JPH11246595A

JPH11246595A - 制癌作用を有する生理活性物質、その生産菌、製造方法および用途

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Publication number: JPH11246595A
Application number: JP10062074A
Authority: JP
Inventors: Hidenao Takazawa; 秀直高沢
Original assignee: Senka Corp
Current assignee: Senka Corp
Priority date: 1998-02-25
Filing date: 1998-02-25
Publication date: 1999-09-14

Abstract

(57)【要約】【課題】制癌作用ＤＮＡ合成抑制および阻害作用、癌
細胞アポトーシス誘導作用、プロテアーゼ作用を有する
アスパラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの
糖タンパク質、又はそれらの混合物、その生産菌、製造
方法および用途を得るものである。【解決手段】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖
鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質を生
産することができる、アスペルギルス属に属する微生物
を培養し、該培養物からＣｏｎ．Ａに吸着するアスパラ
ギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパ
ク質、又はそれらの混合物を採取するＣｏｎ．Ａに吸着
するアスパラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤ
ａの糖タンパク質、またはそれらの混合物の製造であ
る。【効果】制癌作用を有する物質は固型癌、腹水型癌、
多形細胞肉腫、癌の転移抑制、口腔腫瘍の治療に有用で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は制癌作用を有するア
スパラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖
タンパク質、またはそれらの混合物、その生産菌、製造
方法および用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】真菌類に属するアスペルギルス（Ａｓｐ
ｅｒｉｇｉｌｌｕｓ）は、古くから、味そやしょう油な
どに食品添加物（病原真菌学、南山堂、東京、７８−８
０頁、１９８７）として用いられているが、一方では殺
菌効果を有する（Ｗｈｉｔｅ．Ｅ．Ｃ．ｅｔａｌ．，
Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４５：ｐ４３３−４４２、１
９４３）ことも知られている。しかしながら、このよう
な効果を応用するための研究については、少ないことが
報告されている（Ｄｕｔｃｈｅｒ．Ｊ．Ｇ．，Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１７１：３２１−３３９、１９４
７）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明者は、このよう
なアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｉｇｉｌｌｕｓ）の作用
に着目して、そのガン細胞、歯肉細胞等に及ぼす影響の
検討を行ってきた。即ち、本発明者は、従来からよく知
られているように、植物成分がヒトを始めとする動物体
に対して種々の生理作用を有していることに着目し、植
物体に存在または寄生する微生物にも何らかの同様の作
用があるものと考え、植物体より種々の微生物を分離し
て、その生理活性作用を長年にわたり研究してきた。

【０００４】その結果、植物体を構成する種々の部分、
例えば穀物、野菜類、樹木などの幹、葉、根、種子、花
びら、花粉などから分離したアスペルギルス属に属する
微生物、アスペルギルスフラブス（Ａｐｅｒｉｇｉｌ
ｌｕｓｆｌａｖｕｓ）ＳＲＴ株の菌体抽出物に腫瘍細
胞に対する増殖抑制効果、アポトーシス（ａｐｏｐｔｏ
ｓｉｓ）作用を見出し、本発明を完成した。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、制癌作用、ア
ポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）作用、プロテアーゼ
作用等の生理活性を有する生理活性物質、その生産菌、
製造方法および用途に関するものである。本発明はＣｏ
ｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する分子量３
４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、またはそれらの混合物
に関するものであリ、その分子量が７４ｋＤａ、６５ｋ
Ｄａ、５２ｋＤａ、４１ｋＤａ、３４ｋＤａである糖タ
ンパク質の混合物に関する。

【０００６】本発明は糖タンパク質、またはそれらの混
合物はアスペルギルス属の微生物に由来し、そのアスペ
ルギルス属の微生物がアスペルギルスフラブスＳＲ
Ｔ株に関するものである。更に本発明はＣｏｎ．Ａに吸
着するアスパラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋ
Ｄａの糖タンパク質を生産することができるアスペルギ
ルス属に属する微生物に関する。

【０００７】本発明は更にＣｏｎ．Ａに吸着するアスパ
ラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タン
パク質を生産することができるアスペルギルス属に属す
る微生物を培養し、該培養物からＣｏｎ．Ａに吸着する
アスパラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの
糖タンパク質、またはそれらの混合物を採取するＣｏ
ｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する分子量３
４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、またはそれらの混合物
の製造方法に関する。

