JPH1156391A - 乳酸菌のビールに対する有害性の判定法 - Google Patents
乳酸菌のビールに対する有害性の判定法Info
- Publication number
- JPH1156391A JPH1156391A JP9231886A JP23188697A JPH1156391A JP H1156391 A JPH1156391 A JP H1156391A JP 9231886 A JP9231886 A JP 9231886A JP 23188697 A JP23188697 A JP 23188697A JP H1156391 A JPH1156391 A JP H1156391A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- beer
- strain
- test
- strains
- lactobacillus brevis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ラクトバチルス・ブレビスと同定された被検
菌について、ビール中での増殖能力、すなわちビール有
害性の有無について迅速、かつ正確に判定する方法を提
供すると共に、この方法をビール工場での工程管理に利
用する方法を提供すること。 【解決手段】 被検菌であるラクトバチルス・ブレビス
の D−乳酸脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳
動を行い、その移動パターンから当該微生物が属するグ
ループを識別することにより、ビールに対する有害性を
判定する方法並びに当該判定方法を導入することを特徴
とするビール工場における工程管理方法。
菌について、ビール中での増殖能力、すなわちビール有
害性の有無について迅速、かつ正確に判定する方法を提
供すると共に、この方法をビール工場での工程管理に利
用する方法を提供すること。 【解決手段】 被検菌であるラクトバチルス・ブレビス
の D−乳酸脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳
動を行い、その移動パターンから当該微生物が属するグ
ループを識別することにより、ビールに対する有害性を
判定する方法並びに当該判定方法を導入することを特徴
とするビール工場における工程管理方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、乳酸菌のビールに
対する有害性の判定法に関し、詳しくは被検菌であるラ
クトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis) の D
−乳酸脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳動で
の移動度から当該微生物が属するグループを識別し、ビ
ールに対する有害性を判定する方法に関する。さらに、
本発明は、この判定方法を導入することによって、ビー
ル工場における工程管理を行う方法に関する。
対する有害性の判定法に関し、詳しくは被検菌であるラ
クトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis) の D
−乳酸脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳動で
の移動度から当該微生物が属するグループを識別し、ビ
ールに対する有害性を判定する方法に関する。さらに、
本発明は、この判定方法を導入することによって、ビー
ル工場における工程管理を行う方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ビール製造において、乳酸菌は有害微生
物であり、とりわけラクトバチルス・ブレビスが代表的
な有害乳酸菌として知られている。そのため、ビール工
場における工程管理上、乳酸菌を迅速、かつ的確に検出
することが必要であり、これまでに様々な方法が提案さ
れている。
物であり、とりわけラクトバチルス・ブレビスが代表的
な有害乳酸菌として知られている。そのため、ビール工
場における工程管理上、乳酸菌を迅速、かつ的確に検出
することが必要であり、これまでに様々な方法が提案さ
れている。
【０００３】ところで、最近の研究により、ラクトバチ
ルス・ブレビスに属する菌株にはビール中で増殖できる
菌株（ビール有害株）と増殖できない菌株（ビール非有
害株）が存在することが明らかにされている。したがっ
て、ビール工場での微生物管理においては、工程もしく
は環境から分離された微生物が、ラクトバチルス・ブレ
ビスであるか否かを判定するだけでなく、当該菌株がビ
ール有害株であるか否かについても識別し、菌株に応じ
た対策を立案、実施する必要がある。
ルス・ブレビスに属する菌株にはビール中で増殖できる
菌株（ビール有害株）と増殖できない菌株（ビール非有
害株）が存在することが明らかにされている。したがっ
て、ビール工場での微生物管理においては、工程もしく
は環境から分離された微生物が、ラクトバチルス・ブレ
ビスであるか否かを判定するだけでなく、当該菌株がビ
ール有害株であるか否かについても識別し、菌株に応じ
た対策を立案、実施する必要がある。
【０００４】乳酸菌を検出する方法としては、例えばモ
ノクローナル抗体を用いてビール中の乳酸菌を検出する
方法（特開平６−４６８８１号公報）、プライマーを用
いるポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）によってラクト
バチルス属細菌を検出する方法（特開平６−９０７９３
号公報）などがある。しかし、モノクローナル抗体を用
いる方法は、種特異的な検出は可能であるけれども、同
一種内の菌株の表現形質の違いを判別することができな
い。ＰＣＲによる検出法も同様であり、被検菌がビール
を混濁させるものであるか否かを判定することはできな
い。
ノクローナル抗体を用いてビール中の乳酸菌を検出する
方法（特開平６−４６８８１号公報）、プライマーを用
いるポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）によってラクト
バチルス属細菌を検出する方法（特開平６−９０７９３
号公報）などがある。しかし、モノクローナル抗体を用
いる方法は、種特異的な検出は可能であるけれども、同
一種内の菌株の表現形質の違いを判別することができな
い。ＰＣＲによる検出法も同様であり、被検菌がビール
を混濁させるものであるか否かを判定することはできな
い。
【０００５】さらに、ホップやホップのα酸に対する耐
性を調べて乳酸菌等のビールに対する有害性を判定する
方法（特開平９−２６０号公報、Fernandez, J. L. et
al.;Letters in Applied Microbiol., 1992, 14:13-1
6）も提案されているが、これらは試験条件が判定結果
に影響する可能性がある他、被検菌のビール中での増殖
性の有無を正確に判定することは困難である。
性を調べて乳酸菌等のビールに対する有害性を判定する
方法（特開平９−２６０号公報、Fernandez, J. L. et
al.;Letters in Applied Microbiol., 1992, 14:13-1
6）も提案されているが、これらは試験条件が判定結果
