JPH11501219A

JPH11501219A - 細胞への遣伝子導入のためのベクターおよび方法

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Publication number: JPH11501219A
Application number: JP9520720A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ウィッカム、トーマス; コウベスディ、イムリ; イー．ブロー、ダグラス
Original assignee: Genvec Inc
Current assignee: Genvec Inc
Priority date: 1995-11-28
Filing date: 1996-11-27
Publication date: 1999-02-02
Anticipated expiration: 2016-11-27
Also published as: ATE382694T1; CA2236912A1; BG102554A; AU1086897A; EE9800160A; NZ323834A; EP0863987A2; NO982417L; WO1997020051A3; MX9804203A; BR9612685A; JP3420586B2; SK72298A3; EP1616961A1; CA2236912C; IL124654A0; CZ162398A3; EP0863987B1; NO982417D0; EP1518933A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、非天然アミノ酸配列が導入されていることで野生型コート蛋白質とは異なるキメラアデノウイルスコート蛋白質を提供する。本発明のそのようなキメラアデノウイルスコート蛋白質は、該キメラアデノウイルス蛋白質ではなく野生型アデノウイルスコート蛋白質を含む以外は同一のベクターの細胞への進入よりも効率のよい、該コート蛋白質を含むベクターの細胞への進入を指示することができる。該キメラコート蛋白質は、好ましくはファイバー、ヘキソンまたはペントン蛋白質である。本発明はまた、該キメラアデノウイルスコート蛋白質を含むアデノウイルスベクター、並びにそのようなベクターの構築方法および使用方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】細胞への遺伝子導入のためのベクターおよび方法発明の技術分野本発明は、野生型アデノウイルスコート蛋白質を有する類似のベクターよりも効率的なキメラコート蛋白質を含むベクターの細胞内への進入を指示することができる該コート蛋白質に関する。このようなキメラコート蛋白質は、ファイバー、ヘキソンまたはペントン蛋白質である。本発明はまた、そのようなキメラアデノウイルスコート蛋白質を含む組換えベクター、並びにそのようなベクターの構築方法および使用方法に関する。発明の背景アデノウイルスは、２つの属、すなわち、マストアデノウイルス属とアビアデノウイルス属とに分けられるアデノウイルス科に属する。アデノウイルスは、エンベロープのない、直径約６５〜８０ナノメートルの正二十面体である（Horne ら，J ．Mol．Biol.，1，84-86(1959)）。アデノウイルスキャプシドは２５２個のキャプソマー（そのうち２４０個はヘキソンであり、１２個がペントンである）より構成される（Ginsbergら，Virology，28，782-783(1966)）ヘキソンおよびペントンは３つの異なるウイルスポリペプチドに由来する（Maizelら，Virolo gy ,36，115-125(1968)；Weber ら，Virology，76，709-724(1977)）。ヘキソンはそれぞれ９６７のアミノ酸からなる３つの同一のポリペプチド、すなわちポリペプチドIIを含む（Roberts ら，Science，232，1148-1151(1986)）。ペントンはキャプシドに結合したペントンベースと、ペントンベースに非共有結合し且つそこから突き出したファイバーを含む。ファイバー蛋白質はそれぞれ５８２のアミノ酸からなる３つの同一のポリペプチド、すなわちポリペプチドIVを含む。アデノウイルス血清型２（Ａｄ２）のペントンベース蛋白質は、それぞれ５７１のアミノ酸からなる５つの同一の蛋白質サブユニット、すなわちポリペプチドIII より構成される環状の複合体である（Boudinら，Virology，92，125-138(1979) ）。蛋白質IX、VIおよびIIIaもまた、アデノウイルスコート蛋白質に存在し、ウイルスキャプシドを安定化させると考えられている（Stewartら，Cell，67，145 -154(1991)；Stewart ら，EMBO J.，12(7)，2589-2599(1993)）。いったん細胞に接着すると、アデノウイルスは受容体を介して細胞のクラスリンで被覆されたエンドサイトーシス小胞へと内部移行される（Svenssonら，J ．V irol.，51, 687-694（1984）；Chardonnetら，Virology，40，462-477(1970)）。細胞に進入するビリオンは、多くのウイルス構造蛋白質の殻を脱ぎ捨てながら段階的に分解される（Greberら，Cell，75，477-486(1993)）。脱被覆過程の間、ｐＨ依存的なメカニズムによって細胞のエンドソームの破壊を引き起こすが（ Fitsgeraldら，Cell，32，607-617(1983)）、これについてはまだあまり理解されていない。次いで、ウイルス粒子は細胞の核孔複合体へと輸送され（Dales ら，Virology，56，465-483(1973)）、そこでウイルスゲノムが核に進入し、そうして感染を開始する。アデノウイルスは２つの別個の細胞受容体を使用するが、効率よく接着して感染するにはその両方が存在しなければならない（Wickham ら，Cell，73，309-31 9(1993)）。まず、Ａｄ２ファイバー蛋白質が、現在のところまだ同定されていない受容体に結合することによってウイルスを細胞に接着させる。次いで、ペントンベースが、細胞外マトリックス分子および他の分子への細胞の接着を仲介するヘテロダイマーの細胞表面受容体のファミリーであるα_vインテグリンに結合する（Hynes, Cell ，69, 11-25（1992））。ファイバー蛋白質は、テール（tail）、シャフト（shaft）およびノブ（knob ）からなる三量体である（Devauxら，J ．Molec．Biol.，215，567-588(1990)）。ファイバーシャフト領域は２つの交互にあるβ鎖およびβベンドを形成すると信じられている１５アミノ酸モチーフの繰り返しより構成される（Green ら，EM BOJ. ，2 ，1357-1365(1983)）。ファイバーシャフト領域の全長および１５アミノ酸繰り返し配列（repeat）の数はアデノウイルスの血清型間で異なる。例えば、Ａｄ２ファイバーシャフトは長さ３７ナノメートルで２２個の繰り返しを含むが、一方、Ａｄ３ファイバーは長さ１１ナノメートルで６個の繰り返しを含む。ファイバー蛋白質の受容体結合ドメインは該蛋白質の最後の２００アミノ酸によってコードされるノブ領域に局在している（Henry ら，J ．Virology，68(8)，5239 -5246(1994)）。三量体化に必要な領域もまた該蛋白質のノブ領域に位置している（Henry ら，上述）。最後の４０アミノ酸を欠く欠失変異体は三量体化せず、またペントンベースに結合しない（Novelli ら，Virology，185, 365-376（1991 ））。したがって、ペントンベースの結合にはファイバー蛋白質の三量体化が必要である。細胞質で合成された後、ウイルス粒子を形成するために該蛋白質を核へ方向付ける核局在化シグナルは、該蛋白質のＮ末端領域に位置する（Novelli ら（1991），上述）。ヘキソンとともに、ファイバーはウイルスの主要な抗原決定基であり、またウイルスの血清型特異性を決定する（Watsonら，J ．Gen．Viro l. ，69，525-535(1988)）。治療を必要とする罹病細胞または組織に、１またはそれ以上の組換え遺伝子を細胞をターゲッティングして送達するのに、組換えアデノウイルスベクターが用いられている。このようなベクターは、アデノウイルス蛋白質を発現するために宿主細胞の増殖を必要としないという利点により特徴づけられる（Horwitz ら，In Virology, Raven Press，New York，vol．2，pp．1679-1721(1990)；およびB erkner, BioTechniques，6, 616（1988））。さらに、もしも体細胞遺伝子治療の標的組織が肺であれば、これらのベクターは通常、向気道上皮性であるという更なる利点を有する（Straus，In Adenoviruses, Plenan Press，NewYork，pp． 451-496（1984））。ヒトの遺伝子治療のための、可能性のあるベクターとしてのアデノウイルスの他の利点は、（ｉ）このようなベクターを使用すると、組換えが稀にしか起こらない；（ii）ヒトのアデノウイルス感染は良くあることであるにもかかわらず、アデノウイルス感染によりヒトへの悪影響を伴うことは知られていない；（iii ）アデノウイルスゲノム（それは直鎖状の二本鎖ＤＮＡであるが）はかなりサイズが変動する外来遺伝子を収容するのに操作できる；（iv）アデノウイルスベクターは細胞の染色体にＤＮＡを挿入しないので、その効果は永続的でなく、おそらく細胞の通常の機能を妨げない；（ｖ）アデノウイルスは、脳や肺の細胞のような非分裂細胞または最終分化した細胞に感染し得る；および（vi）本質的な特徴として複製能力を有する生のアデノウイルスが、ヒトワクチンとして安全に使用されている(Horwitz ら（1990），上述;Berkner ら（1988），上述；Strausら（ 1984），上述；Chanock ら，JAMA，195, 151（1966）；Haj-Ahmad ら，J ．Virol .，57, 267（1986）；Ballayら，EMBO，4, 3861(1985)；ＰＣＴ特許出願WO 94/1 7832)。アデノウイルスを介した遺伝子治療の欠点は、ベクター投与から２週間後には遺伝子発現の著しい減少が観察されることである。多くの治療上の適用において、発現が減少するとウイルスベクターの再投与が必要となる。しかしながら、再投与の後、該ウイルスベクターのファイバーおよびヘキソン蛋白質の両方に対する中和抗体が生じる（Wohlfart，J ．Virology, 62，2321-2328（1988）；Wohlfa rtら，J ．Virology，56, 896-903（1985））。ウイルスに対するこの抗体の応答は、ウイルスベクターの効果的な再投与を妨げるかもしれない。遺伝子治療において組換えアデノウイルスを使用することのもう一つの欠点は、ある細胞はアデノウイルスを介した遺伝子送達を容易に受けないことである。例えば、α_vインテグリンアデノウイルス受容体を欠くリンパ球では、アデノウイルスの取り込みが損なわれる（Silverら，Virology，165, 377-387（1988）； Harvath ら，J ．Virology，62(1)，341-345(1988)）。このように全ての細胞に感染する能力を欠くことから、研究者らは、例えばアデノウイルス受容体を欠くためにアデノウイルスが感染することができない細胞へアデノウイルスを導入する方法を探し求めている。詳細には、哺乳動物細胞に対するリガンド（例えば、トランスフェリン）を含むＤＮＡ−ポリリジン複合体にウイルスをカップリングさせることができる（例えば、Wagnerら，Proc ．Natl．Acad．Sci.，89，6099-6 103(1992)；ＰＣＴ特許出願WO 95/26412）。同様に、抗体でアデノウイルスファイバー蛋白質を立体的にブロックすることができ、また組織特異的抗体をウイルス粒子に化学的に結合させることができる（Cottenら，Proc ．Natl．Acad．Sci ．USA ，89，6094-6098(1992)）。しかしながら、これらのアプローチは、ポリリジン、受容体リガンドおよび抗体のような大きな分子をウイルスに共有結合させる付加的工程を必要とする点で不利である（Cotten（1992），上述；Wagnerら，Proc ．Natl．Acad．Sci.，89， 6099-6103(1992)）。このことにより生産コストとともに得られるベクターのサイズが増す。さらに、ターゲッティングされる粒子複合体は構造的に均質ではなく、その効率はウイルス粒子、連結する分子および使用されるターゲッティングさせる分子の相対比に鋭敏に反応する。したがって、アデノウイルスを介した遺伝子治療が容易に可能な細胞のレパートリーを拡げるのに、このアプローチは最適ではない。最近、高い効率でアデノウイルスが入ると考えられてきた細胞にでさえ、インビボ（in vivo）でのアデノウイルスを介した遺伝子導入効率が疑問視されている（Grubb ら，Nature，371, 802-806（1994）；Dupuitら，Human Gene Therapy ，6, 1185-1193（1995））。アデノウイルスが最初に細胞に接触するためのファイバー受容体は同定されておらず、他の組織ではどのように提示するか調べられたことがない。肺と腸管の上皮細胞は最適な形質導入を可能にするのに十分なレベルのファイバー受容体を産生していると一般には考えられている。しかしながら、現在に至るまでこの点を確認した研究はない。実際には、分化した肺上皮へのアデノウイルス遺伝子送達は、増殖中の、もしくは未分化の細胞への送達より効率が悪いことが、研究により示唆されている（Grubb ら，上述；Dupit ら，上述）。同様に、アデノウイルスは肺上皮細胞（Rosenfeld ら，Cell，68，143-155(19 92)）、筋肉細胞（Quantin ら，Proc ．Natl．Acad．Sci.，89，2581-2584(1992) ）、内皮細胞（Lemarchandら，Proc ．Natl．Acad．Sci.，89，6482-6486(1992) ）、繊維芽細胞（Anton ら，J ．Virol.，69, 4600-4606（1995））、神経細胞（ LaSalle ら，Science ，259，988-990(1993)）を含む数多くの組織に形質導入することが示されている。しかしながら、これらの研究の多くは、形質導入を達成するために非常に高レベルのウイルス粒子を用いており、しばしば１００プラーク形成単位（ｐｆｕ）／細胞を越えており、感染多重度（ＭＯＩ）１００に相当する。形質導入を達成するために高いＭＯＩを必要とするのは、アデノウイルスの感染に伴ういかなる免疫応答も、高用量を使用すると必ず悪化するであろうから不利である。したがって、高い効率で、とりわけ低いＭＯＩで細胞に感染することができ、増大した感染できる宿主域を示すベクター、例えばアデノウイルスベクターがなおも必要とされている。本発明は、組換えアデノウイルス遺伝子治療の前述した問題の少なくともいくつかを克服しようとするものである。特に、本発明の目的は、広い宿主域および低いＭＯＩであっても高い効率で細胞に入る能力を有するベクター（例えば、アデノウイルスベクター）を提供することであり、それによって投与する組換えアデノウイルスの量を減じ、このような投与の結果生じる全ての副作用／合併症を減じることである。本発明の更なる目的は、ウイルス粒子の付加的な化学的修飾を必要とすることなく、ウイルス粒子がアデノウイルスゲノムのレベルで改変された均質なアデノウイルスを使用することを含む遺伝子治療方法を提供することである。本発明のこれらの、そして他の目的および本発明の利点、並びに本発明の付加的な特徴は、後記の詳細な説明から明確になるであろう。発明の簡単な要約本発明は、非天然の（nonnative）アミノ酸配列を、好ましくはカルボキシル末端もしくはその近傍に導入することにより、野生型（すなわち天然の）ファイバー蛋白質とは異なるキメラアデノウイルスコート蛋白質（例えば、ファイバー、ヘキソンまたはペントン蛋白質）を提供する。得られるキメラアデノウイルスコート蛋白質は、キメラアデノウイルスコート蛋白質ではなく野生型のアデノウイルスコート蛋白質を含むという以外は同一であるベクターの細胞への進入よりも効率的な、該コート蛋白質を含むベクターの細胞への進入を指示することができる。このように進入効率が増すことによる直接的な結果の一つは、該キメラアデノウイルスコート蛋白質が、野生型コート蛋白質を含むアデノウイルスが通常入ることができないか、あるいは低い効率でしか入ることができない数多くの細胞種にアデノウイルスを結合させ、進入させ得ることである。本発明はまた、該キメラアデノウイルスコート蛋白質を含むアデノウイルスベクター並びに、そのようなベクターの構築方法および使用方法を提供する。図面の簡単な説明図１は、様々な組織由来の細胞への野生型アデノウイルスの結合（投入量に対するパーセント）を示す棒グラフである。図２Ａ−Ｂは、カルボキシ末端に非天然のアミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスファイバー蛋白質（図２Ｂ）を誘導するための、野生型アデノウイルスファイバー遺伝子（図２Ａ）の末端での核酸配列の付着を示す。示されているように、ポリＡテールの長さは変動してよく、その結果、得られる蛋白質中のリジンの数も変動してよい。図３は、中間体の導入ベクターを用いた、キメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルス導入ベクターpAd BS 59-100 UTV の構築を示す模式図である。詳細には、ファイバーを有しない（すなわちＦ）のpAd NS 83-100（p193NS(△F)または pNS(△F)としても知られる）を誘導するのにpAd NS 83-100（p193NS 83-100 またはpNS 83-100としても知られている）が使用され（経路Ａ）、pAd NS 83-100 UTV（p193NS(F5^*)、p193(F5^*)またはpNS（F5）としても知られる）を誘導するのにpAd NS 83 100（F）が使用され（経路Ｂ）、pAd BS 59-100 UTV を誘導するのにpAd NS 83-100 UTV が使用される（経路Ｃ）。図４Ａ−Ｄは、GV10 UTVの構築に使用されるオリゴヌクレオチド、すなわち、プライマー、配列番号９（図４Ａ）、配列番号１０（図４Ｂ）、配列番号１１（図４Ｃ）および配列番号１２（図４Ｄ）を示す。図５は、野生型ファイバー蛋白質（ＷＴ）と比較した際の、キメラアデノウイルスファイバー蛋白質（ＵＴＶ）のサイズの増加を示すウェスタンブロットを示す。図６Ａ−Ｂは、野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV10，白抜き三角）とキメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV10 UTV，塗りつぶした円）の、受容体を有する細胞（Ａ５４９，図６Ａ）および受容体を有しない細胞（ＨＳ６８，図６Ｂ）への結合の比較を示すグラフである。図７は、受容体を有しない細胞（すなわち、ＨＳ６８線維芽細胞）へのキメラアデノウイルスファイバー蛋白質の結合の、コンドロイチン硫酸（白抜き円）、ヘパリン（塗りつぶした円）、ムチン（塗りつぶした三角）およびサケ精子ＤＮＡ（白抜き三角）といった可溶性因子による阻害についての、競合物量（μｇ／ｍｌ）に対する結合ＵＴＶ（１分間あたりのカウント（ＣＰＭ））のグラフである。図８は、受容体を有しない細胞（すなわち、ＨＳ６８線維芽細胞）へのキメラアデノウイルスファイバー蛋白質の結合の、コンドロイチナーゼ（白抜き円，点線）、ヘパリナーゼ（白抜き円，実線）、シアリダーゼ（三角，実線）といった酵素による阻害についての、酵素希釈に対する結合ＵＴＶ（ＣＰＭ）のグラフである。図９は、種々の、受容体を有する細胞および受容体を有しない細胞において得られるリポーター遺伝子の発現（すなわち相対明単位（ＲＬＵ））によって評価した際の、野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、 GV10）とキメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV 10 UTV）によるlac Z リポーター遺伝子の導入の比較を示す棒グラフである。図１０は、マウス肺において得られるリポーター遺伝子の発現（すなわち相対明単位（ＲＬＵ））によって評価した際の、野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV10）とキメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV10 UTV）によるlac Z リポーター遺伝子の導入の比較を示す棒グラフである。図１１は、野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクター（すなわち GV10，べた塗りの棒）、並びに蛋白質／ＤＮＡ相互作用を介して２９３細胞、Ａ５４９細胞およびＨ７００Ｔ細胞に結合する可能性のあるキメラファイバーを含むアデノウイルスベクター（すなわちGV10 UTV，白抜きの棒）によるリポーター遺伝子（すなわち、pGUS中に含まれる）の導入を示す棒グラフである。図１２は、アデノウイルスファイバーキメラを構築するのに使用されるプラスミド p193（F5）（図３中ではpAd NS83-100 UTVとして記載され、また、p193(F5^* )またはpNS（F5）としても知られる）、並びに該プラスミド中に存在する変異ファイバー蛋白質のＣ末端配列（ポリアデニル化部位を太字にしている）をさらに示す図である。図１３は、アデノウイルスファイバーキメラを構築するのに使用されるプラスミドp193NS（F5）pGS(K7)（p193（F5）pGS(K7)またはpNS（F5）pGS(K7)としても知られる）を示す図である。図１４は、プラスミドpBSS 75-100 pGS(null)（pBSS 75-100 ΔE3 pGS(null) としても知られる）を示す図である。図１５は、プラスミドpBSS 75-100 pGS(RK32)（pBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK)₂ またはpBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK2)としても知られる）を示す図である。図１６は、プラスミドpBSS 75-100 pGS(RK33)（pBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK)₃ またはpBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK3)としても知られる）を示す図である。