【０００８】本発明は更にＣｏｎ．Ａに吸着するアスパ
ラギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タン
パク質を生産することができるアスペルギルス属に属す
る微生物、その菌体破砕物、またはそれから採取された
Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する分子
量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、またはそれらの混
合物を有効成分として含有する制癌剤、ガン細胞、アポ
トーシス誘導剤、プロテアーゼ活性物質、およびＤＮＡ
合成抑制剤ないし阻害剤に関する。

【０００９】本発明は更に固型癌の治療に使用される制
癌剤、腹水型癌の治療に使用される制癌剤、多形細胞肉
腫の治療に使用される制癌剤に関する。本発明は更に癌
の転移を抑制するために使用される制癌剤に関し、本発
明は更にまた口腔腫瘍の治療に使用される制癌剤に関す
る。

【００１０】上記種々の目的を達成するために、本発明
者は以下に述べる方法にしたがって植物体より微生物の
分離を試みた。１．各種の植物体、たとえば草、樹木、穀類、種子等を
採取し、種類別にまとめたものを水道水にて洗浄し、再
溜水で二度すすぎ、室内にて自然乾燥（ｏｖｅｒｎｉｇ
ｈｔ）をする。ただし、室内上空からの落下菌等を防ぐ
ためフードによって避けた。

【００１１】２．このようにして乾燥した植物を種類毎
に小さくまとめる。３．種類別毎にまとめたものを少しづつホモジナイザー
（ガラス製２０ｍｌ用、岩城ガラス社製、日本）または
乳鉢、乳棒（磁製１２０ｍφ、東京硝子器材社製、日
本）を用いて物理的にすり潰しをする。ただし、植物体
の樹木や根については、予めカッター等で細かく切断し
ておく。

【００１２】４．すり潰した全てのものを再溜水を用い
て懸濁液状として集める。５．懸濁液をガラス試験管にとり、種類別毎での濃度等
の違いを再溜水を用いてできるだけ均一に近づけ、最終
容量を一定量にそろえる。６．オートクレーブ（型式ＨＡ−２４０ＭＩＩ、平山製
作所社製、日本）にて、１２１℃、１５分で処理して、
雑菌を滅菌する。

【００１３】７．市販の調製済み２５ｍｇ／Ｌクロラム
フエニコール含ポテトデキストロース寒天／プラスチッ
クシャーレ（９０ｍｍφ、コージンバイオ社製、日
本）上に上記で得た上清を０．８ｍｌ／ＬＰ程度を種類
別毎に準備したプレート各５枚上に撒き、全体に行きわ
たるようによくロッキングした後、３７℃インキュベー
タ（型式１Ｈ４２／４２Ｍ、ヤマト科学社製、日本）内
に静置する。

【００１４】８．１０日目当たりからコロニー（集落）
の確認ができる。９．コロニーが直径８ｍｍ〜１５ｍｍ程度のときに収穫
する。収穫は５ｍｌ用スクリュー管ビン（ラボラン、ｌ
ｏｔ．Ｎｏ．９−８５２−０４、盛栄堂社製、日本）１０．以上のようにして分離した菌は、−２０℃フリー
ザー（型式ＥＶ２００Ｎ×Ｋ、Ｗｈｉｒｌｐｏｏｌ社
製、米国）以下、または室温（２０〜２５℃）でも長期
保存可能である。

【００１５】本発明物質を生産する能力を有する微生物
はアスペルギルス属に属するが、例えば本発明者が植物
体より分離したアスペルギルス属に属するアスペルギル
スフラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ）
ＳＲＴ菌株は、本発明に最も有効に使用される菌株の一
例であって、本菌株の菌学的性状を示すと次のとおりで
ある。

【００１６】Ｉ．本菌株はポテトデキストロース寒天培
地、ツアペック寒天培地、麦芽エキス寒天培地で良好に
生育し、分生子の着生も良好である。ポテトデキストロ
ース寒天培地に生育したコロニーを顕微鏡で観察する
と、不完全菌亜門は頂のう全体より形成され、メトレは
１３〜１６×４〜４．８μ、フイアライドは７〜９．５
×２〜２．４μ、分生子は直径１．０〜１．８μ、その
形は球形〜だ円形、壁面は粗面〜いぼ状である。

