JPS58109851A - 免疫化学的測定方法及び装置 - Google Patents

免疫化学的測定方法及び装置

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JPS58109851A
JPS58109851A JP57215614A JP21561482A JPS58109851A JP S58109851 A JPS58109851 A JP S58109851A JP 57215614 A JP57215614 A JP 57215614A JP 21561482 A JP21561482 A JP 21561482A JP S58109851 A JPS58109851 A JP S58109851A
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JP
Japan
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support
peroxidase
pod
container
electrode
Prior art date
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Application number
JP57215614A
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English (en)
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ライナ−・ラウテルブルク
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Greiner Electronic AG
Original Assignee
Greiner Electronic AG
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Publication date
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    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54373Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
    • G01N33/5438Electrodes

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 この発明は液体サンプル中の物質の免疫化学的測定方法
及び装置に関する。
発明の背景 この種の方法では所望物質の免疫反応が対応する量のI
i織物質を有する結合状または遊離状の反応関与体を生
成させ、この標識物質を放射線により或は光学的測定方
法により検知できるOこれらの測定方法は部分的に極め
て高感度及び/または選択的であるが、このために必要
な装置は購入に際してかなり高額のものであるか。
或は使用に際して高価にりく。
発明の目的及び概要 この発明の課題は上述の欠点を軽減もしくは除去した方
法及び装置を提供するにある。
この発明は広義には固定相(1)に結合した薬剤(ムb
/)に免疫反応を起させ、得られる生成物を酵素標識に
より測定することからなる液体検体(ムg)中の物質の
免疫化学的測定方法において、前記免疫反応により生成
イオンまたは分子の量或は存在するイオンまたは分予め
量が影畳を受け、試量の測定を選択性電極(3)により
行うことを特徴とする液体検体(Ag)中の物質の免疫
化学的測定方法に存する。
本発明はまた。検体容液(ムg)用容器(コ)が固定相
(1)及びその上に付着した免疫化学薬剤と、選択性電
極とを兼備してなることを特徴とする上記免疫化学的測
定方法に使用する装置に関する。
この発明の方法及び装置の他の構成要件は特許請求の範
囲における従属項に更に詳細に説明される〇 発明の好適な実施態様 以下に図を参照してこの発明を説明する。
第1図の工li#Aによればこの発明の方法では図示さ
れていない精製工1を介在させた実質上J段階の潜伏期
において行われる。固定相に結合した薬剤1例えば抗体
ム1)/は求める抗原ムg含有検体と一緒に第7潜伏期
1に付される0結合しなかった検体部分を除き、固定相
