＨ５ＮＨｚ、特にｎ＝ｏまたは１
−（ＣＨ２）ｎ−８Ｈ、特にｎ＝２ 本発明はまた、攬基がｎ−ブチルアルコールによりエス
テル化されたカルボキシル官能基であり、また、好まし
くはまた同時にＹが一〇〇Ｎ）１２基であるような前記
クラス及びサブクラスのいずれかに属するムラミル−ペ
プチドから誘導された接合体に関するものである。

本発明はさらに、前記した各クラス及び各サブクラス内
でも、ムラばルーペプチド基のＲ基がメチル基であるハ
プテン−ムラミル−ペプチド接合体の好ましい範瞬に関
する。

本発明はさらにまた、前記した各クラス、各サブクラス
及び範−〇中でも、本発明に係る接合体のムラミル−ペ
プチド部分の鳥基が１〜５の炭素原子を含むエステル基
である好ましいものに関する。

本発明はさらに、前記したクラス、サブクラス及び範噴
の中でも、ムラミル−ペプチド部分のＺ基が７クシユル
基である接合体のサブ範鴫に関する。

本発明はさらにまた、前記した各クラス、サブクラス、
範−及びサブ範噴の中でも、接合体のムラミル−ペプチ
ド部分が、ル及び亀が同時にヒドロキシル基、九がアセ
トアミド基である接合体の他のサブ範−に関する。

前記したクラス、サブクラス、範噴のそれぞれにおいて
、本発明に係る接合体の他の好ましいサブ範−は、同時
にＺ、Ｊ及びＲｔＸ５Ｚヒドロキシル基であり、良がア
セトアミド基であり、也がメチル基であり、Ｘがアラニ
ル基であり、鳥がカルボキシアミド基または選択的に１
〜５の炭素原子を有するエステル基であり、Ｙがカルボ
キシアミド官能基であるムラミル−ペプチド部分を含有
するものである。

また本発明に係る好ましい接合体は、ＭＤＰから、また
はＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタ
ミンのα−ｎ−ブチルエステルから、あるいはまた上記
二つのムラミル−ペプチドの６−〇−スクシニル誘導体
から誘導されたムラミル−ペプチド部分を含有するもの
である。

本発明に係る接合体の組成に入る他の好適なムラミル−
ペプチドは、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−
Ｄ−グルタミン酸（ＭＤＰＡ　）のモノ−α−もしくは
γ−エステルまたはジエステル（ここでエステル基は１
〜５の炭素原子を含有するものである）である。

本発明に係る好ましい接合体の製造に用いら（３９） れるムラミル−ペプチドの他の範噴においては、Ｙ基は
リシル基を含むものであり、これにより、他の基は、先
に規定した好ましいクラスまたはサブクラスのいずれか
とに関係して規定されるものに従う。上記接合体に含ま
れる好ましいムラミル−ペプチドは、Ｎ−アセチル−ム
ラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−（ソグルタミニルーＬ−リ
シン（ＭＴＰ　）からなる。

本発明はまた、前記したクラス、サブクラスまたは範躊
の一つに属するムラミル−ペプチドとハプテン間のこれ
ら接合体の製造方法に関するものであり、この方法は種
々の可能な変形を包含する。

第一の技法によれば、ハプテン及びムラミル−ペプチド
の両者がアミン官能基を含むまで、グルタルアルデヒド
を通してのカップリング反応による手段をとるものであ
る、 有利には、ムラミル−ペプチド部分上の所定位置への作
用を行なうことができる他の形態のカップリングによる
手段がとられる。特に、こ（４０） れらの結合は、サツカリド環のＣ６位置またはＣ１位置
、あるいはまたペプチド鎖のＹのＣ−末端のいずれかの
レベルで行なわれることができる。

Ｚ基またはＹ基を含む置換に関しては、例えば一方はア
ミン官能基を有し、他方はカルボキシル、ヒドロキシル
またはスルフヒドリル官能基を有しまたはこの逆である
ように、一方ではムラミル−ペプチドによりまた他方で
はノ１ブテンにより担持される適轟な官能基基間のペプ
チド結合を形成できるまで、ペプチド合成に通常使用さ
れるカップリング方法による手段をとることができる。

ＩＺ基またはＹ基のいずれかには、次いで、専門家に周
知の技法に従ってサツカリド基の６位置の炭素のレベル
で、またはこれと逆にペプチド鎖の末端のレベルでの固
定を行なうために、所望に応゛じて、適尚な末端官能基
が導入される。

また同様に、ヨーロッパ特許出願第３８３３号に考察さ
れている一般技法も参照されたい。

当然のこと乍ら、例えばティー、キタガワ（Ｔ、　ＫＩ
ＴＡ弘盟）及びティ、アイカガヮ（Ｔ。

ＡＩＫＡＧＡＷＡ　　）により”　Ｊ−Ｂｉｏｃｈｅｍ
、’　７９（＋９７６）２３３に記載されている技法を
用いることにより、ハゲテンとムラミル−ペプチドから
なるパートナ−の一つにより担持されるスルフヒドリル
官能基と、他の試薬により担持されるマレイミド基との
間で起こる結合を行なう他のあらゆるタイプの結合手段
も可能である。

接合はまた、ジアゾ化またはインチオシアネートを作用
させる反応の通常の方法を用いることによっても行なう
ことができ、特にムラミル−ペプチドが芳香族アミン官
能基を有するとき（％に基Ａまたは氏のレベルに）、ま
たはハプテンがこの反応に関与しうるアミン官能基を有
するときに行なうことができる。このような生成技法は
、例えば、ビイ−、エフ、エルランガ−（Ｂ、　Ｆ、　
ＢＲＬＡＮＧｆｉＪｔ　）により”　Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ。

Ｒｅｖ、　”　２５　（１９７３）　２７１に記載され
ている。

カップリングはまた、試薬の一つにより担持されるアル
デヒド官能基と他の試薬により担持されるアミン官能基
との間に形成されるシッフ（５ｃｈｉｆｆ　）塩基の還
元によっても行なわれる（Ｇ、　Ｒ，ＧＲＡＹ　、’Ａ
ｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、”　１
６３（１９７４）　、　４２６　）。

これらの反応は全てそれ自体周知であり、同じ結果に到
達するのに数多くの変形を導入できるということは、専
門家にとって明らかなところであろう。さらに詳細には
基Ｙ及び２に関しては、ムラミル−ペプチドとハプテン
間において、接合は例えば二官能性試薬からなる架橋剤
を用いる架橋によって形成できるということも、注意さ
れるべきであろう。結局、最終接合体におけるムラミル
−ペプチドとハプテン間の架橋基は、好ましくはｐ−デ
シル炭化水素鎖の長さに相当する連鎖長さを超えないで
あろう。