【００１７】ＩＩ．培養上の諸性状（１）本菌株の培養所見を下記の表１に示す。本所見は
各種培地上で２５℃、１０日間培養した場合の肉眼的に
観察した結果である。

【００１８】

【表１】

【００１９】（２）ポテトデキストロース寒天培地にお
ける３７℃、１５日間培養した場合の生育状態は非常に
旺盛（１５ｍｍ以上）である。一方、４℃、１５日間培
養した場合（低温室内）は、生育しなかった。

【００２０】III.生理学的性状（１）生育温度範囲：２５〜３８℃ （２）至適生育温度範囲：３６．５〜３７℃ （３）生育ｐＨ範囲：５．４〜７．５（４）至適生育ｐＨ範囲：６．７〜７．２（５）好気性、嫌気性の区別：好気性

【００２１】上記の菌株の形態的特徴、培養上の諸性
状、生理学的性状に基づき、菌類図鑑下（１９９１年）
（講談社、日本）との比較により、本菌株をアスペルギ
ルス属に属する一菌株と同定し、アスペルギルスフラ
ブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ）ＳＲＴと
命名した。本菌株は、日本国茨城県つくば市東１丁目１
番３号に所在の通商産業省工業技術院生命工学工業技術
研究所に「ＳＲＴ」として平成７年３月３日に寄託し、
受託番号はＦＥＲＭＢＰ−５０３０である。

【００２２】本発明の物質を得るためには、先ずアスペ
ルギルスフラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａ
ｖｕｓ）、好ましくはアスペルギルスフラブスＳＲ
Ｔ（ＦＥＲＭＢＰ−５０３０）株が培地に培養され
る。培養は真菌類の培養に用いられる一般的な培地を用
い、工業的には通気攪拌深部培養法により培養が行われ
る。培養温度は真菌の培養に適した温度、１８〜３７
℃、好ましくは２０〜２８℃である。培養時間は菌体が
充分に発育するまで行うことがよく、通常５〜１５日
間、好ましくは５〜１２日間、特に好ましくは７日間で
ある。培養終了後、菌体を遠心分離、フイルタープレス
濾過等の処理により分離する。

【００２３】菌体の分離に際しては必要により濾過助
剤、例えばケイ澡土（セライト）等が加えられる。分離
された菌体は、真菌に菌体破壊に通常用いられる方法、
例えば酵素処理による細胞壁の溶解と界面活性剤を組み
合わせた方法または物理的方法（ポットミル回転台、型
式ＡＮＺ−５０Ｓ：日陶科学社製）により破壊される。
酵素処理は例えばノボザイム２３４とセルラーゼ（１：
１０（ｗ／ｗ）、和光純薬社製、日本）を用い、３０
℃、２時間の処理で行われる。酵素処理の後に界面活性
剤、例えばドデシル硫酸ナトリウムにより菌の破壊が効
率的に行われる。

【００２４】次に菌体を破壊したものの組成を調べるた
めに、以下の分析を行った。（ただし、表中のＳＲＴ−
ＫＡは培養５日間の場合、ＳＲＴ−ＫＢは培養１２日間
の場合のデータである。）

【００２５】目的１．菌体破砕液の分析１−１ＵＶスペクトル測定１−２タンパク質の等電点測定１−３タンパク質の分子量測定１−４プロテアーゼ活性測定２．糖タンパク質の分離と分子量推定３．核酸（ＤＮＡ）含量の測定

【００２６】実験方法は以下のとおりである。１．ＵＶスペクトル測定（１）測定方法試料を蒸留水で５０倍希釈後、ＵＶ領域（２００〜３６
０ｎｍ）の吸収スペクトルを測定した。同じく蒸留水の
ＵＶスペクトルを測定し、試料のスペクトルより差し引
いた。（２）使用装置ＵＶ２２００（島津製作所社製、日本）

