JPH11514101A - 組換えウサギ組織因子に基づくプロトロンビン時間試薬 - Google Patents
組換えウサギ組織因子に基づくプロトロンビン時間試薬Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.以下の工程を包含する、血漿サンプル中のプロトロンビン時間またはフィブ リノーゲンレベルを決定するための液体試薬または凍結乾燥された試薬の調製方 法: (a) リン脂質小胞を含有する溶液、懸濁液、または分散液を提供する工程; (b) 組織因子タンパク質を該溶液、懸濁液、または分散液と混合する工程; および (c) 工程(b)において生成された混合物を、該タンパク質の該リン脂質小胞と の会合を可能にする条件下で、十分な時間インキュベートし、血漿サンプル中で 凝固を誘導し得る試薬を生成する工程。 2.前記工程(b)の単離された組織因子タンパク質が、組換えウサギ組織因子タ ンパク質である、請求項1に記載の方法。 3.前記工程(c)のタンパク質含有リン脂質小胞を含有する溶液を処方緩衝液と 混合するさらなる工程を包含する、請求項1に記載の方法。 4.前記工程(b)の単離された組織因子タンパク質が、組換えウサギ組織因子タ ンパク質である、請求項3に記載の方法。 5.請求項1、請求項2、請求項3、または請求項4に記載の方法により生成さ れた試薬。 6.前記タンパク質含有リン脂質小胞が、リン脂質1mgあたり約0.05μg〜約30 μgの単離されたタンパク質含有組織因子を含有する、請求項5に記載の試薬。 7.前記タンパク質含有リン脂質小胞が、リン脂質1mgあたり約0.2μg〜約20μ gの単離されたタンパク質含有組織因子を含有する、請求項6に記載の試薬。 8.前記血漿サンプルの凝固に必要な量のカルシウムイオンをさらに含む、請求 項5に記載の試薬。 9.前記血漿サンプルの凝固に必要なイオン強度をさらに含む、請求項8に記載 の試薬。 10.Hepes緩衝液をさらに含む、請求項9に記載の試薬。 11.組換えウサギ組織因子の精製された調製物であって、該調製物は: N末端からC末端へ (a) 細胞外ドメイン、 (b) 脂質結合ドメイン、 (c) 細胞内ドメイン、および (d) 該組換えウサギ組織因子を選択的に富化するのに使用するためのアフィ ニティータグ、 を規定するアミノ酸配列を含む組換えウサギ組織因子を含み、 ここで、該精製された調製物は、アフィニティータグのない組換えウサギ組織 因子に比較して、脂質結合ドメインを有する組換えウサギ組織因子タンパク質に ついて富化される、調製物。 12.前記アフィニティータグが、複数の連続的に連結したヒスチジンアミノ酸 を含む、請求項11に記載の精製された調製物。 13.前記結合ドメインが(His)6配列を含む、請求項12に記載の精製された調 製物。 14.前記組換えウサギ組織因子が、第VII因子および第VIIa因子と反応する、 請求項11に記載の精製された調製物。 15.前記組換えウサギ組織因子が、約1.0のISI値を有するプロトロンビン時間 試薬を生成するために用いられ得る、請求項11に記載の精製された調製物。 16.前記組換えウサギ組織因子が、ヒトまたはウシの組織因子と比較して、血 漿サンプル中のPIVKAに対してより感受性でない、請求項11に記載の精製され た調製物。 17.本質的に以下からなる、血漿サンプル中のプロトロンビン時間またはフィ ブリノーゲンレベルを決定するための液体試薬または凍結乾燥された試薬: (a) 組換えウサギ組織因子タンパク質; (b) ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、およびこれらの組合せか らなる群より選択されるリン脂質;および (c) 緩衝液系。 18.脂質に対するタンパク質の比が、約0.05μgタンパク質/mgリン脂質〜約30 μgタンパク質/mgリン脂質である、請求項17に記載の試薬。 19.前記脂質に対するタンパク質の比が、約0.2μgタンパク質/mgリン脂質〜 約20μgタンパク質/mgリン脂質である、請求項18に記載の試薬。 20.前記リン脂質が、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリンの混 合物を、約5:95〜約95:5の比で含有する、請求項17に記載の試薬。 21.前記リン脂質が、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリンの混 合物を、約15:85〜約60:40の比で含有する、請求項17に記載の試薬。 22.前記リン脂質が、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリンの混 合物を、約20:80〜約30:70の比で含有する、請求項17に記載の試薬。 23.前記緩衝液系が、血漿サンプルの凝固のために十分な量のカルシウムイオ ンを含有する、請求項17に記載の試薬。 24.前記緩衝液系が、血漿サンプルにおける凝固を補助するために十分なイオ ン強度を有する、請求項17または請求項23に記載の試薬。 25.前記緩衝液系がHepesを含有する、請求項17または請求項23に記載の 試薬。 26.前記緩衝液系がHepesを含有する、請求項24に記載の試薬。 27.請求項17に記載の試薬であって、前記組織因子タンパク質が、以下: N末端からC末端へ、 (a) 細胞外ドメイン、 (b) 脂質結合ドメイン、 (c) 細胞内ドメイン、および (d) 該組換えウサギ組織因子を選択的に富化するのに使用するためのアフィ ニティータグ、を規定するアミノ酸配列、 を含む組換えウサギ組織因子の精製された調製物を含み、 ここで、該精製された調製物は、アフィニティータグのない組換えウサギ組織 因子に比較して、脂質結合ドメインを有する組換えウサギ組織因子タンパク質に ついて富化される、試薬。 28.血漿サンプル中のフィブリノーゲンの量を測定するための方法であって、 請求項5、請求項17、または請求項27に記載の試薬を用いる工程を包含する 、方法。
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