図１７は、プラスミドp193NS F5F2K（p193 F5F2Kとしても知られる）を示す図である。図１８は、プラスミドp193NS F5F2K(RKKK)₂（p193NS F5F2K(RKKK2)、p193NS F 5F2K(RK32)またはp193 F5F2K(RKKK2)としても知られる）を示す図である。図１９は、プラスミドp193NS F5F2K(RKKK)₃（p193NS F5F2K(RKKK3)、p193 F5F 2K(RKKK3)またはp193 F5FK(RK33)としても知られる）を示す図である。図２０は、プラスミドpACT(RKKK)₃(pACT(RKKK3)またはpACT（RK33）としても知られる）を示す図である。図２１は、プラスミドpACT(RKKK)₂（pACT(RKKK2)またはpACT（RK32）としても知られる）を示す図である。図２２は、プラスミドpACT Hl1を示す図である。図２３は、プラスミドpACT Hl1(RKKK)₂（pACT Hl1(RKKK2)またはpACT Hl1(RK3 2)としても知られる）を示す図である。図２４は、プラスミドp193 F5F9sK（p193 F5F9-Short としても知られる）を示す図である。図２５は、プラスミドpSPdeltaを示す図である。図２６は、プラスミドpSP2alphaを示す図である。「ｊ」は該プラスミド中の破壊されたPpu10I部位を示す。図２７は、プラスミドpSP2alpha2を示す図である。「ｊ」は該プラスミド中の破壊されたPpu10I部位を示す。図２８は、Ａｄ５（白抜き円）、Ａｄｚ．Ｆ（ＲＧＤ）（塗りつぶした正方形）またはＡｄｚ．Ｆ（ｐＫ７）（白抜き三角）を感染させた２９３細胞についての、ＦＦＵ／細胞に対する感染後日数のグラフである。発明の詳細な説明本発明は、特に、キメラファイバー、ペントンおよび／またはヘキソン蛋白質のようなキメラコート蛋白質を含む組換えアデノウイルスを提供する。該キメラコート蛋白質は、天然のアミノ酸配列に加えてあるいはそれに代えて、非天然のアミノ酸配列を含む。この非天然のアミノ酸配列が、キメラファイバー（または該キメラファイバーを含むベクター）がより効率よく細胞に結合し進入することを可能にする。したがって、本発明は、非天然のアミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、キメラアデノウイルスコート蛋白質ではなく野生型アデノウイルスコート蛋白質を含む（すなわち、キメラアデノウイルスコート蛋白質が存在せず、野生型アデノウイルスコート蛋白質が存在する）以外は同一であるベクターの細胞への進入よりも効率のよいコート蛋白質を含むベクターの細胞への進入を指示することができる該コート蛋白質を提供する。キメラコート蛋白質本発明の「コート蛋白質」は、好ましくはファイバー蛋白質（とりわけアデノウイルスファイバー蛋白質）、ペントン蛋白質（とりわけアデノウイルスペントン蛋白質）およびヘキソン蛋白質（とりわけアデノウイルスヘキソン蛋白質）を包含する。特に、コート蛋白質は、アデノウイルスのファイバー、ペントンまたはヘキソン蛋白質を好ましく包含する。ヒトまたは非ヒトアデノウイルスのいずれの血清型もコート蛋白質遺伝子のソースとして使用し得るが、アデノウイルスはＡｄ２またはＡｄ５アデノウイルスであるのが最適である。該コート蛋白質は、その中に野生型アデノウイルス（すなわち天然の蛋白質、つまり野生型の蛋白質）から単離される蛋白質には通常見出されないアミノ酸配列を含むので「キメラ」である。従って、該コート蛋白質は「非天然のアミノ酸配列」を含む。「非天然のアミノ酸配列」とは、既知のアデノウイルス血清型の天然ファイバーにおいては見出されず、好ましくは遺伝子発現のレベルで（すなわち、「非天然のアミノ酸配列をコードする核酸配列」の導入によって）ファイバー蛋白質に導入されるあらゆるアミノ酸配列を意味する。このような非天然のアミノ酸配列は、得られるキメラ蛋白質に、新規細胞表面結合部位によって、細胞に結合して中に入る能力を与えるアミノ酸配列（すなわち、「ＵＴＶ配列」つまりユニバーサルトランスファーベクター（Universal Tr ansfer Vector）配列）を含み（すなわち、特定のオーダーで成分残基を有する）、および／または天然／非天然、非天然／非天然もしくは天然／天然配列間に得られるキメラ蛋白質のある特定の相対的配置を作るか維持するために組み込まれた配列（すなわち、「スペーサー配列」）を含む。非天然のアミノ酸配列は、あるアミノ酸配列中に、あるいはそれに代えて挿入され、また、キメラコート蛋白質のアミノ酸配列の操作は核酸レベルでなされるのが好ましいので、キメラコート蛋白質中の野生型コート蛋白質とは異なるアミノ酸配列（すなわち、ＵＴＶ配列およびスペーサー配列）は、好ましくは全く非天然のアミノ酸配列か、あるいは天然および非天然のアミノ酸の混合物を包含し得る。「細胞表面結合部位」としては、受容体（好ましくは、それは蛋白質、炭水化物、糖蛋白質またはプロテオグリカンである）の他、反対に荷電したいかなる分子（すなわち、キメラコート蛋白質、好ましくは、ここにさらに記載されるように、正に荷電した非天然のアミノ酸配列を含むキメラコート蛋白質とは反対に荷電したもの）またはキメラコート蛋白質が細胞に結合するように相互作用し、それによって細胞への進入を促進し得る他の分子種も包含される。可能性のある細胞表面結合部位の例としては、それらに限定されないが、例えば、グリコサミノグリカン上に見られさらにシアル酸、硫酸および／またはリン酸を含んでもよい、負に荷電したヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸およびコンドロイチン硫酸部分；ムチン、糖蛋白質およびガングリオシド上に見られるシアル酸部分;主要組織適合性複合体Ｉ（ＭＨＣＩ）の糖蛋白質；マンノース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、フコース、ガラクトース等を含む、膜糖蛋白質中に見られる一般的な炭水化物成分；および例えば核酸上のリン酸部分が挙げられる。しかしながら、本発明のキメラコート蛋白質およびその使用方法は、細胞の相互作用のいかなる特定のメカニズム（すなわち、特定の細胞表面結合部位との相互作用）にも限定されないし、またそのように解されるべきではない。さらに、本発明のファイバー蛋白質のようなキメラアデノウイルスコート蛋白質を含むベクターと比較すると、野生型アデノウイルスコート蛋白質を含むベクターの進入効率が減少することに反映されるように、このような細胞表面結合部位は、以前はアデノウイルスコート蛋白質（すなわち、ファイバー蛋白質等の野生型アデノウイルスコート蛋白質）との相互作用に利用し得なかったか、あるいは非常に低いレベルでしか利用し得なかったので、該部位は「新規である」。さらに、該結合部位は、すべてではないにしても、起源に関係なく大多数の細胞上に存在するという点で新規である。このことは、野生型アデノウイルスファイバーを含むベクターの進入効率が減少することに反映されるように、表向きは少しの集団の細胞上にしか存在しないかあるいは少しの集団の細胞上でしか利用し得ない、野生型アデノウイルスファイバー蛋白質が相互作用すると推定される細胞結合部位とは対照的である。「進入効率」はいくつかの手段で定量化することができる。特に、進入効率はキメラコート蛋白質をベクター、好ましくはウイルスベクター中に導入し、細胞への進入を感染多重度（ＭＯＩ）の関数としてモニタリングすることによって（例えば、リポーター遺伝子のような遺伝子のベクターを介した細胞への送達によって）定量化することができる。この場合、キメラアデノウイルスコート蛋白質ではなく野生型アデノウイルスコート蛋白質を含む以外は同一のベクターと比較した際の、該キメラアデノウイルスコート蛋白質を含むベクターの細胞への進入に必要なＭＯＩの減少は、「より効率的な」進入を示す。同様に、進入効率は、キメラもしくは野生型コート蛋白質を含むベクター、あるいは可溶性のキメラもしくは野生型コート蛋白質自身が細胞に結合する能力に基づいて定量化することができる。この場合、代わりに野生型コート蛋白質を含む同一のベクターまたは野生型コート蛋白質自身と比較した際の、キメラアデノウイルスコート蛋白質を含むベクターまたはキメラコート蛋白質自身に提示される結合の増大は、進入効率の増大、すなわち「より効率的な」進入を示す。本発明の非天然アミノ酸配列は、好ましくは内部のコート蛋白質配列中にまたはそれに代えて挿入される。あるいは、本発明の非天然アミノ酸配列は蛋白質のＣ末端もしくはその近傍にあることが好ましい。特に、本発明のコート蛋白質がファイバー蛋白質である場合、非天然アミノ酸配列は該蛋白質のＣ末端もしくはその近傍にあることが望ましい。本発明のコート蛋白質がペントンまたはヘキソン蛋白質である場合、非天然アミノ酸配列は、例えば、下記実施例に記載されるように、該蛋白質の露出したループ内、特にアデノウイルスヘキソン蛋白質のループ１および／またはループ２中の超可変領域（Crawford-Miksza ら，J ．Virol . ，70，1836-1844(1996)）内にあることが好ましい。すなわち非天然アミノ酸配列は、コート蛋白質の、細胞と相互作用して結合し得る領域内にあることが望ましい。さらに、本発明の方法は、特にヘキソンおよび／またはペントンベース蛋白質において、延長されたヘキソンおよび／またはペントンベース蛋白質を結果として生じるように、ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を、伸張した（というか折れ線状の(spiked)）構造で含むアデノウイルスベクターを創製するのに使用することができるが、ここで該アミノ酸挿入物は、ビリオンのキャプシド中に存在する時には蛋白質から外側に突き出している。特に、このような折れ線状のコート蛋白質は、ファイバーのシャフトが短く、且つファイバー蛋白質のノブが、該ファイバー蛋白質の残りの部分が由来するアデノウイルスベクターとは別の血清型のノブ（三量体化ドメインを含む）で置き換えられているかもしれない「短シャフトファイバー（short-shafted fiber）」（以下にさらに記載される）とともに組換えアデノウイルス中に組み込むことができる。したがって、短シャフトファイバー蛋白質は、１つのＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を含むキメラペントンベース蛋白質を有するか、あるいはさらに任意でＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を組み込むことができる「折れ線状の」キメラペントンベース蛋白質を有するアデノウイルス中に、好ましく組み込むことができる。また、短シャフトファイバー蛋白質は、１つのＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を含むキメラヘキソン蛋白質を有するか、あるいはさらに任意でＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を組み込むことができる「折れ線状の」キメラヘキソン蛋白質を有するアデノウイルス中に組み込むことができる。最も好ましくは、非天然アミノ酸配列は別の非天然アミノ酸配列、すなわち、介在のスペーサー配列によって蛋白質に連結される。スペーサー配列は、天然の蛋白質配列と非天然配列の間、非天然配列と別の非天然配列の間または天然配列と別の天然配列の間に介在する配列である。スペーサー配列は、細胞表面結合部位を含む非天然配列が、細胞と相互作用して結合し得るような様式で、キメラ蛋白質の三次元構造（とりわけ、キメラ蛋白質が天然に存在する際の、すなわち、キャプシドの一部としての三次元構造）から確実に突き出すように該蛋白質中に組み込まれることが好ましい。スペーサー配列がコート蛋白質の内部配列中に挿入されるか、あるいはそれを置換する場合、１つまたはそれ以上のスペーサー配列が該キメラコート蛋白質中に存在してもよい。介在のスペーサー配列は、いかなる適当な長さの配列でもよいが、（下記実施例においてさらに記載されるように）「折れ線状の」コート蛋白質を誘導するのに付加されるスペーサー配列としては、約３〜約４００アミノ酸が好ましく、また、ここで記載される他の適用についてはどれも約３〜約３０アミノ酸が好ましい。スペーサー配列はいかなるアミノ酸を含んでもよい。最も好ましくは、スペーサー配列は、一般にコート蛋白質が機能するのを妨害せず、また、特にその他の非天然アミノ酸配列（すなわち、ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列）が機能するのを妨害しないものである。スペーサー配列ではない非天然アミノ酸配列、すなわちＵＴＶ配列もまた、いかなる適当な長さの配列であってよいが、好ましくは約３〜約３０アミノ酸である（スペーサー配列と同様、ＵＴＶ配列は任意でより長くてもよく、例えば約４００アミノ酸に達してもよいが）。これらのアミノ酸は、真核細胞の表面上に存在する負に荷電した部分に結合し得る、正に荷電した残基のいずれでも好ましく、（すべてではないとしても）大多数の真核細胞の表面上に存在する負に荷電した部分に結合し得るのが最も好ましい。特に、ＵＴＶ配列が結合する真核細胞の表面上に存在するこのような負に荷電した部分としては、前記「細胞表面結合部位」が挙げられる。望ましくは、非天然アミノ酸配列は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンからなる群より選択されるアミノ酸を含む。あるいは、これらのアミノ酸は、正に荷電した細胞表面結合部位に結合し得る負に荷電した残基であってもよく、例えば、該非天然アミノ酸配列はアスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸を望ましく含む。すなわち、コート蛋白質の非天然アミノ酸配列は、好ましくは配列番号１（すなわち、Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys）、配列番号２（すなわち、Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg）および配列番号３（すなわち、Xaa Xaa Xaa Xaa Xa a Xaa Xaa Xaa，ここで「Xaa」はLys またはArg より構成される）であり、該配列の１，２，３，４または５残基がそのＣ末端で欠失していてもよい。コート蛋白質がファイバー蛋白質である場合、該蛋白質は配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４（すなわち、Gly Ser Asn Lys Glu Ser Phe Val Leu Lys Ly s Lys Lys Lys Lys）および配列番号５（すなわち、Ala Gly Ser Asn Lys Asn L ys Glu Ser Phe Val Leu Lys Lys Lys Lys Lys Lys）からなる群より選択される配列を含み、ここで該配列の１，２，３，４または５残基がそのＣ末端で欠失していてもよい。また、ヘパリンに結合する配列はヘパリン様受容体への結合に関与するかもしれない（Sawitzkyら，Med ．Microbiol．Immunol.，182, 285-92(1993)。同様に、いわゆる「ヘパリン結合配列」は、それらが含まれるペプチドもしくは蛋白質と他の細胞表面結合部位、例えば細胞表面ヘパラン硫酸プロテオグリカン（Thom psonら，J ．Biol．Chem.，269, 2541-9(1994)）との相互作用を仲介するかもしれない。したがって、非天然アミノ酸配列（すなわち、ＵＴＶ配列）は、これらの配列、並びに真核細胞の表面上に広く提示される負に荷電した部分を認識し得るさらなる配列を含むことが好ましい。特に、非天然アミノ酸配列は、約２０Å離れて位置し、αヘリックスの反対の方向に面する２つの塩基性アミノ酸（頻繁にはＡｒｇ）を含むことが好ましい（ Margalitら，J ．Biol．Chem.，268, 19228-31(1993)；Maら，J ．Lipid Res., 35 , 2049-2059（1994））。他の塩基性アミノ酸はこれら２つの残基の間で一方に面して分散し、他方、非極性残基はもう一方に面して両親媒性構造を形成していることが望ましく、最も好ましくは両親媒性構造は、ＸＢＢＸＢＸ［配列番号４９］もしくはＸＢＢＢＸＸＢＸ［配列番号５０］（ここでＢは塩基性アミノ酸（すなわち、Ｌｙｓ，Ａｒｇ他）、Ｘは他のいずれかのアミノ酸である）のモチーフを含む。また好ましくは、ＵＴＶ非天然アミノ酸配列は、フィブロネクチンや熱ショック蛋白質に存在する共通のヘパリン結合モチーフである配列ＬＩＧＲＫＫＴ［配列番号５１］、ＬＩＧＲＫ［配列番号５２］またはＬＩＧＲＲ［配列番号５３］（Hansenら，Biochim ．Biophys．Acta，1252，135-45（1995））；ＬｙｓまたはＡｒｇのいずれかあるいはＬｙｓおよびＡｒｇの混合物の７残基の挿入（Fromm ら，Arch ．Biochem．Biophys.，323，279-87（1995））；約１８アミノ酸からなり、ヘパリン結合配列を含む、ＩＧＦＢＰ−３およびＩＧＦＢＰ−５の共通の塩基性Ｃ末端領域（Booth ら，Growth Regul. ，5，1-17（1995））；ＨＡ受容体ＲＨＡＭＭのＣ末端の３５アミノ酸領域内に位置する２つのヒアルロナン（ＨＡ）結合モチーフのいずれか１つもしくは両方（Yangら，J ．Cell Biochem.，56，45 5-68（1994））；ヘパリン結合コンセンサス配列を含むスタフィロコッカス・アウレウスのビトロネクチンのヘパリン結合型を基に作られた合成ペプチド（Ala3 47-Arg361）（Liang ら，J ．Biochem.，116，457-63（1994））；ウシヘルペスウイルス１の糖蛋白質gIIIのアミノ酸１２９と３１０の間の５つのヘパリン結合部位のいずれか１つまたは２つ以上、あるいは偽狂犬病ウイルスの糖蛋白質gIII のアミノ酸９０と２７５の間の４つのヘパリン結合部位のいずれか１つ（Liang ら，Virol.，194, 233-43(1993)）；あるいは偽狂犬病ウイルスの糖蛋白質gIII のアミノ酸１３４〜１４１（Sawitzkyら，Med ．Microbiol．Immunol.，182, 285 -92(1993)；ヒトリポ蛋白質リパーゼの２７９〜２８２位および２９２〜３０４位の荷電した残基に対応するヘパリン結合領域（Maら，上述）；配列ＮＶＳＰＰＲＲＡＲＶＴＤＡＴＥＴＴＩＴＩＳＷ［配列番号５４］を有する合成２２残基ペプチドＮ２２Ｗ、またはフィブロネクチンを基に作られ、ヘパリン結合性を示すこの合成ペプチドの残基ＴＥＴＴＩＴＩＳ［配列番号５５］（Inghamら，Arch． Biochem．Biophys.，314，242-246(1994)）；アルツハイマーβ−アミロイド前駆蛋白質（ＡＰＰ）、並びにヘパリン親和性を調節する種々の他のＡＰＰ様蛋白質のエクトドメイン亜鉛結合部位中に存在するＧＶＥＦＶＣＣＰ［配列番号５６］モチーフ（Bushら，J ．Biol．Chem.，229, 26618-21(1994)）；ラミニンＡ鎖の十字領域由来の８アミノ酸残基ペプチド（Tashiro ら，Biochem ．J.，302，73 -9（1994））；F123-G148 およびK121-A134 を含む、セリンプロテアーゼ阻害剤アンチトロンビンIII のヘパリン結合領域に基づく合成ペプチド（Tyler-Cross ら，Protein Sci.，3, 620-7（1994））；ヘパリン結合領域として提唱されているＡＰＰの１４ＫＮ末端フラグメントおよびＮ末端付近の領域（すなわち、残基９６〜１１０）（Smallら，J ．Neurosci.，14，2117-27(1994)）；リジンおよびアルギニン残基含量が高いことを特徴とするヘパリン結合表皮成長因子様成長因子（ＨＢ−ＥＧＦ）の一連の２１アミノ酸（Thompsonら，J ．Biol．Chem.，26 9, 2541-9（1994））；トロンボスポンジンのヘパリン結合領域を含み、ｈｅｐ１合成ペプチドに相当する１７アミノ酸領域（Murphy-Ullrichら，J ．Biol．Che m. ,268, 26784-9(1993)）；ヘパリンに結合するヒトフオンビルブラント因子の２３アミノ酸配列（Y565-A587）（Tyler-Cross ら，Arch ．Biochem．Biophys.， 306 ，528-33（1993））；ヘパリンと結合するフィブロネクチン由来ペプチドＰＲＡＲＩ［配列番号５７］（およびこのモチーフを含むより大きいペプチド、例えばＷＱＰＰＲＡＲＩ［配列番号５８］）（Woods ら，Mol ．Biol．Cell.，4, 6 05-613（1993））；血小板因子４のヘパリン結合領域（Satoら，Jpn ．J．Cancer Res.，84, 485-8（1993）；および線維芽細胞成長因子受容体であるチロシンキナーゼ膜貫通糖蛋白質中のＫ１８Ｋ配列（Kan ら，Science ，259，1918-21(1993 )）を含む。さらに、ＵＴＶ配列は、以下の実施例に記載される他の配列を含んでもよい。すなわち、ＵＴＶ配列は、好ましくは［配列番号１］、［配列番号２］、［配列番号３］、［配列番号４］、［配列番号５］、［配列番号２０］、［配列番号２２］、［配列番号２４］、［配列番号２６］、［配列番号２８］、［配列番号３０］、［配列番号３２］、［配列番号３４］、［配列番号３６］、［配列番号３８］、［配列番号４０］、［配列番号４２］、［配列番号４６］、［配列番号４８］、［配列番号４９］、［配列番号５０］、［配列番号５１］、［配列番号５２］、［配列番号５３］、［配列番号５４］、［配列番号５５］、［配列番号５６］、［配列番号５７］、［配列番号５８］、［配列番号７３］、［配列番号７４］、［配列番号７６］、［配列番号７８］、［配列番号９０］および［配列番号９３］からなる群より選択される。これらの配列はまた、ＣまたはＮ末端で配列の１，２または３残基が欠失していても使用することができる。また、本発明によれば、スペーサー配列は蛋白質が機能するのを妨害しないアミノ酸のいかなる配列であってもよいので、前記ＵＴＶ配列もまたスペーサー配列を含んでもよい。非天然アミノ酸配列はまた、前記配列のいずれかの「均等物」である（すなわち、「ＵＴＶ様配列」である）アミノ酸配列を含むことが好ましい。均等物は、（おそらく有効性においては小さな相違をもって）同じ機能を果たすが、そのアミノ酸配列もしくは他の構造的特徴の点でわずかに異なり得るいかなる配列であってもよい。特に、均等な配列は、配列の１またはそれ以上の保存的なアミノ酸置換を含むものである。「保存的なアミノ酸置換」とは、類似した電荷密度、親水性／疎水性、サイズおよび／または形状の代替アミノ酸によって置換されるアミノ酸（例えば、Ｉｌｅに対するＶａｌ）である。これと比較して、「非保存的なアミノ酸置換」とは、異なる電荷密度、親水性／疎水性、サイズおよび／または形状の代替アミノ酸によって置換されるアミノ酸（例えば、Ｐｈｅに対するＶａｌ）である。