【００２７】２．タンパク質の等電点測定等電点は電気泳動法によりタンパク質の等電点を測定し
た。（１）ゲルの種類：ＡｍｐｈｏｌｉｎｅＰＡＧＰｌ
ａｔｅｐＨ３．５〜９．５（フアルマシア社製、米
国）（２）染色法：ＣＢＢ染色（３）等電点推定：画像解析装置（日本国ＡＴＴＯ社
製、ＡＥ−６９００Ｍ）を用い、同時に泳動した等電点
マーカー蛋白質の移動度を基準に目的タンパク質の等電
点を推定した。

【００２８】３．タンパク質の分子量測定ＳＤＳ−ポリアクリルアミドによる電気泳動法によりタ
ンパク質の分子量を測定した。（１）ゲルの種類：４〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥミニ
ゲル（ＴＥＦＣＯ社製、米国）（２）染色法：ＣＢＢ染色（３）分子量推定：画像解析装置（日本国ＡＴＴＯ社
製、ＡＥ−６９００Ｍ）を用い、同時に泳動した分子量
マーカー蛋白質の移動度を基準に目的タンパク質の分子
量を推定した。

【００２９】４．プロテアーゼ活性の測定カゼインを基質としてプロテアーゼにより遊離したアミ
ノ酸およびペプチドをフェノール法を用いて定量する。
以下に具体的な手順を示す。

【００３０】対照標準試料緩衝液１．０ｍｌ１．０ｍｌ１．０ｍｌ基質１．０ｍｌ１．０ｍｌ１．０ｍｌ塩酸溶液０．２ｍｌ − ０．２ｍｌＣａＣｌ₂溶液０．２ｍｌ０．２ｍｌ − ↓３７℃、５分チロシン溶液 − ０．２０ｍｌ − 試料 − − ０．２０ｍｌ ↓３７℃、１０分 ↓ ←ＴＣＡ溶液２．０ｍｌ試料０．２０ｍｌ０．２０ｍｌ − ＣａＣｌ₂溶液 − − ０．２０ｍｌ ↓０℃、１０分 ↓３０００ｒｐｍ、１０分 ↓ろ過（マイレスクＨＶ、０．４５μｍ）ろ過液１．５ｍｌ１．５ｍｌ１．５ｍｌＮａ₂ＣＯ₃溶液５．０ｍｌ５．０ｍｌ５．０ｍｌフォーリン試薬１．０ｍｌ１．０ｍｌ１．０ｍｌ ↓０℃、２０分Ａ₅₇₈測定

【００３１】上記手順中において、緩衝液としては０．
１ＭＮａ₂Ｂ₄Ｏ₇（ほう酸）ｐＨ７．５、基質とし
ては２％カゼインｐＨ７．５、ＨＣｌ溶液としては０．
０５ＮＨＣｌ、ＣａＣｌ₂溶液としては０．００２Ｍ
ＣａＣｌ₂、チロシン溶液としては５．０ｍＭチロシ
ン（０．０５ＮＨＣｌ中）、ＴＣＡ溶液としては０．
１Ｍトリクロロ酢酸、Ｎａ₂ＣＯ₃溶液としては０．４
ＭＮａ₂ＣＯ₃、フォーリン試薬としてはフォーリン
試薬を蒸留水で３倍希釈したもの、試料としては菌体破
砕液をＣａＣｌ₂溶液で１０倍希釈したものである。

【００３２】計算方法 ΔＡＳａｍｐｌｅ＝ＡＳａｍｐｌｅ−ＡＢｌａｎｋ ΔＡＳｔａｎｄａｒｄ＝１／２×ΔＡＳａｍｐｌｅ／Δ
ＡＳｔａｎｄａｒｄ［Ｕ／ｍｌ］^* 尚、１Ｕ：１分間に１μＭチロシンに相当するアミノ酸
またはペプチドを遊離させる酵素活性

【００３３】５．レクチンカラムによる糖タンパク質の
分離（１）カラムの種類：コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ．Ａ）
−アガロース（生化学工業社製、日本）（２）分離条件カラムの緩衝液^*による平衡化 ↓ 菌体破砕液のカラムへの吸着 ↓ 未吸着のタンパク質の溶出 ↓ 溶出液^**によるカラムに吸着したタンパク質の分取

