JPH1142088A - 芳香族化合物酸化分解酵素遺伝子及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 フェノール等、芳香族化合物の酸化分解に関
与する新規な蛋白質及びそれをコードする遺伝子の提
供。 【解決手段】 配列表：１に示すアミノ酸配列を有する
蛋白質群及びそれをコードする遺伝子。 【効果】 フェノール等の芳香族化合物に対して親和性
の高い、芳香族化合物分解性微生物を用いて、芳香族化
合物を含有する排水を効率よく処理することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、芳香族化合物の酸
化分解に関与する酵素又は酵素群、それらをコードする
遺伝子、該ＤＮＡを含んで成るベクター特に発現ベクタ
ー、該ベクターにより形質転換された宿主、特に細菌、
及び該発現ベクターによる前記酵素又は酵素群の製造方
法を提供する。

【０００２】本発明は、芳香族化合物の合成、生産、変
換、分解に関わる石油精製、化学工業、化成品工業及び
医薬品工業などの分野並びに土壌浄化、水質浄化、排水
処理、排気処理などの環境関連分野、土壌改良などの農
業分野、発酵工業分野などの分野において有用である。

【０００３】

【従来の技術】従来のフェノール分解菌は、バッチ培養
法（初期フェノール濃度１０００ppm程度) でスクリー
ニングされたものが殆どであるので、高濃度のフェノー
ルに対して分解活性が高いものであった。今までに、こ
れらの菌を活性汚泥などに投入する試みもなされている
が、これらの菌を高濃度で生存させることに成功した例
はない。その理由は、活性汚泥などの連続培養系におい
ては、系内の基質濃度は低く保たれるため、その中で高
濃度で生存させるためには、基質であるフェノールに対
して高親和性であることが重要となるが、従来の微生物
はバッチ培養から単離されている為高濃度のフェノール
中での分解活性は高いが、フェノールに対する親和性が
低いためと考えられる。

【０００４】このように連続培養系において有用なフェ
ノール高親和性微生物として、アルカリゲネス(Alcalig
enes）属に属するアルカリゲネスｓｐ．Ｒ２株が知られ
ている（特開平７−６７６１９）。この微生物は、フェ
ノール親和性Ｋ_s 値０．８７μＭを有する。しかしなが
ら、上記のごとくフェノールなどの芳香族化合物に対し
て親和性の高い芳香族化合物分解性微生物の芳香族化合
物分解系酵素をコードする遺伝子は知られていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、芳
香族化合物に対して親和性の高い微生物由来の芳香族化
合物分解酵素をコードする遺伝子及びその利用方法を提
供しようとするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
め、本発明は、配列番号：１におけるアミノ酸１〜５６
８から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＲ、アミ
ノ酸５６９〜６４２から成るアミノ酸配列を有する蛋白
質ＰｏｘＡ、アミノ酸６４３〜９７３から成るアミノ酸
配列を有する蛋白質ＰｏｘＢ、アミノ酸９７４〜１０６
３から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＣ、アミ
ノ酸１０６４〜１５６７から成るアミノ酸配列を有する
蛋白質ＰｏｘＤ、アミノ酸１５６８〜１６８６から成る
アミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＥ、アミノ酸１６８
７〜２０４２から成るアミノ酸配列を有する蛋白質Ｐｏ
ｘＦ、アミノ酸２０４３〜２１４３から成るアミノ酸配
列を有する蛋白質ＰｏｘＧ、アミノ酸２１４４〜２４５
３から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＨ、又は
アミノ酸２４５４から始るアミノ酸配列を有する蛋白質
ＰｏｘＩ、あるいは上記生来のアミノ酸配列において１
〜数個のアミノ酸の欠失、及び／又は他のアミノ酸によ
る置換により修飾されており、且つ対応する前記生来の
アミノ酸配列を有する蛋白質と同等の生物学的活性を有
する蛋白質を提供する。

【０００７】本発明は、例えば、上記の蛋白質群の１態
様として、蛋白質ＰｏｘＲ又はその修飾体、蛋白質Ｐｏ
ｘＡ又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＢ又はその修飾体、
蛋白質ＰｏｘＣ又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＤ又はそ
の修飾体、蛋白質ＰｏｘＥ又はその修飾体、及び蛋白質
ＰｏｘＦ又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＧ又はその修飾
体から成る、フェノール又はベンゼン分解酵素群を提供
する。

【０００８】本発明はまた、上記の蛋白質又は酵素群を
コードする遺伝子、該遺伝子を含んで成るベクター、特
に発現ベクター、並びに該ベクターにより形質転換され
た宿主、特に細菌宿主に関する。本発明はまた、上記の
宿主を培養することを特徴とする。前記蛋白質又は酵素
群の製造方法に関する。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明における遺伝子の給源とし
ては、フェノール等の芳香族化合物に対して高い親和性
を有し、芳香族化合物を酸化分解する能力を有するもの
であればよいが、好ましくはアルカリゲネス(Alcaligen
es）属の微生物であり、具体例としてアルカリゲネス(A
lcaligenes）ｓｐ Ｅ２（FERM P-14939）が挙げられ
る。この菌株の分離及び性質については特開平８−３２
３３８９に詳細に記載されている。本発明においては、
上記の菌株からの、芳香族化合物の酸化分解に関与する
遺伝子群のクローニングの方法を実施例１に具体的に記
載する。

【００１０】遺伝子をクローニングした後、その塩基配
列を常法に従って決定し、リーディングフレームを推定
したところ、下記表１に示す結果が得られた。推定され
る１０個のリーディングフレームによりコードされてい
る蛋白質をＰｏｘＲ，ＰｏｘＡ，ＰｏｘＢ，ＰｏｘＣ，
ＰｏｘＤ，ＰｏｘＥ，ＰｏｘＦ，ＰｏｘＧ，ＰｏｘＨ及
びＰｏｘＩと称する。

【００１１】これらの蛋白質は、すでに知られているシ
ュードモナス（Pseudomonas)sp. CF600株（J.Bacterio
l.172(12),6826-6833(1990)(表１中Ｄｍｐ, Ｐ又はＣ２
３０として示す）、シュードモナス・プチダ（Pseudomo
nas putida）Ｐ３５Ｘ株（Gene,151,29-36(1994)（表１
中Ｐｈｈとして示す）及びシュードモナス・プチダ（Ps
eudomonas putida）Ｈ株（J.Mol.Gen.Genet.247(2),240
-246(1995)）（表１中Ｐｈｌとして示す）のフェノール
分解酵素群と対応関係があり、その相互関係を表１に示
す。しかしながら、表１に示すごとく、相互に対応する
蛋白質のアミノ酸配列の相同性は２９〜６５％と低く、
本発明の遺伝子の蛋白質及び酵素群が新規なものである
ことがわかる。

【００１２】

【表１】

【００１３】これらの内、ＰｏｘＲ，ＰｏｘＡ，Ｐｏｘ
Ｂ，ＰｏｘＣ，ＰｏｘＤ，ＰｏｘＥ，ＰｏｘＦがあれば
フェノールやベンゼンをカテコールまで分解するのに十
分である。従って、本発明は特にこれらの蛋白質全体を
コードする遺伝子に関する。表１に示す既知の配列との
類似性から、表１に示す遺伝子ｐｏｘＲ〜ｐｏｘＩの
内、ｐｏｘＲは調節遺伝子であり、ｐｏｘＡ〜ｐｏｘＦ
はフェノールヒドロキシラーゼをコードしており、ｐｏ
ｘＧ以降はメタ開裂系酵素をコードしていると推定され
る。

【００１４】表１に示すＰｏｘＲからＰｏｘＩまでの蛋
白質のアミノ酸配列（ＰｏｘＩは途中まで）及びそれら
のアミノ酸配列をコードする塩基配列を配列表１に示
す。しかしながら、蛋白質性の生理活性物質において
は、生来のアミノ酸配列に対して１個又は少数個のアミ
ノ酸が除去、付加及び／又は他のアミノ酸による置換等
により修飾されていてもなお、生理活性を維持している
場合があることは周知である。

【００１５】従って本発明は、配列番号：１に示すアミ
ノ酸配列を有する蛋白質のみならず、それらのアミノ酸
配列中で１又は少数個、例えば各蛋白質の全アミノ酸の
約１０％以下が除去、付加及び／又は他のアミノ酸の置
換により修飾されており、且つ芳香族化合物、例えばフ
ェノールベンゼンの酸化的分解に関与する能力を維持し
ている修飾された蛋白質及びそれらをコードする遺伝子
をも包含する。これらの修飾された蛋白質をコードする
遺伝子は、例えば、核酸中の特定の部位を修飾するため
の周知の方法、例えばＰＣＲ法、部位特定変異誘発法等
により得ることができる。

【００１６】本発明の遺伝子はまた、配列番号１に示す
塩基配列を有する核酸又はその一部分をプローブとして
用いて、例えば天然のＤＮＡ、例えばゲノム遺伝子、ｃ
ＤＮＡライブラリー等をスクリーニングすることによっ
ても得られる。従って本発明は、配列番号：１に示す塩
基配列を有する核酸又はその一部分、例えばリーディン
グフレーム領域もしくはその部分と、所定のストリンジ
エンシー条件下でハイブリダイズし、且つフェノール等
の芳香族化合物の酸化分解に関与する能力を有するＤＮ
Ａをも包含する。この場合のストリンジエンシー条件
は、例えば４２〜６５℃，１６時間〜２０時間である。

【００１７】本発明の遺伝子は、フェノール、ベンゼン
等の芳香族化合物の分解除去のため、又はこれらの芳香
族化合物の酸化生成物の製造のために用いることができ
る。例えば、本発明の遺伝子のｐｏｘＲからのｐｏｘＦ
の部分を用いれば、フェノール等の芳香族化合物をカテ
コールまで酸化することができるから、フェノール分解
のための酵素系を有していなくともカテコールの分解の
ための酵素系を有する宿主に導入することにより、芳香
族化合物の酸化分解、例えばフェノール等を含有する排
水の処理、のために用いることができる。

【００１８】他方、フェノール及びカテコール分解のた
めの酵素系を有しない宿主に導入すれば、カテコール
等、芳香族化合物酸化生成物の製造のために用いること
ができる。フェノール分解のための酵素系を有せず、カ
テコール分解のための酵素系を有する微生物としては、
例えばシュードモナス属、アルカリゲネス属、アシネト
バクター属等に属する微生物の中から選択することがで
きる。シュードモナス属に属する菌株の１例として、シ
ュードモナス、アエルギノーサ（Pseudomonas aerugino
sa）ＰＡＯ１ｃ株を挙げることができる。