に影響する可能性がある他、被検菌のビール中での増殖
性の有無を正確に判定することは困難である。
【０００６】そのため、ビール工場において最も確実に
ラクトバチルス・ブレビスの有害性を判定する方法とし
て、工程等から分離された菌株をビール中に直接接種し
て１週間ないし数週間培養し、増殖能力を確認する方法
（ビール混濁試験）が行われている。しかしながら、こ
の方法は判定に長時間を要するという致命的な問題があ
る。しかも、ビール有害株と判定された菌株であって
も、培地で培養する間にビール中で増殖できなくなる場
合があり、工程管理用培地等で検出された菌株のビール
有害性を、その潜在能力も含めて正確に判断することは
非常に困難である。
ラクトバチルス・ブレビスの有害性を判定する方法とし
て、工程等から分離された菌株をビール中に直接接種し
て１週間ないし数週間培養し、増殖能力を確認する方法
（ビール混濁試験）が行われている。しかしながら、こ
の方法は判定に長時間を要するという致命的な問題があ
る。しかも、ビール有害株と判定された菌株であって
も、培地で培養する間にビール中で増殖できなくなる場
合があり、工程管理用培地等で検出された菌株のビール
有害性を、その潜在能力も含めて正確に判断することは
非常に困難である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】そのため、前記の手法
とは別の観点から、ビール中でのラクトバチルス・ブレ
ビスの増殖能力を判定する方法の開発が望まれている。
本発明者らは、かかる課題を解決すべく検討を重ね、そ
の過程で乳酸菌に存在する酵素に着目した。乳酸菌は生
成する乳酸の光学異性（D-(-) 乳酸とL-(-) 乳酸）の比
によってL型，DL型及び D型に大別される（乳酸旋光
性）。また、乳酸菌に存在し、乳酸の生成に関与する酵
素である乳酸脱水素酵素（以下、LDH と記載する。）
は、光学活性ごとに酵素タンパクは別々に存在し、L-乳
酸脱水素酵素（以下、L-LDH と記載する。）や D−乳酸
脱水素酵素（以下、D-LDH と記載する。）と表現され
る。DL型の乳酸菌であるラクトバチルス・ブレビスに
は、L-LDH と D-LDHの２つの酵素が存在する。このLDH
は、菌種によって性質が異なり、ポリアクリルアミドゲ
ル上で電気泳動をさせると、その分子量や荷電等に応じ
て泳動距離に差が現れるため、分類の指標の一つとして
認められている（Bregey's Manual of Systematic Bact
eriology, 2, 1230(1986) 、乳酸菌実験マニュアル, 95
-97(1992),朝倉書店) 。この性質は菌種を特定するため
に利用されているが、ビール中での増殖性を判定するた
めの指標としては利用されていない。
とは別の観点から、ビール中でのラクトバチルス・ブレ
ビスの増殖能力を判定する方法の開発が望まれている。
本発明者らは、かかる課題を解決すべく検討を重ね、そ
の過程で乳酸菌に存在する酵素に着目した。乳酸菌は生
成する乳酸の光学異性（D-(-) 乳酸とL-(-) 乳酸）の比
によってL型，DL型及び D型に大別される（乳酸旋光
性）。また、乳酸菌に存在し、乳酸の生成に関与する酵
素である乳酸脱水素酵素（以下、LDH と記載する。）
は、光学活性ごとに酵素タンパクは別々に存在し、L-乳
酸脱水素酵素（以下、L-LDH と記載する。）や D−乳酸
脱水素酵素（以下、D-LDH と記載する。）と表現され
る。DL型の乳酸菌であるラクトバチルス・ブレビスに
は、L-LDH と D-LDHの２つの酵素が存在する。このLDH
は、菌種によって性質が異なり、ポリアクリルアミドゲ
ル上で電気泳動をさせると、その分子量や荷電等に応じ
て泳動距離に差が現れるため、分類の指標の一つとして
認められている（Bregey's Manual of Systematic Bact
eriology, 2, 1230(1986) 、乳酸菌実験マニュアル, 95
-97(1992),朝倉書店) 。この性質は菌種を特定するため
に利用されているが、ビール中での増殖性を判定するた
めの指標としては利用されていない。
【０００８】前記したように、ラクトバチルス・ブレビ
スはビール中で生育が可能な菌種の一つであり、ビール
製造における著名な有害菌の一つである。本発明者ら
は、生理学、生化学及び遺伝学的な手法からラクトバチ
ルス・ブレビスと同定された菌株の D-LDHについて、ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動（以下、ＰＡＧＥと記載
する。）を行ったところ、泳動パターンがその移動度に
より５つのグループに分類することができ、しかもビー
ル有害株の D-LDHの移動度が１つのグループに集中する
ことを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに
至った。したがって、本発明の目的は上記した課題を解
決し、ラクトバチルス・ブレビスと同定された被検菌に
ついて、ビール中で増殖する能力があるか、つまりビー
ル有害性の有無について迅速、かつ正確に判定する方法
を提供すると共に、この方法をビール工場での工程管理
に利用する方法を提供することである。
スはビール中で生育が可能な菌種の一つであり、ビール
製造における著名な有害菌の一つである。本発明者ら
は、生理学、生化学及び遺伝学的な手法からラクトバチ
ルス・ブレビスと同定された菌株の D-LDHについて、ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動（以下、ＰＡＧＥと記載
する。）を行ったところ、泳動パターンがその移動度に
より５つのグループに分類することができ、しかもビー
ル有害株の D-LDHの移動度が１つのグループに集中する
ことを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに
至った。したがって、本発明の目的は上記した課題を解
決し、ラクトバチルス・ブレビスと同定された被検菌に
ついて、ビール中で増殖する能力があるか、つまりビー
ル有害性の有無について迅速、かつ正確に判定する方法
を提供すると共に、この方法をビール工場での工程管理
に利用する方法を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】請求項１に記載の本発明
は、被検菌であるラクトバチルス・ブレビスの D−乳酸
脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、
その移動パターンから当該微生物が属するグループを識
別することにより、ビールに対する有害性を判定する方
法である。請求項４に記載の本発明は、請求項１記載の
判定方法を導入することを特徴とするビール工場におけ
る工程管理方法である。
は、被検菌であるラクトバチルス・ブレビスの D−乳酸
脱水素酵素のポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、
その移動パターンから当該微生物が属するグループを識
別することにより、ビールに対する有害性を判定する方
法である。請求項４に記載の本発明は、請求項１記載の
判定方法を導入することを特徴とするビール工場におけ