このような架橋剤は例えば１９７８年６月５日出願のフ
ランス特許第１８１６７９２号に記載されている。

前記において、ムラミル−ペプチドとペプチド性質のハ
プテン間のカップリングの場合について特に述べた。ハ
プテンがオリゴサツカリドにより構成されているときは
、同じタイプの反応が採用でき、ハプテンが遊離のカル
ボキシル官能基またはアミン官能基あるいはさらにアル
コール官能基を有するやいなや、これらはついでムラミ
ル−ペプチドに担持される適切な官能基とアミドまたは
エステル結合を形成できる。

一つの変形としては、還元端末糖を有するか、さもなく
ば偽アルデヒド官能基がカルボキシル官能基に酸化され
ているオリゴサツカリドの０１位置ヘムラミルーペプチ
ドを結合する手段も可能であり（Ｑ、　ＡＳｆ４ＷＢＬ
Ｌ、　”　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｂｎｚｙｍｏｌ、”
２ｇ、　（１９７２）、　２１９　）、あるいは前記方
法（既に述べたＲ、　ＧＲＡＹ　）も使用できる。最初
のケースではペプチドまたはエステル結合が確立され、
第二のケースではアルキルアミン結合である。

ムラミル−ペプチドへのハプテンの固定ハ、ムラミル−
ペプチドの幾つかの点で起こり、また同様にその逆も起
こり、従って本発明は二つの構成成分が適当な化学的官
能を有する割合までのムラミル−ペプチドとハプテンと
のオリゴマーにもその範囲が及ぶ。しかしながら、この
ような接合体の分子量は、通常５，０００を超えてはい
けないと理解される。

一般に、ハプテン成分とムラミル−ペプチド成分は、有
利には約１乃至１０、特に１．５乃至１０、有利には２
乃至３の重量比であろう。

本発明はまた、本発明に係る接合体を適当な賦形薬と共
に含有してなるワクチンの形態に調製された組成物に関
するものである。

有利な製薬学的組成物は、少なくとも一つの本発明に係
る接合体の有効量を含有する溶液、懸濁液または注射可
能なりボゾームからなるものである。好ましくは、これ
らの溶液、懸濁液またはりボゾームの形態は、等張無菌
水性相、好ましくは生理食塩水またはグルコースの水性
相で調製される。

本発明は、さらに詳細には、皮膚内、筋肉内または皮下
注射あるいはさらに乱刺法により投与されるべく適合さ
れたこのような懸濁液、溶液またはりボゾーム形態に関
する。

さらに、本発明は、他の経路、特に経口的にまたは直腸
経路により、あるいはさらに粘膜、特に眼、真、肺また
は膣の粘膜と接触せしめられるようにエロゾールの形態
で投与可能な製薬学的組成物に関するものである。

従って、本発明は、本発明に係る少なくとも一つの接合
体が、経口、経眼、経鼻形態の構成に適合された固体も
しくは液体の製薬学的に受容可能な佐薬、または直腸投
与形態の構成に適合された佐薬、あるいはさらに膣投与
用のゼラチン状佐薬と共に見い出される製薬学的組成物
に関するものである。さらにまた、膠様組織、特に眼ま
たは鼻への投与用に適合された、本発明に係る少なくと
も一つの接合体を含有する等張液組成物に関するもので
ある。最後に、本発明は、本発明に係る接合体が懸濁液
中に溶解ないし保持され、その解放がエロゾールへの分
散を生ずる”′噴射剤′″型の製薬学的に受容可能な液
化ガスから形成された組成物に関するものである。

有利には、本発明に係るワクチン組成物は、さらにワク
チンの実証を促進するポリビニルピロリドンなとの賦形
薬を含有する。ポリビニルピロリドンに代えて、過去に
おいてこの表現に与えられた通常の意味におけるあらゆ
るタイプの佐薬、すなわち医薬の吸収をより容易にし、
あるいは生体内でのその作用を促進する物質を用いるこ
とができる。後者のタイプの他の佐薬の例としては、カ
ルボキシメチルセルロース、水酸化アルミニウム、ホス
フェート、あるいは画業技術者にとって周知のこのタイ
プのあらゆる他の佐薬が挙げられる。

本発明に係る製薬学的組成物は、従って本質的に、宿主
に免疫反応を生起せしめ、ノ・ブテンと同じようなシー
ケンスを有する抗原またはノ・ブテン自体に関して、抗
体または細胞媒介免疫性を生成せしめようとするもので
ある。最後のケースは、ハプテンが、その作用が緩和さ
れるべきホルモンなどの天然ペプチドからなる場合（４
７） に特に興味のあることである。これらの製薬学的組成物
は、従って、ヒトまたは動物生体の挙動の発展における
修正が探究されているそれぞれのときに、ヒトまたは獣
医治療に特に有用である。探究される発展は、動物種に
おける受精能力、または幾つかのホルモンの抑制に対す
るヒトまたは動物宿主の代謝の制御された方向の制御か
らなる。後者の場合、使用された接合体に入るハプテン
は、ホルモン自体または後者の断片からなるだろう。

獣医の分野においては、さらに他の構成成分の犠牲で幾
つかの構成成分の生成が増大するといえる。例えば、免
疫学的去勢により、食肉生産の動物の増加目的で投与さ
れる獣医ワクチンの応用が挙げられる。

本発明は特に、ハプテン自体が、ペプチドまたはグリコ
ペプチドホルモンのクラスに属するホルモン自体、また
ろ該ホルモンと共通部分を有するペプチドシーケンスの
いずれかからなるハプテン接合体に関する。この点にお
いて特に（４８） 興味のあるホルモンは、菌体刺激ホルモンＬＨ−ＲＨの
遊離因子からなる。

本発明はさ、らにまた、本質的にこれらのハプテン抗体
接合体から形成された生物学的薬剤に関する。特に、ハ
プテン部分は薬剤の有効成分からなり（例えばモルヒネ
）、関連する生物学的薬剤はそこで特に低減された無熱
性の抗体、特に−価の抗体及び単一（ｍｏｎｏｃｌｏｎ
ａｌ　）抗体を製造するのに用いられる。これらの抗体
は、そこで、例えば生体宿主に関連する医薬の作用の研
究を行なえる薬剤構成に有用である。特に、これらの抗
体は細胞受容体の検出、あるいはさらに代謝及び関係薬
剤の作用モードの研究を可能にする。

本発明はまた、さらに一般に、抗体自体、または本発明
に係るハ・ブテンとムラミル−ペプチドとの接合体の生
体宿主への投与により得られるような抗体の調製にも関
するものである。これらの抗体の本質的固定特徴は、当
然のこと乍ら、本発明に係る接合体、及びさらにそのノ
ーブテン部分が天然抗原と同じような構造要素を有する
ときにはこれ、を中和する能力にある。