【００１９】本発明の遺伝子を宿主に導入するにはベク
ター、特に発現ベクターを使用する。この発現ベクター
は、宿主中で機能し得る発現制御領域、特にプロモータ
ー及びターミネーターを含有する。原核生物、特に細菌
中で機能するプロモーターとしては、１ａｃプロモータ
ー、ｇａｌプロモーター、ｔｒｐプロモーター、Ｔ３プ
ロモーター、Ｔ７プロモーター等を使用することができ
る。

【００２０】本発明の組換え宿主を用いてフェノール、
ベンゼン等の芳香族化合物を含有する排水を処理するに
は、活性汚泥法などの連続培養系を用いるのが有利であ
る。本発明の遺伝子はフェノール等の芳香族化合物に対
する親和性が高いので、活性汚泥法等の連続培養系にお
いて、フェノール等の芳香族化合物を非常に低濃度、例
えば０．５ppm にまで分解することが可能である。

【００２１】本発明はさらに、次のごとく種々の用途を
有する。すなわち、本発明の遺伝子を、遺伝子工学の手
法を用いて他の微生物に導入することによって、他の菌
にこの遺伝子の性質を付与することができる。この遺伝
子を用いて、芳香族化合物を含有する廃水の処理の効率
化に応用できる。芳香族化合物の分解経路を持たない菌
にこの遺伝子の一部を導入することによって、菌体内で
分解経路中の有用中間代謝産物（例えば、カテコール、
２−ヒドロキシムコン酸セミアルデヒド）を生産させる
ことができる。

【００２２】また、この遺伝子の一部と他の遺伝子を組
み合わせて、芳香族化合物からの有用物質生産（例え
ば、この遺伝子のベンゼン、フェノールをカテコールに
酸化する遺伝子の部分とカテコールをｃｉｓ，ｃｉｓ−
ムコン酸にする別の遺伝子を組み合わせ、ベンゼン、フ
ェノールからｃｉｓ，ｃｉｓ−ムコン酸を作り出す）に
利用できる。この様にして、芳香族化合物からの有用物
質への変換・生産に利用できる。遺伝子工学の手法を用
いて、この遺伝子の遺伝子配列の一部分を変えることに
より、この遺伝子の持つ分解能力や親和性をさらに増
強、改変することができる。

【００２３】

【実施例】次に本発明を実施例によりさらに具体的に説
明する。実施例１ ．フェノール分解に関与する遺伝子のクローニ
ング （１）遺伝子ライブラリーの作成 アルカリゲネス(Alcaligenes）ｓｐ．Ｅ２株は、高親和
性のフェノール分解菌として単離された菌である。ま
た、この株はフェノールだけでなくベンゼンも唯一の炭
素源として増殖することができる。この、アルカリゲネ
スｓｐ．Ｅ２株をＭＰ培地（Ｋ₂ ＨＰＯ₄ ２．７５
ｇ，ＫＨ₂ ＰＯ₄ ２．２５ｇ，（ＮＨ₄)₂ＳＯ₄
１．０ｇ，ＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ ０．２ｇ，ＮａＣｌ
０．１ｇ，ＦｅＣｌ₃ ・６Ｈ₂ Ｏ ０．０２ｇ，Ｃａ
Ｃｌ₂ ０．０１ｇ、１リットル中、pH６．８−７．
０）に唯一の炭素源としてフェノールを５００ppm を加
えた培地で培養し、菌を遠心回収後、Ｍａｒｍｕｒ法に
より全ＤＮＡを抽出した。

【００２４】この全ＤＮＡを制限酵素Ｓａｕ３ＡＩで部
分分解後、アルカリフォスファターゼ処理した。次にこ
のＤＮＡ断片を制限酵素ＢａｍＨＩで制限処理したコス
ミドベクターｐＬＡＦＲ３（２２．１kb、テトラサイク
リン耐性）と連結した。これをファージにインビトロパ
ッケージング（GIGAPACK II Gold Packaging Extract,
TOYOBO）し、Ｅ２株の遺伝子ライブラリーを作成した。

【００２５】（２）遺伝子の選択 このアルカリゲネスｓｐ．Ｅ２株の遺伝子ライブラリー
を大腸菌ＶＣＳ２５７（STRATAGENE）にトランスフェク
トし、ｄＬＢ培地（酵母エキス ０．５ｇ，トリプトン
１ｇ，ＮａＣｌ １ｇ，１リットル中）＋テトラサイ
クリン（５０μｇ／ml）＋マルトース（０．０２％）＋
ＭｇＳＯ₄ （１０mM）＋フェノール（２５０ppm)の寒天
プレートでトランスフェクタントの選択を行った。Ｅ２
株のフェノール分解経路の一部分（フェノール→２−ヒ
ドロキシムコン酸セミアルデヒド）を獲得した株は、そ
の代謝産物である２−ヒドロキシムコン酸セミアルデヒ
ドを蓄積し、コロニーが黄色に着色した。この様にし
て、トランスフェクタントの中から、フェノール分解経
路を持つ遺伝子を獲得した株を選択した。

【００２６】（３）単離した遺伝子の塩基配列の解析 アルカリ法により、このトランスフェクタントに含まれ
るコスミドを回収し調査した結果、このコスミドにはア
ルカリゲネスｓｐ．Ｅ２株由来のＤＮＡ断片約２０kbが
含まれることが確認できた。この遺伝子の制限酵素地図
をもとに、その中の約１２kbの塩基配列を決定した。調
べた塩基配列とこの配列から推測されるオープンリーデ
ィングフレーム（ＯＲＦ）を配列番号：１に示す。

【００２７】ＯＲＦは塩基配列を解読したＤＮＡ断片中
に１０個存在し、それぞれのＯＲＦをｐｏｘＲ（塩基の
位置：２０１４−３７１７），ｐｏｘＡ（４４９０−４
７１１），ｐｏｘＢ（４８０７−５７９９），ｐｏｘＣ
（５８１３−６０８２），ｐｏｘＤ（６１５３−７６６
４），ｐｏｘＥ（７７０４−８０６０），ｐｏｘＦ（８
０８９−９１５６），ｐｏｘＧ（９２０５−９５０
７），ｐｏｘＨ（９６００−１０５２９），ｐｏｘＩ
（１０８５４−１２０１９（一部分のみ、さらに先へ続
く））とした。

【００２８】ホモロジー検索の結果から、この部分の遺
伝子にはベンゼン・フェノールからカテコール、カテコ
ールから２−ヒドロキシムコン酸セミアルデヒド、２−
ヒドロキシムコン酸セミアルデヒドから２−ヒドロキシ
ムコン酸への分解を担う酵素がコードされていると考え
られた。塩基配列が明らかになっている他のフェノール
分解菌とのアミノ酸レベルでの相同性を調べた結果を表
１にまとめる。この様に、今回単離したアルカリゲネス
ｓｐ．Ｅ２株由来のベンゼン・フェノール酸化分解遺伝
子は、既知の配列と相同性が極めて低く、新規な配列と
考えられる。

【００２９】実施例２．単離した遺伝子のフェノール及
びベンゼン酸化活性の測定 この遺伝子の中のフェノール・ベンゼンからカテコール
への酸化分解に関わると考えられる部分（塩基の位置：
１−９５１１）を、シュードモナス・アエルギノーサ(P
seudomonas aeruginosa)ＰＡＯ１ｃ株（フェノール、ベ
ンゼンの分解活性を持たない菌、カテコールは資化でき
る）に形質転換した。コントロールとしてベクターのみ
も形質転換した。この二つの株のフェノール、ベンゼン
酸化活性を調べた。それぞれの株を、ＬＢ培地（酵母エ
キス ５ｇ，トリプトン １０ｇ，ＮａＣｌ １０ｇ，
１リットル中）で１５時間培養後、集菌し、ＭＰ培地で
２回洗った。この菌を再度遠心集菌後ＭＰ培地＋フェノ
ール２００ppm の液中に６時間さらした。この菌を遠心
集菌し、ＭＰ培地で２回洗ったものを酸化活性測定に用
いた。

【００３０】酸化活性の測定は次のようにして行った。
すなわち、反応セルに２mlのＭＰ培地（１Ｌ中に２．７
５ｇのＫ₂ ＨＰＯ₄ ，２．２５ｇのＫＨ₂ ＰＯ₄ ，１．
０ｇの（ＮＨ₄)₂ ＳＯ₄ ，０．２ｇのＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ
₂ Ｏ，０．１ｇのＮａＣｌ，０．０２ｇのＦｅＣｌ₃ ・
６Ｈ₂ Ｏ，０．０１ｇのＣａＣｌ₂ を含有する）を入れ
溶存酸素濃度が安定した後、前記の菌体５mgをセルに添
加した。次に１Ｍシアン化カリウムを２０μｌ添加し、
菌の呼吸による酸素消費を抑制した後、フェノール又は
ベンゼンを１０ppm 添加し、フェノール又はベンゼンの
分解に伴う特異的な酸素消費を測定した。

【００３１】測定結果を表２に示す。コントロール株
は、ベンゼン、フェノールの酸化活性が見られなかっ
た。しかし、Ｅ２株のフェノール酸化に関わると思われ
る遺伝子を導入した株では、フェノール、ベンゼンの酸
化活性が測定された。以上の結果より、この遺伝子は、
Ｅ２株のフェノール、ベンゼンの分解に関わる遺伝子で
あると考えられる。

【００３２】

【表２】

【００３３】実施例３．単離した遺伝子のフェノールに
対する親和性 シュードモナス・アエルギノサＰＡＯ１ｃ株にＥ２株由
来のフェノール酸化分解に関わる部分の遺伝子を導入し
た株を用いて、基質濃度に対するフェノール酸化活性の
関係を調べた。フェノール酸化活性は酸素電極を用いて
測定した。この結果をもとに、フェノール酸化活性の動
力学的解析を行った。Ｅ２株遺伝子導入株のフェノール
に対する親和性Ｋ_s 値は０．４７と低く、元の株Ｅ２株
のＫ_s 値０．３６を反映した低い値となっていた。

【００３４】ここで、Ｋ_s 値は次のようにして求めるこ
とができる。すなわち、１５００ppm のフェノールを唯
一の炭素源とするＭＰ培地（１Ｌ中に２．７５ｇのＫ₂
ＨＰＯ₄ ，２．２５ｇのＫＨ₂ ＰＯ₄ ，１．０ｇの（Ｎ
Ｈ₄)₂ ＳＯ₄ ，０．２ｇのＭｇＣｌ₂ ・６Ｈ₂ Ｏ，０．
１ｇのＮａＣｌ，０．０２ｇのＦｅＣｌ₃ ・６Ｈ₂ Ｏ，
０．０１ｇのＣａＣｌ₂ を含有する）中で培養して菌体
を得る。

