JPS58155100A - 乾式分析用要素 - Google Patents
乾式分析用要素Info
- Publication number
- JPS58155100A JPS58155100A JP58016356A JP1635683A JPS58155100A JP S58155100 A JPS58155100 A JP S58155100A JP 58016356 A JP58016356 A JP 58016356A JP 1635683 A JP1635683 A JP 1635683A JP S58155100 A JPS58155100 A JP S58155100A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- enzyme
- phosphoric acid
- dry
- pyridoxal phosphate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
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- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、筐体試料におけるリン酸ピリドキサール活性
化酵素の量を調定するに有用である乾燥分析素子に関す
るものである。本発明の素子は、アスパルテート アミ
ノトランスフェラーゼおよびアラニンア建ノドランス７
１ラーゼ酵素の定ｔにおいて、％に有用である。
化酵素の量を調定するに有用である乾燥分析素子に関す
るものである。本発明の素子は、アスパルテート アミ
ノトランスフェラーゼおよびアラニンア建ノドランス７
１ラーゼ酵素の定ｔにおいて、％に有用である。
トランスアミナーゼ酵素は、ａ−ア建ノ酸からα−ケト
酸へａ−ア建ノ基の転換を触媒する酵素である。これら
の酵素はしばしばアイノドランスフェラーゼとして記述
される。最も、臨床学的に重要なアミントランス７８ラ
ーゼ酵素のなかの二つに、Ｌ−アラニン：ａ−ケト グ
ルタレードアミノトランスフ、ラーゼ、ＦｉＣ２，４ｔ
２（一般的ニニアラニン アミノトランスフ２ラーゼも
しく６１ＡＬＴとして記述もれる）シよびＬ−アスＩ（
ルテート二ａ−ケト グルタレートアミノトランスンエ
ラーゼ、ＴＡＣｔ表’Ｌ１（一般的にはアス／＜ルテー
ト アミノトランスフェラーゼ もしくはＡ８Ｔ）（ミ
トコンドリアおよび細胞質アイソエンザイムを含む）で
ある。
酸へａ−ア建ノ基の転換を触媒する酵素である。これら
の酵素はしばしばアイノドランスフェラーゼとして記述
される。最も、臨床学的に重要なアミントランス７８ラ
ーゼ酵素のなかの二つに、Ｌ−アラニン：ａ−ケト グ
ルタレードアミノトランスフ、ラーゼ、ＦｉＣ２，４ｔ
２（一般的ニニアラニン アミノトランスフ２ラーゼも
しく６１ＡＬＴとして記述もれる）シよびＬ−アスＩ（
ルテート二ａ−ケト グルタレートアミノトランスンエ
ラーゼ、ＴＡＣｔ表’Ｌ１（一般的にはアス／＜ルテー
ト アミノトランスフェラーゼ もしくはＡ８Ｔ）（ミ
トコンドリアおよび細胞質アイソエンザイムを含む）で
ある。
これらの酵素の両方は臨床学的に重要であり、心筋まｆ
ｃは肝誠において非常に高濃変で見られる。
ｃは肝誠において非常に高濃変で見られる。
血清におけるそれらの上昇は、最近の心筋痙梗塞ｉたけ
肝臓疾患の黴侯である。
肝臓疾患の黴侯である。
ＡＬＴおよびへＢＴｅａ両方ともに補欠分子族を含むこ
とにおいては同じである。補欠分子族は、リン酸ピリド
キサールでＴｏす、酵素が活性であるために存在しなけ
ればならない。リン酸ピリドキサールは、酵素の活性位
置でリジン基とシップ塩基を形成する。トランスフェラ
ーゼ反応にお−て、基質のａ−アミノ基は、リン酸ビリ
ドキ！−身と一時的なシップ塩基を形成する酵素の活性
位置のリジン基のアミノ部分と置換する。次いで、リン
酸ピリドキｆ−ルは、ａ−アミノ基ｔσ−ケト酸に転移
し、酵素のリジンと再結合する。リン酸ピリドキサール
は、補欠分子族でもＴｏり、そして多くの他の酵素の賦
活体（活性剤）である。リン酸ピリドキサールは、ピリ
ドキシン（ビタミンＢａ）の誘導体である。しばしばピ
リドｄＰ１−ルー５−ホスフェート、ホスフォピリドキ
サール、Ｐ−５−ｐ、ＰＬＰまたはＦＤＰとして記述さ
れる。リン酸ピリドキ賃−身は、分子量約２６５でＴｏ
４゜−万、血清は一般に内因性リン酸會幡→ヒリド同じ
くこの補欠分子族を持つ他の酵素に対する分析に−Ｊ？
いて、付加的リン酸ピリドＩ？フールを含むＳ液で、Ａ
８ＴまたはＡＬＴＩ分析するために試＄４５ｒ約培養す
る（ ｐｒｅｉｎｃｕｂａｔｉｎｇ ） コとＫ １
ってリン酸ピリドキサールの血清におけるｔｔ補足する
ことがｉｌましい。従って、アポｍまたは不活性型であ
るいかなる酵素４、この前培養処理によって活性化され
る。−万人ＬＴシよびＡ８Ｔ分析におけるリン酸ピリド
キサール培養に対する必要性は、数カ年討論され文献に
記載されているが、萌培養は現在では試料中のポテンシ
ャル酵素活性のすべてｔ発揮させる六めに必要であると
認められている。従って、国際臨床化学連盟は、リン酸
ピリドキサールα１ ｖｍ Ｍ ／ Ｌｔ食むｌｌｌ１
１１で試料管１０分間培養することｔすすめている〔＠
Ｉｉ！１ＩＩｉ臨床化学連盟、酵素の触媒濃度の測定に
対する１ＦＣＣ法への勧告条数“、′アスパルテートア
ミノトランスフェラーゼに対する１ｐｃｃパー） ２−
、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、２８巻、８８７ページ
。
とにおいては同じである。補欠分子族は、リン酸ピリド
キサールでＴｏす、酵素が活性であるために存在しなけ
ればならない。リン酸ピリドキサールは、酵素の活性位
置でリジン基とシップ塩基を形成する。トランスフェラ
ーゼ反応にお−て、基質のａ−アミノ基は、リン酸ビリ
ドキ！−身と一時的なシップ塩基を形成する酵素の活性
位置のリジン基のアミノ部分と置換する。次いで、リン
酸ピリドキｆ−ルは、ａ−アミノ基ｔσ−ケト酸に転移
し、酵素のリジンと再結合する。リン酸ピリドキサール
は、補欠分子族でもＴｏり、そして多くの他の酵素の賦
活体（活性剤）である。リン酸ピリドキサールは、ピリ
ドキシン（ビタミンＢａ）の誘導体である。しばしばピ
リドｄＰ１−ルー５−ホスフェート、ホスフォピリドキ
サール、Ｐ−５−ｐ、ＰＬＰまたはＦＤＰとして記述さ
れる。リン酸ピリドキ賃−身は、分子量約２６５でＴｏ
４゜−万、血清は一般に内因性リン酸會幡→ヒリド同じ
くこの補欠分子族を持つ他の酵素に対する分析に−Ｊ？
いて、付加的リン酸ピリドＩ？フールを含むＳ液で、Ａ
８ＴまたはＡＬＴＩ分析するために試＄４５ｒ約培養す
る（ ｐｒｅｉｎｃｕｂａｔｉｎｇ ） コとＫ １
ってリン酸ピリドキサールの血清におけるｔｔ補足する
ことがｉｌましい。従って、アポｍまたは不活性型であ
るいかなる酵素４、この前培養処理によって活性化され
る。−万人ＬＴシよびＡ８Ｔ分析におけるリン酸ピリド
キサール培養に対する必要性は、数カ年討論され文献に
記載されているが、萌培養は現在では試料中のポテンシ
ャル酵素活性のすべてｔ発揮させる六めに必要であると
認められている。従って、国際臨床化学連盟は、リン酸
ピリドキサールα１ ｖｍ Ｍ ／ Ｌｔ食むｌｌｌ１
１１で試料管１０分間培養することｔすすめている〔＠
Ｉｉ！１ＩＩｉ臨床化学連盟、酵素の触媒濃度の測定に
対する１ＦＣＣ法への勧告条数“、′アスパルテートア
ミノトランスフェラーゼに対する１ｐｃｃパー） ２−
、 Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、、２８巻、８８７ページ
。
（１９７７）参照〕。
この標準ＩＦＣＣ法における前培養処理に対する必要性
は、自動分析器におけるこの方法の採用についての障害
