JPH114684A - 新規β−ホスホグルコムターゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 至適ｐＨが中性近辺にあり、かつ熱安定性の
優れた新規なβ−ホスホグルコムターゼの提供。 【解決手段】ラクトコッカス・ラクチス・サブエスピー
・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)
（ＩＦＯ3427）を培地に培養し、培養物からβ−ホスホ
グルコムターゼを採取する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、β−Ｄ−グルコース−
１−リン酸をβ−Ｄ−グルコース−６−リン酸に変換す
る反応を触媒する新規β−ホスホグルコムターゼに関す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】β−ホスホグルコムターゼ（以下、β−
ＰＧＭという）は、例えばマルトペンタオースを基質と
し、マルトース・ホスホリラーゼ、β−ＰＧＭおよびグ
ルコース−６−リン酸・デヒドロゲナーゼを共役酵素と
して用いるα−アミラーゼ活性測定用試薬（生物試料分
析、第9巻、第21〜29頁、1986年）、マルトース、マル
トースホスホリラーゼ、β−ＰＧＭおよびグルコース−
６−リン酸・デヒドロゲナーゼを主成分とする無機リン
酸塩分析用試薬（特公昭58-5676）などに用いられてお
り、また、β−アミラーゼ測定用試薬などの一共役酵素
として使用されている（米国特許4,097,336）。

【０００３】このようなβ−ＰＧＭは、各種微生物の培
養によって製造されており、例えばユーグレナ・グラ
シリス(Euglena gracilis)から得たもの［ユーロピアン
・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー(European Jo
urnal of Biochemistry)、第46巻、第631〜637頁、1974
年］（公知酵素Ａ）、ラクトバチルス・ブレビス(Lac
tobacillus brevis)から得たもの［アーカイブス・オブ
・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス(A
rchives of Biochemistry and Biophysics)、第228巻、
第592〜599頁、1984年］（公知酵素Ｂ）、ラクトコッ
カス・ラクチス・サブエスピー・ラクチス(Lactococcus
lactis subsp. lactis)から得たもの［ジャーナル・オ
ブ・バクテリオロジー(Journal of Bacteriology)、第1
76巻、第5304〜5311頁、1994年］（公知酵素Ｃ）などが
知られている。また、特公昭60-54036号公報には、酵素
の性質についての具体的記載はないものの、ラクトバチ
ルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)ＤＳＭ20054、
ＮＣＩＢ8836、8561、8562、ラクトバチルス・プランタ
ルム(Lactobacillus plantarum)ＤＳＭ20174、微工研菌
寄第4628号、ラクトバチルス・レウテリ(Lactobacillus
reuteri)ＤＳＭ20016、ラクトバチルス・フェルメンテ
ュム(Lactobacillus fermentum)ＤＳＭ20052、ストレプ
トコックス spec.(Streptococcus spec.)微工研菌寄第4
624号、微工研菌寄第4625号、微工研菌寄第4626号、微
工研菌寄第4627号が当該酵素を製出するという記載があ
る。しかしながら、これら従来公知のβ−ＰＧＭは、至
適ｐＨ及び熱安定性の点で難点がある。

【０００４】例えば臨床検査などでは、酵素類を含む測
定試薬を用い自動分析法などによって中性近辺でしかも
３７℃で測定されるのが通例となっており、このためβ
−ＰＧＭを使用する場合においても、該酵素には熱安定
性や中性付近の至適ｐＨが要求されており、従来公知の
上記酵素では、反応性を保持するために、いきおい酵素
の使用量が多くせざるを得ないという欠点を有してい
る。更に、最近では、液状試薬の普及に伴い熱安定性の
優れた、長期保存にも耐え得るβ−ＰＧＭが要望されて
いる。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、至適ｐＨが
中性近辺にあり、かつ熱安定性の優れたβ−ＰＧＭを提
供することを課題とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、財団法人発酵
研究所の保存菌ラクトコッカス・ラクチス・サブエスピ
ー・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)
（ＩＦＯ3427）を培養することにより、目的とするβ−
ＰＧＭを提供することができるということを見出し本発
明を完成した。以下、本発明について詳細に説明する。