【００３５】次に、反応セルに２mlのＭＰ培地を入れ溶
存酸素濃度が安定した後、前記の菌体５mgをセルに添加
した。次に１Ｍシアン化カリウムを２０μｌ添加し、菌
の呼吸による酸素消費を抑制した後、フェノールを添加
し、フェノールの分解に伴う特異的な酸素消費を測定し
た。フェノール添加量を調節し、各種基質濃度での酸素
消費を求める。これにより、基質であるフェノールの濃
度〔Ｓ〕（μＭ）に対するフェノール分解速度Ｖ（ユニ
ット／ｇ・乾燥細胞）を求める。次にＨａｌｄｅｎｅ
式：

【００３６】

【数１】

【００３７】から基質親和性Ｋ_s （μＭ）、阻害定数Ｋ
_sI（μＭ）、及び最大分解速度Ｖ_{ma x} （ユニット／ｇ・
乾燥細胞）を、例えばJMP statistical Visualization
softwere (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA）によ
る動力学的解析により算出する。

【００３８】実施例４．組み換え体での発現 本発明の遺伝子の中のフェノール・ベンゼンからカテコ
ールへの酸化分解に関わると考えられる部分（塩基の位
置：１−９５１１）を、シュードモナスアエルギノーサ
ＰＡＯ１ｃ株（フェノール・ベンゼンの分解活性を持た
ない菌、カテコールは資化できる）に形質転換した。コ
ントロールとしてベクターのみも形質転換した。この二
つの形質転換体について、フェノールとベンゼンの資化
性を、フェノールあるいは、ベンゼンを唯一の炭素源と
して各々２００ppm 加えたＭＰ培地で培養し、濁度の増
加によって調べた。その結果を表３に示す。

【００３９】

【表３】

【００４０】Ｅ２株由来のフェノール・ベンゼンの酸化
分解に関わる遺伝子を導入した株でのみ、フェノールだ
けでなくベンゼンも資化して増殖することができた。こ
の様に、フェノールやベンゼンの分解活性を持たない菌
にＥ２株由来のこの遺伝子断片を導入することによっ
て、フェノールやベンゼンのカテコールへの酸化能が獲
得され、フェノールやベンゼンを唯一の炭素源として資
化できるようになった。この様に、この遺伝子を導入す
ることによって、これらの能力を持たない菌にフェノー
ル、ベンゼンからカテコールへの酸化分解という新たな
性質を付与することができる。

【００４１】実施例５．単離した遺伝子の基質特異性 この遺伝子の中のフェノール・ベンゼンからカテコール
への酸化分解に関わると考えられる部分（塩基の位置：
１−９５１１）を（シードモナス アエルギノーサ)(Ps
eudomonas aeruginosa）ＰＡＯ１ｃ株（フェノール、ベ
ンゼンの分解活性を持たない菌、カテコールは資化でき
る）に形質転換した。この株をＭＰ培地に1000ppm のフ
ェノールと3000ppm のカザミノ酸を添加した合成培地で
連続培養した。この菌体を酸化活性測定に用いた。酸化
活性の測定は、実施例２に記載したのと同様にした。各
基質は50μＭ添加した。測定結果を表に示す。このよう
に、この菌は、フェノール、ベンゼンの他の芳香族化合
物として、o-クレゾール、m-クレゾール、p-クレゾー
ル、 o-クロロフェノール、m-クロロフェノール、p-ク
ロロフェノール、3,4-ジメチル フェノールも酸化する
事ができた。