る工程管理方法である。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の対象となる被検菌は、何
らかの微生物検査法によって検出された微生物につい
て、適当な同定方法、例えば発酵形式，各種乳酸の生成
比，生育温度試験，糖類発酵性試験、DNA-DNA ハイブリ
ダイゼーション、抗血清等によりラクトバチルス・ブレ
ビスと同定されたものである。ラクトバチルス・ブレビ
スと同定された菌株のすべてがビール中で増殖するので
はなく、一部の菌株のみがビール中で増殖（ビール有害
株）する。すなわち、本発明者らが検討した結果、ラク
トバチルス・ブレビスは、当該菌株の D-LDHのＰＡＧＥ
による移動度の違いから５つのグループに分類すること
ができ、ビール有害株は、その中の１グループに属する
ものであることが判明した。本発明では、被検菌のビー
ルに対する有害性の判定にあたり、スタンダード株を用
いる。スタンダード株は、すべて菌株系統保存機関から
入手できるものであり、予めこれら菌株について、その
D-LDHのＰＡＧＥにより移動パターンを測定して、その
移動度の違いから５グループに分類しておく。本発明に
用いるスタンダード株は以下のように分類される。
らかの微生物検査法によって検出された微生物につい
て、適当な同定方法、例えば発酵形式，各種乳酸の生成
比，生育温度試験，糖類発酵性試験、DNA-DNA ハイブリ
ダイゼーション、抗血清等によりラクトバチルス・ブレ
ビスと同定されたものである。ラクトバチルス・ブレビ
スと同定された菌株のすべてがビール中で増殖するので
はなく、一部の菌株のみがビール中で増殖（ビール有害
株）する。すなわち、本発明者らが検討した結果、ラク
トバチルス・ブレビスは、当該菌株の D-LDHのＰＡＧＥ
による移動度の違いから５つのグループに分類すること
ができ、ビール有害株は、その中の１グループに属する
ものであることが判明した。本発明では、被検菌のビー
ルに対する有害性の判定にあたり、スタンダード株を用
いる。スタンダード株は、すべて菌株系統保存機関から
入手できるものであり、予めこれら菌株について、その
D-LDHのＰＡＧＥにより移動パターンを測定して、その
移動度の違いから５グループに分類しておく。本発明に
用いるスタンダード株は以下のように分類される。
【００１１】グループＡ：JCM 1170株，AHU 1508株また
はVTT E78074株 グループＢ：JCM 1559株またはVTT E64029株 グループＣ：JCM 1059T 株,JCM 1061 株,JCM 1065 株ま
たはVTT E64028株 グループＤ：JCM 1102株またはJCM 1183株 グループＥ：JCM 1562株
はVTT E78074株 グループＢ：JCM 1559株またはVTT E64029株 グループＣ：JCM 1059T 株,JCM 1061 株,JCM 1065 株ま
たはVTT E64028株 グループＤ：JCM 1102株またはJCM 1183株 グループＥ：JCM 1562株
【００１２】次に、被検菌について、同様にして D-LDH
のＰＡＧＥによる移動度を求め、どのグループに属する
かを調べる。各グループの菌株について、ビール中での
増殖能力を調べたところ、グループＢに属するものの中
にのみビール有害菌が存在することが判明した。したが
って、被検菌がどのグループに属するかを判定すること
によって、ビール有害菌であるか否かを知ることができ
る。
のＰＡＧＥによる移動度を求め、どのグループに属する
かを調べる。各グループの菌株について、ビール中での
増殖能力を調べたところ、グループＢに属するものの中
にのみビール有害菌が存在することが判明した。したが
って、被検菌がどのグループに属するかを判定すること
によって、ビール有害菌であるか否かを知ることができ
る。
【００１３】以下に、本発明の方法について詳しく説明
する。 （１）粗酵素液の調製方法 ＭＲＳ培地（Difco 社製) ５〜１００ｍｌ、好ましくは
３０ｍｌに、ラクトバチルス・ブレビスと同定された菌
株（被検菌）を１白金耳接種し、１５〜３５℃、好まし
くは３０℃で２〜７日間、好ましくは２〜４日間培養す
る。培養終了後、菌体を緩衝液、好ましくは５０ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）にて２回洗浄した
後、５０００〜１２０００ｒｐｍ、好ましくは８０００
ｒｐｍ、２〜２０℃で５〜３０分間、好ましくは１０分
間遠心分離し、菌体を回収する。
する。 （１）粗酵素液の調製方法 ＭＲＳ培地（Difco 社製) ５〜１００ｍｌ、好ましくは
３０ｍｌに、ラクトバチルス・ブレビスと同定された菌
株（被検菌）を１白金耳接種し、１５〜３５℃、好まし
くは３０℃で２〜７日間、好ましくは２〜４日間培養す
る。培養終了後、菌体を緩衝液、好ましくは５０ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）にて２回洗浄した
後、５０００〜１２０００ｒｐｍ、好ましくは８０００
ｒｐｍ、２〜２０℃で５〜３０分間、好ましくは１０分
間遠心分離し、菌体を回収する。
【００１４】次に、該菌体を適当な試験管に移し、菌体
重量を測定した後、５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）を１０〜４０％（Ｗ／Ｗ）懸濁液、好ましく
は３０％（Ｗ／Ｗ）懸濁液になるように加える。こうし
て得た菌体懸濁液を、細胞破砕装置（例えばSONIFEIER
(R), ブラウン社製）にかけて、例えば５０〜１００ブ
ラウンユニット、好ましくは８０ブラウンユニットで１
〜５分間、好ましくは１〜２分間菌体を破砕する。破砕
後、冷却遠心機にて回転数１００００〜１５０００ｒｐ
ｍ、好ましくは１５０００ｒｐｍ、温度２〜１０℃、好
ましくは４℃で１５〜６０分間、好ましくは３０分間遠
心分離を行って菌体を除き、上清を回収する。これを D
-LDH粗酵素液とする。
重量を測定した後、５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）を１０〜４０％（Ｗ／Ｗ）懸濁液、好ましく
は３０％（Ｗ／Ｗ）懸濁液になるように加える。こうし
て得た菌体懸濁液を、細胞破砕装置（例えばSONIFEIER
(R), ブラウン社製）にかけて、例えば５０〜１００ブ
ラウンユニット、好ましくは８０ブラウンユニットで１
〜５分間、好ましくは１〜２分間菌体を破砕する。破砕
後、冷却遠心機にて回転数１００００〜１５０００ｒｐ
ｍ、好ましくは１５０００ｒｐｍ、温度２〜１０℃、好
ましくは４℃で１５〜６０分間、好ましくは３０分間遠
心分離を行って菌体を除き、上清を回収する。これを D
-LDH粗酵素液とする。
【００１５】（２）ＰＡＧＥ用試料の調製 上記（１）によって得た粗酵素液７８μｌ、０．５Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２μｌ、グリセリン
２０μｌ、マーカー色素１０μｌを、ミクロチューブ
（１．５ｍｌ容）内で混合し、これをＰＡＧＥ用試料と
する。１レーンあたりのタンパク質は２〜１０μｇ程度
である。このとき用いるマーカー色素の組成としては、
ＢＰＢ１ｍｇ、グリセリン１００μｌ、蒸留水９００μ
ｌとする。
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２μｌ、グリセリン
