JPS58152812A - 水性相中単層脂質顆粒の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、水性相中琳層脂質頒粒の製造方法に関する
。

脂質一粒については文献中に多くの記載が見られる−こ
の製造及び使用は多くの研究の対象となっている。１つ
の脂質二重膜を有する単層脂質顆粒は、球状に配置され
た複数の脂質二重膜を有する多層脂１ＩＬ顆粒から区別
される。

単層脂質顆粒は１つの球状核ｆ１１′に有し、そして例
えば約２００〜ｓｏｏｏｏｌ、好ましくは約２００〜３
００００Ｘの直径を有する．球状被膜は、脂質成分、例
えば両親媒性脂質、例えば燐脂質、例えばホスファチノ
ン酸、レシチン又はり７アリン、そして場合によっては
中性脂質、例えばコレステロールの二重膜から成る。こ
の二重膜は、１つの水性相から成る内部空間を包囲して
いる。

単層脂質顆粒は又、「小胞」とも称される。

脂質顆粒の、橿々の活性物質の担体としての医薬への使
用に大きな関心が寄せられている。すなわち、脂質噴粒
は、蛋白質、例えば抗体もしくは酸承、ホルモン、一タ
ｉン又は遺伝子の担体として、あるいは標識され走化合
物の担体として分析目的への使用が提案されている．例
えば、米国特許第３９９３７５４号においては、担体と
して脂質顆粒を使用する腫瘍細胞の処理による化学療法
が記載されている。

所定の活性物質は、脂質顆粒の形成の際κ又はその後拡
散により封入する．脂質顆粒の形成と活性物質の封入は
橿々の方法によ）行われ、ＣａｒｅｅｒＴｒ＠ａｔｍ＠
＋ａｔ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ　　（　　１　　９８　　１
　　）　　＄　　ｓ　　２７〜５０のスタンレーＢ．カ
イエ（　８ｔ．　８　Ｋ＠ｙ●）等の総説ｒＬｉｐｏｓ
ｏｍｅｓ−Ｐｒｏｌｌ＠ｒｍｍ　　ａｎｄ　　ｐｒｅｔ
ｍ１ｓ＊　　ａｍｉｓｌ＊ｅｔ１ｖ＋ｓ　ｄｒｕｇ　ｗ
ａｒｒｉｏｒｓ　Ｊに記載されている。同様に、活性物
質の封入を目的とする脂質顆粒の多くの製造方法が、ノ
童しンホルッ（Ｂａｒ＠ｎｈ＠ｌｍ）等によるＢｌｏａ
ｈ＊ｏｘｉａｔｒｙ、第１６巻、第１２号、２８　０６
　〜２８　１　０，並びにａｍ特奸公開（００ｇ）第２
８１９１Ｆ観カ号、同第２９０２６７２号、同第２５３
２３１７号及び同第２８４２６０８号、米国特許第４０
５３５８５号明細書、及び画一ロッ／ｌ特許出願第３６
６７６号明細書に記載されている。

例えば、脂質成分、例えば燐脂質、例えばホスファチノ
ン酸、レシチン又はケファリン、及び場合によっては中
性脂質、例えばコレステロールを有機溶媒、例えばクロ
ロホルム又はベンゼンに溶解する。＃発の後、該当する
脂質成分の均質層、例えば膜層が残留する。次にこの脂
質成分を、例えば攪拌しながら、所定の活性物質を含有
する水性層に分散せしめる。これに続く超音波処理によ
シ活性物質を封入した単層脂質顆粒が形成される。

多くの常用法においては、単層脂質顆粒及び多層脂質顆
粒の１合物を伴なう水性相であって、該脂質−粒の構造
及び大きさが不ぞろいであって、はとんど影響を受けず
、そして著しく変化する可能性のあるものが得られる。

この発明の方法によれば、開本な方法で多くの、そして
ほとんど定量的な量の単層脂質−粒を伴なう水性相を形
成することができ、この脂質−粒には、直径約２００〜
６００　Ｘｔ４ｊｉする小形単層脂貢顆粒（１ＧＪＩ、
　）及び直径約６００〜３０００１を有する大形単層脂
質顆粒（ＧＵＬ　）が含まれる。この発明の方法の特有
の利点は、相対的に均一な大台さのＫＵＬ及びＧＵＬを
得ることができ、そして分散相中のＫＵＬとＧＵＬの量
比を変えることができる点にある。適当な分１ｌｌ１１
苧段、例えばｒルＰ通法又は限外濾過法により大形単層
脂質顆粒から小形単層脂質−粒を分離することができる
。

この発明は、次の成因 ｋ１２０ｆ（ （式中、■は０又はｌでめ９；基Ｒ４及び町の内の１つ
は水嵩、ヒドロキシ基、又は炭票原子数１〜４個の低級
アルキル基でめ）他方の基はそれぞれ炭素原子数１０〜
２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基もし
くはアルケニルオキシ基、又は炭素原子６１０〜２０個
の７シルオキシ基であり；Ｒ１は水嵩又は縦木原子数１
〜４個の低級アルキル基でアシ；そしてＲ４は水素、炭
素原子ｌ１ｉｌ〜７＠の低級アルキル基、炭素原子数５
〜１２個の炭水化物基であり、又はＲ１及び町が水素も
しくはヒドロキシ基でありＲ１が水素であるときはステ
ロイド基でおる） で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
肪酸及びステロ−に以外の追加の脂質、あるいは、職が
０又は１であり；Ｒ１及びＲ２が相互に独立に、それぞ
れ炭素原子数１０〜２０個のアある式（４）の脂質、及
び場合によっては適当な追加の脂質ｔＰＨ値が７より大
でおる水性相に分散せしめること、あるいは、 （ｂ）　　！１１が０又はｌであり；基Ｒ４及びＲ２の
内の１つが水素、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜４個の
低級アルキル基であって他方の基がそれぞれ炭素原子数
１０〜２０１１１のアルキル基、アルケニル基、アルコ
キシ基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子ｆｉ
ｌＯ〜５０個のアシルオキシ基でめり；８．が水嵩であ
り；七してＲ４はアンモニオ基でＲ換され友低級アルキ
ル基でめる式に）の脂質、及び場合によっては追加の脂
質、あるいは、醜がＯ又はｌでろり；Ｒ４及び町が相互
に独立に、それぞれ炭素原子６１０〜２０個のアルキル
基、アルケニル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭
素原子数１０〜５０個の７シルオキシ基で６す；札が水
素で６す；そして８４はアンモニオ低級アルキルアンモ
ニオ基で置換された低級アルキル基でめる式（４）の脂
質、及び適当な追加の脂質ｔＰＨ値が７よｐ小である水
性相に分散せしめ、そして必要であれば水性相を中和し
、そして所望により得られた単層脂質−粒ｔ−績縮しそ
して／又は分離することｔ特徴とする単層脂質顆粒の製
造方法に関する。

この明細書において、前記のそして後記の一般的記載は
特に次の意味を有する。

方法（ａ） 炭素原子ｌ１１１〜４個の低級アルキル基Ｒ，、Ｒ２又
はｆＬ３は、例えば好ましくはメチル基、さらにはエチ
ル基、鳳−グロピル基、又はｌ−ブチル基である。

アル中ル基８．又は町は、好ましくはｎ−デシル基、ｎ
−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基（ラウリル基）、−一
トリゾシル基、ｎ−テトラデシル基（ｉリスチル基）、
飄−ペンタデシル基、ｎ−へ中サブシル基（セチル基）
、ｎ−オクタデシル基（ステアリル基）又はれ−エイコ
シル基（アルケニル基）、さらにｆ４ｍ−へ！タデシル
基又はａ−ノナデシル基である。

アルケニル基Ｒ４又はＲ２は、好ましくは９−シス−ド
デセニル基（ラウロレイル基）、９−シス−テトラデセ
ニル基（Ｚリストレイル基）、９−シス−へ午ｔｒセニ
ル基（パル（）レイニル基）、６−７スーオクタデセニ
ル基（−ｅ）ロセリニル基）、６−ドランスーオクタデ
セニル基（ペトロセライノニル基）、９−シス−オクタ
デセニル基（オレイル基）、９−）ランス−オクタデセ
ニル基（エイコシル基）　父は９−シス−ドデセニル基
（ｉドレイニル基）、さらにｌ−デセニル基、ｌ−ウン
デセニル基、ｌ−ドデセニル基、１−トリデセニル基、
１−テトラデセニル基、ｌ−（ノナデセニル基、ｌ−へ
キサデセニル基、ｌ−へｆ！デセニル基、１−オクタデ
セニル基、９−シス−１２−トランス−オクタデカジェ
ニル基（リノリル基）、９−トランス−１２−トランス
−オクタｆ　力ｐ　！ニル基（リノライジニルａ）、ｇ
−シス−１２−シス−オクタデセニル基（リルイル基）
、９−シス−１１−トランス−１３−トランスーオクタ
デカトリエニル基（β−エロイステアリニル基）、９−
シス−１２−シス−１５−シスーオタタデカトリヱニル
基（リルニル基）％９−１１１−、１３−、１５−オク
タデカテトラエニル（／＃リナリル基）、ｌ−ノナデセ
ニル基、ｌ−エイコシル基、５−．１１−．１４−エイ
コサトリエニル又は５−．８−．１１−．１４−エイコ
サテトラエニル基（アラキトニル基）である。

アルコキシ基Ｒ１又はＲ２は、好ましくは馳−デシルオ
キシ基、ａ−ドデシルオキシ基（ラウリルオキシ基）、
聰−テトラデシルオキシ基（きりスチルオキシ基）、ｎ
−ヘキサデシルオキシ基（セチルオキシ基）、鳳−オク
タデシルオ中シ基（ステアリルオキシ基）、又はｎ−エ
イコシルオキシ基（アラキニルオキシ基）、さらにｎ−
ランデシ／’　；ｔ　＊　シ４　、ｔｒ　−）　リゾシ
ルオキシ基、鳳−ペンタデシルオキ７基、ｎ−へ！タデ
シルオキシ基又スートデセニルオキシ基（ラウロレイル
オキシ基）、９−シス−テトラデセニルオキシ基（ｉリ
ストレイルオキシ基）、９−７ス一ヘキサデセニルオキ
シＭＣ”ルオトレイニルオキシＭ）、６−シス−オクタ
デセニルオキシ基（−ｅ　）　ａ七すニルオキシ基）、
６−）テンスーオクタｒセニルオキシ基（（トロセライ
ノニルオキシ基）、９−シス−オクタデセニルオキシ基
（オレイルオキシ基）、９−トランスーオクタｒセニル
オキク１ｆＩ（エイコシルオキシ基）、又は９−シス−
ドデセニル基（ガドレイニルオキシ基）、さらにはｌ−
デシルオキシ基、１−ウンデセニルオキシ基、ｌ−ドデ
シルオキシ基、１−）すｒセニルオキシ基、ｌ−テトラ
デセニルオキシ基、１−ペンタデセニルオキシ基、１−
へキサデセニルオキシ基、１−へ！りｒセニルオキシ基
、ｌ−オクタデセニルオキシ基、９−シス−１２−）ラ
ンスーオクタテカノエニルオキシ基（リゾシルオキシ基
）、９−）ランス−１２−）ランスーオクタデカノエニ
ルオキシ基（リノライノニルオキシ基）、９−シス−１
２−７スーオクタジヱニルオキシ基（リゾシルオキシ基
）、９−シス−１１−トランス−１３−トランスーオク
タデカトリエニルオキシ基（β−エレオステアリニルオ
キシ基）、９−シス−１２−シス−１５−シスーオクタ
デカトリエニルオキシ基（リゾシルオキシ基）、９−．
１１−。

ｔａ−、ｔｓ−オクタデカテトラエニルオキシ基（ｌ豐
すナリルオキシ基）、ｌ−ノナデセニルオキシ基、ｌ−
エイコシルオキシ基、５−．１１−。

１４−エイコサトリエニルオキシ基又は５−１８−．１
１−．１４−エイコテテトラエニルオキシ基（アラ中ド
ニルオキ７基）である・ 炭素原子数ｌＯ〜５０偵を有するアシルオキシ基Ｒ１又
はＲ８は、好ましくはアルカノイルオキシ基、芳香族環
系によシ置換されたアルカノイルオキシ基、又はアルケ
ノイルオキシ基である。

アルカノイルオキシ基Ｒ４又はＲ２は、好ましくはａ−
デカノイルオキシ基、ｎ−ドデカノイルオキ７基（ラウ
ロイルオキシ基）、ｎ−テトラゾカッイルオキシ基（ｉ
リストイルオキシ、ｌ）、ｎ−ヘキサデカノイルオキシ
基、ｎ−ヘキサデカノイルオキシ基（）譬ルイトイルオ
キシｔｓ）、鳳−讐りタデカッイルオキシ基（ステアロ
イルオキシ基）又は鳳−エイコソイルオキシ基（アラキ
ノイルオキシ基）、さらにはｎ−ウンデカノイルオキシ
基、ｍ−）リゾカッイルオキシ基、ｎ−４ンタデカノイ
ルオキシ基、聰−へ！りデカノイルオキシ基又はｎ−ノ
ナデカノイルオキシ基である。

