JPH10505493A

JPH10505493A - ヒトケモカインベータ−９

Info

Publication number: JPH10505493A
Application number: JP8508037A
Authority: JP
Inventors: リ，ハオドン; アダムス，マーク・ディ
Original assignee: Human Genome Sciences Inc
Current assignee: Human Genome Sciences Inc
Priority date: 1994-08-23
Filing date: 1995-06-06
Publication date: 1998-06-02
Also published as: US7097985B2; PT799311E; WO1996006169A1; DE69534044T2; ES2235172T3; EP0799311B1; DE69534044D1; DK0799311T3; EP0799311A1; US7198944B2; AU708558B2; CA2198206A1; EP0799311A4; ATE290080T1; MX9701330A; US20050244888A1; KR970705635A; US20060040313A1; NZ288799A; AU2814195A

Abstract

(57)【要約】ヒトのＣｋβ−９のポリペプチド、およびそのようなケモカインポリペプチドをコードするＤＮＡ(ＲＮＡ)、並びにそのようなポリペプチドを組換え技術により製造する方法を開示する。白血病、腫瘍、慢性感染症、自己免疫病、線維性障害、創傷治癒および乾癬の治療のためにＣｋβ−９ポリペプチドを用いる方法も開示する。そのようなポリペプチドに対するアンタゴニスト、並びにリウマチ様関節炎、自己免疫および慢性炎症性および感染性の病気、アレルギー反応、プロスタグランジン非依存性熱病および骨髄不全を治療する治療剤としてのその使用も開示する。Ｃｋβ−９コード配列における変異の存在およびＣｋβ−９タンパク質の過発現を検出する診断法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ヒトケモカインベータ−９本発明は、新しく同定されたポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドがコードするポリペプチド、そのようなポリヌクレオチド及びポリペプチドの使用、さらに、そのようなポリヌクレオチド及びポリペプチドの生産に関するものである。さらに詳しくは、本発明のポリペプチドは、以下、時には“Ｃｋβ−９ ”と呼ぶこともあるヒトケモカインベータ−９である。本発明は又、そのようなポリペプチドの作用を抑制することにも関する。インタークラインなケモカインは、サイトカインと呼ばれることもあり、構造的に及び機能的に関連するサイトカインのサブファミリーである。これらの分子は８−１０ｋｄの大きさである。通常、ケモカインは、アミノ酸レベルにおいて２０％から７５％の相同性を示し、２つのジスルフィド結合を形成する４つの保存されたシステイン残基によって特徴づけられる。最初の２つのシステイン残基の配置に基づいて、ケモカインはアルファとベータの２つのサブファミリーに分類されてきた。アルファサブファミリーでは、最初の２つのシステインは１つのアミノ酸によって分離されているので、“Ｃ−Ｘ−Ｃ”サブファミリーと呼ばれる。ベータサブファミリーでは、２つのシステインは隣あった位置にあり、そのため、“Ｃ−Ｃ”サブファミリーと呼ばれる。今まで、このファミリーの少なくとも８つの異なるメンバーがヒトで同定されている。このインタークラインなサイトカインは広範囲に及ぶ機能を示す。顕著な特徴は、別の種類の細胞の走化性移動を導き出すというそれらの能力であり、その細胞には、単核白血球、好中球、Ｔリンパ球、好塩基球及び繊維芽細胞が含まれる。多くのケモカインは前炎症活性を有し、炎症反応中の多数の段階に関与する。これらの活性は、ヒスタミン放出、リソソーム酵素及びロイコトリエン放出の刺激、内皮の細胞への標的免疫細胞の付着力の増加、補体タンパク質の結合を高めること、顆粒球粘着分子と補体レセプターの発現のを誘発、咳き込むことを含む。炎症においてそれらの関与に加えて、あるケモカインは他の活性をも示すことが示された。例えば、マクロファージ炎症タンパク質１（ＭＩＰ−１）は、血液生成の幹細胞の増殖を抑制することが可能であり、血小板因子−４（ＰＦ−４）は、内皮細胞の増殖の強力な抑制剤であり、インターロイキン−３（ＩＬ−８）は、ケラチン生成細胞の増殖を増進し、ＧＲＯは、黒色腫細胞の自己分泌性増殖因子である。様々な生物学的な活性を考えると、ケモカインが、リンパ球の通行、傷の治療、血液生成の調製、およびアレルギー、喘息及び関節炎というような免疫学的な病気を含む、多くの生理的な状態、そして病的状態に関係してきたことは驚くべきことではない。 “Ｃ−Ｃ”分枝（ブランチ）のメンバーは次のような細胞において効果を表す。すなわち、寄生体を破壊して寄生体の感染を少なくし、また呼吸器系の気道における慢性の炎症を起こす好酸球。脊椎動物における腫瘍の形成を抑制するマクロファージ。アレルギーの炎症において役割を果すヒスタミンを放出する好塩基球。しかしながら、１つの分枝のメンバーは、他の分枝のケモカインと通常、反応する細胞に影響を及ぼすので、正確な役割をブランチのメンバーに帰属させることはできない。Ｃ−Ｃ分枝のメンバーが単核細胞に主に作用し、Ｃ−Ｘ−Ｃ分枝のメンバーが好中球に主に作用するが、ある明らかな化学誘引物質の性質を、このガイドラインに基づき、あるケモカインに帰することはできない。一つのファミリー由来のいくつかのケモカインは他の特徴を示す。本発明のポリペプチドは、アミノ酸配列相同性に基づきＣｋβ−９として同定された。本発明の１態様によれば、新規なポリペプチド、生物学的に活性な、及び診断あるいは治療に有用なそれらのフラグメント、アナログ及び誘導体が提供される。本発明のポリペプチドはヒト起源である。本発明の他の態様によれば、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ並びにそれらの類似体及び生物学的に活性な、および診断上あるいは治療上有用なフラグメント及び誘導体を含む、本発明のポリペプチドをコードする単離された核酸分子が提供される。本発明の更なる態様によれば、該タンパク質の発現及びその後の該タンパク質の回収を促進する条件下において、本発明のポリペプチドをコードする核酸配列を含む、組換え原核生物及び／または真核生物の宿主細胞を培養することを含んでなる、組換技術によるこのようなポリペプチドを生産する方法が提供される。本発明の更なる態様によれば、このようなポリペプチド又は、このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを治療のために利用する方法、例えば、固体腫瘍、慢性的な感染、自己−免疫病、乾癬、喘息、アレルギーを処置する方法、血液生成を調整する方法、傷の治療を増進する方法が提供される。本発明の更なる態様によれば、このようなポリペプチドに対する抗体が提供される。本発明の他の更なる態様によれば、このようなポリペプチドの作用を抑制するために用いられる、このようなポリペプチドに対する拮抗薬が提供される。例えば、自己免疫病、慢性的な炎症を起こす病気、ヒスタミンを媒介とするアレルギー反応、喘息、関節炎、プロスタプランジン非依存性、骨髄不全、珪肺症、サルコイドーシス、過エオシン好性症候群及び肺炎などがある。本発明の更なる態様によれば、本発明の核酸配列を特異的にハイブリダイズするのに十分な長さの核酸分子を含む核酸プローブをもまた供給する。本発明の更なる他の態様によれば、ポリペプチドの発現とこのようなポリペプチドをコードする核酸配列における突然変異に関連する病気を検出する、診断アッセイが提供される。本発明の更なる態様によれば、科学的な研究、ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの製造に関するインビトロの目的のために、このようなポリペプチド、又はこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを利用する方法が提供される。本発明のこれらの及び他の態様は、本明細書の教示から当業者にとって明白であろう。次の図は、本発明の態様を説明するものであり、請求の範囲によって包含される本発明の範囲を限定することを意味するものではない。図１は、Ｃｋβ−９ｃＤＮＡ配列及び対応する推定アミノ酸配列を表す。最初の２３アミノ酸はリーダー配列を表し、従って、推定される成熟ポリペプチドは１１１アミノ酸を含む。アミノ酸表記は、標準的な１文字略語を用いている。図２は、Ｃｋβ−９と成熟エオタキシンのペプチド（下部）との間のアミノ酸配列相同性を表す。本発明の一態様により、第１図（配列番号２）の推定アミノ酸配列を有する成熟ポリペプチド、または１９９４年６月７日にＡＴＣＣ寄託番号第７５８０３号として寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチド、および第２図の推定アミノ酸配列を有する成熟Ｃkβ−１０ポリペプチド、または１９９４年７月２９日にＡＴＣＣ寄託番号第７５８４９号として寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドをコードする、単離された核酸(ポリヌクレオチド)を提供する。Ｃkβ−９をコードするポリヌクレオチドは、ヒト胸部リンパ節から得られたc ＤＮＡライブラリー中で発見された。Ｃkβ−９は、構造的上、ケモカインファミリーに関係がある。それは、１３４個のアミノ酸残基のタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを含み、このうち、最初の約２３個のアミノ酸残基は推定されるリーダー配列であることから、成熟タンパク質は１１１個のアミノ酸を含んでなる。そのタンパク質は、エオタキシンに対し、７５アミノ酸残基にわたり、３２％の同一性および６９％の類似性をもって、最も高い程度の相同性を示す。ケモカインにおける４つの空間的に保存されたシステイン残基が、本発明のポリペプチドにおいて見い出されることもまた重要である。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形で、またはＤＮＡの形であり得、このＤＮＡには、cＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡが含まれる。該ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得、また一本鎖であるなら、コード鎖または非コード(アンチ−センス)鎖であり得る。