となって−る。多くの自動分析器を、非常な困難さでこ
の前培養段階のために便宜を図り、適応させている。従
って、もし可能であれば、試料をりン酸ピリドキサール
・ホスフェート溶液と前培養することを排除することは
、入いなる刺激となりうる。解決すべき根本的な問題灯
、入れる（ １ｎ１ｔａｔｅｄ ）試料の分析法を開発
することである。すなわちリン酸ピリドキサールを含む
すべての試薬を合わせ、分析ｒｉ約培養の必要性なく、
反石混金物に試料を加えるだけで行なう。
は、自動分析器におけるこの方法の採用についての障害
となって−る。多くの自動分析器を、非常な困難さでこ
の前培養段階のために便宜を図り、適応させている。従
って、もし可能であれば、試料をりン酸ピリドキサール
・ホスフェート溶液と前培養することを排除することは
、入いなる刺激となりうる。解決すべき根本的な問題灯
、入れる（ １ｎ１ｔａｔｅｄ ）試料の分析法を開発
することである。すなわちリン酸ピリドキサールを含む
すべての試薬を合わせ、分析ｒｉ約培養の必要性なく、
反石混金物に試料を加えるだけで行なう。
前培養段階を不要にする試みの１つの例灯１、ブ九ンら
によって１遠心分析器による使用のために改良された血
清アスパルテート・アミノトランスフェラーゼＩＦＣＣ
−勧告方法の評価”、 Ｃｌムｎ。
によって１遠心分析器による使用のために改良された血
清アスパルテート・アミノトランスフェラーゼＩＦＣＣ
−勧告方法の評価”、 Ｃｌムｎ。
Ｃｈｅｍ、 、 ２７巻、１５６ページ、＜１ｑ８１）
Ｋ報告されている。−万、嬉らけ、実質的に前培養の期
間を減少することによってＩＦＣＣ法への簡便な溶液自
動分析６管適用することができ、短い任意の萌培養時間
ですら有意の有利点φＸＴｏること【示すデータを報告
している。言い換えれば、まったく前培養時間を排除す
ることは、全体的により劣った分析、會もたらすことを
、明らかＫしてやる。
Ｋ報告されている。−万、嬉らけ、実質的に前培養の期
間を減少することによってＩＦＣＣ法への簡便な溶液自
動分析６管適用することができ、短い任意の萌培養時間
ですら有意の有利点φＸＴｏること【示すデータを報告
している。言い換えれば、まったく前培養時間を排除す
ることは、全体的により劣った分析、會もたらすことを
、明らかＫしてやる。
ＡＳＴｓ？よびＡＬＴのアポ酵率型ｐ活性化へのリン酸
ピリドキサールの重畳性のために、この活性化、は広く
研究されている。たとえば希釈ｌＷ′ｆｌＩＬにおいて
、アポ酵素の・活性化はリン酸ピリドキサールの低濃破
でおこる。従って、１ｐｃｃ法では、培１１ｔ−リン酸
ピリドキサール１１ｍＭ／ｚで行なうことｔすすめてい
る。他の研究ではりン蒙ピリドキサールのいく、ぶ〜か
那いレベルがｉｌｌし−ことを示唆して訃り、たとえば
ａ３嘱￥ｉｔｔでである。しかしながら、溶液において
付加的リン酸ピリドキサールは、たとえ更に活性化があ
るとしても少ない。付加的にリン酸ピリドキサールのス
ペクトル吸収および分析の示指体（薬、）反応において
用いられたカップリング酵素の可ｔ！々抑制のために、
リン酸ピリドキサールのより高い濃度は、溶液分析にお
いては用いられな―、〔）−フクンシャイドら、１市販
テスト血清のアラニンアミノトランスフェラーゼおよび
アスパルテートアミノトダンスフェラーゼの測定に関す
るビリドキザール５！−リン酸の影響” 、 Ｊ、
Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｃｌ１ｎ。
ピリドキサールの重畳性のために、この活性化、は広く
研究されている。たとえば希釈ｌＷ′ｆｌＩＬにおいて
、アポ酵素の・活性化はリン酸ピリドキサールの低濃破
でおこる。従って、１ｐｃｃ法では、培１１ｔ−リン酸
ピリドキサール１１ｍＭ／ｚで行なうことｔすすめてい
る。他の研究ではりン蒙ピリドキサールのいく、ぶ〜か
那いレベルがｉｌｌし−ことを示唆して訃り、たとえば
ａ３嘱￥ｉｔｔでである。しかしながら、溶液において
付加的リン酸ピリドキサールは、たとえ更に活性化があ
るとしても少ない。付加的にリン酸ピリドキサールのス
ペクトル吸収および分析の示指体（薬、）反応において
用いられたカップリング酵素の可ｔ！々抑制のために、
リン酸ピリドキサールのより高い濃度は、溶液分析にお
いては用いられな―、〔）−フクンシャイドら、１市販
テスト血清のアラニンアミノトランスフェラーゼおよび
アスパルテートアミノトダンスフェラーゼの測定に関す
るビリドキザール５！−リン酸の影響” 、 Ｊ、
Ｃｌ１ｎ、 Ｃｈｅｍ、 Ｃｌ１ｎ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ、、 １ｙ巻、２１９−２２３ページ
。
。
（１９７９）：ンーセ チャンら、 １ピリドキ！−ル
５／−リン酸による豚Ｍ４ラクテートデヒドロゲナーゼ
の変法”、引ｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 １ａ ｑ巻。
５／−リン酸による豚Ｍ４ラクテートデヒドロゲナーゼ
の変法”、引ｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 １ａ ｑ巻。
１０７−１１！Ｓページ、（１９７５）およびピリドキ
サール５′−リン酸による豚心＠１トコンドリア マレ
ートデヒドロゲナーゼの可逆的変法“。
サール５′−リン酸による豚心＠１トコンドリア マレ
ートデヒドロゲナーゼの可逆的変法“。
Ｂｌｏｃｈｅｍ、 Ｊ、、 １５１巻、２９７−３０
！Ｓページ、（１９７５）参照〕。
！Ｓページ、（１９７５）参照〕。
簡便な溶液法以上に改善された乾燥分析用素子が、最近
開発されている。典型的な乾燥分析成分において、特別
の分析の検査−必要卆試薬は層でコーティングし、次−
で乾燥する。血清のような試料を乾燥した素子と接触せ
しめ、反応を生じせしめ、結果を検出する。
開発されている。典型的な乾燥分析成分において、特別
の分析の検査−必要卆試薬は層でコーティングし、次−
で乾燥する。血清のような試料を乾燥した素子と接触せ
しめ、反応を生じせしめ、結果を検出する。
子を適用することは可能である。たとえばフリジパイロ
ヴイッおよびきりカンによる米国特許＆９９２，１５８
において、＾８Ｔの測定のために有用な素子が開示され
ている。このような素子は、有用であるが、Ｉｌ’ＣＣ
法の条件に石するために、血清は、最初にリン酸ピリド
キ賃−ｘｔ含むｉＩｌ′ｆ１１と１Ω分間曲培養する。
ヴイッおよびきりカンによる米国特許＆９９２，１５８
において、＾８Ｔの測定のために有用な素子が開示され
ている。このような素子は、有用であるが、Ｉｌ’ＣＣ
法の条件に石するために、血清は、最初にリン酸ピリド
キ賃−ｘｔ含むｉＩｌ′ｆ１１と１Ω分間曲培養する。
たとえ、より短一時間処理したとしても、ブルンらは、
仙培養を行なわない測定法は、短い任意の培養を有する
ものより劣ることｔ明白に示して−る。フリジパイロヴ
イツ訃よびミリカンの乾燥分析素子を使用するように考
案された方法は、最も好ましくは未希釈試料を使用する
。帥培養時間を規定するために、分析１１に人ね、る萌
に、トランスフェラーゼ測定のためにリン酸ピリドキサ
ールを含む＃ｌ液と試料を処理する必要がある。それが
ｉＩましくないということは明白でろる〇 トランスアミナーゼ画定のための乾燥分析素子の詳細な
記載は、Ｒ＋ｅｖｅａｒｃｈ Ｄム雷ｃｌｏ奮ｌｉｔ＠
１４４巻、１９７６年６月、１４６３４項に見られ
る。
仙培養を行なわない測定法は、短い任意の培養を有する
ものより劣ることｔ明白に示して−る。フリジパイロヴ
イツ訃よびミリカンの乾燥分析素子を使用するように考
案された方法は、最も好ましくは未希釈試料を使用する
。帥培養時間を規定するために、分析１１に人ね、る萌
に、トランスフェラーゼ測定のためにリン酸ピリドキサ
ールを含む＃ｌ液と試料を処理する必要がある。それが