【００３４】上記の分離条件において、＊：カラムの緩衝液；５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ７．２）、０．１ＭＮａＣｌ、１ｍＭＭｇＣｌ₂、
１ｍＭＣａＣｌ₂ ＊＊：溶出液；０．２Ｍメチル−α−Ｄ−マンノシド
を含む上記緩衝液

【００３５】６．ＤＮＡ含量の測定菌体破砕液についてＣｅｒｉｏｔｔｉの方法^1,2)に従
い、インドールとデオキシリボースとの呈色反応による
ＤＮＡの定量を行った。試料および標準ＤＮＡ１ｍｌ ↓ 濃塩酸０．５ｍｌを加える ↓ ０．０４％（ｗ／ｖ）インドール０．５ｍｌを加える ↓１００℃、１０分クロロホルム２ｍｌ ↓ 抽出１分 ↓３０００ｒｐｍ、１０分水層 ↓ ＯＤ₄₉₀測定

【００３６】尚、上記の工程において、クロロホルム２
ｍｌ→抽出１分→水層の操作を３回繰り返す。標準ＤＮＡ：ニシン精子ＤＮＡ２．５、５、１０、２
０、４０μｇ／ｍｌである。

【００３７】以上の分析結果は、以下に示すとおりであ
る。１−１．ＵＶスペクトル図１に試料（培養５日間のＳＲＴ−ＫＡ）および図２に
試料（培養１２日間のＳＲＴ−ＫＢ）のＵＶスペクトル
を示した。２２０ｎｍ付近に大きな吸収ピークをもち、
２８０ｎｍ付近に肩を持っている。これは試料に含まれ
る蛋白質の寄与が大きいものと思われる。

【００３８】１−２．タンパク質の等電点測定図３に試料（培養５日間のＳＲＴ−ＫＡ）および試料
（培養１２日間のＳＲＴ−ＫＢ）の等電点電気泳動の結
果を示した。ＳＲＴ−ＫＡは符号１として示され、ＳＲ
Ｔ−ＫＢは符号２として示され、符号３は等電点マーカ
ーである。矢印で示したタンパク質の推定等電点は高い
方よりそれぞれｐＨ７．２、７．０、６．２、５．５、
４．６及び４．０であり、ｐＨ３．５〜９．５の間にま
んべんなくタンパク質が存在している。特にｐＨ３．５
〜５．５の酸性側に多くのタンパク質が存在している。

【００３９】１−３．タンパク質の分子量測定図４に試料（培養５日間のＳＲＴ−ＫＡ）および試料
（培養１２日間のＳＲＴ−ＫＢ）のＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミド電気泳動の結果を示した。ＳＲＴ−ＫＡは符号
１として示され、ＳＲＴ−ＫＢは符号２として示され、
矢印で示したタンパク質の推定分子量は分子量の高い方
よりそれぞれ７４、５８、３５、２９ｋＤａであり、特
に６．５〜７４ｋＤａの間に多くのタンパク質が存在し
ている。一方、７４ｋＤａ以上の高分子側には、ほとん
ど蛋白質が存在しない。

【００４０】１−４．プロテアーゼ活性の測定下記表２に試料ＳＲＴ−ＫＡおよびＳＲＴ−ＫＢのプロ
テアーゼ活性（数値データ）をそれぞれ示す。

【００４１】

【表２】

【００４２】上記表２の値をもとにして菌体破砕液のプ
ロテアーゼ活性を計算したところ表３に示す結果が得ら
れた。

【００４３】

【表３】

【００４４】２．糖タンパク質の分離および分子量推定図５は試料ＳＲＴ−ＫＡの菌体破砕液の分離であり、図
６は試料ＳＲＴ−ＫＢの菌体破砕液の分離である。図５
及び図６において、符号１は菌体破砕液であり、２〜４
は未吸着画分５０、１００、１５０μｌ、５〜７は吸着
画分１００、２００、３００μｌであり、８は分子量マ
ーカー、矢印で示したタンパク質の推定分子量は分子量
の高い方よりそれぞれ７４、６５、５２、４１、３４ｋ
Ｄａである。このように菌体破砕液には多くのタンパク
質が存在しており、そのうちの分子量３４〜８３ｋＤａ
のいくつかのタンパク質がＣｏｎ．Ａ−アガロースに吸
着された。このことから数種類の糖タンパク質が存在す
ることがわかる。