【０００７】本発明のβ−ＰＧＭ（以下、本酵素とい
う）の理化学的性質は下記のとおりである。 （１）作用：β−Ｄ−グルコース−１−リン酸をβ−Ｄ
−グルコース−６−リン酸に変換する。 （２）基質特異性：β−Ｄ−グルコース−１−リン酸に
特異的に作用し、α−Ｄ−グルコース−１−リン酸には
作用しない。 （３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲：至適ｐＨは、５０ｍ
Ｍ 酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４.０〜５.
５）、 ５０ｍＭ メス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ５.５
〜７.０）、５０ｍＭ ヘペス−水酸化ナトリウム緩衝
液（ｐＨ７.０〜８.０）、５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝
液（ｐＨ８.０〜９.５）および５０ｍＭ キャプス−水
酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９.５〜１０.０）を用い、
各ｐＨにおける本酵素の活性測定を行って求めた（後記
の測定法を使用）。その結果は図１に示すとおりであ
り、本酵素の至適ｐＨは６.８〜７.３、特にｐＨ７.０
近辺である。また、安定ｐＨ範囲は、５０ｍＭ 酢酸−
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．５〜５.５）、５０ｍ
Ｍ メス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ５.５〜７.
０）、５０ｍＭ ヘペス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７.０〜８.０）、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
８.０〜９.５）、及び５０ｍＭ キャプス−水酸化ナト
リウム緩衝液（ｐＨ９.５〜１１.０）を用い、ｐＨ３.
５〜１１.０において、３０℃で３０分間それぞれ処理
した後、本酵素の残存活性を測定して求めた（後記の測
定法を使用）。その結果は図２に示すとおりであり、本
酵素の安定ｐＨ範囲は５.０〜９.５である。

【０００８】（４）作用適温の範囲：後記力価の測定法
におけると同一の基質・酵素混合液を用い、種々の温度
（２５℃〜６０℃）にて本酵素の活性測定を行った。そ
の結果は、図３に示すとおりであり、本酵素の作用適温
の範囲は３５℃〜４２℃である。 （５）力価の測定方法：酵素の力価の測定は下記の方法
で行った。なお、１分間に１μｍｏｌのβ−Ｄ−グルコ
ース−１−リン酸をβ−Ｄ−グルコース−６−リン酸に
変換する酵素量を１単位（Ｕ）とする。 試薬の調製 ２０ｍＭ ＫＣｌ、２．０ｍＭ ＭｇＣｌ₂、０．８％
（Ｗ／Ｖ） トリトンＸ−１００、０．３ｍＭ Ｄ−グ
ルコース−１，６−二リン酸、２．２ｍＭ β−Ｄ−グ
ルコース−１−リン酸、１．２ｍＭ ＮＡＤＰ、グルコ
ース−６−リン酸・デヒドロゲナーゼ（１２Ｕ／ｍｌ）
を含有する２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を調製
する。 活性測定 上記試薬３．０ｍｌを３７℃で約５分間予備加温し、次
に適宜に希釈した酵素液０．０３ｍｌを加えて反応を開
始し、３７℃で反応開始１分後からの１分間における34
0ｎｍの吸光度変化量を測定する。なお、対照は、上記
の操作中本酵素液０．０３ｍｌの代わりに精製水を添加
する以外は、すべて同一操作により測定したものであ
る。次に、反応１〜２分間における１分間当りの酵素反
応液と対照との吸光度増加量の差より本酵素活性を測定
する。

【０００９】（６）ｐＨ、温度などによる失活の条件：
本酵素は、３０℃、３０分間の処理では、ｐＨ５.０〜
９.５で安定であり、図２からわかるように、それより
酸性側またはアルカリ側では徐々に失活する。また、２
ｍＭ ＥＤＴＡを含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
７.０）を用いて、各温度で１５分間処理した場合の本
酵素の熱安定性を調べた。その結果は、図４に示すとお
りであり、本酵素は５０℃程度まで安定であり、６０℃
で４０％以上の活性が残存する。