芳香族環系により置換されたアルカノイルオキシ１Ｂ、
又はＲ２は、例えば、フェニル基がアルカノイルオキシ
基のω位に存在するフェニル−ｎ−アルカノイルオキシ
基、例えばフェニル−ｎ−ｆチリルオキシ基、フェニル
−ｎ−ペンタノイルオキシ基、フェニル−ｎ−ヘキサノ
イルオキシ基、フェニル−ｎ−へノナノイルオキシ基、
フェニル−ｎ−オクタノイルオキシ基、フェニル−ｎ−
ノナノイルオキシ基、フェニル−ｎ−ｆ”カッイルオキ
シ基、フェニル−ａ−ウンデカノイルオキシ基もしくは
フェニル−ｎ−ドデカノイルオキシ基、アルキルフェニ
ル基がアルカノイルオキシ基のω位に存在する３−もし
くは４−１好ましくは４−アルキルフェニル−塾−アル
カノイルオキシ基、例えば４−１１−ブチル−１４−＋
ａミーペンチル−１４−ｎへキシル−１４−ｎ−オクチ
ル−１４−Ｑ−デシル−もしくハ４−ｓｉ−１’デシル
フェニル−＋ａ−ブチリルオキシ基、−ｎ−ペンタノイ
ルオキシ基、−ｎ−ヘキサノイルオキシ基、−１１−オ
クタノイルオキシ基　＋、−ｆカッイルオキシ基もしく
は一翼一ドデカノイルオキ７基、ピレン基がアルカノイ
ルオキシ基のω位に存在するピレン−１−イル−ｎ−ア
ルカノイルオキシ基、例えばピレン−１−イル−ｎ−ブ
チリルオキシ基、ピレン−１−イル−ｎ−（ノナノイル
オキシ基、ピレン−１−４ルーｎ−ヘキサノイルオキシ
基、ピレン−１−イル−ｌ−オクタノイルオキシ基、ピ
レン−１−イル−ｎ−デカノイルオキシ基もしくはピレ
ン−１−イル−デカノイルオキシ基、又はアルキルピレ
ン−１−イル基がアルカノイルオキシ基のω位に存在す
る６−もしくは８−アルキルピレン−１−イル−ｎ−ア
ルカノイルオキシ基、例えば６−もしくは８−低級−ア
ルキルピレン−１−イル−ｎ−ブチリルオキシ基、例え
ば６−もしくは８−エチルピレン−１−イルーｎ−ｆｆ
リルオ争シ基、−ｎ−ペンタノイルオキシ基、−Ｚｍ−
ヘキサノイルオキシ基、−ｎ−オクタノイルオキシｆｉ
、−ｎ−デカノイルオキシ基もしくは−ｍ−デカノイル
オキシ基、もしくは、６−もしくは８−鳳一ノチルピレ
ンー１−イルーｎ−クチリルオキシ基、−ｎ−ペンタノ
イルオキシ基％−ｎ−ヘキサノイルオキシ基、−１１−
オクタノイルオキシ基、ｎ−デカノイルオキシ基もしく
は−−−ドデカノイルオキシ基、もしくは、６−もしく
は８−アルキルピレン−１−イル−ｎ−アルカノイルオ
キシ基、例えば６−４Ｌ＜は−８−ｗａ−ｆ”シル−１
−ｎ−ドデシル−１−１１−テトラデシル−１−１−ヘ
キサデシル−１もしくは６−もしくは８−ｎ−オクタデ
シルピレン−１−イル−ミーブチリルオキシ基、−Ｈ−
ｎノナノイルオキシ基、亀−ヘキサノイルオキシ基、亀
−オクタノイルオキシ基、−ｎ−デカノイルオキシ基も
しくは−ｎ−ドデカノイルオキシ基である。

芳香族環系により置換され九アルカノイルオ中シ基Ｒ１
又はＲ２は、好ましくは４−（４−ｎ−デシルフェニル
）−デカノイル基、４−（ピレン−１−イル）−！タノ
イル基、６−（ピレン−１−イル）−ヘキサノイル基、
８−（ピレン−１−イル）−オクｐノイルｉ、１０−（
ピレン−１−イル）−オクタノイル基、６−（６−又は
８−エチルピレン−１−イル）−オクタノイル基、６−
（６−又ｒｊ８−ｎ−ブチルピレンー１−イル）−ヘキ
サノール基、及び１Ｏ−（６−又はト」−オクタデシル
ビレ／−１−イル）−デカノイル基である。

アルケノイルオキシ基８．又は８□は、好オしくは９−
シス−ドデセニルオキシ基（ラウロレオイルオキシ基）
、９−シス−テトラデセノイルオキシ基（イリストレオ
イルオキシ基）、９−シスーヘキサデセノイルオ中７基
（）９ルミトレイノイルオキシ基）、６−シス−オクタ
デセライルオキシ基（Ｊ）ロセリノイルオキ７基）、６
−ドランスーオクタデセノイルオキシ４（（テロセライ
ゾノイルオキシ基）、９−シス−オクタデセノイルオキ
シ基（オレオイルオキシ基）、９−）う／スーオクタデ
セノイルオ牟シ基（エライジノイルオキシａｌｌ）又Ｆ
ｉ９−シスーエイコセノイル基（カドレイノイルオキシ
基）、さらに９−シス−１２−トランス−オクタジェノ
イルオキシ基（リノロイル基）、９−トランス−１２−
トランスーオクタデカノエノイルオキシ基（リノライゾ
ノイルオキシ基）、９−シス−１２−シス−オクタノエ
ノイルオキシ基（リルオイルオキシ基）、９−シス−１
１−トランス−１３−トランス−オクタデカトリエノイ
ルオキシ基（リルノイルオキシ基）、９−．１１−．１
３−．１５−オクタデカテトラエノイルオキシ基（）９
リナロイルオキシ基）、５−．１１−．１４−エイコサ
トリエノイルオキシ基、又は５−．８−．１１−．１４
−エイコサテトラエノイルオキシ基（アラキトノイルオ
キシ基）である。

炭ＩＡ原子数１〜７１１１ｔ−有する低級アルキル基８
４は、例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｎ
−プロピル基、イソブチル基又は麿−エチル基であって
、酸性基、例えばカルがキシル基もしくはスルホ基、１
１１基性基、例えばアミノ基、低級アルキルアミノ基、
例えばメチルアミノ基もしくはエチルアばノ基、ジ低級
アル午ルアミノ基、例工ばノメチルアｉノ基もしくはノ
エチルアミノ基、゛酸性及び環基性基、例えばアミノ基
がカルｌキシル基に対してα−位に存在するカルがキシ
ル基及びアミノ基、トリ低級アルキルアンモニオ基、例
えばトリメチル−もしくはトリエチルアンモニオ基、遊
離の、もしくは二価炭化水素基會介して例えばメチレン
基、エチレン基、エチリデン基、１．２−ｆロビレン基
もしくは２．２−７’ロビレン基を介して２個のエーテ
ル化されたヒドロキシル基が相互に結合していることが
できるエーテル化ヒドロキシル基、ハロダン、例えば塩
素もしくは臭素、低級アルコキシカルｌニル基、例えば
メトキシ−もしくはエトキシカルノニル基、又は低級ア
ルカンスルホニル基、例えばメタンスルホニル基により
置換されていることができる。

置換されたＩｉｔ索原子数１〜７個の低級アルキル基Ｒ
４は、好オしくはカルｌキシ低級アルキル基、例えばカ
ル−キシメチル基、２−カルボキシエチル基もしくは３
−カルＮｄ？シーｎ−グロビル基、アずノ低級アルキル
基、例えばアミツメチル基、２−アミノエチル基もしく
は３−アミノ−ｎ−プロピル基、低級アル中ルアミノ低
級アルキル基、肖えばメチルアミツメチル基もしくはメ
チルアミノエチル基、２−メチルアミノエチル基、もし
くは３−メチルアイノーＢ　−７’　ａピル基、ゾ低級
アルキルアｉノ低級アルキル基、例えばジメチルアミノ
メチル基もしくはジエチルアばツメチル基、　□２−ジ
メチルアｉノエチル基、もしくは３−ゾメチルアずノー
ｒｓ−７’ロピル基、ω−フイノーω−カルがキシ低級
アルキル基、例えば２−アイノー２−カル−キシエチル
基もしくは３−アミノ−３−カルがキシーｎ−ｆロビル
基、トリ低級アル中ルアンモニオ低級アルキル基、例え
ば２−トリメチル−もしくはセートリエチルアンモニオ
エチル基、もしくｔ′１３−）ジメチルアンモニオ−１
−′ｆロピル基もしくは３−トリエチルアンモニオ−１
−プロピル基、ヒドロキシ低級アルキル基、例えば２−
ヒドロキシエチル基もしく＄１２．３−ジヒドロキシプ
ロピル基、低級アルコキシ低級アルキル基、例えばエト
キシメチル基もしくはエトキシメチル基、２−メトキシ
−エチル基、もしくは３−メドキシーｎ−７’ロピル基
、低級アル中レンジオキシ低級アルキル基、例えば２．
３−エチレンノオキシ！ロピル基、もしくは２．３−（
２，２−！ロビレン）−ノオ中シグロビル基、又はハロ
ダン低級アルキル基、例えば塩化メチル基もしくは臭化
メチル基、２−クロａヱチル基４Ｌ＜ｔｉ２−ツロモエ
チル基、２−４しくは３−タクト１−！ロピル基、もし
くは２−もしくは３−ゾロモーｎ−ｆｏビル基である― 炭素原子数５〜１２個の炭水化物基Ｒ４は、伺えばアル
ピース又はケトースとして存在するペントース又はヘキ
ソースから誘導される天然単糖基である。

アルドースとして存在する（／ドースは、例えばＤ−り
一−ス、Ｄ−アラビノース、Ｄ−中シロース又はＤ−り
中ソースでるる。ケトースとして存在するペントースは
、例えばＤ−リブロース又はＤ−キシルロースである。

アルドースとして存在するヘキソースは、例えばＤ−ア
ロース、Ｄ−アルドロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マン
ノース、Ｄ−ガラクトース又はＤ−タロースである。ケ
トースとして存在するヘキソースは、例えばＤ−グルコ
ース、Ｄ−７ラクトース、Ｄ−ツルＩ−ス又はＤ−タガ
トースでらる。ヘキソースとしては、環状構造を有する
もの、例えばピラノース（アルドース）、例えばα−も
しくは／−Ｄ−グルコビラノースとして、又はフッノー
ス、例えばα−もしくはβ−〇−フラクト７ラノースと
して存在するものが好ましめ、ピラノシル基としては、
特に、１−又は６−位に存在するヒドロキシル基がホス
ファチジル基によジエステル化されているものが挙げら
れ、フラノシル基としては１−又は５位に存在するヒド
ロキシル基がホスファチジル基によジエステル化されて
いるものが挙げられる。

炭素原子数５〜１２個の炭水化物基としてはさらに１天
然二′ＩＩＩ類基、例えば、２個のヘキソースが結合し
九二種類基、例えば２個のアルピース、例えばＤ−グル
コースもしくはＤ−ガラクトースの縮合によって構成さ
れたもの、又は１個のアルドース例えばＤ−グルコース
と１個のケトース例えばフラクトースの縮合によって構
成されたものが挙げられる。２１１１のアルドースから
誘導され九二１１類、例えばラクトース又はアルドース
は、好ましくは、該当するピラノシル基の６−位に存在
するヒドロキシル基がホス７アチノル基によ）エステル
化されている。１個のアルドースと１個のケトースから
誘導された二ｍ１Ｉｌｌ１例えばナッヵロースは、好ま
しくはピラノシル基の６位又は７ラノシル基の１位に存
在するヒドロキシル基がホスファチゾル基によジエステ
ル化されている。

炭素原子数５〜１５個の炭水化物基にはさらに１単糖類
又は二種類から誘導された基が含まれ、これには、例え
ば、アルデヒド基及び／又は１個もしくは２個の末端ヒ
ドロキシル基がカルゲキシル基に酸化されているもの、
例えば好ましくは環状ラクトン基として存在するＤ−グ
ルコン酸基、Ｄ−グルカル酸基又はＤ−グルクロン酸基
が含まれる。さらに、単糖類又は二種類から誘導された
基には、アルデヒド基又はケトン基がヒドロキシ基に還
元されたもの、例えばイノシトール基、ンルビトール基
又はＤ−マンニトール基が含まれ、又ヒドロキシ基が水
素によ多置換され丸もの、例えばデソキシ塘、例えば２
−７′ツキクーＤ−リＳ　−ス、Ｌ−ツムノース４Ｌ＜
はＬ−７コース、又はアはノ酸によ多置換されたもの、
例えばアミノ糖、例えばＤ−ゲルコサイン又はＤ−、ｆ
ラクトサミンが含まれる。

同様に炭水化物基Ｒ４は、前記の琳４１Ｉ類又は二種類
ｔ−強酸化剤、例えば過ヨウ素酸により変換することに
より得られる開裂生成物であってもよい。

ステロイド基Ｒ４としては、例えばステロイド構造の３
位に存在するヒドロキシル基がホスファチノル基により
エステル化されているステロール基が挙げられる。

ステロール基には、例えばラノステロール、シトステロ
ール、コグロスタノール、コレスタ／　−ル、グリココ
ール酸、エルｆステロール又ハスチグマステロール、特
にコレステロールがｔすれる。

Ｒ４がステロイド基を埃わす場合、Ｒ１及びＲ２はヒド
ロキシル基でありＲ３が水素であるのが好ましい。

脂肪酸としては、例えば炭素原子数４〜２６個、好まし
くは１０〜２０個の飽和又は不飽和脂肪族カルがン酸が
挙げられる。

飽和脂肪族カル−ン酸には、例えば炭ｆＩｇ１ｊｌ［十
数’１０〜２０個の直−脂肪族カルｚ　７ｃｔｌ、例え
ば力！リン酸（Ｃ−１０）、ウンデカン酸（Ｃ−１１）
、ラウリン酸（Ｃ−１２）、トリデカン酸（Ｃ−１３）
、ｉリスチン虚（Ｃ−１４）、ペンタデカン酸（Ｃ−１
５）、ツヤルミチン酸（Ｃ−１６）、マルガリｙｄｌ（
Ｃ−１７）、ステアリ／酸（Ｃ−１８）、ノナデカンｗ
（Ｃ−１９）又はアラキン酸（Ｃ−２０）が含まれる。

飽和脂肪族カルがン酸には、例えば炭素原子数１０〜２
０個の分枝鎖脂肪族カルがン酸、例えばイノミリスチン
＃！（Ｃ−１４）、イソ／９ルミチン１１（Ｃ−１６）
、イソメｆ”’ｒりン＄（Ｃ−１８）が含まれる。

炭素原子数１０〜２０個の不飽和脂肪族カルＩン酸は、
例えば偶数個の炭素原子と５個以下の二１１結合を有し
てお９、これには例えばぼりストレインｒＩＩ＆（Ｃ−
１４）、Ａｋ　ミ）　レイｙ＃Ｉ！（Ｃ−１６）、ノ９
ルｉタレイジンｒＩＲ（Ｃ−１６）、（）ロセリン酸（
Ｃ−１６）、オレイン酸（Ｃ−１８）、エライゾン＃（
Ｃ−１８）、／４＊ニア＃ｔＣＣ−１８＞、リノールｇ
ｌ（Ｃ−１８）、リノールエライジン酸（Ｃ−１８）、
リルン＃（Ｃ−１８）、シスー−エイコセンｆｉ、１１
．１４−エイコナノエン酸、１１−．１４−．１７−ニ
イコナトリエン酸、アラキドン酸、又は５−．８−．１
１−．１４−。