【００４５】３．ＤＮＡ含量の測定下記表４に菌体破砕液のＤＮＡ含量の数値データを示
す。ＤＮＡ濃度と吸光度の関係は図７に示すように直線
になる。

【００４６】

【表４】

【００４７】図７を利用して菌体破砕液のＤＮＡ濃度を
求めると下記表５に示す結果が得られた。

【００４８】

【表５】

【００４９】参考文献１）Ｇ．Ｃｅｒｉｏｔｔｉ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
１９８，２９７（１９５２）２）Ｇ．Ｃｅｒｉｏｔｔｉ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．
２１４，５９（１９５５）

【００５０】精製に用いるレクチンとして最も一般的に
使用されているＣｏｎ．Ａを選択したが、Ｃｏｎ．Ａは
アスパラギン（Ａｓｎ）型糖鎖の一部であるＣ−３，
３，６位のヒドロキシル基が未置換であるα−マンノー
ス残基を２つ以上もつ高マンノース型および複合型２本
側鎖の糖鎖に結合する。Ｃｏｎ．Ａ−アガロースを用い
た分離で幾つかのタンパク質がカラムに吸着されており
（図５および図６）、菌体破砕液中にはＣｏｎ．Ａに吸
着するアスパラギン型糖鎖をもった糖タンパク質が存在
することが認められる。

【００５１】本発明の実施にあたっては、前記したアス
ペルギルスフラブスＳＲＴ（ＦＥＲＭＢＰ−５０
３０）株を使用することが最も好ましい一例であるが、
菌は通常極めて変位し易いものであり、従って、アスペ
ルギルスフラブスＳＲＴ（ＦＥＲＭＢＰ−５０３
０）株の天然および人工変異株は勿論のこと、同菌株が
属するアスペルギルスフラブスであって、本発明の物
質を生産し得る菌株はすべて本発明に含まれる。

【００５２】

【発明の実施の態様】実施例１アスペルギルスフラブスＳＲＴ（ＦＥＲＭＢＰ−
５０３０）の保存培養寒天斜面培地から一白金耳菌体を
採取し、これを５００ｍｌ容バッフル三枚羽付フラスコ
中の液体培地１００ｍｌに接種し、２７℃にて１０日間
振とう培養し、種培養を得た。このものを液体培地１０
リットルを含有する３０リットルジャーファメンターに
移植して、５日間および１２日間２７℃、通気量１リッ
トル／分、攪拌１５０〜２００ｒｐｍにて培養した。

【００５３】各々培養終了後、菌体を遠心分離にて分離
して、湿菌体各１ｇを得た。乾燥菌体１０ｍｇ当たり
０．５ｍｇのノボザイム２３４とセルラーゼ（１：１０
（ｗ／ｗ））を加え、３０℃にて２時間処理を行った。
反応後、５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２でよく洗浄
し、１％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）にて菌体
を破壊した。菌体破壊処理液を１０ｇ、２０分間遠心分
離して、上清を集め、凍結乾燥し、乾燥粉末１ｍｇを得
た。

【００５４】このようにして得られた凍結乾燥粉末の一
部をとり、少量の５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ２．２に溶
解し、ＡｍｐｈｏｌｉｎｅＰＡＧプレートｐＨ３．５
〜９．５（フアルマシア社製、米国）による等電点電気
泳動およびＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ）を行い、タンパク質組成分析を行うとと
もにＣＢＢ染色を行った。電気泳動条件は下記のとおり
常法により行った。

【００５５】（１）ゲルの種類イ）ＡｍｐｈｏｌｉｎｅＰＡＧプレートｐＨ３．５
〜９．５（フアルマシア社製、米国）ロ）４〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥミニゲル（ＴＥＦＣ
Ｏ社製、米国）（２）染色法ＣＢＢ染色（３）泳動試料は下記表６に示すとおり。

【００５６】

【表６】

【００５７】電気泳動終了後のゲル内のパターンを画像
解析装置を用い、同時に泳動した分子量マーカー蛋白質
の移動度を基準にし、目的タンパク質の分子量を推定し
た。その結果、ＣＢＢ染色は図５および図６に示す通り
であった。約３４〜８３ｋＤａに多くのタンパク質のバ
ンドが観察された。