２０μｌ、マーカー色素１０μｌを、ミクロチューブ
（１．５ｍｌ容）内で混合し、これをＰＡＧＥ用試料と
する。１レーンあたりのタンパク質は２〜１０μｇ程度
である。このとき用いるマーカー色素の組成としては、
ＢＰＢ１ｍｇ、グリセリン１００μｌ、蒸留水９００μ
ｌとする。
【００１６】（３）電気泳動 ＰＡＧＥ用のスラブゲルの調製方法は、ＰＡＧＥの常法
に基づき、例えば乳酸菌実験マニュアル（尾崎ら、95-9
7(1992) 朝倉書店）を参考にして行うことができる。な
お、分離ゲルおよび濃縮ゲルのアクリルアミド濃度は、
それぞれ８．４９％と４．５％である。第１表にＰＡＧ
Ｅ用ゲルの作製に用いるＡ〜Ｄ溶液の調製方法を、第２
表に分離ゲルおよび濃縮ゲルの組成を示す。電気泳動条
件として、泳動用緩衝液は２５ｍＭ トリス−１９２ｍ
Ｍ グリシン緩衝液を用い、電流はゲル１枚あたり分離
ゲル１５ｍＡ、濃縮ゲル１０ｍＡを目安に通電する。電
気泳動終了の目安は、試料中のマーカー色素がゲルの先
端から５ｍｍとなったときである。
に基づき、例えば乳酸菌実験マニュアル（尾崎ら、95-9
7(1992) 朝倉書店）を参考にして行うことができる。な
お、分離ゲルおよび濃縮ゲルのアクリルアミド濃度は、
それぞれ８．４９％と４．５％である。第１表にＰＡＧ
Ｅ用ゲルの作製に用いるＡ〜Ｄ溶液の調製方法を、第２
表に分離ゲルおよび濃縮ゲルの組成を示す。電気泳動条
件として、泳動用緩衝液は２５ｍＭ トリス−１９２ｍ
Ｍ グリシン緩衝液を用い、電流はゲル１枚あたり分離
ゲル１５ｍＡ、濃縮ゲル１０ｍＡを目安に通電する。電
気泳動終了の目安は、試料中のマーカー色素がゲルの先
端から５ｍｍとなったときである。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【表２】
【００１９】（４）ビール有害性の判定 電気泳動終了後のゲルを、染色液に３０分間〜１８時
間、好ましくは６０分間浸し、酵素の移動パターンを染
色する。染色液は５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）
または５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）１
００ｍｌに、乳酸リチウム塩(D型またはDL型）１ｍｇ、
β−ＮＡＤ５０ｍｇ、ニトロブルーテトラゾリウム２０
ｍｇ、フェナジンメトスルフェート４ｍｇを溶解させた
ものである。このうち乳酸リチウム塩は、LDH の基質と
なるD-乳酸リチウムまたはDL- 乳酸リチウムを用いる。
染色終了後、該染色液を廃棄した後、７％酢酸水溶液５
０ｍｌを添加し、反応を停止する。
間、好ましくは６０分間浸し、酵素の移動パターンを染
色する。染色液は５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）
または５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）１
００ｍｌに、乳酸リチウム塩(D型またはDL型）１ｍｇ、
β−ＮＡＤ５０ｍｇ、ニトロブルーテトラゾリウム２０
ｍｇ、フェナジンメトスルフェート４ｍｇを溶解させた
ものである。このうち乳酸リチウム塩は、LDH の基質と
なるD-乳酸リチウムまたはDL- 乳酸リチウムを用いる。
染色終了後、該染色液を廃棄した後、７％酢酸水溶液５
０ｍｌを添加し、反応を停止する。
【００２０】この染色により得られた LDHの泳動パター
ンから、相対移動度（染色された被検菌の酵素のバンド
の位置／染色されたＢグループスタンダード株のD-LDH
のバンドの位置）を算出し、その移動度の違いから被検
菌の属するグループを知り、被検菌のビール有害性の有
無を判定する。この相対移動度は、電気泳動時の条件を
ほぼ一定にすることにより、再現性のあるものである。
この判定は、通常、被検菌の酵素と共にスタンダード株
の酵素を電気泳動することにより、該被検菌の酵素がど
のスタンダード株の酵素の泳動パターンと一致するかを
識別することで行うものである。すなわち、スタンダー
ド株の酵素の泳動パターンはＡ〜Ｅの５つのグループに
分類することができ、ビール有害菌はグループＢに属す
るものに限られるので、被検菌の酵素がどのグループに
属するかを識別することによりビール有害菌であるか否
かを判定することができる。通常は、適当なスタンダー
ド株の酵素、好ましくはグループＢに属するスタンダー
ド株を含む１〜数種のスタンダード株の酵素と被検菌の
酵素についてＰＡＧＥを行うことによって判定する。し
かし、被検菌のみの酵素についてＰＡＧＥを行い、その
移動パターンを予めスタンダード株の酵素について求め
ておいた移動パターンと比較することによって判定する
ことも可能である。図１は、ビール工場で分離、同定さ
れた被検菌、ラクトバチルス・ブレビスの酵素について
ＰＡＧＥを行って得た移動パターンを示す図である。図
中、レーン１はJCM 1559株、２はSBC 8001株、３はSBC
8002株、４はSBC 8014株、５はSBC8025株、６はSBC 802
9株、７はSBC 8035株である。
ンから、相対移動度（染色された被検菌の酵素のバンド
の位置／染色されたＢグループスタンダード株のD-LDH
のバンドの位置）を算出し、その移動度の違いから被検
菌の属するグループを知り、被検菌のビール有害性の有
無を判定する。この相対移動度は、電気泳動時の条件を
ほぼ一定にすることにより、再現性のあるものである。
この判定は、通常、被検菌の酵素と共にスタンダード株
の酵素を電気泳動することにより、該被検菌の酵素がど
のスタンダード株の酵素の泳動パターンと一致するかを
識別することで行うものである。すなわち、スタンダー
ド株の酵素の泳動パターンはＡ〜Ｅの５つのグループに
分類することができ、ビール有害菌はグループＢに属す
るものに限られるので、被検菌の酵素がどのグループに
属するかを識別することによりビール有害菌であるか否
かを判定することができる。通常は、適当なスタンダー
ド株の酵素、好ましくはグループＢに属するスタンダー
ド株を含む１〜数種のスタンダード株の酵素と被検菌の
酵素についてＰＡＧＥを行うことによって判定する。し
かし、被検菌のみの酵素についてＰＡＧＥを行い、その
移動パターンを予めスタンダード株の酵素について求め
ておいた移動パターンと比較することによって判定する
ことも可能である。図１は、ビール工場で分離、同定さ
れた被検菌、ラクトバチルス・ブレビスの酵素について
ＰＡＧＥを行って得た移動パターンを示す図である。図
中、レーン１はJCM 1559株、２はSBC 8001株、３はSBC
8002株、４はSBC 8014株、５はSBC8025株、６はSBC 802
9株、７はSBC 8035株である。
【００２１】
【実施例】次に、実施例等により本発明を詳しく説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 試験例１ （１）供試菌株 スタンダード株として、菌株系統保存機関から購入した
ラクトバチルス・ブレビス１０株 (JCM 1059T ,JCM 106
1,JCM 1065,JCM 1170,JCM 1562,JCM 1559,AHU1508,VTT
E64028,VTT E64029,VTT E78074)、該菌の亜種２株（L.