lをペルオキシダーゼ溶液と一緒にする。ペルオキシダ
ーゼ溶液は抗体Abコに結合したペルオキシダーゼ(P
OD)を含有し、この抗体ムb−も鵞た求める抗原ムg
に特異性をもつが、大抵の場会抗体ムbコは抗体ムb/
とは別異である0この第1潜伏期■中ペルオ中シダーゼ
PODは間接的ではあるが測定しようとする抗原ムgの
量に応じてこの抗原を介して固定相lに結合する0最後
SC遊離または結合したペルオキシダーゼPODは第S
a伏期に引き出され、過酸化水素の存在下にフッ素化芳
香族化合物R−?例えば参−フルオロアニリン、4I−
フルオロラエノールまたはJ−フルオa−DL−チロシ
ンから対応する量のフッ素イオンシー或は分子が遊離し
、このフッ素イオン或は分子は次いで電気化学的イオン
選択式或はフッ素分子選択式に測定される。
この一般的方法はいわゆる「サンドイッチ目による酵素
−免疫−検定法(IIム)の利点とフッ化物電極の利点
、特−ζその極度に良好な選択性   −の利点とを兼
備し、鳳エムの別の新しい使用分野を開拓するものであ
る0PODIN合体を使用する限り他の1エムも同様に
対象になる。
この発明の方法を実施するための簡略な装置は第1図に
よれば免疫系の固定相用支持体Iを備える。この支持体
Iは容器J6ご挿入される。
この容器コは電極−測定セルに必要な普通の装備、すな
わち測定電極J、標準電極装置ダ及び流通導管装置j(
これらすべては単に一部を示例のために説明したのにす
ぎない)を備える〇その他、この発明による容器コは支
持面6及びりを備え、これらは支持体lの蓋ioの対応
する支持面l及びツと共働する0蓋10の中央から柄1
/が上方に延び、多数の放射状の攪拌羽411Jが容気
中で下方に向って延びるo 1llI j IIに放射
状に延びた攪拌羽根の水平断面図を示す@電極膜の被膜
として使用する三フフ化ランタン結晶/、7と攪拌羽根
11とは結晶13と攪拌羽根/Jとの間に狭い攪拌間隙
lダが生ずるようにそれぞれ形成され、且つ結晶ノJは
容器−中に結合剤で固定されるo Il J図と第3図
とでは前記間隙は製図上の塩由のために過大に描いであ
る。こうして、例えば柄/ltたは蓋10上の支持体/
の回転によって電極膜IJの前lと常に新鮮な液体を輸
送し、それによって高欄定精度が継続的に得られる〇 支持体/に付着している薬剤の量を確実に恒量に保つた
めに、第参図によれば攪拌羽根/Jの攪拌間[/11に
最も接近した部分l、tには薬剤At)/が供給されな
い。
排出装置jを開かないで容器コ中の液体を必要に応じ流
入或は排出させるために、或は排出装置がない場合のた
めに、支持体/は中央通孔16を備え、必要に応じ小さ
な漏斗形部/?を備えることができる。一般に支持体/
と容器コとの形状をそれぞれの特定の要求をかなえるよ
うに造ることができるように1通孔ノロの下部の流出口
もその目的に応じて最適化することができる0このこと
は特にこの発明による方法を自動化する時にも云えるこ
とである。
第3図及び第6図に示すように種々の支持体/を収納箱
/l中に整列しておくのが合法的であり、それらの各々
は例えば測定しようとする他の物質または他の抗体ムg
に和尚する。
作業を容易にし且つ混同を避けるために、支持体l−は
識別手段/f−コダを備えることができ、これらは機械
的に判読できる。
この発明による物質の免疫化学的測定は個々に下記のよ
うに実施できる: 供試抗原五gに対して特異性をもつ抗体を備えた支持体
lを収納箱/1から取出し、これを既に必l!@度に希
釈した検体溶液ムgを計量しである容器−に入れる。支
持体の柄//をありちこっちに回すこと−こよって免疫
反応がすみ中かに平衡に達し、すなわちすべての検体中
の抗原ムgは過剰に存在する支持体上の抗体ム1)/と
結合する。残りの検体溶液は除去し、支持体lと容器2
とをよく洗浄する0その後に容器1に特定の抗体ムbコ
に結合し抗原ムgに対し過剰量のペルオキシダーゼPO
Dを添加する0支持体lをあっちこっちに回転している
間に検体中の抗原Agに正確に対応する量のベルオキシ
ダーゼ複合体が抗原ムgと結合する。再び容器を前のよ
うに洗い1次いで容gJK過酸化水素翼會0.と有機フ
ッ素化合物(R−IF)例えばダーフツ化アニリン、I
I−フッ化フェノール、才たはJ−フッ化−DL−チロ
シンを装入する。さて、再び支持体lを回転させ、生成
したフッ素イオンtたは分子の選択的測定が開始される