【００５８】実施例２実施例１で得られた凍結乾燥粉末１ｍｇを５０ｍＭリン
酸緩衝液ｐＨ７．２、５０ｍｌに溶解し、糖タンパク質
の分離を行った。糖タンパク質を特異的に吸着するレク
チンカラムとしてはＣｏｎ．Ａ−アガロースカラム（長
さ５ｃｍ×直径１．５ｃｍ、生化学工業社製、日本）を
用いて分画した。そのタンパク質組成をＳＤＳ−ポリア
クリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＴＥＦＣＯ
社製、米国）により分析した。

【００５９】１．レクチンカラムによる糖タンパク質の
分離（１）カラムの種類コンカナバリンＡ（Ｃｏｎ．Ａ）
−アガロース（２）分離の手順カラムの緩衝液^*による平衡化 ↓ 実施例１で得られた凍結乾燥粉末のリン酸緩衝液溶解物
のカラムへの吸着 ↓ 未吸着のタンパク質分取（素通り画分） ↓ 溶出液^**によるカラムに吸着したタンパク質の分取（溶
出画分）上記の分取した溶出画分は、それぞれ凍結乾燥した。

【００６０】尚、＊：カラムの緩衝液；５０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、０．１ＭＮａＣｌ、１
ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＣａＣｌ₂ ＊＊：溶出液；０．２Ｍメチル−α−Ｄ−マンノシドを
含む上記の緩衝液

【００６１】２．電気泳動条件常法によりＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。（１）ゲルの種類４〜２０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥミニゲ
ル（ＴＥＦＣＯ社製、米国）（２）染色法ＣＢＢ染色

【００６２】精製に用いるレクチンとしては、最も一般
的に使用れているＣｏｎ．Ａを選択した。Ｃｏｎ．Ａは
アスパラギン（Ａｓｎ）型糖鎖の一部であるＣ−３，
４，６位のヒドロキシル基が未置換であるα−マンノー
ス残基を２つ以上もつ高マンノース型および複合型２本
側鎖の糖鎖に結合する。Ｃｏｎ．Ａ−アガロースを用い
た分離では、幾つかのタンパク質がカラムに吸着されて
おり、ＣＢＢ染色性が見られた。このことから、菌体破
砕液中にＣｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を持
った糖タンパク質が存在することが判った。

【００６３】実施例３ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５：菌糸培養期間８日
間）の長期連続投与による抗腫瘍効果試験Ｉ．目的ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）の投与回数と抗腫
瘍効果について検討する目的で動物実験を実施した。Ｓ
ＲＴ−Ｋの抗腫瘍効果については、既にマウスの実験腫
瘍（Ｓ−１８０）を腹腔内（腹水型）・皮下（固型）に
移植して、ＳＲＴ−Ｋの隔日５回（１０日間）の投与に
より抗腫瘍効果を認めている（特願平８−２５５５８８
号）。

【００６４】本発明は上記と同様の腫瘍（Ｓ−１８０）
を用いた実験系で、移植腫瘍細胞数の少ない担癌マウス
にＳＲＴ−Ｋの隔日７回投与（１４日間）ならびに１４
回投与（２８日間）を行い、ＳＲＴ−Ｋ投与回数と移植
腫瘍細胞数の制限が延命効果、腫瘍の発育抑制効果にお
よぼす影響について検討を行った。各投与群の体重、赤
血球数、白血球数、ヘモグロビン量、臓器重量を計測し
て、ＳＲＴ−Ｋ投与の影響について既報の結果と比較検
討を行った。

【００６５】ＩＩ. 材料および方法１）供試動物マウス（ｄｄｙ雄、４週令、７２匹：ＳＬＣ）を４週令
で購入して１週間の予備飼育を行った後、５週令で実験
に供した。２）ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）原液本実験に用いた試料は、平成８年５月７日に透析・濾過
滅菌処理された量産ロットであり、総タンパク量５．１
３ｍｇ／ｍｌの淡褐色透明水溶液である。

