JPH11507237A

JPH11507237A - 単球走化性蛋白質−４

Info

Publication number: JPH11507237A
Application number: JP9502196A
Authority: JP
Inventors: リ，ハオドン; ルーベン，スティーブン・エム; サットン，グランジャー・ジー・ザ・サード
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Current assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1999-06-29
Also published as: MX9709192A; EP0832112A4; US5866373A; US5880263A; AU6541396A; CN1192751A; KR19990022330A; CA2224099A1; WO1996040762A1; EP0832112A1

Abstract

(57)【要約】ヒト単球走化性蛋白質−４ポリペプチドおよびポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）ならびに組換え技術によるそのポリペプチドの産生方法を開示する。また、該ポリペプチドを、腫瘍を治療し、創傷治癒を促進し、寄生虫感染と闘い、造血調節のために幹細胞可動化、骨髄保護基およびニューロン保護に対し予防および／または治療するために該ポリペプチドを使用する方法を開示する。該ポリペプチド類に対する拮抗剤が開示され、これは、リウマチ様関節炎、肺炎、アレルギー、感染症状の治療や、炎症およびアテローム性動脈硬化症の予防のために使用できる。さらに本発明のポリペプチドをコードする核酸配列における変異の同定および病気の検出のための本発明のポリペプチドの変化するレベルの検出の診断方法も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】単球走化性蛋白質−４本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド類、該ポリヌクレオチド類によってコードされるポリペプチド類、該ポリヌクレオチド類およびポリペプチド類の用途ならびに該ポリヌクレオチド類および該ポリペプチド類の製造に関する。さらに詳しくは、本発明のポリペプチドは単球走化性蛋白質−４（ＭＣＰ−４）である。また、本発明は、該ポリペプチド類の作用の抑制にも関する。単球走化性蛋白質には３つの型、すなわち、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２およびＭＣＰ−３がある。これらの蛋白質のいずれもが、構造的および機能的に特徴づけられており、また、クローンされ、発現されている。ＭＣＰ−１およびＭＣＰ− ２は、白血球（単球および白血球）を誘因する能力を有し、他方、ＭＣＰ−３は、好酸球およびＴリンパ球も誘因する（Dahinderi，E．et al.，J．Exp．Med. ，１７９：７５１−７５６（１９９４））。最初、ヒト単球−特異的誘因因子は神経膠腫細胞系および単球細胞系から精製された。Matsushima，K．et al，J．Exp．Med.，169:1485-1490(1989)。この因子は、当初、Matsushimaらにより、神経膠腫由来走化性因子（ＧＤＣＦ）および単球走化性および活性化因子（ＭＣＡＦ）と命名された。この因子は、現在、ＭＣＰ−１と称されている。ＭＣＰ−１に対するcＤＮＡのその後のクローニングは、それがネズミのＪＥ遺伝子と非常に類似していることを示した。ＪＥ遺伝子は、血小板由来成長因子によりネズミ線維芽細胞に大量に導入できた。Cochran, B．H.，et al，Cell，33:939-947(1983)。ネズミＪＥはＭＣＰ−１と非常に類似している。ＭＣＰ−１蛋白質は、６８個のＮ−末端残基領域においてネズミＪＥと６２％の同一性を有する。ＪＥとＭＣＰ−１とが種相同性であることが広く認められている。ＪＥ／ＭＣＰ−１の投与による脊椎動物における腫瘍形成の抑制方法が、ＪＥ／ＭＣＰ−１の投与による悪性疾患の局所性合併症治療方法および寄生虫感染と闘う方法と共にＰＣＴ出願、ＷＯ９２／２０３７２号に開示されている。悪性細胞におけるＪＥ／ＭＣＰ−１蛋白質の発現が、in vivoにおける該細胞の腫瘍形成能力を抑制することが見いだされた。ヒトＭＣＰ−１は、推定分子量８，７００ダルトンを有する、７６個のアミノ酸の塩基性ペプチドである。ＭＣＰ−１は主に、単球、内皮細胞および線維芽細胞中で誘発的に発現される。Leonard，E．J．およびYoshimura，T.，Immunol．T oday，１１：９７−１０１（１９９０）。この発現を誘発する因子は、ＩＬ−１，ＴＮＦまたはリポ多糖類処理である。ＭＣＰ−１の他の性質には、百日咳毒素−感受性法で成熟（mature）ヒト好塩基球を強く活性化する能力が含まれる。ＭＣＰ−１は、好塩基球によるヒスタミン放出を直接誘発する能力を有するサイトカインである(Bischoff，S.C.et al., J．Exp．Med.，175:1271-1275(1992))。さらに、ＭＣＰ−１は、インターロイキン３、インターロイキン５または顆粒球／マクロファージコロニー−刺激因子で前処理された好塩基球によるロイコトリエンＣ４生成を促進する。ＭＣＰ−１誘発好塩基球メディエーター放出は、アレルギー性炎症およびＭＣＰ−１を発現する他の病状において重要な役割を演じうる。ヒト単球走化性および活性化因子（ＭＣＡＦ）をコードするヌクレオチド配列を有するクローンは、ＭＣＡＦポリペプチドの一次構造が２３個のアミノ酸残基の推定シグナルペプチド配列と、７６個のアミノ酸残基の成熟ＭＣＡＦ配列とからなることを示す。Furutani，Y．H.，et al，Biochem．Biophys．Res．Commu., 159:249-55(1989)。ヒト神経膠腫由来単球走化性因子（ＧＤＣＦ−２）の完全なアミノ酸配列も決定されている。このペプチドは、ヒト単球を誘因するが、好中球は誘因しない。ＧＤＣＦ−２は７６個のアミノ酸配列からなることが確立されている。このペプチド鎖は、１１、１２、３６および５２の位置に、ジスルフィド架橋のところでクラスターとなった一対のループを形成する４個のハーフ−システイン（half−cisteine）を含む。さらに、ＭＣＰ−１遺伝子がヒト染色体１７に指定されている。Mehrabian，M．R.，et al，Gemonics，9:200-3(1991)。ある種のデータは、ＭＣＰ−１の潜在的役割が、動脈壁の単球浸透の媒介であることを示唆している。単球は、泡沫細胞の先祖および内膜肥厚を媒介する成長因子の潜在的な源として、アテローム発生の中枢であるらしい。Nelken，N．A., et al，J．Clin．Invest.，８８：1121-7(1991)。また、ＭＣＰ−１の滑膜生成が、リウマチ様関節炎に伴う炎症の間の単核食細胞の漸増に重要な役割を果たしうること、および滑膜組織マクロファージが、このサイトカインの主な源であることも見いだされている。ＭＣＰ−１レベルは、変形性関節症患者または他の関節炎の患者からの滑液と比べて、リウマチ様関節炎患者からの滑液に著しく高いことが見いだされた。Koch，A．E.，et al，J.Clin.Invest.，90:772-9(1992)。ＭＣＰ−２およびＭＣＰ−３は、プロ炎症性（proinflammatory）蛋白質の亜科に分類されており、それらは特異的に単球を誘因するが、好中球を誘因しないので、機能的にＭＣＰ−１と関連づけられている。Van Damme，J.，et al，J．E xp．Med.，176:59-65(1992)。ＭＣＰ−３は、ＭＣＰ−１およびＭＣＰ−２と、各々、７１％および５８％のアミノ酸相同性を示す。ＭＣＰ−３は、マクロファージ機能を調節する炎症性サイトカインの１種である。血液リンパ球形成幹細胞の移植が、ガンおよび血液学的障害の治療において、提案されてきた。多くの研究は、末梢血から集めた造血細胞の移植が、骨髄由来の幹細胞の移植よりも利点があることを示す。循環する幹細胞の数は少ないので、多能性骨髄幹細胞を末梢血へ移動させるのを誘導する必要がある。適切な量の幹細胞を得るために処理する血液の量を減少させることは、自己移植法の使用を増加させ、同種移植と結び付いた移植片対宿主反応の危険を除去するであろう。現在、骨髄ＣＤ３４⁺幹細胞の血液可動化は、抗菌剤およびＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを含めた薬剤の組み合わせにより得られる。幹細胞可動化が可能な薬剤は、ＩＬ−１、ＩＬ−７、ＩＬ−８、およびＮＩＰ−１αを含む。ＩＬ−１およびＩＬ−８は共に、良い移植のために危険であろう前炎症性活性を示す。ＩＬ −７は、長い継続にわたり高用量で投与しなければならず、ＭＩＰ−１αは、単一の薬剤としては非常には活性でなく、Ｇ−ＣＳＦと組み合わせた場合に最良の活性を示す。本発明の１つの態様において、新規な成熟ポリペプチド、ならびに生物学的に活性であって、診断的または治療的に有用なその断片、アナログおよび誘導体が提供される。本発明のポリペプチドはヒト起源である。本発明の他の態様において、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムｃＤＮＡならびにゲノムＤＮＡを含めた本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸、ならびに生物学的に活性であって、診断的および治療的に有用なその断片が提供される。本発明のさらにもう１つ別の態様において、該蛋白質発現を促進する条件下での本発明のポリペプチドをコードする核酸配列を含有する組換え原核および／または真核宿主細胞を培養し、それに引き続いて該蛋白質の回収することよりなる、組換え技術によるかかるポリペプチドの製法が提供される。本発明のさらにもう１つ別の態様において、該ポリペプチドまたは該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを治療目的、例えば、腫瘍の治療、創傷治癒の促進、寄生虫感染との闘い、および造血の調節のために利用する方法が提供される。本発明のさらにもう１つ別の態様において、該ポリペプチド類に対する抗体が提供される。本発明のさらにもう１つの別の態様において、本発明のポリペプチドを模擬し、受容体に結合して第二のメッセンジャー反応を誘導するアゴニストが提供される。本発明のさらにもう１つ別の態様において、該ポリペプチド類に対するアンタゴニストが提供され、これは治療目的、例えば、慢性関節リウマチ、肺炎、アレルギー、感染症状の治療や、炎症およびアテローム性動脈硬化症の予防のために該ポリペプチドの作用を抑制するのに使用できる。本発明のさらにもう１つ別の態様において、本発明の核酸配列に特異的にハイブリダイズするのに十分な長さの核酸分子からなる核酸プローブが提供される。本発明のさらにもう１つ別の態様において、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列における突然変異に関連する病気または病気への罹患性を検出するための診断方法が提供される。本発明のさらにもう１つの別の態様において、そのようなポリペプチド、またはそのようポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、例えば、ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの作成のような科学的研究に関するイン・ビトロの目的のために用いる方法が提供される。本発明のこれらの態様および他の態様は、本明細書の教示から当業者に明らかであろう。以下の図面は、本発明の具体例の説明であって、特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を制限するものではない。図１は、ＭＣＰ−４のcＤＮＡ配列および対応する推定アミノ酸配列を示す。図示した１１９個のアミノ酸配列は、全長蛋白質であり、概略、最初の２６個のアミノ酸がリーダー配列（下線を付した）を表し、蛋白質の成熟形は、長さ９３個のアミノ酸である。アミノ酸についての標準的な１文字略号を使用している。図２は、本発明のポリペプチド、ＭＣＰ−１およびＭＩＰ−１αの間のアミノ酸配列相同性比較を例示する。ＭＣＰ−４は、ＭＩＰ−１αについて３９％の相同性、ＭＣＰ−１について３４％の相同性を示す。図３は、好中球（ＰＭＮ）および末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対する本発明のポリペプチドの化学走化性活性を例示する。好中球および末梢血単核細胞を、末梢血から単離し、９６ウェルの、単一使用のニューロプローブ・ケモタクティック・チャンバー(Neuroprobe chemotactic chamber)中の化学走化性のために用いた。ＭＣＰ−４とのインキュベーションの９０分後に、チャンバーを取り外し、フィルターを風乾し、メンブレンを通って移動した細胞の数を、cytoflour ＩＩ中に定量した。図４は、ＭＣＰ−４が、高増殖能コロニー形成細胞（ＨＰＰ−ＣＦＣ）（Ａ）の増殖および分化を阻害するが、低増殖能コロニー形成細胞（ＬＰＰ−ＣＦＣ）には有効でないことを例示する。