【００１０】（７）金属イオンおよび補酵素の影響：上
記力価の測定法におけると同一の基質・酵素混合液で、
金属イオンを除いた場合、Ｍｇ²⁺イオン、Ｍｎ²⁺イオ
ン、Ｃｏ²⁺イオンあるいはＮｉ²⁺イオンを添加した場
合、およびＤ−グルコース−１，６−二リン酸を除いた
場合あるいは添加した場合について、各々本酵素の活性
測定を行った。その結果、金属イオンあるいはＤ−グル
コース−１，６−二リン酸を除いた場合には、本酵素の
活性はほとんど発現されない。Ｍｇ²⁺イオン、Ｍｎ²⁺イ
オン、Ｃｏ²⁺イオンあるいはＮｉ²⁺イオンを添加した場
合、およびＤ−グルコース−１，６−二リン酸を添加し
た場合に本酵素反応が活性化される。 （８）阻害および安定化：上記力価の測定法におけると
同一の基質・酵素混合液に、表１に示す種々の金属塩
（各々１ｍＭの濃度）を添加して酵素活性を測定し、そ
の影響を調べた。その結果は、表１に示すとおりであ
り、本酵素は、Ｚｎ²⁺イオン、Ｃｕ²⁺イオンおよびＨｇ
²⁺イオンにより強く阻害され、またＣａ²⁺イオンおよび
Ｆｅ²⁺イオンによっても阻害されるが、安定化に寄与す
る金属塩は見当たらない。

【００１１】

【表１】 （９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳
動法で測定した分子量は約25,000である。 （１０）精製方法：本酵素の単離、精製は常法に従って
行うことができ、例えば硫安塩析法、有機溶媒沈殿法、
イオン交換体などによる吸着処理法、イオン交換クロマ
トグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルろ過クロ
マトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー、電気泳動法などが単独または
適宜組み合わせて用いられる。 （１１）Ｋｍ値：ラインウエーバー・バークのプロット
から、β−Ｄ−グルコース−１−リン酸に対するＫｍ値
は、約０.２３ｍＭである。 （１２）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動：ア
クリルアミド４〜２０％（Ｗ／Ｖ）の濃度勾配を有する
ポリアクリルアミドゲルを用い、常法によりＳＤＳ−ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動（以下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ということがある）を行った結果、図５に示すごとく本
酵素の単一なバンドが認められた。４０ｍＡ、６０分間
通電後の相対移動度（Ｒｆ）は、０.６５である。

【００１２】本酵素の主要な理化学的性質は前記のとお
りであるが、本酵素は特にその至適ｐＨ、熱安定性など
において従来知られているβ−ＰＧＭ（項番号０００３
記載の公知酵素Ａ〜Ｃ）とは異なる性質を有する新規な
β−ＰＧＭということができる。本酵素とこれらの公知
酵素との主要な理化学的性質の比較を表２に示す。

【００１３】

【表２】

【００１４】次に、本酵素の製造法について説明する。
まず、使用される微生物は、ラクトコッカス・ラクチス
・サブエスピー・クレモリス(Lactococcus lactis subs
p. cremoris)（ＩＦＯ3427）であって、該菌株の変種又
は変異株も用いられる。

【００１５】なお、本発明における新規β−ＰＧＭとし
ては、前記した作用、基質特異性、至適ｐＨ、安定ｐＨ
範囲、作用適温、熱安定性などの主要な理化学的性質を
有するものであればよく、その他の理化学的性質が多少
の相違を示すものであっても、本発明の酵素として包含
される。

【００１６】次に、上記微生物を用いて本酵素を製造す
るためには、通常の固体培養法でもよいが、液体培養法
が好ましい。そしてその培地としては、炭素源、窒素
源、無機物、その他の栄養素を含有するものであれば、
合成培地又は天然培地のいずれでも使用できる。