本発明は、特に、後述する実施例の一つに示すように、
２．０００ダルトン未満の分子量を有し、高い免疫原性
を有し、それと同時に、接合体に入るムラミル−ペプチ
ドがそれ自体あるレベルの発熱性を有する場合でさえも
発熱作用が無視し得あるいはさらに存在しない、前記ホ
ルモンとムラミル−ペプチドとの接合体を提供するもの
である。さらに、高分子量の抗原とムラミル−ペプチド
から形成される従来の接合体で観察されるものとは逆に
、本発明のものは現在使用されている検出方法で検出さ
れうる限度内で、ムラミル−ペプチド構成成分に関する
免疫原作用が欠如している。

本発明の他の特徴は、本発明を実施する以下の好ましい
実施例及び本発明に係る接合体により得られる結果から
より明らかとなろう。

好ましい実施態様； 代表的な接合反応を得るために、ＬＨ−ＲＨ３■を、溶
剤としてのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ　）　Ｏ−４
ｍｌ−中のＮ−エチル−Ｎ’−（３−メチＡ、　−７ミ
ノプロビル）−カルボジイミド塩酸塩（ＢＣＤＩ　）　
２４２ｑ及び１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（Ｈ
ＯＢＴ　）　４３■に酸系態で加えた〇周囲源度で７時
間、マグネチツクスターラーを用いて温置を行なった。

次いで、この溶液に、蒸留水０−３ｍ１に混合した３、
２４ＷのＭｒＰ　（Ｎ　−７セチルームラミルーＬ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミニルーし一リシン）を加え、
周囲温度で４８時間、マグネチツクスターラーを用いて
反応を続けた。反応生成物を０．１５ＭのＮａｃｌ溶液
にとり、形成された接合体をセファデックス（ＳＥＰｆ
（ＡＤ［）　Ｇ　Ｉ　Ｏの分子篩上での分別により回収
した。接合体は死容積に溶離した。ペグチドとムラミン
酸の含量をレイスイヒ（Ｒｅ１５５１ｇ　）ら、Ｊ、　
Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２１７　、９５９−９６６　
（１９５６）の方法により評定した。９３％のＭＴＰが
カップリングされていることが解った。従つ【、ＬＨ−
ｉｔ　ｌ−（分子当りのＭＴＰ分子の数は１：１に近い
。

ＭＴＰ　１６■に、ＤＭＦＯ，＋５■＋ｐＨ７，４のＰ
ＢＳＯ，０１ｍ１　（燐酸塩で緩衝された生理食塩水溶
液）を、ついで１３ｃＤＩ　３００μｙ　、　ｌ−１０
ＢＴ　ｌ〜及び破傷風トキシン２Ｉｌｖを加えた。反応
は、暗闇の中で、周囲温度でマグネチツクスターラーを
用いて１５分間続け、ついでこの混合物にＥＣＤＩ　３
００μ２を加え、ＨＯＢｉ”　１〜及び破傷風トキシン
２ｑを加えた。

反応をさらに１５分続げ、同じ操作を９回繰り返した。

従って、破傷風トキシンは２０１１ｖ用いられたことに
なる。反応終了時に、セファデックス０７５カラム上で
のクロマトグラフィーにより、ＰＢＳ中に接合体を回収
した。接合体は最初の溶離ビークに含有されていた。破
傷風トキシン及びＭＴＰのそれぞれの測定はフォリン（
Ｆｏｌｉｎ　）とレイスイヒの方法により行なった。

新鮮な赤血球へのＭＴＰのカップリングベンゾキノンに
よる新鮮な赤血球へのＭＴＰのカップリングを、以下の
方法により行なった。

ベンゾキノン０．２　ｍｌ　（３０Ｗ／ｍｌ　）をｐＨ
７の帆２Ｍ　（Ｄ　ＰＢＳ　０．２ｎｆに溶解したＭＴ
Ｐ　３１ｎｆ　Ｋ加えた。

反応は、暗闇で、攪拌しながら周囲温度で９０分続けた
。ｐ）（ｇ、ｏの０．１　ＭのＮａＨＣＯ３媒体中のセ
フアデノ２フ０２５分子篩のカラム上でのりｐマドグラ
フィーにより反応を停止した。ベンゾキノンにより活性
化されたＭＴＰは死容積に溶離された。これを０．１Ｍ
のＮａＨＣＯａ溶液中の羊の新鮮な赤血球５０チ懸濁液
０−８ｍ１に加えた。混合物を攪拌しながら室温で夜通
し温置し、ついで赤血球が残っているＰＢＳを有するＭ
ＴＰを三度洗滌した。

以下の溶液０−１ｎｆを、年令６個間のスイス雄マウス
の幾つかのグループに、０，２．４及び２９日目に皮下
注射により投与した。

（１）　　フロイント完全佐薬（ＦＣＡ　）に懸濁した
ＬＨ−４Ｈ５０μｔ （２）　　ＦＩＡに懸濁したＬＨ−ＲＨ５０μ２（３）
　　ＭＤＰ　４．３μ２と接合され、ＦＩＡに懸濁され
たＬＨ−ＲＨ８，６μ？ （４）ＰＢＳ中ＬＨ−ＲＨ５０μ？ （５）　　ＰＢＳ中のＭＤＰ４．３μりと接合したＬＨ
−ＲＨ８，６μ？ さらに三つの対照グループにも、抗原もＭＤＰも伴なわ
ずに、ＦＣＡまたはＦＩＡまたはＰＢＳのいずれかを注
射した。

使用前に、抗原（ＬＨ−ＲＨ純粋物又はカップリング物
）は０．９５６　Ｎａｃｌ中５０　％　ＰＶＰ　（ホ０
リビニルビロリドン）に吸収され、温置け２時間続けら
れたことは注意すべきであり、ついで混合物はＦＩＡま
たはＦＣＡとエマルジョン化し、あるいはＰＢＳに加え
られた。

皮下注射によりマウスに注射された０、１ｎｆの容積に
は１２．５　％のＰＶＰが含有されていた。

２３日目及び５０日目に、全てのマウスは採血され、乱
切され、それらの血精が集められ、各グループに対して
組合わされた。それらの華丸及び精嚢は取り出され、計
量され、ポイン（Ｂｏｉｎ）溶液に置かれ、組織学的試
験用に調製された。