これらの実験において、低密度の非付着性骨髄細胞からの１,５００細胞を、５ｎｇ／ｍｌマウスＩＬ−３、１００ｎｇ／ｍｌマウスＳＣＦ、１０ｎｇ／ｍｌマウスＩＬ−１α、５ｎｇ／ｍｌヒトＭ −ＣＳＦを補足し、示された濃度のＭＣＰ−４を含むまたは含まない寒天培地中で平板培養した。コロニーを、１４日のインキュベーション後にスコア取りした。３つの実験を行った。結果は、コロニーの平均数±ＳＤで表す。無関係な蛋白質は効果を有しなかった。図５は、初回攻撃を受けた前駆体細胞を除去によって、初期のLin-細胞に富む骨髄細胞に対するＭＣＯ−４の効果を示す（抗体、抗−ＣＤ１１ｂ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲおよびＧｒ．−１）。パネルＡは、５ｎｇ／ｍｌＩＬ−３、１００ｎｇ／ｍｌＳＣＦ、１０ｎｇ／ｍｌＩＬ−１ａ、５ｎｇ／ｍｌＭ− ＣＳＦを含む寒天培地で平板培養した骨髄細胞（カラム１）またはLin-細胞（カラム２）におけるＬＰＰ−ＣＦＣ／ＨＰＰ−ＣＦＣの比率±ＳＤを示す。カラム３、４および５は、５ｎｇ／ｍｌＩＬ−３および１００ｎｇ／ｍｌＳＣＦ（カラム３）、ＩＬ−３、ＳＣＦおよび５０ｎｇ／ｍｌＭＣＰ−４（カラム４）またはＩＬ−３、ＳＣＦおよび５０ｎｇ／ｍｌの無関係な蛋白質（カラム５）にて培養したLin-細胞中に見い出されるＬＰＰ−ＣＦＣ／ＨＰＰ−ＣＦＣの比率を示す。６日後、培養を、ＨＰＰ−ＣＦＣおよびＬＰＰ−ＣＦＣについて検定した。パネルＢは、６日培養後の細胞充実性を示す。図６は、ＭＣＰ−４が、イン・ビトロにおいて、シトシンアラビノシド(Ara-C )の細胞毒性から、ＨＰＰ−ＣＦＣを保護するが、ＬＰＰ−ＣＦＣは保護しないことを示す。図７は、ＭＣＰ−４が、イン・ビトロにおいて、５−フルオロウラシル（５− ＦＵ）の細胞毒性から、ＨＰＰ−ＣＦＣを保護するが、ＬＰＰ−ＣＦＣは保護しないことを示す。図８は、皮質ニューロン生存に対する、ＭＣＰ−４および塩基性ＦＧＦの影響を示す。本発明の１つの態様において、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有する成熟ポリペプチドまたは１９９４年３月１０日にＡＴＣＣ受託番号７５７０３として寄託されているクローンのcＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードする単離された核酸（ポリヌクレオチド）が提供される。本本発明のポリヌクレオチドは活性化された単球cＤＮＡライブラリーから見いだされた。それは、約１１９アミノ酸長の、そのうち最初の２６アミノ酸残基が推定リーダー配列を含む蛋白質をコードするオープンリーディングフレームを含む。従って、該成熟蛋白質は９３アミノ酸長であると予想される。これは構造的にマウス単球走化性蛋白質（ＭＣＰ−１またはＪＥ）と関連しており、全ヒトＭＣＰ−１蛋白質配列にわたって、２７％の同一性および５６％の類似性を示す。該ポリペプチドは、特徴的なモチーフに、全てのケモカイン（chemokine）類に存在する全４個のシステイン残基を含む。これらのシステイン間の間隔は、ネズミＭＣＰ−１／ＪＥと比較して保存されており、該新しい遺伝子がケモカインであることを強く示唆する。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態でも、ＤＮＡの形態でもよく、ＤＮＡには、cＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡが包含される。ＤＮＡは、二本鎖でも一本鎖でもよく、一本鎖の場合は、コーディング鎖でも非コーディング（アンチセンス）鎖でもよい。成熟ポリペプチドをコードする暗号配列は図１（配列番号：１）に示す暗号配列または寄託したクローンの暗号配列と同じでも、また、遺伝子暗号の重複または縮重の結果、図１（配列番号１）のＤＮＡまたは寄託したcＤＮＡと同じ成熟ポリペプチドをコードする異なる暗号配列であってもよい。図１（配列番号：２）の成熟ポリペプチドまたは寄託ｃＤＮＡによってコードされる成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドに対する暗号配列のみ；成熟ポリヌクレオチドの暗号配列と、リーダーもしくは分泌配列またはプロプロテイン配列のような付属の暗号配列；成熟ポリペプチドに対する暗号配列（および、所望により、付属の暗号配列）と、イントロンもしくは成熟ポリペプチドに対する暗号配列の５’および／または３’側の非暗号配列のような非暗号配列が包含されうるが、これらに限定されない。かくして、「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」なる語は、該ポリペプチドに対する暗号配列のみを含むポリヌクレオチドと、付属の暗号配列および／または非暗号配列を含むポリヌクレオチドとを包含する。本発明はさらに、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有するポリヌクレオチドまたは寄託したクローンのcＤＮＡによってコードされるポリペプチドの断片、アナログおよび誘導体をコードする上記したポリヌクレオチド類の変異体にも関する。該ポリヌクレオチドの変異体は、該ポリヌクレオチドの天然の対立遺伝子変異体でも、該ポリヌクレオチドの非天然の対立遺伝子変異体でもよい。かくして、本発明は、図１（配列番号：２）に示したのと同じ成熟ポリペプチドまたは寄託したクローンのcＤＮＡによってコードされると同じ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド類、ならびに図１（配列番号：２）に示したポリペプチドまたは寄託したクローンのcＤＮＡによってコードされるポリペプチドの断片、誘導体またはアナログをコードするかかるポリヌクレオチド類の変異体を包含する。かかるヌクレオチド変異体には、欠失変異体、置換変異体および付加もしくは挿入変異体が含まれる。上記したように、該ポリヌクレオチドは、図１（配列番号：１）に示した暗号配列または寄託クローンの暗号配列の天然の対立遺伝子変異体である暗号配列を有してもよい。当該分野で公知のごとく、対立遺伝子変異体は、１つ以上のヌクレオチドの置換、欠失または付加を有することのできる、コードされたポリペプチドの機能を実質的に変化させないポリヌクレオチド配列の変形である。また、本発明は、成熟ポリペプチドに対する暗号配列が、宿主細胞からのポリペプチドの発現、分泌を助けるポリヌクレオチド配列、例えば、細胞からのポリペプチドの輸送を制御する分泌配列として機能するリーダー配列と、同じリーディングフレームにて融合してもよいポリヌクレオチド類を含む。リーダー配列を有するポリペプチドはプレプロテインであって、宿主細胞によって切断されて、ポリペプチドの成熟形を形成するリーダー配列を有することができる。また、ポリヌクレオチド類は、成熟蛋白質プラス付属の５’アミノ酸残基であるプロプロテインをコードしてもよい。プロ配列を有する成熟蛋白質はプロプロテインであって、該蛋白質の不活性形である。一旦プロ配列が切断されると、活性成熟蛋白質が残る。かくして、例えば、本発明のポリヌクレオチドは成熟蛋白質またはプロ配列を有する蛋白質またはプロ配列と、プレ配列（リーダー配列）を有する蛋白質をコードすることができる。また、本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列とフレーム内で融合する暗号配列を有してもよい。マーカー配列は、pＱＥ−９ベクターによって供給されるヘキサ−ヒスチジンタッグでよく、細菌宿主の場合、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を供し、また、例えば、マーカー配列は、例えば、ＣＯＳ−７細胞のような哺乳動物宿主を使用する場合、ヘマググルチニン（ＨＡ）タッグとすることができる。ＨＡタッグはインフルエンザ・ヘマググルチニン蛋白質から由来するエピトープに対応する（Wi lson，Ｉ.ら.，Cell，37:67(1984)）。「遺伝子」なる語は、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡのセグメントを意味する；それは、暗号領域に先行する、またはそれに引き続く領域（リーダーおよびトレイラー）ならびに個々の暗号セグメント（エキソン類）間の介在する配列（イントロン類）を含む。本発明の全長遺伝子の断片は、全長ｃＤＮＡを単離し、遺伝子への高い配列類似性を有するか、または類似の生物学的活性を有する他のｃＤＮＡを単離するためのｃＤＮＡａライブラリーのためのハイブリダイゼーションプローブとして用いることができる。このタイプのプローブは、好ましくは、少なくとも３０塩基を有し、例えば、５０またはそれ以上の塩基を含むことができる。該プローブは、全長転写物に対応するｃＤＮＡクローンおよびゲノムクローン、または、調節およびプロモーター領域、エキソンならびにイントロンを含めた完全な遺伝子を含むクローンを同定するのにも用いることができる。スクリーニングの１つの例は、公知のＤＮＡ配列を、オリゴヌクレオチドプローブを合成するために用いることによる、遺伝子の暗号配列を単離することを含む。本発明の遺伝子の配列と相補的な配列を有する標識されたオリゴヌクレオチドは、ライブラリーのいずれのメンバーにプローブがハイブリダイズするかを決定するために、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムｃＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングするために用いる。本発明は、さらに、配列間に少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも９０％、より好ましくは、少なくとも９５％のその同一性があれば、上記した配列とハイブリダイズするポリヌクレオチド類にも関する。本発明は、特に、ストリンジェントな条件の下、上記ポリヌクレオチド類とハイブリダイズするポリヌクレオチド類に関する。本明細書で使用する「ストリンジェントな条件」なる語は、配列間に、少なくとも９５％、好ましくは、少なくとも９７％の同一性がある場合にのみ、ハイブリダイゼーションが起こることを意味する。上記のポリヌクレオチド類にハイブリダイズするポリヌクレオチド類は、好ましい具体例において、図１（配列番号：１）のcＤＮＡまたは寄託したcＤＮＡ（類）によってコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同一の生物学的機能または活性を保持しているポリペプチド類をコードする。別法として、ポリヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドにタイブリダイズし、上記のごとくそれに対して同一性を有し、活性を保持していても、していなくてもよい少なくとも２０塩基、好ましくは３０塩基、より好ましくは５０塩基を有することができる。例えば、かかるポリヌクレオチドは、例えば、ポリヌクレオチドの回収のため、または診断プローブとして、もしくはＰＣＲプライマーとして、配列番号：１のポリヌクレオチドのためのプローブとして用いることができる。かくして、本発明は、配列番号：２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは、少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド、ならびに少なくとも３０塩基、好ましくは少なくとも５０塩基を有するその断片、ならびにかかるポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドに指向される。本明細書でいう寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の条件の下で維持されている。これらの寄託は、単に、当業者に対する便宜として供されるものであって、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.１１２下で要求されることを認めたものではない。寄託した材料に含まれるポリヌクレオチド類の配列、ならびにそれによってコードされるポリペプチド類のアミノ酸配列を、参照としてここにに引用し、本明細書の配列の記載と何らかの不一致がある場合に調製する。寄託した材料の製造、使用または販売にはライセンスが必要でありえるが、これにより、何ら、そのようなライセンスを与えるものではない。本発明は、さらに、図１（配列番号：２）の推定アミノ酸配列を有する、または寄託されたｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチド、ならびにかかるポリペプチドま断片、アナログおよび誘導体を含む。図１（配列番号：２）のポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによってコードされるポリペプチドについて言及する場合の「断片」、「誘導体」および「アナログ」なる語は、かかるポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを意味する。かくして、アナログには、プロプロテイン部分の切断によって活性化されて、活性成熟ポリペプチドを生ずるプロプロテインが包含される。