【００４２】

【表４】

【００４３】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ ：１２０１９ｂ．ｐ． 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 起原 生物名：アルカリゲネス(Alcaligenes）ｓｐ． 株名：Ｅ２ 配列の特徴： 他の特徴： アミノ酸番号１〜５６８：蛋白質ＰｏｘＲのアミノ酸配
列 アミノ酸番号５６９〜６４２：蛋白質ＰｏｘＡのアミノ
酸配列 アミノ酸番号６４３〜９７３：蛋白質ＰｏｘＢのアミノ
酸配列 アミノ酸番号９７４〜１０６３：蛋白質ＰｏｘＣのアミ
ノ酸配列 アミノ酸番号１０６４〜１５６７：蛋白質ＰｏｘＤのア
ミノ酸配列 アミノ酸番号１５６８〜１６８６：蛋白質ＰｏｘＥのア
ミノ酸配列 アミノ酸番号１６８７〜２０４２：蛋白質ＰｏｘＦのア
ミノ酸配列 アミノ酸番号２０４３〜２１４３：蛋白質ＰｏｘＧのア
ミノ酸配列 アミノ酸番号２１４４〜２４５３：蛋白質ＰｏｘＨのア
ミノ酸配列 アミノ酸番号２４５４〜２８４１：蛋白質ＰｏｘＩのア
ミノ酸配列のＮ末端側 配列 ATCGATGTCT TTCGTGGAAG TCGGTGTACG GCATCATTGA GCGCAGCACG CGTCCACGCA 60 ATTCCTCAGT GCCGAAGCGT GCGTAAGCCG CAGGCGAAGC GTGCCGTGGC GATGCGGCGT 120 GCGCTGCGCA GGGGATTGAC GGCGCGCCGC CGGCGCGGGC ATCATGACAC CCATGACTTC 180 CGACGCGCTG CGCGCCATCT CCCCGATCAC GACCACTACC ACCACGACCG CGCCAGGCGG 240 GTCGTGAGGA CGGTATCGAG TCGGAACGCA TACCGGTTTC AAGGCCCCGC CAGCGATGGA 300 CGGGGCCTTT TCGTTTCTCC GTCCATGCTG GGACTTTGCG GGGCATGCCT CCACCCAGAC 360 GACATGAGCA GGAGAAACAC ATGCCAGAAC CTTCCGCCCG CCGCGCGCTG CTGATCCTCG 420 ACATGCAGTG CGGCCTTTTC GACGGCCCCG AGCCGCCTTA CGAAGGCGAG CGCGTGCTCG 480 CCCACATCAA CCGGCTGGCC GCGCGTGCGC GTGCCGCCGG CGCGCTGGTC TTGGCCGCGC 540 GCCATACCGG GCCCGCAGGC TCGCCGATCG CGCCGGGCAG CCCGGCCTGG CAGCTGCTGC 600 CGCGCCTCGA CGTGGATGCG GCACACGACA CCGTGTTCGA CAAGACCCGG CCGAGCGGCT 660 TCGTCGGCAC CGGGCTGGAG GCGCGCCTCG CGCAGGCCGG CATCGGCGAG CTGGTGATCG 720 TCGGCATGAA GACGCAGTAC TGCGTTGACG CCAACTGCCG CGCCGCCGCC GATCTCGGCC 780 TGCGGCCGGT GCTGGTGGCC GACGCGCATA CCTGCATGGA CACGCCGGAC CTGCCGGCGG 840 CGGCCATCAT CGCGCACCAC AACCGCACGC TCGGCAGCGC GTTCGCGCCA CTCGTCACTG 900 CCGAGTCGTG CCGCTTCTAG TCATTCGAGG CTCAGGACAC CGCGGAGGCC GGCAGGTCCG 960 CGCTGCAGCT CGGGTGCTCG GTGTCGTGGT CGTGCGGATG CAGCGCGCCG GGCACCTTGC 1020 AGCTGTCGAG CCCGCCGGCG CTCAGCCAGG CGGCGGTGGC TTCGGCCGCG CGATCGATCA 1080 GTTCGCCGCA GCGGCTGTAG TCGTAGGGTG AGACATCGAG CGGACACAGC GGCGGCACCA 1140 CGCTGATGCG GGCCACGTCC GCCCAGCGTT CGAGGTCGTG CACGAGCTGG CGCGCCACCA 1200 GCAGCGACAG GGCGTTGAAG GCGTGCTCGA TGGCGCCGCG CGGTTCGCGC CGCTGCGCGC 1260 AGGCAAAGCC GGCCGGCAGC ACCAGCACGC GCGTGGCGCC CAGCCGGACC GCGGTGGAAA 1320 CCGGGGTATT GTTGGCCACG CCGCCGTCGA TCAGCGCGCG TCCTTCCACC CGCACCGGGG 1380 GGAACACGCC GGGGATGGCG GCGCTGGCCA GCACCGCATC GACCAGGCTG CCGGACGACA 1440 GCACGACTTC TTCGCCGCTG TGCATGTCGG TGGCCACCAC ATGCAGCGGC ACCTCCGCGT 1500 TCTCGATGCG GGCGTTGCCG AAATGGAGCG CCAGCAGGCG CTGCAGCGCG GTGGATTCCA 1560 CCAGGTGCCC GCGCCGTCCG CCGAACATGC CCAGTACGTT GCGCCAGGAC CATGGCATCA 1620 CGTCGTCGCG CCGCACGCCG CGCCAGAGCG CTTCCAGGCG CGACGTTCCC TCGGCGTGGG 1680 GATGGCAGGC GAAGTAGGCG CCGTTGATGG CGCCGGCCGA GGCCCCGACG ACGAAGTCGG 1740 GGATCAGGCC GGAGGCCACC AGCTCGCGCA GCATGCCGGC CTCGACGGCT CCGAGGCTGC 1800 CGCCGCCGGC GAAAACGAAG GCTGTCTTGT CCATGGCGTA TTGCGATGCA GCAGATCGCA 1860 GTGGGAGAGA TCTGCGACTA GGGTATATCG TGCGCGCGCG GACGGCCAGT GCCCGGCGCC 1920 CGCGGGTGCC GGCGCCGCGA TGGCACATAA TGTGCATAGC CATGTGCGAA ACATGGCACG 1980 CCGGCCAGCA GAGCCGCGCG AAGAGAGGAG ACG ATG AGC AGT TCT ACC GAC AAT 2034 Met Ser Ser Ser Thr Asp Asn 1 5 TTT TCG GCC ACC ATG CGC GAT GGC CTG TCC AAC CTC GCC CGC CGG CTG 2082 Phe Ser Ala Thr Met Arg Asp Gly Leu Ser Asn Leu Ala Arg Arg Leu 10 15 20 CGC TTC GCC ATG AAG GAG GGG TCG ATC TGG CTG GGC GAG CAG CGC ATG 2130 Arg Phe Ala Met Lys Glu Gly Ser Ile Trp Leu Gly Glu Gln Arg Met 25 30 35 ATC CTG CTG CAT ACG GCG GCG CTG GGC GCC TTG CGC AAG GAA TTG GTG 2178 Ile Leu Leu His Thr Ala Ala Leu Gly Ala Leu Arg Lys Glu Leu Val 40 45 50 55 GAT ACC CTC GGC ATG GAG CGT GCG CGC GGC CTG TTC ATG CGC ATG GGC 2226 Asp Thr Leu Gly Met Glu Arg Ala Arg Gly Leu Phe Met Arg Met Gly 60 65 70 TTC CAT TCC GGG GTG CGC GAT GCC GAG CTG GCC AAG ACC ATG CGC TCG 2274 Phe His Ser Gly Val Arg Asp Ala Glu Leu Ala Lys Thr Met Arg Ser 75 80 85 GGC CAC AGC GAC TTC GGC ATG CTC GAG ATG GGG CCC TGC CTG CAC ACC 2322 Gly His Ser Asp Phe Gly Met Leu Glu Met Gly Pro Cys Leu His Thr 90 95 100 ATC GAA GGC GTG GTC AGG GTG ACG CCG CTG ACC GTG GAC ATC AAT ATC 2370 Ile Glu Gly Val Val Arg Val Thr Pro Leu Thr Val Asp Ile Asn Ile 105 110 115 GCC GCC GGT GTC TAC CAT GGC GAA TTC CTC TGG GAA GAC TCC TTC GAG 2418 Ala Ala Gly Val Tyr His Gly Glu Phe Leu Trp Glu Asp Ser Phe Glu 120 125 130 135 GGC GAT GTG CAC CGG CAG ATG TTC GGC GTG GCG CAG GCG CCG GTG TGC 2466 Gly Asp Val His Arg Gln Met Phe Gly Val Ala Gln Ala Pro Val Cys 140 145 150 TGG ATG CAG ATC GGC TAC GCC ACC GGC TAT ACC TCG GCG CTG ATG GGC 2514 Trp Met Gln Ile Gly Tyr Ala Thr Gly Tyr Thr Ser Ala Leu Met Gly 155 160 165 AAG ACC ATC CTC TAT CGC GAA CTG GAA TGC GTG GGC TGC GGG CAT CCC 2562 Lys Thr Ile Leu Tyr Arg Glu Leu Glu Cys Val Gly Cys Gly His Pro 170 175 180 CAC TGC CGC ATC CTG GGC AAG CCG CTG GAG CAG TGG GAG GAC GGC GAG 2610 His Cys Arg Ile Leu Gly Lys Pro Leu Glu Gln Trp Glu Asp Gly Glu 185 190 195 GCC GAG CTC GCG CTG TAC CAG CCA GAC CCG GTG ATC GAT ACC ATC CTG 2658 Ala Glu Leu Ala Leu Tyr Gln Pro Asp Pro Val Ile Asp Thr Ile Leu 200 205 210 215 GCC TTG CAG AGC GAA GTG GAG CAA CTG CGC GCC CTG CAG CGC GCC AAC 2706 Ala Leu Gln Ser Glu Val Glu Gln Leu Arg Ala Leu Gln Arg Ala Asn 220 225 230 GAC CAG CCC GCC GAC CTG GTG GGC GGC TCG CCC GGC TTC CGC GCC GCC 2754 Asp Gln Pro Ala Asp Leu Val Gly Gly Ser Pro Gly Phe Arg Ala Ala 235 240 245 TGG AAC CTG CTG CAG CGC GCC GCC GGC AGC AGC GTG ACG GTG CTG CTG 2802 Trp Asn Leu Leu Gln Arg Ala Ala Gly Ser Ser Val Thr Val Leu Leu 250 255 260 CTG GGC GAG ACC GGG GTC GGC AAG GAG CGC TTC GCG CAA GCC CTG CAC 2850 Leu Gly Glu Thr Gly Val Gly Lys Glu Arg Phe Ala Gln Ala Leu His 265 270 275 GGT GTC AGC GCG CGT GCC GGC AAG CCC TTC GTG GCG GTG AAC TGC GCT 2898 Gly Val Ser Ala Arg Ala Gly Lys Pro Phe Val Ala Val Asn Cys Ala 280 285 290 295 GCC ATC CCC GAC GAA CTG ATC GAG TCC GAG TTG TTC GGC GTG GAA AAG 2946 Ala Ile Pro Asp Glu Leu Ile Glu Ser Glu Leu Phe Gly Val Glu Lys 300 305 310 GGC GCT TTC ACC GGC GCC CAC CAG TCA CGT GCC GGC CGC TTC GAG CGT 2994 Gly Ala Phe Thr Gly Ala His Gln Ser Arg Ala Gly Arg Phe Glu Arg 315 320 325 GCC CAC GGC GGC ACC CTG TTC CTG GAC GAA CTG GGC GAG CTG TCC GCC 3042 Ala His Gly Gly Thr Leu Phe Leu Asp Glu Leu Gly Glu Leu Ser Ala 330 335 340 TCG GCG CAG TCC AAG CTG CTG CGC GTG CTG CAG GAG GGC GAG GTG GAA 3090 Ser Ala Gln Ser Lys Leu Leu Arg Val Leu Gln Glu Gly Glu Val Glu 345 350 355 CGC GTC GGC GGC AAC GAG GCG CGC AAG GTC GAC GTG CGC CTG GTC GCC 3138 Arg Val Gly Gly Asn Glu Ala Arg Lys Val Asp Val Arg Leu Val Ala 360 365 370 375 GCC ACC AAT GTG GAC CTG GCC GAG GCG GTG AGG CAG GGC ACC TTC CGC 3186 Ala Thr Asn Val Asp Leu Ala Glu Ala Val Arg Gln Gly Thr Phe Arg 380 385 390 AAG GAC CTG TAC TAC CGG CTC AAC GTC TAC CCG GTC ACG ATC CCG CCG 3234 Lys Asp Leu Tyr Tyr Arg Leu Asn Val Tyr Pro Val Thr Ile Pro Pro 395 400 405 CTG CGT GAG CGG CTG GAC GAC ATC CGG CTG CTG GCG GAG CGC TTC ACC 3282 Leu Arg Glu Arg Leu Asp Asp Ile Arg Leu Leu Ala Glu Arg Phe Thr 410 415 420 GCG CGC TAC GGC GCC CGC CAC GGC AAG AAG ATC CTC GGC ATC ACC GAC 3330 Ala Arg Tyr Gly Ala Arg His Gly Lys Lys Ile Leu Gly Ile Thr Asp 425 430 435 CGC GCG CTG GCC GAA CTG CGC CGC TAC GAC TGG CCG GGC AAT GTG CGC 3378 Arg Ala Leu Ala Glu Leu Arg Arg Tyr Asp Trp Pro Gly Asn Val Arg 440 445 450 455 GAA CTG GAG AAC GTG ATC GAG CGC GGT GTG ATC CTG GCG GCC AAC GGC 3426 Glu Leu Glu Asn Val Ile Glu Arg Gly Val Ile Leu Ala Ala Asn Gly 460 465 470 GGC CAG ATC AGC GCC GAG CAA TTG TTC CTG CCC GGC GCC GAA GCG CCC 3474 Gly Gln Ile Ser Ala Glu Gln Leu Phe Leu Pro Gly Ala Glu Ala Pro 475 480 485 CCC GCG GTC GAC ACC ACG CCC AGG CTG GGC GAG CAA GGC GCG CTG CCC 3522 Pro Ala Val Asp Thr Thr Pro Arg Leu Gly Glu Gln Gly Ala Leu Pro 490 495 500 GGC CTG CGC GAA GCC GCG GTG CAT GGC CTG CTG GAC TAT ATG GCC GAG 3570 Gly Leu Arg Glu Ala Ala Val His Gly Leu Leu Asp Tyr Met Ala Glu 505 510 515 AAC GGC CTG GCG CTG GGC GAG GTC GAA AGC GTG CTG ATG GAG GCT GCC 3618 Asn Gly Leu Ala Leu Gly Glu Val Glu Ser Val Leu Met Glu Ala Ala 520 525 530 535 ATG CAG CGC GCG GAC GGC AAC CTG AGC CAG GCG GCG CGG CTG CTC GGG 3666 Met Gln Arg Ala Asp Gly Asn Leu Ser Gln Ala Ala Arg Leu Leu Gly 540 545 550 TTG ACG CGG CCG CAG CTG GCG TAC CGA TGG AAG ACG CGC GGC ACG CGC 3714 Leu Thr Arg Pro Gln Leu Ala Tyr Arg Trp Lys Thr Arg Gly Thr Arg 555 560 565 GGG TGAGGAGAGC AGGCCGGCAC GGCGCGAATC CCGATGCGCC GGACGAAGCC 3767 Gly ０CGAGATGC GCCAACACCA ATCGCCAAGC ACACGGTCTT GGCTCCCTCT CCCCGCACGG 3827 GGAGAGGGCG GGGGAGAGGG GTGGTTTAGC AAGGCACCAC ATCCAGCGAA GCCCTCGGTG 3887 TGGTCCAGCA CGCGAGCACA GCAACGAAGC CGACGGTGTG ATCCCACCCG CCGCGGCACA 3947 GCCAGCGCCT GCCCTCACCC CCGGCCCCTC TCCCGCAGGC GGGAGAGGGG AGCCAGCCGC 4007 CGCGGCGCAG CCCGTATCGC TCCGTCCGGA GCCGGCCGCC CCCACGCATT CCTCCGATTT 4067 GATCATTTGA TGCATCCCGC ACGTCAGCGC TGCGCCGGGG CCGGCGCGGC GCGGCCTGGC 4127 GATGCTGCGC CGCGTTCCGC CGTCCGGCCC GGCAGCCGTG CGCCCGGGCC CTTTTGGCAG 4187 GGCTTTGTTG TTGCGATGCG CAAGCACGGC GGCGGCAGCG CCCGCTGCCC GCAAACGGCC 4247 GCCTGGCGCG GCTTTTGATC ATTTGATCAA GTGCGCGGCG GCGCTTGATG AATTGATCGA 4307 GCGGTGGCGC AGCGGTCTCT CCGGGTTTGT ACGGAGCTGG CCGGGGCATG GCATCGCCGT 4367 CTGGACCGCA AACGTTGATC TGGCGCGCCT TGGCGCGAGC