ｉＩましくないということは明白でろる〇 トランスアミナーゼ画定のための乾燥分析素子の詳細な
記載は、Ｒ＋ｅｖｅａｒｃｈ Ｄム雷ｃｌｏ奮ｌｉｔ＠
１４４巻、１９７６年６月、１４６３４項に見られ
る。
この印刷物において、リン酸ピリドキサールについては
記載されていな％Ａ、ＳＲ＋ｅｌｅａｒｃｈ Ｄｉｓｃ
ｌｏｓｕｒｅは、インダストリアルすボテ、ニテイ Ｌ
ｔｄ。
記載されていな％Ａ、ＳＲ＋ｅｌｅａｒｃｈ Ｄｉｓｃ
ｌｏｓｕｒｅは、インダストリアルすボテ、ニテイ Ｌ
ｔｄ。
（ホーメウェル、ハパエト；）−ンプシャー。
ＰＯ９１１Ｆ、Ｕ、に、）の出版物である。
従って本発明によって解決される問題に、試料が帥培養
段階を必要としないトランスフェラーゼ酵素の測定用乾
燥分析素子を提供することである。
段階を必要としないトランスフェラーゼ酵素の測定用乾
燥分析素子を提供することである。
このような素子は、鋭敏な、そして正確な検査を提供し
、ＩＦＣＣＱ櫃法（１０分間帥培養段階を含む）Ｋ匹敵
する活性化の＠［ｖｔ提供する。
、ＩＦＣＣＱ櫃法（１０分間帥培養段階を含む）Ｋ匹敵
する活性化の＠［ｖｔ提供する。
問題は、液体試ｆ１４における分析物（Ａｏａｌｙｔｅ
）の測定用乾燥分析素子、その中で分析物はリン酸ピ
リドキサ−ＡＩＫよって活性イヒされる酵素でＴｏす、
すなわち酵素の活性化型の存在に応じて、検出嘔れうる
変化ｔもたらすことのできる試薬組ｌ１ｉＬｔそζで直
ちに有する支持体を含んでなる成分によって解決され、
その橋台に適用範囲の増倍生成物および素子の拡散係数
が、反応混合物におｉて、リン酸ピリドキサールの濃Ｉ
ｆαｑｍＭ／Ｌより大ｔもたらす適用範囲で、リン酸ピ
リドキサールを含んでなる層を含む素子である改良法を
提供することによって解決逼れる。
）の測定用乾燥分析素子、その中で分析物はリン酸ピ
リドキサ−ＡＩＫよって活性イヒされる酵素でＴｏす、
すなわち酵素の活性化型の存在に応じて、検出嘔れうる
変化ｔもたらすことのできる試薬組ｌ１ｉＬｔそζで直
ちに有する支持体を含んでなる成分によって解決され、
その橋台に適用範囲の増倍生成物および素子の拡散係数
が、反応混合物におｉて、リン酸ピリドキサールの濃Ｉ
ｆαｑｍＭ／Ｌより大ｔもたらす適用範囲で、リン酸ピ
リドキサールを含んでなる層を含む素子である改良法を
提供することによって解決逼れる。
本発明に係る素子において、有用であるりン酸ビリドキ
ブールのｔＦｉ、希釈溶液の研究から有用であると予期
されるよりもさらに過剰である。一方大抵のｆｊＩｆＩ
Ｉ法は、帥培養混合−において、１１ｍ Ｍ ／ ｌで
使用し、−万リン酸ピリドキサールの高レベルは、吸収
および可能なカップリング酵素不活性化をひきおこし、
本発明の簀子におけるリン酸ピリドキ賃−身の量は、＊
＊法におけゐ上限として知られている値の５倍以上でめ
ゐ。予期しないことに、リン酸ピリドキサールの多量の
とりこみは、試薬の余剰物と接触すゐｆｌｌＪｆＫ、試
料の帥培養ｔ１！シない測定法において、有用である乾
燥素子を生成することが見い出されている。従って本発
明の素子に、未希釈血清試料のような分析帥の最小を含
む試１４につ−て４有用である。
ブールのｔＦｉ、希釈溶液の研究から有用であると予期
されるよりもさらに過剰である。一方大抵のｆｊＩｆＩ
Ｉ法は、帥培養混合−において、１１ｍ Ｍ ／ ｌで
使用し、−万リン酸ピリドキサールの高レベルは、吸収
および可能なカップリング酵素不活性化をひきおこし、
本発明の簀子におけるリン酸ピリドキ賃−身の量は、＊
＊法におけゐ上限として知られている値の５倍以上でめ
ゐ。予期しないことに、リン酸ピリドキサールの多量の
とりこみは、試薬の余剰物と接触すゐｆｌｌＪｆＫ、試
料の帥培養ｔ１！シない測定法において、有用である乾
燥素子を生成することが見い出されている。従って本発
明の素子に、未希釈血清試料のような分析帥の最小を含
む試１４につ−て４有用である。
使用する橋台に、乾燥分析素子における反応混合物に与
えられた試薬の量は、乾燥分析素子への試薬の適用範囲
および素子への試料の拡散特性の両刀に関係がある。試
薬の一定の適用範囲、反応混合物の一定容量Ｋかける試
薬量は、成分上に占める一定１１ｆｆ容量の領域による
。本発明の目的は、拡散係数に換算して、乾燥分析用素
子の拡散特性管記載できる好まし−ものを見い出すこと
である。
えられた試薬の量は、乾燥分析素子への試薬の適用範囲
および素子への試料の拡散特性の両刀に関係がある。試
薬の一定の適用範囲、反応混合物の一定容量Ｋかける試
薬量は、成分上に占める一定１１ｆｆ容量の領域による
。本発明の目的は、拡散係数に換算して、乾燥分析用素
子の拡散特性管記載できる好まし−ものを見い出すこと
である。
一方乾燥分析用素子は、液体試料と接触するまで反応混
合物損ｆｔ示さな−し、得られるｌ１ｔＬは、拡散係数
（例、ｄ／ｌ）Ｋよって、適用範囲を増倍（乗する）す
ることによって（例、帛Ｍ／−］測定する。拡散係数は
、素子に応用した試料の単位容量につき占められて−る
領域である。４１別の素子に対する拡散係数は、固有の
％像がら９、成分の試料と既知の液体容量と接触せしめ
、液体が広がっておおった部分１掬定し、次いで液体の
容量で領域を分割することによって拡散係数を計算する
ことによって害鳥に測定されうる。こ０４１１定に対す
るもっと特別な試料および条件は、明細書のなかで後に
述べる。
合物損ｆｔ示さな−し、得られるｌ１ｔＬは、拡散係数
（例、ｄ／ｌ）Ｋよって、適用範囲を増倍（乗する）す
ることによって（例、帛Ｍ／−］測定する。拡散係数は
、素子に応用した試料の単位容量につき占められて−る
領域である。４１別の素子に対する拡散係数は、固有の
％像がら９、成分の試料と既知の液体容量と接触せしめ
、液体が広がっておおった部分１掬定し、次いで液体の
容量で領域を分割することによって拡散係数を計算する
ことによって害鳥に測定されうる。こ０４１１定に対す
るもっと特別な試料および条件は、明細書のなかで後に
述べる。
像分析素子に関連して記載する。しかしながら、リン酸
ピリド中す−ルによって活性化される他の酵素ニ、この
活性体（活性剤）の高レベルを含む素子によって定量化
されると−うのは推察されることである。適当な検出剤
の選択によって、他のトランスアイナーゼ、たとえばグ
ルタメート−システィン トランスアイナーゼおよびマ
ーラーらによって“生物化学”、 ６８４ページの表１
４−４〔ハーバ−エン・ドロウｔｔｙ６６））Ｋ報１！
［れている他のトランスア建ナーゼ：アインメラーゼ、
たとえばアナリン、グルタメート、プロリン。
ピリド中す−ルによって活性化される他の酵素ニ、この
活性体（活性剤）の高レベルを含む素子によって定量化
されると−うのは推察されることである。適当な検出剤
の選択によって、他のトランスアイナーゼ、たとえばグ
ルタメート−システィン トランスアイナーゼおよびマ
ーラーらによって“生物化学”、 ６８４ページの表１
４−４〔ハーバ−エン・ドロウｔｔｙ６６））Ｋ報１！
［れている他のトランスア建ナーゼ：アインメラーゼ、
たとえばアナリン、グルタメート、プロリン。
リジンおよびセリνに対する異性体およびジカルボキシ
ラーゼ、たとえば！−ラーらによって生物化学、６８５
ページに報告された他のジカルボキシラーゼのような酵
素が、画定される。
ラーゼ、たとえば！−ラーらによって生物化学、６８５
ページに報告された他のジカルボキシラーゼのような酵
素が、画定される。
本発明に係る撫子に、りン酸ピリドキサー身の高適用範
囲を含み、たとえば濃ｔ １１９ ｍ Ｍ ／ Ｌ ｆ
生成する適用範囲の過剰である。未希釈血清を用いる乾
燥分析成分におけるリン酸ビリドキ！−ルと活性化との
関係は、Ｓ＊活性化とは非常に異なることが見い出され
る。−万、活性化曲線の一般形は同様であり、ｊｌｉ［
ｃおけゐプラトー領域は、リン酸ピリドキ！−身の低レ
ベルで遅する。たとえば、ハフテンシールドら（上記記
載）ニ、活性曲線が１ｌＩｌ′Ｗ１研究に＞ｈ”ｃ、約