本発明のポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドでよく、好ましくは組換えポリペプチドである。図１（配列番号：２）のポリペプチドまたは寄託cＤＮＡによってコードされるポリペプチドの断片、誘導体またはアナログは、（ｉ）そのアミノ酸残基の１つ以上が保存的または非保存的アミノ酸残基（好ましくは、保存的アミノ酸残基）で置換され、かかる置換アミノ酸残基はその遺伝暗号でコードされても、されなくてもよいもの、または（ｉｉ）１つ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが、ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えば、ポリエチレングリコール）のごとき他の化合物と融合しているもの、または（ｉｖ）リーダーまたは分泌配列または成熟ポリペプチドの精製に使用する配列またはプロプロテイン配列のような、さらなるアミノ酸が成熟ポリペプチドと融合したものとすることができる。かかる断片、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者に明らかである。本発明のポリペプチド類およびポリヌクレオチド類は、好ましくは、単離した形態で提供され、また、好ましくは、均質に精製される。「単離」なる語は、その物質が元の環境（例えば、天然のものであれば、天然の環境）から取り出されることを意味する。例えば、生きた動物中に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、天然系に共存する材料のいくらかまたは全てから分離された同ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。かかるポリヌクレオチド類はベクターの一部とすることができ、および／またはかかるポリヌクレオチド類またはポリペプチド類は組成物の一部となり得、また、かかるベクターまたは組成物がその天然環境の一部でない点でやはり単離されている。本発明のポリペプチドは、配列番号：２のポリペプチド（とりわけ成熟ポリペプチド）、ならびに、配列番号：２のポリペプチドに対し、少なくとも７０％の類似性（好ましくは、少なくとも７０％の同一性）を有するポリペプチド、より好ましくは、配列番号：２のポリペプチドに対し、少なくとも９５％の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）を有し、さらにより好ましくは、配列番号：２のポリペプチドに対し、少なくとも９５％の類似性（さらにより好ましくは、少なくとも９５％の同一性）を有するポリペプチドを含み、一般的に少なくとも３０アミノ酸、より好ましくは少なくとも５０アミノ酸を含有するポリペプチドのかかる一部を持つかかるポリペプチドの一部を含む。当該分野で知られているように、２つのポリペプチドの間の「類似性」は、１のポリペプチドのアミノ酸配列およびその保存されたアミノ酸代替を第２のポリペプチドに対して比較することによって決定される。本発明のポリペプチドの断片または部分は、ペプチド合成により、対応する全長ポリペプチドを生産するために用いることができる；従って、該フラグメントは、全長ポリペプチドを生産するための中間体として用いることができる。本発明のポリヌクレオチドの断片または部分は、本発明の全長ポリヌクレオチドを合成するために用いることができる。また、本発明は、本発明のポリヌクレオチド類を含むベクター、本発明のベクターで遺伝子操作された宿主および組換え技術による本発明のポリペプチド類の生産にも関する。宿主細胞は、クローニング・ベクターでも、発現ベクターでもよい本発明のベクターで遺伝子操作（形質導入または形質転換またはトランスフェクション）される。ベクターは、例えば、プラスミド、ウイルス粒子、ファージ等の形態でよい。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化し、形質転換体を選択し、あるいは本発明の遺伝子を増幅するために適宜改変した通常の栄養培地中で培養できる。温度、pＨ等の培養条件は、発現用に選択した宿主細胞について従来使用されているものでよく、当業者に明らかであろう。本発明のポリヌクレオチド類は組換え技術によるポリペプチド類の製造に使用できる。かくして、例えば、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドを発現させるための種々の発現ベクターのいずれか１つに含ませることができる。かかるベクターには、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０の誘導体、細菌性プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドとファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、ワクシニア、アデノウイルス、家禽ポックスウイルスおよび仮性狂犬病のようなウイルス性ＤＮＡが包含される。しかしながら、宿主中で複製でき、生存できる限り、他のいずれのベクターも使用できる。適当なＤＮＡ配列を種々の操作でベクターに挿入できる。一般に、ＤＮＡ配列は、当該分野で公知の方法で適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入される。かかる操作およびその他の操作は、当業者に自明である。発現ベクター中のＤＮＡ配列は、操作可能に適当な発現制御配列（プロモーター）に結合し、mＲＮＡ合成を指令させる。かかるプロモーターの代表的な例としては、ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、イー・コリ（E．coli）lacまたは trp、ファージ・ラムダＰ_Lプロモーターおよび原核または真核細胞またはそれらのウイルスにおいて遺伝子の発現を制御することが公知の他のプロモーターを挙げることができる。該発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写ターミネーターも含む。該ベクターはまた、発現を増幅するための適当な配列を含んでもよい。加えて、該発現ベクターは、好ましくは、真核細胞培養についてはジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性のような、また、イー・コリにおけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性のような、形質転換された宿主細胞選択用の表現型特徴を与える１つ以上の選択マーカー遺伝子を含む。上記したような適当なＤＮＡ配列と、適当なプロモーターまたは制御配列を含むベクターを適当な宿主の形質転換に用い、宿主に蛋白質を発現させることができる。適当な宿主の代表例として、イー・コリ、ストレプトマイセス(Streptomy ces)、サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）のような細菌細胞、酵母のような糸状菌細胞、ドロソフィラ（Drosophila）Ｓ２およびスポドプテラ(Spodoptera)Ｓf９のような昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳまたはボウエス（Bow es）黒色腫のような動物細胞、アデノウイルス、植物細胞等を挙げることができる。適当な宿主の選択は、本明細書の教示から当業者に自明である。さらに詳しくは、本発明は、上記に概説した１つ以上の配列からなる組換え構築体も包含する。該構築体は、その中に本発明の配列を、前進または逆向きで挿入したプラスミドまたはウイルスベクターのようなベクターを含む。この具体例の好ましい態様では、該構築体はさらに、例えば、該配列に操作可能に結合したプロモーターを含めた調節配列も含む。多くの適当なベクターおよびプロモーターが当業者に公知であり、商業的に利用できる。例として以下のベクターを挙げる。細菌性：pＱＥ７０、pＱＥ６０、pＱＥ−９(Qiagen)、ｐＢＳ、ｐＤ１０、ファージスクリプト、psiＸ１７４、pbluescriptＳＫ、pbsks、pＮＨ８Ａ、pＮＨ１６ａ、pＮＨ１８Ａ、pＮＨ４６Ａ（Stratagene）、ptrc９９ａ、pＫＫ２２３−３、pＫＫ２３３−３、pＤＲ５４０、pＲＩＴ５（Pharmacia）、真核：ｐＷＬＮＥＯ、pＳＶ２ＣＡＴ、pＯＧ４４、pＸＴ１、pＳＧ（Stratagene）、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳＧ、pＳＶＬ（Pharmacia）。しかしながら、宿主中で複製でき、生存できる限り、他のいずれのプラスミドまたはベクターも使用できる。プロモーター領域は、ＣＡＴ（クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたは選択マーカーを有する他のベクターを用いて、いずれの所望の遺伝子からも選択できる。２つの適当なベクターはｐＫＫ２３２−８およびＰＣＭ７である。特に命名された細菌プロモーターには、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gp t、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびtrpが包含される。真核プロモーターには、ＣＭＶ即時型初期、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルスからのＬＴＲおよびマウス・メタロチオネイン−Ｉが包含される。適当なベクターおよびプロモーターの選択は、当業者の技術範囲のものである。さらなる具体例において、本発明は、上記の構築体を含有する宿主細胞に関する。宿主細胞は、哺乳動物細胞のごとき高等真核細胞、酵母細胞のような下等真核細胞とすることができ、また、宿主細胞は、細菌細胞のような原核細胞とすることができる。宿主細胞への該構築体の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン介在トランスフェクションまたはエレクトロポレーションで行うことができる。(Davis，Ｌ.，Dibner，Ｍ.,Battey,Ｉ.，Bas ic Methods in Molecular Biology，(1986))。宿主細胞中の該構築体を、常法に従って使用して組換体配列によりコードされる遺伝子生成物を製造する。別法として、本発明のポリペプチドは通常のペプチド合成法により、合成的に製造できる。成熟蛋白質は、適当なプロモーターの制御の下、哺乳動物細胞、酵母、細菌または他の細胞中で発現させることができる。無細胞翻訳系も、本発明のＤＮＡ構築体から誘導したＲＮＡを用いてかかる蛋白質の製造に使用できる。原核および真核宿主と共に使用するための適当なクローニングおよび発現ベクターは、Samb rook，et al.，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，Second Edition,Cold Spring Harbor，N.Y.,（1989）に記載されており、当該記載をここに参照として引用する。高等真核細胞による本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの転写は、ベクターにエンハンサー配列を挿入することにより増加される。エンハンサーは、通常、プロモーターに作用してその転写を増加させる約１０〜３００bpの、ＤＮＡのシス作用性エレメントである。例としては、複製起点の後側bp１００〜２７０のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後側ポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。一般に、組換体の発現ベクターは、宿主細胞の形質転換を可能にする複製起点および選択マーカー、例えば、イー・コリのアンピシリン耐性遺伝子およびエス・セレヴィシアエ（S．cereviseiae）ＴＲＰ１遺伝子、ならびに下流構造配列の転写を指令する高度発現遺伝子に由来するプロモーターを含む。かかるプロモーターは、とりわけ、解糖酵素３−ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）、α− 因子、酸性ホスファターゼまたは熱ショック蛋白質をコードするオペロンから誘導できる。該異種構造配列を、翻訳開始および終止配列および、好ましくは、翻訳された蛋白質のペリプラズム空間または細胞外培地への分泌を指令する能力を有するリーダー配列を有する適当な相に組み入れる。所望により、該異種配列は、例えば、発現された組換体生成物の安定化または精製簡略化のような、望ましい特性を付与するＮ−末端同定（identification）ペプチドを含む融合蛋白質をコードすることができる。細菌用の有用な発現ベクターは、所望の蛋白質をコードする構造ＤＮＡ配列を、適当な翻訳開始および終止シグナルと共に、機能性プロモーターを有する操作可能なリーディング相に挿入することにより構築される。該ベクターは、１つ以上の表現型選択マーカーおよび複製起点を含んで、ベクターの維持を保証し、所望ならば、宿主中での増幅を与える。