成熟ポリペプチドをコードするコード配列は、第１図（配列番号１）に示すコード配列または寄託されたクローンのコード配列と同じであってよく、あるいは遺伝コードの重複または縮重の結果として、第１図（配列番号１）のＤＮＡまたは寄託されたcＤＮＡと同じ成熟ポリペプチドをコードする異なったコード配列であってもよい。第１図（配列番号２）の成熟ポリペプチドまたは寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドには、以下のものが含まれ得る：成熟ポリペプチドのコード配列のみ；成熟ポリペプチドのコード配列、およびリーダーもしくは分泌配列またはプロタンパク質配列といったような付加的コード配列；成熟ポリペプチドのコード配列(また場合により、付加的コード配列)、および成熟ポリペプチドのコード配列のイントロンまたは非コード配列５'および／または３'といったような非コード配列。従って、「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」という用語は、ポリペプチドのコード配列のみが含まれるポリヌクレオチド、さらにはまた、付加的コードおよび／または非コード配列が含まれるポリヌクレオチドを包含する。本発明はさらに、第１図（配列番号２）の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体をコードする、上記のポリヌクレオチドの変異体に関する。ポリヌクレオチドの変異体は、ポリヌクレオチドの天然に存在するアレル変異体またはポリヌクレオチドの天然には存在しない変異体であり得る。従って、本発明には、第１図（配列番号２）に示すのと同じ成熟ポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、さらにはまた、そのようなポリヌクレオチドの変異体が含まれ、これらの変異体は、第１図（配列番号２）のポリペプチドまたは寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログをコードする。そのようなヌクレオチド変異体には、欠失変異体、置換変異体並びに付加および挿入変異体が含まれる。先に示したように、該ポリヌクレオチドは、第１図（配列番号２）に示すコード配列の天然に存在するアレル変異体または寄託されたクローンのコード配列の天然に存在するアレル変異体であるコード配列を有し得る。当業界で知られているように、アレル変異体は、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの置換、欠失または付加を有し得る別の形のポリヌクレオチド配列であり、これは、コードされるポリペプチドの機能を実質的には変えない。本発明にはまた、成熟ポリペプチドのコード配列が、宿主細胞からのポリペプチドの発現および分泌を助けるポリヌクレオチド配列、例えば、細胞からのポリペプチドの輸送を制御するための分泌配列として機能するリーダー配列に、同じ読み枠内で融合し得るポリヌクレオチドも含まれる。リーダー配列を有するポリペプチドがプレタンパク質であり、また宿主細胞により切断されて、成熟型のポリペプチドを形成したリーダー配列を有することがある。該ポリヌクレオチドはまた、付加的５'アミノ酸残基を加えた成熟タンパク質であるプロタンパク質もコードし得る。プロ配列を有する成熟タンパク質がプロタンパク質であり、また不活性型のタンパク質である。プロ配列が一度切断されると、活性成熟タンパク質が残る。従って、例えば、本発明のポリヌクレオチドは、成熟タンパク質、またはプロ配列を有するタンパク質、またはプロ配列およびプレ配列(リーダー配列)の両方を有するタンパク質をコードし得る。本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドの精製を可能とするマーカー配列に枠内で融合したコード配列も有し得る。細菌宿主の場合には、そのマーカー配列は、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製を提供するための、pＱＥ−９ベクターにより与えられるヘキサ−ヒスチジンタグ(tag)であってよく、または、例えば、哺乳動物宿主、例えば、ＣＯＳ−７細胞を使用する場合には、そのマーカー配列は、赤血球凝集素(ＨＡ)タグであってよい。ＨＡタグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質から得られるエピトープに対応する( Ｗilson,Ｉ.ら、Ｃell、３７：７６７（１９８４）)。「遺伝子」なる語はポリペプチド鎖の製造に関与するＤＮＡのセグメントを意味する。すなわちそれは、コード配列の前と後の領域（リーダーおよびトレイラー）、並びに個々のコードセグメント（エクソン）の間の介在配列（イントロン）を含む。本発明の完全長の遺伝子のフラグメントをｃＤＮＡライブラリのハイブリダイゼーションプローブとして用い、完全長のｃＤＮＡを単離し、その遺伝子と大きい配列類似性または類似の生物学的活性を有する他のｃＤＮＡを単離し得る。このタイプのプローブは、好ましくは少なくとも３０塩基を有し、例えば５０またはそれ以上の塩基を有してもよい。プローブは、完全長の転写に対応するｃＤＮＡクローン、および制御およびプロモーター領域、エクソン、並びにイントロンを含む完全な遺伝子を有するゲノムクローンを同定するのにも用い得る。このことに関するスクリーニングの例は、既知のＤＮＡ配列を使用してオリゴヌクレオチドプローブを合成することにより、遺伝子のコード領域を単離することである。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識化オリゴヌクレオチドを、ヒトのcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはmＲＮＡのライブラリーをスクリーニングするために使用して、ライブラリーのどのメンバーにプローブがハイブリダイズするかを決定する。本発明はさらに、配列間に少なくとも７０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性がある場合に、上記の配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本発明は特に、ストリンジェント条件下、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書中で使用する場合、「ストリンジェント条件」という用語は、配列間に少なくとも９５％、また好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にのみ、ハイブリダイゼーションが起こるであろうことを意味する。好ましい態様では、上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドは、第１図（配列番号１）のcＤＮＡまたは寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドと同じ生物学的機能または活性を実質的には保有するポリペプチドをコードする。或いは、該ポリヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズし、上記のように、それに対し同一性を有し、活性を保持し、または保持しなくてもよい、少なくとも２０の塩基、好ましくは３０の塩基、より好ましくは少なくとも５０の塩基を有し得る。例えば、そのようなポリヌクレオチドは、配列番号１のポリヌクレオチド用プローブとして、例えばポリヌクレオチドの回収のために、または診断用プローブとして、またはＰＣＲプライマーとして用い得る。従って、本発明は、配列番号２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド並びにそのフラグメントに対して、少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチドに関する。そのフラグメントは少なくとも３０塩基、そして好ましくは少なくとも５０塩基を有する。本明細書中で言う寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条件の下に保持されるであろう。これらの寄託は、単に当業者への便宜として与えられるものであって、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ．§１１２下に要求されることを承認するものではない。寄託された物質中に含まれるポリヌクレオチドの配列、さらにはまた、それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書の一部を構成して、本明細書中の配列のいずれかの記載と矛盾する際はいつでも照合している。寄託された物質を製造し、使用し、または販売するには、実施許諾が要求され得、またそのような実施許諾は、ここでは付与されない。本発明はさらに、第１図の推定アミノ酸配列（配列番号２）を有する、または寄託されたcＤＮＡによりコードされるアミノ酸配列を有するケモカインポリペプチド、さらにはまた、そのようなポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体に関する。第１図のポリペプチド（配列番号２）または寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチドを示す場合、「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」という用語は、そのようなポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保有するポリペプチドを意味する。従って、アナログには、プロプロテイン部分を切断することにより活性化して、活性な成熟ポリペプチドを製造することができるプロプロテインが含まれる。本発明のケモカインポリペプチドは、組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチド、好ましくは組換ポリペプチドであってよい。第１図のポリペプチド（配列番号２）または寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログは、（i）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が同型または非同型アミノ酸残基(好ましくは、同型アミノ酸残基)で置換されており、またそのような置換アミノ酸残基が遺伝コードによりコードされるものであってもよく、またはコードされたものでなくてもよいもの、（ii）１つまたはそれ以上のアミノ酸残基に置換基が含まれるもの、または（iii）成熟ポリペプチドが、該ポリペプチドの半減期を増加させる化合物(例えば、ポリエチレングリコール)のような、他の化合物と融合しているもの、または（iv）リーダーもしくは分泌配列、または成熟ポリペプチドの精製に使用される配列、またはプロプロテイン配列といったような、付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融合しているものであり得る。そのようなフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、単離された形で提供されるのが好ましく、好ましくは、均一となるまで精製される。「単離された」という用語は、物質がその元の環境(例えば、それが天然に存在するなら、天然の環境)から除去されていることを意味する。例えば、生きている動物にある天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、天然の系における共存物質のいくつかまたは全てから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベクターの部分となり得、および／またはそのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の部分となり得、またそのようなベクターまたは組成物はその天然の環境の部分ではないという点で、なお単離されている。本発明のポリペプチドは、配列番号２のポリペプチド(特に成熟ポリペプチド) 、並びに配列番号２のポリペプチドに対して少なくとも７０％の類似性（好ましくは少なくとも７０％の同一性）、より好ましくは配列番号２のポリペプチドに対して少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）、さらにより好ましくは配列番号２のポリペプチドに対して少なくとも９５％の類似性（より好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有するポリペプチドを含み、そのようなポリペプチドの部分も含み、そのようなポリペプチドの部分は一般に少なくとも３０のアミノ酸、およびより好ましくは少なくとも５０のアミノ酸を含む。当該分野で知られているように、二つのポリペプチド間の「類似性」はアミノ酸配列、および１つのポリペプチドの、第２のポリペプチドの配列への同型アミノ酸置換により決定される。本発明のポリペプチドのフラグメントまたは部分は、ペプチド合成により対応する完全長のポリペプチドを製造するのに用い得る；それゆえフラグメントは完全長のポリペプチドを製造するための中間体として用い得る。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントまたは部分を用いて、本発明の完全長のポリヌクレオチドを合成してもよい。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドが含まれるベクター、本発明のベクターで遺伝的に操作された宿主細胞、および本発明のポリペプチドの組換え技術による製造にも関する。宿主細胞は、例えば、クローニングベクターまたは発現ベクターであり得る本発明のベクターで遺伝的に操作される(トランスデュースされ、またはトランスフォームされ、またはトランスフェクトされる)。該ベクターは、例えば、プラスミド、ウイルス粒子、ファージ等の形であり得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化し、トランスフォーマントを選択し、またはＣkβ−９遺伝子を増幅するのに適するよう改変された従来の栄養培地で培養することができる。温度、pＨ等といったような培養条件は、発現用に選択された宿主細胞で先に使用した培養条件であって、当業者に明らかであろう。本発明のポリヌクレオチドは、ペプチドを組換え技術により製造するのに使用することができる。従って、例えば、該ポリヌクレオチドを、ポリペプチドを発現するための様々な発現ベクターのいずれか１つに含ませることができる。そのようなベクターには、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えば、ＳＶ４０の誘導体；細菌プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡとの組合せから得られるベクター；ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病といったようなウイルスＤＮＡが含まれる。しかし、他のいずれのベクターも、それが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。適当なＤＮＡ配列を様々な方法によりベクターに挿入することができる。一般には、ＤＮＡ配列を当業界で既知の方法により適当な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入する。そのような方法および他の方法は、当業者の範囲内であると思われる。発現ベクターのＤＮＡ配列を、適当な発現制御配列(プロモーター)に作動可能に結合し、mＲＮＡ合成を行わせる。そのようなプロモーターの代表例として、以下のものが挙げられる：ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、Ｅ.coli. lacまたはtrp、ファージラムダＰ_Lプロモーター、および原核もしくは真核細胞またはそれらのウイルスでの遺伝子の発現を制御することが知られている他のプロモーター。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写終結区も含む。該ベクターはまた、発現を増幅するのに適当な配列も含み得る。さらに、発現ベクターは、真核細胞培養の場合にはジヒドロフォレートレダクターゼまたはネオマイシン耐性といったような、またはＥ.coliではテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性といったような、トランスフォームされた宿主細胞の選択のための表現型特性を与えるために、１つまたはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子を含むのが好ましい。上記のような適当なＤＮＡ配列、さらにはまた、適当なプロモーターまたは制御配列を含むベクターを、適当な宿主をトランスフォームするために使用して、その宿主がタンパク質を発現するのを可能にすることができる。適当な宿主の代表例として、以下のものが挙げられる：Ｅ.coli、Ｓtreptomyc es 、Ｓalmonella typhimuriumといったような細菌細胞；酵母のような真菌細胞；Ｄrosophila Ｓ２およびＳpodoptera Ｓf９といったような昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢowesメラノーマといったような動物細胞；アデノウイルス；植物細胞等。適当な宿主の選択は、本明細書中の教示から当業者の範囲内であると思われる。とりわけ、本発明にはまた、先に広く記載した配列を１つまたはそれ以上含んでなる組換え構築物も含まれる。その構築物は、本発明の配列が順または逆方向で挿入されている、プラスミドまたはウイルスベクターといったようなベクターを含んでなる。この実施態様の好ましい態様では、該構築物はさらに、例えば、該配列に作動可能に結合したプロモーターを含め、制御配列を含んでなる。適当なベクターおよびプロモーターが多数、当業者に知られていて、市販されている。以下のベクターを例として挙げる。細菌用：pＱＥ７０、pＱＥ６０、pＱＥ− ９(Ｑiagen)、pＢＳ、pＤ１０、ファージスクリプト(phagescript)、psiＸ１７４、pＢluescript ＳＫ、pＢＳＫＳ、pＮＨ８Ａ、pＮＨ１６a、pＮＨ１８Ａ、p ＮＨ４６Ａ(Ｓtratagene)；ptrc９９a、pＫＫ２２３−３、pＫＫ２３３−３、p ＤＲ５４０、pＲＩＴ５(Ｐharmacia)。真核生物用：pＷＬＮＥＯ、pＳＶ２ＣＡＴ、pＯＧ４４、pＸＴ１、pＳＧ(Ｓtratagene)、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳＧ、pＳＶＬ(Ｐharmacia)。しかし、他のいずれのプラスミドまたはベクターも、それらが宿主中で複製可能であって、生存可能である限り、使用することができる。プロモーター領域は、ＣＡＴ(クロラムフェニコールトランスフェラーゼ)ベクターまたは選択マーカーを有する他のベクターを用いて、いずれかの所望の遺伝子から選択することができる。２つの適当なベクターは、ＰＫＫ２３２−８およびＰＣＭ７である。個々に名付けられた細菌プロモーターには、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gpt、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびtrpが含まれる。真核プロモーターには、ＣＭＶ即時初期(immediate early)、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来のＬＴＲ、およびマウスのメタロチオネイン− Ｉが含まれる。適当なベクターおよびプロモーターの選択は、十分、当業者のレベルの範囲内である。さらなる態様では、本発明は、上記の構築物を含む宿主細胞に関する。その宿主細胞は、哺乳動物細胞のような高等真核細胞、酵母細胞のような低等真核細胞であり得、または該宿主細胞は、細菌細胞のような原核細胞であり得る。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクションまたはエレクトロポレーションにより行うことができる。(Ｄavis,Ｌ.、Ｄibner,Ｍ.、Ｂattey,Ｌ.、Ｂasic Ｍethods in Ｍolecular Ｂiology（１９８６）)。宿主細胞中の構築物を通常の方法で使用して、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を製造することができる。あるいはまた、本発明のポリペプチドは、従来のペプチド合成装置により合成的に製造することができる。成熟タンパク質は、適当なプロモーターの制御下、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞中で発現させることができる。そのようなタンパク質を、本発明のＤＮＡ構築物から得られるＲＮＡを用いて製造するために、無細胞翻訳系もまた使用することができる。