（Ｌ ２−Ｉ Ｓ ｗｓ Ｍ ／ Ｌ後、実質的にフラ
ットになること瞥見い出している。未希釈血清を用いた
乾燥分析素子に対して、曲線は約一度ａ ？ ｗｓ Ｍ
／ ｌ−約最大＃藪値の３倍（例２訃よび図１参照）
まで平ら［（ｆｌａ＋ｔｔｅｒｏｕｔ ）になり始める
ことはな−。
囲を含み、たとえば濃ｔ １１９ ｍ Ｍ ／ Ｌ ｆ
生成する適用範囲の過剰である。未希釈血清を用いる乾
燥分析成分におけるリン酸ビリドキ！−ルと活性化との
関係は、Ｓ＊活性化とは非常に異なることが見い出され
る。−万、活性化曲線の一般形は同様であり、ｊｌｉ［
ｃおけゐプラトー領域は、リン酸ピリドキ！−身の低レ
ベルで遅する。たとえば、ハフテンシールドら（上記記
載）ニ、活性曲線が１ｌＩｌ′Ｗ１研究に＞ｈ”ｃ、約
（Ｌ ２−Ｉ Ｓ ｗｓ Ｍ ／ Ｌ後、実質的にフラ
ットになること瞥見い出している。未希釈血清を用いた
乾燥分析素子に対して、曲線は約一度ａ ？ ｗｓ Ｍ
／ ｌ−約最大＃藪値の３倍（例２訃よび図１参照）
まで平ら［（ｆｌａ＋ｔｔｅｒｏｕｔ ）になり始める
ことはな−。
轡に好ましい実施態様において、素子は少なくとも反応
混合物の濃変約１０ ｖａ Ｍ ／ Ｌ ｋ生ずる十分
なリン酸ビリドキ！−身を會む。約（Ｌ９−１゜ｍＭ／
ｌの間では、活性化の１合が継続して増進（改善）が見
られる。約ｚＯ南Ｍａｔ以上のレベルで、はとんど更に
増進は、見られない、ＬＯＩＩＩＭ／１以上のレベルで
は、素子の作用に有害であるのみならず、リン酸ピリド
キナールの損失がとりこまｉる量への実際的な限界であ
る。完全に活性化せしめるために約１０鯛Ｍａｔより小
過剰用鱒ることが好まし−、正確なｔは、活性化される
特別な酵雰に依存する。ＡＬＴに対する至適濃縦Ｆｉ２
−Ｍａｔ付近にめゐ。＾８’ｌ”Ｋ対する至適一度はＳ
晴Ｍａｔ付近にある。
混合物の濃変約１０ ｖａ Ｍ ／ Ｌ ｋ生ずる十分
なリン酸ビリドキ！−身を會む。約（Ｌ９−１゜ｍＭ／
ｌの間では、活性化の１合が継続して増進（改善）が見
られる。約ｚＯ南Ｍａｔ以上のレベルで、はとんど更に
増進は、見られない、ＬＯＩＩＩＭ／１以上のレベルで
は、素子の作用に有害であるのみならず、リン酸ピリド
キナールの損失がとりこまｉる量への実際的な限界であ
る。完全に活性化せしめるために約１０鯛Ｍａｔより小
過剰用鱒ることが好まし−、正確なｔは、活性化される
特別な酵雰に依存する。ＡＬＴに対する至適濃縦Ｆｉ２
−Ｍａｔ付近にめゐ。＾８’ｌ”Ｋ対する至適一度はＳ
晴Ｍａｔ付近にある。
リン酸ビリドキ！−身は種々の方法によりて、成分に含
まれる。たとえば、リン酸ピリドキ！−には１ｉｆｔ、
−履用コーティング組成物に簡単に＠解する。任意Ｋ１
１ｌ解したりン績ピリドｌ？す一ルを有する高沸点液体
の分散剤は、コーティング組成物に含まれる。他に任意
に、リン酸ピリドキ賃−Ｊ−はア身グ々ンのようなアイ
ノを會むポリマーと会合し、次いでコーティング組成物
に含まれる。
まれる。たとえば、リン酸ピリドキ！−には１ｉｆｔ、
−履用コーティング組成物に簡単に＠解する。任意Ｋ１
１ｌ解したりン績ピリドｌ？す一ルを有する高沸点液体
の分散剤は、コーティング組成物に含まれる。他に任意
に、リン酸ピリドキ賃−Ｊ−はア身グ々ンのようなアイ
ノを會むポリマーと会合し、次いでコーティング組成物
に含まれる。
リン酸ピリドキ賃−身は、＾８Ｔの検査Ｋ特に有用でめ
ゐ、活性化されたＡ８Ｔの存在に応じて検出可能な変化
を生ぜしめることのできる好ましい試薬組成物は、ニコ
チンア々ドアデニンジ翼タレチド〔（還元１１）（ＮＡ
ＤＨ）、Ｉ、−アスノ（ルテ＝ト、ａ−ケトダｈ−レー
トおよびマレートデヒドロゲナーゼＣＭＤＨ）］である
、＾８Ｔは、Ｌ−７スバルテートおよびａ−ケトグルタ
レートのオキずルアセテートおよびＬ−グルタメートへ
の反応を触媒すゐ１次の段階です中ザルアセテートおよ
びＮＡＤＨは、マレートおよびエコチンアミドアデニン
ジ翼クレオチド（＠化ｍ）（ＮＡＤ）を生ずるマレート
デヒドロゲナーゼの存在下に反応する。試料におけるＡ
８Ｔの量は、ＮＡＤＨの消滅の速１と関連して鱒る。多
くの試料、たとえば血清は、しばしば内因性ピルベー）
（ｐｙｒｕＹａｔ＠）を含み、反応を触媒するマレー
ト デヒドロゲナーゼを干渉（妨害）する、ピルベート
からの干渉−（妨害）ｔ−実質的に除去するために、Ａ
８Ｔ欄定測定薬組成物は、しばしばラクテートデヒドロ
ゲナーゼ（ＬＤＩ（） を含む。任意に、オキシダーゼ
は、ピルベート干渉（妨害）！減少式せるために含まれ
る。試料を試薬組ｌ！智と混合した後食だちに、ラクテ
ート デヒドロゲナーゼはピルペー。
ゐ、活性化されたＡ８Ｔの存在に応じて検出可能な変化
を生ぜしめることのできる好ましい試薬組成物は、ニコ
チンア々ドアデニンジ翼タレチド〔（還元１１）（ＮＡ
ＤＨ）、Ｉ、−アスノ（ルテ＝ト、ａ−ケトダｈ−レー
トおよびマレートデヒドロゲナーゼＣＭＤＨ）］である
、＾８Ｔは、Ｌ−７スバルテートおよびａ−ケトグルタ
レートのオキずルアセテートおよびＬ−グルタメートへ
の反応を触媒すゐ１次の段階です中ザルアセテートおよ
びＮＡＤＨは、マレートおよびエコチンアミドアデニン
ジ翼クレオチド（＠化ｍ）（ＮＡＤ）を生ずるマレート
デヒドロゲナーゼの存在下に反応する。試料におけるＡ
８Ｔの量は、ＮＡＤＨの消滅の速１と関連して鱒る。多
くの試料、たとえば血清は、しばしば内因性ピルベー）
（ｐｙｒｕＹａｔ＠）を含み、反応を触媒するマレー
ト デヒドロゲナーゼを干渉（妨害）する、ピルベート
からの干渉−（妨害）ｔ−実質的に除去するために、Ａ
８Ｔ欄定測定薬組成物は、しばしばラクテートデヒドロ
ゲナーゼ（ＬＤＩ（） を含む。任意に、オキシダーゼ
は、ピルベート干渉（妨害）！減少式せるために含まれ
る。試料を試薬組ｌ！智と混合した後食だちに、ラクテ
ート デヒドロゲナーゼはピルペー。
トの迅速な分解を触媒する。引ｔ＆続いて、ＮＡＤＨ消
滅の速度は、モエ−−され、ピルベートの影響は実質的
にうけな−。
滅の速度は、モエ−−され、ピルベートの影響は実質的
にうけな−。
一ルｒ用いる個の酵素である。好ましいＡＬＴ測定用検
出試薬組底物は、ＮＡＤ）（、Ｌ−アラニン。
出試薬組底物は、ＮＡＤ）（、Ｌ−アラニン。
α−ケトグルタレートおよびラクテートデヒドロゲナー
ゼを含む。＾８Ｔの測定と同様の操作で、試、ｎ中のど
のようなＡＬ’ｌ’も、し−アラニンおよびα−ケトグ
ルタレートのＬ−グルタメートおよびピルベートへの反
応を触媒する。ラクテートおよびＮＡＤＰ生ずるラクテ
ートデとドロゲナーゼの存在下にピルベートおよびＮＡ
ＤＨ１ｊ反応する。
ゼを含む。＾８Ｔの測定と同様の操作で、試、ｎ中のど
のようなＡＬ’ｌ’も、し−アラニンおよびα−ケトグ
ルタレートのＬ−グルタメートおよびピルベートへの反
応を触媒する。ラクテートおよびＮＡＤＰ生ずるラクテ
ートデとドロゲナーゼの存在下にピルベートおよびＮＡ
ＤＨ１ｊ反応する。
再び、ＮＡＤＨの消滅の速ｌＩｔモニターし、それＦｉ
試料中のＡＬＴの量と関係がある。
試料中のＡＬＴの量と関係がある。
−刀記載されたＮＡＤＨに基づくＡＬＴおよびＡＣＴに
対する方法は、現今では、リン酸ピリドキサールの高レ
ベルのと９こみによって改善されたこれらの酵素の活性
型の存在下に一検出されうる変化ｔもたらすことのでき
る他の試１１ｉｔ−含む乾燥分析用素子が好まし−、た
とえばＮＡＤ／ＮＡＤ）Ｉの指示体反応は有用でるる。
対する方法は、現今では、リン酸ピリドキサールの高レ
ベルのと９こみによって改善されたこれらの酵素の活性
型の存在下に一検出されうる変化ｔもたらすことのでき
る他の試１１ｉｔ−含む乾燥分析用素子が好まし−、た
とえばＮＡＤ／ＮＡＤ）Ｉの指示体反応は有用でるる。
有用な試薬はたとえば、ヘンＩＪ−ａ、Ｊ著０．臨床化
学；原瑠と方法。
学；原瑠と方法。
二層、１９７４年、８７３−８？！ページ（／１−パー
エンドｐつ、工暴−冒−り、ＮＹ、、）Ｋ記載されてい