形質転換用の適当な原核宿主には、イー・コリ、バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis）、サルモネラ・チフィムリウムならびにシウドモナス（Pseudomonas）属、ストレプトマイセス（Streptomy ces）属およびスタフィロコッカス（Staphylococcus）属に属する種々の種が包含されるが、他のものも選択できる。特に限定するものではないが、代表例として、細菌に使用する有用な発現ベクターは、よく知られたクローニングベクターpＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝子エレメントからなる商業的に入手できるプラスミドから由来する選択マーカーおよび細菌複製起点を含むことができる。かかる商業的ベクターには、例えば、pＫＫ２２３−３（Pharmacia Fine Chemicals，Uppsala，Sweden）およびＧＥＭ−１（Promega Biotec，Madison，WI，USA）が含まれる。これらのpＢＲ３２２「骨格」セクションを適当なプロモーターおよび発現させるべき構造配列と組み合わせる。適当な宿主株の形質転換および該宿主株の適当な細胞密度までの増殖の後に、選択したプロモーターを適当な手段（例えば、温度シフトまたは化学的誘導）により誘導し、細胞をさらなる期間培養する。細胞を、典型的には、遠心分離して収穫し、物理的または化学的手段により破壊し、得られた粗抽出物をさらなる精製用に保持する。蛋白質の発現に用いた微生物細胞は、凍結−解凍サイクル、音波処理、機械的破壊または細胞溶解剤の使用を含む常法により破壊でき、かかる方法は当業者によく知られている。種々の哺乳動物細胞培養系も組換え蛋白質の発現に使用できる。哺乳動物発現系の例には、Gluzman，Cell，23:175(1981)によって記載されているサル腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系および適合ベクターの発現能を有する他の細胞系、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨeＬa、ＢＨＫ細胞系が含まれる。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、適したプロモーターおよびエンハンサー、いずれかの必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終止配列および５’フランキング非転写配列を含む。ＳＶ４０スプライスから誘導されたＤＮＡ配列およびポリアデニル化部位を、必要な非転写遺伝子エレメントの提供に使用できる。該ポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含する方法により、組換え細胞培養から回収、精製される。要すれば、成熟蛋白質の立体配置を完了させるのに、蛋白質の再折畳み工程を使用できる。最後に、最終精製工程に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用できる。本発明のポリペプチドは、天然の精製生成物でも、または化学的合成法による生成物でも、または真核または原核宿主から組換技術により生産されたもの（例えば、培養中の細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞による）でもよい。組換え製造操作において使用した宿主に応じて、本発明のポリペプチドはグリコシル化されていても、非グリコシル化のものでもよい。本発明のポリペプチドには、最初のメチオニンアミノ酸残基を含んでもよい。本発明のポリペプチドは、創傷治癒の促進に使用することができる。ＭＣＰ− ４はケモカインであるので、白血球（単球、Ｔリンパ球、好塩基球、ＰＭＮ、ＰＢＬ等のような）に対する化学誘引剤（chemoattractant）であり、従って、標的免疫細胞の創傷領域への浸潤を起こす。ＭＣＰ−４ポリペプチドは、抗腫瘍治療薬として、また、胸膜滲出または腹水のような悪性疾患の局所合併症の治療用にも使用できる。ＭＣＰ−４の解剖空隙への滴下は局所単球蓄積および活性化を導くことができる。 in vivoにおけるＭＣＰの存在には、住血吸虫症、旋毛虫症および回虫症のような組織に侵入する寄生虫の幼虫を殺す別の機能を有する好酸球の存在を局所的に増加させることが伴う。従って、ＭＣＰ−４は寄生虫感染との闘いにも使用できる。本発明のポリペプチドは、造血前駆細胞の、ヒトまたはヒトでない宿主、好ましくはヒトの宿主の、引き続く回復および移植におけるその使用のための末梢血循環への可動化のために用いることができる。本発明のポリペプチドは、造血前駆細胞を末梢血へ可動化し、末梢血中の造血前駆細胞の量を増加させるため、とりわけ、ヒトの造血幹細胞の末梢血中の量を増加させるための有効量にて投与される。かかる細胞は、しばしばＣＤ３４⁺細胞と呼ばれる。例えば、ポリペプチドは、本明細書で後で述べられる量で投与される。本発明のポリペプチドは、それのみで投与されるか、あるいは、例えば、かかる細胞を末梢血中で増加させるのに効果的なことが知られているＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦのような他の薬剤と組み合わせて投与することができる。造血前駆細胞の末梢循環への可動化は、例えば、がんの治療および血清学的障害の治療のために用いられる、自己のおよび異種の骨髄移入に重要である。本発明のポリペプチドは、化学療法剤の治療に起因する、造血前駆細胞の、ヒトまたはヒトでない宿主、好ましくはヒトの宿主中での崩壊を阻害することに用いることができる。本発明のポリペプチドは、化学療法に先駆け、またはその間もしくは化学療法剤に引き続き投与でき、ガンの治療において使用できる、より高い用量の化学療法剤を可能とする。本発明のポリペプチドは、造血前駆細胞の崩壊を阻害するのに有効な量において投与できる；例えば、該ポリペプチドは、本明細書で後に記載される量にて投与される。ポリペプチドは単独で、または他の薬剤と組み合わせて用いることができる。本発明のポリペプチドは、例えば、白血球減少症、脊髄形成異常症候群、および好中球減少症のごとき、造血前駆細胞の崩壊に起因する病気を予防または阻害するために、造血前駆細胞を保護するためにまた用いることもできる。本発明のポリペプチドは、アルツハイマー病、パーキンソン病およびＡＩＤＳ関連症候群のごときニューロン変性病に起因する、ヒトまたはヒトでない宿主、好ましくはヒトの宿主中での神経細胞の変性を阻害するのに有効な量にて使用することもできる。例えば、該ポリペプチドは、本明細書で後に記載される量にて使用できる。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、ヒトの病気の治療および診断の発見のための研究用試薬および物質として使用することができる。本発明はＭＣＰ−４レセプターの同定方法を提供する。該レセプターを同定する遺伝子を、例えば、リガンドパニング(ligand panning)およびFACS sortingのごとき、当業者に公知の多くの方法により同定可能することができる(Coliganら、Current Protocols in Immun．1(2)、Chapter 5，(1991))。好ましくは、発現クローニングは、ポリアデニル化ＲＮＡを、ＭＣＰ−４に反応する細胞から調製し、このＲＮＡから形成されたｃＤＮＡライブラリーをプールし、ＣＯＳ細胞またはＭＣＰ−４に応答しない他の細胞をトランスフェクトするのに用いる。ガラススライド上で増殖させたトランスフェクト細胞を標識されたＭＣＰ−４に暴露する。ＭＣＰ−４は、部位特異的蛋白質キナーゼについての認識部位のヨウ素化または封入を包含する種々の手段により標識することができる。固定し、次いでインキュベートした後、そのスライドをオートラジオグラフィー分析に付す。陽性プールを同定し、サブプールを調製し、繰り返しサブプーリング法および再スクリーニング法を用いて再トランスフェクトし、最終的に推定レセプターをコードする単クローンを生成する。レセプターを同定する別法として、標識リガンドを、レセプター分子を発現する細胞膜または抽出調製物と光親和性結合させることができる。架橋物質をＰＡＧＥで分解し、ｘ−線フィルムに暴露する。リガンド−レセプター含有の標識複合体を切り出し、ペプチド断片に分解し、蛋白質ミクロ配列決定に付すことができる。ミクロ配列決定より得られるアミノ酸配列を用いて一組の変性オリゴヌクレオチド・プローブを設計して、ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、推定レセプターをコードする遺伝子を同定する。また、本発明は、本発明のホリペプチドに対するアゴニストおよびアンタゴニストを同定するための化合物をスクリーニングする方法を提供する。例えば、ＭＣＰ−４レセプターを発現する哺乳動物の細胞または膜調製物を、注目する化合物と接触させることとなろう。次いで、ＭＣＰ−４レセプターとの相互作用に続いて公知の二次メッセンジャー系の応答を生じる該化合物の能力を測定する。かかる二次メッセンジャー系は、ｃＡＭＰグアニレート・シクラーゼ、イオンチャネルまたはホスホイノシチド加水分解を包含するが、これに限定されない。該化合物の、ＭＣＰ−４レセプターに結合し、二次メッセンジャー応答を誘導する能力は、その化合物をアゴニストとして同定する。二次メッセンジャーに結合するがその応答を誘導しない化合物はその化合物をアンタゴニストとして同定する。化合物が、例えば放射能により標識される競合的結合測定法もまた、アンタゴニストの同定に使用できる。そのような方法は当該分野で公知である。アンタゴニストはＭＰＣ−４の陰性優性突然変異体を包含する。ＭＣＰ−４は四量体ポリペプチドであり、ここに１個の変異単位がポリペプチド全体を無機能なものにしている。ＭＣＰ−４の陰性優性変異体はＭＣＰ−４受容体に結合するが、それが結合する細胞（白血球および単球）を活性化しない。ＭＣＰ−４の陰性優性突然変異体を検出するためのアッセイは、イン・ビトロでの化学走化性アッセイであり、該アッセイでは、ポリビニルピロリドンを含まないポリカーボネート膜を装備した多ウェル化学走化性チャンバーを用いて、潜在的なアンタゴニストまたはアゴニスト分子の存在下および不存在下において白血球に対するＭＣＰ−４の化学誘引能を測定する。潜在的なアンタゴニストは、抗体、またはいくつかの場合には、オリゴヌクレオチドを含み、これはポリペプチドに結合し、それがレセプターと結合することを妨げる。潜在的なアンタゴニストのもう１つの例は、アンチセンス技術を用いたアンチセンス構築体である。アンチセンス技術を用いて、３重らせん形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡにより遺伝子発現を制御することができ、その方法は共にポリヌクレオチドのＤＮＡもしくはＲＮＡへの結合に基づいている。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド配列の５'暗号部分を用いて長さ約１０ないし４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。転写に関与する遺伝子領域に相補的であるようにＤＮＡオリゴヌクレオチドを設計し（３重らせん−リー（Lee）ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（Nucl.Acids Res.）、第６巻：３０７３頁（１９７９年）；クーニー（Cooney）ら、サイエンス（Science）、第２４１巻：４５６頁（１９８８年）；およびダーバン（Dervan）ら、サイエンス、第２５１巻：１３６０頁（１９９０年）参照）、それにより転写およびＭＣＰ−４の産生を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはイン・ビボでｍＲＮＡにハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＭＣＰ−４ポリペプチドへの翻訳をブロックする（アンチセンス −オカノ（Okano）、ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー（J.Neurochem. ）、第５６巻：５６０頁（１９９１年）；オリゴヌクレオタイズ・アズ・アンチセンス・インヒビターズ・オブ・ジーン・イクスプレッション（Oligonucleotid es as Antisense Inhibitors of Gene Expression）、CRC Press,Boca Raton,FL (1988)）。また、前記オリゴヌクレオチドを細胞に送達し、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをイン・ビボで発現させて、ＭＣＰ−４の産生を阻害することもできる。潜在的なアゴニストには、ポリペプチドの活性部位に結合し、それを占領することによって、その触媒部位が、通常の生物学的活性が妨げられるように、基質に接近できなくする。小さい分子の例は、小さいペプチドまたはペプチド様分子を含むが、これらに限定されない。