原核および真核宿主で使用するのに適当なクローニングおよび発現ベクターは、Ｓambrookら、Ｍolecular Ｃloning：ＡＬaborato ry Ｍanual，第２版、Ｃold Ｓpring Ｈarbor、ニューヨーク、(１９８９)により記載されており、この開示は、本明細書の一部を構成する。本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡの高等真核生物による転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増加する。エンハンサーは、プロモーターに作用してその転写を増加させる、通常、約１０〜３００bpの、ＤＮＡのシス作用性要素である。例には、bp １００〜２７０の、複製開始点の後期側にあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが含まれる。通例、組換え発現ベクターには、複製開始点、および宿主細胞のトランスフォーメーションを可能にする選択可能なマーカー、例えば、Ｅ.coliのアンピシリン耐性遺伝子およびＳ.cerevisiae ＴＲＰ１遺伝子、並びに下流の構造配列の転写を行わせるために高度に発現される遺伝子から得られるプロモーターが含まれるであろう。そのようなプロモーターは、とりわけ、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ(ＰＧＫ)のような解糖系酵素、α因子、酸性ホスファターゼ、または熱ショックタンパク質をコードするオペロンから得ることができる。ヘテロロガス構造配列は、翻訳開始および終結配列、また好ましくは、翻訳されたタンパク質の細胞周辺腔または細胞外媒体への分泌を行わせることができるリーダー配列と共に、適当な相(phase)で構築される。場合により、そのヘテロロガス配列は、所望の特性、例えば、発現された組換え生成物の安定化または精製の簡易化を与えるＮ −末端同定ペプチドが含まれる融合タンパク質をコードすることができる。細菌で使用するのに有用な発現ベクターは、所望のタンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を、適当な翻訳開始および終結シグナルと共に、機能的なプロモーターを有する作動可能なリーディング相に挿入することにより構築される。そのベクターは、ベクターの維持を確実なものとするために、また所望により、宿主内での増幅を与えるために、１つまたはそれ以上の表現型の選択可能なマーカーおよび複製開始点を含んでなるであろう。トランスフォーメーションに適当な原核宿主には、Ｅ.coli、Ｂacillus subtilis、Ｓalmonella typhimurium、並びにＰseudomonas属、Ｓtreptomyces属、およびＳtaphylococcus属の範囲内の様々な種が含まれるが、他のものもまた、選択物質として使用することができる。代表的であるが、非限定的な例として、細菌で使用するのに有用なベクターは、周知のクローニングベクターpＢＲ３２２(ＡＴＣＣ３７０１７)の遺伝要素を含んでなる市販のプラスミドから得られる、選択可能なマーカーおよび細菌の複製開始点を含んでなり得る。そのような市販のベクターには、例えば、pＫＫ２２３−３(Ｐharmacia Ｆine Ｃhemicals、Ｕppsala、スウェーデン)およびpＧＥＭ１(Ｐromega Ｂiotec、Ｍadison、ＷＩ、米国)が含まれる。これらのpＢＲ３２２「骨核」部分を適当なプロモーターおよび発現されるべき構造配列と組み合わせる。適当な宿主株をトランスフォーメーションして、その宿主株を適当な細胞密度まで増殖させた後、選択されたプロモーターを適当な方法(例えば、温度シフトまたは化学誘導)により誘導して、細胞をさらなる期間培養する。細胞を、一般的には、遠心分離により収集し、物理的または化学的方法により破壊して、その結果得られた粗製の抽出物を更なる精製のために保有する。タンパク質の発現に使用される微生物細胞は、凍結−解凍サイクル、音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含め、いずれの従来法によっても破壊でき、そのような方法は、当業者に周知である。組換えタンパク質を発現させるために、様々な哺乳動物細胞培養系もまた使用することができる。哺乳動物発現系の例には、Ｇluzman、Ｃell、２３：１７５（１９８１）により記載されている、サルの腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系、および適合可能なベクターを発現させることができる他の細胞系、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨeＬaおよびＢＨＫ細胞系が含まれる。哺乳動物発現ベクターは、複製開始点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、またいずれかの必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および５'に隣接する非転写配列もまた含んでなるであろう。ＳＶ４０のスプライスから得られるＤＮＡ配列、およびポリアデニル化部位を使用して、必要とされる非転写遺伝要素を与えることができる。Ｃｋβ−９ポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈降、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーが含まれる方法により、組換え細胞培養物から回収して、精製することができる。必要に応じて、タンパク質の再生工程を、成熟タンパク質の立体配置を完成するのに使用することができる。最後に、高性能液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)を最終精製工程に使用することができる。本発明のポリペプチドは、天然に精製された産物、もしくは化学合成法の産物であり得るか、または原核もしくは真核宿主から(例えば、培養物中の細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞によって)組換え技術により製造することができる。組換え製造方法で使用する宿主により、本発明のポリペプチドは、グリコシル化され得るか、またはグルコシル化され得ない。本発明のポリペプチドにはまた、最初のメチオニンアミノ酸残基が含まれ得る。Ｃｋβ−９ポリペプチドは、癌の化学療法の間の、また白血病に対する補助的保護処置として、骨髄幹細胞のコロニー形成を阻害するために使用することができる。該ケモカインポリペプチドはまた、ケラチノサイトの過増殖により特徴付けられる乾癬の処置として、表皮ケラチノサイト増殖を阻害するために使用することもできる。該ケモカインポリペプチドはまた、宿主防御細胞、例えば、細胞障害性Ｔ細胞およびマクロファージの侵入および活性化を刺激することにより、固形腫瘍を処置するために使用することもできる。それらはまた、耐性の慢性感染、例えば、ミコバクテリア白血球の誘引および活性化によるミコバクテリア感染に対する宿主防御を高めるために使用することもできる。該ケモカインポリペプチドはまた、ＩＬ２の生合成阻害によってＴ細胞の増殖を阻害することにより、自己免疫疾患およびリンパ性白血病を処置するために使用することもできる。Ｃkβ−９はまた、デブリス(debris)をクリアリングする、また結合組織を促進する炎症性細胞の漸増によって、また過剰のＴＧＦβにより媒介される線維症の制御によっても、創傷治癒において使用することもできる。これと同じ方法で、Ｃkβ−４およびＣkβ−１０をまた、肝硬変、変形性関節症および肺線維症が含まれる、他の線維症障害を処置するために使用することもできる。該ケモカインポリペプチドはまた、住血吸虫症、旋毛虫症および回虫症でのように、組織に侵入する寄生虫の幼虫を殺すという、特徴のある機能を有する好酸球の存在も増加させる。それらはまた、様々な造血始原細胞の活性化および分化を調節し、例えば化学療法後に骨髄から成熟白血球を放出することすることにより、造血を調節するために使用することもできる。そのポリヌクレオチドおよびそのようなポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを、科学的研究、ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの製造に関するインビトロ目的のため、およびヒトの病気を処置するため治療薬および診断薬を設計するためにも用い得る。完全長のＣｋβ−９遺伝子のフラグメントをｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションプローブとして用い、完全長の遺伝子を単離してもよく、その遺伝子に大きい配列類似性または類似の生物学的活性を有する他の遺伝子を単離してもよい。このタイプのプローブは例えば２０〜２０００塩基であり得る。しかしながら、好ましくはプローブは３０〜５０塩基対を有する。そのプローブを用いて、完全長の転写に対応するｃＤＮＡクローン、並びに制御およびプロモーター領域、エクソンおよびイントロンを含む完全な遺伝子を含むゲノムクローンを同定してもよい。スクリーニングの例は既知のＤＮＡ配列を用いてオリゴヌクレオチドプローブを合成することにより、遺伝子のコード領域を単離することを含んでなる。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識したオリゴヌクレオチドを用いて、ヒトのｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのプローブがライブラリーのどのメンバーにハイブリダイズするかを決定する。本発明は、Ｃｋβ−９核酸配列中の変異の存在に関する病気、または病気にかかりやすさを検出するための診断方法の部分としてＣｋβ−９遺伝子を用いることにも関する。そのような病気はケモカインポリペプチドの下方発現、例えば腫瘍および癌に関する。Ｃｋβ−９遺伝子中に変異を有する個体を様々な技術によりＤＮＡレベルで検出し得る。診断のための核酸は血液、尿、唾液、組織生検および剖検等の患者の細胞から得られ得る。ゲノムＤＮＡを検出のために直接用いてもよく、分析前にＰＣＲ（Saiki等，Nature，324:163-166(1986)）を用いることにより酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同じ目的に用いてもよい。例としてＣｋ β−９をコードする核酸に相補的なプライマーを用いてＣｋβ−９変異を同定し、分析し得る。例えば欠失また挿入物は、正常な遺伝子型と比較して、増幅された生成物の大きさの変化により検出できる。