る。ピルベート オキシダーゼを含む有用な試薬は、米
国特許４２４４ｓ４２に開示されている。グルタメート
デヒドロゲナーゼ會含む有用な試薬はドイツ特許Ｌ４
３１，７７９に開示されて−る。シトレートシンターゼ
／ＤＴＮＢＩ含む他の有用な試薬は、Ａｎａｌ、 Ｂｉ
ｏｃｈ＠ｍ、、 ５５巻、４０５−４１０ページ、（１
９７０）Ｋ記載されている。
エンドｐつ、工暴−冒−り、ＮＹ、、）Ｋ記載されてい
る。ピルベート オキシダーゼを含む有用な試薬は、米
国特許４２４４ｓ４２に開示されている。グルタメート
デヒドロゲナーゼ會含む有用な試薬はドイツ特許Ｌ４
３１，７７９に開示されて−る。シトレートシンターゼ
／ＤＴＮＢＩ含む他の有用な試薬は、Ａｎａｌ、 Ｂｉ
ｏｃｈ＠ｍ、、 ５５巻、４０５−４１０ページ、（１
９７０）Ｋ記載されている。
本発明に係るトランスアミナーゼ乾燥分析用素子は、好
ましくは付加的にリン酸ピリドキ！−ルの高適用範囲、
ＮＡＤもしくはＮＡＤ）１の高適用範囲を含む、好まし
くは、適用範囲の増倍（倍ａ）の生成物および拡散係数
が、反応混合１１１１にお−て、ＮＡＤもしくはＮＡＤ
Ｈｌｌ［約１南Ｍ／ｌ−８−Ｍ／ｌＫすることが十分に
できるＮＡＤもしくはＮＡＤＨの適用範囲毎ある。ＮＡ
ＤＨの高レベルは、動的値域（較差）Ｋｓ？ける改善ｔ
４たらし、トランスアミナーゼｏｌＩｌ定のための乾燥
分析用素子の直線応答（比例反応）１％たらす。
ましくは付加的にリン酸ピリドキ！−ルの高適用範囲、
ＮＡＤもしくはＮＡＤ）１の高適用範囲を含む、好まし
くは、適用範囲の増倍（倍ａ）の生成物および拡散係数
が、反応混合１１１１にお−て、ＮＡＤもしくはＮＡＤ
Ｈｌｌ［約１南Ｍ／ｌ−８−Ｍ／ｌＫすることが十分に
できるＮＡＤもしくはＮＡＤＨの適用範囲毎ある。ＮＡ
ＤＨの高レベルは、動的値域（較差）Ｋｓ？ける改善ｔ
４たらし、トランスアミナーゼｏｌＩｌ定のための乾燥
分析用素子の直線応答（比例反応）１％たらす。
１発＋４１１ＴＩｃ基づいて、有用な乾燥分析用素子は
、検出試薬、リン酸ピリドキ賃−におよび緩衝剤のよう
な他の試薬を含む試薬組成物ｔ１適轟な支持体に簡単に
コーティングすることによってｌ１ｉｌｌＩ！される。
、検出試薬、リン酸ピリドキ賃−におよび緩衝剤のよう
な他の試薬を含む試薬組成物ｔ１適轟な支持体に簡単に
コーティングすることによってｌ１ｉｌｌＩ！される。
他・の実施態様において、支持体は多くの層でコーティ
ングされ、そのいくつかは１つｔたはそれ以上の層を含
む、４１！Ｆに好ましい実施態様において、多重層素子
は、素子上での試料拡ａｔ改良すゐために拡散層を含ん
で構成される。拡散層は、検出試薬組成の１つもしくは
それ以上を食む。有用な拡散層はペーパーもしくは繊維
のような繊維状に調製された層を含む。
ングされ、そのいくつかは１つｔたはそれ以上の層を含
む、４１！Ｆに好ましい実施態様において、多重層素子
は、素子上での試料拡ａｔ改良すゐために拡散層を含ん
で構成される。拡散層は、検出試薬組成の１つもしくは
それ以上を食む。有用な拡散層はペーパーもしくは繊維
のような繊維状に調製された層を含む。
検出試薬を含む層は、リン酸ビリドキ賃−にと敵状で接
触（連通）せしめなければなら１ｋｖｈゆこのことは、
試薬のすべてがリン酸ピリドキ賃−ルを有する同じ層に
あるか、またはＩＩＩＢ書したもしくσ中間層によって
相互に分ｍ−ｍれてい−る別々の層；賦杓、可溶化試薬
および反応生成物に、浸透性のめるすべての層にあるこ
と管意味すゐ・１Ｆ＃に有用な乾燥分析用素子は、支持
体上に等方性的有孔、非繊維拡散層、支持体と拡散層の
間に挿入された試薬層を有する支持体を含んでなる。
触（連通）せしめなければなら１ｋｖｈゆこのことは、
試薬のすべてがリン酸ピリドキ賃−ルを有する同じ層に
あるか、またはＩＩＩＢ書したもしくσ中間層によって
相互に分ｍ−ｍれてい−る別々の層；賦杓、可溶化試薬
および反応生成物に、浸透性のめるすべての層にあるこ
と管意味すゐ・１Ｆ＃に有用な乾燥分析用素子は、支持
体上に等方性的有孔、非繊維拡散層、支持体と拡散層の
間に挿入された試薬層を有する支持体を含んでなる。
等方性的有孔、非繊維拡散層は、フリジバイロヴイ４ツ
およびミリカン米国特許へ９９２．１５８およびピアス
ら米国特許４２５ａ００１に開示されている。乾燥分析
用素子の生ＭｔＫ対する方法および組ｇは、これらの特
許ＫＮ示されている。
およびミリカン米国特許へ９９２．１５８およびピアス
ら米国特許４２５ａ００１に開示されている。乾燥分析
用素子の生ＭｔＫ対する方法および組ｇは、これらの特
許ＫＮ示されている。
可能な場合はいつでも、乾燥分析用素子の拡散層におけ
る分析下に、酵素に対する基質を含むことが、特に１ま
しい、酵素は、相対に大きな分子であるので、有孔拡散
層における酵素に対する基質の局在は、基質を有する試
料ＫｊＩＰいて、酵素の接触を促進せしめる。結果とし
て、遅滞時間もしくは、反応開始に要する時間は減少す
る。更に、拡散層におけゐ基質−を有する素子は、改良
され大長期保存（維持）を示す・ ・ 一万、拡散層に基質を會むこ、とが好ましく、ゲラチン
のような結合剤を含む別々の試薬層において、リン酸ピ
リドキ賃−ルを含むことが好ましい。
る分析下に、酵素に対する基質を含むことが、特に１ま
しい、酵素は、相対に大きな分子であるので、有孔拡散
層における酵素に対する基質の局在は、基質を有する試
料ＫｊＩＰいて、酵素の接触を促進せしめる。結果とし
て、遅滞時間もしくは、反応開始に要する時間は減少す
る。更に、拡散層におけゐ基質−を有する素子は、改良
され大長期保存（維持）を示す・ ・ 一万、拡散層に基質を會むこ、とが好ましく、ゲラチン
のような結合剤を含む別々の試薬層において、リン酸ピ
リドキ賃−ルを含むことが好ましい。
によって、素子の長期保存（維持）は、改善される。
いかなる特別な索子に対する拡散係数でも、試料の既知
容緻を有する素子の接触によって測定される。拡散係数
の計算において、試料の容量は、素子が液体で飽和され
ないように選択すべきである。素子を試料既知量Ｋｍ触
せしめた後、試料が、素子上に拡赦しおおっ九領域を測
定する。領域の測定を促進するために、拡散係数の測定
は、領域が容易に区別できるように色素を含む試料で任
意に行なわれる。試料の容量によって分割され光試料に
よって生じ九領域は、拡散係数である。
容緻を有する素子の接触によって測定される。拡散係数
の計算において、試料の容量は、素子が液体で飽和され
ないように選択すべきである。素子を試料既知量Ｋｍ触
せしめた後、試料が、素子上に拡赦しおおっ九領域を測
定する。領域の測定を促進するために、拡散係数の測定
は、領域が容易に区別できるように色素を含む試料で任
意に行なわれる。試料の容量によって分割され光試料に
よって生じ九領域は、拡散係数である。
広範囲内で、特別な素子に対する拡散係数は、拡散係数
を計算するために用いられる試料の粘度と、実質的に無
関係である。拡散係数の計算の場合に、１更用において
最も見い出される（出会う）可能性のある最も粘性のあ
る液体を用いるヒとが望ましい。拡散係数をｍ走する丸
めに％現今の好ましい液体は、血清である。
を計算するために用いられる試料の粘度と、実質的に無
関係である。拡散係数の計算の場合に、１更用において
最も見い出される（出会う）可能性のある最も粘性のあ
る液体を用いるヒとが望ましい。拡散係数をｍ走する丸
めに％現今の好ましい液体は、血清である。
広範囲内で、拡散係数は、素子に試料を適用する方法と
実質的に無関係である。現今の好ましい方法において、
安定な懸滴は、コンテナから分配し、素子に滴を接触せ
しめるようＫする。この方法は、更に詳しく米国特許４
，０４１，９９５に開示されている。
実質的に無関係である。現今の好ましい方法において、
安定な懸滴は、コンテナから分配し、素子に滴を接触せ
しめるようＫする。この方法は、更に詳しく米国特許４
，０４１，９９５に開示されている。