抗＝（ＬＨ−ＲＨ）抗体の検出 抗−（ＬＨ−４Ｈ）抗体が以下のようにして検出された
。

被検未稀釈血清５０μｔ、ＰＢＳ中にｌ／に稀釈（資） された通常の兎血清５０μを及びヨード１２５（約１．
０００　ｄｐｍ　、　ｉ分当りの崩壊：ｄｐｍ）ト表示
すれた（ＬＨ−１−ＬＨ）１０μｔを加えた。これを放
置して４℃で７２時間温温置た。ついでデキストランで
被覆された活性炭（活性炭２５０１１ＩＩを０．０１Ｍ
のＰＢＳ中のデキストラン溶液１００ｍｔに加えて得ら
れたもの）の水冷した懸濁液１５０μｔを加えた。これ
を４℃で５分間放置した。２５００　ｒｐｍで２０分間
遠心分離後、上澄み液をデカントし、その放射能をヘイ
バー（ＨＡＢＥＲ）らＭａｎｕａｌｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃ
ａｌ　Ｉｒｒｒｎｕｎｏｌｏｇｙ　”　、　Ｒｏｓｅ　
Ｎ、　Ｒ，＆Ｆｒｉｅｄｍａｎ　Ｈ，発行、　ｐｐ　１
９０−１９６に記載の′方法により測定した。予備研究
によれば、デキスト（５５） ランで被覆された活性炭は使用条件下で９５俤までの純
粋（Ｌ　ｔｌ　−ＲＨ）を吸収することができた、とい
うことが示された。

抗−ＭＴＰ抗体の検出 抗−ＭＴＰ抗体の存在は、Ｕ状凹陥部を有するミクロ滴
定プレート（Ｃｏｏｋｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　）
で行なわれる溶血性試験により、以下のようにしてチェ
ックした。

血清を５６℃で３０分間の不活性化により解補体化（ｄ
ｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　）　した。二倍稀釈され
た血清５０μｔをＰＢＳ　５０μｔと混合した。新鮮な
赤血球−Ｍ’ｌ”Ｐ接合体２０μｔを２．５％の濃度で
加え、プレートを３７℃で１５分間の製置のために放置
した。最後に、補体２０μｔ　（ＰＢＳで１：２０に稀
釈された標準のモルモット血清）ヲカｐえ、結果を記帳
する前にプレートを再度３７℃で３０分間の製置のため
に放置した。

発熱性の評定 試験は２．５〜２４　Ｋｇのニューシーラント兎で行な
った。約８αの長さに兎の直腸に導入され、（５６） 遠隔温度計（モデ／ｌ／　Ｎｏ、　ＴＥ３　；エラグ（
Ｂ１１ａｂ）。

コペンハーゲン、デンマーク）に接続されたサーミスタ
探針で温度を測定した。兎は２０℃の空調された部屋に
置かれ、観察された。注射は、その体温が３０分間の経
過段階において安定に保たれているものにのみ行なった
。その発熱可能性が検査されている組成物の注入後３時
間の体温を測定した。結果は、検査下の組成物の静脈内
注射後の３時間の過程の兎について得られる平均温度変
位（℃）として表わした。最小発熱性服用量は０．６℃
の上昇を生ずる量に相当する。

以下の結果が観察された。

ａ）免疫化試験 結果を下記第１表に示す。これらは、ｄｐｍの合計数に
対する、上澄み液の１分当りの崩壊（ｄｐｍ）数の比率
を１００倍したものとして表わされている。

以下余白 抗原が存在しない場合には、ＦＣＡ　、’　Ｆ’ＩＡま
たはＰＢＳを注射した対照の血清には固定は観察されな
かった（測定された（最大２．３俤まで）固定は意味の
あるものでない）。しかしながら、ＦＣＡに懸濁された
（ＬＨ−ＲＨ）５０μｆの場合抗体が生成する（　３０
．５％固定）。ＦＩＡ中（ＬＨ−ＲＨ）５０μｆを受け
たグループには意味のある応答は検出されなかった（固
定２．５　％　）。またＰＢＳ　（Ｉ　０％）で得られ
た弱い応答には意味カナイ。接合体ＭＴＰ　−（ＬＨ−
ＲＨ）　テ免疫化された動物からの血清では、接合体は
わずかに８．６μ２の（ＬＨ−ＲＨ）及び４．４μｔの
ＭＴＰを含有するに拘らず、強い応答が得られる。驚く
べきことに、抗体応答は等量のＭｒＰ　−（Ｌ　Ｈ−Ｒ
Ｈ）接合体が水性媒体に投与されたときでさえもより高
い。これらの結果は、ＭｒＰ　−（Ｌ　Ｈ−Ｒ，Ｈ）接
合体は（ＬＨ−４Ｈ）とＦ’ＣＡの協会よりもより効果
的であり、またＦＩＡ中においてもまたＰＢＳ中におい
てもより効果的であるということを示している。

組織学的検査 華丸の平均重量は、ＰＢＳ（ＬＨ−Ｒ，Ｈ）の５〜５０
μ？の投与後にわずかに増加した（２５２７＃〜２７９
■）。この増加は意味があるけれども（ｐｏ、０５）、
いかなる組織学的変化も伴なわなかった。これとは逆に
、ＦＣＡ中に投与された抗原の同量では、精液生成の減
少及び幾つかの場合には精管のわずかな萎縮を伴なつ華
丸の実質的重量増加を生ずる。これに反し、ＰＢ８溶液
中の接合体ＭＴＰ　−（Ｌ　Ｈ−ＲＨ）を受けた動物に
おいては、畢丸の重量は他のグループにおけるよりも明
瞭に低かった（　ｐ　Ｏ，０１）。さらに、華丸の組織
学的検査では、このグループにおいてのみ、同時に腸管
及び精管の著しい萎縮が示され、これは実際上１０のう
ち９のマウスに生殖細胞が欠如していた。

＋２５　Ｉ−ＬＨ−ＩＬＨ固定活性について先に試験し
たのと同じように組合わせた血清を、赤血球とＭＴＰと
の接合体での溶血性試験により、それらの抗−ＭＴＰ抗
体の含有量に関しても検査した。ＭＴＰのα−メチルエ
ステルと牛のアルブミン血清の接合体での過免疫化後に
得られた抗−ＭＴＰ兎血清を、対照抗原として用いた。

１：３０゜７２０の最終稀釈までの兎の抗−ＭＴＰ血清
では溶血反応が観察されたけれども、接合体ＭＴＰ　−
（Ｌ　Ｈ−ＲＨ）で処置したグループのいずれにも抗−
ＭＴＰ抗体は検出されなかった。

結果を以下の第２表に示す。これによれば、単離状態に
あるときのムラミル−ペプチド自体あるいは同じムラミ
ル−ペプチドが破傷風トキシンなど天然抗原と形成され
た接合体のいずれの発熱性と比較しても、本発明に係る
接合体の発熱性が存在しないことが顕著である。本発明
に係る接合体［（ＬＨ−ＲＨ）　−ＭｒＰ　Ｊは、接合
体中の庸Ｐの相対量がＭＴＰ９．３μＶのオーダーであ
る場合でさえも、動物における著しい温度上昇を惹起し
ない。これらの結果は、特に比較接合体（Ｔ　Ｔ　−１
１ｉ４ＴＰ　）による同じ条件下で得られるものと比較
されるべきであり、これによれば、投与された接合体中
のＭＴＰの相対比率が本発明におけるものよりも１００
倍も小さい場合でさえも、全く著しい温度上昇を惹起す
る。