アンタゴニストを用いて、創傷または外傷部位への単球の誘引を防止することにより炎症を治療してもよく、また、急性および慢性の炎症性の肺疾患は肺の単球食細胞の隔離に関連しているので、正常な肺のマクロファージ集団を調節することもできる。ＭＣＰレベルは慢性関節リウマチの患者由来の滑液中で上昇することが見いだされており、それによりＭＣＰの滑液産生は単球を誘引し、その流入および活性化が変質性および炎症性双方の関節障害の病理において重要であることが示唆されているため、それらを用いて慢性関節リウマチを治療することができる。ＭＣＰは動脈壁における単球の浸潤を媒介し、その浸潤はアテローム性動脈硬化症を引き起こすので、アンタゴニストをアテローム性動脈硬化症の治療に用いてもよく、さらに、ＭＣＰは好塩基球によるヒスタミン放出を直接誘導することが示されているので、アンタゴニストをアレルギーの防止に用いることができる。結核は、細胞を、通常には単球を標的とし、単球にＭＣＰを放出させ、そのことによりより多くの単球が肺に誘引されて重篤な感染を引き起こすので、アンタゴニストを用いて結核のごとき感染症を治療することができる。例えば、上記の医薬上許容される担体と組み合わせた医薬組成物中にアンタゴニストを用いてもよい。本発明のポリペプチド、およびアゴニストおよびアンタゴニストは、適当な医薬担体と組み合わせて使用することができる。かかる組成物は治療上有効量のポリペプチドまたはアゴニストもしくはアンタゴニストと、医薬上許容される担体または賦形剤とからなる。かかる担体は、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびその組合せを包含するが、これらに限定されるものではない。処方を投与の形式に適合させるべきである。また、本発明は、該発明の医薬組成物の１またはそれ以上の成分を充填した１またはそれ以上の容器からなる医薬用パックまたはキットを提供する。医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を取り締まる政府機関により規定された形式の注意書であって、ヒトに投与する製品の製造、使用または販売についての機関による認証を反映している注意書をかかる容器に組み合わせることができる。加えて、本発明のポリペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを他の治療用化合物と組み合わせて使用することもできる。医薬組成物は、常法、例えば経口、局所、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経鼻内または皮内経路により投与することができる。医薬組成物は特定の適用症の治療および／または予防に有効な量にて投与される。一般に、それらは少なくとも約１０ｐｇ／ｋｇ体重の量で投与され、ほとんどの場合、約８ｍｇ／ｋｇ体重／日を超えない量にて投与される。ほとんどの場合、投与量は、投与経路、徴候などを考慮して約１０ｐｇ／ｋｇ体重／日ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重／日である。また、該ポリペプチドならびにポリペプチドであるアゴニストおよびアンタゴニストは、しばしば「遺伝子治療」と称される、イン・ビボにおけるかかるポリペプチドの発現により使用できる。かくして、例えば、患者からの細胞を、エクス・ビボで、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）で操作し、操作した細胞を次いで、該ポリペプチドで治療すべき患者に供給する。かかる方法は当該分野でよく知られており、本明細書の教示から明らかである。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクターを用いて細胞を操作することができる。同様に、細胞は、例えば、当該分野で公知の方法により、ポリペプチドのイン・ビボにおける発現のため、イン・ビトロで操作することができる。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルスプラスミドベクターでパッケージング細胞を形質導入し、パッケージング細胞が今や興味のある遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生み出すようにすることができる。イン・ビボで細胞を操作し、イン・ビボでポリペプチドを発現させるために、これらの生産細胞を患者に投与することができる。本発明のポリペプチドを投与するこれらの方法および他の方法は本発明の教示から当業者に明らかである。本明細書中で上に述べたレトロウイルスプラスミドベクターが由来するレトロウイルスは、モロニーネズミ白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルスのごときレトロウイルス類、ハービー肉腫ウイルス、禽類白血症ウイルス、ギボンサル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および哺乳類腫瘍ウイルスを含むが、これらに限定されない。該ベクターは、１以上のプロモーターを含む。用いることができる適当なプロモーターは、Millerら、Biotechniques ７（９）：９８０−９９０（１９８９）に記載されている、レトロウイルスＬＴＲ、ＳＶ４０プロモーター、およびヒト・サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、または他のプロモーター（例えば、ヒストン、pol ＩＩＩ、およびβ−アクチンプロモーターを含むが、これらに限定されない真核生物細胞プロモーターのごとき細胞プロモーター）を含むが、これらに限定されない。使用できる他のウイルスプロモーターは、アデノウイルスプロモーター類、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター類、およびＢ１９パルボウイルスプロモーター類を含むが、これらに限定されない。適当なプロモーターの選択は、本明細書の教示の範囲から当業者に明らかであろう。本発明のポリペプチドをコードする核酸配列は、適当なプロモーターの制御下にある。用いることができる適当なプロモーターは、アデノウイルス主後期プロモーターのごときアデノウイルスプロモーター、または、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターのごとき異種プロモーター、呼吸シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、メタロチオネインプロモーターのごとき誘導性プロモーター、熱ショックプロモーター類、アルブミンプロモーター、ApoAIプロモーター、ヒト・グロビンプロモーター、単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーターのごときウイルス・チミジンキナーゼプロモーター、（本明細書で上記記載の修飾レトロウイルスＬＴＲを含めた）レトロウイルスのＬＴＲ類、β−アクチンプロモーター、ヒト・成長プロモーターを含むが、これらに限定されない。プロモーターは、また、ポリペプチドをコードする天然のプロモーターをコードする。レトロウイルスプラスミドベクターは、プロデューサー細胞系を形成するために、パッケージング細胞系に形質導入するために用いる。トランスフェクトできるパッケージング細胞の例は、出典明示してその全内容を本発明の一部とみなす MillerのHuman Gene Therapy、第一巻、第５頁−第１４頁（１９９０）に記載されるように、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ψ−２、Ψ−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９− １４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ΨＣＲＥ、ΨＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２、およびＤＡＮ細胞系を含むが、これらに限定されない。該ベクターは、当該分野で公知のいずれかの手段によってパッケージング細胞を形質導入することができる。かかる手段は、エレクトロポレーション、リポソームの使用、およびＣａＳＯ₄沈殿を含むが、それらに限定されない。１つの代法として、レトロウイルスプラスミドベクターを、リポソームに封入するか、脂質とカップルさせ、次いで宿主に投与することができる。プロデューサー細胞系は、ポリペプチドをコードする核酸配列を含めた感染性レトロウイルスベクター粒子を生じる。かかるレトロウイルスベクター粒子を、次いで、イン・ビトロまたはイン・ビボで真核細胞を形質導入するために用いることができる。形質導入真核細胞は、ポリペプチドをコードする核酸配列（類）を発現するであろう。形質導入できる真核細胞は、卵巣幹細胞、卵巣癌細胞、ならびに造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、および気管上皮細胞を含むが、これらに限定されない。また、本発明は、本発明の遺伝子の診断剤としての使用に関する。遺伝子の変異型の検出により、ＭＣ−４の過小発現に起因する病気または罹病性の診断が可能となる。本発明の遺伝子に突然変異を担う個人は、種々の技術によるＤＮＡレベルにおいて検出できる。診断のための核酸は、血液、尿、唾液、組織生検および死体解剖物質を含めた患者の細胞から得られるが、これらに限定されない。ゲノムＤＮＡを、検出に直接用いるか、または、分析に先駆けてＰＣＲ(Sailiら、Noture 3 24:163-166(1986)を用いて酵素的に増幅させることができる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを、同じ目的のために用いることができる。例として、ＭＣＰ−４をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーを、突然変異を同定し、分析するために用いることができる。例えば、欠失および挿入は、通常の遺伝子型と比較して増幅した産生物のサイズにおける変化によって検出可能である。点突然変異を、増幅させたＤＮＡを放射性標識したＲＮＡ、または代法として放射性標識したアンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイズさせることによって同定することができる。好ましくは、マッチした配列は、ＲＮａｓｅＡ消化によって、または融点の差によってミスマッチしたデュプレックスから区別することができる。突然変異を有する参照の遺伝子または複数の遺伝子の間の配列の相違は、直接ＤＮＡ配列決定法により明らかにすることができる。加えて、クローン化されたＤＮＡセグメントを、特異的ＤＮＡセグメントを検出するためのプローブとして用いることができる。この方法の感度は、ＰＣＲと組み合わせた場合に非常に増強される。例えば、配列決定プライマーを、二本鎖ＰＣＲ産生物または、修飾ＰＣＲによって生じた一本鎖鋳型分子と共に用いる。配列決定は、放射性標識ヌクレオチドによる通常の方法で、または蛍光タッグでの自動配列決定方法により行う。ＤＮＡ配列相違に基づく遺伝子テストを、変性剤の存在下または非存在下でのゲル中におけるＤＮＡ断片の電気泳動移動度の変化の検出によって行うことができる。小さい配列欠失および挿入を、高分解能ゲル電気泳動により可視化できる。異なる配列のＤＮＡ断片を、異なるＤＮＡ断片の移動度が、その特異的融解または部分的融解温度により、異なる位置においてゲル中で遅らされる変性ホルムアミド勾配ゲル上で識別できる(例えば、Meyersら、Science 230:1242(1985)参照。特異的位置における配列変化は、ＲＮａｓｅおよびＳ１保護のごときヌクレアーゼ保護分析、あるいは、化学的切断法(例えば、cottonら、PNAS USA 85:4397- 4401(1985))によっても明らかにすることができる。かくして、特異的ＤＮＡ配列の検出は、ハイブリダイゼーション、ＲＮａｓｅ保護、化学的切断、直接ＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用、（例えば、制限断片長多型（ＲＦＬＰ））およびゲノムＤＮＡのサザーンブロッティングのごとき方法によって行うことができる。より通常のゲル−電気泳動およびＤＮＡ配列決定に加えて、突然変異を、イン・サイチュ分析によって検出可能である。正常な対照組織試料と比較した過剰発現は、ＭＣＰ−４の存在を検出するので、本発明は、様々な組織における本発明のポリペプチドのレベルの変化を検出するための診断分析にも関する。宿主由来の試料中の本発明のポリペプチドのレベルを検出するために用いられるアッセイは、当業者に公知であり、放射性免疫分析、競合的結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ならびに好ましくはＥＬＩＳＡ分析を含む。ＥＬＩＳＡ分析は、ＭＣＰ−４抗原に特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することからなる。加えて、リポーター抗体が、モノクローナル抗体に対して調製される。リポーター抗体に対し、放射能、蛍光、またはこの例においては西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素のごとき検出可能な試薬にを付着させる。