上記のようにフリジパイログイツおよび建リカンによっ
て米国特許に開示されているように１等方性的有孔拡散
層を有する乾燥分析用素子に対する拡散係数は、次のよ
うに測定される：ヒト血清１０μを滴を、フリジパイロ
ヴイッおよび建リカンによる特許に記載の実施例１の素
子（硫酸バリウムを含む拡散層および酢酸セルロース結
合剤をのそく）と同様の素子上にスポットする。得られ
たスポットは、約α８１の直径を有する。１０μを滴に
よって生じた領域は、α５０３２である。従って、この
素子に対する拡散係数社、α０５０ｅＩＩＩ２／ｐｔで
ある。反応混合物濃度を少なくてもａｒｍｍｏｌ ／
ｊにするために５これらの拡散特性を有する素子上のリ
ン酸ピリドキサールの適用範囲は、少なくても約（Ｌ
Ｏ５ｆ／ｄでなければならない。
て米国特許に開示されているように１等方性的有孔拡散
層を有する乾燥分析用素子に対する拡散係数は、次のよ
うに測定される：ヒト血清１０μを滴を、フリジパイロ
ヴイッおよび建リカンによる特許に記載の実施例１の素
子（硫酸バリウムを含む拡散層および酢酸セルロース結
合剤をのそく）と同様の素子上にスポットする。得られ
たスポットは、約α８１の直径を有する。１０μを滴に
よって生じた領域は、α５０３２である。従って、この
素子に対する拡散係数社、α０５０ｅＩＩＩ２／ｐｔで
ある。反応混合物濃度を少なくてもａｒｍｍｏｌ ／
ｊにするために５これらの拡散特性を有する素子上のリ
ン酸ピリドキサールの適用範囲は、少なくても約（Ｌ
Ｏ５ｆ／ｄでなければならない。
酸素の測定用試薬組成において緩衝剤を含むことが一般
的Ｋｆｆｌましい。広範囲の緩衝剤が有用である。〔列
、グツドも、′″生物学的研究に対する水素イオン緩衝
剤”、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 、 ５巻。
的Ｋｆｆｌましい。広範囲の緩衝剤が有用である。〔列
、グツドも、′″生物学的研究に対する水素イオン緩衝
剤”、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 、 ５巻。
４６７ページ、（１９４６）参照〕。特に有効な緩衝剤
としては、Ｎ−）リス（ヒドロキシメチル）メチルアミ
ノエタンスルフォン酸（Ｔｌｉ１８）およびトリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノエタン（ＴＲＩ８）が含まれる
。他の有用な緩衝剤として、イ、ミダゾール、ジェタノ
ールアミンおよびトリエタノールアミンが含まれる。
としては、Ｎ−）リス（ヒドロキシメチル）メチルアミ
ノエタンスルフォン酸（Ｔｌｉ１８）およびトリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノエタン（ＴＲＩ８）が含まれる
。他の有用な緩衝剤として、イ、ミダゾール、ジェタノ
ールアミンおよびトリエタノールアミンが含まれる。
検出試薬およびリン酸ピリドキサールを含む記載された
試薬組成の使用を応用する成分および材料は、たとえば
米国特許４０９２，４６５．４４１ａ０？？、４４１４
０８！５％Ｌ８９４８４５．２．８９５，８４４，２．
９−１２，５０９．！ＤＯ＆８７９、へ８０２．８４２
、へ７９Ｂ、０６４、翫２９＆７５ｇ、へ９１翫６４７
．４９１罵４５３．ｊ％？？八５９へ、Ｓ、９５６．Ｓ
５７．４．２７Ｑ？２０，４２４＆８２？、４．２５５
，５８４．４．２５６６９Ｓ、英国特許２，０５２，０
５７および８・畠ｅａｒｃｈＤｉｓｃｌｏｓｕｒｅ、
１４６巻、１９７６年６月。
試薬組成の使用を応用する成分および材料は、たとえば
米国特許４０９２，４６５．４４１ａ０？？、４４１４
０８！５％Ｌ８９４８４５．２．８９５，８４４，２．
９−１２，５０９．！ＤＯ＆８７９、へ８０２．８４２
、へ７９Ｂ、０６４、翫２９＆７５ｇ、へ９１翫６４７
．４９１罵４５３．ｊ％？？八５９へ、Ｓ、９５６．Ｓ
５７．４．２７Ｑ？２０，４２４＆８２？、４．２５５
，５８４．４．２５６６９Ｓ、英国特許２，０５２，０
５７および８・畠ｅａｒｃｈＤｉｓｃｌｏｓｕｒｅ、
１４６巻、１９７６年６月。
１４４５８号に記載されている。
次に実施例を示す。
実施例ｔ
Ａ８Ｔの測定用乾燥分析用素子を調製する。成分は、リ
ン酸ピリドキサールの（ＰＬＰ）の適用範囲内で変化す
る。系統的にまとめた素子は、次の組成を有する： 拡散ｌｌ：硫酸バリウム、酢酸セルロース結合剤。
ン酸ピリドキサールの（ＰＬＰ）の適用範囲内で変化す
る。系統的にまとめた素子は、次の組成を有する： 拡散ｌｌ：硫酸バリウム、酢酸セルロース結合剤。
ポリウレタン、トリトンＸ−４０５° 、ａケトグルタ
ル酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウム（ｓｏｄｌ
ｕｍ ａｓｐｉｒｔａｔｅ）サブ化層：ポリ（Ｎ−イ
ソプロピルアクリルアンド） 試薬層：ゲラチン、トリトンＸ−４０，５’″ 、緩衝
剤：ＮニトリＸ（ハ’Ｆ’／Ｉｆ“））ｊｊ、１−２−
ア建ノエタンスル７オン＠（Ｔｌ１８）、ＮＡＤｉ（。
ル酸ナトリウム、アスパラギン酸ナトリウム（ｓｏｄｌ
ｕｍ ａｓｐｉｒｔａｔｅ）サブ化層：ポリ（Ｎ−イ
ソプロピルアクリルアンド） 試薬層：ゲラチン、トリトンＸ−４０，５’″ 、緩衝
剤：ＮニトリＸ（ハ’Ｆ’／Ｉｆ“））ｊｊ、１−２−
ア建ノエタンスル７オン＠（Ｔｌ１８）、ＮＡＤｉ（。
ＭＤＨ、ＬＤＨ、リン酸ピリドキサールの多様なレベル
およびゲラチン硬化剤。
およびゲラチン硬化剤。
支持体：ポリ（エチレンテレフタレート）。
拡散層Ｋ＞けるポリウレタン結合剤は、拡散層の凝集力
を助長し、商品名ニスタン＠（ｌＪｔａｎ／）ＣＢ、Ｆ
、グ、トリッヒＣｏ、） として害鳥に手に入れるこ
とができる。サブ化層は、拡散層の試薬層への付着を助
長する。
を助長し、商品名ニスタン＠（ｌＪｔａｎ／）ＣＢ、Ｆ
、グ、トリッヒＣｏ、） として害鳥に手に入れるこ
とができる。サブ化層は、拡散層の試薬層への付着を助
長する。
ヒト血清試料１０μＬを上記記載の素子−の１つにスポ
ットする。試ＩＩ４は、素子のコーティング層に完全に
吸収され、直径（Ｌ８ａｗｌ有するスポット１生ずる。
ットする。試ＩＩ４は、素子のコーティング層に完全に
吸収され、直径（Ｌ８ａｗｌ有するスポット１生ずる。
従ってこれらの素子に対する拡散係数−に、０．０５３
”／ＰＬである。
”／ＰＬである。
病院患者血清の４８試料からの一定量（部分標本）は、
変形ＩＦＣＣ標準法によってＡ８ＴＫ対する活性を検査
する（３７℃、リン酸ピリドキサール３０分間培養）。
変形ＩＦＣＣ標準法によってＡ８ＴＫ対する活性を検査
する（３７℃、リン酸ピリドキサール３０分間培養）。
各々患者の試ｙＩ４に対するＡＳＴｉｌｌ準値を設定す
る。
る。
各々患者の試料からの４つの一定量（部分標本）（各々
１０μ“Ａ）を各雇乾燥分析用素子の４つの別々の試料
上にスポットする。各々の素子の反射帯１１” （Ｒｃ
ｆｌｅｃｔｌｏａ ｄｅｎｓｉｔｙ ） （ＤＢ ）
は、スポットした後１５０−３００秒間モニターする
。
１０μ“Ａ）を各雇乾燥分析用素子の４つの別々の試料
上にスポットする。各々の素子の反射帯１１” （Ｒｃ
ｆｌｅｃｔｌｏａ ｄｅｎｓｉｔｙ ） （ＤＢ ）
は、スポットした後１５０−３００秒間モニターする
。
患者の検量線菅、配ＩＥ嘔れた素子よに実験的に測定し
た各々の運ｔＫ対する各々患者の試料の活性（標準検査
法によって測定されたような）回帰する（ｒｅｇｒｅｔ
ｔｉｎｇ）ことによって設定する。回帰直線【弔いて、
全誤差分散（ｅｒｒｏｒ ｖａｒｉａｎｃｅ ）ＪＥ゛
（８ｙ＠Ｘ としても記載）ｒｉ、計算サレ、４つの
反復検体から方法の精度Ｊｏ（プール化検定精１として
も知られている）ハ、計算される。無作為の偏＊ａｅけ
、Ｊｏ およびａＦ、 Ｃロートンら。
た各々の運ｔＫ対する各々患者の試料の活性（標準検査