キメラコート蛋白質をコードする核酸先に示したように、非天然アミノ酸配列はＤＮＡのレベルで導入されるのが好ましい。したがって、本発明はまた、好ましくは本発明のコート蛋白質をコードする単離精製された核酸を提供する。ここで非天然アミノ酸配列をコードする該核酸配列は、配列番号６の配列（すなわち、GGA TCC AA）を含み、それはポリアデニル化部位の前に位置する。同様に、本発明は、好ましくは配列番号７（すなわち、GGA TCC AAT AAA GAA TCG TTT GTG TTA TGT）、配列番号８（すなわち、G CC GGA TCC AAC AAG AAT AAA GAA TCG TTT GTG TTA）、［配列番号１９］、［配列番号２１］、［配列番号２３］、［配列番号２５］、［配列番号２７］、［配列番号２９］、［配列番号３１］、［配列番号３３］、［配列番号３５］、［配列番号３７］、［配列番号３９］、［配列番号４１］、［配列番号４５］、［配列番号４７］、［配列番号７２］、［配列番号７５］、［配列番号７７］および［配列番号８９］からなる群より選択される配列を含む単離精製された核酸を提供する。さらに本発明は、これらの核酸の保存的に改変された変種を提供する。「保存的に改変された変種」とは、結果として保存的なアミノ酸置換を生じる核酸配列上の変化である。これと比較して、「非保存的に改変された変種」とは、結果として非保存的なアミノ酸置換を生じる核酸配列上の変化である。このような改変を作製する手段は当該技術分野でよく知られ、且つ以下の実施例に記載されており、また、市販のキットおよびベクター（例えば、New England Biolab s，Inc.，Beverly，MA; Clonetech，Palo Alto，CA）によって成し得るものである。さらに、このような置換を評価する手段（例えば、細胞に結合し中に入る能力に及ぼす効果に基づいて）はここで実施例に記載されている。このようなキメラコート蛋白質を作製する手段、特にＤＮＡのレベルで配列を導入する手段は当該技術分野で周知であり、代表的なキメラ蛋白質について図２に図示され、且つ以下の実施例に記載されている。簡単にいえば、該方法はある配列（好ましくは、配列番号６の配列もしくはその保存的に改変された配列）をコート蛋白質の配列中に導入することを含む。以下の実施例に記載される好ましい一態様においては、キメラ蛋白質が付加的なアミノ酸を組み込むように結果として得られる蛋白質にフレームシフト変異を導入するために、該導入は終止コドンまたはポリアデニル化シグナルのいずれかの前でなされる。一般に、このことは、ファイバー配列をプラスミドまたは該配列の操作が容易な他のあるベクター中にクローニングすることによって達成することができる。次いで、フレームシフト変異を導入すべき配列の側にある制限部位を同定する。オーバーラップする合成一本鎖センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドから（例えば、図４に示されるように、それぞれTAT GGA GGA TCC AAT AAA GAA TC G TTT GTG TTA TGT TTC AAC GTG TTT ATT TTT C ［配列番号９］およびAAT TGA AAA ATA AAC ACG TTG AAA CAT AAC ACA AAC GAT TCT TTA TTG GAT CCT CCA ［配列番号１０］のセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドから）、二本鎖合成オリゴヌクレオチドを、該二本鎖オリゴヌクレオチドが標的配列にフランキングする制限部位を組み込むように創製する。プラスミドまたは他のベクターを制限酵素で開裂させ、適合する粘着末端を有する該オリゴヌクレオチド配列を該プラスミドまたは他のベクターに連結して野生型ＤＮＡを置換する。当業者に知られており、例えば市販のキットによって成し得る（特に、ＰＣＲを用いて）ようなインビトロでの部位特異的突然変異誘発の他の手段を、コート蛋白質コード配列中に変異した配列を導入するのに使用することができる。いったんキメラコート蛋白質中に配列を導入すると、例えば、５’および３’ プライマーを用いたＰＣＲ増幅によって、該配列をコードする核酸フラグメントを単離することができる。例えば、あるキメラコート蛋白質について、図４に示されるように、プライマーTCCC CCCGGG TCTAGA TTA GGA TCC TTC TTG GGC AAT G TA TGA ［配列番号１１］およびプライマーCGT GTA TCC ATA TGA CAC AGA ［配列番号１２］を用いたＰＣＲによって、該フラグメントを単離することができる。このやり方でこれらのプライマーを使用すると、結果として該フラグメントを簡便にサブクローニングするのに使用することができる制限部位（すなわち、この場合ではNde ＩおよびBam HI部位）にフランキングされた、キメラファイバー含有フラグメントが増幅される。キメラコート蛋白質を生成させる他の手段も使用することができる。したがって、コート蛋白質コード配列のどの部分にでもフレームシフト変異を導入することができる。例えば、配列番号６について、蛋白質のＣ末端をコードするコート蛋白質遺伝子の領域に置くことができ（すなわち、ＴＡＡ終止コドンの直前に付加することができ）、あるいは、配列番号５の配列を含むキメラ蛋白質をコードする配列番号８の前記コード配列を製造するためのＡｌａ（すなわちＡ）とＧｌｎ（すなわちＱ）をコードするコドンの間のように、より前のコード領域中に置くこともできる。同様に、このアプローチは、コード配列中のいっそう前にフレームシフト変異を導入するのに使用することができ、例えば内部（すなわち天然の）コート蛋白質配列中に挿入するか、それともそれに代えて挿入することができる。さらに、二本鎖オリゴヌクレオチドはまた、やはり配列を操作するのに使用できる、さらなる制限部位を組み込むことができる。例えば、ベクター中に導入される配列番号６の配列は、修飾されたBam HI部位−すなわちパリンドローム状の認識配列上に付加的なヌクレオチドを追加するという点で、該部位は「修飾されている」−を含む。この配列はまた、ＤＮＡ操作に都合のよいいかなる他の制限部位をも含むように合成することができる。コート蛋白質コード配列中に組み込まれる場合、該配列はフレームシフト変異を導入するだけでなく、該コート蛋白質遺伝子中に他のコード配列を導入するのにも使用することができる。特に、このやり方で導入されるコード配列は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンのコドン、あるいはアスパラギン酸およびグルタミン酸のコドンを、いずれか１つだけ、あるいはいかなる組み合わせでも含むことができる。さらに、新しい翻訳終止コドンをこれらのアミノ酸コドンの後に続けて、キメラ蛋白質が非天然アミノ酸配列中に所定の数の付加的アミノ酸だけを組み込むように製造されるようにすることができる。アミノ酸コドンと翻訳終止コドンは、先に記載したように、あるいは当業者に公知の他の手段によって、制限部位によってフランキングされるこれらの配列を含むオリゴヌクレオチド（例えば、５’および３’Bam HI部位を含む）を合成することによって、コート蛋白質中に組み込まれた、フレームシフト変異を導入する該新規制限部位中に導入することができる。天然の受容体結合配列を置換するのに用いられるＤＮＡのサイズは、例えば、ファイバーの妨害された折り畳みまたはペントンベース／ファイバー複合体の不適切なアッセンブリによって制限を受けるかもしれない。前記アミノ酸配列（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸等）をコードするＤＮＡが、天然の受容体結合配列が欠失したかさもなくば変異したファイバー遺伝子配列中に挿入するのに優先的に選ばれる。さらに、スペーサー配列中に組み込むためのアミノ酸をコードするような他のＤＮＡ配列が、天然のコート蛋白質コード配列を置換するのに好ましく使用される。キメラコート蛋白質を含むベクター本発明の「ベクター」は、当業者がその用語を理解している通り、遺伝子導入用の乗り物（vehicle）である。本発明に包含される４つのタイプのベクターはプラスミド、ファージ、ウイルスおよびリポソームである。プラスミド、ファージおよびウイルスは、それらの核酸の形態で細胞に導入することができ、また、リポソームは核酸を導入するのに使用することができる。したがって、遺伝子導入に使用し得るベクターを、ここでは「導入ベクター」と称する。好ましくは、本発明のベクターは、ウイルス、とりわけエンベロープのないウイルス、すなわち、非エンベロープ型ＲＮＡもしくはＤＮＡウイルスからなる群より選択されるウイルスである。また、ウイルスはエンベロープを有するウイルス、すなわち、エンベロープ型ＲＮＡもしくはＤＮＡウイルスからなる群からも選択することができる。このようなウイルスはコート蛋白質を含んでいることが好ましい。望ましくは、該ウイルスコート蛋白質は、細胞と相互作用することができるようにキャプシドから外向きに突き出しているものである。エンベロープ型ＲＮＡもしくはＤＮＡウイルスの場合、該コート蛋白質は、実際には脂質エンベロープ糖蛋白質（すなわち、いわゆるスパイクまたはペプロマー）であることが好ましい。特に好ましくは、ベクターは、ヘパドナウイルス科、パルボウイルス科、パポーバウイルス科、アデノウイルス科またはピコルナウイルス科由来の非エンベロープ型ウイルス（すなわち、ＲＮＡまたはＤＮＡウイルスのいずれか）である。本発明の好適な非エンベロープ型ウイルスは、ヘパドナウイルス科、とりわけヘパドナウイルス属のウイルスである。パルボウイルス科のウイルスは、望ましくはパルボウイルス属（例えば、哺乳動物および鳥類のパルボウイルス）またはデペンドウイルス属（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ））のウイルスである。パポーバウイルス科のウイルスは、好ましくはパピローマウイルス亜科（例えば、これに限らないが、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）１〜４８を含むパピローマウイルス）またはポリオーマウイルス亜科（例えば、これに限らないが、ＪＣ、ＳＶ４０およびＢＫウイルスを含むポリオーマウイルス）のウイルスである。アデノウイルス科のウイルスは、望ましくはマストアデノウイルス属（例えば、哺乳動物のアデノウイルス）またはアビアデノウイルス属（例えば、鳥類のアデノウイルス）のウイルスである。ピコルナウイルス科のウイルスは、好ましくはＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）または非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスである。同様に、ベクターは、ヘルペスウイルス科またはレトロウイルス科由来のエンベロープ型ウイルス、あるいはシンドビスウイルスであってもよい。本発明の好適なエンベロープ型ウイルスは、ヘルペスウイルス科、とりわけアルファヘルペスウイルス亜科（例えば、ヘルペス単純様ウイルス）、シンプレックスウイルス属（例えば、ヘルペス単純様ウイルス）、ワリセラウイルス属（例えば、ワリセラおよび偽狂犬病様ウイルス）、ベータヘルペスウイルス亜科（例えば、サイトメガロウイルス）、サイトメガロウイルス属（例えば、ヒトサイトメガロウイルス）、ガンマヘルペスウイルス亜科（例えば、リンパ球関連ウイルス）およびリンホクリプトウイルス属（例えば、ＥＢ様ウイルス）といった亜科または属のウイルスである。別の好適なエンベロープ型ウイルスは、レトロウイルス科のＲＮＡウイルス（すなわち、好ましくはレトロウイルス）、特に、オンコウイルス亜科、スプーマウイルス亜科、スプーマウイルス属、レンチウイルス亜科およびレンチウイルス属といった属または亜科のウイルスである。オンコウイルス亜科のＲＮＡウイルスは、望ましくはヒトＴ−リンパ球指向性ウイルス１または２型（すなわち、ＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−２）またはウシ白血病ウイルス（ＢＬＶ）、トリ白血病−肉腫ウイルス（例えば、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、トリ骨髄芽球症ウイルス（ＡＭＶ）、トリ赤芽球症ウイルス（ＡＥＶ）、ラウス関連ウイルス（ＲＡＶ）−１〜５０、ＲＡＶ−０）、哺乳動物のＣ−タイプウイルス（例えば、Moloney ネズミ白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）、Harveyネズミ肉腫ウイルス（ＨａＭＳＶ）、Abelson ネズミ白血病ウイルス（Ａ−ＭｕＬＶ）、ＡＫＲ−ＭｕＬＶ、ネコ白血病ウイルス（ＦｅＬＶ）、サル肉腫ウイルス、細網内皮症ウイルス（ＲＥＶ）、脾壊死ウイルス（ＳＮＶ））、Ｂ−タイプウイルス（例えば、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ））、またはＤ−タイプウイルス（Mason-Pfizerモンキーウイルス（ＭＰＭＶ）、「ＳＡＩＤＳ」ウイルス）である。レンチウイルス亜科のＲＮＡウイルスは、望ましくはヒト免疫不全ウイルス１または２型（すなわち、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２、ＨＩＶ−１は以前リンパ節症関連ウイルス３（ＨＴＬＶ−III）および後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連ウイルス（ＡＲＶ）と呼ばれていた）、あるいは同定され、ＡＩＤＳまたはＡＩＤＳ様疾患に付随する、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に関連した別のウイルスである。「ＨＩＶ」という頭字語または「ＡＩＤＳウイルス」もしくは「ヒト免疫不全ウイルス」という用語は、ここではこれらのＨＩＶウイルス並びにＨＩＶ関連およびＨＩＶ随伴ウイルスを一般的に指すのに用いる。さらに、レンチウイルス亜科のＲＮＡウイルスは、好ましくはヴィスナ／マエディ（Visna/maedi）ウイルス（例えば、ヒツジに感染するような）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシレンチウイルス、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）またはヤギ関節炎−脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）である。特に好ましい本発明のベクターは、アデノウイルスベクター（すなわち、アデノウイルス科、最適にはマストアデノウイルス属のウイルスベクター）である。他の血清型のアデノウイルスベクターを使用することもできるが、望ましくは、このようなベクターはＡｄ２またはＡｄ５ベクターである。遺伝子導入に使用されるアデノウイルスベクターは野生型（すなわち、複製能力のある）であってもよい。あるいは、アデノウイルスベクターは、ウイルスを複製欠損にすることができる少なくとも１つの修飾をその中に有する遺伝的材料を含んでもよい。アデノウイルスゲノムに対する修飾としては、ＤＮＡセグメントの付加、ＤＮＡセグメントのリアレンジメント、ＤＮＡセグメントの欠失、ＤＮＡセグメントの置換またはＤＮＡ損傷の導入が挙げられるが、それらに限定されない。ＤＮＡセグメントは、小さいもので１ヌクレオチド、大きいもので３６キロ塩基対（すなわち、おおよそアデノウイルスゲノムのサイズ）、あるいはまた、アデノウイルスビリオン中にパッケージングできる最大量（すなわち、約３８ｋｂ）と同等であればよい。アデノウイルスゲノムに対する好ましい修飾としては、Ｅ１，Ｅ２，Ｅ３またはＥ４領域における修飾が挙げられる。同様に、アデノウイルスベクターは、共インテグレーション体（cointegrate）、すなわち、アデノウイルス配列と、他のウイルスもしくはプラスミド配列のような他の配列との連結物であってもよい。ウイルスベクター（例えば、特に複製欠損アデノウイルスベクター）に関して、そのようなベクターは完全なキャプシド（すなわち、アデノウイルスゲノムのようなウイルスゲノムを含む）か空のキャプシド（すなわち、ウイルスゲノムが欠失しているかあるいは、例えば物理的もしくは化学的手段により分解されている）のいずれかを含むことができる。同じ考え方に沿えば、方法はウイルス、プラスミドおよびファージをそれらの核酸（すなわち、ＲＮＡまたはＤＮＡ）の形態で導入するのに利用できるから、ベクター（すなわち、導入ベクター）も同様に、キャプシド蛋白質のようないかなる付随蛋白質もなしに、また、いかなるエンベロープ脂質もなしに、ＲＮＡまたはＤＮＡより構成され得る。同様に、リポソームは細胞膜と融合することにより細胞への進入をもたらすので、導入ベクターはコート蛋白質をコードする構成的核酸とともにリポソーム（例えば、市販のもの、例えばLife Technologies，Bethesda，MD から市販されているもののような）を含むことができる。したがって、本発明によれば、ベクターはキメラアデノウイルスコート蛋白質を「含む」のに対し、導入ベクターはキメラアデノウイルスコート蛋白質を「コードしている」；リポソーム導入ベクターは、実際に、蛋白質をコードする核酸を含んでいるという意味で、特に「コードしている」。本発明のベクターは、付加的な配列および変異、例えば、コート蛋白質自身の内部のあるものを含んでもよい。例えば、本発明のベクターは、好ましくはさらにパッセンジャー遺伝子を含む核酸を含んでもよい。「核酸」とは、ポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。「遺伝子」とは、蛋白質または初期ＲＮＡ分子をコードするあらゆる核酸配列である。「パッセンジャー遺伝子」とは、通常はベクター中に存在せず、本発明によりベクター（例えば、導入ベクター）中にサブクローニングされ、且つ宿主細胞に導入すると細胞内環境の識別できる変化（例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、ペプチドまたは蛋白質のレベルの増加、あるいはそれらの生産または分解速度の変化）を伴うあらゆる遺伝子である。「遺伝子産物」とは、所定の遺伝子またはコード配列から転写された、未だ翻訳されていないＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡ）、あるいは所定の遺伝子またはコード配列から転写されたｍＲＮＡ分子から翻訳されたポリペプチド鎖（すなわち、蛋白質またはペプチド）のいずれかである。遺伝子はコード配列に加えていずれかの非コード配列を含むが、「コード配列」はいかなる非コード（例えば、調節）ＤＮＡも含まない。遺伝子またはコード配列は、もし該分子に沿う塩基配列が、天然に通常見出される遺伝子またはコード配列を有する配列から変化していれば、あるいは該塩基配列が天然に通常見出されないものであれば、「組換え体」である。本発明によれば、遺伝子またはコード配列は全体または部分的に合成で作ることができ、ゲノミックまたは相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列を含むことができ、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態で提供され得る。非コード配列または調節配列にはプロモーター配列が包含される。「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼの結合を指示し、それによってＲＮＡ合成を促進するＤＮＡ配列である。「エンハンサー」は、隣接する遺伝子の転写を刺激または阻害するＤＮＡのシス活性化因子である。転写を阻害するエンハンサーはまた、「サイレンサー」とも呼ばれる。エンハンサーは、それがいずれの配向においても、数キロ塩基対までならその距離を越えて、転写される領域の下流の位置からでさえ機能し得るという点で、プロモーター中にのみ見出される配列特異的ＤＮＡ結合蛋白質のためのＤＮＡ結合部位（それは「プロモーター因子」とも云われる）とは異なる。本発明によれば、プロモーターがコード配列の転写を指示し得る場合（例えば、コード配列とプロモーターの両方が１つのパッセンジャー遺伝子を構成する場合）、該コード配列は該プロモーターに「機能的に連結している」。したがって、「パッセンジャー遺伝子」はいかなる遺伝子であってもよいが、望ましくは治療遺伝子もしくはリポーター遺伝子のいずれかである。好ましくは、パッセンジャー遺伝子はベクターが内部に取り込まれた細胞内で発現し得るものである。例えば、パッセンジャー遺伝子はリポーター遺伝子、すなわち何らかのやり方で細胞内で検出することができる蛋白質をコードする核酸配列を包含し得る。パッセンジャー遺伝子はまた、例えば、ＲＮＡもしくは蛋白質のレベルでその効果を発揮する治療遺伝子を包含し得る。例えば、嚢胞性線維症の治療のための嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス調節因子ｃＤＮＡのように、導入された治療遺伝子にコードされる蛋白質を遺伝病の治療に使用することができる。治療遺伝子にコードされる蛋白質は、結果的に細胞を殺すこと（殺細胞）によってその治療効果を発揮するかもしれない。例えば、ジフテリア毒素Ａ遺伝子の発現のように、遺伝子発現そのものが殺細胞を導くか、あるいは遺伝子発現により、細胞をある特定の薬剤の殺作用に選択的に感受性となるようにすることができる（例えば、ＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子の発現により、細胞はアシクロビル、ガンシクロビル、およびＦＩＡＵ（１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ− アラビノフラシル）−５−ヨードウラシル）を含めた抗ウイルス性化合物に感受性となる）。さらに、治療遺伝子は、例えば、アンチセンスメッセージもしくはリボザイム、スプライシングや３’プロセッシング（例えば、ポリアデニル化）に影響する蛋白質をコードすることによってＲＮＡレベルでその効果を発揮することができ、あるいは、おそらくはとりわけｍＲＮＡ蓄積速度の変化、ｍＲＮＡ輸送の変化、および／または転写後調節の変化を仲介することによって、細胞内で別の遺伝子の発現レベルに影響することで作用する蛋白質をコードすることができる（すなわち、ここでは遺伝子発現は、転写開始からプロセスされた蛋白質の生産までのすべての工程を含めるものと広く解釈されている）。したがって、「治療遺伝子」という用語の使用は、これらの、およびより一般的に遺伝子治療と称され、当業者に知られている他のいかなる態様をも包含することを意図するものである。同様に、遺伝子治療のために、あるいはインビトロまたはインビボでの所定の細胞または組織における遺伝子発現の効果を研究するために、組換えアデノウイルスを用いることができる。