さらに注記すべきことは、■Ｐ７７μＶの相対比率を含
有する接合体（ＬＨ−ＲＨ）−ＭＴＰのより高い服用量
でも、動物における著しい温度上昇を惹起しないという
ことである。

以下余白 第２表 上記表中、表示パ−”は相対量のホルモンとＭＤＰまた
は破傷風トキシンのいずれかとの間の試験接合体におけ
るカップリングを示し、上記量は表の標題゛′服用ｔ（
μｆ）”下の同じライン上の最初及び第２の数から得ら
れるものである。

Ｄ−グルコビラノースのｎ−ブチルエステルの調製 ａ）２−アリロキシエチル−２−０−（２，３゜（６３
） ４−トリー〇−ベンジルーα−Ｌ−フコピラノシル）−
３−ｏ−（２，３，４，６−チトラー１）−ヘンシル−
α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−４，６−ｏ−ベンジリ
デン−ガラクトピラノシドの調製 ２−ヒドロキシエチル　２−０−（２，３゜４−　）　
ＩＪ　−ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−３
−ｏ−（２，３，４、’６−チトラーｏ−ベンジルーα
−Ｄ−ガラクトピラノシル）−４，６−ｏ−ペンジリ−
デンーＤ−ガラクトピラノシド（フランス特許Ａ　７８
１０５５８　／　２−４２２゜６２１に記載されている
）の９８４■（０，７７７ｍモル）を無水ＤＭＦ　（１
５ｍＡ　）に溶かし、ついでナトリウムの水素化合物（
５０チ油中懸濁液；１５゜■；３．１モル）を加えた。

１時間後、臭化アリルを加えた（　０．２５　ｍｌ　；
　２．９　ｍモル）。２時間後にさらに臭化アリルの添
加を行なった（　０．２５ｙ＠Ｌ；２．９ｍモル）。４
時間後、メタノールを加えた（３ｍｔ）。反応混合物を
乾燥度まで濃縮し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し
たクロロホ（６４）　　− シム中に再びとりあげ、ついで硫酸ナトリウム上で乾燥
した。蒸発後、残留物を酢酸エチル−ヘキサン（３；３
）混合物中のシリカゲルカラム（３０Ｆ）上でのクロマ
トグラフィーにより精製した。

蒸発、乾燥後、白い泡状物が得られたニア４５Ｗ　（７
４，２％）〔α］％＝−１−３°（ｃ＝＝１．クロロホ
ルム）。生成物（１）はエタノール中に晶出し、１０３
−１０４℃で溶融する。

ｂ）　　３−ヒドロキシプロピル□２−０−（２。

３．４−トリー〇−ベンジルーα−Ｌ−７コビラノシル
）−３−ｏ−（２，３，４，６−テトラ−０−ベンジル
ーα−Ｄ−ガラクトピラノシル）−４，６−０−ベンジ
リデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＩＩ）の調製 生成物（Ｉ）の７５３　ｑ（０，５８ｍモル）をテトラ
ヒドロフラン無水物に溶かした。窒素通流下に攪拌され
ているこの混合物に、９−ボラビシクロ（３，３，１）
ノナン（１，８ｍｔ　；　０．９　ｍモル）の０．５Ｍ
溶液を加えた。還流下に４時間後、エタノールを加え（
０−３ｍｌ）　、ついで１０分後に３Ｍのソーダ（０，
４ｍｔ　；　１．２　ｍ　％　ル）及び１０Ｍの過酸化
水素（０・６　ｍｌ　；　５０ｇ　ｍモル）を加えた。

５０℃で１時間後、ジクロロメタンを加え（２５ｍｔ）
、ついで溶液が透明となるまで攪拌しながら固形炭酸カ
リウムを除々に導入した。

濾過後、溶媒の蒸発及び乾燥を行ない、残留物を酢酸エ
チル−ヘキサン（Ｋ；％）混合物中のシリカｑカラム（
３０ｊ）上でのクロマトグラフィーにより精製した：　
８５７　ｍｆ（６７，３％）。

〔α）Ｔ；　＝　＋ｌ−５°（ｃ：ｌ、クロロホルム）
。

ｃ）　　３−アジドプロピＡ／−２−０−（２、３。

４−トリー〇−ベンジルーα−Ｌ−７コビラノシル）　
−３−ｏ　−（２，３，４，６−チトラーＯ−ベンジル
ーα−Ｄ−ガラクトピラノシル）−４，６−０−ベンジ
リデン−β−Ｄ−テラクトビラノシド（ＩＩＩ）の調製 生成物（ＩＩ）の５１７〜（０，３９ｍモル）を乾燥ク
ロロホルム（ｌｏｍｔ）に溶かした。トリエチルアミン
（０，１ｍｌ　；　０．７　ｍモル）、Ｎ−ジメチル−
アミノピリジン（４■）及び新しく結晶化されたトシル
クロライド（８２■−０，４２９ｍモル）を加えた。２
４時間後、さらにトリエチルアミン（０，０２５ｍｌ　
）　、　Ｎ−ジメチル−アミノピリジン（３■）及びト
シルクロライド（２０ｖ）を加えた。

２４時間後、ジクロロメタンを加え（２０ｍｔ）、同様
に水を加えた（　５　ｍｌ　）。

２時間攪拌後、有機相を２Ｍの塩酸で、また水、重炭酸
す）　ＩＪウム飽和溶液及び水で洗浄した。

硫酸す）　ＩＪウム上での乾燥及び蒸発後、残留物が得
られた（５５８■；９６・８チ）。この生成物をジメチ
ルホルムアミド（１５ｍｔ）に溶解し、ついでアジ化ナ
トリウム（７６■）を加えた。

反応混合物を６０℃で２時間攪拌し、ついで乾き度まで
濃縮した。得られた残留物を、酢酸エチル−ヘキサン（
号；／Ｖ）中シリカカラム（２０ｆ）のカラム上で精製
Ｌ？、：　：　４６２　ｔｎｙ　（８７，８ｓ）。

生成物をエーテル−ヘキサン中に晶出せしめた；（６７
） ｍ、ｐ、　８６−８７℃；〔α昂＝＋３°（ｃ＝ｌ、ク
ロロホルム）。

ｄ）　　３−アミノプロピル　２−ｏ−（α−Ｌ−フコ
ピラノシル）−３−ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル
）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ＩＶ）の調製 生成物（ＩＩＩ）の４５０ｑを酢酸（３０ｍｔ）中に溶
かし、ついで水素雰囲気下に木炭上５％パラジウムの存
在下に４〜５日間攪拌した。反応混合物を濾過し、凍結
乾燥により製品を得た（１４４．５η；６９チ）。〔α
］”１）　＝　＋　５．５°（ｃ＝２．水）。