【００１７】炭素源としては、同化可能な炭素化合物で
あればよく、例えばマルトース、スクロース、トレハロ
ース、デンプン加水分解物、グリセリン、糖蜜などが使
用される。窒素源としては、利用可能な窒素化合物であ
ればよく、例えば酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コ
ーンスチープリカー、大豆粉、アミノ酸、硫安、硝酸ア
ンモニウムなどが使用される。その他、食塩、塩化カリ
ウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄、
リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、炭酸ナトリウ
ム、酢酸ナトリウムなどの種々の塩類、ビタミン類、消
泡剤などが使用される。これらの栄養源はそれぞれ単独
で用いることもでき、また組み合わせて用いることもで
きる。

【００１８】このようにして調製した液体培地を用いて
本酵素を製造するには、通気攪拌深部培養または振盪培
養などにより好気的に培養しても良いが、微量通気で、
無攪拌で深部培養するのが好ましい。その際に、培地の
初発ｐＨを５〜９程度に調整し、２０〜３７℃、好まし
くは２５〜３５℃前後の温度で１０〜５０時間、好まし
くは１５〜２５時間培養する。こうすることによって、
培養物中の本酵素が生成、蓄積する。この培養物から本
酵素を採取するには、通常の酵素採取手段を用いること
ができる。

【００１９】本酵素は、主に菌体内に存在する酵素であ
るため、培養物から、例えばろ過、遠心分離などの操作
により菌体を分離し、この菌体から本酵素を採取するの
が好ましい。この場合、常法、例えば超音波破砕機、フ
レンチプレス、ダイナミルなどの種々の破壊手段を用い
て菌体を破壊する方法、リゾチームなどの細胞壁溶解酵
素を用いて菌体細胞壁を溶解する方法、トリトンＸ−１
００などの界面活性剤を用いて菌体から酵素を抽出する
方法などを単独又は組み合わせて採用することができ
る。次いで、ろ過又は遠心分離などにより不溶物を除
き、本酵素の粗酵素液を得る。

【００２０】このようにして得られた粗酵素液から本酵
素を必要により単離するには、前記の精製方法が適用で
きる。

【００２１】

【発明の効果】本発明は、その至適ｐＨが自動分析法な
どにおいて用いられる酵素類を含む測定試薬の反応系の
ｐＨ領域と一致する中性近辺であり、しかも熱安定性が
優れているという性質を兼ね備えていることから、少量
の酵素使用量で測定でき、また本酵素は、その熱安定性
が従来になく優れているため、長期保存にも耐えること
ができるので、特に液状試薬への使用には極めて好適で
ある。

【００２２】

【実施例】次に、実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれらの例によってなんら限定される
ものではない。 実施例１（本酵素の製造） マルトース・一水和物０．５％（Ｗ／Ｖ）、ポリペプト
ン２．０％（Ｗ／Ｖ）、酵母エキス１．０％（Ｗ／
Ｖ）、リン酸一カリウム０．５％（Ｗ／Ｖ）、酢酸ナト
リウム・三水和物０．５％（Ｗ／Ｖ）、硫酸マグネシウ
ム・七水和物０．０２％（Ｗ／Ｖ）、塩化マンガン・四
水和物０．０００２％（Ｗ／Ｖ）及び水道水からなる培
地（ｐＨ７．０）２０Ｌを３０Ｌ容ジャーに入れて、１
２０℃で１０分間殺菌した。

【００２３】この培地に、財団法人発酵研究所保存菌ラ
クトコッカス・ラクチス・サブエスピー・クレモリス(L
actococcus lactis subsp. cremoris)（ＩＦＯ3427）の
保存スラント（５本）から、生理食塩水を用いて調製し
た菌体懸濁液を接種し、これを３０℃で約２４時間、微
量通気、無攪拌で培養して、種培養液とした。