ファイバー蛋白質のようなキメラコート蛋白質を含む組換えアデノウイルス、およびパッセンジャー遺伝子または特定の細胞で発現し得る遺伝子をさらに含む組換えアデノウイルスは、本発明にしたがって、導入ベクター、好ましくはウイルスもしくはプラスミド導入ベクターを使用することにより作ることができる。このような導入ベクターは、先に記載したようなキメラアデノウイルスコート蛋白質遺伝子配列を含んでいることが好ましい。該キメラコート蛋白質遺伝子配列は、欠失した天然の配列の代わりに、あるいは天然の配列に加えて非天然の配列を含む。組換えキメラコート蛋白質遺伝子配列（例えば、ファイバー遺伝子配列）は、その発現および受容体または蛋白質特異性および機能的親和性、三量体化能、ペントンベース結合および他の生化学的特徴の評価のために、アデノウイルス導入ベクターからバキュロウイルスまたは適当な原核もしくは真核の発現ベクターに移すことができる。したがって、本発明はまた、キメラアデノウイルスコート蛋白質遺伝子配列（好ましくはファイバー遺伝子配列）を含む組換えバキュロウイルス発現ベクター並びに原核および真核の発現ベクターを提供するが、それもまた、ここで定義されるように「導入ベクター」である。該キメラコート蛋白質遺伝子配列（例えば、ファイバー遺伝子配列）は、天然のアミノ酸配列に加えて、あるいはそれに代えて非天然の配列を含み、それによって得られるキメラコート蛋白質（例えば、ファイバー蛋白質）が、該天然配列が結合する結合部位以外の結合部位に結合することを可能にする。キメラ遺伝子をアデノウイルスベクターからバキュロウイルスまたは原核もしくは真核の発現ベクターに移すことによって、高い蛋白質発現が達成できる（総蛋白質のおよそ５〜５０％がキメラファイバーである）。本発明のベクターは、コート蛋白質のコード配列の内側、それに代えて、またはその外側に、ファイバー蛋白質のようなコート蛋白質が三量体化する能力に影響を与えるか、あるいはプロテアーゼ認識配列を含む付加的な配列をさらに含むことができる。三量体化する能力に影響を与える配列とは、ファイバー蛋白質であるキメラコート蛋白質の三量体化を可能にする１つまたはそれ以上の配列である。プロテアーゼ認識配列を含む配列とはプロテアーゼによって切断され、それによってキメラコート蛋白質（またはその一部）の除去および別のコート蛋白質による細胞への該組換えアデノウイルスの接着をもたらす配列である。ファイバー蛋白質であるコート蛋白質とともに使用する場合、該プロテアーゼ認識部位はファイバーの三量体化およびファイバー蛋白質の受容体特異性に影響しないことが好ましい。例えば、本発明の一態様において、好ましくはファイバー蛋白質またはその一部がプロテアーゼ認識配列によって欠失し、次いで、好ましくは先に記載したようにスペーサー配列を使用して、新規な細胞表面結合部位がペントンベースまたはヘキソンコート蛋白質のいずれかに組み込まれる。本発明のベクターおよび導入ベクターの製造において、導入ベクターは当業者に知られた標準的な分子遺伝学的技術を用いて構築される。ベクター（例えば、ビリオンまたはウイルス粒子）はウイルスベクターを用いて製造される。例えば、本発明のキメラコート蛋白質を含むウイルスベクターは、図３に示されるように、いかなるＥ４相補配列も含まない細胞に、（１）キメラファイバーおよび野生型Ｅ４遺伝子を含む直鎖状ベクター、および（２）Ｅ４^-の直鎖状ベクターを与えることによって構築することができる。下記実施例に記載されるように、この方法論によれば、結果として該配列間で組換えが起こり、最初のＥ４^-ベクターの一部とＥ４⁺ベクターの一部、特にキメラファイバー配列を含む領域を含むベクターが生成する。同様に、ファイバーキメラ含有粒子は、標準的な細胞株、例えば、現在アデノウイルスベクター用に使用されているものの中で製造することができる。製造および精製の後、ファイバーを欠失させるべき粒子は、ファイバー蛋白質を切断してウイルス粒子から遊離させ、ファイバーの無い粒子を生じさせる配列特異的プロテアーゼで該粒子を消化することによりファイバーを無くさせる。例えば、トロンビンはベクター中に組み込まれ得る既知のアミノ酸配列を認識してそこで切断する（Stenflo ら，J ．Biol．Chem.，257, 12280-12290（1982））。同様に、ファイバー遺伝子を欠く欠失変異体、例えば、H2dl802、H2dl807 およびH2dl102 1（Falgout ら，J ．Virol.，62, 622-625（1988））を、ベクターの構築に使用することができる。これらのファイバーを有しない粒子は安定で、且つ細胞に結合し感染し得ることが分かっている（Falgout ら，上述）。このようにして得られた粒子は、次いでペントンベースまたは他のコート蛋白質を介して特定の組織にターゲッティングすることができる（好ましくはこのような他のコート蛋白質は１つまたはそれ以上の本発明の非天然アミノ酸配列を含む）。あるいは、さらなる改変を有するキメラファイバー蛋白質を含む組換えアデノウイルスは、受容体結合および三量体化ドメインを含む、ファイバー蛋白質の天然のノブ領域を除去し、非天然の三量体化ドメイン（Peteranderl ら，Biochemi stry ，31，12272-12276(1992)）および本発明の非天然アミノ酸配列で置換することによって製造することができる。キメラファイバー蛋白質を含む組換えアデノウイルスはまた、ノブ領域において点突然変異を誘発し、三量体化し得るクローンを単離することによっても製造することができる。いずれかの場合で、しかも上記したような天然の受容体特異的結合配列の除去および置換に関しては、非天然アミノ酸配列をコードする１またはそれ以上の核酸配列のコピーを適切な位置に挿入することにより、新しい蛋白質結合ドメインを、ファイバー蛋白質のＣ末端上もしくはファイバー蛋白質の露出したループ中に付加することができる。このようなファイバー蛋白質は、ペントンベース蛋白質に結合し得るように三量体化できることが好ましい。キメラファイバー蛋白質を生成するための上記方法はまた、他のキメラコート蛋白質、例えば、キメラヘキソンまたはペントン蛋白質を作るのにも用いることができる。実例となる使用本発明は、細胞に結合することができ、高い効率で細胞内に入るのを仲介することができるキメラ蛋白質、並びにそれを含むベクターおよび導入ベクターを提供する。キメラコート蛋白質自身は多数の用途、例えば、インビトロでのアデノウイルスの細胞への結合を研究する道具としての用途（例えば、Wickham ら（19 93），上述により、先に示されたようなスキャッチャード解析によって）、インビトロでのアデノウイルスの受容体への結合をブロックするための用途（例えば、実施例に記載されるように、抗体、ペプチドおよび酵素を用いて）、およびアデノウイルスが細胞への進入を果たす結合部位への結合を競合させることによってインビボでのアデノウイルス感染を防御するための用途を有する。キメラコート蛋白質を含むベクターはまた、系統の作出にも、また新しいベクターを作る手段としても使用することができる。例えば、非天然アミノ酸配列は核酸に結合することができ、組換えによって新しいベクターを生み出す手段として細胞内に導入することができる。同様に、ベクターを遺伝子治療に使用することができる。例えば、本発明のベクターは、矯正ＤＮＡ、すなわち、欠損するか損なわれた機能をコードするＤＮＡ、または、例えば細胞内でのみ活性のある細胞毒素をコードするＤＮＡのような慎重な殺傷剤を標的細胞に送達することにより数多くの疾患のいずれかを治療するのに用いることができる。このような治療の対象となり得る疾患としては、例えば、癌（例えば黒色腫、膠腫または肺癌）、遺伝病（例えば嚢胞性線維症、血友病または筋ジストロフィー）、病原性の感染（例えばヒト免疫不全ウイルス、結核または肝炎）、心臓病（例えば壊死組織に再灌流させるための血管形成術または血管新生促進の後の妨害的再狭窄）および自己免疫障害（例えばクローン病、大腸炎または関節リウマチ）が挙げられる。特に、遺伝子治療は、野生型アデノウイルスファイバー蛋白質が結合する高レベルの受容体を表面上欠いており、そのため現在のアデノウイルスを介した遺伝子治療へのアプローチが最適ではない様々な組織（例えば、単球／マクロファージ、線維芽細胞、ニューロン、平滑筋および上皮細胞への送達）に付随する疾患、障害もしくは状態を処置するのに行うことができる。これらの細胞より構成される組織（およびそれらに付随する疾患、障害もしくは状態）としては、それらに限定されないが、内皮（例えば血管新生、再狭窄、炎症および腫瘍）、ニューロン組織（例えば腫瘍およびアルツハイマー病）、上皮（例えば皮膚、角膜、腸および肺の障害）、造血細胞（例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１，ＨＩＶ−２）、癌および貧血）、平滑筋（例えば再狭窄）および線維芽細胞（例えば炎症）が挙げられる。さらに、治療遺伝子を導入する代わりに、リポーター遺伝子、またはある種のマーカー遺伝子を、本発明のベクター（特にアデノウイルスベクター）を用いて導入することができる。マーカー遺伝子およびリポーター遺伝子は、例えば、細胞の分化や細胞の運命を研究するのに有用であり、またあり得ることとして診断目的にも有用である。さらに、β−ガラクトシダーゼリポーター遺伝子、緑色蛍光蛋白（ＧＦＰ）をコードする遺伝子もしくはβ−グルクロニダーゼ遺伝子のような標準的なリポーター遺伝子は、例えば、生きている宿主中でのアッセイの手段として、あるいは、例えば、標的細胞を除去する手段としてインビボで使用することができる（例えば、Mindenら，Biotechniques ，20, 122-129（1996）；Yo uvan，Science ，268，264(1995)；米国特許第5,432,081 号；Deonarain ら，Br ．J．Cancer，70, 786-794（1994）参照）。同様に、宿主を、本質的にある特定の蛋白質をインビボで製造する手段として使用するために遺伝子を導入することが望ましいかもしれない。この考え方に沿って、トランスジェニック動物が、例えば、トランスジェニックのウシ種の乳中に組換えポリペプチドを産生させるために使用されている（例えばＰＣＴ国際出願 WO 93/25567）。遺伝子導入をするための他の「非治療的」理由としては、動物モデルを用いたヒト疾患の研究（例えば、腫瘍発生研究のためのｐ５３腫瘍抑圧遺伝子ノックアウトを含むトランスジェニックマウスおよび他のトランスジェニック動物の使用、グルコース代謝とアルツハイマー病の病原の研究のための損なわれたグルコーストレランスとヒトアルツハイマーアミロイド前駆蛋白質モデル用のトランスジェニックモデルの使用、他）が挙げられる。これら前記の実例となる使用は決して包括的なものではなく、本発明は、ここでの開示において、明記されてはいないがそこから導かれるようなさらなる使用を包含することが意図される。同様に、本発明のさまざまな側面を用いて得られる数多くの利点がある。例えば、本発明のユニバーサルターゲッティングベクターの使用は、（１）該ベクターはすべての細胞および組織に使用できる可能性がある、（２）すべての細胞株での使用に１つのベクターしか必要とせず、独立のベクターを共トランスフェクションする必要がない、（３）該ベクターは野生型ファイバー蛋白質を含むベクターについて観察されるよりも増大した効率で遺伝子を送達し得る、（４）従来のベクターと異なり、該ベクターは特定の細胞をターゲッティングせず、その代わりに全体的と思われるやり方で形質導入効率を増加させる、（５）該ベクターは、野生型ファイバー蛋白質を含むベクターと比較すると、少ない用量（すなわち、感染多重度（ＭＯＩ））で使用しても遺伝子導入を仲介することができ、したがって、おそらく現在利用可能なアデノウイルスベクターに伴う投与量に関連する欠点を減じる、および（６）該ベクターは、現在利用できる細胞株を用いて増殖および維持することができるので、有利である。ユニバーサルターゲッティングアデノウイルスベクターのような、ユニバーサルターゲティングベクターが潜在的に持つ、すべての、もしくはほとんどの組織に結合しその中に入る能力は幾つかの利点を有する。これらの利点としては、多くの組織への遺伝子送達効率が増大すること、すべての組織に遺伝子を送達し得る単一のベクターを入手できること、および遺伝子送達に必要な成分を簡単に製造できることが挙げられる。さらに、このようなユニバーサルターゲッティングベクターは、蛋白質／ＤＮＡ相互作用によりベクター上のＤＮＡを「ピギーバック方式で輸送すること」によって、外因性ＤＮＡを細胞内に送達する能力を含む。このようなユニバーサルターゲッティングベクターの可能性のあるさらなる利点としては、野生型ファイバー蛋白質が結合するファイバー受容体を低レベルで発現する細胞への送達効率が実質的に増加すること（例えば１０ないし１００倍に増加する）、並びに野生型ファイバーが結合するファイバー受容体を発現する細胞または組織への効率も増加することが挙げられる。さらに、投与量を減らしベクターを使用する結果、アデノウイルス付随性の炎症、アデノウイルスに対する体液性（免疫）応答およびアデノウイルスに対する細胞傷害性Ｔリンパ球の応答が減少するはずである。さらに、該ベクターは慣用の手段により単離精製され得る点で有利である。ベクター中の変化はゲノムレベルでなされるので、他のベクター（例えば、Cotten ら，上述；Wagnerら，上述を参照）に付随するような、面倒でコストのかかる産生後の修飾を必要としない。同様に、特殊な受容体を発現する細胞株も必要ではない。ＵＴＶベクターは、ファイバーを改変していない野生型ベクターと同様の力価まで増殖され得る。投与手段本発明のベクターおよび導入ベクターは、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞に接触させて使用することができる。本発明によれば、「接触させること」は、ベクターを細胞内に導入するいかなる手段も包含し、その方法はいかなる特定の導入手段にも依拠しないし、また、そのように解されるべきではない。導入手段は当業者によく知られ、また、以下に例示される。すなわち、導入は、例えば、インビトロ（例えば、遺伝子治療の生体外（ex v ivo）タイプの方法または組織培養研究で）またはインビボのいずれかで、エレクトロポーレーション、形質転換、形質導入、接合もしくはトリペアレンタルメイティング、（共）トランスフェクション、（共）感染、カチオン性脂質との膜融合、ＤＮＡでコーティングされたマイクロプロジェクタイルによる高速発砲、リン酸カルシウム−ＤＮＡ沈殿とのインキュベーション、単一細胞への直接マイクロインジェクション等によって達成され得る。同様に、ベクターはカチオン性脂質、例えば、リポソームによって導入することができる。このようなリポソームは市販されている（例えば、Life Technologies，Gibco BRL，Gaithersburg，量を増し、および／またはインビボでの毒性を低減したリポソーム（例えば、ＰＣＴ特許出願 WO 95/21259）を本発明において使用することができる。他の方法もまた利用でき、当業者に知られている。本発明によれば、「宿主」（および、したがって宿主由来の「細胞」）は、本発明のベクターを導入することができるいかなる宿主をも包含し、したがって、それらに限定されないが、両生類、鳥類、魚類、昆虫、爬虫類もしくは哺乳類を含む動物を包含する。最も好ましくは、宿主は哺乳動物、例えば、齧歯類、霊長類（例えばチンパンジー、サル、尾ナシザル、ゴリラ、オランウータン、または手長ザル）、ネコ、イヌ、有蹄類（例えば反芻動物またはブタ）、並びに、特にヒトである。ユニバーサルターゲッティングベクターは表向きにはすべての細胞に進入するので、細胞はこのようなベクターが入ることができるいかなる細胞であってもよい。特に、ユニバーサルターゲッティングベクターは低レベルもしくは検出できないレベルのファイバー受容体を発現する細胞（それに限定されないが、内皮、平滑筋、ニューロン、造血または線維芽細胞を含む）への遺伝子導入のために使用することができる。当業者には、本発明のベクター（特にアデノウイルスベクター）を遺伝子治療（例えば、Rosenfeld ら，Science ，252，431-434（1991）；Jaffeら，Clin ．Re s. ，39(2), 302A（1991）；Rosenfeldら，Clin ．Res.，39(2), 311A（1991）；B erkner，Bio Techniques，6, 616-629（1988）を参照）、化学療法およびワクチン接種の目的で動物に投与するのに適当な方法を利用することができ、また、１つ以上の経路が投与に使用できるが、ある特定の経路が他の経路よりもより迅速でより効果的な反応を提供し得ることがわかるであろう。医薬上許容され得る賦形剤もまた当業者によく知られており、容易に入手可能である。賦形剤の選択は組換えベクターの投与に使用される特定の方法によって部分的に決定されるであろう。したがって、本発明における使用には非常に多様な好適な製剤がある。以下の方法および賦形剤は単なる例示であって何ら限定するものではない。経口投与に好適な製剤は、（ａ）液剤、例えば水、生理食塩水、オレンジジュースのような希釈剤に溶解された有効量の化合物、（ｂ）それぞれ予め決められた量の有効成分を固形剤または顆粒剤として含むカプセル剤、サッシェ剤または錠剤、（ｃ）適当な液体中の懸濁液剤、および（ｄ）適当な乳液剤からなり得る。錠剤型は、ラクトース、マンニトール、コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、微晶質セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド性二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸および他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、着香剤、並びに薬理学的に適合する賦形剤のうちの１つまたはそれ以上を含み得る。トローチ型は、有効成分を香味成分、通常はシュクロースおよびアカシアまたはトラガカントゴム中に含み得るし、また、香錠剤は有効成分をゼラチンおよびグリセリン、またはシュクロースおよびアカシアのような不活性な基剤中に含み、乳化剤、ゲル剤などは有効成分に加えて、当技術分野において知られているような賦形剤を含有する。本発明のベクターまたは導入ベクターは単独で、あるいは他の適当な成分と組み合わせて、吸入によって投与されるエアロゾル製剤にすることができる。このようなエアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等の加圧された許容され得る推進ガス中におくことができる。それらはまた、ネブライザー噴霧器やアトマイザー噴霧器のような非加圧製剤用の医薬として製剤化され得る。非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図する受容者の血液と製剤とを等張にする溶質を含み得る水性および非水性の等張滅菌注射溶液剤、並びに懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定化剤および保存剤を含み得る水性および非水性の滅菌懸濁化剤が挙げられる。当該製剤はアンプルやバイアルのような単位用量または複数回用量を封入した容器で提供され、注射用に、使用直前に滅菌した液状賦形剤、例えば水を添加すればよいだけのフリーズドライ（凍結乾燥）された状態で保存することができる。即席の注射溶液剤および懸濁液剤は、以前に記載された種類の滅菌した散剤、顆粒剤および錠剤から調製することができる。さらに、本発明のベクターまたは導入ベクターは、乳化用基剤や水溶性基剤のような種々の基剤と混合することにより坐薬としてもよい。膣投与に適した製剤は、有効成分に加えて当技術分野において適当であると知られているような担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡またはスプレー剤として提供され得る。本発明によれば、動物、特にヒトに投与される用量は目的の遺伝子、使用される組成物、投与方法および治療される特定部位および生物によって変化する。しかしながら、その投与量は治療的応答をもたらすに十分であるべきである。先に示したように、本発明のベクターまたは導入ベクターはまた、インビトロでの有用性を有する。そのようなベクターは、アデノウイルスの細胞接着および細胞感染の研究における研究用の道具として、また、結合部位−リガンド相互作用の測定方法に使用することができる。同様に、天然の受容体結合配列に加えて、あるいはそれの代わりに非天然のアミノ酸配列を含む組換えコート蛋白質は、例えば、受容体−リガンドアッセイに、また、インビトロまたはインビボでの接着蛋白質として使用することができる。以下の実施例に本発明をさらに説明するが、勿論これらはその範囲を何ら限定されるように解釈されるべきではない。実施例１この実施例において野生型アデノウイルスの細胞に対する結合能によって決定される、異なる細胞におけるアデノウイルス受容体のレベルの研究について述べる。これらの実験では、野生型ファイバーを含むアデノウイルスの、種々の組織由来の細胞に対する結合能を評価した。以前に記載されているように（Wickham ら，ジンで標識した。亜飽和レベル(subsaturating level)のチミジン標識されたアデノウイルスを、２０μｇ／ｍｌの可溶性ファイバー蛋白質の存在下または非存在下で約３０〜６０分間プレインキュベートした１０⁶個の細胞２００μｌに加え、該細胞を４℃で１時間、該ウイルスと共にインキュベートし、冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄した。残っている細胞結合カウントはシンチレーションカウンターで測定された。特異的な結合は、ファイバー存在下での細胞結合カウント（すなわち、counts per minute（ｃｐｍ））を、ファイバー非存在下での細胞結合カウントから引くことによって測定した。ファイバーの存在下での結合は、放射活性のあるウイルス粒子の全投入量(input)の２％を決して超えなかった。結果は３回の測定を平均して得られた。図１に示されるように、かなりの数の異なる組織由来の細胞は、野生型アデノウイルスのこれらの細胞に対する相対的非結合性で示されるように、ファイバー受容体をほとんど、または全く発現しなかった。上皮起源の細胞（すなわち、Ｃｈａｎｇ細胞、ＨｅＬａ細胞およびＡ５４９細胞を含む「受容体（＋）」細胞）は高レベルのアデノウイルスに結合した。それに比べて、非上皮細胞（すなわち単球／マクロファージ、繊維芽細胞、ニューロン、平滑筋細胞および上皮細胞のような「受容体（−）」細胞）は、上皮様細胞に比べ１０倍またはそれ以上のウイルス結合の減少を示した。これらの結果は、「受容体（＋）」の上皮細胞と比較して、アデノウイルスは「受容体（−）」の非上皮細胞に相対的に結合しにくく、したがってその中に進入する能力も相対的に低いという従来認識されていなかったことを確認するものである。