１７−ニイコサペンタエ／ｒａがある。

脂肪酸は、解離していない形、又は塩の形で、例えばア
ルカリ金属塩、例えばナトリウム塩又はカリウム塩とし
て存在し得る。

適当な追加の脂質は、例えばｍが０又は１であり、Ｒ１
及びＲ２が相互に独立に、それぞれ炭素原子数１０〜２
０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基又はア
ルケニルオキシ基、又は炭素原子ｆｉｌＯ〜５０個のア
シルオキシ基でｈＬｍ。

が水素であり、そしてＲ４が水素又は炭ＩＡ原子数１〜
７個の低級アルキル基、炭素原子ａ５〜１２個の炭水化
物基、又はステロイド基である式（４）の脂質である。

Ｒ，、Ｒ２及びＲ３は前述の意味を有する。１４にはそ
のほかにトリ低級アルキルアンモニオ基、例えばトリメ
チルアンモニオにょｊｌｆｌｌｌ換され走低級アルキル
基、例えば２−トリメチルアンモニオエチル基（コリニ
ル漏）がある。

適当な追加の脂質には、例えば、８．及びＲ２がアシル
オキシ基であり、札が水素であり、そしてＲ４が２−ト
リメチルアンモニオエチル基又は２−アミノエチル基で
るる式■の脂質がある。

これらの追加の脂質は、Ｒ４が２−トリメチルアンモニ
オエチル基である場合には天然レシチン、例えば卵−レ
シチン又は大豆レシチンでＴｏシ、Ｒ４が２−アミノエ
チル基でおる場合には天然ケファリン、例えば卵−ケフ
ァリン又は大豆ケファリンである。

このほかに、追加の脂質として、式（８）の合成レシチ
ン類（Ｒ４−２−）リメチルアンモニオエチル基）及び
合成ケファリン類（Ｒ４−２−７２ノエチル基）を挙げ
ることができ、これらは好ましくは、８．及びＢ２が同
一のアシルオキシ基、例えばラフロイルオキシ基、オレ
オイルオキシ基、リスイルキシ基、リストイルキシ基も
しくはアラキノイルオキシ基ｔ−表わす例えばジラウロ
イル−、シミリストイル−、ジ／譬ルｉトイルー、ジス
テアロイル−、ノアラキノイルー、ノリルオイルー、ノ
リノイル−、ノリルオイル−１もしくはノアラキノイル
レシチンもしくは一ケファリン、Ｒ１及びＲ２が異るア
シルオキシ基、例えばＲ４がノリヘトイルオキシ基でＲ
２がオレオイルオキシ基である例えば１−ｉ４ルｉトイ
ルー２−オレオイル−レシチンもしくは−）ｊｙアリン
、ａ　及Ｕｎ２が同一のアルコキシ基、例えばテトラデ
シルオ中シ基もしくはヘキサデシルオキシ基である例え
ばジテトラデシルーもしくはジヘキサデシルーレシチン
もしくは一ケファリン、Ｒ４がアルケニル基でありＲ２
がアシルオキシ基である例えばグッズマｏ−）ｆノ（Ｒ
４−）　！ｊ　メチルアンモニオエチル基）、又はＲ２
がアシルオキシ基、例えば（リストイルキシ基もしくは
ノタルミトイルオキシ基であシＲ２がヒドロキシル基で
ある例えば天然もしくは合成リソレシチンもしくはリソ
ケ７アリン、例えばｌ−ミリストイル−もしくは１−−
リペトイルリルシチンもしくは一ケファリンがＴｏＤ、
これらにおいてＲ５は水素である。

適当な追加の脂質にはさらに、ｍが１でありＲ４がアル
ケニル基であり、Ｒ２がアジルアイノ基で６、ｐ、Ｒ，
が水嵩であｐｌそしてＲ４が２−トリメチルアンモニオ
エチル基（コリン基）である代休）の脂質がある。この
脂質はスピンｆ（ニリンとして知られている。

このほかの適当な追加の脂質は、リソレジチル類似体、
例えばｌ−ラウロイル−１，３−グＯ／豐ンジオールー
３−ホスホリルコリン、モノクリセリド、例えばモノオ
レインもしくはモノイリスチン、セレ！ロミド、ガング
リオシド、又は３位に遊離のもしくはエーテル化された
ホスホリル基又はホスホニル基を有しないグリセリドで
ある。このグリセリドには例えば前記のアシル基又はア
ルケニル基を伴うジアシルグリセリド又はｌ−アルケニ
ル−１−ヒドロキシ−２−アシルグリセリドであって、
３位のヒドロキシ基が前記の炭水化物基、例えばガラク
トシル基によりエーテル化され゛　たもの、例えばモノ
ガラクトシルグリセロールがある・ 追加の脂質にはさらに、細胞膜に含まれておプ、非極性
有機溶媒、例えばクロロホルムにのみ溶解する中性脂質
がおる。中性脂質には、例えばステロイド、例えばエス
トラジオール又はステロール、？ＩＪ、ｔｔｌｆコレス
プロール、β−シトステロール、デスモスチロール、７
−ケドーコレステロールモシくハβ−コレステロール、
脂溶性ピタはン、例工ばピタｉンム、例えばピタｔンム
監　もしくはム富、ビタミンＥ１　ビタミンに１例えば
ビタミンＫｓ　　４しくはビタミンに！、ビタミンＤ３
もしくはＤ畠、又は任意の蛋白質が含まれる。　　　　
以下余白好ましくは、水性分散体には、ｍが１であシ；
Ｒ１がアルキル基、例えばｎ−ドデシル基（ラウリル基
）、ｎ−トリデシル基、ｎ−テトラデシル基（ミリスチ
ル基）、ｎ−ペンタデシル基、ｎ−ヘキサデシル基（セ
チル基）、ｎ−へ！タデシル基もしくはｎ−オクタデシ
ル基（ステアリル基）、アルコキシ基、例えばｎ−ドデ
シルオキシ基（ラウリルオキシ基）％　ｎ−テトラデシ
ルオキシ基（ミリスチルオキシ基）、ｎ−ヘキサデシル
オキシ基（セチルオキシ基）もしくはｎ−オクタデシル
オキシ基（ステアリルオキシ基）、又はアシルオキシ基
、例えばラウロイルオキシ基、ばリストイルオキシ基、
Ｉ譬ルｉトイルオキシ基もしくはステアロイルオキシ基
であＦｔ　：　ｆｔ２が水素又はヒドロキシ基であ、９
：Ｒ，が水素又は低級アルキル基、例えばメチル基であ
シ：そしてＲ４は水素、低級アルキル基、例えばメチル
基もしくはエチル基、酸性基及び塩基性基例えばカルゲ
キシル基及びアイノ基により置換された低級アルキル基
、例えばω−アｉノーω−カルＩキシ低級アルキル基、
例えば２−アミノ−２−カル−キシエチル基もしくは３
−アミノ−３−カルＸｔ１シーｍ−ｆロピル基、ヒドロ
キシ低級アルキル基、例えば２−ヒドロキシエチル基モ
しくは２．３−ヒドロキシゾロビル基、低級アルキレン
ジオキシ低級アルキル基、例えば２．３−エチレンジオ
キシプロピル基モジくは２．３−（２，２−プロピレン
）−ジオキシグロビル基、ハロダン化低級アルキル基、
例えば２−クロロ−もしくは２−ブロモエテル基、炭素
原子数５〜１２個の炭水化物基、例えばイノシトール、
又はステロイド基、例えばステロール、例えばコレステ
ロールである式（Ａ）の脂質、及びＲ４及びＲ２がアシ
ルオキシ基、例えばラウロイルオキシ基、ミリストイル
オキシ基、ノｆルミトイルオキシ基又はステアロイルオ
キシ基であり：Ｒｓが水素であり：そしてＲ４が２−ト
リメチルアンモニオエチル基モしくは２−アミノエチル
基である式（Ａ）で示される追加の脂質を含有せしめる
。又、水性分散体には、Ｒ′１及びＲ２がアシルオキシ
基、例えばラウロイルオキシ基、きりストイルオキシ基
、ノヤルイトイルオキシ基もしくはステアロイルオキシ
基でｉｂ、Ｒ３が水素であり、セしてＲ４が水素である
式（Ａ）の脂質、及び場合によっては、Ｒ４及びＲ２が
アシルオキシ基、例えばラウロイルオキシ基、ミリスト
イルオキシ基、ノ臂ルミトイルオキシ基又はステアロイ
ルオキシ基であり、Ｒ５が水素であり、そしてＲ４−１
）Ｒ２−）　ＩＪメチル了ンモニオエｆ　ル基、２−７
ミノエチル基、酸性基及び塩基性基例えばカルダキシ基
及び了きノ基で置換された低級アルキル基、例えばω−
アイノーω−カルがキシ低級アルキル基、例えば２−ア
ミノ−２−カル−キシエチル基もしくは３−アンノー３
−カルゲキシーｎ−プロピル基、又は炭素原子数５〜１
２個の炭水化物基、例えばイノシトール基、又はモノグ
リセリド例えばモノオレインもしくはモノミリスチン、
又はステロール、例えばコレステロールである式（Ａ）
で示される追加の脂質を含有せしめることができる。

好ましくは、水性媒体にはトリホスファチノン酸、例え
は天然リソホスファチジン酸、例えば卵−りソホｘ７ア
チジン酸、もしくは合成リソホスファチジン酸、例えば
１−ラウロイル−リソホスファチジン酸、ｌ−ミリスト
イルリンホスファチジン酸もしくは１−ｉ４ルミトイル
リソホスファチジン酸、リソホスファチジルセリン、例
えば天然リソホスファチノルセリン、例えば牛脳リンホ
スファチジルセリン、もしくは合成リンホスファチジル
セリン、例えばｌ−ミリストイルリソホスファチジル七
リンもしくは１−、量ルきトイルリソホスファチノルセ
リン、リソホスファチジルグリセリン、又はリソホスフ
ァチジルイノシトール、そしてさらに、レシチン、例え
ば天然レシチン、例えば卵−レシチン、同一のアシルオ
キシ基を有するレシチン、例えばシミリストイルレシチ
ン４しくはジ／豐ルミトイルレシチン、異なるアシルオ
キシ基を有するレシチン、例えば１−／４ルミトイルー
２−オレオイルレシチン、又はさらにケファリン、例え
ば天然ケファリン、例えば卵−ケファリン、もしくは異
なるアシルオキシ基を有するケファリン、例ＪＪｉ’１
−／＋ルミトイルー２−オレオイルケファリンを含有せ
しめる。

好ましくは水性分散体には、天然ホスファチジン酸、例
えば卵−ホスファチジン酸、合成ホスファチジン酸、例
えばジラウロイルホスファチジン酸、ノミリストイルホ
スファチシン酸、ジノ４ルミトイルホスフアチジン酸も
しくは１−／譬ルミトイルー２−オレオイルホスファチ
ジン酸、そして場合によってはさらに、レシチン、例え
ば天然レシチン、例Ｌｔｄ卵−シーレシチン一のアシル
オキシ基を有するレシチン、例えばノミリストイルレシ
チンもしくはジ／４ルミトイルレシチン、もしくは異な
るアシルオキシ基を有するレシチン、例えば１−パルミ
トイル−２−オレオイルレシチン、又はケファリン、例
えば天然ケファリン、例えば卵−ケファリン、もしくは
異なるアシルオキシ基を有するケファリン、例えば１−
ノ譬ルｉトイルー２−オレオイルケファリン、又はホス
ファチゾルセリン、例えば天然ホスファチジルセリン、
例えば牛脳ホスファチジルセリン、もしくは合成ホスフ
ァチジルセリン、例えばジ／４′ルミトイルホスファチ
ジル七リン、モノグリセリド、例えばモノオレインもし
くはモノミリスチン又はステロール、例えばコレステロ
ールを含有せしめることができる。

率層脂質顆粒を製造するために、まず脂質成分の均質層
ｔ−調製する。均質層の調製は、それ自体公知の方法に
より行うことができ、この明細書において、「脂質成分
の均質層の―製」の項に詳細に記載する。

均質層を水性相に分散せしめ、そして次に１種類のみの
脂質成分、例えば純ホスファチジン酸を分散せしめた水
性相のＰＨ１−約１２１で、好ましくは約９〜ｌｉｔで
上昇せしめる。この操作は、例えば、斑点法又は−メー
タによりμ値を監視しながら、生理的に許容される塩基
性溶液、例えば約０．０１〜０．２Ｎ、好ましくは約０
．ＩＮの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム希水醇液
を添加することにより行う、複数の脂質成分、例えばホ
スファチジン酸及びレシチンを分散せしめた水性相にお
いては、μ値は約８〜９に上昇せしめれば十分である。

この−範囲は、−の同時的調整を行いながら塩基水溶液
、例えば水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウムの糖
水溶液を添加することにより、又は緩衝液、例えば−７
〜８の燐酸緩衝液を添加することにより達成することが
できる。

好ましい態様においては、脂質成分の均質層を、７より
高い−を有する水性相、例えば生理的に許容される塩基
性溶液、例えば約０．０１〜０．２Ｎ。

特に０．ＩＮの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム希
水溶液に分散せしめる。１つの脂質成分、例えば純ホス
ファチジン酸は約１２以下、好ましくは約９〜１１のＰ
Ｈを有する水性相に分散せしめる。

複数の脂質成分、例えばホスファチジン酸及びレシチン
は約８〜９の−を有する水性相に分散せしめる。

方法（ｂ） ｍが０又は１であり、基Ｒ１及びＲ２の内の１つが水素
、ヒドロキシル基、又は炭素原子数１〜４個の低級アル
キル基であって他方の基がそれぞれ炭素原子数１０〜２
０個を有するアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基
もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜５
０個を有するアシルオキシ基であり、Ｒ５が水素であり
、そしてＲ４がアンモニ★　基により置換され九低級ア
ルキル基である式（Ａ）の脂質において％Ｒ，Ｉ及びＲ
２＃′ｉ方法（龜）においてすでに記載した意味を有す
る。