試料を、宿主から取り出し、試料中のタンパク質に結合する、ポリスチレン皿のごとき固体支持体上でインキュベートする。皿上のいずれの遊離蛋白質結合部位も、次いで、ウシ血清アルブミンのごとき非特異的蛋白質と共にインキュベートすることによってカバーされる。次に、モノクローナル抗体を、該モノクローナル抗体が、ポリスチレン皿上に付着した本発明のいずれかのポリペプチドに付着する間、皿中でインキュベートする。全ての未結合モノクローナル抗体を、緩衝液で洗浄除去する。西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したリポーター抗体を、皿中に入れ、このことにより、リポーター抗体が、本発明のポリペプチドに結合するいずれかのモノクローナル抗体に結合する。付着しないリポーター抗体を次いで洗い流す。ペルオキシダーゼ基質を、次いで皿に加え、所与の時間の間に現れた色の量が、標準の曲線と比較した場合に、所与の容積の患者試料に存在する本発明のポリペプチドの量の測定である。競合アッセイを使用することができ、ここに、本発明のポリペプチドに特異的な抗体が固体支持体に付着し、標識ＭＣＰ−４および、宿主由来の試料を固体支持体に通し、固体支持体に付着した検出標識量を、試料中の本発明のポリペプチドの量に関連付けることができる。本発明の配列はまた染色体を同定するのに有用である。配列を、個々のヒト染色体上の特定の位置に特異的に標的化し、それとハイブリダイズさせることができる。さらに、染色体上の特定の部位を同定する要望が現在ある。実際の配列データに基づく染色体マーキング試薬（繰り返し多形）は、現在、染色体の位置をマークするのにほとんど利用されない。本発明によるＤＮＡの染色体へのマッピングは、それらの配列を疾患に関連する遺伝子と相関させる重要な第１工程である。略言すると、配列は、ＰＣＲプライマー（好ましくは１５〜２５ｂｐ）をｃＤＮＡから調製することにより染色体にマップさせることができる。遺伝子の３' 非翻訳領域のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡ中の１を超えるエキソンにまたがらない、かくして増幅プロセスを複雑とするプライマーを速やかに選択する。次いで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含有する体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに用いる。該プライマーに対応するヒト遺伝子を含有するバイブリッドだけが増幅された断片を生成するであろう。体細胞バイブリッドのＰＣＲマッピングは特定のＤＮＡを特定の染色体に割り当てるための迅速な手段である。本発明を同一のオリゴヌクレオチドプライマーで用いると、サブローカリゼーションが、同様の方法にて特定の染色体または大きなゲノムクローンのプールに由来の断片のパネルを用いて達成され得る。同様に、その染色体にマップするのに用いることができる他のマッピング法は、イン・サイチュハイブリダイゼーション、標識されたフロー選別染色体を用いる予備スクリーニング、およびハイブリダイゼーションに付し、染色体特異的ｃＤＮＡライブラリーを構築するための予備選択を包含する。ｃＤＮＡクローンの中期染色体スプレッドへの蛍光イン・サイチュ・ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用い、一工程で正確な染色体位置を得ることができる。この技術は少なくとも５０または６０塩基を有するｃＤＮＡで用いることができる；この技術のレビューについては、Ｖermaら、Ｈuman Ｃhromosome:a Ｍanual of Ｂasic Ｔechniques、Ｐergamon Ｐress、Ｎew Ｙork（１９８８）を参照のこと。一旦配列が正確な染色体位置にマップされると、該染色体上の該配列の物理的位置をゲノムマップデータと相関させることができる。かかるデータは、例えば、Ｖ.ＭcＫusick、Ｍendelian Ｉnheritance in Ｍan（Ｊohns Ｈopkins Ｕnive rsity Ｗelch Ｍedical Ｌibraryよりオン・ラインにて利用可能）に見られる。次いで、同じ染色体領域にマップされた、遺伝子と疾患の間の関係を連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の共遺伝）を介して同定する。次に、影響を受けたおよび受けていない個体の間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の違いを決定することが必要である。もし正常な個体では観察されないが、いくつかのまたはすべての影響を受けた個体で突然変異が観察されるならば、その場合、突然変異がその疾患の原因であるかもしれない。物理的マッピング技術および遺伝子マッピング技術の現在の解明にて、疾患に関連する染色体領域に正確に突き止められたｃＤＮＡは、５０と５００の間の潜在的病因性遺伝子の一であるとすることができる。（これは１メガ塩基マッピング分解および２０ｋｂ当たり１遺伝子を仮定する）。ポリペプチド、その断片または他の誘導体、またはそのアナログ、またはそれらを発現する細胞を、抗体を産生するための免疫原として用いることができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体とすることができる。また、本発明は、キメラ抗体、一本鎖抗体およびヒト化抗体、ならびにＦａｂ断片、またはＦａｂ発現ライブラリーの産物を包含する。かかる抗体および断片の産生に当該分野にて知られている種々の操作を用いることができる。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して産生される抗体は、ポリペプチドを動物に直接注射することにより、またはポリペプチドを好ましくはヒト以外の動物に投与することにより得ることができる。次いで、かく得られた抗体はポリペプチドそれ自体と結合する。このように、ポリペプチドの断片だけをコードする配列であっても完全な天然ポリペプチドに結合する抗体を生成するのに用いることができる。次いで、かかる抗体を用いてそのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離することができる。モノクローナル抗体の調製では、連続的細胞系培養により得られる抗体を供給するいずれの技術も用いることができる。例えば、ハイブリドーマ技術(Kohler およびMilstein、１９７５、Ｎature、２５６：４９５−４９７）、トリオーマ技術、ヒトＢ−細胞ハイブリドーマ技術（Ｋozborら、１９８３、Ｉmmunology Ｔoday ４：７２）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃoleら、１９８５、Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy、Ａlan Ｒ.Ｌiss,Ｉnc.、ｐｐ．７７−９６）が含まれる。一本鎖抗体の産生について記載されている技法（米国特許第４,９４６,７７８号）は、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対する一本鎖抗体を産生するのに用いることができる。また、トランスジェニックマウスを用いて、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化抗体を発現させることができる。さらに、本発明を下記実施例を参照して説明する。しかしながら、本発明はかかる実施例に限定されないことが理解されるべきである。特記しない限り、すべての部または量は重量により表される。下記実施例の理解を容易にするために、頻出する特定の方法および／または用語を説明する。「プラスミド」は、大文字および／または数が前および／または後についた小文字ｐにより命名される。本発明の出発プラスミドは市販され、制約なしに公に得られるものであるか、あるいは公表された手順によって使用可能なプラスミドから構築されうる。さらに、記載されたのと同等なプラスミドが当該分野において知られており、当業者に明らかであろう。ＤＮＡの「消化」とは、ＤＮＡの特定配列にのみ作用する制限酵素でのＤＮＡの触媒的切断をいう。本発明に用いる種々の制限酵素は市販されており、当業者に知られたそれらの反応条件、コファクターおよび他の必要因子が用いられる。分析を目的とする場合には、典型的には、約２０μｌの緩衝液中、１μｇのプラスミドまたはＤＮＡ断片を約２ユニットの酵素とともに使用する。プラスミド構築のためのＤＮＡ断片の単離を目的とする場合には、典型的には、より大きな体積中で、５ないし５０μｇのＤＮＡを２０ないし２５０ユニットの酵素で消化する。個々の制限酵素に適するバッファーおよび基質量が製造者により詳述されている。３７℃で１時間のインキュベーション時間が通常用いられるが、供給者の説明に従って変更してもよい。消化後、反応物を直接ポリアクリルアミドゲルに乗せて所望断片を単離する。ゲデル,ディー（Goeddel,D.）ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ、第８巻：４０５７頁（１９８０年）により記載されている８パーセントのポリアクリルアミドゲルを用いて切断断片のサイズ分離を行う。「オリゴヌクレオチド」とは、化学合成してもよい１本鎖ポリヌクレオチドまたは２本の相補的ポリヌクレオチドをいう。かかる合成オリゴヌクレオチドは５ 'リン酸を有しておらず、かくして、キナーゼ存在下でＡＴＰを用いてリン酸を付加しない場合は別のオリゴヌクレオチドに連結しないであろう。合成オリゴヌクレオチドは、脱リン酸化されていない断片に連結するであろう。「連結」とは、２本鎖核酸断片の間にホスホジエステル結合を形成する工程をいう（マニアティス,ティー（Maniatis,T.）ら、上記文献、１４６頁）。特記しない限り、ほぼ等モル量の連結すべきＤＮＡ断片０.５μｇにつき１０ユニットのＴ４ＤＮＡリガーゼ（「リガーゼ」）を用い、既知のバッファーおよび条件を用いて連結を行ってよい。特記しない限り、グラハム,エフ（Graham,F.）およびファン・デル・エブ,エイ（Van der Eb,A.）、ウイロロジー（Virology）、第５２巻：４５６〜４５７頁（１９７３年）に記載のごとく形質転換を行った。実施例１ＭＣＰ−４の細菌での発現および精製まず、ＭＣＰ−４をコードしているＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ＃７５７０３を、プロセッシングされたＭＣＰ−４蛋白の５'ならびに３'配列（シグナルペプチド配列を欠くもの）およびＭＣＰ−４遺伝子の３’側のベクター配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。ＭＣＰ−４に対応するさらなるヌクレオチドをそれぞれ５'および３'配列に付加した。５'オリゴヌクレオチドヌクレオチドプライマーは配列５'−ＴＣＡＧＧＡＴＣＣＣＣＴＡＣＧＧＧＣＴＣＧＴＧＧＴＣ−３'（配列番号：３）を有し、プロセッシングされた蛋白のコドンの推定末端アミノ酸から始まるＭＣＰ−４暗号配列のうちの１８個のヌクレオチドが後に続くＢａｍＨＩ制限酵素部位を含んでいる。３'配列３'−ＣＧＣＴＣＴＡＧＡＧＴＡＡＡＡＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴ−５'（配列番号：４）は、ＸｂａＩ部位およびＭＣＰ−４ＤＮＡインサートの３'側に存在するpBluesc ript SKベクター配列に相補的な配列を含んでいる。制限酵素部位は細菌発現ベクターｐＱＥ−９(キアゲン・インコーポレイテッド（Quiagen、Inc.）9529 Eton Avenue，Chestworth，CA,91311)上の制限酵素部位に対応している。ｐＱＥ−９は抗生物質耐性（Ａｍｐ^r）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧ−調節可能プロモーターオペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボゾーム結合部位（ＲＢＳ）、６−Ｈｉｓタッグおよび制限酵素部位をコードしている。次いで、ｐＱＥ−９をＢａｍＨＩおよびＸｂａＩで消化した。増幅された配列をｐＱＥ−９に連結し、ヒスチジンタッグおよびＲＢＳをコードしている配列とフレームを合わせて挿入した。次いで、サムブルック,ジェイ（Sambrook,J.）ら、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Molecular Cloning:A Laboratory Manual）、Cold Spring Laboratory Press、１９８９年に記載の手順により、連結混合物を用いて、商標名Ｍ１５／ｒｅｐ４としてキアゲンから市販されているイー・コリ（E.coli）ｍ１５／ｒｅｐ４株を形質質転換した。Ｍ１５／ｒｅｐ４はプラスミドｐＥＲＰ４の多コピーを含んでおり、該プラスミドはｌａｃＩリプレッサーを発現し、またカナマイシン耐性（Ｋａｎ^r）を付与する。