おそらく、この能力のなさは、これらの細胞上では、野生型アデノウイルスファイバー蛋白質に対する受容体の提示が低いことによると考えられる。実施例２この実施例においては、キメラコート蛋白質、特にキメラアデノウイルスファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクターの構築について述べる。非上皮組織のような臨床的に意味のある組織上に、限られた数だけしかファイバー受容体が存在しないことによって課された形質導入の制限を克服するために、修飾アデノウイルスベクターを、図２Ａおよび２Ｂに描写されるように構築し、ここで「ユニバーサルトランスファーベクター」あるいはＵＴＶと呼ばれるベクターを誘導した。特に、フレームシフト変異がアデノウイルスコート蛋白質をコードする遺伝子、この場合にはファイバー遺伝子内で引き起こされた。野生型アデノウイルスでは、非修飾のファイバー遺伝子は一揃えの翻訳終止シグナル（ＴＡＡ）と転写ポリアデニル化シグナル（ＡＡＴＡＡＡ）を含んでいる。ポリアデニル化シグナルは転写物の３’末端へのポリＡテールの付加を指示する。ポリＡテールは通常、ざっと約２０から約２００ヌクレオチドぐらいを含んでいる。転写後、核から出てきて、ＴＡＡの終止シグナルがリボゾームによる翻訳の停止を命令する。それに比べて、ＵＴＶベクターの修飾ファイバー遺伝子はフレームの合った翻訳「終止」シグナルを欠いている。正常な転写およびｍＲＮＡへのポリＡ伸長の付加の後、終止コドンがないので、リボゾームはポリＡ領域まで転写産物の翻訳を続ける。コドンＡＡＡはアミノ酸リジンをコードするので、結果として得られる、ＵＴＶによって作られたキメラファイバー遺伝子翻訳産物は、Ｃ末端に一続きのポリリジン残基、すなわち、Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys ［配列番号：１］の付加を含んでいる。キメラファイバー蛋白質では、ポリリジン残基は一般的に約３から３０残基から成っているので、ポリリジン列の長さを制限すべく細胞プロセスが働くこともありうる。しかしながら、どのような場合であれ、蛋白質のポリリジン修飾ならびにここに記載される更なる修飾は、高レベルの野生型アデノウイルスファイバー蛋白質受容体を欠く細胞（すなわち、「受容体（− ）細胞」）にＵＴＶを効率よく結合させる。ベクターの構築と同定に関しては、株、プラスミドおよびウイルスの作成、ゲル電気泳動、プラスミド単離を含むＤＮＡ操作、ＤＮＡクローニングおよびシークエンシング、ウエスタンブロット解析等のような標準的な分子および遺伝子技術は当業者に知られているように、および標準的な実験室マニュアル（例えば、 Maniatisら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，第２版（Cold spring Harbor，NY，1992); Ausubelら，Current Protocols in Molecular Biology，(1 987)）に詳しく記述されているようにして行った。分子的操作に用いられた制限酵素およびその他の酵素は、商業的供給元から購入され、（例えば、Boehringer Mannheim，Inc.，Indianapolis，Indiana; New England Biolabs，Beverly，Ma ssachusetts; Bethesda Research Laboratories，Bethesda，Maryland）、製造元の推奨に従って使用した。実験に使用した細胞（例えば形質転換されたヒト胎児性腎細胞株２９３細胞（すなわち、ＣＲＬ１５７３細胞）やアメリカンタイプカルチャーコレクションによって供給されるその他の細胞）は、以前に記述されているように(Erzerumら，Nucleic Acids Research，21，1607-1612(19 93))標準的な無菌培養用試薬、培地および技術を用いて培養し維持された。結果的に、ファイバーの終止コドンのフレームシフト変異は、修飾BamHI部位（すなわち、GGATCCAA［配列番号：６］）をアデノウイルス導入ベクターに導入することによって引き起こされた。これは図３に示されているように、導入プラスミドpAd NS 83-100（これはp193NS 83-100 またはpNS 83-100としても知られている）から始めることで行われた。pAd NS 83-100 は、Ａｄ５ゲノムの83-100 地図単位領域におよぶ、ファイバー遺伝子を含むＡｄ５のNdeI からSalI までのフラグメントをプラスミドpNEB193(New England Biolabs，Beverly，MA)にクローニングすることにより構築した。 pAd NS 83-100 のNdeI-MunI フラグメントを、クローニングを容易にするために5'NdeI 部位と3'MunI 部位にフランキングしているBamHI部位を含む合成オリゴヌクレオチドで置換した。２本鎖合成オリゴヌクレオチドフラグメントはオーバーラップ合成１本鎖センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチド、すなわち、それぞれ、センスプライマー TAT GGA GGA TCC AAT AAA GAA TCG TTT GTG TTA TGT TTC AAC GTG TTT ATT TTT C ［配列番号：９］、アンチセンスプライマー AAT TGA AAA ATA AAC ACG TTG AAA CAT AAC ACA AAC GAT TCT TTA TTG GAT CCT CCA ［配列番号：１０］（それぞれ図４Ａおよび４Ｂに示されている）から創製された。オーバーラップオリゴマーの末端はNdeI およびMunI 部位へ、直接クローニングできるように突出部を持つように作成された。得られた導入プラスミドである、pAd NS 83-100（F^-）（これはp193NS(ΔF)またはpNS(ΔF)としても知られている）は、ファイバー遺伝子のコード配列の最初の５０塩基対以外は全て欠いている（すなわち、「ファイバー（−）」である）。ベクターはさらに、アデノウイルスＥ４コード配列全体を含んでいる。プラスミドは合成NdeI/MunI オリゴヌクレオチド内に含めたＡＡＴＡＡＡポリアデニル化シグナルを保持しており、そして新しいBamHI制限部位をも組み込んでいる。ファイバー遺伝子の最後のコドンに続いて修飾BamHI部位を組み込んで変異ファイバー遺伝子を創製する一方、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）でファイバー遺伝子を増幅するために、該変異ファイバー遺伝子をファイバー（−）pAd NS 8 3-100 プラスミドに合成センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーを用いて組み込んだ。この組み込まれた修飾BamHI部位はアミノ酸グリシンおよびセリンをコードする役割も果たし、その結果、GGA TCC AAT AAA GAA TCG TTT GTG TTA TGT ［配列番号：７］のキメラ核酸配列ができる。修飾ファイバー遺伝子はこのように、Gly Ser Asn Lys Glu Ser Phe Val Leu Lys Lys Lys ［配列番号：４］という配列（ここでポリリジン列の長さは変動可能である。）の結果として得られるキメラファイバー蛋白質を延長してコードする。ファイバー増幅のために用いられる合成オリゴヌクレオチドは、図４Ｃおよび４Ｄにそれぞれ示されているように、プライマーTCCC CCCGGG TCTAGA TTA GGA TCC TTC TTG GGC AAT GTA TGA ［配列番号：１１］およびプライマーCGT GTA TCC ATA TGA CAC A GA ［配列番号：１２］であった。ついで、増幅された遺伝子産物を制限酵素NdeI およびBamHIで切断し、導入ベクターpAd NS 83-100 UTV（p193NS（F5^*）、p193NS（F5^*)またはpNS（F5^*）としても知られる）を作成するために、ファイバー（−）プラスミドのpAd NS 83-10 0 のNdeI/BamHI部位にクローニングした。pAd NS 83-100 UTV のNdeI からSalI までの全体のアデノウイルス配列を、pAd BS 59-100 UTV（p193NS(F5^*)、p193NS （F5^*）またはpNS（F5^*）としても知られる）を創製するためにファイバー（− ）プラスミドpAd BS 59-100 にクローニングした。 UTV アデノウイルスベクターを２９３細胞中で、相同組換えによって創製した。すなわち、E4⁺pAd BS 59-100 UTV 導入ベクターをSalI で線状化し、あらかじめアデノウイルスベクターA2F で感染させた２９３細胞にトランスフェクトした。A2F ベクターはGV10ベクターから誘導された。Ａｄ５をもとにしたベクターであるGV10はＲｏｕｓ肉腫ウイルスプロモーターの制御下にあるlac Z 遺伝子を含んでいる（すなわち、ＲＳＶ lac Z を含んでいる。）GV10でのリポーター遺伝子の挿入はＥ１領域内でなされる（すなわち、ベクターはＥ１^-である。）GV10 ベクターはＥ３領域の欠失を含んでいるが、Ｅ４⁺である。GV10（すなわち、ＲＳＶ lac Z Ｅ１^-Ｅ３^-Ｅ４⁺）と比べると、Ａ２Ｆは必須のＥ４アデノウイルス遺伝子の欠失をさらに含んでいるが、Ｅ３⁺（すなわち、ＲＳＶ lac Z Ｅ１^-Ｅ３⁺Ｅ４^-）である。２９３細胞はＥ１相補的配列を含んでいるが、Ｅ４相補的配列は含んでいない。Ｅ４相補的配列の欠如は、２９３細胞株でのＥ４^-Ａ２Ｆベクターの複製を妨げる。しかしながら、２９３細胞にＡ２ＦウイルスとpAd BS 59-100 UTV を共トランスフェクションすると、ＵＴＶ導入ベクターとＡ２Ｆアデノウイルスゲノムとの間で相同組換えが起こり、２９３細胞内で複製可能な、キメラファイバー蛋白質を含むＥ３⁺Ｅ４⁺アデノウイルスゲノムを産生する。この特定の結果として得られるUTV ベクターをGV10 UTVと名付けた。 GV10 UTVベクターを標準的なプラーク単離技術を２９３細胞に用いることによって単離した。プラーク精製を連続３回行うと、GV10 UTVベクターはファイバー変異を含み、且つE4^-A2F ベクターによるいかなる混入もなかった。GV10 UTVベクターでのキメラファイバー配列の存在は逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いたファイバーｍＲＮＡをシークエンシングすることにより確認された。このことは、キメラファイバーｍＲＮＡでのポリアデニンテールの存在を証明した。同様にして、ベクターによるキメラファイバー蛋白質の産生をウェスタンブロットにより確認した。これを行うために、野生型アデノウイルスファイバー蛋白質を含むGV10またはキメラファイバー蛋白質を含むGV10 UTVのどちらかを、５感染多重度（ＭＯＩ）で２９３細胞に感染させた。感染２日後に、細胞を洗浄し、ついで３回の凍結融解サイクルにより、ＰＢＳ中で溶解した。ライセートを遠心分離により、澄明にし、１０％ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲルに付した。電気泳動の後、該蛋白質をニトロセルロースに移し、ファイバーに対するポリクローナル抗体を用いた化学発光によって検出した。該ウェスタンブロットを図５に示す。この図から分かるように、蛋白質の移動は、非修飾の６２キロダルトンのＷＴファイバー蛋白質よりも、約１．５〜約２．０キロダルトンキメラＵＴＶファイバーのほうが大きいことを示している。これらの結果は、ここで示された方法を、キメラファイバー蛋白質を産生すべくファイバー蛋白質に修飾を導入するために用い得ることを確認している。同様の技術がヘキソンまたはペントン蛋白質に修飾を導入するために、または同様の修飾（例えば、アルギニン、リジンおよび／またはヒスチジンを含む、またはアスパラギン酸および／またはグルタミン酸を含むアミノ酸列の付加、或いは、コート蛋白質のコード領域への任意のこれらの配列の付加）を導入するために用いることができる。実施例３この実施例において、キメラファイバー蛋白質のようなキメラコート蛋白質を含むアデノウイルスベクターの細胞への結合を、可溶性野生型ファイバー蛋白質の存在下または非存在下で、野生型のアデノウイルスベクターと比較して述べる。これらの実験には、アデノウイルスが、高効率で（すなわち受容体（＋）細胞）または低効率で（すなわち受容体（−）細胞）結合することが実施例１で確認された細胞を用いた。上皮細胞株Ａ５４９を代表的な受容体（＋）細胞として用い、繊維芽細胞株ＨＳ６８を代表的な受容体（−）細胞として用いた。Ａ５４９またはＨＳ６８細胞の集密的な(confluent)単層を、０から約１０μｇ／ｍｌまでの範囲の可溶性ファイバー蛋白質濃度で、４℃でプレインキュベートした。キメラファイバー蛋白質（ＵＴＶ）を含むGV10 UTVベクターまたは野生型ファイバー蛋白質（ＷＴ）を含むGV10ベクターは、実施例１で示されたように、トリチル化チミジンで標識した。ついで約２０，０００ｃｐｍの[³H]−チミジン標識されたGV10 UTVまたはGV10ベクターを、細胞とともに４℃で約２時間インキュベートした。該細胞を冷ＰＢＳで３回洗浄し、細胞結合ｃｐｍをシンチレーションカウンティングによって測定した。結果を２回の測定の平均として得、Ａ５４９およびＨＳ６８細胞株それぞれに対し、図６Ａおよび６Ｂに示す。図６Ａ−Ｂで分かるように、GV10 UTVベクターのキメラファイバー蛋白質は受容体（＋）細胞（図６Ａ）および受容体（−）細胞（図６Ｂ）の両方に、高効率で結合することが出来た。それに比べて、野生型ファイバーを含むGV10ベクターは受容体（＋）細胞に対する結合において効率的であった。特に、放射標識されたGV10 UTVは、ファイバー受容体を検出可能なレベルで発現している細胞（すなわち、Ａ５４９肺胞上皮細胞）にGV10よりも約２〜２．５倍良く結合した。GV10 ベクターのすべての結合が競合する組換えファイバー蛋白質によって阻害されたが、GV10 UTVベクターは約４０％しか競合するファイバーの添加によって阻害されなかった。ファイバー受容体を欠くＨＳ６８ヒト包皮繊維芽細胞に対する、野生型アデノウイルスファイバーを含むGV10ベクターの検出可能な結合は観察されなかった。それに比べ、GV10 UTVベクターは効率よくＨＳ６８細胞に結合し、競合するファイバー蛋白質の添加は結合に何ら影響を及ぼさなかった。これらの結果はキメラコート蛋白質（すなわち、キメラファイバー蛋白質）を含むGV10 UTVベクターの結合が野生型アデノウイルスファイバー受容体を介して起こるのではなく、そのかわりに現在のところ未確認のファイバー受容体を介して起こることを確認した。さらに、この結果はキメラファイバー蛋白質のようなキメラコート蛋白質のアデノウイルスベクターへの組み込みが改良されたアデノウイルスベクターをもたらすことを確認した。すなわち、GV10 UTVベクターによって構成される修飾は上述した野生型アデノウイルスの受容体（−）細胞、特に非上皮細胞に対する結合に対しての相対的な能力のなさを克服することを可能にし、また修飾ベクターを受容体（＋）細胞により高い効率で結合させる。実施例４この実施例において、種々の可溶性因子およびこれら可溶性因子の阻害剤が、キメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルスの受容体（−）のＨＳ６８繊維芽細胞に対する結合を阻害する能力の研究について述べる。これらの実験では、サケ精子ＤＮＡ、ムチン、コンドロイチン硫酸およびヘパリンを含む種々の負に荷電した分子によるGV10 UTV結合の阻害を評価した。コンドロイチン硫酸およびヘパリンは硫酸基から電荷を得て負に荷電した分子である。ムチンはシアル酸部分の存在により負に荷電し、ＤＮＡはリン酸部分が組み込まれているために負に荷電している。２５０μｌの結合バッファー（すなわち、 Du lbecco's Modified Eagle Media（D-MEM））中のＵＴＶ約２０，０００ｃｐｍを、約１×１０^-3から約１×１０⁴μｇ／ｍｌまでの範囲の負に荷電した分子の濃度で、室温で約３０分間インキュベートした。インキュベーション後、該混合物を氷上で冷却し、ついで２４穴プレートで平板培養し(plated)、あらかじめ冷却しておいたＨＳ６８細胞に添加した。細胞を約１時間インキュベートした後、該細胞をＰＢＳで３回洗浄した。細胞結合ｃｐｍをシンチレーションカウンティングで測定し、２回の測定の平均として報告した。図７に示すように、競合する野生型ファイバー蛋白質の存在はGV10 UTVベクター（すなわちキメラファイバーを含む）のＨＳ６８細胞に対する結合に影響を及ぼさなかったのに対し、負に荷電した競合分子はGV10 UTVの結合を阻害することができた。ヘパリンおよびＤＮＡが最も効果的であったが、４種の分子は全てＨＳ６８細胞に対するGV10 UTVの結合を阻害することができた。これらの分子はGV10ベクター（すなわち野生型ファイバーを含んでいる）の高レベルでファイバー受容体を発現している細胞（すなわちＡ５４９細胞；データ示さず）に対する結合に対して顕著な影響を及ぼさない。これらの結果は、負に荷電した分子が、キメラファイバー蛋白質によって仲介されるGV10 UTVベクターの細胞への結合を阻害することができることを確認した。この阻害はおそらく、GV10 UTVファイバー上に存在する正に荷電したポリリジン残基に負に荷電した分子が結合することによるものである。従って、GV10 UTV ベクターの細胞への結合の際にこれらの負に荷電した分子を切断する酵素の影響を調べた。ＨＳ６８細胞を２４穴プレートで平板培養し、ヘパリナーゼ（Sigma，St．L ouis，MO）、コンドロイチナーゼ(Sigma)およびシアリダーゼ(Boehringer Mannh eim，Inc.)の約０．０００１から１までの範囲の希釈液とともに３７℃で４５分間、ついで４℃で１５分間プレインキュベートした。コンドロイチナーゼはコンドロイチン硫酸を切断するのに対し、ヘパリナーゼはヘパリンおよびヘパリン硫酸を切断し、シアリダーゼはシアル酸を切断する。希釈液の最初の初期濃度は以下の通りであった。ヘパリナーゼ２５Ｕ／ｍｌ（Ｕ＝０．１μモル／時間、ｐＨ＝７．５、２５℃）コンドロイチナーゼ２．５Ｕ／ｍｌ（Ｕ＝１．０μモル／分、ｐＨ＝８．０、３７℃）、シアリダーゼ０．２５Ｕ／ｍｌ（Ｕ＝１．０μ モル／分、ｐＨ＝５．５、３７℃）。インキュベーション後、細胞を冷ＰＢＳで３回洗浄し、ついで、２０，０００ｃｐｍの標識GV10 UTVベクターと共に、４℃ で約１時間インキュベートした。ついで該細胞を冷ＰＢＳで３回洗浄し、細胞結合ｃｐｍをシンチレーションカウンティングで測定した。結果は２回の測定の平均として報告された。図８に示すように、細胞表面から負に荷電した分子を除去する酵素でのＨＳ６８細胞の前処理は、キメラファイバー蛋白質を含むGV10 UTVベクターが細胞表面で、負に荷電した部分と相互作用することを確認している。特に、ＨＳ６８細胞についてはヘパリナーゼのほうがシアリダーゼより効果的であったが、ヘパリナーゼとシアリダーゼは両方とも、GV10 UTV 結合を減少させることができた。従って、これらの結果はキメラファイバー蛋白質を含むベクター（すなわちGV 10 UTVベクター）は、野生型のアデノウイルスとは違って、細胞進入に影響を及ぼすために細胞表面上の負に荷電した分子と新規なやり方で相互作用することを確認している。これらの結果はさらに、正に荷電した分子（例えば、リジン）の代わりに負に荷電した残基（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸）を含むベクターを同様に、細胞表面に存在する正に荷電した分子を介して結合し、細胞内進入に影響を及ぼすために用いることができることを示している。実施例５この実施例においてキメラファイバー蛋白質のようなキメラコート蛋白質を含むアデノウイルスベクター（例えば、GV10 UTV）に仲介される異なるタイプの細胞への遺伝子送達を、ファイバー蛋白質のような野生型のコート蛋白質を含むアデノウイルス（例えばGV10）によって介在される遺伝子送達と比較して評価する。これらの実験では、キメラファイバー蛋白質を含むベクター（すなわち、GV10 UTV）と比べた、野生型ファイバー蛋白質を含むベクター（すなわち、GV10）によるlac Z 遺伝子送達の相対的なレベルを、上皮様細胞（すなわち、ＨｅＬａ細胞、Ａ５４９細胞、ＨｅｐＧ２細胞およびＨ７００Ｔ細胞）、平滑筋細胞（すなわち、ＨＡＳＭＣ細胞およびＨＩＳＭＣ細胞）、内皮細胞（すなわち、ＨＵＶＥＣ細胞およびＣＰＡＥ細胞）、繊維芽細胞（すなわち、ＨＳ６８細胞およびＭＲＣ−５細胞）、グリオブラストーマ細胞（すなわち、Ｕ１１８細胞）および単球マクロファージ細胞（すなわち、ＴＨＰ−１細胞）について比較した。アデノウイルスによる形質導入の１日前に、約２×１０⁵の細胞を２４多穴プレートヘ播種した。ついで、各ウェルをGV10（すなわち、野生型アデノウイルスファイバー蛋白質を含む）またはGV10 UTV（すなわち、キメラアデノウイルスファイバーを含む）によって１ＭＯＩで２５０μｌの容量で約１時間感染させた。そしてウェルを洗浄し、２日間インキュベートした。その後、細胞ライセートのla c Z 活性を測定した。結果は２回の測定の平均値として報告された。図９に示されているように、選定した細胞株へリポーター遺伝子を導入するためのGV10 UTVベクターの使用は、キメラファイバー蛋白質（ＵＴＶ）の存在がファイバー受容体を低いレベルまたは検出不可能なレベルで発現している細胞（すなわち、受容体（−）細胞）へのlac Z 遺伝子送達を野生型ベクター（GV10）に比較して約５から約３００倍増加させることを確認している。ファイバー受容体を高レベルで発現している細胞（すなわち、受容体（＋）細胞）では、キメラファイバー蛋白質のGV10 UTVベクターへの組み込みが結果として遺伝子送達を約３倍にまで増加させる。野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルス（すなわちGV10）による受容体（−）非上皮細胞の導入で観察される、受容体（＋）上皮細胞と比較した場合のこの発現の減少は、実施例３で報告されているように、これらの異なるタイプの細胞に結合するベクターの相対的な能力に直接関連している。これらの結果は野生型アデノウイルスファイバー蛋白質の受容体の低発現が現在のアデノウイルスベクターによるそれらの効率的な導入の重大な制限因子であるという見解を支持している。同様に、キメラコート蛋白質（すなわち、キメラファイバー蛋白質）のインビボでの遺伝子導入を増大させる能力を調べた。１０ｍＭＭｇＣｌ₂および１０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）を含む生理食塩水溶液５０μｌ中の約１×１０⁸ ｐｆｕのGV10を３匹のＢＡＬＢ／ｃマウスに経鼻腔的に接種した。