法によって測定されたような）回帰する（ｒｅｇｒｅｔ
ｔｉｎｇ）ことによって設定する。回帰直線【弔いて、
全誤差分散（ｅｒｒｏｒ ｖａｒｉａｎｃｅ ）ＪＥ゛
（８ｙ＠Ｘ としても記載）ｒｉ、計算サレ、４つの
反復検体から方法の精度Ｊｏ（プール化検定精１として
も知られている）ハ、計算される。無作為の偏＊ａｅけ
、Ｊｏ およびａＦ、 Ｃロートンら。
１重書分析の統計学的比較：臨床化学への応用“。
である。
表１に結果１１とめて示す。
以下余白
表 １
＋１！ ｏ、１１２．０８１１１ ａｔ ｌａ ａ７８
ｘ１゜６ ０．１６ ｈＱ５ ９．５ ５．２
９．８ ａｓｏ−ｘｌｏ−’データは、各々の素
子が、卓越し九人８Ｔ分析ができることを示す。すべて
の素子に対するＪＥが低い°という事実は、本質的に血
清におけるアポ型の酵素すべてが活性層に転換するとい
うことを示唆する。他方、血清試！！における不濡性酵
嵩に対する活性の比が変化するために、リン酸ピリドキ
サールとの１０分間の前培養魁理にようてすべての酵素
は完全に活性化され標準分析との比較においてより＾い
変動性が期待される。更に％ａ９ｍｍｏｌ／ ｔからｌ
Ｏ＠ ５ＩＩｎＯ１／ Ｌ までの増加する適用範囲
でａＩＡおよび感度は、改善される。更にリン酸ピリド
キサールレベルにおける増加は、ＪＥおよび感度におい
て、よ抄わずかの改善を示す。
ｘ１゜６ ０．１６ ｈＱ５ ９．５ ５．２
９．８ ａｓｏ−ｘｌｏ−’データは、各々の素
子が、卓越し九人８Ｔ分析ができることを示す。すべて
の素子に対するＪＥが低い°という事実は、本質的に血
清におけるアポ型の酵素すべてが活性層に転換するとい
うことを示唆する。他方、血清試！！における不濡性酵
嵩に対する活性の比が変化するために、リン酸ピリドキ
サールとの１０分間の前培養魁理にようてすべての酵素
は完全に活性化され標準分析との比較においてより＾い
変動性が期待される。更に％ａ９ｍｍｏｌ／ ｔからｌ
Ｏ＠ ５ＩＩｎＯ１／ Ｌ までの増加する適用範囲
でａＩＡおよび感度は、改善される。更にリン酸ピリド
キサールレベルにおける増加は、ＪＥおよび感度におい
て、よ抄わずかの改善を示す。
実施例２
実施例は、前培養に対しての必要なく、人８Ｔのアポー
型活性化する丸めの本発明に係る素子の効能（＊！力）
Ｋついて説明する。
型活性化する丸めの本発明に係る素子の効能（＊！力）
Ｋついて説明する。
アポ型酵素を活性化するための本発明に係る素子の効能
（能力）は、アポ型ム＄Ｔだ秒を含む試料を調製し、次
いでリン酸ピリドキサールの変化量と素子の応答（反応
）を測定することＫよってテストする。
（能力）は、アポ型ム＄Ｔだ秒を含む試料を調製し、次
いでリン酸ピリドキサールの変化量と素子の応答（反応
）を測定することＫよってテストする。
ム８Ｔ測定のための乾燥分析用素子は、調製され、概臂
的に次のように表わされる： 拡散層：アビセル、ポリ（ビニルピロリドン）。
的に次のように表わされる： 拡散層：アビセル、ポリ（ビニルピロリドン）。
結合剤、ａ−ゲトグルタレートおよびＬ−７スパルテー
ト 試薬層：ゲラチン、緩衝剤：イミダゾール、オキサメ−
） 、 ＮＡＤＨ，りン酸ピリドキｔ−ルの多様な適用
範囲 表■は、この実施例における種々の素子におけるリン喰
ピリドキサールの適用範囲を示す。
ト 試薬層：ゲラチン、緩衝剤：イミダゾール、オキサメ−
） 、 ＮＡＤＨ，りン酸ピリドキｔ−ルの多様な適用
範囲 表■は、この実施例における種々の素子におけるリン喰
ピリドキサールの適用範囲を示す。
表 ■
比較 ＯＱ
比較（１０２（１６
４（ＬＯ４１，２
５α０４４ １？
６ ａｎ ８６ １５
ミトコンドリアム８Ｔ（ｍＡ８Ｔ）をジ凰うらによって
Ａｃｔａ、Ｖｉｔａｍｉｎ、１ｍｘｙｍｏｌ、 Ｓ
０巻２８ページ（１９７１）Ｋ記載の方法を用いて、ヒ
ト肝臓から分離する。
Ａｃｔａ、Ｖｉｔａｍｉｎ、１ｍｘｙｍｏｌ、 Ｓ
０巻２８ページ（１９７１）Ｋ記載の方法を用いて、ヒ
ト肝臓から分離する。
細１１１１ｊＡｓ Ｔ （ｃ Ａ８ Ｔ ） １ｃ１ｊ
ｎ Ｃｈ＠ｗ。
ｎ Ｃｈ＠ｗ。
１８％’、 ５７４ヘ−シ（１？ ７２ ）Ｋｌｅ−ノ
方法を用いて、赤十字から提供されえ古い赤血球から分
−す−る。
方法を用いて、赤十字から提供されえ古い赤血球から分
−す−る。
各々アイソエンザイムのアポ型の調製は、次の方法に基
づいて行なう。
づいて行なう。
アイソエンザイム溶液１５Ｕ／−をアスノくルテートで
ａｍＭにする。この溶液を室温で２時間保持する。次い
で溶液をリン酸ナトリウムｐＨ４０でｓｏｏ、Ｍにせし
め、２５℃のも−とで一夜培養する。溶液を超遠心分離
し、１０ｍＭ ＴＷ８ で１）Ｈ７，８に緩衝化する
。
ａｍＭにする。この溶液を室温で２時間保持する。次い
で溶液をリン酸ナトリウムｐＨ４０でｓｏｏ、Ｍにせし
め、２５℃のも−とで一夜培養する。溶液を超遠心分離
し、１０ｍＭ ＴＷ８ で１）Ｈ７，８に緩衝化する
。
ｍム８Ｔアポエンずイムの試料は、Ａ８Ｔ活性の全部が
除去されたヒト血清に加え、それ社実質的に内因性リン
酸ピリドキサールを含まない。
除去されたヒト血清に加え、それ社実質的に内因性リン
酸ピリドキサールを含まない。
２４５．１６５および１２１ Ｕ／Ｌ ｍＡ ８ Ｔを
含む溶液を調製する。
含む溶液を調製する。
各々溶液の一定量を上記記載の各々の素子の試料にスポ
ットする。反射１度（ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎｄｅｎｓｉ
ｔｙ ）をモニターし、各々溶液−素子対に対するＩ
ＤＢ ／分を測定する。
ットする。反射１度（ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎｄｅｎｓｉ
ｔｙ ）をモニターし、各々溶液−素子対に対するＩ
ＤＢ ／分を測定する。
アポミトコンドリア アイソエンザイムに関するデータ
紘次に示す： ゛（ｌ） 溶液における酵素は、実質的に不活性であ
る。ところが一方、リン酸ピリドキサールを含まない素
子で一部分わずかの活性が観察され、これは酵素を入れ
た鳩舎、血清Ｋかいて、残留のリン酸ピリドキサールに
よってひきおこされ九残留活＠Ａｓ’ｒのり〈少量によ
るものであるかもしれない。
紘次に示す： ゛（ｌ） 溶液における酵素は、実質的に不活性であ
る。ところが一方、リン酸ピリドキサールを含まない素
子で一部分わずかの活性が観察され、これは酵素を入れ
た鳩舎、血清Ｋかいて、残留のリン酸ピリドキサールに
よってひきおこされ九残留活＠Ａｓ’ｒのり〈少量によ
るものであるかもしれない。
（２） アボエンザイムは、反応混合物におけるリン
酸ピリドキサールａ ４ ＠ｍｏｌｅ／Ａ ＩＩＣよる
未前培養を有する乾燥素子組成において、不十分Ｋｉｔ
性化される。
酸ピリドキサールａ ４ ＠ｍｏｌｅ／Ａ ＩＩＣよる
未前培養を有する乾燥素子組成において、不十分Ｋｉｔ
性化される。
（３）反応混合物におけるリン酸ピリドキサール約ＩＪ
、 ９ 、Ｎ ｍｏｌｅ／ ｌで、活性化開始に対して
プラトー領域であることをデータは示していゐ。
、 ９ 、Ｎ ｍｏｌｅ／ ｌで、活性化開始に対して
プラトー領域であることをデータは示していゐ。
アポ細胞質アイソエンずイムに対するデータは、同様の
操作で分析される。一方活性化の全レベルは、このアイ
ソエンずイムに対しては、より低く、素子におけるリン
酸ピリドキサールによる活性化に圓してと同じ結論が出
される。
操作で分析される。一方活性化の全レベルは、このアイ
ソエンずイムに対しては、より低く、素子におけるリン
酸ピリドキサールによる活性化に圓してと同じ結論が出
される。
以下余白
Claims (1)
- １、 液体試料における分析物の測定用乾燥分析用素子
において、鋏分析物はリン酸ビリドキ賃−ルによって活
性化された酵素でＴｏす、該酵素の活性盤の存在に応答
して、検出されうる変化を生ぜしめることのできる試薬
組成物を含んでなる層を有する支持体を會んでなる鋏素