brevis subsp. gravesensis JCM 1102, L. brevis su
bsp. otakiensis JCM 1183)および被検株として、ビー
ル工場から分離、同定したラクトバチルス・ブレビス３
９株 (SBC 8001〜8020,SBC 8025 〜8027,SBC 8029,SBC
8030,SBC 8035 〜8037,SBC 8052,SBC 8271,SBC 8273,SB
C 8284,SBC 8288,SBC 8294,SBC 8301,SBC 8322,SBC 880
9,SBC 8811,SBC 8812)の合計５１株を使用した。なお、
ビール工場から分離した菌株は発酵形式、各種乳酸の生
成比、糖類発酵性試験、生育温度試験、抗血清、DNA-DN
A ハイブリダイゼーションによりラクトバチルス・ブレ
ビスと同定した。以下に、SBC 8002株について実施した
同定試験の結果の一部を示す。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。 試験例１ （１）供試菌株 スタンダード株として、菌株系統保存機関から購入した
ラクトバチルス・ブレビス１０株 (JCM 1059T ,JCM 106
1,JCM 1065,JCM 1170,JCM 1562,JCM 1559,AHU1508,VTT
E64028,VTT E64029,VTT E78074)、該菌の亜種２株（L.
brevis subsp. gravesensis JCM 1102, L. brevis su
bsp. otakiensis JCM 1183)および被検株として、ビー
ル工場から分離、同定したラクトバチルス・ブレビス３
９株 (SBC 8001〜8020,SBC 8025 〜8027,SBC 8029,SBC
8030,SBC 8035 〜8037,SBC 8052,SBC 8271,SBC 8273,SB
C 8284,SBC 8288,SBC 8294,SBC 8301,SBC 8322,SBC 880
9,SBC 8811,SBC 8812)の合計５１株を使用した。なお、
ビール工場から分離した菌株は発酵形式、各種乳酸の生
成比、糖類発酵性試験、生育温度試験、抗血清、DNA-DN
A ハイブリダイゼーションによりラクトバチルス・ブレ
ビスと同定した。以下に、SBC 8002株について実施した
同定試験の結果の一部を示す。
【００２２】（１）糖類発酵性試験糖 類 結 果 * グルコン酸 ＋ アラビノース ＋ キシロース ＋ ラムノース − ソルボース − リボース ＋ グルコース ＋ マンノース − ガラクトース ＋ シュークロース − マルトース ＋ セロビオース − ラクトース − トレハロース − メリビオース ＋ ラフィノース − メレチトース − デンプン − マンニトール − ソルビトール −* ＋：生育した −：生育しない
【００２３】（２）ビール混濁試験 上記のスタンダード株および被検菌株の合計５１株につ
いて、ビール混濁試験を以下の手順で行った。寒天培地
（ＭＲＳ培地、Difco 社製）にて培養した菌体を１白金
耳（約１０6cell)または液体培養（ＭＲＳ培地、Difco
社製、濁度が６６０ｎｍで吸光度１．０程度を示したも
の）した培養液１ｍｌを、市販の瓶詰ビール（３３０ｍ
ｌ）を開栓してビールに接種し、再打栓をした。菌体を
接種したビールは、３０℃で１〜数週間培養を行い、そ
の間ビールの混濁等を目視で確認した。培養期間中に、
ビールの混濁が確認されたものを、ビール有害株と判定
した。この結果、ビール有害株２９株および非有害株２
２株の２グループに分類することができた。結果を第３
表に示す。なお、スタンダード株および被検菌株につい
てビール混濁までの培養日数を調べた結果を第４表に示
す。
いて、ビール混濁試験を以下の手順で行った。寒天培地
（ＭＲＳ培地、Difco 社製）にて培養した菌体を１白金
耳（約１０6cell)または液体培養（ＭＲＳ培地、Difco
社製、濁度が６６０ｎｍで吸光度１．０程度を示したも
の）した培養液１ｍｌを、市販の瓶詰ビール（３３０ｍ
ｌ）を開栓してビールに接種し、再打栓をした。菌体を
接種したビールは、３０℃で１〜数週間培養を行い、そ
の間ビールの混濁等を目視で確認した。培養期間中に、
ビールの混濁が確認されたものを、ビール有害株と判定
した。この結果、ビール有害株２９株および非有害株２
２株の２グループに分類することができた。結果を第３
表に示す。なお、スタンダード株および被検菌株につい
てビール混濁までの培養日数を調べた結果を第４表に示
す。
【００２４】
【表３】
【００２５】
【表４】
【００２６】実施例１ 上記のスタンダード株および被検菌株の合計５１株につ
いて、以下のようにしてビールに対する有害性の判定を
行った。 （１）粗酵素液の調製 ＭＲＳ培地（Difco 社製) ３０ｍｌに、ビール工場より
分離され、ラクトバチルス・ブレビスと同定された菌株
を１白金耳接種し、３０℃で２〜４日間培養した。培養
終了後、菌体を５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）にて２回洗浄後、８０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離し、菌体を沈澱物として回収した。次に、該菌体
を適当な試験管に移し、菌体重量を測定後に５０ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を３０％（Ｗ／Ｗ）
懸濁液になるように加え、これを細胞破砕装置（SONIFE
IER(R), ブラウン社製）にかけて、８０ブラウンユニッ
トで２分間菌体を破砕した。破砕後、冷却遠心機にて回
転数１５０００ｒｐｍ、温度４℃で３０分間遠心分離を
し、上清を回収した。これを粗酵素液とし、以下の実験
に用いた。同様の方法により、スタンダード株について
も粗酵素液を調製した。
いて、以下のようにしてビールに対する有害性の判定を
行った。 （１）粗酵素液の調製 ＭＲＳ培地（Difco 社製) ３０ｍｌに、ビール工場より
分離され、ラクトバチルス・ブレビスと同定された菌株
を１白金耳接種し、３０℃で２〜４日間培養した。培養
終了後、菌体を５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）にて２回洗浄後、８０００ｒｐｍで１０分間遠
心分離し、菌体を沈澱物として回収した。次に、該菌体
を適当な試験管に移し、菌体重量を測定後に５０ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を３０％（Ｗ／Ｗ）
懸濁液になるように加え、これを細胞破砕装置（SONIFE
IER(R), ブラウン社製）にかけて、８０ブラウンユニッ
トで２分間菌体を破砕した。破砕後、冷却遠心機にて回
転数１５０００ｒｐｍ、温度４℃で３０分間遠心分離を
し、上清を回収した。これを粗酵素液とし、以下の実験
に用いた。同様の方法により、スタンダード株について
も粗酵素液を調製した。
【００２７】（２）ＰＡＧＥ用試料の調製 上記の（１）によって得た粗酵素液７８μｌ、０．５Ｍ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２μｌ、グリセリ
ン２０μｌ、マーカー色素（組成：ブロモフェノールブ
ルー（和光純薬社製）１ｍｇ、グリセリン１００μｌ、
蒸留水９００μｌ）１０μｌを、ミクロチューブ（１．
５ｍｌ容）で混合し、これをＰＡＧＥ用試料として用い
た。１レーンあたりのタンパク質は５μｇである。
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．８）２μｌ、グリセリ
ン２０μｌ、マーカー色素（組成：ブロモフェノールブ
ルー（和光純薬社製）１ｍｇ、グリセリン１００μｌ、
蒸留水９００μｌ）１０μｌを、ミクロチューブ（１．
５ｍｌ容）で混合し、これをＰＡＧＥ用試料として用い
た。１レーンあたりのタンパク質は５μｇである。