もう３匹のマウスに同じ投与量のGV10 UTV を接種した。２匹のマウスには生理食塩水溶液だけを投与した。投与２日後、該動物を犠牲にし、肺についてlac Z 活性を測定した。肺の液体窒素での素早い凍結(snap-freezing)、乳鉢と乳棒による組織のすりつぶし、およびすりつぶした組織の１．０ｍｌのlac Z リポーター溶解バッファー(Promega Corp.，Madison，WI)での溶解によって肺を解析の為に調製した。蛍光光度解析をlac Z 活性をモニターするために用い、この実験の結果は各動物群から測定された平均活性として報告された。これらの実験の結果を、図１０に示す。図から分かるように、キメラファイバー蛋白質（ＵＴＶ）を含むGV10 UTVベクターによって仲介されるインビボでの遺伝子導入は、野生型ファイバー蛋白質を含むベクター（GV10）に比べ、マウス肺への送達が平均８倍高くなる結果となった。従って、これらの結果はアデノウイルスベクターのキメラコート蛋白質（この場合、キメラファイバー蛋白質）の組み込みはインビボおよびインビトロの両方でベクターを介した遺伝子送達の効率を、野生型ファイバー蛋白質を含むアデノウイルスベクターに比べて実質的に上昇させることを確認する。さらに、該結果は低いファイバー受容体の発現が肺およびその他の組織において観察される準最適(suboptimal)送達に寄与する１つの重要な因子であるという結論を支持している。また、該結果は肺およびその他の組織への遺伝子導入（例えば、ＧＦＴＲ遺伝子の送達）のために現在利用可能なアデノウイルスベクターに比べて、GV10 U TV並びに他の類似のＵＴＶベクターの優位性を確認している。実施例６この実施例において、キメラコート蛋白質（例えば、キメラファイバー蛋白質）を含む本発明のベクターの、蛋白質／ＤＮＡ相互作用によってパッセンジャーＤＮＡと相互作用し、およびそれによって、「ピギーバック」様式でそのＤＮＡを細胞に運ぶ能力を評価する。これらの実験には、受容体（＋）上皮細胞（すなわち、２９３細胞、Ａ５４９細胞およびＨ７００Ｔ細胞）への遺伝子導入を調べるために、野生型ファイバーを含むアデノウイルスベクター（すなわち、GV10）およびキメラファイバー蛋白質を含むアデノウイルス（すなわち、GV10 UTV）が用いられた。対照実験では、以前記載したベクターで細胞を変換した。実験条件において、キメラアデノウイルスファイバー蛋白質がプラスミドＤＮＡと複合体を形成することができるように、ベクターをβ−グルクロニダーゼリポーター遺伝子を含むプラスミドpGUS とともにインキュベートした。詳しくは、約５×１０⁷のGV10またはGV10 UTVの活性のある粒子（すなわち、蛍光フォーカス単位(fluorescence focus units（f fu））を約２．５μｇのプラスミドｐＧＵＳＤＮＡと共に１時間インキュベートした。ついで該混合物に１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ２５０μｌ中の約２×１０⁵の指示細胞(indicated cell)を添加した。それからβ−グルクロニダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼの両活性をトランスダクション後１０日目に、蛍光光度解析によって評価した。細胞でのβ−グルクロニダーゼの発現をlac Z 発現の為のβ−ガラクトシダーゼ解析と同様にして、β−グルクロニダーゼがＸ −ｇｌｕ基質との反応を触媒する時の青色色素の生成をモニターすることによって、モニターした。これらの実験の結果を図１１に示す。GV10ベクター（すなわち野生型ファイバー蛋白質を含む）またはGV10 UTVベクター（すなわちキメラファイバー蛋白質を含む）のどちらかを上皮細胞へのリポーター遺伝子のシス導入に用いた時には同等のレベルのlac Z の発現が得られた。それに比べ、野生型のベクターは、β− グルクロニダーゼ遺伝子の発現によって評価されるように、全ての上皮細胞において比較的低いレベルでのみプラスミドｐＧＵＳを細胞内へ導入できなかった。以前記載されているように（ＰＣＴ特許出願WO95/21259）、この遺伝子導入の基底レベルは、おそらく、いあわせた分子(bystander molecules)の受容体を介する取り込み（ＲＭＥ）によって達成された。しかしながら、キメラファイバー蛋白質を含むGV10 UTVベクターを用いるとｐＧＵＳプラスミドの導入は実質的に増加した。２９３細胞への遺伝子導入の場合には、ｐＧＵＳプラスミド指示性のβ −グルクロニダーゼ発現はGV10 UTVベクターに仲介されたシス連結した(cis-lin ked)リポーター遺伝子の導入後に観察される発現を上回った。これらの結果は、本発明のキメラファイバー蛋白質のようなキメラコート蛋白質を含むベクターが、シスに位置していない核酸の該ベクターでの導入の増加を示すことを確認する。表向きには、この高められた遺伝子導入はキメラファイバー上の負に荷電した残基（例えば、ポリリジン列残基）の間の蛋白質／ＤＮＡ相互作用が起こることによって影響されており、結果として核酸のベクターへの結合が生じる。しかしながら、その他の向上方法もまた可能である。実施例７この実施例において、ファイバー蛋白質のＣ末端にＵＴＶあるいはＵＴＶ様の配列を含有する、さらなるプラスミドの構築について述べる。実施例２に記載の、導入プラスミドp193（F5^*）（図１２；p193NS(F5^*)、pNS （F5^*）、およびpAd NS 83-100 UTV としても知られている）を、キメラアデノウイルスファイバー蛋白質を含有する、これらのさらなるプラスミドの構築の為の出発点として用いた。図１２に描写されるように、p193(F5^*)は、最後のファイバー蛋白質コドンとフレームシフトされたファイバー蛋白質の終止コドンとの間にBamHI部位を有する変異したファイバー遺伝子を含有している。ここで記載されるように構築された、さらなる変異導入プラスミドは、ファイバーＣ末端に、アミノ酸グリシン／セリン反復リンカー、標的配列、および終止コドンをコードする配列を含有している。これらのプラスミドは合成オリゴヌクレオチドをp1 93(F5^*)のBamHI部位にクローニングすることによってつくられ、図１３に描写されるような導入プラスミドp193NS（F5）pGS（K7）（p193（F5）pGS(K 7)またはpNS（F5）（pK7）としても知られている）を調製した。つまり、野生型のＡｄ５ファイバー遺伝子の配列は：であり、ここで「TAA」は停止コドンであり、ポリアデニル化配列を太字で示している。p193(F5^*)に存在する変異ファイバー遺伝子のＣ末端は：ここで下線を施した配列は、ファイバー蛋白質に導入された変異したBamHI部位を示し、ポリアデニル化配列を太字で示している。一方、p193NS（F5^*）pGS（K7 ）に存在するファイバー遺伝子のＣ末端のアミノ酸配列は：ここで下線を施した配列は、ファイバー蛋白質に導入された変異したBamHI部位を示し、太字で示されている配列はＣ末端に付加されたポリリジン列を示す。このアミノ酸配列は、核酸配列：GGA TCA GGA TCA GGT TCA GGG AGT GGC TCT AAA AAG AAG AAA AAG AAG AAG TAA ［配列番号２１］によってコードされ、ここで「 TAA」は停止コドンである。導入プラスミドp193NS（F5^*）pGS（K7）を作るために使用したオーバーラップ合成オリゴヌクレオチドは：ｐＫ７ｓ（センス）、GA TCA GGA TCA GGT TCA GGG AGT GGC TCT AAA AAG AAG A AA AAG AAG AAA TAA G ［配列番号６１］；ｐＫ７ａ（アンチセンス）、GA TCC TTA CTT CTT CTT TTT CTT CTT TTT AGA GCC ACT CCC TGA ACC TGA TCC T［配列番号６２］である。該センスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを等モルの割合で混合し、p193NS(F5^*)のBamHI部位にクローニングし、p193NS（F5^*）pGS(p K7)を調製した。p193NS（F5^*）pGS(pK7)中の正確に方向づけられたインサートの確認は、ｐＫ７ｓセンスプライマーおよび下流のアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーＡ５ａ３２９３８、CAGGTTGAATACTAGGGTTCT ［配列番号６３］を用いたＰＣＲによって行った。また、該Ａ５ａ３２９３８プライマーを用いてインサートの領域内のＤＮＡ配列のシークエンシングによって、該プラスミドが正確に方向づけられたインサートを含有していることを確認した。ファイバー蛋白質のＣ末端に、ＵＴＶあるいはＵＴＶ様の細胞標的配列を付加的に含有するさらなる変異導入プラスミドの構築に導入プラスミドp193NS（F5^* ）を用いた。これらのプラスミドはp193NS(F5^*)pGS（null）（p193(F5^*)pGS(n ull)またはp193（F5^*）pGSとしても知られている）、pBSS 75-100 pGS(null)、p BSS 75-100 pGS(RK32)、pBSS 75-100 pGS(RK33)、およびpBSS 75-100 pGS（tat ）を包含している。 p193NS（F5^*）pGS（null）を構築するために、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチドｐＧＳｓ、GATCCGGTTCAGGATCTGGCAGTGGCTCGACTAGTTAAA ［配列番号６４］およびｐＧＳａ GATCTTTAACTAGTCGAGCCACTGCCAGATCCTGAACCG［配列番号６５］をBamHI消化したp193NS(F5^*)プラスミド内へのダイレクトライゲーション用に構築した。正確に方向づけられているクローンの確認は、ｐＧＳｓプライマーおよび下流のアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーＡ５ａ３２９３８を用いるＰＣＲによって行った。また、Ａ５ａ３２９３８プライマーを用いてインサートの領域内のＤＮＡ配列のシークエンシングによって、該プラスミドが正確に方向づけられているインサートを含有していることも確認した。図１４に描写されている、ベクターpBSS 75-100 pGS（null）(pBSS 75-100 Δ E3 pGS（null）としても知られている)を、pBSS 75-100 由来のNheI −SalI フラグメントを、対応するp193NS（F5^*）pGS（null）由来のフラグメントで置き換えることによって構築した。次いで、該プラスミドをSPeI で部分消化し、クレノウフラグメントで埋め、次いでベクターを再連結することによって、ファイバーキメラ遺伝子内にはないSpeI 部位を削除した。得られたベクターは、アミノ酸配列Ala Gln Glu Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ser ［配列番号２４］をコードする適切な核酸配列：GCCCAAGAAGGATCCGGTTCAGGATCTGGCAG TGGCTCGACTAGTTAA［配列番号２３］（ここで「TAA」は停止コドンである）を含んでいる。プラスミドpBSS 75-100 pGS（RK32）(pBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK)₂またはpBS S 75-100 ΔE3 pGS(RKKK2)としても知られている)、pBSS 75-100 pGS（RK33）（ pBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK)₃、またはpBSS 75-100 ΔE3 pGS(RKKK3)としても知られている）、およびpBSS 75-100 pGS（tat）のインサートをSpeI 消化したpBS S 75-100 pGS(null)プラスミド内へのダイレクトライゲーション用に構築した。図１５に描写されているpBSS 75-100 pGS(RK32)を構築するために、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチド、ＲＫ３２ｓ、CTAGAAAGAAGAAACGCAAAAAGAAGA ［配列番号６６］およびＲＫ３２ａ、CTAGTCTTCTTTTTGCGTTTCTTCTTT ［配列番号６７］を用いた。得られたベクターは、アミノ酸配列Ala Gln Glu Gly Ser Gly Se r Gly Ser Gly Ser Gly Ser Thr Arg Lys Lys Lys Arg Lys Lys Lys Thr Ser ［配列番号２６］をコードする適切な核酸配列： GCCCAAGAAGGATCCGGTTCAGGATCTGGCAGTGGCTCGACTAGAAAGAAGAAACGCAAAAAGAAGACTAGT TAA ［配列番号２５］（ここで「TAA」は停止コドンである）を含む。図１６に描写されているpBSS 75-100 pGS(RK33)を構築するために、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチド、ＲＫ３３ｓ、 CTAGAAAGAAGAAGCGCAAAAAAAAAAGAAAGAAGAAGA ［配列番号６８］およびＲＫ３３ａ、CTAGTCTTCTTCTTTCTTTTTTTTTTGCGCTTCTTCTTCTTT［配列番号６９］を用いた。得られたベクターは、アミノ酸配列Ala Gln Glu Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Se r Gly Ser Thr Arg Lys Lys Lys Arg Lys Lys Lys Arg Lys Lys Lys Thr Ser ［配列番号２８］をコードする適切な核酸配列： GCCCAAGAAGGATCCGGTTCAGGATCTGGCAGTGGCTCGACTAGAAAGAAGAAGCGCAAAAAAAAAGAAAGA AGAAGACTAGTTAA ［配列番号２７］（ここで「TAA」は停止コドンである）を包含している。 pBSS 75-100 pGS（tat）を構築するために、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチド、ＴＡＴｓ、CT AGT TAT GGG AGA AAA AAG CGC AGG CAA CGA AGA CGG G CA T ［配列番号７０］およびＴＡＴａ、CT AGA TGC CCG TCT TCG TTG CCT GCG CTT TTT TCT CCC ATA A ［配列番号７１］を用いた。得られたベクターは、アミノ酸配列Thr Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Ser Ser ［配列番号７３］をコードする関連する核酸配列：ACT AGT TAT GGG AGA AAA AA G CGC AGG CAA CGA AGA CGG GCA TCT AGT ［配列番号７２］を包含している。正確に方向づけられたクローンの確認は、３つの各プラスミドのそれぞれ用のセンスプライマー（ＲＫ３２ｓ、ＲＫ３３ｓ、またはＴＡＴｓ）を用い、且つ下流のアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーＡ５ａ３２９３８を用いるＰＣＲによって行った。Ａ５ａ３２９３８プライマーを用いてインサートの領域内のＤＮＡ配列のシークエンシングによって、各自プラスミドが正確に方向づけられたインサートを含有していることもまた確認された。実施例８この実施例において、ファイバーループ内にＵＴＶドメインを含有するプラスミドの構築について述べる。ファイバー蛋白質の露出ループ内にＵＴＶ配列（および／またはスペーサー配列）を含有するプラスミドは、任意の上述の配列（および任意のさらなるＵＴＶ様配列）をファイバー蛋白質に組み入れることによって構築される。これは図１７に描写されるさらなる導入ベクターp193NS F5F2K（p193 F5F2Kとも呼ばれる）を構築するための、プラスミド導入ベクターp193NS(F5^*)の既成の利用法である。プラスミドp193NS F5F2Kは、該蛋白質内の露出ループをコードしているＡｄ２ファイバー遺伝子内にユニークなSpeI 制限部位を含有している。すなわち、p19 3NS F5F2K内に存在するファイバー遺伝子はファイバー配列：を含み、ここで下線を施した配列はファイバー遺伝子内に導入された新規なSpeI 部位を示す。次いで、このベクターを、標的配列をSpeI 部位にクローニングするために用いた。特に、ヘパリン結合ドメインを有する８つの塩基性アミノ酸RKKKRKKK（Ar g Lys Lys Lys Arg Lys Lys Lys ［配列番号７４］）の範囲をコードする核酸配列を、オーバーラップセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、 p193 F5F2KのSpeI 部位にクローニングした。すなわち、該（ＲＫＫＫ）₂配列は、部分的に配列：を有する。 RKKKRKKK［配列番号７４］ペプチドモチーフを有するポリＧＳ（ＲＫＫＫ）₂ 配列をクローニングするために、実施例７に記載の、２７ｍｅｒのセンスオリゴクレオチドＲＫ３２ｓおよび２７ｍｅｒのアンチセンスオリゴヌクレオチドＲＫ３２ａを用いた。p193NS F5FK2のSpeI 部位に該結合ドメインをコードするＤＮＡ配列をクローニングすることによって、p193NS F5F2K(RKKK)₂を構築した。該結合ドメインをコードしている該オーバーラップセンスおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドは、まず最初にアニーリングし、つづいてSpeI 制限部位に直接連結させて、図１８に描写されているp193NS F5F2K(RKKK)₂を得た。このプラスミドはまた、p193NS F5F2K(RKKK2)、p193NS F5F2K(RK32)、またはp193 F5F2K(RK KK2)としても知られている。p193NS F5F2K(RKKK)₂内に存在するファイバーノブの修飾ループの関連部分は：である。さらに、（ＲＫＫＫ）₃配列あるいはこの配列の他の変異体がp193NS F5F2Kに挿入され得る。この配列は、部分的には：を有する。該配列は、３９ｍｅｒのセンスオリゴヌクレオチド（ＲＫＫＫ）₃（ｓ）（即ち、配列CT AGA AAG AAG AAG CGC AAA AAA AAA AGA AAG AAG AAG A ［配列番号７９］を含む）、および３９ｍｅｒのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＲＫＫＫ）₃（ａ）（即ち、配列CT AGT CTT CTT CTT TCT TTT TTT TTT GCG CT T CTT CTT T ［配列番号８０］を含む）を用いて挿入され得る。得られたプラスミドp193NS F5F2K(RKKK)₃を図１９に描写する。このプラスミドはまたp193NS F 5F2K(RKKK3)、p193 F5F2K(RKKK3)、またはp193 F5FK(RK33)としても知られている。p193 F5F2K(RKKK)₃内に存在するファイバーノブの修飾ループの関連部分は：である。実施例９この実施例において、ＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列を含むキメラペントンベース蛋白質を含有するプラスミドの構築について述べる。外来性の配列の挿入を容易にする為に、部分的に、Ａｄ５ゲノムのユニークな BamHI/PmeI フラグメント（１３２５９−２１５６１）を有し、且つ、就中、α_v インテグリン結合ドメインを構成する８アミノ酸の欠失、該欠失した領域のユニークなSpeI 部位を構成するアミノ酸での置換を含むペントンベース蛋白質を含有するプラスミドを操作することによって導入プラスミドpACT（ΔRGD）(米国特許5,559,099 ではプラスミドpAT としても記載されている)を誘導した。図２０に描写されているpACT(RKKK)₃(pACT(RKKK3)またはpACT（RK33）としても知られている）を構築するために、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチドＲＫ３３ｓおよびＲＫ３３ａをSpeI 消化したpACT(ΔRGD)プラスミドに直接連結した。正確に方向づけられたクローンの確認は、該プラスミド用のＲＫ３３ａプライマーおよび上流のセンスオリゴヌクレオチドプライマーＡ５ｓ１５００２を用いるＰＣＲによって行った。Ａ５ｓ１５００２プライマーを用いるインサートの領域内のＤＮＡ配列のシークエンシングによって、該プラスミドが正確に方向づけられたインサートを含有していることもまた確認した。pACT(RKKK)₃内のキメラペントンベース蛋白質となるであろうＵＴＶドメインの関連部分は：である。ＲＫ３２ｓおよびＲＫ３２ａオーバーラッププライマーを用いて、図２１に描写されるプラスミドpACT（RK32）（pACT(RKKK2)またはpACT(RKKK)₂とも呼ばれ得る）を、同様にして構築することができる。pACT(RKKK)₂のキメラペントンベース内に存在するＵＴＶドメインの関連部分は：である。実施例１０この実施例において、アデノウイルスヘキソン蛋白質内にＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列を含み、特にアデノウイルスヘキソン蛋白質の露出ループ内にこれらの配列を含有するプラスミドの構築について述べる。これらのプラスミドは、図２２に描写される別の導入プラスミドであるプラスミドpACT Hl1を利用して構築され得る。プラスミドpACT Hl1そのものは、プラスミドpACT（Ａｄ５ゲノムの１３２５９から２１５６１からなる）由来であって、ヘキソン蛋白質コード配列（およそ１８８４２−２１７００に対応する）の大部分を含有する。特に、pACT Hl1は、Ａｄ５ヘキソン蛋白質のループ１領域にXbaI 部位を組み入れることによって構築され得る。ループ１もしくはループ２領域のどちらかに、もしくはヘキソン蛋白質のその他の露出ループにXbaI 部位または他のいかなる便宜の良い制限部位を組み入むために、同様の技術が使用され得る。Ａｄ５ＤＮＡ由来のループ１領域をＰＣＲによって増幅するために、そして同時にループ１領域に変異したXbaI 部位をもたらす変異を導入するためにセンスおよびアンチセンスプライマーを使用することができる。特に、pACT内に生じる、自然に生じるユニークな制限部位ApaI を含有するセンスプライマー、およびユニークな制限部位BsrGIを含有するアンチセンスプライマー、２］を用いることができる。