【００２４】次いで、前記と同様の培地８００Ｌを含む
１トンタンクに前記種培養液５Ｌを接種し、３０℃で約
２４時間、微量通気、無攪拌で培養した。

【００２５】培養終了後、培養液約８００Ｌから限外濾
過膜を用いて菌体を集め、２ｍＭ ＥＤＴＡを含有する１
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）［以下緩衝液Ａとい
う］にて菌体を洗浄した後、２５Ｌまで限外濃縮して菌
体懸濁液とした。本酵素の精製は、以下に示す操作によ
り行った。 ステップ１（粗酵素液の調製）：前記菌体懸濁液２５Ｌ
に、リゾチーム５０ｇと１２５ｍｌのトリトンＸ−１０
０を溶解した水溶液１０００ｍｌを添加、混合した後、
ｐＨを８.５に調整して３５℃で約２時間溶菌した。次
に、硫安４００ｇを溶解した緩衝液Ａ２０００ｍｌを添
加、混合した後、１０％（Ｖ／Ｖ）ポリエチレンイミン
水溶液（ｐＨ７.０）約１０００ｍｌを攪拌しながら滴
下して除核酸処理を行った。濾過助剤を用いて除核酸液
を濾過し、濾過助剤を洗浄した液も含めた上澄液を限外
濾過膜を用いて０．１Ｍ塩化カリウムを含有する緩衝液
Ａに対して透析した。 ステップ２（ＤＥＡＥ−セルロース・バッチワイズ）：
透析液（４９Ｌ）に、予め緩衝液Ａで平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セルロースを添加、混合し、時々攪拌しながら本酵
素をＤＥＡＥ−セルロースに完全に吸着させ、次いで緩
衝液Ａを用いて、このＤＥＡＥ−セルロースをろ布上で
十分洗浄した後、０．４Ｍ塩化カリウムを含有する緩衝
液Ａを用いて本酵素をＤＥＡＥ−セルロースから溶出し
た。この溶出液を、限外濃縮し、０.０５Ｍ塩化カリウ
ムを含有する緩衝液Ａに対して透析した。 ステップ３（ＱＡＥ−セファデックスＡ−５０・クロマ
トグラフィー）：透析液（約５０００ｍｌ）を、予め
０．０５Ｍ塩化カリウムを含有する緩衝液Ａで平衡化し
たＱＡＥ−セファデックスＡ−５０のカラム（２０×４
０ｃｍ）に吸着させた後、０．２Ｍ塩化カリウムを含有
する緩衝液Ａにてカラムを洗浄し、次に、０.２５Ｍ塩
化カリウムを含有する緩衝液Ａにより本酵素を溶出さ
せ、活性画分を限外濃縮した。 ステップ４（フェニル−セファロースＣＬ−４Ｂ・クロ
マトグラフィー）：濃縮液（約１００ｍｌ）に、２０％
飽和になるように硫安を添加、混合した後、２０％飽和
硫安を含有する緩衝液Ａで平衡化したフェニル−セファ
ロースＣＬ−４Ｂのカラム（５×１５ｃｍ）に本酵素を
吸着させ、２０％飽和硫安を含有する緩衝液Ａにてカラ
ムを洗浄し、次に、２０％〜０％飽和硫安を含有する緩
衝液Ａの逆直線濃度勾配法により本酵素を溶出させ、活
性画分を限外濃縮し、２ｍＭリン緩衝液（ｐＨ６.８）
に対して透析した。

【００２６】ステップ５（ヒドロキシアパタイト・クロ
マトグラフィー）：透析液をヒドロキシアパタイトのカ
ラム（３.５×２０ｃｍ）に吸着させた後、２ｍＭ リ
ン酸緩衝液（ｐＨ６.８）でカラムを洗浄し、次に２ｍ
Ｍ〜３０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ６.８）の直線濃度
勾配法にて溶出させ、活性画分を６.０ｍｌまで限外濃
縮した。 ステップ６（バイオゲル A-1.5m・クロマトグラフィ
ー）：この濃縮液３.０ｍｌをバイオゲル A-1.5m のカ
ラム（２.５×９６.５ｃｍ）に通塔させた後、０.１Ｍ
塩化カリウムを含有する緩衝液Ａを用いてゲルろ過を行
った。前記の方法で２回に分けてゲルろ過を実施し、溶
出された活性画分（合計３６ｍｌ）を採取した。この精
製酵素液は、全活性が２１，０００Ｕ、全タンパク量が
約１０７ｍｇ、比活性が１９７Ｕ／ｍｇのものであっ
た。