TGGCACGGTC TTCGCAATAG 4427 ACCGGGCAAG CACAACGCGA TGCGGCACGG CAGCACGCGA ATGCCACGCA CCAGGAGACG 4487 CC ATG ATC AAT CAA TCG GTC CCG CTG TTC GAA GCC ACG CCG CGC TAC 4534 Met Ile Asn Gln Ser Val Pro Leu Phe Glu Ala Thr Pro Arg Tyr 570 575 580 GTG CGC GTG GAA GGC CGC ACG CCG GAG GGC TTC GTG CTG TTT GCC TTC 4582 Val Arg Val Glu Gly Arg Thr Pro Glu Gly Phe Val Leu Phe Ala Phe 585 590 595 AGC GTC GCC GAT CCC GAC CTG AAC GTC GAG CTC ATC CTC CCG GAG CCG 4630 Ser Val Ala Asp Pro Asp Leu Asn Val Glu Leu Ile Leu Pro Glu Pro 600 605 610 615 ATG TTC GAA GCC TTC TGC AGC GCC AAC CAT GTG CGC TTC CTG CCG GCA 4678 Met Phe Glu Ala Phe Cys Ser Ala Asn His Val Arg Phe Leu Pro Ala 620 625 630 CAG GCG GCC TGC GCC GAC AGC GGC GAG GAC GCC TAGCAGGCAC CACCGGGCAC 4731 Gln Ala Ala Cys Ala Asp Ser Gly Glu Asp Ala 635 640 ACACGACGGG CCGCCAGAGC CCTCACCGCC GGCGCAGCCG CGCCGGCACC ACGATACAAA 4791 CCAGGAGACA ACGCG ATG CAA GTC GAT ATC AAG ACG CAG CAG ATC CAG CCG 4842 Met Gln Val Asp Ile Lys Thr Gln Gln Ile Gln Pro 645 650 CTG CGC CAG ACC TAC GGC CAC GTG GCG CGA CGC TTC GGC GAC AAG CCG 4890 Leu Arg Gln Thr Tyr Gly His Val Ala Arg Arg Phe Gly Asp Lys Pro 655 660 665 670 GCC TCG CGC TAC CAG GAG GCG ACC TAC GAC GTC CAG TCC GAG GTC AAC 4938 Ala Ser Arg Tyr Gln Glu Ala Thr Tyr Asp Val Gln Ser Glu Val Asn 675 680 685 TTC CAC TAC CGC CCG ACC TGG GCG CCG CAG TTC GAA CTG TAC GAC AAG 4986 Phe His Tyr Arg Pro Thr Trp Ala Pro Gln Phe Glu Leu Tyr Asp Lys 690 695 700 CGC CGC ACC GCC ATC GAG ATG GCG GAC TGG TAC GCG CTG AAG GAT CCG 5034 Arg Arg Thr Ala Ile Glu Met Ala Asp Trp Tyr Ala Leu Lys Asp Pro 705 710 715 CGC CAG TAC TAC TAC GGT GCC TAC GTC GGT ACG CGC GGG CGC CAG CAG 5082 Arg Gln Tyr Tyr Tyr Gly Ala Tyr Val Gly Thr Arg Gly Arg Gln Gln 720 725 730 GAA GCG GCC GAG AAG AAC TTC GCC TTC GTC GAG AAG CGC GGG CTG CTG 5130 Glu Ala Ala Glu Lys Asn Phe Ala Phe Val Glu Lys Arg Gly Leu Leu 735 740 745 750 CAA GCG CTG CCG CTG GAA TGG CGC GAG CGC CTG ACC GAT GGC CTG CTG 5178 Gln Ala Leu Pro Leu Glu Trp Arg Glu Arg Leu Thr Asp Gly Leu Leu 755 760 765 CCG CTG CGC CAC GTG GAA TGG GCG GCG AAC ATG AAC AAC TTC TAC TGC 5226 Pro Leu Arg His Val Glu Trp Ala Ala Asn Met Asn Asn Phe Tyr Cys 770 775 780 GCC GAC TAT GGC TGG GGC ACG GCC ATC ACG CAG GCC TGC ACC TAC TGC 5274 Ala Asp Tyr Gly Trp Gly Thr Ala Ile Thr Gln Ala Cys Thr Tyr Cys 785 790 795 GCG ATG GAC CGG CTG GGC ATC GCC CAA TAC CTG TCG CGC ATC GGC CTG 5322 Ala Met Asp Arg Leu Gly Ile Ala Gln Tyr Leu Ser Arg Ile Gly Leu 800 805 810 CTG CTG GAC GGC AAC ACG GGC GCT GCG CTG GAG CGC GCG CGC GCG GCC 5370 Leu Leu Asp Gly Asn Thr Gly Ala Ala Leu Glu Arg Ala Arg Ala Ala 815 820 825 830 TGG CTG GAG AGC GAG GCG TGG CAG CCG CTG CGC CGC TTC GTC GAG CAC 5418 Trp Leu Glu Ser Glu Ala Trp Gln Pro Leu Arg Arg Phe Val Glu His 835 840 845 AGC TTC GTC ATC GAG GAC TGG TTC CAG ACC TTC GTT ACG CAG AAC CTG 5466 Ser Phe Val Ile Glu Asp Trp Phe Gln Thr Phe Val Thr Gln Asn Leu 850 855 860 GCG CTC GAC GGG CTG CTC TAT CCG CTG GTC TAC CAG CAT GCC GAC GCG 5514 Ala Leu Asp Gly Leu Leu Tyr Pro Leu Val Tyr Gln His Ala Asp Ala 865 870 875 GCC ATC GTG CGC GCC TGC GGC ACC GGG CTG GCC GTG GTG ACG GAA TTC 5562 Ala Ile Val Arg Ala Cys Gly Thr Gly Leu Ala Val Val Thr Glu Phe 880 885 890 ATG AAC GAC TGG CGC GAC GAG CAC GTG CGC TGG GTC GAT GCG GTG GTG 5610 Met Asn Asp Trp Arg Asp Glu His Val Arg Trp Val Asp Ala Val Val 895 900 905 910 CAG ACG GCG GCC GCC GAG TCC GAG GCC AAC CGC GCG CTG CTG TCG CGC 5658 Gln Thr Ala Ala Ala Glu Ser Glu Ala Asn Arg Ala Leu Leu Ser Arg 915 920 925 TGG GCC GGC GAG GCG CGC GCG CAG GCG GCC GAG GCG CTG CGG CCG GTG 5706 Trp Ala Gly Glu Ala Arg Ala Gln Ala Ala Glu Ala Leu Arg Pro Val 930 935 940 GCG GCC ATC CTG CTG GGT GGC GAA GGA GAG CAG GCG ATC GCC CTG TGC 5754 Ala Ala Ile Leu Leu Gly Gly Glu Gly Glu Gln Ala Ile Ala Leu Cys 945 950 955 CTC GAA CAA TTC GAC GCC CGG CTG GCC AAG CTC GGC GTG GCC GCC 5799 Leu Glu Gln Phe Asp Ala Arg Leu Ala Lys Leu Gly Val Ala Ala 960 965 970 TGAGGAGACC GCC ATG AGC GCC AAC GTC TAC ATC GCC CTG CAG AAC AAC 5848 Met Ser Ala Asn Val Tyr Ile Ala Leu Gln Asn Asn 975 980 985 GAC GAC ACC CGT CCC ATC ATC GAG GCC ATC GCC GAG GCC AAC CCG CTC 5896 Asp Asp Thr Arg Pro Ile Ile Glu Ala Ile Ala Glu Ala Asn Pro Leu 990 995 1000 GCC GTG GTG TCG CAG TTT CCC GCC ATG GTC AAG ATC GAC GCC CCG GGG 5944 Ala Val Val Ser Gln Phe Pro Ala Met Val Lys Ile Asp Ala Pro Gly 1005 1010 1015 CGC CTG ACC ATC GTG CGC GAG CTG GTG GCC GAC AAG CTC GGC CGC GAC 5992 Arg Leu Thr Ile Val Arg Glu Leu Val Ala Asp Lys Leu Gly Arg Asp 1020 1025 1030 TGG GAC CTG CAG GAG ATC CAC CTG AAC CTG ATC TCG CTG TCC GGC AAC 6040 Trp Asp Leu Gln Glu Ile His Leu Asn Leu Ile Ser Leu Ser Gly Asn 1035 1040 1045 ATC GAC GAG ACC GAC GAA GCC TTC ACG CTG CAC TGG AGC GCC 6082 Ile Asp Glu Thr Asp Glu Ala Phe Thr Leu His Trp Ser Ala 1050 1055 1060 TGAGCACGGC TCGGCGCTCC GCACACAAGC AACGGCAACC GCACGCCATA CCAGAGCATA 6142 CGGAGACATC ATG GAC GCA CGC AAG AAG CTC AAC CTG CGC GAG AAG TAC 6191 Met Asp Ala Arg Lys Lys Leu Asn Leu Arg Glu Lys Tyr 1065 1070 1075 GCG ACG ATG ACG CGC GAC CTC GGC TGG GAA ACC ACC TAC GAG CCG ATG 6239 Ala Thr Met Thr Arg Asp Leu Gly Trp Glu Thr Thr Tyr Glu Pro Met 1080 1085 1090 GAC AAG GTC TTT CCC TTC GAC AAG TAC GAA GGC ATC AAG ATC CAC GAC 6287 Asp Lys Val Phe Pro Phe Asp Lys Tyr Glu Gly Ile Lys Ile His Asp 1095 1100 1105 TGG GAC AAG TGG GAG GAT CCC TTC CGC ATG ACC ATG GAC GCG TAC TGG 6335 Trp Asp Lys Trp Glu Asp Pro Phe Arg Met Thr Met Asp Ala Tyr Trp 1110 1115 1120 AAG TAC CAG TCG GAG AAG GAG CGC AAG CTG TAC GCG ATC ATC GAC TCC 6383 Lys Tyr Gln Ser Glu Lys Glu Arg Lys Leu Tyr Ala Ile Ile Asp Ser 1125 1130 1135 1140 TTC GTG CAG AAC AAC GGC CAC CTC AAC GTC TCG GAC GCG CGC TAC CTG 6431 Phe Val Gln Asn Asn Gly His Leu Asn Val Ser Asp Ala Arg Tyr Leu 1145 1150 1155 AAC GCG CTG CGG CTG TTC CTG ACC GGC GTG ACG CCG CTG GAG TAC GCC 6479 Asn Ala Leu Arg Leu Phe Leu Thr Gly Val Thr Pro Leu Glu Tyr Ala 1160 1165 1170 GCG CAC CGC GGC TAT GCC CAC CTG GGG CGC CAT TTC CGC GGC GCC GGC 6527 Ala His Arg Gly Tyr Ala His Leu Gly Arg His Phe Arg Gly Ala Gly 1175 1180 1185 GCG CGC GTG GCG GCG CAG ATG CAG TCG ATC GAC GAG CTG CGC CAC GCG 6575 Ala Arg Val Ala Ala Gln Met Gln Ser Ile Asp Glu Leu Arg His Ala 1190 1195 1200 CAG ACC CAG TTG CAC ACG CTG TCG GTC TAC AAC AAG TAT TTC CAC GGC 6623 Gln Thr Gln Leu His Thr Leu Ser Val Tyr Asn Lys Tyr Phe His Gly 1205 1210 1215 1220 TTC GGC GAA TGG CGC CAC ATG CAC GAC CGC GTC TGG TAC CTG TCG GTG 6671 Phe Gly Glu Trp Arg His Met His Asp Arg Val Trp Tyr Leu Ser Val 1225 1230 1235 CCC AAG TCC TAC TTC GAG GAC GCG ATG AGC GCG GGG CCG TTC GAG TTC 6719 Pro Lys Ser Tyr Phe Glu Asp Ala Met Ser Ala Gly Pro Phe Glu Phe 1240 1245 1250 ATC ACC GCG ATC TCG TTC TCC TTC GAG TAC GTG CTG ACC AAC CTG CTG 6767 Ile Thr Ala Ile Ser Phe Ser Phe Glu Tyr Val Leu Thr Asn Leu Leu 1255 1260 1265 TTC ATG CCC TTC ATG TCG GGC GCT GCC TAC AAC GGC GAC ATG GCC ACC 6815 Phe Met Pro Phe Met Ser Gly Ala Ala Tyr Asn Gly Asp Met Ala Thr 1270 1275 1280 GTG ACC TTC GGC TTT TCC GCG CAG TCG GAC GAG TCG CGC CAC ATG ACG 6863 Val Thr Phe Gly Phe Ser Ala Gln Ser Asp Glu Ser Arg His Met Thr 1285 1290 1295 1300 CTG GGC CTG GAG GTG GTC AAG TTC CTG TGC GAG CAG GAC CCG GAC AAC 6911 Leu Gly Leu Glu Val Val Lys Phe Leu Cys Glu Gln Asp Pro Asp Asn 1305 1310 1315 ATC CCG CTC CTG CAG AAG TGG CTC GAC AAA TGG TTC TGG CGC GGC TTC 6959 Ile Pro Leu Leu Gln Lys Trp Leu Asp Lys Trp Phe Trp Arg Gly Phe 1320 1325 1330 CGC CTG CTG ACG CTG GTC GGC ATG ATG ATG GAC TAC ATG CTG CCG CGC 7007 Arg Leu Leu Thr Leu Val Gly Met Met Met Asp Tyr Met Leu Pro Arg 1335 1340 1345 CGC GTG ATG TCC TGG GCC GAG GCC TGG GAG ATG TAC TTC GAG CAG GCC 7055 Arg Val Met Ser Trp Ala Glu Ala Trp Glu Met Tyr Phe Glu Gln Ala 1350 1355 1360 GGC GGG GCG CTC TTC AAG GAC CTG GAG CGC TAC GGC CTG CGC CTG CCC 7103 Gly Gly Ala Leu Phe Lys Asp Leu Glu Arg Tyr Gly Leu Arg Leu Pro 1365 1370 1375 1380 AAG TAC CAC GAC GTC GCC ACC AAG ACC AAG GAC CGC ATC ACC CAC GAG 7151 Lys Tyr His Asp Val Ala Thr Lys Thr Lys Asp Arg Ile Thr His Glu 1385 1390 1395 GCA TGG GGC ACC TTC TAC AAC TAC GCC GCC GCC GCC GGC TTC CAC ACC 7199 Ala Trp Gly Thr Phe Tyr Asn Tyr Ala Ala Ala Ala Gly Phe His Thr 1400 1405 1410 TGG ATC CCG AAG CCC GAC GAG ATG GCG TGG CTG GAC GAG AAG TAT CCG 7247 Trp Ile Pro Lys Pro Asp Glu Met Ala Trp Leu Asp Glu Lys Tyr Pro 1415 1420 1425 CAG ACC TTC GCG CGC TAC TAC AAG CCG CGC CTG GAC TAC TGG CAA GAG 7295 Gln Thr Phe Ala Arg Tyr Tyr Lys Pro Arg Leu Asp Tyr Trp Gln Glu 1430 1435 1440 CGC CAG CAG GCC GGC GAA CGC TTC TAC AAC GGC ACG CTG CCG ATG CTG 7343 Arg Gln Gln Ala Gly Glu Arg Phe Tyr Asn Gly Thr Leu Pro Met Leu 1445 1450 1455 1460 TGC CAG ACC TGC CAG ATC CCG ATG GTG TTC TCC GAG CCG GAC GAT CCG 7391 Cys Gln Thr Cys Gln Ile Pro Met Val Phe Ser Glu Pro Asp Asp Pro 1465 1470 1475 ACG CAG ACC TGC TAC CGC GAG AGC AGC TAC CAC GGC ATG AAG TTC CAC 7439 Thr Gln Thr Cys Tyr Arg Glu Ser Ser Tyr His Gly Met Lys Phe His 1480 1485 1490