子でＴｏす、鋏素子が、適用範囲内の増倍生成物および
成分の拡散係数が、屓応混合物におけるリン綾ピリドキ
賃−身の濃度ａ９綱ｍｏｌ／ｊよｐ大である験適用範囲
内にリン酸ピリドキ？−ＡＩ含むことＹｔＩＦ＃黴とす
る乾燥分析用素子。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US345844 | 1982-02-04 | ||
| US06/345,844 US4450232A (en) | 1982-02-04 | 1982-02-04 | Incorporation of pyridoxal phosphate in dry analytical elements for the determination of enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58155100A true JPS58155100A (ja) | 1983-09-14 |
| JPH0249718B2 JPH0249718B2 (ja) | 1990-10-31 |
Family
ID=23356719
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58016356A Granted JPS58155100A (ja) | 1982-02-04 | 1983-02-04 | 乾式分析用要素 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4450232A (ja) |
| EP (1) | EP0085954B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58155100A (ja) |
| CA (1) | CA1182726A (ja) |
| DE (1) | DE3372787D1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4575488A (en) * | 1982-06-25 | 1986-03-11 | Technicon Instruments Corp. | Interference free transaminase assay |
| JPS63137699A (ja) * | 1986-11-28 | 1988-06-09 | Fuji Photo Film Co Ltd | 酵素活性測定用分析要素 |
| GB8900924D0 (en) * | 1989-01-17 | 1989-03-08 | Amco Chemie Handel | Compositions for use in enzyme deficiencies |
| US4990445A (en) * | 1988-01-20 | 1991-02-05 | Beckman Instruments, Inc. | Stable reagent and kinetic assay for alpha-amylase |
| US5441739A (en) * | 1990-06-22 | 1995-08-15 | The Regents Of The University Of California | Reduced and controlled surface binding of biologically active molecules |
| US5462858A (en) * | 1993-12-29 | 1995-10-31 | Eastman Kodak Company | Dry multilayer analytical elements for assaying transaminases |
| US6565738B1 (en) | 1999-01-28 | 2003-05-20 | Abbott Laboratories | Diagnostic test for the measurement of analyte in abiological fluid |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1143835A (ja) * | 1965-05-11 | 1900-01-01 | ||
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| CA1054034A (en) * | 1975-06-20 | 1979-05-08 | Barbara J. Bruschi | Multilayer analytical element |
| US4242446A (en) * | 1978-07-26 | 1980-12-30 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
| US4241179A (en) * | 1978-08-14 | 1980-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Method for determining a transaminase in a biological fluid and reagent combination for use in the method |
| US4255384A (en) * | 1978-08-14 | 1981-03-10 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Multilayered integral element for the chemical analysis of the blood |
| US4235962A (en) * | 1978-08-21 | 1980-11-25 | The Dow Chemical Company | Combination kit for transaminase assay of a body fluid |
| US4318982A (en) * | 1979-06-04 | 1982-03-09 | Miles Laboratories, Inc. | FMN-Labeled specific binding assay |
-
1982
- 1982-02-04 US US06/345,844 patent/US4450232A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-01-28 CA CA000420478A patent/CA1182726A/en not_active Expired
- 1983-02-03 EP EP83101021A patent/EP0085954B1/en not_active Expired
- 1983-02-03 DE DE8383101021T patent/DE3372787D1/de not_active Expired
- 1983-02-04 JP JP58016356A patent/JPS58155100A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3372787D1 (en) | 1987-09-03 |
| EP0085954B1 (en) | 1987-07-29 |
| US4450232A (en) | 1984-05-22 |
| JPH0249718B2 (ja) | 1990-10-31 |
| EP0085954A2 (en) | 1983-08-17 |
| CA1182726A (en) | 1985-02-19 |
| EP0085954A3 (en) | 1985-04-17 |
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