【００２８】（３）電気泳動 ＰＡＧＥ用ゲルに用いる以下のＡ〜Ｄ溶液を調製した。 Ａ溶液：３０％アクリルアミド溶液；アクリルアミド
（和光純薬社製）２９．２ｇとビス（N,N'- メチレンビ
スアクリルアミド）（和光純薬社製）０．８ｇを蒸留水
に溶かし、１００ｍｌとした。 Ｂ溶液：１．５Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
８）；トリスアミノメタン（和光純薬社製）１８．１７
ｇを蒸留水（７０ｍｌ）に溶かし、濃塩酸でｐＨ８．８
に調整した後、蒸留水で１００ｍｌとした。 Ｃ溶液：０．５Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．
８）；トリスアミノメタン（和光純薬社製）６．０６ｇ
を蒸留水（７０ｍｌ）に溶かし、濃塩酸でｐＨ６．８に
調整した後、蒸留水で１００ｍｌとした。 Ｄ溶液：１０％過硫酸アンモニウム；過硫酸アンモニウ
ム（和光純薬社製）０．１ｇに蒸留水１ｍｌを加えた。 ゲルは、D-LDH およびDL-LDH用の２枚のスラブゲルを作
成した。分離ゲルおよび濃縮ゲルのアクリルアミド濃度
は、それぞれ８．４９％と４．５％で、以下のように配
合した。
（和光純薬社製）２９．２ｇとビス（N,N'- メチレンビ
スアクリルアミド）（和光純薬社製）０．８ｇを蒸留水
に溶かし、１００ｍｌとした。 Ｂ溶液：１．５Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．
８）；トリスアミノメタン（和光純薬社製）１８．１７
ｇを蒸留水（７０ｍｌ）に溶かし、濃塩酸でｐＨ８．８
に調整した後、蒸留水で１００ｍｌとした。 Ｃ溶液：０．５Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ６．
８）；トリスアミノメタン（和光純薬社製）６．０６ｇ
を蒸留水（７０ｍｌ）に溶かし、濃塩酸でｐＨ６．８に
調整した後、蒸留水で１００ｍｌとした。 Ｄ溶液：１０％過硫酸アンモニウム；過硫酸アンモニウ
ム（和光純薬社製）０．１ｇに蒸留水１ｍｌを加えた。 ゲルは、D-LDH およびDL-LDH用の２枚のスラブゲルを作
成した。分離ゲルおよび濃縮ゲルのアクリルアミド濃度
は、それぞれ８．４９％と４．５％で、以下のように配
合した。
【００２９】 8.49%分離ゲル部 4.5%濃縮ゲル部 ──────────────────────────────── Ａ溶液 ５．０ｍｌ ０．９ｍｌ Ｂ溶液 ４．４ ─ Ｃ溶液 ─ １．５ Ｄ溶液 ０．０７０ ０．０１８ 蒸留水 ８．２ ３．６ TEMED * ０．０１ ０．０１ ──────────────────────────────── * N'-N'-N'-N'-テトラメチルエチレンジアミン（ＩＢＩ社製）
【００３０】電気泳動条件は次の通りである。泳動装置
は日本エイドー社製、ミニスラブゲル電気泳動装置を用
い、泳動用緩衝液はトリスアミノメタン（和光純薬社
製）３ｇとグリシン１４．４ｇを蒸留水で１Ｌとした。
また、電流はゲル１枚あたり分離ゲル１５ｍＡ、濃縮ゲ
ル１０ｍＡを目安に通電した。電気泳動は、試料中のマ
ーカー色素がゲルの先端から５ｍｍとなったときに終了
した。
は日本エイドー社製、ミニスラブゲル電気泳動装置を用
い、泳動用緩衝液はトリスアミノメタン（和光純薬社
製）３ｇとグリシン１４．４ｇを蒸留水で１Ｌとした。
また、電流はゲル１枚あたり分離ゲル１５ｍＡ、濃縮ゲ
ル１０ｍＡを目安に通電した。電気泳動は、試料中のマ
ーカー色素がゲルの先端から５ｍｍとなったときに終了
した。
【００３１】（４）ビール有害性の判定 電気泳動終了後のゲルを、活性染色液(D-LDH用またはDL
-LDH用) に６０分間浸し、酵素の移動パターンを染色し
た。染色液の組成は、乳酸リチウム塩(D型またはDL型、
D 型はシグマ社製、DL型は和光純薬社製）１ｍｇ、β−
ＮＡＤ（シグマ社製）５０ｍｇ、ニトロブルーテトラゾ
リウム（和光純薬社製）２０ｍｇ、フェナジンメトスル
フェート（和光純薬社製）４ｍｇを溶解させたものを用
いた。これらを５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）ま
たは５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）１０
０ｍｌに溶解した。反応終了後、染色液を廃棄した。続
いて、７％酢酸水溶液５０ｍｌを添加して反応を停止
し、LDH の泳動パターンの相対移動度を算出した。ビー
ル有害菌は、相対移動度０．７８の位置にL-LDH のバン
ド、１．００の位置にD-LDH のバンドを持ち、すべてグ
ループＢに属する。それ故、グループＢと同一の泳動パ
ターンを示した被検菌株は、ビール有害性の菌株である
と判定される。
-LDH用) に６０分間浸し、酵素の移動パターンを染色し
た。染色液の組成は、乳酸リチウム塩(D型またはDL型、
D 型はシグマ社製、DL型は和光純薬社製）１ｍｇ、β−
ＮＡＤ（シグマ社製）５０ｍｇ、ニトロブルーテトラゾ
リウム（和光純薬社製）２０ｍｇ、フェナジンメトスル
フェート（和光純薬社製）４ｍｇを溶解させたものを用
いた。これらを５０ｍＭ 酢酸緩衝液（ｐＨ５．５）ま
たは５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）１０
０ｍｌに溶解した。反応終了後、染色液を廃棄した。続
いて、７％酢酸水溶液５０ｍｌを添加して反応を停止
し、LDH の泳動パターンの相対移動度を算出した。ビー
ル有害菌は、相対移動度０．７８の位置にL-LDH のバン
ド、１．００の位置にD-LDH のバンドを持ち、すべてグ
ループＢに属する。それ故、グループＢと同一の泳動パ
ターンを示した被検菌株は、ビール有害性の菌株である
と判定される。
【００３２】グループＢに属する菌株のD-LDH のバンド
の移動度を１としたとき、その他のバンドの相対移動度
は以下の通りである。グループ L-LDH移動度 D-LDH移動度 Ａ ０．７８ ０．９７ Ｂ ０．７８ １．００ Ｃ ０．７８ １．０５ Ｄ ０．８５ ０．８５ Ｅ １．２３ １．２３ なお、培養条件によっては移動度０．６３の位置にD-LD
H のバンドが出現する場合もあるが、該バンドの出現に
よって他のバンドの移動度等への影響はない。図２は、
スタンダード株およびビール工場より分離・同定された
被検菌株の各酵素を電気泳動した後のパターンを示す図
である。レーン１はAHU 1508株、２はJCM 1559株、３は
JCM 1059T 株、４はJCM 1102株、５はJCM 1562株、６は
被検菌株（SBC 8002株）である。
の移動度を１としたとき、その他のバンドの相対移動度
は以下の通りである。グループ L-LDH移動度 D-LDH移動度 Ａ ０．７８ ０．９７ Ｂ ０．７８ １．００ Ｃ ０．７８ １．０５ Ｄ ０．８５ ０．８５ Ｅ １．２３ １．２３ なお、培養条件によっては移動度０．６３の位置にD-LD
H のバンドが出現する場合もあるが、該バンドの出現に
よって他のバンドの移動度等への影響はない。図２は、
スタンダード株およびビール工場より分離・同定された
被検菌株の各酵素を電気泳動した後のパターンを示す図
である。レーン１はAHU 1508株、２はJCM 1559株、３は
JCM 1059T 株、４はJCM 1102株、５はJCM 1562株、６は
被検菌株（SBC 8002株）である。
【００３３】上記の結果および第３表から明らかなよう
に、LDH の泳動パターンから算出した相対移動度の違い
から、スタンダード株および被検菌の合計５１株は、す
べてＡ〜Ｅの５つのグループのいずれかに分類された。
また、第３表に示す通り、ビール混濁試験によりビール
有害株と判定された菌株は、すべてグループＢに属して
いる。なお、グループＢに属するものでも非有害株と判
定されるものがあるが、これら菌株は有害株に変わる可
能性や有害株であったものが何らかの原因で非有害株に