0最後に検量−線に照して検体中の抗体ムgの含量を決
定する。
この検量曲線は未知のムgサンプルの代り化段階的に含
有量が変化した既知含有量の抗原溶液、である検量溶液
すなわち標準溶液を全く同じ方法で使用することによっ
て作製することができるO 上述の方法では設備費は測定容器及び洗浄容器のはかに
は付加的な容器は必要としないから設備費は極めて少額
ですむ。場合によっては洗浄容器を省略することができ
、支持体/を操作の始めから終りtで測定*a−の中に
置いたままにしてお−でもよい0その場合には洗浄容器
コ中で例えば通孔/′4を通して洗浄を行うことができ
る。そのうえ、このような小装置は医師が往診に際して
佛帯でき、小装置にも拘らず医師に比較的短時間で極め
て正確な結果を与える。
逆に、すでに述べたように全手動操作を自動化の方向に
改変することも可能である。最後に免疫化学操作はこの
発明の範囲内で種々の改変、例えば抗原と抗体の機能の
交換を行うことがで館、ここに記載の電極以外の他のイ
オン感受性電極ならびに酸素電極を使用することが可能
である〇 この発明のこのような改変は簡略に記載するために個々
jとついては記載しない。
発明の効果 この発明によれば光学的方法の煩雑な準備や放射能によ
る標識化を回避でき、動的測定を容易にする。
要約 この発明の方法では消毒工11(これは記載せず)が介
在する実質上3回の漕伏工程が行われる。固定相に結合
した薬剤例えば抗体ムb/は被検抗原ムg含有検体と一
緒に第7潜伏工程■に付される。結合しなかった検体部
分を除き、固定相lをペルオキシダーゼ溶液と金併する
。このベルオキシダー419液は抗体ムbコと結合した
ペルオキシダーゼPODを含有する0この抗体ムbコは
被検抗原ムgjc41異性を示すが一般化抗体AI)/
とは異なる。この第1潜伏工1!■中にPODは間接的
であるが測定しようとする抗原匂の量に応じて抗原ムg
を介して固定相l#ど結合する。最後に遊離菫たは締金
したペルオキシダーゼPODを第3潜伏工鴨璽に取出し
、ここでHlomの存在下で有機フッ素化合物例えばダ
ーフルオロアニリン、ダーフルオロフェノール菫たはJ
−フルオロ−DL−チロシンから対応する量のフッ素イ
オンまたは分子を遊離され、この量を選択的に決定する
【図面の簡単な説明】
第1図はこの発明の免疫化学手順を示す工程図、II−
図は電極−測定セルの縦断面図、第3図は第1図をム−
Aiiで截った測定セルの平面図、第参図はfs3図の
部分拡大図、第5図は薬剤支持体用収納箱の部分破断立
面図、第を図は支持体用収納箱の平面図である0図中:
l・・支持体 1・・容gk J・・測定用電極 ダ・
・標準電極 !・・流通導管(R人・排出)導管 &、
t、t、?  −・支持面 IO・・蓋 ti・−柄 
/J@苧攪拌羽根 /、7・・三フッ化ランタン結晶(
電極膜)  /11・・攪拌間@  71・・先端部分
 14・・通孔/7・・漏斗形状部 it@・収納@ 
 /1〜Jダー・識別手段 図面の浄書(内容に変更なし) 第5園     第6園 手続補正書 昭和58年1 月18日 特許庁長官殿 1、 事件の表示 昭和jt年特許願第J/14/参号 2、 発明の名称 免疫化学的測定方法及びllll1 3、 補正をする者 事件との関係 特許出願人

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 l 固定相(1)に結合した薬剤(ムb/)に免疫反応
    を起こさせ、得られる生成物を酵素標識を付与すること
    により測定することからなる液体検体(ムg)中の物質
    の免疫化学的測定方法において、前記免疫反応により生
    成イオンオたは生成分子の量才たは存在するイオンまた
    は分子の量が影響を受け、試量の測定を選択性電極(3
    )により行うことを特徴とする、液体検体(ムg)中の
    物質の免疫化学的測定方法0ユ 液体検体(ムg)が攪
    拌要素(/J)により、固定相の支持体(1)上ならび
    に電極(3)上を通過するように液体検体(Ag)を動
    揺させる特許請求の範囲第1項記載の方法。 3 攪拌要素(/J)及び/または液体検体供給用通孔
    (/6)として同時に使用で営る支持体(1)を使用す
    る特許請求の範囲第2項記載の方法0倶 免疫化学的反
    応の関与体(ムg)を測定するために、関与体を一方で
