JPH11508441A - 遺伝子治療用の新規組換えdnaベクター - Google Patents
遺伝子治療用の新規組換えdnaベクターInfo
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 異種ウイルスプロモーターの発現を抑制するために、真核生物細胞DNA に導入するための組換えDNAベクターであって、 a)標的細胞中で感染および発現を指令することができる、ベクターのDNAま たはベクターの少なくとも一部に対応するDNAと; b)少なくとも1つの配列は、Naf活性を有するペプチドまたはその誘導体を コードする、1以上のコード配列とを、機能的に結合して含有する組換えベクタ ー。 2. 請求項1に記載の組換えベクターであって、抑制すべき前記異種ウイルス プロモーターが、HIVまたはMLVプロモーターから選択される組換えベクタ ー。 3. 請求項1〜2のいずれか一方に記載の組換えベクターであって、前記ベク ターが、RNAウイルスおよびDNAウイルスベクターの群から選択されるウイ ルスベクター、または真核生物発現ベクターの群から選択されるプラスミドベク ターである組換えベクター。 4. 請求項3に記載の組換えベクターであって、該RNAウイルスベクターが 、レトロウイルスベクターから選択される組換えベクター。 5. 請求項3に記載の組換えベクターであって、前記DNAウイルスベクター が、アデノウイルス、アデノウイルス関連ウイルスおよびヘルペスウィルスベク ターの群から選択される組換えベクター。 6. 請求項4に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスゲノムが 、複製欠損である組換えベクター。 7. 請求項4に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスベクター は、5’LTR領域と;少なくとも1つのコード配列は、異種ウイルスプロモー ターの発現を抑制するためのNaf活性を有するペプチドまたはその誘導体をコ ードする、1以上の前記コード配列と;3’LTR領域とを、機能的に結合して 含有しており、前記5’LTR領域はU3−R−U5構造を含み、また前記3’ LTR領域は完全にまたは部分的に欠失したU3領域を含んでいて、該欠失した U3領域は、プロモーター変換を受けるように、ポリリンカー配列により置換さ れ且つ、R領域およびU5領域がこれに続いている組換えベクター。 8. 請求項4に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスベクター が、5’LTR領域および3’LTR領域を機能的に結合して含有しており、前 記5’LTR領域はU3−R−U5構造を含み、また前記3’LTR領域は完全 にまたは部分的に欠失したU3領域を含んでいて、前記欠失したU3領域は、少 なくとも1つのコード配列が異種ウイルスプロモーターの発現を抑制するための Naf活性を有するペプチドまたはその誘導体をコードする1以上の前記コード 配列により置換されており、R領域およびU5領域がこれに続いている組換えベ クター。 9. 異種ウイルスプロモーターの発現を抑制するための、請求項1〜8に記載 の組換えベクターの使用。 10. 異種ウイルスプロモーターの発現を抑制するための、Naf活性を有す るペプチドまたはその誘導体の使用。 11. 請求項9または10のいずれか1項に記載の使用であって、前記ウイル スプロモーターが、HIVプロモーターおよびMLVプロモーターから選択され る使用。 12. B細胞またはT細胞DNA中に導入するための遺伝子治療用の組換えD NAベクターであって、 a)B細胞またはT細胞に感染できる、ベクターのDNAまたはベクターの少な くとも一部に対応するDNAと; b)少なくとも1つの配列が、Sag活性を有するペプチドまたはその誘導体を コードし、かつ少なくとも1つの配列が、治療用ペプチドまたはタンパク質をコ ードする、1つまたはそれ以上のコード配列とを、機能的に結合して含有する組 換えDNAベクター。 13. 請求項12に記載の組換えベクターであって、前記ベクターが、RNA ウイルスベクターおよびDNAウイルスベクターの群から選択されるウイルスベ クター、または真核生物発現ベクターの群から選択されるプラスミドベクターで ある組換えベクター。 14. 請求項13に記載の組換えベクターであって、前記RNAウイルスベク ターが、レトロウイルスベクターから選択される組換えベクター。 15. 請求項13に記載の組換えベクターであって、前記DNAウイルスベク ターが、アデノウイルス、アデノウイルス関連ウイルスおよびヘルペスウィルス ベクターの群から選択される組換えベクター。 16. 請求項14項に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスゲ ノムが、複製欠損である組換えベクター。 