【００２７】実施例２（熱安定性の比較） 実施例１と同様にして調製した培地３５０ｍｌを５００
ｍｌ容三角フラスコに入れて、１２０℃で１０分間殺菌
した。この培地に、ラクトコッカス・ラクチス・サブエ
スピー・クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremo
ris)（ＩＦＯ3427）の保存スラント（１本）から、生理
食塩水を用いて調製した菌体懸濁液を接種し、これを３
０℃で培養中に２〜３回軽く攪拌して約１日間静置培養
した。

【００２８】次いで、この培養液３５０ｍｌから遠心分
離により菌体を集め、前記緩衝液Ａにて菌体を洗浄した
後、−２０℃にて一晩凍結保存した。この凍結菌体を室
温にて融解後、０.２％リゾチームと０.５％（Ｗ／Ｖ）
トリトンＸ−１００を含有する前記緩衝液Ａ１０ｍｌを
添加、混合した後、ｐＨを８.５に調整して３５℃で約
２時間加温処理した。この処理液から不溶物を遠心分離
により除去した後、上澄液を採取して、粗酵素液とし
た。また対照として公知酵素Ｃの製造に使用されている
ラクトコッカス・ラクチス・サブエスピー・ラクチス(L
actococcus lactis subsp. lactis)（ＡＴＣＣ19435）
を上記と同様に培養して粗酵素液を得た。

【００２９】この２菌株から採取した粗酵素液を、０.
１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６.７５）で５倍希釈して、
４０℃あるいは５０℃で２０分間それぞれ処理した後、
前記の力価の測定方法で活性を測定して熱安定性の比較
を行った。ラクトコッカス・ラクチス・サブエスピー・
クレモリス（ＩＦＯ3427）では、４０℃処理でほぼ１０
０％の残存活性、５０℃処理で約６５％の残存活性が認
められた。一方、対照のラクトコッカス・ラクチス・サ
ブエスピー・ラクチス（ＡＴＣＣ19435）では、４０℃
処理で約５０％の残存活性が認められたが、５０℃処理
では全く活性が認められなかった。これらの熱安定性の
結果から、ラクトコッカス・ラクチス・サブエスピー・
ラクチス（ＡＴＣＣ19435）由来のβ−ＰＧＭは、ラク
トコッカス・ラクチス・サブエスピー・クレモリス（Ｉ
ＦＯ3427）由来の本酵素に比較して、非常に不安定であ
ることが示され、公知酵素Ｃと良く一致した。

【図面の簡単な説明】

【図１】本酵素の至適ｐＨを示すグラフ。 □：５０ｍＭ 酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４.
０〜５.５）、 ■：５０ｍＭ メス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ
５.５〜７.０）、 ●：５０ｍＭ ヘペス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７.０〜８.０）、 ▲：５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０〜９.
５）、 ○：５０ｍＭ キャプス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ９.５〜１０.０）

【図２】本酵素の安定ｐＨ範囲を示すグラフ。 □：５０ｍＭ 酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．
５〜５.５）、 ■：５０ｍＭ メス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ
５.５〜７.０）、 ●：５０ｍＭ ヘペス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７.０〜８.０）、 ▲：５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８.０〜９.
５）、 ○：５０ｍＭ キャプス−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ９.５〜１０.０）

【図３】本酵素の作用適温の範囲を示すグラフ。

【図４】本酵素の熱安定性を示すグラフ。

【図５】本酵素の電気泳動図。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の理化学的性質を有する新規β−ホス
   ホグルコムターゼ。 （１）作用：β−Ｄ−グルコース−１−リン酸をβ−Ｄ
   −グルコース−６−リン酸に変換する。 （２）基質特異性：β−Ｄ−グルコース−１−リン酸に
   特異的に作用し、α−Ｄ−グルコース−１−リン酸には
   作用しない。 （３）至適ｐＨおよび安定ｐＨ範囲：至適ｐＨは６.８
   〜７.３であり、安定ｐＨ範囲は３０℃、３０分間処理
   で、ｐＨ５.０〜９.５で安定。 （４）作用適温の範囲：３５℃〜４２℃。 （５）ｐＨ、温度などによる失活の条件：ｐＨ７.０、
   １５分間処理により、５０℃程度まで安定。