点突然変異は、増幅したＤＮＡを、放射標識したＣｋβ−９ＲＮＡに、または放射標識したＣｋβ−９アンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイズさせることにより同定できる。完全にマッチした配列を、ミスマッチしたデュープレックスから、ＲＮアーゼＡ消化により、または融点の差により区別できる。ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝的試験は、変性剤と共に、または変性剤なしの、ゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動移動度の変化の検出によって行い得る。小さい配列の欠失または挿入は、高分解ゲル電気泳動により視覚化し得る。異なった配列のＤＮＡフラグメントは変性ホルムアミドグラジエントゲルで区別でき、そこでは異なるＤＮＡフラグメントの移動度は、それらの特異的な融点または部分融点に従って、異なった位置でゲル中で遅延する(例えばMyers等，Science，2 30:1242(1985))。特殊な位置での配列変化も、ＲＮアーゼおよびＳ１保護等のヌクレアーゼ保護アッセイまたは化学的な解裂法によって明らかにし得る(例えばCotton等，PNAS ，USA，85:4397-4401(1985))。従って特殊なＤＮＡ配列の検出は、ハイブリダイゼーション、ＲＮアーゼ保護、化学的解裂、直接的なＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用(例えばレストリクション・フラグメント・レングス・ポリモルフィズム（ＲＦＬＰ）)、およびゲノムＤＮＡのサザーンブロッティング等の方法により行い得る。従来のゲル電気泳動およびＤＮＡ配列決定の外に、変異はin situ分析によっても分析できる。本発明は、様々な組織におけるＣｋβ−９タンパク質のレベルの変化を検出する診断アッセイにも関する。何故なら、正常な対照組織試料と比較したタンパク質の過発現は、ある病気、例えば腫瘍の存在、または病気にかかりやすさを検出し得るからである。宿主からの試料中のＣｋβ−９タンパク質のレベルを検出するのに用いるアッセイは当業者に周知であり、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよび「サンドイッチ」アッセイを含む。ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｃoligan等、Ｃurrent Ｐrotocols in Ｉmmunology、1(2)、6章(1991)）は、最初にＣｋβ−９抗原に特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを含む。更にリポーター抗体をモノクローナル抗体に対して調製する。リポーター抗体に対して、放射活性、蛍光、またはこの例では西洋ワサビパーオキシダーゼ酵素等の検出可能な試薬を結合させる。ある試料を宿主から取り出し、試料中のタンパク質を結合する固体の担体、例えばポリスチレンの皿上でインキュベートする。皿上の遊離のタンパク質結合部位を、ウシ血清アルブミンのような非特異的なタンパク質とインキュベートすることにより次に被覆する。次にモノクローナル抗体をその血中でインキュベートし、その間にモノクローナル抗体はポリスチレン皿に結合したいずれかのＣｋ β−９タンパク質に付着する。すべての非結合モノクローナル抗体を緩衝液で洗浄して除く。西洋ワサビパーオキシダーゼに結合したリポーター抗体を皿中に置き、レポーター抗体は、Ｃｋβ−９に結合したいずれかのモノクローナル抗体に結合する。付着しなかったリポーター抗体を次に洗浄して除く。パーオキシダーゼの基質を次に皿に加え、一定時間中に発色した色の量は、標準曲線と比較した場合、一定体積の患者の試料中に存在するＣｋβ−９タンパク質の量の尺度である。競合アッセイを用いてもよく、そこではＣｋβ−９に特異的な抗体を固体担体に付着させ、標識したＣｋβ−９および宿主からの試料を固体担体上を通過させ、例えば液体シンチレーションクロマトグラフィーにより検出された標識の量を、試料中のＣｋβ−９の量と関連づけることができる。「サンドイッチ」アッセイはＥＬＩＳＡアッセイに似ている。「サンドイッチ」アッセイにおいては、Ｃｋβ−９を固体担体上を通過させ、固体担体に付着した抗体に結合させる。第２抗体を次にＣｋβ−９に結合させる。標識され第２抗体に特異的な第３抗体を固体担体上を通過させ、第２抗体に結合させ、量を次に定量する。本発明は、Ｃｋβ−９ポリペプチドに対する受容体の同定方法を提供する。該受容体をコードする遺伝子は、例えば、リガンドパニングおよびＦＡＣＳソーティング（Ｃoligan等、Ｃurrent Ｐrotocols in Ｉmmun.，１(２)、５章（1991）等の当業界で知られた多くの方法により同定することができる。好ましくは発現クローニングを用い、該方法では、ポリアデニル化ＲＮＡを該ポリペプチドに応答する細胞から調製して、このＲＮＡから作られるcＤＮＡライブラリーをプールに分けて、ＣＯＳ細胞または該ポリペプチドに応答しない他の細胞をトランスフェクトするために使用する。ガラススライド上で増殖させた、トランスフェクトされた細胞を、標識化ポリペプチドにさらす。該ポリペプチドは、ヨウ素化または部位特異的プロテインキナーゼに対する認識部位の包含を含め、様々な方法により標識化することができる。固定およびインキュベーションに続いて、そのスライドをオートラジオグラフ分析にかける。陽性のプールを同定して、サブプールを調製し、反復サブプーリングおよび再スクリーニング方法を利用して、再びトランスフェクトし、最終的には、推定される受容体をコードする単一クローンを得る。受容体を同定するための他の方法として、標識化ポリペプチドを細胞膜と光親和性により結合させるか、または受容体分子を発現する調製物を抽出することができる。橋かけ(cross-linked)物質をＰＡＧＥ分析により分けて、Ｘ線フィルムにさらす。該ポリペプチドの受容体を含む標識化複合体を切除し、ペプチドフラグメントに分けて、タンパク質ミクロ配列決定にかけることができる。ミクロ配列決定から得られるアミノ酸配列を使用して、一組のオリゴヌクレオチドプローブを設計し、cＤＮＡライブラリーをスクリーニングして、推定される受容体をコードする遺伝子が同定されるであろう。本発明は、本発明のＣｋβ−９ポリペプチドに対するアゴニストおよびアンタゴニストを同定するために、化合物をスクリーニングする方法を提供する。アゴニストは、該ポリペプチドの天然の生物学的機能を有する化合物であるが、アンタゴニストは、そのような機能を阻害する。本発明のポリペプチドのいずれかにより化学誘引される細胞を、細胞を入れるのに十分な直径（約５μｍ）の孔を有するフィルターの頂部に置くことにより、走化性を測定し得る。可能性のあるアゴニストの溶液を上方の室中の適当なコントロール媒体を有するチャンバーの底に置き、アゴニストの濃度グラジエントを、多孔性膜中へ、または膜を通して移動する細胞を時間にわたって計数することにより測定する。アンタゴニストについて分析する場合には、本発明のポリペプチドをチャンバーの底に置き、可能性のあるアンタゴニストを加え、細胞の走化性が阻げられるかどうか決定する。或は、ポリペプチドの受容体を発現する哺乳動物細胞または膜調製物を、例えば放射活性により標識したＣｋβ−９ポリペプチドと、その化合物の存在下にインキュベートする。その化合物のこの相互作用を阻ける能力を次に測定し得る。この型のアゴニストについて分析する場合、ケモカインは存在せず、受容体と相互作用するアゴニスト自体の能力を測定し得る。可能性のあるＣｋβ−９アンタゴニストの例には、抗体、また幾つかの場合には、ポリペプチドに結合するオリゴヌクレオチドが含まれる。可能性のあるアンタゴニストの別の例は、ポリペプチドの負の(negative)優性突然変異体である。負の優性突然変異体は、野生型のポリペプチドの受容体に結合するが、生物学的活性を保有していないポリペプチドである。アンチセンス技術を利用して製造されたアンチセンス構築物もまた、可能性のあるアンタゴニストである。アンチセンス技術を利用して、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡによって遺伝子発現を制御することができ、この方法は両方とも、ポリヌクレオチドのＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づく。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド配列の５'コード部分を使用して、長さ約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。ＤＮＡオリゴヌクレオチドを、転写に関与する遺伝子領域に対して相補的であるよう設計し(三重らせん−Ｌeeら、Ｎucl.Ａcids Ｒ es.、６：３０７３（１９７９）；Ｃooneyら、Ｓcience、２４１：４５６（１９８８）；およびＤervanら、Ｓcience、２５１：１３６０（１９９１）を参照)、そのことによって、転写およびケモカインポリペプチドの産生を妨げる。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボにおいてmＲＮＡにハイブリダイズして、mＲＮＡ分子のポリペプチドへの翻訳をブロックする(アンチセンス−Ｏ kano、Ｊ．Ｎeurochem.、５６：５６０（１９９１）；Ｏligodeoxynucleotides as Ａntisense Ｉnhibitors of Ｇene Ｅxpression、ＣＲＣＰress、Ｂoca Ｒa ton、ＦＬ（１９８８）)。上記のオリゴヌクレオチドをまた、細胞に送り込むことから、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをインビボにおいて発現させて、Ｃｋ β−９の産生を阻害することができる。別の可能性のあるＣｋβ−９アンタゴニストは、生物学的機能を失ってしまってはいるが、それにもかかわらず、ポリペプチドの受容体を認識して結合し、それによって、その受容体を有効にブロックするポリペプチドの、自然に、または合成的に修飾されたアナログである、ポリペプチドのペプチド誘導体である。ペプチド誘導体の例には、これらに限定されるものではないが、小さなペプチドまたはペプチド様分子が含まれる。該アンタゴニストは、自己免疫疾患および慢性の炎症性疾患および感染症において、マクロファージおよびそれらの前駆体の、並びに好中球、好塩基球、Ｂリンパ球および幾つかのＴ細胞サブセット、例えば、活性化およびＣＤ８細胞障害性Ｔ細胞、並びに天然のキラー細胞の走化性および活性化を阻害するために使用することができる。