17. 請求項14項に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスベ クターは、5’LTR領域と;少なくとも1つの配列は、Sag活性を有するペ プチドまたはその誘導体をコードし、かつ少なくとも1つの配列は、治療用ペプ チドまたはタンパク質をコードする1以上の前記コード配列と;3’LTR領域 とを機能的に結合して含有しており、前記5’LTR領域はU3−R−U5構造 を含み、また前記3’LTR領域は完全にまたは部分的に欠失したU3領域を含 んでいて、該欠失したU3領域は、プロモーター変換を受けるように、ポリリン カー配列により置換されて且つR領域およびU5領域がこれに続いている組換え ベクター。 18. 請求項14に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスベク ターは、5’LTR領域および3’LTR領域を機能的に結合して含有しており 、前記5’LTR領域はU3−R−U5構造を含み、また前記3’LTR領域は 完全にまたは部分的に欠失したU3領域を含んでいて、該欠失したU3領域は、 少なくとも1つの配列がSag活性を有するペプチドまたはその誘導体をコード し、かつ少なくとも1つの配列が治療用ペプチドまたはタンパク質をコードする 1以上の前記コード配列により置換されており、R領域およびU5領域がこれに 続いている組換えベクター。 19. 請求項12〜18のいずれか1項に記載の組換えベクターの使用であっ て、係るベクターを有するB細胞またはT細胞を特異的に増幅するための使用。 20. 請求項1から19のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、前 記コード配列が、さらに、少なくとも1つの制御要素およびプロモーターから選 択される非コード配列を含んでなる組換えベクター。 21. 請求項20に記載の組換えベクターであって、前記非コード配列が、S V40、サイトメガロウイルス、ラウス肉腫ウイルス、β−アクチン、HIV− LTR、MMTLV−LTR、B細胞またはT細胞特異的なプロモーターおよび 腫瘍特異的なプロモーターからなる群の少なくとも1のプロモーターから選択さ れる組換えベクター。 22. 請求項7または17のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、 前記ポリリンカー配列が、少なくとも1つのユニークな制限部位を有する組換え ベクター。 23. 請求項22に記載の組換えベクターであって、前記ポリリンカー配列が 、異種DNA断片の少なくとも1つの挿入体を含有する組換えベクター。 24. 請求項23に記載の組換えベクターであって、前記異種DNA断片が、 制御要素およびプロモーターよりなる群の1以上の要素から選択される組換えベ クター。 25. 請求項20または24のいずれか1項に記載の組換えベクターであって 、前記制御要素およびプロモーターが、その発現において標的細胞特異的である 組換えベクター。 26. 請求項25項に記載の組換えベクターであって、前記標的細胞特異的な 制御要素およびプロモーターは、HIV;WAP;MMTV;β−ラクトグロブ リンおよびカゼイン特異的制御要素およびプロモーター;炭酸脱水酵素IIおよび β−グルコキナーゼ制御要素およびプロモーターを含む、膵臓特異的な制御要素 およびプロモーター;免疫グロブリンおよびMMTVリンパ球特異的制御要素お よびプロモーターを含む、リンパ球特異的な制御要素およびプロモーター;グル ココルチコイドホルモンに対する応答性を与えるかまたは乳腺に対して発現を指 令する、MMTVP2のような、MMTV特異的な制御要素およびプロモーター;T 細胞受容体遺伝子、CD4受容体プロモーターのような、T細胞特異的な制御要 素およびプロモーター;免疫グロブリンプロモーターおよびmb1のような、B 細胞特異的な制御要素およびプロモーターよりなる群の1つまたはそれ以上の要 素から選択される組換えベクター。 27. 請求項20または24項のいずれか1項に記載の組換えベクターであっ て、前記制御要素が、トランス作用性分子により制御可能な組換えベクター。 28. 請求項20または24に記載の組換えベクターであって、前記制御要素 およびプロモーターは、前記レトロウイルスベクターの少なくとも1つのコード 配列の発現を制御する組換えベクター。 29. 請求項1〜28のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、前記 レトロウイルスベクターのLTR領域が、MLV、MMTV、MSV、SIV、 HIV、HTLV、FIV、FeLV、BLVおよびMPMVのLTRよりなる 群の少なくとも1つの要素から選択される組換えベクター。 30. 請求項28に記載の組換えベクターであって、前記レトロウイルスベク ターが、BAGベクターである組換えベクター。 