【００４４】 TTC TGC TCG GAC GGC TGC AAG GAC ATC TTC GAC GGC GAG CCC GAG AAG 7487 Phe Cys Ser Asp Gly Cys Lys Asp Ile Phe Asp Gly Glu Pro Glu Lys 1495 1500 1505 TAT GCC CAG GCC TGG CTG CCG GTG CAC CAG ATC TAC CAG GGC AAC TGC 7535 Tyr Ala Gln Ala Trp Leu Pro Val His Gln Ile Tyr Gln Gly Asn Cys 1510 1515 1520 GGC GGT GCC TCG CTG GAG GAC GTG CTC AAG TGG TAC CGG CTC AAC CTG 7583 Gly Gly Ala Ser Leu Glu Asp Val Leu Lys Trp Tyr Arg Leu Asn Leu 1525 1530 1535 1540 GGT GCC GAC AAC CTC GAC TTC GAA GGC TCG CAG GAC CAG AAG AAC TGG 7631 Gly Ala Asp Asn Leu Asp Phe Glu Gly Ser Gln Asp Gln Lys Asn Trp 1545 1550 1555 AAT GCC TGG AAG GGC GTG CCG CAC CCG GCT GCC TGAGCGCCGC ACCGGACCCC 7684 Asn Ala Trp Lys Gly Val Pro His Pro Ala Ala 1560 1565 AAGCATAAGG AGACACATC ATG TCC GTC GCA TCC ATC GGT GAA TAC CGT TTC 7736 Met Ser Val Ala Ser Ile Gly Glu Tyr Arg Phe 1570 1575 GAG CCC GCG GAC CGC GAG GCC GTG TTC CAC GGC AAC CGC CTG CTC TAC 7784 Glu Pro Ala Asp Arg Glu Ala Val Phe His Gly Asn Arg Leu Leu Tyr 1580 1585 1590 GTC GGC TGG GAC CAG CAC CTG CTG TTC TGC GCG CCG CAC TGC TTC CCC 7832 Val Gly Trp Asp Gln His Leu Leu Phe Cys Ala Pro His Cys Phe Pro 1595 1600 1605 1610 TTC CCG CCC GCC ATG CGC ATG CGC GAG GTG GTC GAG CAG GTA CTG CCC 7880 Phe Pro Pro Ala Met Arg Met Arg Glu Val Val Glu Gln Val Leu Pro 1615 1620 1625 GGC GTC TAC GGC TAC CAC CCC GAC TTC GGC CGC ATC GAC TGG AGC CGG 7928 Gly Val Tyr Gly Tyr His Pro Asp Phe Gly Arg Ile Asp Trp Ser Arg 1630 1635 1640 GTC GAG TGG CTG CGC GGC GGC CGG CCC TGG CAG CCC GAC CTG GAC GCC 7976 Val Glu Trp Leu Arg Gly Gly Arg Pro Trp Gln Pro Asp Leu Asp Ala 1645 1650 1655 ACG CTG GAG GAG AAC GGC CTC GGC CAC AAG GAA GTG ATC CGC TTC CGC 8024 Thr Leu Glu Glu Asn Gly Leu Gly His Lys Glu Val Ile Arg Phe Arg 1660 1665 1670 ACG CCC GGC CTG GAC GGT ATC GGC GGC AGC GCG AGC TGAGCGCCGC 8070 Thr Pro Gly Leu Asp Gly Ile Gly Gly Ser Ala Ser 1675 1680 1685 CGCGCAAGGA GACGCAAG ATG TAT TCG CTG ACC ATC GAG CCG ATC GGG CAG 8121 Met Tyr Ser Leu Thr Ile Glu Pro Ile Gly Gln 1690 1695 ACC ATC CCG ATC GCA CCC GGG CAG ACC GTG CTG GAT GCC TGC CTG CGC 8169 Thr Ile Pro Ile Ala Pro Gly Gln Thr Val Leu Asp Ala Cys Leu Arg 1700 1705 1710 AGC GGC GTG TGG CTG CCG CAC GCC TGT TGC CAC GGC TTG TGC GCC ACC 8217 Ser Gly Val Trp Leu Pro His Ala Cys Cys His Gly Leu Cys Ala Thr 1715 1720 1725 TGC AAG GTG CAG GTG GTG GAG GGC GAG GTC GAC CAG GGC GAG GCC TCG 8265 Cys Lys Val Gln Val Val Glu Gly Glu Val Asp Gln Gly Glu Ala Ser 1730 1735 1740 1745 AGC TTC GCG CTG ATG GAC TTC GAG CGC GAC AAC GGC CAG TGC CTG GCC 8313 Ser Phe Ala Leu Met Asp Phe Glu Arg Asp Asn Gly Gln Cys Leu Ala 1750 1755 1760 TGC TGC GCC ACC GCG CAG TCG GAC CTG ACC ATC GAG GCC GAC ATC GAG 8361 Cys Cys Ala Thr Ala Gln Ser Asp Leu Thr Ile Glu Ala Asp Ile Glu 1765 1770 1775 GAG GAC GCC GAT GCG CTG GGC TTA CCG TTG GCC GAC TAC GAG GCC GAA 8409 Glu Asp Ala Asp Ala Leu Gly Leu Pro Leu Ala Asp Tyr Glu Ala Glu 1780 1785 1790 GTG GTG GAC GTG CGC GCG CTT ACA CCG ACC ATC CGC GGC ATC TGG CTG 8457 Val Val Asp Val Arg Ala Leu Thr Pro Thr Ile Arg Gly Ile Trp Leu 1795 1800 1805 CGG GTC AAG GGC GGC GCG AAG GTG GCA TTC CAG GCG GGC CAG TAC CTG 8505 Arg Val Lys Gly Gly Ala Lys Val Ala Phe Gln Ala Gly Gln Tyr Leu 1810 1815 1820 1825 AAC CTG CAG GTG CCG GGC TGC GAC CAG CCG CGC GCC TTC TCG CTG GCC 8553 Asn Leu Gln Val Pro Gly Cys Asp Gln Pro Arg Ala Phe Ser Leu Ala 1830 1835 1840 AAC GCG CCG GAC GAG GAA CTG GTG GAA CTG CAT GTG CGC AAG GTG GAG 8601 Asn Ala Pro Asp Glu Glu Leu Val Glu Leu His Val Arg Lys Val Glu 1845 1850 1855 GGC GGC CAG GCC ACC GGC TAC CTG CAC GAG CGG CTG GCG GTC GGC GAC 8649 Gly Gly Gln Ala Thr Gly Tyr Leu His Glu Arg Leu Ala Val Gly Asp 1860 1865 1870 GCC TTG CGC TTC TCC GCG CCC TAC GGC CGC TTC TTC GTG CGC CGC TCG 8697 Ala Leu Arg Phe Ser Ala Pro Tyr Gly Arg Phe Phe Val Arg Arg Ser 1875 1880 1885 GCA CAG GCG CCG ATG CTG TTC CTG GCG GGC GGC TCC GGG CTG TCG AGC 8745 Ala Gln Ala Pro Met Leu Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Leu Ser Ser 1890 1895 1900 1905 CCG CGC GCG ATG ATC CGC GAA CTG CTG GCG GCG GGC GAG ACC TTG CCG 8793 Pro Arg Ala Met Ile Arg Glu Leu Leu Ala Ala Gly Glu Thr Leu Pro 1910 1915 1920 ATC ACG CTG GTG CAG GGC GCG CGC AAC CGG GCC GAG CTG TAC GGC GAG 8841 Ile Thr Leu Val Gln Gly Ala Arg Asn Arg Ala Glu Leu Tyr Gly Glu 1925 1930 1935 GAC GAG TTC CGC GCG CTG GCC GAA CGC CAT CCG AAC TTC CGC TAC GTG 8889 Asp Glu Phe Arg Ala Leu Ala Glu Arg His Pro Asn Phe Arg Tyr Val 1940 1945 1950 CCG GCG CTG TCC GAC GAG CCG GCC GAC AGT GCC TGG CAG GGC GCG CGT 8937 Pro Ala Leu Ser Asp Glu Pro Ala Asp Ser Ala Trp Gln Gly Ala Arg 1955 1960 1965 GGC TTC GCG CAC GAG GCG CTG GCC GCG CTC TAT GCC GAT GGC GAC GGG 8985 Gly Phe Ala His Glu Ala Leu Ala Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Asp Gly 1970 1975 1980 1985 CGC GCG GAC TTC CGC GGC CAC AAG GCC TAC CTG TGC GGG CCG CCG CCG 9033 Arg Ala Asp Phe Arg Gly His Lys Ala Tyr Leu Cys Gly Pro Pro Pro 1990 1995 2000 ATG ATC GAG GCC TGC ATC CGC ACC CTG ATG CAG GGC CGG CTG TTC GAG 9081 Met Ile Glu Ala Cys Ile Arg Thr Leu Met Gln Gly Arg Leu Phe Glu 2005 2010 2015 GCG GAC ATC CAT ACC GAG AAG TTC CTG TCG GCG AGC GAT GCG CAG AAC 9129 Ala Asp Ile His Thr Glu Lys Phe Leu Ser Ala Ser Asp Ala Gln Asn 2020 2025 2030 AGC GCG CGC AGC CCG CTG TTC AAG ATC TGACGGGCAA AGCGCACAGA 9176 Ser Ala Arg Ser Pro Leu Phe Lys Ile 2035 2040 ACGCACAAAG CGCGCAAAGG AGACAGAC ATG CAT ACG GTG GAG ATA GCG GAC 9228 Met His Thr Val Glu Ile Ala Asp 2045 2050 AGC GGG CAG CGC TAC CCC TGC GAC CCG GGG CAG AAC CTG CTG CGT GCC 9276 Ser Gly Gln Arg Tyr Pro Cys Asp Pro Gly Gln Asn Leu Leu Arg Ala 2055 2060 2065 ATG GAG GTG CTG GGG CAG CGC GGC ATC CCC GCG GGA TGC CGC GGC GGC 9324 Met Glu Val Leu Gly Gln Arg Gly Ile Pro Ala Gly Cys Arg Gly Gly 2070 2075 2080 GGC TGC GGC GTG TGC AAG GTC CGC ATC GAA TCG GGG CGC TAC CGC ACC 9372 Gly Cys Gly Val Cys Lys Val Arg Ile Glu Ser Gly Arg Tyr Arg Thr 2085 2090 2095 GGC AAG ATG AGC CGC GCC TGC CTG TCG GAG GCA GAG CAA GGG CAG GGG 9420 Gly Lys Met Ser Arg Ala Cys Leu Ser Glu Ala Glu Gln Gly Gln Gly 2100 2105 2110 CTG GTG CTG GCC TGC AAG GCC TTT CCC GAC AGC GAT ATC CGC TTG CGG 9468 Leu Val Leu Ala Cys Lys Ala Phe Pro Asp Ser Asp Ile Arg Leu Arg 2115 2120 2125 2130 CCG GCC GCG CTG CTG GCG CGT TGC CTG GAC AAG GCG CGC TAGCGGCGGT 9517 Pro Ala Ala Leu Leu Ala Arg Cys Leu Asp Lys Ala Arg 2135 2140 CGCAGGCGAG CAAGCGAAAG CGCCGCCGCG AGGGCGGTGA CGACCAACAC GGATCGCAGA 9577 TCCGGACATC AAGGAGACGA AC ATG GCA TTG ACT GGC GTA TTG CGC CCG GGG 9629 Met Ala Leu Thr Gly Val Leu Arg Pro Gly 2145 2150 CAC GTG GCA TTG CGC GTG CTG GAA CTG GAA CCG GCG CTG AAA CAC TAT 9677 His Val Ala Leu Arg Val Leu Glu Leu Glu Pro Ala Leu Lys His Tyr 2155 2160 2165 ATC GAC GTG CTC GGC CTG CAG GAG ACC GGC CGC