自己免疫疾患の例には、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、およびインスリン依存性糖尿病が含まれる。幾つかの感染症には、単核食細胞の漸増および活性化を妨げることによる珪肺症、サルコイドーシス、特発性肺線維症、好酸球産生および遊走を妨げることによる特発性過エオシン好性症候群、マクロファージの遊走および本発明のケモカインポリペプチドの産生を妨げることによる内毒素性ショックが含まれる。該アンタゴニストはまた、動脈壁における単球浸潤を妨げることにより、アテローム性動脈硬化症を処置するために使用することもできる。該アンタゴニストはまた、ケモカインにより誘発されるマスト細胞および好塩基球の脱顆粒、並びにヒスタミンの放出を阻害することにより、後期相アレルギー反応、慢性ジンマ疹およびアトピー性皮膚炎を含む、ヒスタミンにより媒介されるアレルギー反応および免疫的病気を処置するために使用することもできる。アレルギー喘息、鼻炎および湿疹などのＩｇＥ媒介のアレルギー反応も処置し得る。該アンタゴニストはまた、単球の創傷領域への誘引を妨げることにより、慢性および急性の炎症を処置するために使用することもできる。それらはまた、急性および慢性の炎症性肺疾患が、肺における単核食細胞の腐骨形成と関連があることから、正常な肺のマクロファージ数を調節するために使用することもできる。アンタゴニストはまた、患者の関節において単球の滑液中への誘引を妨げることにより、慢性関節リウマチを処置するために使用することもできる。単球の流入および活性化は、変性および炎症性関節炎の両方の病因において重要な役割を担う。該アンタゴニストはまた、他の炎症性サイトカインの生合成を妨げる、主としてＩＬ−１およびＴＮＦが原因となる有害なカスケードを妨げるために使用することもできる。この方法では、該アンタゴニストはまた、炎症を妨げるために使用することもできる。該アンタゴニストはまた、ケモカインにより誘発される、プロスタグランジンとは無関係の発熱を阻止するために使用することもできる。該アンタゴニストはまた、骨髄不全の病症、例えば、再生不良性貧血および脊髄形成異常症候群を処置するために使用することもできる。該アンタゴニストはまた、肺における好酸球蓄積を妨げることにより、喘息およびアレルギーを処置するために使用することもできる。アンタゴニストを用いて、喘息の肺の顕著な特徴である上皮下の底膜繊維症を処置し得る。該アンタゴニストはまた、薬学上許容され得る担体、例えば、以下に記載するような担体と共に、組成物中で使用することもできる。本発明のＣＫβ−９ポリペプチドおよびアゴニストまたはアンタゴニストは、適当な薬学的担体と組み合わせて使用することができる。そのような組成物は、治療上有効な量のポリペプチド、および薬学上許容され得る担体または賦形剤を含んでなる。そのような担体には、これに限定されるものではないが、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせが含まれる。その製剤は、投与方法に適合すべきである。本発明はまた、本発明の医薬組成物の成分を１つまたはそれ以上充填した、１つまたはそれ以上の容器を含んでなる医薬品パックまたはキットも提供する。そのような容器に関連して、薬学的または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定された形の通知を付してもよく、この通知は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の、該当局による承認を表わす。さらに、本発明のポリペプチド並びにアゴニストおよびアンタゴニストは、他の治療化合物と共に使用することができる。該医薬組成物は、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、皮下、鼻腔内または皮内経路といったような、便利な方法で投与することができる。該医薬組成物は、具体的な徴候を治療および／または予防するのに有効な量で投与される。一般に、該ポリペプチドは、少なくとも約１０μg／kg(体重)の量で投与され、最も多くの場合、それらは、１日当り約８mg／kg(体重)を超えない量で投与されるであろう。最も多くの場合、投与経路および症状等を考慮に入れて、投薬量は、毎日約１０μg／kg〜約１mg／kg(体重)である。該Ｃｋβ−９ポリペプチドおよびポリペプチドであるアゴニストまたはアンタゴニストは、「遺伝子治療」と呼ばれることが多い、そのようなポリペプチドのインビボにおける発現により、本発明に従って使用することができる。従って、例えば、患者由来の細胞を、エクスビボにおいてポリペプチドをコートするポリヌクレオチド(ＤＮＡまたはＲＮＡ)で操作した後、操作した細胞を該ペプチドで処置すべき患者に与える。そのような方法は、当業界で周知である。例えば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子の使用によって、細胞を当業界で既知の方法により操作することができる。同様に、例えば、当業界で既知の方法により、ポリペプチドのインビボにおける発現のために、細胞をインビボにおいて操作することができる。当業界で知られているように、細胞をインビボにおいて処理して、ポリペプチドをインビボにおいて発現させるために、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を製造するための産生細胞を患者に投与することができる。そのような方法により本発明のポリペプチドを投与するためのこれらの方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明らかであろう。例えば、細胞を操作するための発現ビヒクルは、レトロウイルス以外のもの、例えば、適当な運搬ビヒクルと組み合わせた後、細胞をインビボにおいて操作するために使用することができるアデノウイルスであってもよい。本発明の配列はまた、染色体同定にも有益である。その配列を個々のヒト染色体上の特定の位置に対して具体的に標的化して、ハイブリダイズさせることができる。そのうえ、現在、染色体上の特定の部位を同定する必要がある。実際の配列データ（反復多型性）に基づいた染色体マーキング試薬は、現在、染色体位置をマークするのにはほとんど利用できない。本発明によるＤＮＡの染色体へのマッピングは、それらの配列を病気と関連する遺伝子と関係づける重要な第一段階である。簡単に言えば、cＤＮＡ由来のＰＣＲプライマー(好ましくは、１５−２５bp) を調製することにより、配列を染色体にマップすることができる。３'非翻訳領域のコンピューター分析を使用して、ゲノムＤＮＡ中の１つ以上のエクソンをスパン(span)しないプライマーを迅速に選択することから、増幅過程を複雑なものとする。次いで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに使用する。プライマーに対応するヒト遺伝子を含む、それらのハイブリッドのみが、増幅されたフラグメントを与えるであろう。体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定のＤＮＡを特定の染色体に帰属させるための迅速な方法である。同じオリゴヌクレオチドプライマーを用いての本発明を利用して、サブローカリゼーションは、具体的な染色体または大きいゲノムクローンのプール由来のフラグメントのパネルを用いる類似の方法で達成することができる。その染色体へマップするのに同様に利用することができる他のマッピング方法には、in situ ハイブリダイゼーション、標識化フロー−ソーティッド(flow−sorted)染色体を用いてのプレスクリーニング、および染色体特異的cＤＮＡライブラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレクションが含まれる。 cＤＮＡクローンの、中期染色体スプレッドへの蛍光 in situ ハイブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)を利用して、正確な染色体位置を一工程で与えることができる。この技術は、５００または６００塩基という短いcＤＮＡで利用することができる。この技術の復習には、Ｖermaら、Ｈuman Ｃhromosomes：a Ｍanual of Ｂasic Ｔechniques、Ｐergamon Ｐress、ニューヨーク（１９８８）を参照。ある配列が正確な染色体位置に一度マップされると、染色体上の配列の物理的位置を遺伝マップデータと関連付けることができる。そのようなデータは、例えば、Ｖ.ＭcＫusick、Ｍendelian Ｉnheritance in Ｍan(Ｊohns Ｈopkins Ｕniv ersity Ｗelch Ｍedical Ｌibraryを介してオンラインで利用できる)に見い出される。次いで、同じ染色体領域にマップされている遺伝子と疾患との間の関係を結合分析(物理的に隣接した遺伝子の共遺伝（coinheritance)）によって確認する。次に、病気に冒された個体と冒されていない個体との間のcＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する必要がある。変異が、冒された個体のいくつかまたは全てにおいて認められるが、いずれの正常な個体においても認められないなら、その変異は疾患の原因となるものであるらしい。現在、物理的マッピングおよび遺伝的マッピングの分析から、疾患と関連する染色体領域に正確に局在化したcＤＮＡは、５０〜５００の可能な原因となる遺伝子の１つとなり得るであろう。(これは、１メガベースのマッピング分析および２０kb当り１つの遺伝子を仮定する)。ポリペプチド、それらのフラグメントもしくは他の誘導体、もしくはそれらのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免疫源として使用して、それらに対する抗体を製造することができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。本発明にはまた、キメラ、単鎖、およびヒト化抗体、さらにはまた、Ｆabフラグメント、またはＦab発現ライブラリーの生成物も含まれる。当業界で既知の様々な方法を、そのような抗体およびフラグメントの製造に使用することができる。本発明の配列に対応するポリペプチドに対して生成される抗体は、ポリペプチドを動物に直接注入することにより、またはポリペプチドを動物、好ましくはヒトでない動物に投与することにより得ることができる。次いで、そのようにして得られた抗体は、そのポリペプチド自体に結合するであろう。