31. 請求項1〜30のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、前記 コード配列が、さらに、マーカー遺伝子、治療用遺伝子、抗ウイルス遺伝子、抗 腫瘍遺伝子、およびサイトカイン遺伝子よりなる群の1つまたはそれ以上の要素 から追加して選択される組換えベクター。 32. 請求項1〜31のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、前記 マーカーまたは治療用遺伝子が、β−ガラクトシダーゼ、ネオマイシン、アルコ ール脱水素酵素、ピューロマイシン、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフ ェラーゼ(HPRT)、ヒグロマイシンおよび分泌アルカリホスファターゼのよ うなタンパク質をコードするマーカー遺伝子;または単純ヘルペスウィルスチミ ジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、グアニンホスホリボシルトランスフェラ ーゼ(gpt)、チトクロームP450のようなタンパク質をコードする治療用 遺伝子;およびP.T.O.、SDIのようなタンパク質をコードする細胞周期 制御遺伝子;またはp53のようなタンパク質をコードする腫瘍抑制遺伝子;ま たはメリチン、セクロピンもしくはIL−2のようなサイトカインのようなタン パク質をコードする抗増殖遺伝子よりなる群から選択される組換えベクター。 33. 請求項1〜32のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、レト ロウイルスの組込みに関連するレトロウイルス配列が、改変されているか、また は少なくとも部分的に欠失している組換えベクター。 34. 請求項1〜33のいずれか1項に記載の組換えベクターであって、1つ またはそれ以上の細胞内配列またはその一部と相同的なDNA断片を含有する組 換えベクター。 35. 第1成分としての請求項1〜34のいずれか1項に記載のレトロウイル スベクターと;前記レトロウイルスベクターをパッケージングするために必要な タンパク質をコードする、少なくとも1つのレトロウイルスウイルスまたは組換 えレトロウイルス構築物を有するパッケージング細胞株とを含んでなる、組換え レトロウイルスベクター系。 36. 請求項35に記載の組換えレトロウイルスベクター系であって、パッケ ージング細胞株が、ψ2、ψ−Crip、ψ−AM、GP+E−86、PA31 7およびGP+envAM−12よりなる群から選択される組換えレトロウイル スベクター系。 37. ヒトまたは動物細胞中にインビトロまたはインビボでSagまたはNa f活性を有するペプチドをコードするヌクレオチド配列を導入するための非治療 的または治療的方法であって、請求項35に記載のレトロウイルスベクター系の パッケージング細胞株を、請求項1〜36のいずれか1項に記載のレトロウイル スベクターでトランスフェクションすることと、パッケージング細胞株により産 生される前記組換えレトロウイルスで標的細胞集団を感染することとを含んでな る方法。 38. 請求項35に記載のレトロウイルスベクター系において、請求項1〜3 4のいずれか1項に記載のレトロウイルスベクターを複製することにより産生さ れるレトロウイルスプロウイルスであって、3’LTR中のU3または前記ポリ リンカーおよび前記ポリリンカーに挿入されたいかなる配列も、感染標的細胞に おける逆転写の過程で重複して複製され、得られたプロウイルスの3’LTRと 同様に5’LTRにも現れ、また5’LTRのU5は、感染標的細胞における逆 転写の過程で重複して複製されて、得られたプロウイルスの5’LTRと同様に 3’LTRにも現れるプロウイルス。 39. レトロウイルス粒子であって、請求項35に記載のレトロウイルスベク ター系のパッケージング細胞株を、請求項1〜34のいずれか1項に記載のレト ロウイルスベクターでトランスフェクションすることと、前記レトロウイルス粒 子を単離することとにより産生されるレトロウイルス粒子。 40. 請求項39に記載のレトロウイルス粒子でトランスフェクションされた 宿主細胞。 41. 前記相同的な細胞内配列中のターゲティングされた組込みのための、請 求項34に記載の組換えベクターの使用。 42. 前記の相同的な細胞内配列中のターゲティングされた組込みのための、 請求項35に記載の組換えレトロウイルスベクター系の使用。 43. 前記相同的な細胞内配列中のターゲティングされた組込みのための、請 求項38に記載のレトロウイルスプロウイルスの使用。 44. 請求項38に記載のレトロウイルスプロウイルスのmRNA。 45. 請求項1〜34のいずれか1項に記載のベクターのRNA。
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