ApaI をBsrGIフラグメントに置き換える為に、XbaI 部位を含有するＰＣＲ産物を、BsrGIおよびApaI で切断し、そしてpACTにクローニングして戻した。得られたプラスミドpACT Hl1 は、ヘキソンのループ１へのＵＴＶ配列の挿入の為のユニークなXbaI 部位を含有している。pACT Hl1 クローン内でのXbaI 部位の存在は、XbaI を用いる制限消化（該プラスミドを線状化するはずである）することによって確認することができる。変異していないヘキソンループ１のアミノ酸配列は、配列ＴＥＡＴＧＮＧＤＮＬ［配列番号８３］を含む。対照的に、pACT Hl1（図２２）では、野生型のＴＥＡ残基につづく、変異したヘキソンループ１のアミノ酸配列は、配列ＴＡＳＲＧＤＮＬ［配列番号４０］（即ち、核酸配列ACCGCATCTAGAGGTGATAACTTG［配列番号３９］によってコードされている）を含む。そしてpACT Hl1のXbaI 部位は、ＲＫＫＫＲＫＫＫ［配列番号７４］のような一般的な標的配列を、例えばオーバーラップオリゴヌクレオチドＲＫ３２ｓおよびＲＫ３２ａを用いてクローニングするために、ユニークな部位として使用することができる。そのような操作から得られた特定のプラスミド、すなわちpACT H 11(RKKK)₂（またはpACT Hl1（RK32）またはpACT Hl1(RKKK2)）を図２３に描写する。このプラスミドは、配列：である。他のＵＴＶまたはＵＴＶ様の配列もまたヘキソン蛋白質のループ１領域内に、および／またはヘキソン蛋白質のループ２領域内にクローニングすることができる。例えば、さらにＵＴＶ配列がクローニングされ得るユニークな制限部位（Xb aI 部位のような）を含むプラスミドpACT Hl2（示さず）を作製するために、ヘキソンループ２をコードする配列を変異をおこさせるために同様のアプローチを用いることができる。また、相補的オーバーラップオリゴヌクレオチドＲＫ３３ｓおよびＲＫ３３ａを用い、そして該ＰＣＲ産物をXbaI 消化したpACT Hl1プラスミドに直接連結させることによって、プラスミドpACT Hl1(RKKK)₃（またはpACT Hl1(RKKK3)または pACT Hl1（RK33）を構築することができる。正確に方向づけられたクローンの確認は、該プラスミド用のＲＫ３２センスプライマーおよび適当な下流のアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーを用いたＰＣＲによって行うことができる。下流のアンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーを用いてインサートの領域内のＤＮＡ配列をシークエンシングすることによって、該プラスミドが正確に方向づけられたインサートを含有していることもまた確認した。類似の導入ベクター、特に類似の導入ベクターpACT Hl1(RKKK)₂およびpACT Hl2(RKKK)₃を構築するために、同様のアプローチを行うことができる。実施例１１この実施例において、短シャフトファイバー蛋白質を有するプラスミドの構築について述べる。特に、この実施例においてプラスミドp193 F5F9sK の構築について述べる。プラスミドp193 F5F9sK（p193 F5F9K-Shortとしても知られている）を図２４に描写する。このベクターは、Ａｄ５ファイバーシャフトのおよそ３分の２を欠失し、そして該Ａｄ５ファイバーノブがＡｄ９ファイバーノブで置換されているキメラファイバー蛋白質をコードする。該プラスミドp193 F5F9K-shortはp193NS(F5^*)から構築された。ファイバー遺伝子由来の最後のシャフト反復およびノブをコードしているＡｄ９配列を増幅するために、オリゴヌクレオチドプライマー、GGACTAGTAG CATTTAATAA AAAAGAAG AT AAGCGC ［配列番号８４］およびCCGGATCCTC ATTCTTGGGC GATATAGG［配列番号８５］を用いた。次いで、通常の技術を用いてＰＣＲ産物を精製し、制限酵素Nh eI およびBamHIで消化してp193NS(F5^*)導入プラスミドのNheI ／BamHI領域へ該ＰＣＲ産物をクローニングした。得られた短シャフトファイバー蛋白質を後述のようにアデノウイルスベクターの構築に用いることができる。さらに、１つ乃至それ以上の任意の上述のＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を短シャフトファイバーに組み込むことができ、そして得られたファイバーを細胞送達(cell delively)に用いることができる。実施例１２この実施例において、それによって細胞への接触および細胞ターゲティングへの寄与をより可能にする伸長したヘキソンおよび／またはペントンベース蛋白質を生じるように、伸長構造内、特にヘキソンおよび／またはペントンベース蛋白質内に、ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を含有するプラスミドの構築について述べる。得られたキメラ蛋白質はセンス内に「折れ線状に」ウイルス表面から突き出るであろう非天然のアミノ酸配列の挿入を包含する。ＲＧＤ配列に従う３２アミノ酸のα−ヘリックスドメインをコードするペントン遺伝子の領域を増幅するために、プライマー１alpha（ｓ）、 GGGCTGCAGGCGGCCGCAGAAGCTGAAGAGGCAGCCACACGGGCTGAGGAGAA ［配列番号８６］および１alpha（ａ）、を使用することができる。この３２アミノ酸配列は配列 ATRAEEDRAEAEAAAEAAAPAAQPEVEKPQKK［配列番号８８］を含む。使用される該プライマーはまた、どちらかの末端に追加のα−ヘリックス配列をコードすることができる、すなわち、例えば最終的に増幅されたＤＮＡ配列は配列：をコードしている。強調されている配列は該プライマーによってコードされている非ペントン配列に対応し、下線を施した配列は、２つの互換性のある制限部位 SfcI およびApaLIによってコードされているアミノ酸を表す。α−ヘリックス構造を予測するために設計された通常のコンピュータープログラムによると、これらのアミノ酸配列もまた、無傷のalpha ヘリックスを保存している。これらのアミノ酸配列をコードしているＰＣＲ産物を、SfcI およびApaLIの両方で切断し、再連結し、そして再び両酵素で切断することができる。類似部位(l ike-site)の類似部位への連結は再切断の為の部位を保存するが、しかしながら、互換性はあるが類似していない部位の連結は該部位を破壊する。従って、連結した産物の再切断時には、ＰＣＲ産物の当初のサイズの倍数である多数のフラグメントがつくられる。完全に再切断されたフラグメント（およそ１５０ｂｐ）、およそ３００ｂｐのフラグメント（１つの制限部位が破壊されている）およびおよそ４５０ｂｐのフラグメント（２つの制限部位が破壊されている）等がある。従って、該方法は、より大きな「折れ線（スパイク）」をつくりあげるべく、大きな、中断されていないα−ヘリックス領域を蛋白質にクローニングするため、あるいは該蛋白質の伸長の為に、５０アミノ酸（１alpha）をコードするもとの配列を２倍（２alpha）、３倍（３alpha）等にする。例えば、プラスミドpSP2alpha（図２６に描写）をつくりあげるために、２alp ha ２倍産物（すなわち2alpha2）をプラスミドpSPdelta（図２５に描写）の最初のPpul0I部位にクローニングすることができる。該プラスミドpSPdeltaは、基本プラスミドpUC19 から、または他の任意の適当なクローニングプラスミドから構築される。ウイルス粒子表面からＵＴＶ配列（あるいは他の任意のターゲティング配列）を持ち上げさせるペントンまたはヘキソン蛋白質のさらなる修飾を行うために、pSPdelta導入プラスミドを用いることができる。折れ線状構造（例えば「タワー」型）内での該ターゲティング配列の持ち上げは、該ファイバー蛋白質による、ペントンおよびヘキソンの細胞表面との相互作用の立体障害を最小にし、そして細胞表面との相互作用の為に該キメラペントンおよびヘキソン蛋白質をより接近させるであろう。該プラスミドpSPdeltaは、ＵＴＶ配列の組み込みのためのユニークなSpeIクローニング部位を含有している。該SpeIクローニング部位は、ＵＴＶ配列をウイルス粒子表面から離れて持ち上げるであろうアミノ酸をコードしているＤＮＡ配列の取り込みをもたらすPpu10I クローニング部位にどちらか一方の側で隣接している。pUC19 のユニークなXbaI 部位に、XbaI 部位に直接挿入するように設計されているオーバーラップオリゴヌクレオチドをクローニングすることによってpS Pdeltaプラスミドを構築した。特に該センスオリゴヌクレオチドは： CTAGAGCAGCTATGCATGAAGGGACTAGTGGAGAGATGCATGCAGCCT［配列番号９１］である。該アンチセンス、相補的オリゴヌクレオチドは： CTAGAGGCTGCATGCATCTCTCCACTAGTCCCTTCATGCATAGCTGCT［配列番号９２］である。該オリゴヌクレオチドを等モルの割合で混合し、ｐＵＣ１９のXbaI 部位にクローニングした。正確なインサートの存在は、インサート領域にわたるシークエンシングによって、およびPpu10I で該プラスミドを切断することによって確認することができる。インサートのどちらか一方の側のXbaI 部位はあとのクローンにおけるこの部分の除去に都合が良い。 pSPdelta内にはPPu10I が２つ存在するので、該プラスミドは只一つの部位が切断される様にPpu10I を用いた消化によって部分的に制限することができる。A PaLIおよびSfcI 部位を含むＰＣＲ産物の互換性のあるPpu10I 部位への連結は、該プラスミド内の最初のPpu10I 部位を破壊するであろうし、また該APaLI およびSfcI 部位をも破壊するであろう。これらの破壊された部位を図２６（pSP2alp ha2プラスミドを示している）に「ｊ」によって表している。そして図２７に描写される、ＵＴＶ配列あるいは他のよく似たターゲティング配列の挿入クローニングのためにSpeI 部位を含有しているプラスミドpSP2alpha2を作るために第２のダブレット産物をpSP2alpha2プラスミドの残っているPpu10I 部位にクローニングすることができる。予想される2alpha2 蛋白質の二次元構造のコンピューター解析は、それがSpeI クローニング部位の領域内であるということを除いては完全なαヘリックスであろうことを明確にしている。つまり、pSPdeltaが配列：を含む一方でpSP2alpha は配列：を含み、そしてpSP2alpha2は配列：を含む。ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列のような標的配列をプラスミドpSP2alpha2のSPeI 部位にクローニングすることができる。特にＲＫ３２ｓおよびＲＫ３２ａオーバーラップオリゴヌクレオチドをpSP2alpha2(RKKK)₂（またはpSP2 alpha2（RK32）またはpSP2alpha2(RKKK2)）をつくりあげるためにSPeI 部位にクローニングすることができる。プラスミドpSP2alpha2(RKKK)₃（またはpSP2alpha2（RK33）またはpSPSalpha2(RKKK3)を同様に構築することができる。別に、pACT 2alpha2(RKKK )₂（pACT 2alpha2(RKKK2)あるいはpACT 2alpha2（RK32）とも呼ばれ得る）をつくりあげるために、XbaI を用いた制限によって該プラスミドから全2alpha２α −ヘリックスドメインを除去し、そしてpACT(ΔRGD)の互換性のあるSPeI 部位にクローニングすることができる。pACT 2alpha2(RKKK)₃（pACT 2alpha2（RKKK3）あるいはpACT 2alpha2（RK33）とも呼ばれ得る）を作製するために同様の技術を用いることができる。同様にして、pACT Hl1 2alpha2(RKKK)₂（pACT Hl1 2alpha2(RKKK2)またはpACT Hl1 2alpha2（RK32）ともよばれ得る）をつくりあげる為に、2alpha2 α−ヘリックスドメインをpACT Hl1のXbaI 部位にクローニングすることによって折れ線状となる(spiked)キメラヘキソン蛋白質（例えばそれらの伸長をもたらす配列を包含している）を構築することができる。pACT Hl2 2alpha2(RKKK)₂（pACT H12 2alpha2(RKKK2)あるいはpACT Hl2 2alpha2（RK32）とも呼ばれ得る）を作製するために同様の技術を用いることができる。実施例１３この実施例において、ＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列をアデノウイルスファイバー蛋白質内に含むすでに記載されているものにに加え、さらなるアデノウイルスベクターの構築について述べる。ファイバー内にＵＴＶ修飾を有するアデノウイルスベクターの構築は、当業者により多くの方法で遂行されている。上述のプラスミドからＵＴＶファイバーベクターを創製する方法の一つは、まずプラスミドＤＮＡをSalI で線状化し、ついでこのＤＮＡを、トランスフェクションの前にＥ４欠失アデノウイルスで感染させた２９３パッケージング細胞株にトランスフェクトすることである。Ｅ４を欠失したアデノウイルスベクターは、２９３細胞株のような細胞株内で複製することは不可能であり、トランスにアデノウイルスＥ１領域を供給するだけである。修飾ファイバー遺伝子およびＥ４領域を含む該プラスミドのＥ４欠失したＤＮＡとの組換えは、複製反応能のある(replication-competent)、修飾ファイバー遺伝子を担持するＥ４を有するベクターを生じる。従って、プラスミドp193NS（F5^*）pGS（K7）、pBSS 75-100 pGS(null)、pBSS 75-100 pGS(RKKK)₂、pBSS 75-100 pGS(RKKK)₃、pBSS 75-100 pGS（tat）、p193N S F5F2K（RK32）、およびp193NS F5F9sK をそれぞれSalI で線状化し、Ｅ４を欠失したアデノウイルスベクター、GV11A.Z（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターの制御下にＬａｃＺ遺伝子を担持している）もしくはGV11A.S（ＣＭＶプロモーターの制御下に分泌アルカリホスファターゼ遺伝子を担持している）のいずれかで１時間前に感染させた２９３細胞にトランスフェクトした。結果として生じるアデノウイルスベクターAdZ.F(pK7)、AdZ.F(pGS)、AdZ.F(RKKK)₂(AdZ .F(RKKK2)あるいはAdZ.F(RK32)としても知られる）、AdZ.F(RKKK)₃(AdZ.F(RKKK3 )あるいはAdZ.F(RK33)としても知られる）、AdZ.F(tat)、AdZ.F5F2K(RKKK)₂（Ad Z.F5F2K(RKKK2)あるいはAdZ.F(RK32)としても知られる）、およびAdZ.F5F9sK（A dZ.F5F9sK-Shortとしても知られている）を得、２９３細胞上での連続してプラーキング(plaquing)を２回行い精製した。インサート領域にわたるＰＣＲによって、またＨｉｒｔ抽出によってベクターで感染させた２９３細胞から得られたウイルスＤＮＡの制限解析(restriction a nalysis)によって、全てのベクターが正確な配列を含んでいることを確認した。また、要求されれば蛋白質のサイズを調べるためにウエスタン解析（前述）を行うこともできる。ポリアクリルアミドゲルで電気泳動したベクター粒子および／またはベクターで感染させた細胞のライセート由来のファイバー蛋白質のウエスタン解析は、非修飾のファイバー蛋白質に比べ、そのファイバー蛋白質の移動度において付加されているアミノ酸の存在と矛盾のない対応するシフトを示した。例えば、AdZ.F(pK7)粒子のウエスタン解析は、そのファイバー蛋白質がAdZ.F(pK 7)ファイバー蛋白質に付加されたアミノ酸の存在と矛盾なく、非修飾のファイバーを含んでなるＡｄＺベクターのものに比べて上にシフトしていることを確認した。上に概略したのと同じ方法（あるいは僅かに変えた方法）を用いて、ここで同様に地図が描写されている他のプラスミドをアデノウイルスベクターにすることができる。実施例１４この実施例において、ＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列をアデノウイルスペントンベース蛋白質内に含んでいるアデノウイルスベクターの構築について述べる。キメラペントンベース蛋白質を含むアデノウイルスベクターを作る方法は、例えばWickham ら，J ．Virol.，70，6831-6838(1996)に記載されている。上に記載の、キメラペントンベース蛋白質を含有するｐＡＣＴベクター（例えば導入プラスミドpACT 2alpha2(RKKK)₂、pACT Hl2 2alpha2(RKKK)₂およびpACT(ΔRGD)）が、該プラスミドを線状化するために例えばBamHIで消化され得る。Ａｄ５ゲノム内の１４５６１および１５７１０の位置で野生型Ａｄ５を切断する制限エンドヌクレアーゼXmnI でＡｄ５ＤＮＡが消化され得る。２つの大きなフラグメントをより小さな１ｋｂ片からわけて精製し、ついで該線状化プラスミドと一緒に適当な細胞株（例えば２９３細胞株）にトランスフェクトして、組換えウイルスを生産する。このやり方で生産されたアデノウイルスベクターを、潜在的に混入している修飾されていないベクターから、２９３細胞上でのプラーク精製を連続して２回行って精製する。ついで得られたベクターがペントンベース領域に正確な配列を含んでいることを、つづくベクターで感染させた２９３細胞のＨｉｒｔ抽出によって得られるウイルスＤＮＡの制限解析によって確認する。インサートの存在を確認するために、ウイルスＤＮＡ由来のインサート領域を増幅することによって調製されるＰＣＲ産物のシークエンシングを用いることもできる。ポリアクリルアミドゲルで電気泳動したキメラペントンベースのウエスタン解析は、修飾されていないペントンベースに比べ、ペントンベースの移動度においてキメラ蛋白質に付加されたアミノ酸の存在に矛盾のない対応するシフトを示すはずである。実施例１５この実施例において、ＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列をヘキソン蛋白質内に含むアデノウイルスベクターの構築について述べる。ウイルスAdZ.H(RKKK)₂を構築するために、オーバーラップし、そして完全なAd Z.H(RK32)を創製すべくPmeI-BamHI pACT Hl1(RK32)配列のどちらか一方の側で組換えがおこるであろうＤＮＡ配列を含むレフトおよびライトのベクターアームを調製する。レフトアームを構築するために、精製Ａｄ５ＤＮＡを、１４４９９、１５２８３、１９０１７、２３０６３、２３６５６、２３４１１、および３１１０２の位置でＡｄ５を切断するAgeI で制限消化する。そして０−１４４９９フラグメントをレフトアームとして用い、ゲル電気泳動によって他のフラグメントから精製することができる。DrdI でＡｄ５ＤＮＡを消化することによってライトアームを調製することができる。DrdI はＡｄ５を５４５８、７０３９、１４００４、１５５９３、１７２５７、および２１０２３の位置で切断する。そして２１０２３−３５９３８ｂｐフラグメントをライトアームとして用い、ゲル電気泳動によって残りのフラグメントから精製することができる。ついでこれら２つのフラグメントをpACT Hl1(RK32)由来のPmeI/BamHIフラグメントとともに２９３細胞ヘトランスフェクトする。PmeI はＡｄ５の１３２５８の位置で切断し、BomHIはＡｄ５の２１５６２の位置で切断する。AdZ.H(RKKK)₃をつくるために同様の技術を用いることができる。実施例１６この実施例において、短シャフトファイバー蛋白質を含むベクターの構築について述べる。導入プラスミドp193 F5F9Kshort 由来のアデノウイルスの構築のためにここで記載した方法は、他の短シャフトファイバー由来の他のアデノウイルスベクターの構築のために用いることができる。すなわち、アデノウイルスの不可欠なＥ４領域を含有している導入プラスミドp193 F5F9Kshort をSalI で切断し、そしてアデノウイルスベクターAdSE.E4Gusで１時間前もって感染させた２９３細胞にトランスフェクトした。AdSE.E4GusはアデノウイルスゲノムのＥ４領域を欠いており、Ｅ４遺伝子の相補性がないときには、２９３細胞内で複製することができない。つまり、Ｅ４遺伝子を得るべくAdSE.E4GusＤＮＡがp193 F5F9Kshort プラスミドＤＮＡと組換えを起こす時にのみ、該ベクターは２９３細胞内で複製することができる。この組換え現象の際に、新しく作られたベクターもまた、該プラスミドによってコードされている変異ファイバー蛋白質コード配列を獲得する。ついで、F5F9Kshortファイバーキメラを含有する生存可能な組換え体Ｅ４⁺アデノウイルスを、トランスフェクション５日後のトランスフェクトされた細胞のライセートをプラーキングすることによって単離した。得られたベクターAdSE.F5F9K short を、２９３細胞上での連続した２回のプラーキングを含む通常のウイルス学的な技術を用いて単離、精製した。該ベクターが正確なインサートを含有していることを、ウイルスＤＮＡのＰＣＲおよび制限解析によって確認した。ファイバー遺伝子のどちらか一方の側で複製のもととなる(prime)オリゴヌクレオチドプライマーは、該ＰＣＲ産物が短くなったキメラファイバー遺伝子によってコードされている正確なサイズのものであることを確認した。該ベクターＤＮＡの制限解析は新しいベクターが、Ａｄ９ファイバーノブに対してユニークな正確な制限部位を含有していることを示した。実施例１７この実施例において、短シャフトファイバー蛋白質およびＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を組み込んでいるキメラペントンベース蛋白質を含むアデノウイルスベクターの構築について述べる。この構築のために、上述のようにAds.F9sKウイルスＤＮＡをXmnI で消化することができる。ついでプラスミドpACT Hl1(RK32)を制限酵素PmeI およびBamI で切断する。該制限消化されたウイルスおよびプラスミドＤＮＡを精製し、２９３細胞へトランスフェクトする。得られたベクターを２９３細胞上でプラーク精製を２回連続して行うことによって単離し、Ｈｉｒｔ抽出によってベクター感染させた２９３細胞から得られたウイルスＤＮＡの制限解析によってペントンベース領域内に正確なインサートを含有していることを確認する。ウイルスＤＮＡ由来のインサート領域の増幅により調製されるＰＣＲ産物のシークエンシングもまたインサートの存在を確認するために使用され得る。