この方法では、ポリペプチドのフラグメントのみをコードする配列さえも、完全な天然のポリペプチドを結合する抗体を製造するのに使用することができる。次いで、そのような抗体を使用して、そのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離することができる。モノクローナル抗体を調製するには、連続的な細胞系培養により産生される抗体を与える技術を全て使用することができる。例には、ハイブリドーマ技術(Ｋo hlerおよびＭilstein、１９７５、Ｎature、２５６:４９５−４９７)、トリオーマ(trioma)技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術(Ｋozborら、１９８３、Ｉmmun ology Ｔoday ４：７２)、およびヒトモノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ技術(Ｃoleら、１９８５、Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃ ancer Ｔherapy、Ａlan Ｒ.Ｌiss,Ｉnc.、７７−９６頁において)が含まれる。単鎖抗体の産生に関して記載されている技術(米国特許第４，９４６，７７８号)は、本発明の免疫原性ポリペプチド産生物に対する単鎖抗体を製造するのに適合し得る。またトランスジェニックマウスを用いて、本発明の免疫原性ポリペプチド生成物に対するヒト化抗体を発現させてもよい。本発明をさらに、以下の実施例に関して記載する；しかし、本発明は、そのような実施例に限定されないことを理解すべきである。部または量は全て、特にことわらない限り、重量単位である。以下の実施例の理解を容易にするために、幾つかの頻繁に出てくる方法および／または用語を記載する。「プラスミド」は、前置きする小文字のpおよび／または続けて大文字および／または数字により示す。本明細書中の出発プラスミドは、市販されていて、限定されない基盤の下に公に入手可能であるか、または公開された方法により入手可能なプラスミドから構築できる。さらに、記載したプラスミドと同等のプラスミドは、当業界で既知であって、当業者に明らかであろう。ＤＮＡの「消化」は、ＤＮＡのある配列にのみ作用する制限酵素でＤＮＡを触媒切断することを示す。本明細書中で使用する様々な制限酵素は市販されており、それらの反応条件、補因子および他の必要条件は、当業者に知られているように使用した。分析目的には、一般的に、緩衝溶液約２０μl中、１μgのプラスミドまたはＤＮＡフラグメントを約２単位の酵素と共に使用する。プラスミド構築のためのＤＮＡフラグメントを単離する目的には、一般的に、より多量の体積中、ＤＮＡ５〜５０μgを２０〜２５０単位の酵素で消化する。特定の制限酵素に適当な緩衝液および基質量は、製造者により指定されている。３７℃で約１時間のインキュベーション時間が通常利用されるが、供給者の指示に従って変えることができる。消化後、その反応物をポリアクリルアミドゲルで直接電気泳動して、所望のフラグメントを単離する。切断したフラグメントのサイズ分離は、Ｇoeddel,Ｄら、Ｎucleic Ａcids Ｒe s.、８：４０５７（１９８０）により記載されている８％ポリアクリルアミドゲルを用いて行う。「オリゴヌクレオチド」は、化学的に合成することができる、一本鎖ポリデオキシヌクレオチド、または２つの相補的ポリヌクレオチド鎖を示す。そのような合成オリゴヌクレオチドは５'ホスフェートを有さないことから、キナーゼの存在下、ＡＴＰでホスフェートを加えることなしには、別のオリゴヌクレオチドにライゲートしないであろう。合成オリゴヌクレオチドは、脱リン酸化されていないフラグメントにライゲートするであろう。「ライゲーション」は、２つの二本鎖核酸フラグメントの間にホスホジエステル結合を形成する過程をいう(Ｍaniatis,Ｔ.ら、同上、１４６頁)。特にことわらない限り、ライゲーションは、ライゲートさせるべきＤＮＡフラグメントのほぼ等モル量の０.５μg当り１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ(「リガーゼ」)と共に、既知の緩衝液および条件を用いて成し遂げることができる。特にことわらない限り、トランスフォーメーションは、Ｇraham,Ｆ.およびＶa n der Ｅb,Ａ.、Ｖirology、５２：４５６−４５７（１９７３）の方法に記載されているようにして行った。実施例１Ｃｋβ−９の細菌発現および精製Ｃｋβ−９をコードするＤＮＡ配列ＡＴＣＣ＃７５８０３を、プロセシングされたＣｋβ−９遺伝子（推定のシグナルペプチド配列がない）の５’および３’ 末端配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、最初に増幅する。Ｃｋβ−９に対応する付加的なヌクレオチドを５’および３’末端配列にそれそれ付加した。５’オリゴヌクレオチドプライマーは、配列：を有し、ＳphＩ制限酵素部位（肉太活字）、それに続く成熟タンパク質をコードする配列の２番目のヌクレオチドから始まるＣｋβ−９コード配列の１７ヌクレオチド（下線）を含む。ＡＴＧコドンがＳphＩ部位に含まれる。ＡＴＧに続く次のコドンにおいて、最初の塩基はＳphＩ部位に由来し、残りの２つの塩基は推定の成熟タンパク質の最初のコドン（残基Ｓ₂₄）の２番目および３番目の塩基に対応する。結果として、このコドンにおける最初の塩基は元の配列と比べてＡからＣへ変化し、組換えタンパク質においてＳからＲへの置換をもたらす。３’配列：は、ＢamＨＩ部位に相補的な配列（肉太活字）を有し、終止コドンに先行する遺伝子特異的配列の２１ヌクレオチドが続く。その制限酵素部位は細菌の発現ベクターpＱＥ−７０（Qiagen，Inc．Chatsworth，カリホルニア）の制限酵素部位に対応する。pＱＥ−７０は、抗生物質耐性(Ａmp^r)、細菌複製起源(ori)、ＩＰＴＧ制御可能なプロモーターオペレーター（Ｐ／０）リボソーム結合部位(ＲＢＳ) 、６−Ｈisタグおよび制限酵素部位をコードする。pＱＥ−７０をＳphＩおよびＢamＨＩで次に消化する。増幅された配列をpＱＥ−９中にライゲートし、ヒスチジンタグおよびＲＢＳをコードする配列と共に枠内で挿入する。ライゲーションを混合を次に用いて、Sambrook，J等、Molecular Cloning: A Laboratory Man ual，Cold Spring Laboratory Press,(1989)に記載された方法により、Ｅ．coli 株Ｍ１５／rep４（Qiagen，Inc.）をトランスフォームする。Ｍ１５／rep４はプラスミドpＲＥＰ４の多重コピーを含み、そのプラスミドはlacＩリプレッサーを発現し、カナマイシン耐性（Ｋan）も与える。トランスフォーマントをＬＢプレート上で増殖するそれらの能力により同定し、アンピシリン／カナマイシン耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析により確認する。所望の構築物を含むコロニーを、Ａmp（１００μｇ／ｍｌ）およびＫan（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補ったＬＢ媒地における液体培養で一晩（Ｏ／Ｎ）増殖させる。そのＯ／Ｎ培養を用いて1:100〜1:250の割合で大きい培養に播種する。その細胞を０.４〜０.６の光学密度６００（Ｏ．Ｄ．⁶⁰⁰）まで増殖させる。ＩＰＴＧ（「イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド」）を最終濃度１ｍＭまで加える。ＩＰＴＧは、lacＩリプレッサーを不活性化し、Ｐ／Ｏをクリアーにし、遺伝子発現の増加に導く。細胞をさらに３〜４時間増殖させる。次に細胞を遠心分離により収集する。細胞ペレットをカオトロピック剤、６モルのグアニジンＨＣl、ｐＨ５.０中で可溶化する。清澄化の後、可溶化したＣｋβ−９を、６−Ｈ isタグを含むタンパク質による強固な結合を可能にする条件下でニッケルキレートカラムでのクロマトグラフィーによりこの溶液から精製する(Hochuli，E等、J ．Chromatography，411:177-184(1984))。Ｃｋβ−９（９８％以上の純度）をカラムから６ＭグアニジンＨＣlで溶出する。ＧnＨＣlからのタンパク質の再生はいくつかのプロトコールにより行い得る（Jaenicke，RおよびRudolph,R，Protei n Structure - A Practical Approach，IRL Press.ニューヨーク(1990))。最初にステップ透析を用いてＧnＨClを除去する。或いは、Ｎｉ−キレートカラムから単離した精製タンパク質を第２のカラムに結合させ、その上で減少リニア−Ｇ nＨＣlグラジエントを行う。タンパク質をカラムに結合させながら再生させ、２５０ｍＭのイミダゾール、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのＴris−ＨＣl、ｐＨ７.５およびグリセロールを含む緩衝液でその後溶出する。最後に、可溶性タンパク質を５ｍＭの重炭酸アンモニウムを含む貯蔵緩衝液に対し透析する。実施例２ＣＯＳ細胞中での組換えＣｋβ−９の発現プラスミドＣｋβ−９ＨＡの発現は、１）ＳＶ４０複製起源、２）アンピシリン耐性遺伝子、３）Ｅ．coli複製起源、４）ＣＭＶプロモーターとそれに続くポリリンカー領域、ＳＶ４０イントロンおよびポリアデニル化部位を含むベクター pcＤＮＡＩ／Ａmp（Invitrogen）に由来する。完全なＣｋβ−９前駆体およびその３’末端に枠内で融合したＨＡタグをコードするＤＮＡ断片をベクターのポリリンカー領域にクローンし、それ故組換えタンパク質発現はＣＭＶプロモーターの下に指図される。ＨＡタグは以前に記載されたインフルエンザヘマググルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応する(I.Wilson，H.Niman，R.Heighten ，A.Cherenson，M.ConnollyおよびR.Lerner，1984，Cell 37，767)。ＨＡタグを標的タンパク質に融合すると、ＨＡエピトープを認識する抗体による組換えタンパク質の容易な検出が可能となる。プラスミド構築方法は以下の如くである。Ｃｋβ−９をコードするＤＮＡ配列ＡＴＣＣ＃７５８０３を、２つのプライマーを用いるＰＣＲにより構築する：５’プライマー：はＢamＨＩ部位とそれに続く開始コドンから出発するＣｋβ−９コード配列の１８個のヌクレオチドを含み；３’配列：は、ＸbaＩ位に相補的な配列、翻訳停止コドン、ＨＡタグ、およびＣｋβ−９コード配列の最後の１８ヌクレオチド（停止コドンを含まず）を含む。それ故ＰＣＲ産物は、ＢamＨＩ部位、Ｃｋβ−９コード配列、それに続く枠内で融合したＨＡタグ、ＨＡタグに隣接する翻訳停止コドン、およびＸbaＩ部位を含む。