アンモニオ基により置換された低級アルキル基Ｒ４は、
例えば、トリ低級アルキルアンモニオ基、例えばトリメ
チル−又はトリエチルアンモニオ基により置換された低
級アルキル基、例えば２−トリメチルアンモニオエチル
基又は２−　）！Ｊエチルアンモニオエテル基である。

ｍが０又はｌであり、Ｒ１及びＲ２が相互に独立に、そ
れぞれ炭素原子数１０〜２０個のアルキル基、アルケニ
ル基、アルコキシ基、もしくはアルケニルオキシ基、又
は炭素原子数１０〜５ｏの７シルオキシ基であり、Ｒ５
が水素であり、そしてＲ４がアンモニオ低級アルキルア
ンモニオ基により置換され九低級アルキル基である式（
Ａ）の脂質において、Ｒ１及びＲ２は好ましくは方法（
ａ）において詳細に記載し九特定の意味【有する。

アンモニオ低級アルキルアンモニオ基により置換された
低級アルキル基は、例えば、２−（Ｎ。

Ｎ−）低級アルキル−Ｎ　−（２−Ｎ’　、　Ｎ’　、
　Ｎ’　−トリ低級アルキルアンモニオエチル）−了ン
モニオ〕−エチル基、例えば２−（Ｎ、Ｎ−ジメチル−
Ｎ　−（２−Ｎ’　、　Ｎ’　、　Ｎ’　−）リメチル
アンモニオエチル）−アンモニオツーエチル基テアル。

適当な追加の脂質は、方法（ａ）において詳細に記載し
た追加の脂質である。

好ましくは、水性分散体には、ｍが１であり、Ｒ１がア
シルオキシ基、例えばラウロイルオキシ基、ミリストイ
ルオキシ基、ノｆルミトイルオキシ基又はステアロイル
オキシ基であり、Ｒ２がヒドロキシ基であり、Ｒ３が水
素であり、そしてＲ４が２−トリメチルアンモニオエチ
ル基である成因の脂質、並びにＲ１及びＲ２がアシルオ
キシ基、例えばラウロイルオキシ基、ミリストイルオキ
シ基、ノｆルミトイルオキシ基又はステアロイルオキシ
基で６９、Ｒ３が水素であり、そしてＲ４が２−アミノ
エチル基又は２−トリメチルアンモニオエチル基である
式（Ａ）の適当な追加の脂質を含有せしめる。又、水性
分散体には好ましくは、Ｒ４及びＲ２が了シルオキシ基
、例えばラウロイルオキシ基、ミリストイルオキシ基、
パルミトイルオキシ基、又はステアロイルオキシ基であ
り、Ｒ５が水素であり、そしてＲ４が２−（Ｎ、Ｎ−ジ
メチル−Ｎ−（２−Ｎ’、Ｎ’。

Ｎ’−ト９）チルアンモニオエチル）−アンモニオ〕−
エチル基である式（Ａ）の脂質、並びに場合によっては
％　Ｒ１及びＲ２がアシルオキシ基、例えばラウロイル
オキシ基、ミリストイルオキシ基％／４４？トイルオキ
シ基又はステアロイルオキシ基であり、Ｒ５が水素であ
シ、ナしてＲ４が２−アはノエチル基又は２−トリメチ
ルアンモニオエチル基で６る式（Ａ）の追加の脂質を含
有せしめることができる。

好ましくは、水性分散体にはりソホス７丁テジルコリン
（リンレシチン）及び天然レシチン、例えば卵−レシチ
ンを含有せしめる。好ましくは、水性分散体にはホスフ
ァチジル−２−（Ｎ、Ｎ−ツメチル−Ｎ　−（２−Ｎ’
　、　Ｎ’　、　Ｎ’−トリエチルアンモニオエチル）
−アンモニオ〕−エチルクロリド、及び場合によっては
天然レシチン、例えば卵−レシチンを含有せしめる。

単層脂質顆粒を製造するために、まず、脂質成分、例え
ばリソレシチン又はホスファチジル−２−（Ｎ、Ｎ−ジ
メチル−Ｎ　−（２−Ｎ’　、　Ｎ’　、　Ｎ’−）Ｉ
Ｊメチルアンモニオエチル）−アンモニオ〕−エチルク
ロリドの均質層を調製する。

均質層の調製はそれ自体公知の方法によシ行うことがで
き、この明細書の「脂質成分の均質層の調製」の項で詳
細に記載する。

均質層【水性相に分散せしめ、そして、例えば斑点法又
は−メータによりμ値を調整しながら、−を約１又はそ
れより低く下げる。この操作は例えば生理的に許容され
る酸、例えば鉱酸の希水溶液、例えば硫酸、塩酸又は燐
酸の希水溶液を添加することによシ行う。

好ましい態様においては、脂質成分の均質層を、−約１
又はそれよシ低い範囲の水性相、例えば鉱酸含水溶液、
例えば硫酸、塩酸又は燐酸の希水溶液に、−億を同時的
Ｋｌｌ整しながら添加する。

次に行う水性相の中和は、方法（ａ）において−億ｔ−
５より低くした場合に必須である。この操作は、−値の
上昇又は低下の直後に塩基性又は酸性条件下で活性物質
及び／又は脂質顆粒が破壊されるのを防止する丸めに行
う。塩基性化し九水性相は、適当な生理的に許容される
酸又は緩衝液、例えば声７〜８の燐績緩衝液によシ中和
する。適当な酸としては、例えば前記の鉱酸水浩液及び
弱有横酸、例えば蟻酸、又は酢酸が挙げられる。酸性水
性相は、塩基性水溶液、例えば水酸化す）　ＩＪウム又
は水酸化カリウムの希水溶液を添加することにより中和
する。中和はμ値の同時的調整の下で行う。

脂質は、水性相中に７０−より多くまでの濃度で分散せ
しめる。濃度範囲は約ｌｑｋ〜約２０−とするのが好ま
しい。室温又はそれより高い温度、例えば約６０℃まで
の温度で行うのが好都合である。封入すべき活性物質の
感受性の丸めに必要がある場合には、冷却下、そして場
合によっては不活性気体雰囲気下、例えば窪素雰囲気下
で行う。

方法（＆）及び方法（ｂ）のいずれにおいても、単層脂
質顆粒の形成は自発的Ｋ（自発的顆粒形成）、す々わち
外部から追加のエネルギーを加える仁となく、そして大
きな速度で行われる・ 方法（ａ）及び（ｂ）により得られた単層脂質顆粒は水
性相中で比較的大きな安定性を有する０例えば、水性相
中に存在する卵−ホスファチジン酸、又は卵−ホスファ
チジン酸と卵−レシチンとから成る単層脂質顆粒は、４
℃にて１４日以上置いても安定に維持される。この発明
の方法に従りて製造された脂質顆粒を有する水性相は、
日−ロツノ臂特許出験第００６５２９２号に記載されて
いる方法により貯蔵安定圧される。

単層脂質顆粒の形成と水性相中におけるその量は、七九
自体公知の方法により、種々の方法、例えば電子顕微鏡
による視覚的観察、分析用超遠心分子ｌｉＫよる質量測
定、そして特にス（クトル法、例えば核共鳴スペクトル
（Ｈ％　Ｃ及び　Ｐ）に基いて測定することができる０
例えば、核共鳴ス（クトルの鋭いシグナルは小形単層脂
質顆粒の形成と関連する。系における小形単層脂質顆粒
の比率はシグナルの強度から算出することができる。

陽子核共鳴ス（クトルにおいて、ホスファチジン酸から
形成された小形単層脂質顆粒の場合−＝１、２８　ｐＰ
ｍにおける鋭いメチレンシグナルとａ−０、８９ｐｐｍ
における鋭いメチルシグナルが特異的である。ホスファ
チジン酸及びレシチンから形成された小形単層脂質顆粒
からは、同様にメチレンシグナル及びメチルシグナルで
あるδ＝　１．２８ｐｐｍ及び０．８９　ｐｐｔｎのシ
グナルと、さらにレシチンのトリメチルアンモニオ４基
に帰属するδ＝３、２３　ｐｐｍのメチルシグナルが生
ずる。

形成された単層脂質顆粒の大きさは、巷に脂質成分の構
造、脂質成分の混合比、これらの脂質成分の水性相中で
の１１度、及び封入すべき活性物質の量と構造に依存す
る。従って、例えば、水性相中の脂質成分の濃度を変え
ることによって、高い比率で小形単層脂質顆粒又は大形
単層脂質顆粒を製造することができる０例えば、分散相
に卯−ホスファジノンａｉ’を添加することにょや小形
単層脂質顆粒（ＫＵＬ　）の比率を高めることができる
。又、分散相中の大形単層脂質顆粒（ＧＵＬ　）の比率
は、塩、例えばＮ畠Ｃｔ又はＫＣ１’、−添加すること
によシ高めることができる。例えばホスファチジン酸、
又はホスファチジン酸とレシチンとから形成され九ＫＵ
Ｌは約２００〜６００Ｘの直径１有する。このような大
きさを有するＫＵＬの封入容量は加えた脂質成分の１モ
ル当１）約０５〜ｌｌである。

ＫＵＬの他に大形単層脂質顆粒（ＧＵＬ−直径約５０．
０００Ｘ以下）も形成される。このものは加え九脂質成
分１モル当たりより大きな封入容量を有し、この丸め、
より大きな収率で封入するのに適し、そして容積の大き
い材量、例えばウィルス、細菌又は細胞６管を封入する
のに適する。

ＧＵＬからＫＵＬの分離は、常用の分離法、例えばグル
濾過法、例えばセファロース４Ｂｔ−担体として使用す
るグル濾過法、又は１６０，０００　　ｙの超遠心によ
るＧＵＬの沈降によシ行うことができる。

例えば、前記の重力場において数時間、例えば約３時間
遠心分離することによりＧＵＬが沈降し、他方ＫＵＬは
分散したｉｔであり、デカントにより取り出すことがで
きる。

さらに、ｒルｐ過により、水性相中に存在する直径が６
００１よシ大きいすべての脂質顆粒、例えばＧＵＬ又は
多層脂質顆粒、並びに封入されていない活性物及び残存
し分散している脂質含分離し、そして大きさが比較的均
一なＫＵＬ区分を伴う水性相を得ることができる。

この発明の脂質顆粒（ＫＵＬ及びＧＵＬ　’）は、適当
な担体系であって、この担体系は親脂性物質、例えば脂
溶性色素の水性相中への可溶化、加水分解感受性化合物
、例えばプロスタグランジンの安定化、害虫駆除剤の封
入、例えばジクロロホスの活性スペクトルの変更、食品
添加物の封入、例えばビタミンもしくは色素の吸収性を
変えることを目的とする場合、又は封入された活性物質
、例えば酵素、抗体、ホルモン、遺伝子、ウィルス、ビ
タミンもしくは細胞器官の培養細胞への導入に使用され
る。

活性物賞金封入し九この発明の脂質顆粒を含有する水性
相は投薬系を構成し、場合によりては、例えば超遠心分
離によシ顆粒の濃縮又は分離を行った後、経口（ｐ、ｏ
　）投与、非経口（静脈内、筋肉内、もしくは腹腔内）
投与、又は局所投与のための医療目的に適する。

経口投与において、脂質顆粒に基礎を置く投薬系により
、消化管中で不安定な活性物質例えばインスリンは保鰻
され、又はその吸収が改善される。

経口投与のためには、脂質微粒含有水性相は、医薬とし
て許容される希釈剤もしくは担体、又は常用の添加剤、
例えば色素もしくは嗜好剤と混合して、シロッｌ又はカ
ブ七ルの形で投与することができる。

非経口投与の場合、脂質顆粒に基礎を置く投薬系により
、例えばデスフェリオキサミン〔グイルメッテ（Ｇｕｉ
１ｍ＠ｔ１ｍ　）　Ｒ，Ａ等、５％ず＊　８＠１．２２
−（４）、３１３〜３２０．１９７８年〕又はｒンタマ
イシン〔シェルド（８ｅｈ＠１ｄ　）　ＷｏＭ、等、Ｃ
１１ｎ、　Ｒｓｓ、　２６．４１．５９Ａ、１９７８年
〕の体内滞留時間が延長される。同様に、封入されたキ
レート剤、例えばＥＤＴＡ　（エチレンシアばンテトラ
酢酸）の体内滞留時間が長びきこれにより、キレート形
成により、特に肝臓、牌臓、又は腎臓から重金属を除去
することができる〔ラーマン（Ｒａｈｍａｎｎ　）等、
８ｃｉ＠ｎｅ＊、Ｖａｔ　１８０．３００〜３０２．１
９７３年、及びＪ、　Ｌａｂ、　ＣｌＩｎ、　Ｍ＠４゜
６４０〜６４７．１９７４年〕。脂質顆粒に基礎を置く
投薬法により活性物質を心筋中に濃縮する仁とができる
（ランデスマン（ＬａｔＬｄ＊ａｍａｔ＋ｎ）等、Ｓｃ
ｉ＠ｎｃ＠Ｖｏ１．１９８．７３７〜７３８．１９７７
年１゜抗炎症作用剤、例えばコーチゾル（Ｎａｔｕｒ・
２７１１４５６４３．３７２〜７３．１９７８年）、又
はプロテアーゼ阻害剤（Ａｎａｌ、　Ｂｌｏａｈ＠ｍ、
　８９、轟２．４００〜０７．１９７８年）を関節液中
に、静細胞剤を腫瘍組織中に［Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒ＠ａ
ｔｍ＠ｎｔＲ・マｌ＠Ｗ１８．２７〜５０．１９８１年
のカイエ（Ｋａｙ・）ＳＬ、Ｂ、の総説、及びそこで引
用されている４つの文献］濃縮することができる。ガン
治療における多くの化学療法剤は、それを脂質顆粒に封
入して投与した場合、毒性がより少なくなり、さらに体
に対して穏和になる６例えば脂質顆粒に封入された了り
チノマイシンＤ〔ラーマン（Ｒａｈｍａｎ　　）等、　
Ｐｒｏｃ＠＠ｄｉｎｇ＠　ｏｆ　　ｔｈ＠　８ｏａｉｅ
ｔｙｆｏｒ　Ｅｘｐｒｉｍ＠ｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ
、及びＭ＠ｄｉｃｌｎｓ１４６．１１７３〜１１７６．
１９７４年〕、メントレキセート〔レゾ−マン（Ｌ・虐
ｓｒｍａｎｎ　）Ｌ、　Ｄ、等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ
、　Ａｅａｄ、　Ｓｃｉ、　７１．４７．４０８９〜９
３．１９８ｏ−年〕、ビンブラスチン、グウノマイシン
又はシトシンアラビノシド［ｊニーレンジ−ベン（Ｍｆ
ｆｉｈｌ＠５ｓｓｉ＊ｐ＠ｎ　）等−Ｃａｎｃ＠ｒＲ＠
ｍ、　４１、Ａ５．１６０２〜０７．１９８１年〕がそ
うである。脂質顆粒は、活性成分、例えば酵素、ペプチ
ドホルモン、遺伝子又はウィルスの生体細胞の細胞質中
への導入に、例えばアス・ヤライナーゼ（Ｊ、　Ｌｉｐ
ｉｄ　Ｒ＠ｓ＠ａｒｃｈｓ　Ｖｏｌ　　１９．１９７８
年、２８９〜３０３中のフィンケルスタイン（Ｆ１ｎｋ
＊ｌｓｔ＠ｉｎ　）　Ｍ及びワイスマン（Ｗｅｉｓｍａ
ｎｎ）Ｇ、の＆Ｍｆｉ　）　、アミログルコンダーゼ〔
ブレボリアジス（Ｇｒ＠ｇｏｒ１ａｄｌｓ　）　Ｇ、及
びりｖ　ｙ　（Ｒｙｍａｎ）８、　Ｅ、　、Ｅｕｒ、　
Ｊ、　Ｂ１ｏｃｈ＠ｍ、　２４（１９７２年）、４８１
〜４９１〕、又はニューロミニダーゼ〔ブレボリアジス
等、Ｂｌｏａｈ書ｍ、　Ｊ、　（１９７４年）１４０．
２３２〜３３０〕の導入に、特異的識別分子、例えば種
々の標的細胞に選択的に導入するためのモノクローン抗
体を固定するために〔レーゼルマン（Ｌ＠ｓｓｒｍａｎ
ｎ　）等、Ｎａｔｕｒｅ　２９２（５８２９）、２２６
〜２２Ｆ３．１９８１年〕、例えばリーン。