GAC GCG CAG GGC CGC 9725 Ile Asp Val Leu Gly Leu Gln Glu Thr Gly Arg Asp Ala Gln Gly Arg 2170 2175 2180 2185 GTC TAC CTG AAG GCC TGG GAC GAG CAC GAC CAT CAC AGC GTG GTG CTG 9773 Val Tyr Leu Lys Ala Trp Asp Glu His Asp His His Ser Val Val Leu 2190 2195 2200 CGC GAG GCC GAC AGC CCG GGC ATG GAC TAC ATG GGC TTC CGC GTC GAC 9821 Arg Glu Ala Asp Ser Pro Gly Met Asp Tyr Met Gly Phe Arg Val Asp 2205 2210 2215 AGC GAT GCC ACG CTG GAG CGG CTG GCG GGC GAA GTG GCC GCC AGC GGG 9869 Ser Asp Ala Thr Leu Glu Arg Leu Ala Gly Glu Val Ala Ala Ser Gly 2220 2225 2230 CTG GCG CAG GAC TGC GCC TGG ATC CCC GCC GGC GAG CAC CTG CGC ACC 9917 Leu Ala Gln Asp Cys Ala Trp Ile Pro Ala Gly Glu His Leu Arg Thr 2235 2240 2245 GGC CGG CGC TTC CGC TTC ACC ATT CCG ACC GGC CAT GCC ATC GAG CTG 9965 Gly Arg Arg Phe Arg Phe Thr Ile Pro Thr Gly His Ala Ile Glu Leu 2250 2255 2260 2265 TTC GCG GAC AAG GAC AAG CTC GGC TGC CAG ACC GGC GAC CTG AAT CCG 10013 Phe Ala Asp Lys Asp Lys Leu Gly Cys Gln Thr Gly Asp Leu Asn Pro 2270 2275 2280 GAC CCC TGG CCG GAC GAC CTG CGC GGC ATG GCG CCG AGC CGT TTC GAC 10061 Asp Pro Trp Pro Asp Asp Leu Arg Gly Met Ala Pro Ser Arg Phe Asp 2285 2290 2295 CAC TGC CTG CTG TAC GGC GAC GAC CTC AAC GGC ACG GTC AAG CTG TTC 10109 His Cys Leu Leu Tyr Gly Asp Asp Leu Asn Gly Thr Val Lys Leu Phe 2300 2305 2310 CGT GAC GTG CTG GGC TTC TCG CTG GCC GAG GAG GTG GTG GCG GGG CCG 10157 Arg Asp Val Leu Gly Phe Ser Leu Ala Glu Glu Val Val Ala Gly Pro 2315 2320 2325 GAG CGG ATG GTG ATC GGC GCC TTC CTG ACC TGC TCG AAC AAG GCG CAC 10205 Glu Arg Met Val Ile Gly Ala Phe Leu Thr Cys Ser Asn Lys Ala His 2330 2335 2340 2345 GAC ATC GCC TTC ATC CGC CAC GCG GAG AAG AAC CGC TTC CAT CAC GCT 10253 Asp Ile Ala Phe Ile Arg His Ala Glu Lys Asn Arg Phe His His Ala 2350 2355 2360 TCG TTC CAG CTC GAC AAC TGG AGC GAG GTG CTG AAG GCG GCC GAC ATC 10301 Ser Phe Gln Leu Asp Asn Trp Ser Glu Val Leu Lys Ala Ala Asp Ile 2365 2370 2375 ATC TCC AAG CGC GAT GTG TCG CTC GAC ATC GGC CCG ACC CGG CAC GGC 10349 Ile Ser Lys Arg Asp Val Ser Leu Asp Ile Gly Pro Thr Arg His Gly 2380 2385 2390 ATC ACG CGC GGC GCC ACC ATC TAC TTC TTC GAC CCC TCG GGC AAC CGC 10397 Ile Thr Arg Gly Ala Thr Ile Tyr Phe Phe Asp Pro Ser Gly Asn Arg 2395 2400 2405 AAC GAG GTC TTC GCC GGC GGC TAT ATC CAC TAC CCG GAC AAG CCG ACC 10445 Asn Glu Val Phe Ala Gly Gly Tyr Ile His Tyr Pro Asp Lys Pro Thr 2410 2415 2420 2425 ATC ACC TGG ACC GAT AAC GAG CTC GGG CGG GCG ATT TTC TAT CAC GAC 10493 Ile Thr Trp Thr Asp Asn Glu Leu Gly Arg Ala Ile Phe Tyr His Asp 2430 2435 2440 CGC AAG CTC AAT GAT GCC TTC TTG AAT GTG TTG ACC TGAGGGGGGA 10539 Arg Lys Leu Asn Asp Ala Phe Leu Asn Val Leu Thr 2445 2450 GTTTTCGAAT GGGGTGGTGC TCGGCATCGT GCGGGTCATC GCATGACGCT GGCGCCAGCC 10599 CTCACCCCCA AGCCCTCTCC CGCGAGCGGG AGAGGGGAGC CAGGTTCATC GCGGGCGGGG 10659 GACGTCGCTC TGGCGAGGGT TTGCTCCCCT CTCCCATGCA ATGGGAGAGG GGCCGGGGGT 10719 GAGGGCGGGC GATTGCCGTG GCGAAGGCCT GCGTGGTTCC CCGGCCCTCT GGGAAAGCGG 10779 AGCGCACCGG GAACCGAGCG GACGACAGAA GCAAGCATCC CCCGCCATAC CCAAGCCGCA 10839 ACAAGACAAG CACC ATG GAA GAG TTC CAG GAC TTC ATC AAC GGC CAG TGG 10889 Met Glu Glu Phe Gln Asp Phe Ile Asn Gly Gln Trp 2455 2460 2465 GTT GCC ACC GGC CGC CAA TTT GAC GAC CGC AAC CCG GTT GAC AAC AGC 10937 Val Ala Thr Gly Arg Gln Phe Asp Asp Arg Asn Pro Val Asp Asn Ser 2470 2475 2480 CTG ATC GGG CGC GTG CAC GAA GCC GGC CGC GCC GAG GTA GAG GCC GCG 10985 Leu Ile Gly Arg Val His Glu Ala Gly Arg Ala Glu Val Glu Ala Ala 2485 2490 2495 GTG GCC GCC GCG CGT GCC GCG CTC GCG GGT CCC TGG GGC CGC ATG ACG 11033 Val Ala Ala Ala Arg Ala Ala Leu Ala Gly Pro Trp Gly Arg Met Thr 2500 2505 2510 GTG GCC CAG CGC GTG GAG CTG CTG CAC GCG GTG GCC GAC GGC ATC AAC 11081 Val Ala Gln Arg Val Glu Leu Leu His Ala Val Ala Asp Gly Ile Asn 2515 2520 2525 CGC CGC TTC GAC GAC TTC CTG CAG GCG GAG ATC GCC GAC ACC GGC AAG 11129 Arg Arg Phe Asp Asp Phe Leu Gln Ala Glu Ile Ala Asp Thr Gly Lys 2530 2535 2540 2545 CCG CTG TCG CTG GCC AGC CAC GTC GAC ATC CCG CGC GGC GCG GCC AAC 11177 Pro Leu Ser Leu Ala Ser His Val Asp Ile Pro Arg Gly Ala Ala Asn 2550 2555 2560 TTC AAG GTC TTC GCC GAC CTG ATC AAG AAC GTG CCG ACC GAG AGC TTC 11225 Phe Lys Val Phe Ala Asp Leu Ile Lys Asn Val Pro Thr Glu Ser Phe 2565 2570 2575 GCC ATG GCC ACG CCG GAT GGC GGC GAG GCG GTC AAC TAT GCG GTG CGC 11273 Ala Met Ala Thr Pro Asp Gly Gly Glu Ala Val Asn Tyr Ala Val Arg 2580 2585 2590 ACA CCG CGC GGA GTG ATC GGC GTG GTG TGC CCG TGG AAC CTG CCG CTG 11321 Thr Pro Arg Gly Val Ile Gly Val Val Cys Pro Trp Asn Leu Pro Leu 2595 2600 2605 CTG CTG ATG ACG TGG AAG GTC GGC CCG GCG CTG GCC TGC GGT AAC ACG 11369 Leu Leu Met Thr Trp Lys Val Gly Pro Ala Leu Ala Cys Gly Asn Thr 2610 2615 2620 2625 GTG GTG GTC AAG CCC TCG GAA GAG ACG CCC GCC ACG GCC ACG CTG CTG 11417 Val Val Val Lys Pro Ser Glu Glu Thr Pro Ala Thr Ala Thr Leu Leu 2630 2635 2640 GGC GAG GTG ATG AAC GAG GTG GGC GTG CCG CCC GGT GTC TAC AAC GTG 11465 Gly Glu Val Met Asn Glu Val Gly Val Pro Pro Gly Val Tyr Asn Val 2645 2650 2655 GTG CAC GGC TTC GGC CCG GAC TCG GCG GGG GCC TTC CTC ACG GAG CAT 11513 Val His Gly Phe Gly Pro Asp Ser Ala Gly Ala Phe Leu Thr Glu His 2660 2665 2670 CCG GAC GTG GAC GGC ATC ACC TTC ACC GGC GAG ACG CGC ACC GGC GAG 11561 Pro Asp Val Asp Gly Ile Thr Phe Thr Gly Glu Thr Arg Thr Gly Glu 2675 2680 2685 GCC ATC ATG CGG GCG GCG GCG CGC GGC GTG CGT CCC GTG TCG TTC GAG 11609 Ala Ile Met Arg Ala Ala Ala Arg Gly Val Arg Pro Val Ser Phe Glu 2690 2695 2700 2705 CTG GGC GGC AAG AAC GCC GGC ATC GTC TTC GCC GAC GCG GAC TTC GAC 11657 Leu Gly Gly Lys Asn Ala Gly Ile Val Phe Ala Asp Ala Asp Phe Asp 2710 2715 2720 AAG GCG GTG GCC GGC ATC ACG CGC TCG GCC TTC GAG AAC AGC GGC CAG 11705 Lys Ala Val Ala Gly Ile Thr Arg Ser Ala Phe Glu Asn Ser Gly Gln 2725 2730 2735 GTA TGC CTG GGC ACC GAG CGG GTC TAT GTG CAG CGG CCC ATC TTC GAG 11753 Val Cys Leu Gly Thr Glu Arg Val Tyr Val Gln Arg Pro Ile Phe Glu 2740 2745 2750 CGC TTC GTC GCC GCG CTC AAG GAC AGG GCG GAA GGG CTC AAG CTG GGT 11801 Arg Phe Val Ala Ala Leu Lys Asp Arg Ala Glu Gly Leu Lys Leu Gly 2755 2760 2765 CCG CCC AAC GAG GCG GGC GTG ACC ATG GGC CCC CTG GTG TCG CTG GAG 11849 Pro Pro Asn Glu Ala Gly Val Thr Met Gly Pro Leu Val Ser Leu Glu 2770 2775 2780 2785 CAC CGC GAG AAG GTC CTG TCC TAC TAC CGC AAG GCG GCC GAG GCG GGT 11897 His Arg Glu Lys Val Leu Ser Tyr Tyr Arg Lys Ala Ala Glu Ala Gly 2790 2795 2800 GCC ACC GTG GTG ACC GGC GGC GGC GTG CCG CAG ATG CCG GGC GCG CTG 11945 Ala Thr Val Val Thr Gly Gly Gly Val Pro Gln Met Pro Gly Ala Leu 2805 2810 2815 GCC GAG GGC GCC TGG GTG CAG CCG ACC ATC TGG ACC GGC CTG CCT GAG 11993 Ala Glu Gly Ala Trp Val Gln Pro Thr Ile Trp Thr Gly Leu Pro Glu 2820 2825 2830 AGC GCA GCA GTG ATC CCC GGG AAT TC 12019 Ser Ala Ala Val Ile Pro Gly Asn 2835 2840