ＬＢプレート上での増殖能により形質転換体を同定し、アンピシリン／カナマイシン耐性コロニーを選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析により確認した。所望構築体を含むコロニーを、Ａｍｐ（１００μｇ／ｍｌ）およびＫａｎ（２５μｇ）双方を補足したＬＢ培地中の液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）増殖させた。Ｏ／Ｎ培養物を用いて、１：１００ないし１：２５０の割合で大型培養に接種する。光学密度６００（Ｏ．Ｄ．⁶⁰⁰）が０.４と０.６の間になるまで細胞を増殖させた。次いで、ＩＰＴＧ（［イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド」）を添加して最終濃度１ｍＭとした。ＩＰＴＧは、Ｐ／Ｏを解除してｌａｃＩリプレッサーを不活性化し、遺伝子発現の増大を引き起こすことにより誘導を行う。細胞をさらに３ないし４時間増殖させた。次いで、細胞を遠心分離により集めた。細胞ペレットをカオトロピック剤である６モラーのグアニジン塩酸中に可溶化した。清澄化後、６−Ｈｉｓタッグを含む蛋白による強い結合を可能にする条件下でのニッケル −キレートカラムでのクロマトグラフィーにより、可溶化したＭＣＰ−４をこの溶液から精製した。ホチュリ,イー（Hochuli,E.）ら、ジャーナル・オブ・クロマトグラフィー（J.Chromatography）、第４１１巻：１７７〜１８４頁（１９８４年）。ＭＣＰ−４（純度９５％）は、６モラーのグアニジン塩酸（ｐＨ５．０）中のカラムから溶離され、再生を目的として３モラーのグアニジンＨＣｌ、１００ｍＭのリン酸ナトリウム、１０ミリモラーのグルタチオン（還元型）および２ミリモラーのグルタチオン（酸化型）に調節した。この溶液中で１２時間インキュベーション後、蛋白を１０ミリモラーのリン酸ナトリウムに対して透析した。実施例２ヒト・細胞におけるＭＣＰ−４の発現パターンノーザンブロット分析を行ってヒト細胞におけるＭＣＰ−４の発現レベルを試験した。ＲＮＡｚｏｌ^TMＢシステム（バイオテックス・ラボラトリーズ・インコーポレイテッド（Biotex Laboratories,Inc.）、6023 South Loop East,Houston ，TX 77033）を用いて全細胞ＲＮＡ試料を単離した。特定されたそれぞれのヒト組織から単離した全ＲＮＡ約１０μｇを１％アガロースゲルで分離し、ナイロンフィルター上にブロットした（サムブルック（Sambrook）ら、モレキュラー・クローニング（Molecular Cloning）、Cold Spring Harbor Laboratory Press,(19 89)）。５０ｎｇのＤＮＡ断片を用いて、ストラタジーン（Stratagene）のPrime -Itキットによって標識反応を行った。標識ＤＮＡをSelect-G-50カラムで精製した（５プライム−３プライム・インコーポレイテッド（5Prime-3Prime,Inc.）、 5603 Arapathoe Road，Boulder，CO 80303）。次いで、０.５ＭＮａＰＯ₄,ｐＨ７.４および７％ＳＤＳ中、６５℃において、フィルターを、１００００００ｃｐｍ／ｍｌの放射性標識全長ＭＣＰ−４遺伝子とハイブリダイゼーションさせた。０.５ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで、室温で２回洗浄した後、−７０℃で一晩フィルターを増強スクリーンに一晩曝露した。ＭＣＰ−４に対するメッセンジャーＲＮＡは、活性化ならびに未活性化Ｔ細胞、単球およびＴ細胞系において豊富である。実施例３バキュロウイルス発現系を用いたＭＣＰ−４のクローニングおよび発現全長ＭＣＰ−４蛋白質をコードするＤＮＡ配列、ＡＴＣＣ番号７５７０３を、遺伝子の５’および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅させる：増幅させた配列を、商業的に入手可能なキット (「ジンクリーン」、バイオ・１０１・インコーポレイテッド（BIO 101 Inc.）,La Jolla，Ca.)を用いて１％アガロースゲルから単離する。該断片を次いで増幅した産生物に対応する制限エンドヌクレアーゼで消化し、次いで、１％アガロースゲル上で精製した。この断片をＦ２と命名する。ベクターｐＲＧ１（ｐＶＬ９４１ベクターの修飾、以下に論ずる）を、バキュロウイルス発現系(概説としては、サマーズ，エム・デイ(Summers，M.D.)およびスミス，ジー・イー（Smith,G.E.）１９８７、バキュロウイルスベクターおよび昆虫細胞培養法のための方法のマニュアル(A manual of methods for baculovir us vectors and insect cell culture procedures)、Texas Agricultural Exper imental Station Bulletin No．1555を参照されたし)を用いるＭＣＰ−４蛋白で使用する。この発現ベクターは、オートグラファ・カリフォルニカ・ニクレアー・ペリヘドリン・ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーターを含み、増幅した産生物を消化するために用いられた制限エンドヌクレアーゼが続く。シミアンウイルス（ＳＶ）４０のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために用いる。組換えウイルスの容易な選択のために、イー・コリ由来のベーターガラクトシダーゼ遺伝子を、ポリヘドリンプロモーターと同じ向きに挿入し、ポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグナルが続く。ポリヘドリン配列の両側には、共トランスフェクトされた野生型ウイルスＤＮＡの、細胞媒介相同的組換えのためのウイルス配列が直ぐに隣接した並ぶ。ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１のごとき、多くの他のバキュロウイルスベクターをｐＲＧ１の代わりに用いることができる（ラッカウ,ブイ・エイ(Luckow，V.A.) およびサマーズ，エム・デイ(Summers，M.D.)、バイロロジー(Virology)１７０：３１−３９）。プラスミドを、制限酵素で消化し、当該分野で公知の方法により、子ウシ腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化する。ＤＮＡを、次いで、商業的に入手可能なキット(「ジンクリーン」、バイオ・１０１・インコーポレイテッド（BIO 101 I nc.）,La Jolla，Ca.)を用いて１％アガロースゲルから単離する。このベクターＤＮＡをＶ２と命名する。断片Ｆ２および脱リン酸化したプラスミドＶ２を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼで連結する。次いで、イー・コリＨＢ１０１細胞を形質転換し、該酵素を用いて、ＭＣＰ−４遺伝子を持つプラスミド（ｐＢａｃＭＣＰ−４）を含む細菌を同定される。５μｇのプラスミドｐＢａｃＭＣＰ−４を、リポフェクション法(Felgner(フェルグナー)ら、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ(Proc.Natl.Acad.Sci USA 84:7413-7417(1987))を用いて、１.０μ ｇの商業的に入手可能な線状化バキュロウイルス(「バキュロゴールド^TM・バキュロウイルス・ＤＮＡ(BaculoGold^TMbaculovirus DNA)、ファルミンゲン(Pharmi ngen)、San Diego，C.A.)で共−トランスフェクトする。１μｇのバキュロゴールド^TMウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドｐＢａｃＭＣＰ−４を、５０μｌの無血清グレース(Grace)培地(ライフ・テクノロジーズ・インコーポレイテッド(Life Technologies，Inc.)、Gaithersburg，MD)を含むマイクロタイタープレートの無菌ウェルに混合する。その後、１０μｌのリポフェクチンおよび９０μｌのグレース培地を添加し、混合し、１５分間室温にてインキュベートする。次いでトランスフェクション混合物を、無血清グレート培地で３５ｍｍの組織培養プレート中に撒いたｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ１７１１）に滴下する。プレートを、前後に揺らし、新しく添加した溶液を混合する。次いで、プレートを５時間２７℃にてインキュベートする。５時間後、トランスフェクション溶液をプレートから除去し、１０％のウシ胎児血清を補足した１ｍｌのGrace溶液を添加する。プレートをインキュベーターに戻し、培養を、２７℃にて４日間継続した。４日後に上清を集め、プラーク分析を、サマーズ(Summers)およびスミス(Smit h)(上記)に記載したのと同様に行う。修飾として、「ブルー・ガル」(ライフ・テクノロジーズ・インコーポレイテッド(Lige Technologies Inc.)、Gaithersbu rg)を用い、このことにより、青く染まったプラークを容易に単離することが可能となる。（「プラーク・アッセイ」の詳細な記述は、また、昆虫細胞培養のための使用者のガイドおよびLife Technologies，Inc.によって配布されるバキュロバイロロジー(baculovirology)、Gaithersburg，第９頁−第１０頁に見いだすことができる）。系列希釈の４日後、ウイルスを細胞に添加し、青く染まったプラークをエッペンドルフピペットの先端で拾う。組換えウイルスを含む寒天を、次いで、２００ μｌのグレース培地を含むエッペンドル試験管に再懸濁する。寒天を、短い遠心にて除き、組換えバキュロウイルスを含む上清を、３５ｍｍ皿中に撒いた感染Ｓｆ９細胞を感染させるため用いる。４日後、これらの培養皿の上清を集め、次いで４℃にて保存する。Ｓｆ９細胞を、１０％の熱で不活性化したＦＢＳを補足したグレース培地中で増殖させる。細胞を、２の感染多重度（ＭＯＩ）にて、組換えバキュロウイルスＶ−ＭＣＰ−４で感染させる。６時間後、培地を除去し、エスエフ・９００ I Iミディアム・マイナス・メチオニン・アンド・システイン(SF900 II medium mi nus methionine and cysteine)、ライフ・テクノロジーズ・インコーポレイテッド(Life Technologies Inc.)、Gaithersburg)で置換する。４２時間後、５μＣｉの³⁵Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの³⁵Ｓシステイン(アマシャム(Amersham)) を添加する。細胞をさらに１６時間インキュベートし、次いで、遠心にて集め、標識した蛋白質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーにて可視化する。実施例４遺伝子治療を介した発現線維芽細胞を、皮膚生検によって対象から得る。得られた組織を、組織−培養培地中に入れ、小片に分ける。組織の小さい固まりを、各フラスコに約１０片となるよう、組織培養フラスコの湿った表面に置く。フラスコを上下を逆にし、堅く閉め、室温にて一晩放置する。室温にて２４時間後、フラスコを逆にし、組織の固まりはフラスコの底に固定したままであり、新鮮な培地（例えば、１０％ＰＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むたハム（Ｈａｍ）のＦ１２培地）を添加する。これを、次いで、３７℃にて約１週間インキュベートする。この時点で、新鮮な培地を添加し、引き続いて数日間毎日交換する。培養にてさらに２週間後、線維芽細胞の単層が現れる。該単層をトリプシン処理し、より大きいフラスコに計って入れる。モロニー・ネズミ肉腫ウイルスの長い末端反復配列が直ぐに隣接するｐＭＶ− ７（キルシュメイアー，ピイ・テイ（Kirchmeier，P.T.）ら、ＤＮＡ７：２１９−２５（１９８８））を、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIIIで消化し、次いで子ウシ腸ホスファターゼで処理する。直線状ベクターを、アガロースゲルで分画し、ガラスビーズを用いて精製する。本発明のポリペプチドをコードするｃＤＮＡは、各々、５’および３’末端に対応するＰＣＲプライマーを用いて増幅する。５’プライマーはＥｃｏＲＩ部位を含み、３’プライマーは、さらに、ＨｉｎｄIII部位を含む。等量の、モロニー・ネズミ肉腫ウイルスの直線状の骨格および増幅したＥｃｏＲＩならびにＨｉｎｄIII断片を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼの存在下にて一緒に添加する。得られた混合物を、２つの断片の連結に適した条件にて維持する。連結混合物を、細菌ＨＢ１０１を形質転換するのに用い、これを、次いで、該ベクターが、正確に挿入された興味のある遺伝子を有することを確認とするために、カナマイシン含有寒天で平板培養する。