マニアに対する接種の際のアジ、パントトシて免疫刺激
のためＫ〔二、−（Ｎ・ｗ　）　Ｒ，Ｒ，Ｃ，等Ｎａｔ
ｕｒｅ　２７２（５６４８）５５〜５６．１９７８年〕
、又は、例えば炎症を起した組織における温度の上昇、
又は−値の変化のごとき信号によシ活性物質の遊離ｔＳ
導するために使用される。非経口投与のために、濃縮し
た又は分離した脂質顆粒を、適当な担体液、例えば殺菌
した蒸留水又は生理的食塩水溶液中に懸濁することもで
きる。

脂質成分の均質層の調製 脂質成分の均質層の調製は、それ自体公知の方法により
行うことができる０例えば、まず、式（Ａ）の脂質又は
脂質混合物、例えば純粋な卵−ホスファチジン酸、又は
卵−ホスファチジン酸と卵−レシチンとの混合物を、場
合によっては、脂質顆粒の形成の際に脂質層に封入され
る親脂性活性物質、例えば蛋白質と共に、有機溶剤中に
溶解する。好ましくは真空中、又は不活性気体、例えば
窒素の通気によシ有機溶材を除去することによシ脂質成
分の均質層を得る。

溶剤の選択は、それに溶解する脂質成分の溶解度に依存
して行う、適当な溶剤としては、例えば置換されていな
い又は置換されている、例えばハロガン化され友、脂肪
族の、環状脂肪族の、芳香族の又は芳香族−脂肪族の炭
化水素、例えばベンゼン、トルエン、塩化メチレン、モ
ジくはクロロホルム、アルコール、例えばメタノールも
しくはエタノール、低級アルカンカルゲン酸エステル、
例えば酢酸エチル、エーテル、例えばノエチルエーテル
、ジオキサンもしくはテトラヒドロフラン、又はこれら
の溶剤の混合物を挙げることができる。

前記し九脂質は公知のものであり、又はそれが新規のも
のである場合には、ナイ）　（Ｋｎｌｇｈｔ　）Ｃ，Ｇ
、の標準的方法（Ｌｉｐｏｓｏｍ＊ａｓ　ＥＬｓｓｖｉ
ｓｒ１９８１年、第３章）中に記載されている処方に従
ってそれ自体公知の方法によ）製造することができる。

記載したすべての脂質は、水性分散体中で光学的に活性
な誘導体又はラセミ体として存在し得る０次に例により
この発明の詳細な説明するが、これによりこの発明の範
囲を限定するものではない、温ｆは℃で表わし、混合比
は容量比である。

例１゜ （ａ）　　クロロホルム／メタノール混合液（２：１）
２０ＪＬＺＫｌ、ｐの卵−ホスファチジン酸を溶解し、
そして真空条件下ロータリー蒸発装置で溶剤を蒸発せし
める。膜状の残渣管、５分間攪拌しながら２０１ノの蒸
留水に分散せしめ、−を約３に調整する。次に、単層脂
質顆粒音形成するために、−メーターで監視しながら室
温において、−が１１になるまで分散相に０．ＩＮ水酸
化ナトリウム溶液【加える０次に、０．１ＮＨＣｊｔ−
添加することによｐ水性相のｐ）１ｔ−１１から約７に
調整する。こうして薄乳白色ｔ−有する水性相を得る。

形成された単層脂質顆粒は電子顕微鏡で観察することが
できる。次に、脂質頴粒分散体を常用の冷凍分離法（凍
結分別法）にかける。直径によって次のように区別され
る単層脂質顆粒の主たる２種類の集団が得られる。すな
わち、 １、小形単層脂質顆粒（ＫＵＬ　）　：直径約２００〜
６００１．及び ２、大形単層脂質顆粒（ＧＵＬ　）：直径約１，０００
〜１０，０ＯＯＸ。

である。ＫＵＬは、陽子−ＮＭＲ−スペクトルにおいて
シグナルδ＝１．２８（メチレン）及びδ＝　０．８９
ｐｐｍ（メチル）によυ確認される。ＫＵＬの収量はシ
グナルの強度により評価される。約５６チである。

（ｂ）例１（１）と同様にして、クロロホルム／メタノ
ール混合液（２二１）０．２ｍＪに１０Ｍｌ１の卵−ホ
スファチジン酸ｔ−Ｓ解したものｔ４個用意し、セして
溶剤を真空蒸発せしめる。膜状の残渣ｔ−，５分間攪拌
しながらｌ　ａｔの蒸留水に分散せしめる。

単層脂質顆粒を形成せしめるため、−メータで監視しな
がらそれぞれの分散相に０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液
を加え、ｐＨｔそれぞれ６．８．１１．３及び１１．６
とする。ＫＵＬの収率はそれぞれの−において５チ、２
４％、５７−及び６０−である。

例２゜ （＆）クロロホルム／メタノール混合ｌ（２：１）２０
１ｊに１ｇの卵−ホスファチジン酸を溶解し、そしてこ
の溶剤を真空蒸発せしめる。！ＩＩ状残渣を０．０１Ｎ
水酸化ナトリウム溶ＱＫ５０ｍＪＫ攪拌しながら分散せ
しめる。水性相の−は約１２となる。

次に水性分散体のｐＨｔｏ、ＩＮ塩酸溶液を添加するこ
とにより約７〜８に調整する。ＫＵＬの収率は約１００
係である。

（ｂ）　　例２　（ａ）と同様に、クロロホルム／メタ
ノール混合液（２：　ｌ　）　０．２ＩＩＡ！ＫＩ　Ｏ
Ｗｋｇの卵−ホスファチジン酸ｔ−溶解する。これを４
個用意し、溶剤を真空蒸発せしめる。これらの試料を、
それぞれ−が７．３．８，０．９．４及び１Ｏ１０とな
るように０．０１Ｎ＊酸化ナトリウム溶液と蒸留水とを
攪拌しながら分散せしめる。ＫＵＬの収＊はそれぞれの
−について、３３チ、４６チ、６５％及び８１チである
。

例３゜ クロロホルム／メタノール混合液（２：１）５ｙａｌに
０．１ｇのノラウリルホスファチジン！！！！′ｔ″溶
解し、そして瘤剤を真空蒸発せしめる。膜状残渣を５０
贋ｔの０．０１Ｎ水酸化す）　ＩＪウム溶液に攪拌しな
がら分散せしめる。これにより生成した分散体の−は約
１２となる。次に、０．ＩＮ場酸溶液を加えることによ
り水性分散体のｐＨｔ約７〜８に調整する。ＫＵＬ　（
直径約３００〜８００Ｋ）の収率は７３チである。

例４゜ （１）　　クロロホルム／メタノール混ｆｉ液（２：１
）０．５肩ｌに３ｍｇの卵−ホスファチジン酸と７〜の
卵−レシチンを溶解し、溶剤を真空蒸発せしめるＯ室温
にて５分間攪拌することにより、膜状の残渣ｔ−１１の
蒸留水に分散せしめる。これにより−は約３となる。次
に単層脂質顆粒を形成せしめるために、−メータにて監
視しながら室温において、−が約１１，２になるように
０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液を加える０次に、燐酸緩
衝液を加えることにより水性層の−を約７に調整する。

こうして、薄い乳白色を有する水性相を得る。単層脂質
顆粒の生成は、ＮＭＲ−スペクトルにおけるシグナルδ
＝１．２８（メチレン）、δ＝０．８９（メチル）及び
δ＝　３．２３　（Ｎ−ＣＲ２）によシ確認される。電
子顕微鏡観察により、直径によって区別される単層脂質
顆粒の主たる２種類の集団が確認される。すなわち、 １、ＫＵＬ：直径約２００〜８００１．及び２、ＧＵＬ
：直径約１，０００〜１０，０００Ｘ。

である。ＫＵＬの収率は４５ｇ！である。

（ｂ）　　例４　（ａ）と同様に、クロロホルム／メタ
ノール混合液（２：　１　）　０．５ｄに３ダの卵−ホ
スファチジン酸と７■の卵−レシチンｔ−Ｓ解する。こ
れｔ−２個用意し、これらの溶剤を真空蒸発せしめる。

それぞれの膜状の残渣上、５分間攪拌することに□より
１．　Ｏｍｌづつの蒸留水に分散せしめる０次に単層脂
質顆粒を形成するため、−メータで監視しながら攪拌下
で０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液を加え、最終値をそれ
ぞれ８．６及びｌＯとする。ＫＵＬの収率は、それぞれ
の声について２２％及び３５嗟である。

（ｃ）　　（ａ）に記載した方法に従って、クロロホル
ム／メタノール混合液（２：１）０．５ｉｕに種々の濃
度になるように卵ホスファチジン酸及び卵レシチンをそ
れぞれ溶解し、そしてこれらの溶液を真空濃縮する。５
分間銀とりすることにより、それぞれの膜状残渣ｔ−１
４の水に分散せしめる。ＰＲメータでの監視下で振とう
しながら、最終Ｐ）１を約１１．２にするのに十分な量
の０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液をそれぞれの分散相に
加えることにより単層脂質頌粒を形成する。卵−ホスフ
ァチジン酸の濃度を増加するに従って８ＵＬの収率は次
のようになる。

例５゜ （ａ）　　０．３９の、卵−ホスファチジン酸と０．７
９０（２：１）１０ｍ７！に溶解し、セしてｆ＃液を真
空濃縮する。振とうしながら、残渣’ｉｏ、ｏＩＮ水酸
化ナトリウム溶液１０ＩＩｊに分散せしめる。こうして
生成した分散体は約１２の一億ｔ−有する０次に、０、
　Ｉ　Ｎ塩酸を加えることにより水性分散体のＰＨ會約
７〜８に下げる。　ＫＵＬの収率は約３０ｇ６である。

（ｂ）　　（ａ）の方法に従って、種々の量の卵−ホス
ファチジン酸と卵−レシチンの試料（脂質の合計量１０
１ｋｇ）をそれぞれクロロホルム／メタノール混合液（
２：１）０．５−に溶解し、そしてＨ液を真空濃縮する
。それぞれの膜状残渣會、振とうしながら１履ｌの０．
０ＩＮ水酸化す）　ＩＪウム＊＊に分散せしめる。この
分散体の−は約１２である。各水性媒体の−を約７〜８
に下げる。卵−ホスファチジン酸の濃度が増加するに従
りて各試料のＫＵＬの収率は次のように々る。

例６゜ ０．７９の卵−レシチン、０．３，９の牛脳−ホスファ
チジルセリン及び２ｇの卵−ホスファチジン酸ヲクロロ
ホルム／メタノールｆｉ合ｇ（２：ｔ）２０１／［溶解
し、そしてこの溶液をロータリーエバポレータにて真空
濃縮する。室温にて５分間銀とりすることにより、膜状
残渣會０．０ＩＮ水酸化ナトリウム溶液１０１００ｌに
分散せしめる０分散体の−は約１２である。ｌＮ塩酸に
より水性層の−を約７に１ｌｌＩ＊する。薄乳白色の水
性相が得られる０単層脂質顆粒の形成は例１　（ａ）の
場合のようにス（クトル法により例えばＮＭＲ又は電子
顕微鏡によりｍｌ！することができる。

（ｂ）　　（ａ）の方法に従って、種々の卵−ホスファ
チノン酸濃度と同一量の卵−レシチン及びホスファチジ
ルセリン濃［１有する試料（脂質の合計量は１０■）ｔ
すれぞれクロロホルム／メタノール混合液（２：１）０
．５履ｌに溶解し、そしてこれらの溶液を真空＃ｉｌｉ
した。残渣のそれぞれｔ　Ｏ，Ｉ　Ｎ水酸化ナトリウム
溶液１．　Ｑ　ｔｔｒｌに振とり分散せしめる。

生成した分散体の−は約１２となる＊０．ｌＮ塩酸を加
えることにより水性分散体のＰＦ（を約７〜８に下げる
。卵−ホスファチジン酸濃度が上昇するに従って各試料
のＫＵＬの収率は次のようになる。