ｅ）式Ｉの組成物の調製 ６−ｏ−スクシニル−２−アセトアミド−２−デオキシ
−３−ｏ−（Ｄ−２−プロピオニル−Ｌ−アラニル−Ｄ
−グルタミン）−Ｄ−グルコビラ／　−／（（６−ｏ　
−Ｓｕｅ　−ＭＤＰＱ　−ｏｎＢｕ　）のｎ−ブチルエ
ステル（１８１，６η；　０．２８　ｍモル）をジメチ
ルホルムアミドに溶かした。ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール（４８，５■；　０．２８　ｍモル）及びＮ−シク
ロヘキシル−Ｎ’　（β−（Ｎ−メチ（６８） ルーモルホリノ）−エチル）カルボシイばドル−トルエ
ンスルホネート（１１８，５■；０．２８ｍモル）を加
えた。

１時間後、式（１’ｉ’）の生成物（８５”９　；０１
４ｍモル）をＮ−メチルモルホリン（０，ＯＩ５ｍｔ）
の存在下にジメチルホルムアミドの溶液（，３ｍｔ）を
加えた。２４時間後、反応混合物を乾き度に濃縮し、乾
燥した。得られた残留物をＡＧ−５０−Ｗ−Ｘ　２　（
ＯＨ）の名称で知られるイオン交換樹脂のカラム上で精
製し、これを水で溶離した。薄層クロマトグラフィーに
より決定したフラクションを結合し、凍結乾燥した。得
られた生成物（２１７■）をＡＧ−１−Ｘ２（アセテー
ト）の名称で知られるイオン交換樹脂のカラム上でＭＭ
Ｌ、、これを水で溶離した。精製したフラクションを結
合し、凍結乾燥した。得られた生成物（８８１Ｉｖ）を
最後にシリカカラム（ローバーカラム、タイプＡ　Ｍｅ
ｒｃｋ　）上で精製し、酢酸エチル−ピリジン−酢酸−
水（５−５−１−３及び６２０−６　　ｌ；駕）の溶剤
系の混合物に溶離した。生成物（１）を含有するフラク
シ３ ヨンを結合し、凍結乾燥した：４７■〔α〕Ｄ＝＋２３
．１０（ｃ　＝　１．０３　、水）。

糖（ガラクトース及びフコース）の評価は、Ｚ、　ＤＩ
ＳＣＨＥとり、　Ｂ、　ＳＨＢ’ｒＴＬＥＳ　　”　Ｊ
、　Ｂｉｏｌ　。

ｃｈｅｍ、’　、　１７５　（１９４８）　５９５に従
って行ない、アミノ酸とアミノ酸分析によるムラミン酸
のそれは、完全な酸加水分解（ｂＮ塩酸、１１０℃、２
０１１ｉ）後Ｋ、８．　ＭＯＯＲＥ　トＷ、　Ｈ，Ｓ’
ｌ”ＥＩＮ　。

”　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　ｃｈｅｍ、　”’、　１７６　
（１９４ｇ　）　３６７　　によった。

アミノ酸含量とガラクトース及びフコース含量との間に
見られる比率は０．９５であった。

最終的に得られた接合体は発熱性が欠如していた。０，
５■／紛の服用量で、兎Ｋ　Ｏ，１℃の殆んど意味のな
い温度上昇が惹起しただけである。

ｍ　−ＭＴＰ　トバソプレッシンとの接合体の調製出発
生成物は、式 ％式％ の［：　Ｌｙｓ　’］−バソプレッシン（ＬＶＰ　）で
あった。

３つの化学基が接合のために採用された（２つのアミノ
基と１つのヒドロキシル基）。

この化合物をトリプシンの作用を受けさせ、これにより
以下の化合物が得られた； Ｎｌ２０ＨＮｌ２ “Ｄｅ　ｓ　ｇ　Ｉ　ｙＬＶＰ”として指示されるこの
化合物を、アミノ基をブロックするためにアセチル化し
た（ｐＨ７で、Ｄｅ　ｓ　ｇ　１　ｙＬＶＰの当量当り
２．１モル当量の酢酸によるアセチル化）。

アセチル化されたＤｅ　ｓ　ｇ　ｌ　ｙＬＶＰを、つい
で以下のようにしてＭＴＰに結合した； アセチル化されたＤｅ　ｓ　ｇ　１　ｙＬＹＰのｌ　ｍ
ｙ　ｆ；ｔ　ＢＣＤｌｌｏｍｉに加え（モル比１　：　
３２Ｂ　）、またＤＭＰ　Ｏ、５ｍＡ中ＨＯＢ’ｌ”　
ｌ　５　ｑに加えた。

混合物をマグチツクスターラーで攪拌しなから周囲温度
で７時間装置した。蒸留水０　、３　ｍｌに溶解したＭ
ＴＰｌ、３２■を先記混合物に加えた。

反応を起こさせるために、周囲温度で４８時間攪拌しな
がら接触を維持した。

反応混合物をついで濾過し、ＡＭＩＣＯＮ　Ｉ’）ＩＡ
Ｆ’ＬＯＹＭ２の名称で市販されている濾過膜上で濃縮
した。

レイスイヒの方法によるＭＴＰの投薬後、反応に付され
たＭ’ｌ’１）の６０チが接合されたことが確認された
。Ｄｅ　ｓ　ｇ　ｌ　ｙＬＶＰとＭＴＰは、得られた接
合体中では約Ｉ：１の分子比率であることが確認された
。

バソプレッシンへのＭＴＰの接合は、前者のホルモンを
注射可能とし、未変性バソプレッシンに対する抗体を引
き出すその能力を何ら変更しなかった。特に、抗−バソ
プレッシン抗体が兎に得られ、その抗体は未変性バソプ
レッシンのＮ−末端部分を確認することが見い出された
。

出発ツマトスタテインは以下の式のものである。

遊離のアミン基を、ｐＨ８，２で１．１モル当量の酢酸
でアセチル化し、これによりスレオニル及びセリル基の
Ｃ−末端シアテイル残基に最も近いスレオニル及びセリ
ル基の遊離ヒドロキシル基のＯ−アセチル化を避ける。

アセチル化されたツマトスタテイン誘導体を先に示した
混合無水物方法によりＭＴＰに接合した。接合生成物を
セファデックスＧ５１５シーブ上での濾過により分離し
、Ａｍ１ｃｏｎ　”　ＤＩＡＦＬＯ’　Ｙ　Ｍ　２膜上
で限外濾過して濃縮した。最終接合体は約８３．１６　
／３２．３の重量比でツマトスタテイン誘導体とＭＴＰ
を含有していた。分゛子量は２２７６と測定された。

ＭＴＰ−ツマトスタテイン接合体は、生理食塩水溶液の
形態で兎に注射された場合、変換されていないツマトス
タテインに対し活性な抗体の生成を引き出した。

ｖ　−ＨＢ８の抗原部位を有するペプチドとＭＴＰの使
用されるペプチドは、先に述べたもののいずれでもよく
、あるいは）ＴＢＳポリペプチドと共通のシーケンスを
有し合成される同様のもののいずれでもよい。