変わった可能性がある。したがって、グループＢに属す
る菌株はビール有害株と判定するのが妥当である。
に、LDH の泳動パターンから算出した相対移動度の違い
から、スタンダード株および被検菌の合計５１株は、す
べてＡ〜Ｅの５つのグループのいずれかに分類された。
また、第３表に示す通り、ビール混濁試験によりビール
有害株と判定された菌株は、すべてグループＢに属して
いる。なお、グループＢに属するものでも非有害株と判
定されるものがあるが、これら菌株は有害株に変わる可
能性や有害株であったものが何らかの原因で非有害株に
変わった可能性がある。したがって、グループＢに属す
る菌株はビール有害株と判定するのが妥当である。
【００３４】
【発明の効果】本発明によれば、ラクトバチルス・ブレ
ビスと同定された菌株がビール中で増殖する能力を有す
るかどうかの判定を、従来の方法よりも迅速、かつ正確
に行うことができる。したがって、本発明の方法をビー
ル工場における工程管理の指標として導入することによ
り、ビール製造工程における微生物管理の安定化に寄与
することができる。
ビスと同定された菌株がビール中で増殖する能力を有す
るかどうかの判定を、従来の方法よりも迅速、かつ正確
に行うことができる。したがって、本発明の方法をビー
ル工場における工程管理の指標として導入することによ
り、ビール製造工程における微生物管理の安定化に寄与
することができる。
【図１】 ビール工場より分離されたラクトバチルス・
ブレビス菌株の D-LDHを試料として用いた電気泳動図で
ある。
ブレビス菌株の D-LDHを試料として用いた電気泳動図で
ある。
【図２】 スタンダード株および被検菌株の D-LDHを試
料として用いた電気泳動図である。
料として用いた電気泳動図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年９月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】そのため、前記の手法
とは別の観点から、ビール中でのラクトバチルス・ブレ
ビスの増殖能力を判定する方法の開発が望まれている。
本発明者らは、かかる課題を解決すべく検討を重ね、そ
の過程で乳酸菌に存在する酵素に着目した。乳酸菌は生
成する乳酸の光学異性（D-(-) 乳酸とL-(+) 乳酸）の比
によってL型，DL型及び D型に大別される（乳酸旋光
性）。また、乳酸菌に存在し、乳酸の生成に関与する酵
素である乳酸脱水素酵素（以下、LDH と記載する。）
は、光学活性ごとに酵素タンパクは別々に存在し、L-乳
酸脱水素酵素（以下、L-LDH と記載する。）や D−乳酸
脱水素酵素（以下、D-LDH と記載する。）と表現され
る。DL型の乳酸菌であるラクトバチルス・ブレビスに
は、L-LDH と D-LDHの２つの酵素が存在する。このLDH
は、菌種によって性質が異なり、ポリアクリルアミドゲ
ル上で電気泳動をさせると、その分子量や荷電等に応じ
て泳動距離に差が現れるため、分類の指標の一つとして
認められている（Bregey's Manual of Systematic Bact
eriology, 2, 1230(1986) 、乳酸菌実験マニュアル, 95
-97(1992),朝倉書店) 。この性質は菌種を特定するため
に利用されているが、ビール中での増殖性を判定するた
めの指標としては利用されていない。
とは別の観点から、ビール中でのラクトバチルス・ブレ
ビスの増殖能力を判定する方法の開発が望まれている。
本発明者らは、かかる課題を解決すべく検討を重ね、そ
の過程で乳酸菌に存在する酵素に着目した。乳酸菌は生
成する乳酸の光学異性（D-(-) 乳酸とL-(+) 乳酸）の比
によってL型，DL型及び D型に大別される（乳酸旋光
性）。また、乳酸菌に存在し、乳酸の生成に関与する酵
素である乳酸脱水素酵素（以下、LDH と記載する。）
は、光学活性ごとに酵素タンパクは別々に存在し、L-乳
酸脱水素酵素（以下、L-LDH と記載する。）や D−乳酸
脱水素酵素（以下、D-LDH と記載する。）と表現され
る。DL型の乳酸菌であるラクトバチルス・ブレビスに
は、L-LDH と D-LDHの２つの酵素が存在する。このLDH
は、菌種によって性質が異なり、ポリアクリルアミドゲ
ル上で電気泳動をさせると、その分子量や荷電等に応じ
て泳動距離に差が現れるため、分類の指標の一つとして
認められている（Bregey's Manual of Systematic Bact
eriology, 2, 1230(1986) 、乳酸菌実験マニュアル, 95
-97(1992),朝倉書店) 。この性質は菌種を特定するため
に利用されているが、ビール中での増殖性を判定するた
めの指標としては利用されていない。
Claims (4)
- 【請求項１】 被検菌であるラクトバチルス・ブレビス
（Lactobacillus brevis) の D−乳酸脱水素酵素のポリ
アクリルアミドゲル電気泳動を行い、その移動パターン
から当該微生物が属するグループを識別することによ
り、ビールに対する有害性を判定する方法。 - 【請求項２】 被検菌であるラクトバチルス・ブレビス
を５グループに分類し、ビールに対する有害性を判定す
る請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 被検菌であるラクトバチルス・ブレビス
が、スタンダード株ラクトバチルス・ブレビスJCM 1559
株または同VTT E64029株と同一グループに属すると識別
されたとき、ビール有害菌であると判定する請求項１記
載の方法。 - 【請求項４】 請求項１記載の判定方法を導入すること
を特徴とするビール工場における工程管理方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9231886A JPH1156391A (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 乳酸菌のビールに対する有害性の判定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9231886A JPH1156391A (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 乳酸菌のビールに対する有害性の判定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1156391A true JPH1156391A (ja) | 1999-03-02 |
Family
ID=16930579
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9231886A Withdrawn JPH1156391A (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 乳酸菌のビールに対する有害性の判定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1156391A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002243627A (ja) * | 2001-02-19 | 2002-08-28 | Asahi Breweries Ltd | 強制劣化装置及び混濁能予測方法 |
| WO2007111210A1 (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Asahi Breweries, Ltd. | 難培養化したビール類混濁乳酸菌の作製方法及びビール類混濁乳酸菌の検査培地 |