例７゜ １９のアンレクチン（主としてレシチン、セフ４リン、
ホス７アチジルセリン及びホスフ丁チジルイノシトール
を含んで成る燐脂質の混合物）と０．２１の卵−ホスフ
ァテノン酸をクロロホルム／メタノール混合液（２：１
）２０１７に溶解し、そしてこの溶液を真空濃縮する。

室温にて５分間銀とりすることにより、膜状残渣ｔ−０
，０１Ｎ＊酸化ナトリウム溶液ＩＱ□ａＪに分散せしめ
る。こうして生成し九分散体の−は約１２であるｅｌＮ
の塩酸を添加することにより水性相の−を約７に下げる
。薄乳白色の水性相が得られる。

檗層脂質顎粒の形成は、例１　（ａ）の場合と同様にス
（クトル法により、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡により
確認することができる。ＫＵＬ及びＧＵＬは電子−微鏡
写真中に見ることができる。

（ｂ）　　例６闇の方法に従って種々の濃度の卵−ホス
ファチジン酸と同一量のアソレクチン（脂質の合計量１
０■）ｔ−含む試料をそれぞれクロロホルム／メタノー
ル混合液（２二ｌ　’）　０．５１４Ｋｉｌ解し、そし
てこれらの溶液を真空濃縮する。各残渣ｔ０．０１Ｎ７
に酸化ナトリウム溶液１　ｍｌに振とり分散せしめる。

この分散体の−は約１２である。０．ＩＮ塩ｔ１１を加
えることにより水性分散体のｐ）Ｉ’ｔ−約７〜８に下
げる。卵−ホスファチノン酸の濃度の増加に従って各試
料のＫＵＬの収率は次のようＫなる。

例８゜ （ａ）　　１１１−レシチンとコレステロールとの混合
物（モル比１：１）０．１＃と卵−ホスファチジン酸０
．１ｇとをクロロホルム／メタノール混合液（２：１）
１０屑ｊに溶解し、そしてこの溶液を真空濃縮する。室
温にて５分間振とりすることにより、膜状残渣を０．０
１Ｎ水識化ナトリウムＩＱａ＋ｊに分散せしめる。こう
して生成した分散体のｐ）（ｔｉ約１２である。次に、
ＩＮ塩酸の添加により水性相のＰＨｔ−約７に下げる。

藩札白色の水性相が得られる。

単層脂質顆粒の形成は例１（ａ）の場合のようにス（ク
トル法的に、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡によシ確認す
ることができる。

（ｂ）　　例８（１）の方法に従って、種々の濃度の卵
−ホスファチジン酸と同一量の卵−レシチン及びコレス
テロール（脂質の合計量１０■）とを含む試料をそれぞ
れクロロホルム／メタノール混合液（２：　１　）Ｏ１
５Ｊ！Ｉｔに溶解し、そしてこの溶液管真空濃縮する。

次に、各残渣を０．０１Ｎ水酸化ナトリウＪ−溶液１．
９Ｍ／に振とり分散せしめる。この分散体の−は約１２
に上昇する。次にＯ，１ＮｔＪＩ！を加えることにより
水性分散体のＰＨを約７〜８に下げる。卵−ホスファチ
ジン酸の１ｌｌｌｆが増加するに従って各試料のＫＵＬ
の収率は次のようになる。

例９゜ ０．５１１の卵−ホス７アテノン酸と０．５．９のシイ
リストイルレシチンをクロロホルム／メタノール混合液
（２：１）１０ｇｗｊ！に溶解し、そしてこの溶液を真
空濃縮する。膜状残渣ｔ−０，０ＩＮ水酸化ナトリウム
溶液５０１７に分散せしめる。この分散体の−は約１２
である。次に０．ＩＮ塩酸を加えて水性分散体の−を約
７〜８に下げる。ＫＵＬの収率は３６優である。

例１０゜ 例９の方法に従って、０．５．ｌｉｌの卵−ホス７アチ
ノン酸と０．５，９のジ・？ルミトイルレシチン又はノ
ステ了すルレシチンとを含む脂質顆粒の混合物を製造す
る。　ＫＵＬの収率は１０％である。

例１１゜ 例９の方法に従って、０５ｇのジノダルミドイルホスフ
ァチジン酸と０．５ｇの卵−レシチンとを含む脂質顆粒
の混合物を製造する。ＫＵＬの収率は１０−である。

例１２゜ ５１ｋｇのリソレシチンと５ダの卵−レシチンｔ−１ｍ
１のクロロホルム／メタノール混合液（２：１）に溶解
し、そしてこ−の溶液を真空濃縮する。５分間像とりす
ることにより膜状残渣＠　１１Ｒ１の蒸留水に分散せし
める。分散体の−は約５〜７である。

水性相のｐＨ１に０．５に下げるのに十分な量の０．Ｉ
Ｎ塩酸を一メータで監視しながら室温にて水性分散体に
加えることにより単層脂質顆粒が生成する。

これに続いて、０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液を加える
ことにより）１１（ヲ７に上げる。

単層脂質顆粒の形成は例１（ａ）と同様にしてス（クト
ル法により、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡により確認す
ることができる。　ＫＵＬとＧＵＬが電子顕微鏡写真中
に観察される。ＫＵＬの収率は５０優である。

例１３゜ 例１２の方法に従って、塩化ホスファチジル２−［Ｎ、
Ｎ−ツメチル−Ｎ　−（２−Ｎ’　、　Ｎ’　、　Ｎ’
−トリメチルアンモニオエチル）了ンモニオ〕エチル（
この製造方法はＣ，Ｇ、ナイト、Ｌ１ｐｏｓｏｍｓｓｓ
第３章、Ｅｌｓ＠ｖｉ＠ｒ　１９８１年に記載されてい
る）と５１ｎ９の卵−レシチンとを含む脂質顆粒の混合
物を製造する。

１１１−脂質喚粒の形成は例１（ａ）のようにスペクト
ル法により、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡により確認す
ることができる。電子顕微鏡により、直径２５０ＸのＫ
ＵＬと直径約６００〜１０，０ＯＯＸのＧＵＬ　１に観
察することができる。ＫＵＩ、の収率は５０チである。

例１４゜ ５〜（６，６７ｒｎモル）の卵−レシチンと５１１ｇ（
９，５ｍモル）の天然リンホスファチジルグリセロール
をクロロホルム／メタノールの混ｆ液（２：１）ｌｌｊ
に溶解し、そしてこの溶液をロータリーエバポレータで
真空濃縮する。膜状残渣１１　ｄの蒸留水に分散せしめ
る。この分散体のｐＨは約５トリウム溶液を用いて水性
分散体の…を約８に調整する。

一層脂質顆粒の形成は、例１（１）と同様にしてスペク
トル法により、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡によシ確認
することができる。ＫＵＬとＧＵＬが電子顕微鏡写真中
に観察される。　ＫＵＬの収率は約３５１６である。

例１５ ６〜（８０ｍモル）の卵−レシチンと４ａｙ（８，０ｍ
モル）の天然リソホス７了テジルセリンをクロロホルム
／メタノールの混合物（２：１）１肩ｌＫ溶解し、そし
てこの溶液をロータリーエバポレータで真空濃縮する。

５分間部とうすることによシ模状残渣をｌＮｉ１の蒸留
水に分散せしめる。

この分散体の声は約６である。−メータで監視しながら
０．ＩＮ＊酪化す）　ＩＪウム溶液により水性分散体の
ＰＨを約８に調整する。

単層脂質顆粒の形成は、例１（＆）と同様の方法により
、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡によシ確認することがで
きる。電子顕微鏡写真中にＫＵＬ及びＧＵＬが観察され
る。ＫＵＬの収率は約２０優である。

同１６゜ ５Ｑ（６，６７ｍモル）の卯−レシチンと５９（１０，
０ｍモル）のりソホスフ了テジルイノシトールをクロロ
ホルム／メタノールの混合ｆｉ（２：１）ＩＷｔに溶解
し、そしてこの溶液をロータリーエバポレータにより真
空濃縮する。５分間部とうすることにより膜状残渣ｆ　
１　ｍｌの蒸留水に分散せしめる。この分散体のｐｉ４
は約６である。−（メｌ−タで監視しながら０．ＩＮ水
酸化ナトリウム溶液を用いて水性分散体の−を約７にｙ
４整する。

単層脂質顆粒の形成は例１　（ａ）の場合と同様にして
スペクトル法により、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡によ
り確認することができる。電子Ｍ微鏡写真中にＫＵＬ及
びＧＵＬが観察さｒＬる。ＫＵＬの収″４Ａは約４０−
である。

例１７゜ （ａ）　　０．５　ｇのモノオレイン（９−シス−オク
タデセノイルグリセロール）及Ｏｏ、５ｇの卵−＊　ス
ファチジン酸をクロロホルム／メタノールの混合液（２
：１）２０履１ＫＩＷ解し、そしてこの溶液を真空濃縮
する。室温にて５分間部とりすることにより、膜状残渣
’ｔ　１００　ＷＬｌの０．０ＩＮ水酸化ナトリウム溶
液に分散せしめる。こうして生成した分散体のｐＨは約
１２である。次に、１Ｎ塩ｆｆ１ｔ添加することにより
水性媒体のｐｉ−１を約７に下げる。藩札白色の水性相
が得られる。

単層脂質顆粒の形成は例１（ａ）の場合と同様にスペク
トル法によシ、例えばＮＭＲ又は電子顕微鏡によシ確認
することかで舞る。電子顕微鏡写真中ＫＫＵＬ及びＧＵ
Ｌが観察される。

（ｂ）　　例１７（ａ）の方法に従って、種々の濃度の
卵−ホスファチジン酸とモノオレインと（脂質の合計量
１０ダ）からなる試料管それぞれクロロホルム／メタノ
ール混合液（２：　１　）　０．５ｍ１Ｋｆｆｔｌｌｉ
シ、そしてこれらの溶液を真空濃縮する。振とりするこ
とにより、各残渣ｔ−１ｄの０．０ＩＮ水酸化ナトリウ
ム浩液に分散せしめる。生成し九分散体の−は約１２で
ある＊０．ＩＮ塩酸を添加することにより水性分散体の
ｐ）ｉｋ約７〜８に下げる。卵−ホスファテノン酸の濃
度が増加するに従ってＫＵＬの収率は次のようになる。

例１８゜ 例１７（ａ）の方法に従って、種々の濃度の卵−ホスフ
ァチジン酸とモノミリスチンと（脂質の合計量１０１ｖ
）を含む試料をそれぞれ、クロロホルム／メタノール混
合液（２：ｌ）０．５１１ｊに溶解し、そして溶液を真
空濃縮する。振とうすることにより各残渣ｔ　１．　Ｏ
ｍｌの０．０ＩＮ水酸化す）　ＩＪウム溶液に分散せし
める。こうして生成した分散体の−は約１２である。０
．ＩＮ塩酸を添加することにより水性分散体のｐｉ（ｔ
７〜８に下げる。卵−ホスファチジン酸の含量が増加す
るに従って各試料のＫＵＬの収率は次のようになる。

例１９゜ （１）例１（ａ）及び１（ｂ）の方法に従って、卵−ホ
スファチジン酸を含み、ＫＵＬの比率が６６−である脂
質顆粒の混合物上調製する。脂質顆粒混合物中のＧＵＬ
の比率を増加せしめるために、新たに調製した単層脂質
顆粒を含有する分散相に０．５Ｍの塩化ナトリウム溶液
を加える。　ＫＵＬの含有量は、分散相中のＮａＣＬの
濃度が増加するに従って次のように低下する。

（ｂ）　　脂質顆粒混合物中のＧＵＬの含有量を増加せ
しめるために、卵−ホスファチジン酸のみからなる新た
に調製した単層脂質顆粒を含有する分散相に０．５Ｍ塩
化カリウム溶液を加える０分散相中のＫＣ１＠Ｉｆが増
加するに従ってＫＵＬの濃度は次のように低下する。

例２０゜ ４０１９の・り、？ルミトイルホスファテノルコリンと
２０〜の卵−ホスファチノン酸を、６０℃にて５Ｈ１の
純ｔ＠ｒｔ−１タノールに溶解する。メタ／　−ル／ド
ライアイス混合物中にフラスコを浸漬することにより溶
液を凍結する。凍結乾燥機中でｔｓｒｔ−ブタノール除
去し、脂質の均一泡状物を得る。

次に、激しく振とうしながら、この泡状物を水に分散せ
しめる。室温において−メータで監視しながら一］ｔ−
約８に上昇せしめるのに十分な量の０．ＩＮ水酸化ナト
リウム溶液を加えることにより、単層脂質顆粒が生成す
る０次に、燐酸緩衝液を加えることにより水性相のｐＨ
ｔ約７に調整する。藩札白色の水性相が得られる。こう
して得た脂質顆粒は電子顕微鏡で観察することができ、
２００〜１０．０００１の直径を有する・ 例２１゜ 後記の表に列挙した脂質の一種を３．０ダと卵−膜状残
渣ｔ−１ｒｎｌの蒸留水に分散せしめる０分散体の−は
約６〜１０の範囲である０次に、０．１Ｎ水酸化ナトリ
ウム爵液を加えることにより水性層のＰ１″１ｔ−約８
に上げる。単層脂質顆粒の形成は、例１（ａ）の場合と
同様にしてスペクトル法によシ、例えばＮＭＲ又は電子
顕微鏡により確認することができる。電子顕微鏡写真中
にＧＵＬ及びＫＵＬが観察される。ＫＵＬの比率を次の
表に示す、　　　以下余白例１〜２０の方法に従って、
ミリスチン酸と卵−レシチン、ミリスチン酸と卵−ケフ
ァリン、シミ、リストイルホスファチジン酸とグミリス
トイルレシチン、ジｔ４ルミトイルホスファチジン酸ト
１−ノダルミトイルー２−オレオイルレシチン、１−ノ
４ルミトイルー２−オレオイルホスファチジン酸トシａ
ｐルミトイルレシチン、１−ｔ４ルミトイルー２−オレ
オイルホスファテノン酸と１−ａ４ルミトイルー２−オ
レオイルレシチン、卵管リソホスファチジン酸と卵−レ
シチン、１−ミリストイル−リソホスファチノン域と１
−ノ譬ルミトイルー２−オレオイルレシチン、ｌ−ノ臂
ルミトイルーリソホスファｆ　シｙ［トｌ、　−）！ル
ミトイルー２−オレオイルレシチン、牛脳−リソホスフ
ァテノルセリン１ｉ−レシチン、１−バルミトイル−リ
ソホスファチジルセリン、ｌ　−／譬ルミトイルー２−
オレオイルーホスファチジル七リン、！：　１−７４ル
ミトイルー２−オレオイルレシチン、及び牛脳−リソホ
スファチジルセリンと卵−ケファリンがら単層脂質顆粒
’ｔａｌｌ造することができる。