    は固定相の支持体(1)に、他方ではペルオキシダーゼ
    (POD )に結合させ;次いでH會Olヲダーツルオ
    ロアニリン、蓼−フルオーフェノールtたはJ−フルオ
    ロ−DL −チルシンのような有機フッ素化合物(R−
    F)を添加し;このフッ素化合物へ結合または遊離ペル
    オ命シト(POD)による接触分解により生成したフッ
    素イオン(F−)または分子をそれらに対して選択性電
    極(J)により測定することにより前記ペルオ中シト(
    POD) 接触分解を監彼することからなる特許請求の
    範囲第1項記載の方法。 よ 多価抗原(ムg)の測定のためにペルオキシダーゼ
    (POD)ヲベルオキシダー、ゼー抗体(ムbコ)/抗
    1[(Ag)/抗体(ム11/)−支持体(ハのタイプ
    のナンドインチ免疫結合により支持体(1)上に結合さ
    せ、11定を下記のように行う、すなわち、(IL)抗
    体(AI)/)を有する支持体(/1を反応容器中に導
    入し、鉄容器中に検体(Ag)を反応rI器に針量導入
    し、それによって抗原(Ag)と支持体(1)上の抗体
    (*bz)との選択的結合による第1潜伏期(1)を開
    始させ、(四残余の検体溶液反応容器及び支持体から除
    き、(C)ペルオキシダーゼ(POD )−抗体(Ab
    コ)l[合体を過剰に含有するペルオキシダーゼ溶液を
    添加して第コ潜伏期(1)を開始させ、 (diペルオ
    キシダーゼ(POD)と結合した支持体(1)または自
    由に流動できるペルオキシダーゼ(POD)を含む残留
    ペルオキシダーゼ溶液のいずれかを測定容器(2)中に
    移し、過酸化水素(HIOI )−(4’−フルオロア
    ニリン、ダーフルオロフェノールまたは3−フルオロ−
    DL−チロシンのような有機フッ素化合物(R−F)溶
    液をフッ素電極(8)を含む測定容器(2)に添加して
    第J漕伏期(1)を生成させ、(e)前記電極から発生
    した電圧を測定しようとする検体の抗原(Ag)lとし
    て観測することからなる特許請求の範囲第事項記載の方
    法。 ム 検体溶液(Ag)用容器(旬が固定相(1)及びそ
    の上に付着した免疫化学薬剤と、及び選択性電極(3)
    とを兼備してなる。固定相(1)に結合した薬剤(ムt
    )/)lこ免疫反応を起こさせ、得られる生成物を酵素
    標識を付与することにより液体検体(Aa’)中の物質
    の免疫化学的測定方法であって前記免疫反応により生成
    イオンまたは分子量が影響を受け、試量の測定を選択性
    電極(J)により行う液体検体(Ag)中の物質の免疫
    化学的測定装置。 7 固定相(1)が攪拌要素(lコ)として形成された
    固体支持体(1)上に設けられ、且つ攪拌要素(/J)
    と電極(7,7)の先端との間に液体(ムg)用の狭い
    間隙(l#)だけが空間として残されるように支持面〔
    (4)〜(テ)〕を容器(コ)に対して移動可能に設置
    し且つ電極(3)を容器(コ)中に固定してなる特許請
    求の範囲#I≦項記載の装置。 t 攪拌間隙(ll)に隣接した攪拌要素(lコ)の部
    分(#)には薬剤(ム1)/)が付着しない特許請求の
    範囲第7項記載の装置〇 ! 容器(コ)中の支持体(1)が回転可能に設置され
    、軸に千行才たはらせん状で下方及び外方に向いた攪拌
    羽1j (/コ)、蓋(lの及び蓋の中央から上方に突
    出した柄(ll)t−備える特許請求の範囲第7項記載
    の装置0 IQ 柄(//)及び曽(10)を貫通して通孔(14
    )が下方に攪拌羽根間の空間中に才で延び、Cの通孔は
    容器(λ)中への液体の注入及び/または排−出に使用
    される特許請求の範囲第を項記載の装置。
JP57215614A 1981-12-10 1982-12-10 免疫化学的測定方法及び装置 Pending JPS58109851A (ja)

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CH7882/818 1981-12-10

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