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明の芳香族化合物の酸化分解に関
与する遺伝子の上流非コード領域の塩基配列を示す図で
ある。

【図２】図２は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図３】図３は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図４】図４は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図５】図５は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図６】図６は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図７】図７は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図８】図８は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図９】図９は、本発明の芳香族化合物の分解に関与す
る遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸配列
を示す図である。

【図１０】図１０は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１１】図１１は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１２】図１２は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１３】図１３は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１４】図１４は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１５】図１５は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

【図１６】図１６は、本発明の芳香族化合物の分解に関
与する遺伝子の塩基配列及び対応する蛋白質のアミノ酸
配列を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 9/14 １０１ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｂ０１Ｄ 53/34 １１７Ｚ // Ｂ０９Ｃ 1/10 ＺＡＢ Ｂ０９Ｂ 3/00 ＺＡＢＥ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:05） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:385） (Ｃ１２Ｎ 9/14 Ｃ１２Ｒ 1:385） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:385） (72)発明者 渡辺 一哉 埼玉県入間郡大井町西鶴ヶ岡１丁目３番１ 号 東燃株式会社総合研究所内 (72)発明者 早野 俊哉 埼玉県入間郡大井町西鶴ヶ岡１丁目３番１ 号 東燃株式会社総合研究所内 (72)発明者 梶江 慎一 埼玉県入間郡大井町西鶴ヶ岡１丁目３番１ 号 東燃株式会社総合研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１におけるアミノ酸１〜５６
   ８から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＲ、アミ
   ノ酸５６９〜６４２から成るアミノ酸配列を有する蛋白
   質ＰｏｘＡ、アミノ酸６４３〜９７３から成るアミノ酸
   配列を有する蛋白質ＰｏｘＢ、アミノ酸９７４〜１０６
   ３から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＣ、アミ
   ノ酸１０６４〜１５６７から成るアミノ酸配列を有する
   蛋白質ＰｏｘＤ、アミノ酸１５６８〜１６８６から成る
   アミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＥ、アミノ酸１６８
   ７〜２０４２から成るアミノ酸配列を有する蛋白質Ｐｏ
   ｘＦ、アミノ酸２０４３〜２１４３から成るアミノ酸配
   列を有する蛋白質ＰｏｘＧ、アミノ酸２１４４〜２４５
   ３から成るアミノ酸配列を有する蛋白質ＰｏｘＨ、又は
   アミノ酸２４５４から始るアミノ酸配列を有する蛋白質
   ＰｏｘＩ、あるいは上記生来のアミノ酸配列において１
   〜数個のアミノ酸の欠失、及び／又は他のアミノ酸によ
   る置換により修飾されており、且つ対応する前記生来の
   アミノ酸配列を有する蛋白質と同等の生物学的活性を有
   する蛋白質。
2. 【請求項２】 蛋白質ＰｏｘＲ又はその修飾体、蛋白質
   ＰｏｘＡ、又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＢ又はその修
   飾体、蛋白質ＰｏｘＣ又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＤ
   又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＥ又はその修飾体、及び
   蛋白質ＰｏｘＦ又はその修飾体、蛋白質ＰｏｘＧ又はそ
   の修飾体から成る、フェノール又はベンゼン分解酵素
   群。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の蛋白質の少なくとも１
   つをコードする遺伝子。
4. 【請求項４】 請求項２に記載の酵素群をコードする遺
   伝子。
5. 【請求項５】 請求項３又は４に記載の遺伝子を含んで
   なるベクター。
6. 【請求項６】 請求項５に記載のベクターにより形質転
   換された宿主。
7. 【請求項７】 請求項６に記載の宿主を培養することを
   特徴とする、請求項１に記載の蛋白質又は請求項２に記
   載の酵素群の製造方法。