例２３゜ ２〜のヒドロコーチジン−２１−ノダル１ｆ−）、４０
〜の卵−レシチン及び２０ｒｍ９の卵−ホスファチジン
酸ｔＩｓ　ｍｌのｔ＠ｒｔ−ブタノールに溶解する。

この溶液を無菌条件下で０．２μｍのフィルターを通し
て一過し、２５ｄのバイアルに入れ、バイアルをドライ
アイス／エタノール混合物に浸漬することによって凍結
し、そして凍結乾燥する。１５分間振とうすることによ
シ、泡状物質’ｉ５ｄの無菌殺菌水に分散せしめる。無
菌条件下で一過した０、ＩＮ＊酸化ナトリウム溶液を加
えることによシｐｉ（ｔｌｎ、５に調整し、そしてこの
分散体１１分間放置する＊　Ｐ）１７．４の燐酸緩衝化
（注射用燐酸緩衝液）塩化ナトリウム等張液の１０倍濃
度のものＱ、　５　ｙｉｌを加える。こうして得られた
分散体は炎症を有する関節嚢への注射に適する。

例２４゜ ０．１■のＮ−アセチルムラミル−し−アラニル−Ｄ−
イソグルタイル−Ｌ−アラニル−２−（１’。

２′−ジ・やルミトイルーローグリセロ−３′−ホスフ
オリル）エテル了ミド、７■のクロマトグラフ的に純粋
な卵−アルブミンレフチン及び３ダの卵−ホスファテノ
ンａＩヲクロロホルム／メタノール混合液（２：１）２
ａｊに溶解する。この溶液を真空濃縮し、そして残渣と
して透明な脂質膜が残留する。振とりすることによりこ
のＩ［を無菌蒸留水２１Ｌｌに分散せしめ、そして０１
嗟チモ一ルフタレイン溶液１滴を滴加する０色が変わる
まで０．ＩＮ水酸化ナトリウム溶液を加える。これＫよ
り自発的な顆粒化が生ずる。次に、燐酸緩衝化（注射用
燐酸緩衝液）塩化ナトリウム箸張液の１０倍濃度のもの
０．２　ｙｘｌを加えることによ＃）ｐ）ｆｔ”７．４
近くに緩衝化する。こうして得られる分散体は細胞培養
中又はラットの生体内で胞状マクロファージを活性化す
るのに直接使用するのに適する。

例２５゜ ０．１５ｇのＮ−ア竜チルムラミルーＬ−アラニル−Ｄ
−イアグルタミル−Ｌ−アラニル−２−（１’、２’−
ジノ譬ルミトイルー■ｎ−グリセロ−３′−ホスフォリ
ル）エチルアミド、９７優のホスファチジルコリンを含
む卵−レシチン２７ｇ、及び３ｙの卵−ホスファチジン
酸ｔ２００ｍｌのクロロホルムと２０ａｔのメタノール
の混合物に６解し、２００ｄのｔ・ｒｔ−ブタノールを
加え、そして溶液ｆ：１８０−に濃縮する。この溶液を
、無菌条件下０．２μｍのフィルターで一過し、エタノ
ール／ドライアイス混合物中で急激に凍結し、そして次
に凍結乾燥する。激しく攪拌しながら、細砕し九凍結乾
燥物を３００ｄの無菌の０．０ＩＮ水酸化す）　ＩＪウ
ム溶液に加え、そして完全に分散せしめる。水性相’ｔ
　Ｏ，Ｉ　Ｎ　ＨＣｌで中和し、乳白色の分散棒金。

限外−過板の代シに、ポリカーＩネート製の孔径０．１
μｍの均一孔一過板〔ヌクレオデア（Ｎｕｃｌ＠ｏｐｏ
ｒ＠）■〕（粒子が付着していないように洗浄したもの
）ｔ″装着た攪拌限外濾過セル〔アミコン（Ａｍｔｅｏ
ｎ　）■〕に入れる。わずかな加圧下で、ドゥルベコ（
Ｄｕｌ　ｂ＠ｅａｏ　）の無菌緩衝溶液（ｐｉ（７，４
、Ｃａ及びＭｇｔ含まない）を、セル中の液量が３００
３４よシ少なくならないように連続的に加えながら分散
体ｔＦ遇する。３１のＰ液が通過した後、すべてのＫＵ
Ｌが分離され、上に残ったＧＵＬの分散体はアンプルに
詰め、ナして治療試験に使用することができる。

例２６゜ １５ｍ９のＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
イングルタミル−Ｌ−アラニル−２−（１’　、　２’
−ツノ９ルミトイルーｌｌｌ−グリセロ−３′−ホスホ
リル）エチルアミド、０．６ｇの純卵−レシチン及び２
．４ｇの卵−ホスファチジン酸ヲ２０履ｌのクロロホル
ムと２ｊｌＩＪのメタノールとの混合液に溶解する。こ
の溶液を、０．２μｍのフィルターを通して無菌条件下
で一過し、そして無菌フィルターで空気全遮断し、そし
て粒子が付着していないように洗浄したロータリーエバ
Ｉレータ−を用いて、５００ａ＋ｊ丸型フラスコ中で濃
縮し、フラスコの壁に好ましくは単一の膜が形成される
ように脂質混合物を乾燥する。残渣を高真空下で一夜乾
燥した後、無菌の０．０１Ｎ水酸化ナトリウム３０１１
７を加え、そしてフラスコを対し、５分間振とうする。

こうして得た乳白色の水性相のＰＨ１−１無菌の０、Ｉ
Ｎ塩ａｔ加えることにより７．４　Ｋ調整する。

この分散体を例２３に記載したように攪拌フィルターセ
ル（全容１００ｊ１／）に入れ、セしてＦ遇する。この
間に、粒子金含有しなくなるまで濾過した無菌水を、Ｐ
液が５ｏｏｙｎｔ得られるまで加える。

このＦ液を１限外−過板、例えばアミコン（Ａｍ　ｉ　
ｃｏｎ　）ＵＩＯ■【装着し九攪拌Ｐ通セルに連続的に
供給し、そして３０５１１で濃縮する。濃縮された分散
体は小形単層脂質顆粒を含有しており、そしてドゥルペ
コの燐酸緩衝液（ｐｉ（７，４、Ｃａ及びＭｔｔ含有し
ない）ｆ：加えた後アンプル圧詰め、そして治療試験に
使用する。