反応ハ、ＭＴＰ２１９と混合された、Ｏ，１Ｍ重炭酸ナ
トリウム溶液２．５ｍｔ中に溶解したペプチド２５■を
用いることによって行なうことができる。周囲温度で攪
拌下１時間接触後、カップリング試薬の０．１％最終溶
液が得られるまでグルタルアルデヒドを加えることがで
きる。得られた接合体は、ついで前述した実施例に記載
の方法と同様の技法により分離できる。

自ら明らかなように、また前記から既に明らかなように
、本発明は特に詳細に考察してきた適用のタイプ及び態
様に何ら限定されるものでなく、これに反して全ゆる変
性乃至修正を包含し、また特許請求の範囲に挙げられて
いるハプテン−ムラミルペプチド接合体の全ゆる例を含
むものである。ムラミル−ペプチド部分の重要な部分は
、以下の基礎構造からなると理解されるべきである。

Ｃｏ−Ｘ−開−〇〇 ） ＣＨＣＨ２ ＣＨ２−Ｃ０− この構造から出発して形成される各種誘導体または変性
物は、ここに規定したような置換基により完成される場
合、特許請求の範囲に挙げられているムラミル−ペプチ
ド部分と等価物とみなされるべきである。

さらに、ここに挙げた全ての構造部分は先に規定した構
造においてＸがＬ−アラニルのものと等価物または選択
物と考えられるべきである。

■） 出願人　　アジャーンス、ナショナル、ド、ヴアロリザ
ション、ト、う、ルシエルシュ（７−、エヌ、つ工、７
−、エル）代理人　　弁理士　米　原　正　章 弁理士　松　本　　　昂 （７６） 第１頁の続き ！’　　明　者　ルフランシエ・ビニールフランス国９
１１９０キフ・スイユ ル・イヴエット・アレー・ド・ う・マレ・オアゼユ４６番 Ｍ−明　者　レベル・ミシエル フランス国７５０１２パリ・リュ・ ズビュエ・ビイ−６２２１２６番 ０発　明　者　ショアイ・ジャン フランス国７５００７パリ・リュ・ サントーギローメ２１番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、少なくとも１つの抗原部位を有するハプテンと、高
   分子担体を本質的に有しないムラミル−ペプチドとの、
   免疫原作用を有する接合体。 ２、抗体のあるいは特異細胞媒介反応の生体内生産によ
   り明示され、いずれもそれ自体に対して及び前記抗原と
   同じような構造要素を有する天然抗原に対して免疫原作
   用を有する特許請求の範囲第１項に記載の接合体。 ８、　ハプテンがペプチドまたはグリコペプチドである
   特許請求の範囲ｔｓ１項に記載の接合体。 ４、　ハプテンがホルモンまたはそれらの部分から構成
   されている特許請求の範囲第１項に記載の接合体。 ６、ハプテンがＬＨ−ＲＨである特許請求の範囲第４項
   に記載の接合体。 ６、接合体に発熱性がない程充分に低い分子１を有する
   特許請求の範囲第１項に記載の接合体。 ７、前記接合体の□ムラミルーペプチド部分に対する生
   体内抗体を引き出さない特許請求の範囲第６項に記載の
   接合体。 ８、　兎に１００μｆ／Ｋｙ　の服用量で静脈内投与を
   したとき、０．６℃の温度上昇を惹き起こさない特許請
   求の範囲第６項に記載の接合体。 ９、　兎に３００μｆ／Ｋｆの服用量で静脈内投与をし
   たとき、０．６℃の温度上昇を惹き起こさない特許請求
   の範囲第８項に記載の接合体。 １０、　　兎に５００μｆ　／　Ｋｙの服用量で静脈内
   投与をしたとき、０．６℃の温度上昇を惹き起こさない
   特許請求の範囲第８項に記載の接合体。 １１、　　その分子量が約５，０００以下である特許請
   求の範囲第６項に記載の接合体。 １２、その分子量が３．０００未満である特許請求の範
   囲第１１項に記載の接合体。 １３、その分子線が２．０００未満である特許請求の範
   囲第１２項に記載の接合体。 １４．　　ハプテン部分が、５０未満のアミノアシル残
   基（β−ｈＣＧのＣ一端末エイコサペプチドを除く）を
   含有するペプチドである特許請求の範囲第１項に記載の
   接合体。 １５．３０未満のアミノアシル基を含有する特許請求の
   範囲第１４項に記載の接合体。 １６．２０未満のアミノアシル基を含有する特許請求の
   範囲第１４項に記載の接合体。 １７．１５未満のアミノアシル基を含有する特許請求の
   範囲第１４項に記載の接合体。 １８、　　ハプテンに接合されるムラミル−ペプチド部
   分が、下記一般式（Ｉ）を有するムラミル−ペプチドか
   ら誘導されたものである特許請求の範囲第１項に記載の
   接合体。 以下余白 Ｚ　−ＣＨ２ ＯＨ２ ＣＩＬ、−Ｙ ここで、上記の各基は、ハプテンに共有結合的に結合し
   ていないときには以下の意味を有する；すなわち、 塊は遊離のカルボキシル基もしくはアミド基、または１
   〜１０の炭素原子を有する脂肪族アルコールによりエス
   テル化されたカルボキシル基、あるいはそれ自身遊離の
   カルボキシル基、アミド化されたカルボキシル基もしく
   は１〜１０の炭素原子を有する脂肪族アルコールにより
   エステル化されたカルボキシル基を有するアミノ酸によ
   り置換されたカルボキシアミド Ｒは水素またはメチル基であり、 鴇はアセトアミドまたはグリコリル−アミド基であり、 ｌ（は−ＮＨ２，ＯＨ，または任意的にヒドロキシル。 アミン、カルボキシアミド、スルホンアミド、エーテル
   、チオエーテル、エステルまたはチオエステル置換基を
   有し、アルキル、アリール、アリールアルキルまたはア
   ルキルアリール基に相当するせいぜい１０の炭素原子を
   有するラジカルであり、　　。 瓜はヒドロキシルまたは１〜４の炭素原子を有するオキ
   シアシル基であり、 Ｘはアラニル、アルギニル、アスパラギル、アスパルチ
   ル、システイニル、グルタミニル、グルタミル、グリシ
   ル、ヒスチジル、ヒドロキシ−プロリル、イソロイシル
   、ロイシル、リシル、メチオニル、フェニルアラニル、
   プロリル、セリル、スレオニル、トリプトファニル、チ
   ロシル、バリル及びアミノブチリルからなる群のアミノ
   アシル残基であり、 Ｚは下記一般式（ｎ）を有し、ムラミン酸のＣ−６の位
   置を置換する基であり、 −Ｒ６−（Ｒ７）ｘ　　　　　　　　　　（ｎ）ここで
   、ｘ　＝　Ｏまたは１であり、 ｘ　＝　Ｏのとき、 Ｒ６はヒドロキシルまたはアミノ基であり、ｘ　＝　ｌ