| WO2008023665A1 (fr) * | 2006-08-21 | 2008-02-28 | Sapporo Breweries Limited | Souche bactérienne possédant une activité anti-allergique et immunostimulante, et boisson, aliment, agent anti-allergique et agent immunostimulant comprenant la souche bactérienne |
-
1997
- 1997-08-14 JP JP9231886A patent/JPH1156391A/ja not_active Withdrawn
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002243627A (ja) * | 2001-02-19 | 2002-08-28 | Asahi Breweries Ltd | 強制劣化装置及び混濁能予測方法 |
| JP4628559B2 (ja) * | 2001-02-19 | 2011-02-09 | アサヒビール株式会社 | 強制劣化装置及び混濁能予測方法 |
| WO2007111210A1 (ja) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Asahi Breweries, Ltd. | 難培養化したビール類混濁乳酸菌の作製方法及びビール類混濁乳酸菌の検査培地 |
| JP4986302B2 (ja) * | 2006-03-24 | 2012-07-25 | アサヒビール株式会社 | 難培養化したビール類混濁乳酸菌の作製方法及びビール類混濁乳酸菌の検査培地 |
| WO2008023665A1 (fr) * | 2006-08-21 | 2008-02-28 | Sapporo Breweries Limited | Souche bactérienne possédant une activité anti-allergique et immunostimulante, et boisson, aliment, agent anti-allergique et agent immunostimulant comprenant la souche bactérienne |
| JPWO2008023665A1 (ja) * | 2006-08-21 | 2010-01-07 | サッポロビール株式会社 | 抗アレルギー作用及び免疫賦活作用を有する菌株、並びにその菌株を含有する飲料、食品、抗アレルギー剤及び免疫賦活剤 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2256218B1 (en) | Primers for tubercle bacillus detection, and method of detecting human tubercle bacillus therewith | |
| McDaniels et al. | Confirmational identification of Escherichia coli, a comparison of genotypic and phenotypic assays for glutamate decarboxylase and beta-D-glucuronidase | |
| JP3749540B2 (ja) | Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属およびｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属の細菌の検出のための核酸プローブ、および麦酒腐敗の原因となる細菌物質の検出方法 | |
| Villalonga et al. | Disposable electrochemical biosensors for Brettanomyces bruxellensis and total yeast content in wine based on core-shell magnetic nanoparticles | |
| CN102449137B (zh) | 包括结核分枝杆菌复合群分枝杆菌的分枝杆菌培养基和培养方法 | |
| CN101535476A (zh) | 修饰型黄素腺嘌呤二核苷酸依赖性葡萄糖脱氢酶 | |
| JP2809537B2 (ja) | リステリア属の細菌を同定する方法及び媒質 | |
| WO2013166460A1 (en) | Antibiotic susceptibility testing using probes for preribosomal rna | |
| Herrero et al. | Use of flow cytometry to follow the physiological states of microorganisms in cider fermentation processes | |
| Kim et al. | Use of conventional and real-time polymerase chain reaction for confirmation of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in a broth-based culture system ESP II | |
| US5173401A (en) | Detection of neisseria gonorrohoeae | |
| JPH1156391A (ja) | 乳酸菌のビールに対する有害性の判定法 | |
| JP2003052392A (ja) | 微生物の検出方法および検出キット | |
| Nagy et al. | Optimization of conditions for culture of the test bacteria used for direct bioautographic detection 1. The gram-positive test bacterium Bacillus subtilis | |
| US20090136930A1 (en) | Method for the identification of microorganisms by means of in situ hybridization and flow cytometry | |
| WO2021013041A1 (zh) | 一种利用纳米孔进行细菌耐药性的快速检测方法、装置和系统 | |
| JP2005525804A (ja) | ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよびフローサイトメトリーを用いる微生物の同定方法 | |
| CA2549658A1 (en) | Electrochemical assay for the identification of microorganisms | |
| RUAN et al. | Detection of viable Listeria monocytogenes in milk using an electrochemical method | |
| JP2003250557A (ja) | ジャイレース遺伝子を用いてラクトバチルス・ブレビス菌のビール混濁性を判定する方法 | |
| CN112725474B (zh) | 含有特异性分子靶标的单核细胞增生李斯特菌标准菌株及其检测和应用 | |
| JP2005006556A (ja) | ビール有害菌の検出方法 | |
| CN113913318B (zh) | 一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用 | |
| CN117987579B (zh) | 一种检测鸡白痢沙门菌的引物和探针、检测体系和用途 | |
| CN116987802B (zh) | 一种用于检测呕吐型蜡样芽孢杆菌的rpa引物对及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20041102 |