特許出願人 チパーガイギーアクテエンがぜルシャフト特許出願代理
人 弁理士　實　木　　　朗 弁理士西舘和之 弁理士福本　積 弁理士　山　口　昭　之

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、（ａ）　　次の式（Ａ） Ｒ２０ｆ（ （式中、ｍは０又はｌでらり；基Ｒ１及びＲ２の内の１
   つは水素、ヒドロキシ基又は炭素原子数１〜４個の低級
   アル中ル基であり他方の基はそれぞれ炭素原子数１０〜
   ２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基もし
   くはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜２０個
   のアシルオキシ基でありＳＲ５は水嵩又は炭素原子数１
   〜４個の低級アルキル基であり；そしてｆｔ４は水素、
   炭素原子６ｔ〜７個の低級アルキル基、炭素原子数５〜
   １２個の一水化物基でＴｏシ、又はＲ５及びＲ２が水素
   もしくはヒドロ中シル基でありＲ３が水素であるときは
   ステロイド基である） で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
   肪酸及びステロール以外の追加の脂質、あるいは、ｍが
   Ｏ又は１であり；Ｒ１及び８．が相互に独立に、それぞ
   れ炭素原子数１０〜２０個のアある式■の脂質及び場合
   によりては遍尚な追加の脂質ｔｐＨ値が７より大である
   水性相に分散せしめること、あるいは、 （ｂ）　　ｍがＯ又はｌであり；基Ｒ１及びＲ２の内の
   １つが水素、ヒドロキシ基、炭素原子ａｌ〜４個の低級
   アルキル基であって他方の基がそれぞれ炭素原子数１０
   〜２０個のアル中ル基、アルケニル基、アルコキシ基も
   しくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜５０
   個のアシルオキシ基でありＳＲ，が水素であり；そして
   Ｒ４はアンモニオ基で置換された低級アルキル基である
   式（６）の脂質、及び場合によっては追加の脂質、ある
   いは、閣が０又は１であり；Ｒ５及び町が相互に独立に
   、それぞれ炭素原子ａｌＯ〜２０個のアル中ル基、アル
   ケニル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数
   １０〜５０個のアシルオキシ基であシ；Ｂ、が水素であ
   り；そしてＲ４はアンモニオ低級アルキルアンモニオ基
   で置換され九低級アルキル基で弗る式囚の脂質、及び適
   当な追加の脂質を一値が７より小である水性相に分散せ
   しめ、そして必要であれば水性相を中和し、そして所望
   により得られ九本１脂質顆粒を濃縮しそして／又は分離
   することを特徴とする単層脂質顆粒の製造方法。 ２、水性分散体が、醜が１であり；Ｒ９がアルキル基、
   例えば１−ドデシル基（ラウリル基）、ｎ−トリデシル
   基、鳳−テトラデシル基（ｔリスチル基）、ｎ−ペンタ
   デシル基、ｎ−ヘキサデシル基（七チル基）、ｎ−へゲ
   タデシル基もしくはｎ−オクタデシル基（ステアリル基
   ）、アルコキシ基、例えばｎ−ドデシルオキ７基（ラウ
   リルオキ７基）、鳳−テトラデシルオキシ基（ｉリスチ
   ルオキシ基）、ｎ−ヘキサデシルオキシ基（セチルオキ
   シ基）もしくはｎ−オクタデシルオキシ基（ステアリル
   オキシ基）、又はアシルオキシ基、例えばラウロイルオ
   キシ基、ミリストイルオキシ基、・タルミドイルオキシ
   基もしくはステアロイルオキシ基であり；Ｒ３が水嵩又
   はヒドロキシ基であり；札が水素又は低級アルキル基、
   例えばメチル基であり；そしてＲ４は水車、低級アルキ
   ル基、例えばメチル基もしくはエチル基、酸性基及び塩
   基性基例はカルゲキシル基及びアミノ基により置換され
   九低級アルキル基、例えばω−アｉノーω−カルがキシ
   低級アルキル基、例えば２−アずノー２−カルはキシエ
   チル基もしくは３−アＺノー３−カルメキシーａ−ｆａ
   ビル基、ヒドロキシ低級アルキル基、例えば２−とドロ
   キシエチル基もしくは２．３−ヒドロキシグロビル基、
   低級アルキレンツオキシ低級アルキル基、例えハ２，３
   −エチレンゾオキシ！ロビル基もしくは２．３−（２，
   ２−ｆロビレン）−ジオキシグロビル基、ハロダン化低
   級アルキル基、例えば２−クロロ−もしくは２−！ロモ
   エチル基、炭素原子数５〜１２個の炭水化物基、例えば
   イノシトール、又はステロイド基、例えばステロール、
   例、ｔばコレステロールである式■の脂質、及びＲ４及
   びＲ２がアシルオキシ基、例えばラウロイルオキシ基、
   ミリストイルオキシ基、ノ譬ルミトイルオキシ基又はス
   テアロイルオキシ基であり；礼が水素であり；そしてＲ
   ４が２−トリメチルアンモニオエチル基もしくは２−ア
   ミノエチル基である式囚で示される追加の脂質を含有す
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記−の方法。 ３、水性分散体が、ａ、及びＲ２がアシルオキシ基、例
   えばラウロイルオキシ基、ぼりストイルオキシ基、ノ譬
   ルｔトイルオキシ基もしくはステアロイルオキシ基であ
   り、Ｒ３が水車であり、そしてＲ４が水素である大体）
   の脂質、及び場合によりては、８．及びＢ２がアシルオ
   キシ基、例えばツウロイルオキシ基、ずリストイルオキ
   シ基、ｄルミトイルオキシ基又はステアロイルオキシ基
   であり、Ｒ３が水素であり、そしてＲ４が２−トリメチ
   ルアンモニオエチル基、２−アミノエチル基、酸性基及
   び塩基性基例えばカルメキシ基及びアミノ基でａ換され
   九低級アルヤル基、例えばω−アはノーω−カル−キシ
   低級アルキル基、例えば２−アミノ−２−カルメキシエ
   チル基−しくは３−アきノー３−カルＩキシー鳳−！ロ
   ピル基、又は炭素原子数５〜１２個の炭水化物基、例え
   ばイノシトール基、又はモノグリ竜リド例えばモノオレ
   インもしくはモノミリスチン、又はステロール、例えば
   コレステロールである式（４）で示される追加の脂質を
   含有することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 ４、水性分散体が、リソホスファチシン酸、例えば天然
   リソホスファチノン酸、例えば卵−リソホスファチシン
   酸、もしくは合成リソホスファチノン酸、例えばｌ−ラ
   ウロイル−リソホスファチシン酸、１−イリストイルリ
   ソホス７アテゾン酸もしくは１−バルミトイルリンホス
   ７アチゾン酸、リソホス７アチノルセリ／、例えば天然
   リソホス７アチノルセリン、例えば牛脳リソホス７アチ
   ジルセリン、もしくは合成リソホス７アチゾルセリン、
   例えばｌ−ミリストイルリソホスファチジルセリンもし
   くはｉ−ノ争ルｉトイルリソホス７アチゾルセリン、リ
   ソホスファチノルグリセリン、又はリソホス７アチゾル
   イノシトール、そしてさらに、レシチン、例えば天然レ
   シチン、例えば卵−レシチン、同一のアシルオキシ基を
   有するレシチン、例えばノミリストイルレシチンもしく
   はジノ９ルミトイルレシチン、異なるアシルオキシ基を
   有するレシチン、例えばｌ−ノ譬ルミトイルー２−オレ
   オイルレシチン、又はさらにケアプリン、例えば天然ケ
   ファリン、例えば卵−ケアプリン、もしくは異なるアシ
   ルオキシ基を有するケファリン、例えば１−ノ譬ルｉト
   イルー２−オレオイルケファリンを含有することｔ−特
   徴とする特許請求の範囲第１項記−の方法。 ５、水性分散体が、天然ホスファチノン酸、例えば押−
   ホス７アチゾン酸、合成ホスファチジン酸例えばノラウ
   ロイルホスファチノン酸、ゾζリストイルホスファチシ
   ン皺、ジａｌルｉトイルホスファチジン酸４Ｌ＜ｉｌ−
   ノ譬ルｆ）イル−２−オレオイルホス７アチノン酸、そ
   して場合によってはさらに、レシチン、例えば天然レシ
   チン、例えば罪−レシチン、同一のアシルオキシ基を有
   するレシチン、例えばゾ電リストイルレシチンもしくは
   ツノ譬ルミトイルレシチン、もしくは異なるアシルオキ
   シ基を有するレシチン、９１１ｊｔｆｌ−ノ量ルｆ）（
   ルー２−オレオイルレシチン、又はケファリン、例えば
   天然ケファリン、例えば卵゛−ケファリン、４しくは異
   なるアシルオキシ基を有するケアァリ／、例えばｌ−）
   譬ルｉトイルー２−オレオイルケファリン、又はホスフ
   ァチジルセリン、例えば天然ホス７アチゾルセリン、例
   えば牛脳ホスファチジルセリン、もしくは合成ホスファ
   チジルセリン、例えばジノ譬ル２トイルホスフアテゾル
   セリン、モノグリセ替ド、例えばモノオレインもしくは
   モノミリスチン又はステリロール、例えばコレステロー
   ルを含有することを特徴とする特許請求の範囲第１項記
   載の方法。 ６、水性分散体が卵−ホスファチジン酸、又は卵−ホス
   ７アチノン酸及び卵−レシチンを含有することを特徴と
   する特ＩＦＦ請求の範囲第１項記載の方法。 ７、水性分散体が卵−ホスファチジン酸、卵−レシチン
   又は牛脳ホスファチノルセリンを含有スる特１Ｆｌ−請
   求の範囲第１項記載の方法。 ８、水性分散体がアソレクチンを含有する特許請求の範
   囲第１項記載の方法。 ９、水性分散体が卵−ホスファチノン酸、卵−レシチン
   、及びコレステロールを含有する特許請求の範囲第１項
   記載の方法。 １０、　　水性分散体がリンレクチン及び卵−レシチン
   を含有する特許請求の範囲第１項記載の方法。 １１、　　水性分散体が天然リソホスファチジルセリン
   及び卵−レシチンを含有する特許請求の範囲第１項記載
   の方法。 １２、　　方法（、）の脂質の均質層を水性相中に分散
   せしめ、そして次にＰＨヲ約１２まで上昇せしめること
   Ｖｒ特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 １３、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの冷水溶液
   を添加することにより−を上昇せしめること１に特徴と
   する特許請求の範囲第１２項記載の方法。 １４、方法（ａ）の脂質の均質層を、−値が７よ）高い
   水性相に分散せしめることを特徴とする特許請求の範囲
   第１２項記載の方法。 １５、　　方法（、）の脂質の均質層を、水酸化ナトリ
   ウム又は水酸化カリウムの検水浴液に分散せしめること
   １−ｅ黴とする特許請求の範１第１４項記載の方法。 １６、方法（ｂ）の脂質の均質層ｔ１−が約１の水性相
   に分散せしめることｔ−特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 １７、　　さらに、生理的に許・容される酸、塩基又は
   緩衝剤を添加することにより水性相を−７〜８に中和す
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 １８、あらかじめ８より高い−に調整した水性相を、生
   理的に軒容される酸又は緩衝液により−７〜８に中和す
   ることを特徴とする特許−求の範囲第１２項記載シン法
   。 １９、塩酸の添加により水性相を特徴する特許請求の範
   囲第１８項記載の方法。 ２０．あらかじめ５よシ低い−に調整した水性′４＠を
   生理的に許容される塩基の添加によプ中和することｔ％
   像とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 ２１、　　次の式囚 Ｒ，ＯＨ （式中、騰はＯ又はｌであり；基Ｒ４及び８□の内の１
   つは水嵩、ヒドロキシ基、又は炭素原子数１〜４個の低
   級アルキル基であシ他方の基はそれぞれ炭素原子数１０
   〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基も
   しくはアルケニルオキシ基、又は炭ＪＩＪｌｌ［十数ｌ
   Ｏ〜５０個のアシルオキシ基であＣ；Ｒ３は水素又は炭
   Ｓ原子数１〜４個の低級アルキル基であり；そしてＲ４
   は水素１炭嵩原子数１〜７個の低級アルキル基、炭素原
   子数５〜１２個の炭水化物基であり、又は＆、及びＢ２
   が水ｉ１！もしくはヒドロキシル基であシＲ５が水素で
   で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
   肪酸及びステロール以外の追加の脂質、あるいは、ｍが
   ０又は１であｐ：ハ及びＲ２が相互に独立に、それぞれ
   炭素原子数１０〜２０個の７ある成体）の脂質、及び場
   合によっては適当な追加の脂質をｐＨ値が７より大であ
   る水性相に分散せしめること、あるいは、 （ｂ）　　ｒｍが０又はｌであシ；基Ｒ７及び町の内の
   １つが水素、ヒドロキシ基、炭素原子８１〜４個の低級
   アルキル基で６って他方の基がそれぞれ炭素原子ｌ＆１
   ０〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基
   もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜５
   ０個のアシルオキシ基であり；Ｒ５が水素てあり；そし
   てＲ４はアンモニオ基で置換された低級アルキル基であ
   る式（転）の脂質、及び場合によっては追加の脂質、あ
   るいは、ｍがＯ又はｌでｅＩシ；Ｒ１及びＢ、が相互に
   独立に、それぞれ炭素原子数１０〜２０個のアルキル基
   、アルケニル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭車
   原子［１０〜５０個のアシルオキシ基であり；Ｒ３が水
   素であり；そしてＦＬ４はアンモニオ低級アルキルアン
   モニオ基で鐙換された低級アルキル基である式囚の脂質
   、及び適当な追加の脂質を一値が７より小である水性相
   に分散せしめ、そして必要であれば水性相を中和し、そ
   して所望により得られた単層脂質顆粒を濃縮しそして／
   又は分離することにより得られる単層脂質顆粒。 ２２、式に） Ｒ，０■ （式中、Ｉは０又は１であり；基Ｒ１及びＢ２の内の１
   つは水素、ヒドロキシ基、又は炭素原子数１〜４個の低
   級アルキル基であり他方の基はそれぞれ炭素原子数１０
   〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基も
   しくはアルケニルオキ７基、又は炭素原子数１０〜５０
   個のアシルオキシ基であ６　：　Ｒ，は水素又は炭素原
   子数１〜４個の低級アルキル基で６シ；そしてＲ４は水
   素、庚嵩原子数１〜７個の低級アルキル基、炭素原子１
   １５〜１２個の炭水化物基であり、又はＲ及びＲ２が水
   素もしくはヒドロキシル基でちゃ町が水嵩であるときは
   ステロイド基である） で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
   肪酸及びステロール以外の追加の脂質、あるいは、ｍが
   Ｏ又は１であり；Ｒ１及び８□が相互に独立に、それぞ
   れ炭素原子数１０〜２０備のアある式（４）の脂質、及
   び場合によっては適当な追加の脂質を一値が７より大で
   ある水性相に分散せしめること、あるいは、 伽）鵬が０又はｌであり；基Ｒ１及び８２の内の１つが
   水素、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜４傭の低級アルキ
   ル基であって他方の基がそれぞれ嶽；１［十数１０〜２
   ０偵のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基もしく
   はアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜５０個の
   アシルオキシ基であす；Ｒ５が水嵩であり；そしてＲ４
   はアンモニオ基で置換され九低級アルキル基で６る式■
   の脂質、及び場合によっては追加の脂質、あるいは、ｍ
   がＯ又はｌでＴｏシ；Ｒ１及びＲ２が相互に独立に、そ
   れぞれ炭素原子数１０〜２０個のアルキル基、アルケニ
   ル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０
   〜５０個のアシルオキシ基であり；Ｒ５が水素であり；
   そしてＲ４はアンモニオ低級アルキルアンモニオ基で置
   換された低級アルキル基である式（Ａ）の脂質、及び適
   当な追加の脂質ｔｐＨ値が７より小である水性相に分散
   せしめ、そして必要であれば水性相を中和し、そして所
   望により得られた単層脂質顆粒を濃縮しそして／又は分
   離することにより製造され九単層脂質顧粒を基礎とし、
   該脂質粗粒に封入された活性成分を投与するための方式
   。 ２３、活性成分がＮ−７セチルムラｉルーＬ−アラニル
   −Ｄ−イソグルタミル−Ｌ−アラニル−２−（１’、　
   ２’−、ジ／譬ルｉトイルーＩｎ−グリセロ−３′−ホ
   スホロ）−エチルアイドである特許請求の範囲第２２項
   記載の方式。 ２４、人体又は動物体の治療に使用する特許請求の範Ｉ
   ｉ！第２２項記載の方式。 ２５、式（〜 Ｒ，ＯＨ （式中、ｍは０又は１で６す；基Ｂ、及び町の内の１つ
   は水素、ヒドロキシ基、又は炭素原子数１〜４個の低級
   アルキル基で６９他方の基はそれぞれ炭素原子数１０〜
   ２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基もし
   くはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数ｌＯ〜５０１
   １のアシルオキシ基であり：Ｒ１ｔｆ水素又は炭素原子
   数１〜４個の低級アルキル基であり；そしてＲ４は水素
   、炭素原子数１〜７個の低級アルキル基、炭素原子数５
   〜１２個の炭水化吻基でＴｏＪ）、又は８．及び町が水
   素もしくはヒドロキシル基でるり８．が水嵩であるとき
   はステロイド基である） で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
   肪酸及びステロール以外の追加の脂質、あるいは、論が
   Ｏ又は１であり；Ｒ４及びＲ２が相互に独立に、それぞ
   れ炭素原子数１０〜２０個のアある式（４）の脂質、及
   び場合によっては適当な追加の脂質ｔ−−値が７より大
   である水性相に分散せしめること、あるいは、 （ｂ）　　ｒｍが０又は１であり；基Ｒ４及びＲ２の内
   の１つが水素、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜４個の低
   級アルキル基であって他方の基がそれぞれ炭素原子数１
   ０〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基
   もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜２
   ０個のアシルオキシ基で６す：Ｒ１が水嵩であり；そし
   てＲ４はアンモニオ基で置換され九低級アルキル基であ
   る式■の脂質、及び場合によっては追加の脂質、あるい
   は、ｍがＯ又はｌであす；Ｒ７及びＲ２が相互に独立に
   、それぞれ炭素原子数１０〜２０個のアルキル基、アル
   ケニル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数
   １０〜５０個のアシルオキシ基でＴｏ、ｂ：Ｒ１が水嵩
   であり；そしてＲ４はアンモニオ低級アルキルアンモニ
   オ基で置換された低級アルキル基である大体）の脂質、
   及び適当な追加の脂質をμ値が７よシ小である水性相に
   分散せしめ、そして必要であれば水性相を中和し、そし
   て所望により得られた単層脂質−粒を濃縮しそして／又
   は分離することにより製造される、活性成分を封入した
   単層脂質顆粒を、医薬として計容される添加剤と混合し
   て成る医薬組成物。 ２６、人体又は動物体の治療に使用する特許請求の範囲
   第２５項記載の医薬組成物。 ２７、式（Ａ） ８□　　　０ｉｌ （式中、ｍは０又は１であり；基８．及びＲ２の内の１
   つは水素、ヒドロキシ基、又は炭素原子数１〜４個の低
   級アルキル基で６９他方の基はそれぞれ炭素原子数１０
   〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基も
   しくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１θ〜５０
   個のアシルオキシ基でおり；Ｒ５は水素又は次ｌＡ原子
   数１〜４個の低級アルキル基であり；そしてＲ４は水素
   、炭素原子数１〜７個の低級アルキル基、炭素原子数５
   〜１２個の炭水化物基であり、又はＲ１及びＲ２が水素
   もしくはヒドロキシル基でありＢ、が水素であると亀は
   ステロイド基である） で表わされる脂質、及び適当な追加の脂質及び／又は脂
   肪酸及びステロール以外の追加の脂質、あるいは、ｍが
   ０又は１であり；Ｒ１及び町が相互に独立に、それぞれ
   炭素原子数１０〜２０個Ｏアある成因の脂質、及び場合
   によっては適当な追加の脂質をμ値が７より大である水
   性相に分散せしめること、あるいは、 （ｂ）　　ｍが０又は１であり；基Ｂ、及び８□の内の
   １つが水素、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜７個の低級
   アルキル基であって他方の基がそれぞれ炭素原子数１０
   〜２０個のアルキル基、アルケニル基、アルコキシ基も
   しくはアルケニルオキシ基、又は炭素原子数１０〜５０
   個のアシルオキシ基であり；Ｒ６が水素であり；そして
   Ｒ４はアンモニオ基で置換され′た低級アルキル基であ
   る式（転）の脂質、及び場合によっては追加の脂質、あ
   るいは、鵬が０又は１であり；Ｒ４及びＲ２が相互に独
   立に１それぞれ炭素原子ａ１０〜２０個のアルキル基、
   アルケニル基もしくはアルケニルオキシ基、又は炭素原
   子数１０〜５０個のアシルオキシ基であり；Ｒ１が水素
   であり；そしてＲ４はアンモニオ低級アルキルアンモニ
   オ基で置換でれた低級アルキル基である式（Ａ）の脂質
   、及び適当な追加の脂質ｔＰＨ値が７より小である水性
   相に分散せしめ、そして必要であれば水性相を中和し、
   そして所望によシ得られた単層脂質粗粒を濃縮しセして
   ／又は分離することにより得られる、活性成分を封入し
   九単層脂質職粒ｔ−使用するヒト及び動物の治療方法。