   のとき、 Ｒ６はヒドロキシルもしくはアミノ基、カルボキシアミ
   ド、スルホンアミドエーテルもしくはチオエーテル、エ
   ステルもしくはチオエステルであり、 Ｒフはそのとき−ＣＨ８，−ＣＨ＝ＣＨ−、−８−。 −ＣＯ−またはＮＨ基、−ＣＪ（２−；−ＣＨ＝ＣＨ−
   。 またはＮＨ基の鎖であり、該基は任意的にアリール基に
   より、またはカルボキシル、アミン、スルホヒドリルも
   しくはヒドロキシル基により・、または５以下の炭素原
   子を有するアルキル基により、または８以下の炭素原子
   を有するアルキルアリール、アリールアルキル基により
   、または６以下の炭素原子及び１または２の酸素、窪素
   もしくはイオウ原子を有する複素環基により置換されて
   いるものであり、上記アルキルアリールまたはアリール
   アルキル基はさらに任意にカルボニル基を含有し、また
   は任意的にカルボキシル、アミン、スルホヒドリルもし
   くはヒドロキシル基により置換されているものであり、
   また前記複素環基けそれ自身任意的に５以下の炭素原子
   を有するアルキル基、カルボキシル、アミン、スルホヒ
   ドリルもしくはヒドロキシル基により置換されているも
   のであり、また前記馬基はそれにも拘らずｎ−デシル炭
   化水素鎖の長さを超えない長さを有するものであり、Ｙ
   は遊離のもしくはアミド化されたカルボキシル基、また
   は１０以下の炭素原子を有するエステル基またはアミノ
   酸好ましくはりシン、オルニチン、グルタミン酸、アス
   パラギン［）しくはチロシンからなる三官能アミノ酸に
   より置換されたエステル基、すなわちカルボキシル基及
   びアミン基の他にさらにカルボキシルアミノもしくはヒ
   ドロキシル基を含有するエステル基、またはＹは下記一
   般式（Ｉｌｌ）に相当する基である。 −Ｒ８（Ｒｌｅ　）ｘ　　　　　　　　　　（Ｉｌｌ）
   ここで、ＸはＯまたは１であり、またＲ８はＸが０のと
   きにはアミドもしくはエステル結合であり、ＸがＯでな
   いときは、Ｒ８はカルボキシアミド、エステルもしくは
   チオエステル基であり、Ｒ９はそのときＲ７と同じであ
   る。 １９、　　Ｘにグリシル、セリル、バリル、ロイシル、
   アミノブチリル残基、またはさらに好ましくはアラニル
   である特許請求の範囲第１８項に記載の接合体。 加、Ｘが０であり、Ｚがヒドロキシルまたはアミン官能
   基である特許請求の範囲第１８項に記載の接合体。 ２１、Ｘ＝１であり、 鵬がカルボキシアミド結合またはスルホンアミドエーテ
   ルもしくはチオエーテル、エステルもしくはチオエステ
   ルであり、また 山が下記に示すような基の一つを表わすものである特許
   請求の範囲第１８項に記載の接合体。 （ＣＨ２）　ｎ　　Ｃ０ＯＨ、特にｎ＝１，２．３また
   は４−　（Ｃ）Ｌ、）ｎ−ＮＨ２、特にｎ＝ｌ、２．３
   または４ｔ） （ＣＨ２）ｎ　　Ｃ６Ｈ５ＮＨ２、特にｎ＝ｏまたは１
   −（ＣＨａ）ｎ−８Ｈ、特にｎ　＝　２２２、　　Ｒ６
   基が１〜５の炭素原子を有するアルコールによりエステ
   ル化されたカルボキシル官能基であり、またＹが一〇〇
   Ｎ）（２基である特許請求の範囲第１８項に記載の接合
   体。 鮨、ムラミル−ペプチド部分の基Ｒがメチル基である特
   許請求の範囲第１８項に記載の接合体。 あ、ムラミル−ペプチド部分の基Ｚがスクシニル基であ
   る特許請求の範囲第１８項に記載の接合体。 届、視、八及びルが゛ヒドロキシル基、九がアセトアミ
   ド基、Ｒがメチル基、Ｘがアラニル基、塊がカルボキシ
   アミド基または１〜５の炭素原子を有スるエステル基、
   Ｙがカルボキシアミド官能基である特許請求の範囲第１
   ８項に記載の接合体。 ２６、ムラミル−ペプチド部分が下記のムラミル−ペプ
   チドの一つから選択される特許請求の範囲第１８項に記
   載の接合体。 Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグル
   タミン、 Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−クルタミ
   ンのα−ｎ−ブチルエステル、上記二つのムラミル−ペ
   プチドの６−ｏ−スクシニル化誘導体、 Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタミ
   ン酸のモノ−α−またはγ−エステ□　ルもしくはジエ
   ステル（ここでエステル基は１〜５の炭素原子を有する
   ものである）０２７、　　Ｙがリシル基を含むものであ
   る特許請求の範囲第１８項に記載の接合体。 ２８、ムラミル−ペプチド部分がＮ−アセチル−ムラミ
   ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニルート−リシン
   から誘導されたものである特許請求の範囲第１９項に記
   載の接合体。 旅　製薬学的に受容可能な佐薬と共に、少なくとも一つ
   の抗原部位を有するノ・ブテンと高分子担体な本質的に
   有しないムラミル−ペプチドとの免疫原作用を有する接
   合体を含有してなる製薬学的組成物。 初、ヒトまたは動物生体のレベルにおいて、所定のホル
   モンを抑制しがちなその挙動の修正を惹き起こすための
   製薬学的組成物にして、ここで前記接合体のハブテン部
   分が上記ホルモンまたはその断片からなる特許請求の範
   囲第２９項に記載の製薬学的組成物。 ３１、宿主（ヒトまたは動物）に、少なくとも一つの抗
   原部位を有するノ１ブテンと高分子担体を本質的に有し
   ないムラミル−ペプチドとの免疫原作用を有する接合体
   を投与することからなり、ここで上記ハプテンは測定さ
   れた免疫原またはホルモンと同じような構造要素を有し
   、上記接合体は上記免疫原またはホルモンに対する抗体
   を引き出すのに有効な服用量で投与されることを特徴と
   する測定された免疫原またはホルモンの活性レベルを宿
   主において制御する方法。 ３２、動物においてＬ　Ｈ−ＲＨに対する抗体を引き出
   すに有効な服用量で、動物にＬ　Ｈ−ｆｔ　Ｈとムラミ
   ル−ペプチドとの接合体を投与することからなる動物を
   免疫学的に去勢する方法。