両親媒性ｐＡ３１７またはＧＰ＋ａｍ１２パッケージング細胞を、組織培養中で増殖させ、１０％子ウシ血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを添加したダルベッコの修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で密集密度にする。該遺伝子を含むＭＳＶベクターを次いで培地に添加し、パッケージング細胞をベクターで形質導入する。パッケージング細胞は、今や、該遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を産生する（パッケージング細胞は、いまや、プロデューサー細胞と呼ばれる）。新鮮な培地を、形質導入されたプロデューサー細胞に添加し、引き続き、培地を、１０ｃｍプレートの密集プロデューサー細胞から集める。感染性のウイルス粒子を含む、スペント培地を、ミリポアフィルターを通して濾過して、脱着したプロデューサー細胞を除去し、この培地を次いで線維芽細胞を感染させるのに用いる。培地を、線維芽細胞の密集下プレートから除去し、プロデューサー細胞からの培地ですばやく置換する。この培地を除去し、新鮮な培地で置換する。ウイルスの力価が高ければ、事実上全ての線維芽細胞が感染し、選択は必要ないであろう。力価が非常に低ければ、ｎｅｏまたはｈｉｓのごとき選択マーカーを有するレトロウイルベクターを使用する必要がある。次いで、操作した線維芽細胞を、単独で、またはサイトデックス・３・マイクロキャリアー・ビーズ(cytodex 3 microcarrier beads)上で密集するまで増殖させた後、宿主に注入する。線維芽細胞は、今や、蛋白産生物を産生する。実施例５骨髄幹細胞のモービライザーとしてのＭＣＰ−４のプライマリー・インディケーション（骨髄レスキュー）末梢血、脾臓、および骨髄中の原始造血前駆細胞の分布に対するＭＣＰ−４の効果を、１６週令のＣ５７Ｂ１／６マウス（約２０ｇ）にて研究した。最初の実験において、３匹のマウスに、腹腔内に毎日１ｍｇ／ｋｇのＭＣＰ−４または生理食塩水を注射し、最後の注射から２４時間後に分析した。第二の実験において、さらに３匹のマウスに、腹腔内に毎日１ｍｇ／ｋｇのＭＣＰ−４または生理食塩水を４日間注射し、最後の注射２４時間後に分析した。両実験において、それぞれの動物の血液を、心臓穿刺により集め、マウスを殺して骨髄および脾臓を得た。各組織からの示された数の細胞を、寒天含有培地中、５ｎｇ／ｍｌＩＬ −３、５０ｎｇ／ｍｌＳＣＦ、５ｎｇ／ｍｌＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍ１ＩＬ−１αの存在下二連にて撒き、１４日間インキュベートする。２つの実験において、異なる動物からのデータをプールし、平均±Ｓ．Ｄ．として表す。両実験の結果より、ＭＣＰ−４は幹細胞を、骨髄から末梢血へ可動化させることが示される［表１および２］。最初の実験において、ＭＣＰ−４での処理の２日後、末梢血中のＨＰＰ−ＣＦＣ、ＬＰＰ−ＣＦＣおよび未熟細胞の頻度が、対照を顕著に超えて増加した。脾臓に変化は観察されず、ＨＰＰ−ＣＦＣの減少が骨髄中に見いだされた［表１］。第二の実験において、ＭＣＰ−４での処理の４日後、ＨＰＰ−ＣＦＣ、ＬＰＰ−ＣＦＣおよび未熟細胞頻度の同一の顕著な増加が末梢血中に見いだされる。未熟細胞頻度の顕著な増加が脾臓にて見いだされ、ＨＰＰ−ＣＦＣおよびＬＰＰ−ＣＦＣの顕著な減少が骨髄にて見いだされる［表２］。とりわけ、ＭＣＰ−４の注射後の末梢血中の未熟造血細胞の存在に注意することが重要である。対照および、ＭＣＰ−４で処理したマウス双方の白血球組成のＦＡＣＳｃａｎプロフィールが同一であるので［表３］、ＭＣＰ−４で処理した動物中に観察される影響は毒性によるものではなかった。実施例６シトシン・アラビノシドに対するミエロプロテクタントとしてのＭＣＰ−４この実験において、Ｌｉｎ−細胞を、５ｎｇ／ｍｌマウスＩＬ−３、５０ｎ g／ｍｌマウスＳＣＦ（カラム１）；ＩＬ−３、ＳＣＦおよび１００ｎｇ／ｍｌＭＣＰ−４（カラム２）；またはｉｌ−３、ＳＣＦおよび１００ｎｇ／ｍｌの無関係タンパク質ＨＧ２００−３−Ｂ（カラム３）を補足した増殖培地中に撒いた（１×１０⁵細胞／ｍｌ）。インキュベーションの４８時間後、上記の培養１組に５０μｇ／ｍｌＡｒａ−Ｃを加え、インキュベーションをさらに２４時間続けた。細胞を次いで集め、３回ＨＢＳＳで洗浄し、薬剤およびサイトカイン類を除去し、図４の脚注に記載するごとく、ＨＰＰ−ＣＦＣおよびＬＰＰ−ＣＦＣの存在を分析した。結果を、保護の平均％（±ＳＤ）として表す。保護の％を、以下のように計算した：パーセント保護は、Ａｒａ−Ｃの存在下でインキュベートした培養中に見いだされるコロニー数を、Ａｒａ−Ｃが存在しない状態でインキュベートした培養中に見いだされるコロニー数で割り、１００を掛けたものして表される。３つの実験のうちの１つからのデータを図６に示す。全ての試料を二連にて試験した。実施例７５−フルオロウラシルに対するミエロプロテスタントとしてのＭＣＰ−４マウス骨髄細胞の単球集団は、細胞表面抗原に対するパネルモノクローナル抗体を用いた陰性試験によると、系統−初回攻撃細胞が枯渇していた。得られた細胞集団（Ｌｉｎ−細胞）を、ＩＬ−３（５ｎｇ／ｍｌ）、ＳＣＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ（５ｎｇ／ｍｌ）、Ｍ−ＣＳＦ（５ｎｇ／ｍｌ）およびＩＬ −１αを含む増殖培地中に再懸濁し（１×１０⁵細胞／ｍｌ）、１ｍｌのこの細胞懸濁液を、培養試験管に分配した。（１）ケモカインを摂取させない二連の培養組；および（２）ＭＣＰ−４の１００ｎｇ／ｍｌにての二連培養；および（３）無関係のタンパク質の１００ｎｇ／ｍｌにての二連培養。全ての培養を、組織培養インキュベーター中で４８時間インキュベートし、この時点で各組に５−フルオロウラシルを１００μｇ／ｍｌ添加し、インキュベーションをさらに２４時間続けた。全ての培養を次いで集め、ＨＢＳＳで３回洗浄し、次いで、図５の脚注に記載するごとく、ＨＰＰ−ＣＦＣおよびＬＰＰ−ＣＦＣの存在下で分析した。パーセント保護は、５−ＦＵの存在下にてインキュベートした培養中に見いだされるコロニー数を、５−ＦＵ無しにインキュベートした培養中に見いだされるコロニー数により割って１００を掛けたものとして表される。データは、平均± ＳＤとして表される。２つの実験を行い、各分析は二連であった。図７参照。実施例８皮質ニューロン生存に対するＭＣＰ−４の影響懐胎から第１７日のスプラーグ−ドーリーラット(Sprague-Dawley rat)を殺し、皮質を除去し、髄膜を、注意深く皮質組織片から剥がした。単一細胞懸濁液を調製し、細胞を、５％ウマ血清を含有する培地にて、２０,０００細胞／ウェルの密度にて平板培養した。２４時間後、血清含有培地を除去し、無血清培地を培養に添加した。無血清培養には、図８に示される濃度のＭＣＰ−４が含まれていた。用いられるＭＣＰ−４は、本願の配列番号：１に示されるポリヌクレオチド配列によってコードされるＭＣＰ−４ポリヘプチドである。培地を１日毎に交換し、ＭＣＰ−４を再び添加した。ニューロンを、生存試験に先立って６日間培養中に維持した。細胞生存率は、モレキュラー・プローブズ(Molecular Probes)からのライブ／デッド・アッセイ・キット(live/dead assay kit)を用いて評価した。この分析は、生きたおよび死んだ細胞の同時測定に基づく二色蛍光生存率分析である。生きた細胞は、ほとんど非蛍光の細胞を透過できるカルセインＡから、強い蛍光のカルセインへの酵素的変換によって決定される普遍性細胞内エステラーゼ活性の存在によって区別される。ポリカチオン性カルセリンは、生細胞によってよく保持され、従って、生細胞中で強い均一な緑の蛍光を発する。従って、発光の読み（約５３０ｎｍ）は、培養中の全細胞数の尺度である。図８に示されるように、生細胞数は、ＭＣＰ−４の濃度が増加するにつれて増加した。上記教示によれば本発明の多くの修飾および変更が可能であり、それゆえ、添付した請求の範囲内において、特記しない限り本発明を実施することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＥＡＣ０７Ｋ 14/52 39/395 ＡＢＦＣ１２Ｎ 1/21 ＡＢＹＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ 48/00 ＡＤＮＣ１２Ｎ 5/00 ＢＣ０７Ｋ 14/52 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵＣ１２Ｎ 1/21 ＡＤＳ 5/10 ＡＥＡＣ１２Ｐ 21/02 ＡＢＥ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ルーベン，スティーブン・エムアメリカ合衆国20832メリーランド州オールニ、ヘリティッジ・ヒルズ・ドライブ 18528番 (72)発明者サットン，グランジャー・ジー・ザ・サードアメリカ合衆国21045メリーランド州コロンビア、スノーマン・コート6409番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号：２に示されるアミノ酸−２６ないしアミノ酸９３を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号：２に示されるアミノ酸１ないしアミノ酸ないし９３を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｃ）ＡＴＣＣ受託番号７５７０３に含まれるＤＮＡによって発現されるアミノ酸配列を有する成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能であって、それらに対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド；および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド断片よりなる群から選択されるメンバーを含む単離されたポリヌクレオチド。２．ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項１記載のポリヌクレオチド。３．配列番号：２のアミノ酸１ないし９３からなるポリペプチドをコードする請求項２記載のポリヌクレオチド。４．請求項２記載のＤＮＡを含むベクター。５．請求項４記載のベクターで遺伝子操作された宿主細胞。６．請求項５記載の宿主細胞から該ＤＮＡによりコードされるポリペプチドを発現させることからなるポリペプチドの製法。７．請求項４記載のベクターで遺伝子操作された細胞からなる、ポリペプチドを発現できる細胞の生産生成。８．（ｉ）配列番号：２の推定アミノ酸配列を有するポリペプチド、その断片、アナログおよび誘導体ならびに（ii）ＡＴＣＣ受託番号７５７０３のｃＤＮＡによってコードされるポリペプチド、および該ポリペプチドの断片、アナログおよび誘導体よりなる群から選択されるメンバーを含むポリペプチド。９．ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸１ないしアミノ酸９３からなる請求項８記載のポリペプチド。１０．請求項８記載のポリペプチドの活性化を阻害する化合物。１１．ＭＣＰ−４の必要な患者に対して治療上有効量の請求項８記載のポリペプチドを投与することを特徴とする該患者の治療方法。１２．ポリヌクレオチドをコードするＤＮＡを患者に供し、該ポリペプチドをイン・ビボで発現させることによりポリペプチドの該治療上有効量を投与する請求項１１記載の方法。１３．ＭＣＰ−４ポリペプチドの抑制の必要な患者に治療上有効量の請求項１０記載の化合物を投与することを特徴とする該患者の治療方法。１４．ＭＣＰ−４をコードする核酸配列中の突然変異を決定することを特徴とする、ＭＣＰ−４の過小発現に関連する病気または罹病性の診断方法。１５．宿主由来の試料中の請求項８記載のポリペプチドの存在を分析することを特徴とする診断方法。１６．ポリペプチドに対するレセプターをその表面に発現する細胞を、該レセプターへの結合を可能とする条件下で化合物と接触させ、該レセプターは、該レセプターへの化合物の結合に応答して、検出可能なシグナルを供することができる第二の成分と会合し、該化合物と該レセプターとの相互作用により生じたシグナルの不存在を検出することを特徴とする請求項８記載のポリペプチドに結合し、その活性化を阻害する化合物の同定方法。１７．ポリペプチドに対するレセプターをその表面に発現する細胞を、該レセプターへの結合を可能とする条件下で化合物と接触させ、該レセプターは、該レセプターへの化合物の結合に応答して、検出可能なシグナルを供することができる第二の成分と会合し、該化合物と該レセプターとの相互作用により生じたシグナルの存在を検出することを特徴とする請求項８記載のポリペプチドに結合し、それを活性化する化合物の同定方法。１８．宿主の末梢血中の造血前駆細胞の量を増加させるのに有効な量の請求項８記載のポリペプチドを該宿主に投与することを特徴とする末梢血中の造血前駆細胞量を増大させる方法。１９．化学療法剤による造血前駆細胞の破壊を阻害するのに有効な量の請求項８記載のポリペプチドを宿主に投与することを特徴とする化学療法剤による宿主の治療の結果である造血前駆細胞の活性化を阻害する方法。２０．それを必要とする宿主にニューロン細胞の変性を阻害するのに有効な量の請求項８記載の化合物を投与することを特徴とするニューロン細胞の変性を阻害する方法。