ＰＣＲで増幅されたＤＮＡ断片およびベクター、pcＤＮＡＩ／Ａmpを、ＢamＨＩおよびＸbaＩ制限酵素で消化し、ライゲートする。ライゲーション混合物を、Ｅ．coli 株ＳＵＲＥ（Stratagene Cloning Systems，La Jolla，カリホルニア）中にトランスフォームし、トランスフォームされた培養物を、アンピシリン媒地プレート上にプレートし、耐性コロニーを選択する。プラスミドＤＮＡをトランスフォーマントから単離し、正しい断片の存在につき制限分析により調べる。組換えＣｋ β−９の発現のために、ＣＯＳ細胞をＤＥＡＥ−ＤＥＸＴＲＡＮ法によりその発現ベクターでトランスフェクトする(J．Sambrook，E．Fritsh，T.Maniatis，Mol ecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Laboratory Press,(1989) )。Ｃｋβ−９ＨＡタンパク質の発現を、放射標識および免疫沈降法により検出する(E.Harlow，D.Lane，Antibodies: A Laboratory Manual，Cold Spring Harb or Laboratory Press(1988))。細胞をトランスフェクション２日後に³⁵Ｓ−システインで８時間標識する。培地を次に集め、細胞を界面活性洗剤（ＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭＮaＣl、１％ＮＰ−４０、０.１％ＳＤＳ、１％ＮＰ−４０、０ .５％ＤＯＣ、５０ｍＭＴris，pＨ７.５）で溶菌する(Wilson,Ｉ等、同書、37: 767(1984))。細胞溶菌物および媒地の両方をＨＡ特異的モノクローナル抗体で沈殿させる。沈殿したタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。実施例３遺伝子治療による発現線維芽細胞を皮膚のバイオプシーにより被験者から得る。得られた組織を組織培養培地に置き、小片に分離する。組織の小さい塊を組織培養フラスコの湿った表面に置き、約１０片を各フラスコ中に置く。フラスコを逆さまにし、しっかり封じ、室温で一晩置く。室温で２４時間後、フラスコを逆にし、組織の塊をフラスコの底に固定したままにし、新しい媒地（例えば１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するＨamのＦ１２媒地）を加える。次にこれを３７ ℃で約１週間インキュベートする。この時新しい培地を加え、数日毎に変える。培養の更に２週間後、線維芽細胞の単層が生じる。その単層をトリプシン処理し、より大きいフラスコに計り入れる。Ｍoloneyのネズミの肉腫ウイルスのロングターミナルリピートが側面にあるｐＭＶ−７（Kirschmeier，P.T.等、ＤＮＡ、7:219-25(1988)）を、ＥcoＲＩおよびＨindIIIで消化し、次に子牛の腸のホスファターゼで処理する。そのリニアーなベクターをアガロースゲルで分別し、ガラスビーズを用いて精製する。本発明のポリペプチドをコードするcＤＮＡを、それそれ５’および３’末端配列に対応するＰＣＲプライマーを用いて増幅する。５’プライマーはＲcoＲＩ部位を有し、３’プライマーは更にＨindIII部位を有する。等量の、Ｍoloneyネズミ肉腫ウイルス線状骨核および増幅したＥcoＲＩおよびＨindIII断片を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼの存在下に一緒に加える。生じた混合物をその２つの断片のライゲーションに適当な条件下に保つ。ライゲーション混合物を用いて細菌ＨＢ１０１をトランスフォームし、そのベクターが適当に挿入された問題の遺伝子を有することを確認する目的でカナマイシンを含有する寒天上に次にプレートする。アンホトロピックなｐＡ３１７またはＧＰ＋am１２パッケージ細胞を、１０％の子牛血清（ＣＳ）、ペニシリンおよびストレプトマイシンを有するＤulbecco 改変Ｅagles培地（ＤＭＥＭ）中で集密密度になるまで組織培養で増殖させる。遺伝子を有するＭＳＶベクターを次に培地に加え、パッケージ細胞をそのベクターでトランスデュースする。パッケージ細胞はその遺伝子を含む感染性のウイルス粒子を今や作る（パッケージ細胞をプロデューサー細胞と呼ぶ）。新鮮な培地をトランスデュースされたプロデューサー細胞に加え、その後その培地を集密性のプロデューサー細胞の１０ｃｍプレートから収集する。感染性のウイルス粒子を含む消費された培地をミリポアフィルターで濾過し、分離したプロデューサー細胞を除去し、この培地を用いて線維芽細胞を感染させる。培地を線維芽細胞のサブ集密プレートから除去し、プロデューサー細胞からの培地で素早く置き換える。この培地を除去し、新鮮な培地で置き換える。ウイルスの力価が高いなら、実際上すべての線維芽細胞が感染しているであろうし、選択は不要である。力価が非常に低ければ、neoまたはhis等の選択可能なマーカーを有するレトロウイルスベクターを用いることが次に必要である。その操作された線維芽細胞を、単独かまたはcytodex３ミクロキャリアビーズ上で集密まで増殖させた後に、宿主に注入する。本発明の無数の改変および変形が上記教示に照らして可能であり、それ故、請求の範囲内で本発明を特に記述したのとは別のやり方で実施し得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＰＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＢ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者アダムス，マーク・ディアメリカ合衆国20878メリーランド州ノース・ポトマック、ダフィーフ・ドライブ 15205番

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号２に記載したアミノ酸−２３〜アミノ酸１１１を含有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号２に記載したアミノ酸１〜アミノ酸１１１を含有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドにハイブリダイズでき、少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド；および（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド断片；よりなる群から選択される一員を含有する単離されたポリヌクレオチド。２．ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．配列番号２のアミノ酸１〜アミノ酸１１１を含有するポリペプチドをコードする請求項２に記載のポリヌクレオチド。４．（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号第７５８０３号に含まれるＤＮＡにより発現されるアミノ酸配列を有する成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号第７５８０３号に含まれるＤＮＡにより発現されるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドにハイブリダイズでき、少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド；および（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチドのポリヌクレオチド断片；よりなる群から選択される一員を含有する単離されたポリヌクレオチド。５．ヌクレオチド１〜ヌクレオチド４０５の配列番号１に記載した配列を含有する請求項１に記載のポリヌクレオチド。６．ヌクレオチド７０〜ヌクレオチド４０５の配列番号に記載の配列を含有する請求項１に記載のポリヌクレオチド。７．請求項２に記載のＤＮＡを有するベクター。８．請求項７に記載のベクターで遺伝的に操作された宿主細胞。９．請求項８に記載の宿主細胞から該ＤＮＡによりコードされるポリペプチドを発現させることを含んでなるポリペプチドの製造方法。１０．請求項７に記載のベクターで細胞を遺伝的に操作することを含んでなる、ポリペプチドを発現できる細胞を製造する方法。１１．（i）配列番号２の推定アミノ酸配列を有する成熟ポリペプチド、並びにそのフラグメント、アナログおよび誘導体；および（ii）ＡＴＣＣ寄託第７５８０３号のｃＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチド、並びにそのポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体；よりなる群から選択される一員を含有する請求項１に記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。１２．ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸１〜アミノ酸１１１を含有する請求項１１に記載のポリペプチド。１３．請求項１１に記載のポリペプチドの受容体の活性化を阻害する化合物。１４．請求項１１に記載のポリペプチドの受容体を活性化する化合物。１５．Ｃｋβ−９を必要とする患者の処置方法であって、患者に治療的に有効量の請求項１１に記載のポリペプチドを投与することを含んでなる方法。１６．治療的に有効量のポリペプチドを、該ポリペプチドをコードし、インビボで該ポリペプチドを発現するＤＮＡを患者に供給することにより投与する請求項１５に記載の方法。１７．Ｃｋβ−９ポリペプチドを阻害する必要を有する患者の処置方法であって、治療的に有効量の請求項１３に記載の化合物を該患者に投与することを含んでなる方法。１８．請求項１１に記載のポリペプチドの少なすぎる発現に関連する病気または病気にかかりやすさを診断する方法であって、該ポリペプチドをコードする核酸配列中の変異を測定することを含んでなる方法。１９．宿主由来の試料中の請求項１１に記載のポリペプチドの存在を分析することを含んでなる診断方法。２０．請求項１１に記載のポリペプチドに対するアゴニストまたはアンタゴニスト化合物を同定する方法であって、その表面でそのポリペプチドの受容体を発現する細胞を、受容体への結合することを可能にする条件下に、分析的に検出可能な化合物と接触させ（該受容体は、該受容体への化合物の結合に応答して検出可能なシグナルを提供できる第２成分と関連している）；該化合物の受容体との相互作用から生ずるシグナルの不存在または存在を検出することからなる方法。