ポリアクリルアミドゲル上でのキメラペントンベースのウエスタン解析は、修飾されていないペントンベースに比べ、キメラペントンベースの移動度において付加された非天然のアミノ酸配列の存在（および天然のアミノ酸の不在）に矛盾無く対応するシフトを示すはずである。上に概略した方法と同じ、あるいは僅かに変えた方法を利用することによって、ここにその地図を表している、アデノウイルスベクターにしなかった他のプラスミドを作ることができる。特に、短シャフトファイバー蛋白質を、さらに必要に応じてＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列を組み込むことができる「折れ線状の」キメラペントンベース蛋白質をもつアデノウイルスに組み込むことができる。実施例１８この実施例において、短シャフトファイバー蛋白質およびＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を組み込んでいるキメラヘキソン蛋白質を含むアデノウイルスベクターの構築について述べる。ＵＴＶを含有するキメラヘキソン蛋白質を含むベクターを作るためにウイルスＤＮＡをAdZ.F9sKのようなシャフトの短いベクターから単離し、上述の制限酵素で切断することができる。他の全ての工程は、例えば実施例１７に記載されているのと同じである。得られたベクターは、短シャフトファイバー蛋白質とＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を組み込んでいるキメラヘキソン蛋白質を含有しているはずである。さらにこのアプローチを異なるキメラヘキソン蛋白質を含む導入プラスミドの変種を用いて行うことができる。特に短シャフトファイバー蛋白質を、さらに必要に応じてＵＴＶあるいはＵＴＶ様配列を組み込むことができる「折れ線状の」キメラヘキソン蛋白質をもつアデノウイルスに組み込むことができる。実施例１９この実施例において、ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を含む本発明のベクター、特にアデノウイルスベクターの評価について述べる。例えば、ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列の付加がウイルスのアッセンブリに影響を及ぼさないことを確認する為に、ベクターのウイルス増殖動力学(kinetics)を調べることができる。プラスミドを含有するＵＴＶ配列の典型として、pAd.F(pK7) の増殖の様子をモニタリングし、配列ＳＡＣＤＣＲＧＤＣＦＣＧＴＳ［配列番号９３］に存在するＲＧＤペプチドモチーフの挿入を含有している野生型のアデノウイルス（Ａｄ５）およびアデノウイルスベクターAdZ.F(RGD)の増殖の様子と比較した。これらの検討のために、２９３細胞に、５活性ウイルス粒子／細胞の感染多重度でAdZ.F(RGD)あるいはpAd.F(pK7)のどちらかを感染させ、細胞あたり生産された感染性粒子の数（蛍光フォーカス単位(fluorescent focus units)（ＦＦＵ））を、感染１、２、および３日後に細胞の回収につづいて測定した。AdZ. F(RGD)あるいはAdZ.F(pK7)の力価は幾分低かったが、Ａｄ５の力価と劇的に異なるということはなかった。図２８に見ることができるように、AdZ.F(RGD)および AdZ.F(pK7)のピークの力価は、それぞれＡｄ５のピークの力価の８６％および５６％であった。これらの結果は、２つのベクターの増殖動力学が実質的に配列、特にＵＴＶまたはＵＴＶ様配列のファイバー蛋白質末端への付加によって影響されないことを明確にしている。該結果はまた、ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を含んでいるさらなるベクターが常軌を逸した増殖動態は示さないであろうことも示唆している。さらに、負に荷電した分子（例えばヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸等）、可溶性のアデノウイルスコート蛋白質によって、あるいはそのような負に荷電した部分を切断する試薬（コンドロイチナーゼ、ヘパリナーゼ、シアリダーゼ等）で細胞を前処理することによって阻害されるはずの、それらの細胞への結合あるいは遺伝子の送達の能力についてＵＴＶまたはＵＴＶ様配列を含んでいるベクターを評価することができる（例えばWickham ら，Nature Biotechnolo gy ，14，1570-1573(1996)および上記の実施例参照）。可溶性のファイバー蛋白質はＵＴＶベクターの細胞への結合の大部分を阻害することはないであろう（Wi ckham ら，(1996)、上述）。これらの結果は、ＵＴＶまたはＵＴＶ様配列のペントン、ヘキソンあるいはファイバーへの組み込みが、キメラコート蛋白質を含む組変えアデノウイルスの遺伝子導入をもたらすための能力を減ずるものではないであろうことを示唆している。また、本発明のＵＴＶベクターが、組換えアデノウイルス上のポリカチオンの血液中のポリアニオンでの飽和による全身送達(systemic delivery)に限定されるものではないことを確認するために、インビボでの感染あるいは全血の存在下で行われるインビトロでのトランスフェクションの検討を行うことができる。そのような結合が粒子性ウイルスの標的細胞導入のための能力を妨げるという場合には、該ウイルスを高用量で、好ましくはそのような高用量に伴ういかなる免疫応答も減ずることができるように分割して投与することができる（例えば、アデノウイルスベクターの別の血清型の投与、あるいはＰＣＴ国際出願WO96/12406に記載の技術；Mastrangeli ら，Human Gene Therapy，7，79-87(1996)）。ここに挙げた特許、特許出願、および刊行物を含むすべての引例は、各個々の引例がここに完全に明らかにされたと同程度に、言及することによってそっくりそのままそれにより組み入れられるものである。本発明を、好ましい実施態様を強調して説明してきたが、当業者には好ましい実施態様が変更され得ること、本発明がここで具体的に記載された以外によっても実施され得ることが自明であろう。本発明は、そのようなバリエーションや別の方法を包含することを意図している。従って、本発明は添付の請求の範囲によって定義される該発明の精神と範囲に包含されるすべての変形を含むものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１２月１９日【補正内容】請求の範囲：１．コート蛋白質の内部配列中に、またはそれに代えて挿入される非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、野生型アデノウイルスコート蛋白質よりも広い範囲の真核細胞に効率よく結合し、且つ特定のタイプの真核細胞に選択的ではない、該キメラアデノウイルスコート蛋白質。２．コート蛋白質の内部配列中に、またはそれに代えて挿入される非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、上皮細胞、平滑筋細胞、内皮細胞、線維芽細胞、グリオブラストーマ細胞および単球細胞に効率よく結合する、該キメラアデノウイルスコート蛋白質。３．コート蛋白質の内部配列中に、またはそれに代えて挿入される非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、大多数の真核細胞に効率よく結合する、該キメラアデノウイルスコート蛋白質。４．非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、野生型の血清型５ファイバー蛋白質よりも効率よく、ＨＡＳＭＣ細胞、ＨｕＶｅｃ細胞、ＣＰＡＥ細胞、ＨＳ６８細胞、ＭＲＣ−５細胞、Ｕ１１８細胞およびＴＨＰ−１細胞に結合する、該キメラアデノウイルスコート蛋白質。５．該キメラアデノウイルスコート蛋白質が実質的にすべての真核細胞に効率よく結合するものである、請求の範囲１〜４のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。６．非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、大多数の真核細胞の表面に存在する部分に効率よく結合する、該キメラアデノウイルスコート蛋白質。７．該部分が負に荷電した部分である、請求の範囲５のキメラアデノウイルスコート蛋白質。８．ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、シアル酸、ケラチン硫酸およびコンドロイチン硫酸からなる群より選択される少なくとも１つの細胞表面部分に結合する、請求の範囲６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。９．該部分がヘパリン硫酸である、請求の範囲６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１０．該部分が実質的にすべての真核細胞上に存在する、請求の範囲６または７のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１１．該非天然アミノ酸配列が３または４以上の正に荷電したアミノ酸残基を含む、請求の範囲１〜１０のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１２．該非天然アミノ酸配列が該蛋白質の露出したループ中にある、請求の範囲１〜１１のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１３．天然アミノ酸配列および３〜約３０アミノ酸残基を有するカルボキシル末端非天然アミノ酸配列を含む、請求の範囲１〜１２のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１４．該天然アミノ酸配列が少なくとも１つのアミノ酸の欠失を含む、請求の範囲１３のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１５．該非天然アミノ酸配列がスペーサー配列を含む、請求の範囲１〜１４のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１６．該非天然アミノ酸配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号９０および配列番号９３からなる群より選択される配列を含む、請求の範囲１〜１５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１７．該非天然アミノ酸配列が配列番号４または配列番号５を含み、且つ約３〜約３０のリジン残基を含む、請求の範囲１６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１８．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がファイバー蛋白質である、請求の範囲１〜１７のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１９．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がヘキソンまたはペントン蛋白質である、請求の範囲１〜１８のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。２０．請求の範囲１〜１９のいずれかのコート蛋白質を含むベクター。２１．該ベクターが非エンベロープ型ウイルスからなる群より選択されるウイルスベクターである、請求の範囲２０のベクター。２２．該ベクターがアデノウイルスベクターである、請求の範囲２１のベクター。２３．該ベクターがパッセンジャー遺伝子をさらに含むものである、請求の範囲２０〜２２のいずれかのベクター。２４．請求の範囲２０〜２３のいずれかのベクターを含む宿主細胞。２５．細胞に請求の範囲１９〜２２のいずれかのベクターを接触させることを含む、該細胞を遺伝的に修飾する方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:92） (31)優先権主張番号０８／７０１，１２４ (32)優先日 1996年８月21日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ブロー、ダグラスイー. アメリカ合衆国、メリーランド州 20832、オルネイ、シャロウブルックレーン、 3900

Claims

【特許請求の範囲】１．非天然アミノ酸配列を含むキメラアデノウイルスコート蛋白質であって、該キメラアデノウイルス蛋白質ではなく野生型アデノウイルスコート蛋白質を含むこと以外は同一であるベクターの細胞への進入よりも効率のよい、該キメラアデノウイルスコート蛋白質を含むベクターの細胞への進入を指示し得る該キメラアデノウイルスコート蛋白質。２．該キメラアデノウイルスコート蛋白質が細胞表面上に存在する新規結合部位に結合するものである、請求の範囲１のキメラアデノウイルスコート蛋白質。３．該非天然アミノ酸配列がコート蛋白質の内部配列中に、またはそれに代えて挿入される、請求の範囲１または２のキメラアデノウイルスコート蛋白質。４．該非天然アミノ酸配列が該蛋白質のＣ末端またはその近傍にある、請求の範囲１または２のキメラアデノウイルスコート蛋白質。５．該非天然アミノ酸配列が該蛋白質の露出したループ中にある、請求の範囲１または２のキメラアデノウイルスコート蛋白質。６．該非天然アミノ酸配列が、約３〜約４００アミノ酸のスペーサー配列によって該蛋白質に結合するＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列を含む、請求の範囲１〜５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。７．該スペーサー配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号９０および配列番号９３からなる群より選択される、請求の範囲６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。８．該ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列が約３〜約３０アミノ酸を含む、請求の範囲６または７のキメラアデノウイルスコート蛋白質。９．該ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列が、リジン、アルギニンおよびヒスチジンからなる群より選択されるアミノ酸を含む、請求の範囲６〜８のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１０．該ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸を含む、請求の範囲６〜８のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１１．該ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号９０および配列番号９３からなる群より選択される、請求の範囲６〜８のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質（ここで、該配列はＣ末端で１，２，３，４または５残基を欠失していてもよい）。１２．該ＵＴＶもしくはＵＴＶ様配列が、配列番号４および配列番号５からなる群より選択される、請求の範囲６〜８のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質（ここでポリリジン列の長さは約３〜約３０残基まで変動し得る）。１３．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がファイバー蛋白質である、請求の範囲１〜１２のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１４．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がペントンベース蛋白質である、請求の範囲１〜１２のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１５．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がヘキソン蛋白質である、請求の範囲１〜１２のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質。１６．請求の範囲１〜１５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質をコードする単離精製された核酸であって、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４７、配列番号７２、配列番号７５、配列番号７７および配列番号８９からなる群より選択される配列を含むものである該核酸。１７．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がファイバー蛋白質である、請求の範囲１６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１８．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がペントンベース蛋白質である、請求の範囲１６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。１９．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がヘキソン蛋白質である、請求の範囲１６のキメラアデノウイルスコート蛋白質。２０．請求の範囲１〜１５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質を含むベクター。２１．該ベクターが非エンベロープ型ウイルスからなる群より選択されるウイルスベクターである、請求の範囲２０のベクター。２２．該ベクターがアデノウイルスベクターである、請求の範囲２０のベクター。２３．該ベクターがパッセンジャー遺伝子を含む核酸をさらに含有するものである、請求の範囲２０〜２２のいずれかのベクター。２４．該核酸がアデノウイルスゲノム中に挿入される、請求の範囲２３のベクター。２５．該核酸が、蛋白質／ＤＮＡ相互作用によって該キメラアデノウイルスコート蛋白質に接着する、請求の範囲２３のベクター。２６．GV10 UTV，AdZ.H(RKKK)₂，AdZ.H(RKKK)₃，AdZ.F(RKKK)₂，AdZ.F(RKKK)₃， AdZ.F(pK7)，AdZ.F(pGS)，AdZ.F(tat)，AdZ.F52K(RKKK)₂およびAdZ.F52K(RKKK)₃ からなる群より選択されるベクター。２７．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がファイバー蛋白質である、請求の範囲２０〜２５のいずれかのベクター。２８．該キメラアデノウイルスコート蛋白質がペントンベースまたはヘキソン蛋白質である、請求の範囲２０〜２５のいずれかのベクター。２９．該ベクターが野生型ファイバー蛋白質を含まないものである、請求の範囲２８のベクター。３０．該ベクターが短シャフトファイバー蛋白質を含むものである、請求の範囲２８のベクター。３１．請求の範囲１〜１５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質をコードする導入ベクター。３２．該導入ベクターが非エンベロープ型ウイルスからなる群より選択されるものである、請求の範囲３１の導入ベクター。３３．該導入ベクターがアデノウイルスベクターである、請求の範囲３１の導入ベクター。３４．該導入ベクターが、パッセンジャー遺伝子をコードする核酸をさらに含むものである請求の範囲３１〜３３のいずれかのベクター。３５．p193(F5^*)，pAd BS 59-100 UTV，p193NS（F5）pGS(pK7)，p193NS（F5）pG S(null)，pBSS 75-100 pGS(null)，pBSS 75-100 pGS(RK32)，pBSS 75-100 pGS(R K33)，pBSS 75-100 pGS(tat)，p193 F5F2K，p193 F5F2K(RKKK)₂，p193 F5F2K(RK KK)₃，pACT(RKKK)₃，pACT(RKKK)₂，pACT Hl1，pACT Hl1(RKKK)₂，pACT H11(RKKK )₃，pACT Hl2，pACT Hl2(RKKK)₂，pACT Hl2(RKKK)₃，pSP2alpha，pSP2alpha2，p SP2alpha2(RKKK)₂，pSP2alpha2(RKKK)₃，pACT2alpha2(RKKK)₂，pACT 2alpha2(RKKK)₃，pACT Hl1 2alpha2(RKKK)₂，pACT Hl1 2alpha2(RKKK)₃,pACTHl2 2alpha2(RKKK)₂およびpACT Hl2 2alpha2(RKKK)₃からなる群より選択される導入ベクター。３６．該コート蛋白質がファイバー蛋白質である、請求の範囲３１〜３４のいずれかの導入ベクター。３７．該コート蛋白質がペントンベースまたはヘキソン蛋白質である、請求の範囲３１〜３４のいずれかの導入ベクター。３８．コート蛋白質を含むベクターの細胞への進入効率を増大させる方法であって、該ベクターのコート蛋白質を請求の範囲１〜１５のいずれかのキメラアデノウイルスコート蛋白質で置換することを含む方法。３９．請求の範囲２０〜３７のいずれかのベクターを細胞に接触させることを含む、細胞を遺伝的に修飾する方法。４０．細胞を遺伝的に修飾する方法であって、 (a) 請求の範囲１〜１５のいずれかのコート蛋白質を含むベクターを取得すること、 (b) 該ベクターにパッセンジャー遺伝子をコードする核酸を、該キメラ蛋白質と該核酸が蛋白質／ＤＮＡ相互作用により結合するように接触させること、および (c) 結合した核酸を含む該ベクターを、該細胞に接触させることを含む方法。４１．請求の範囲２０〜３７のいずれかのベクターを含む宿主細胞。４２．請求の範囲１のキメラアデノウイルスコート蛋白質の製造方法であって、スペーサー配列を、あらゆる終止コドンまたはポリアデニル化シグナルの前に該キメラアデノウイルスコート蛋白質のコード配列に導入することを含む方法。４３．該スペーサー配列が配列番号６または保存的に改変されたその変種の配列を含む、請求の範囲４２の方法。４４．ベクターGV10 UTVの製造方法であって、いかなるＥ４相補配列も含まない細胞に、(a)キメラファイバーおよび野生型Ｅ４遺伝子を含む直鎖状ベクター、および(b)Ｅ４^-である直鎖状ベクターを供給することを含む方法。