【００６６】３）ＳＲＴ−Ｋ投与量と投与方法試料の投与量と投与径路は以下の２系統について実施し
た。ａ）腹水型腫瘍マウスにはＳＲＴ−Ｋ原液０．１ｍｌ
（タンパク量５１３μｇ／マウス、約１５．４ｍｇ／ｋ
ｇ）を生理食塩水で２倍に希釈して腹腔内（０．２ｍｌ
／マウス）に隔日投与を行った。対照群にも生理食塩水
（０．２ｍｌ／マウス）の隔日投与を実施した。

【００６７】ｂ）固型腫瘍マウスにはＳＲＴ−Ｋ原液２
０μｌ（タンパク量１０２μｇ／マウス、約３．０ｍｇ
／ｋｇ）をマイクロシリンジ（ＭＳ−Ｎ１００、伊藤製
作所社製、日本）を用いて固型腫瘍局所中央に隔日投与
した。同様に対照群にも同容量（２０μｌ）の生理食塩
水の投与を行った。

【００６８】また腹水型ならびに固型腫瘍ともにＳＲＴ
−Ｋの投与回数は７回（１４日間）実施した後に、さら
に投与を隔日に７日（計１４回、２８日）継続した群
（投与継続群）と投与を中止して同量の生理食塩水を投
与した群（投与中止群）を作製した。ＳＲＴ−Ｋの投与
は腫瘍細胞の移植後２日目より投与を開始した。

【００６９】４）実験腫瘍マウスの多形細胞肉腫であるサルコーマ１８０（ｓａｒ
ｃｏｍａ−１８０：Ｓ−１８０）を用いた。本実験で
は、担癌マウスに対するＳＲＴ−Ｋの長期（最長２８日
間）に及ぶ投与を考慮して、少ない量の細胞を移植し
た。すなわち、腹水型には腫瘍細胞５×１０⁶／０．２
ｍｌを腹腔内に接種し、固型腫瘍作成には左大腿部外側
皮下に５×１０⁵／２０μｌの細胞を接種した。

【００７０】５）体重の測定マウスの体重はＳＲＴ−Ｋ投与前に実施した。６）赤血球数、白血球数およびヘモグロビン量の測定腫瘍移植後１４日目および２８日目にマウスをクロロホ
ルムを用いて薬殺し、心臓尖刺によるヘパリン加採血を
行い、直ちに自動血球計数機（ＳｙｓｍｅｘＦ−／３０
０、東亜医療電子社製、日本）にて測定した。

【００７１】７）臓器と腫瘍重量の測定採血終了後、肝臓、腎臓、脾臓、胸腺および腫瘍の重量
を測定した。腹水型腫瘍は腹腔内の腫瘍（腹水）を乾綿
に吸着させ、体重より減じた重量を腹水量とした。ま
た、固型腫瘍は左大腿部より腫瘍を摘出して、その重量
を計測した。

【００７２】８）統計処理個々の項目の測定値はＳｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ−ｔｅｓ
ｔによる処理を行い、５％（ｐ＜０．０５）、１％（ｐ
＜０．０１）および０．１％（ｐ＜０．０１）水準で有
意差を検討した。

【００７３】９）実験群腫瘍移植部位およびＳＲＴ−Ｋの投与回数により以下の
９群を作成した。Ａ）正常対照群１）無処置対照群（ｎ＝８）Ｂ）腹水型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より投与開始隔日
７回投与）２）腹水型対照群（生理食塩水腹腔内投与０．２ｍｌ／
マウスｎ＝８）３）腹水型ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ腹腔内投与
０．２ｍｌ／マウスｎ＝８）

【００７４】Ｃ）固型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より投
与開始隔日７回投与）４）固型対照群（生理食塩液腫瘍内投与２０μｌ／マウ
スｎ＝８）５）固型ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ腫瘍内投与２０
μｌ／マウスｎ＝８）

【００７５】Ｄ）腹水型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より
投与開始隔日７回投与後、さらに１４日間実験継続）６）腹水型ＳＲＴ−Ｋ継続投与群（継続してＳＲＴ−Ｋ
を隔日７回追加投与ｎ＝７）７）腹水型投与中止群（ＳＲＴ−Ｋの投与を中止して生
理食塩水を隔日７回投与ｎ＝８）

【００７６】Ｅ）固型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より隔
日７回投与後、さらに１４日間実験継続）８）固型ＳＲＴ−Ｋ継続投与群（継続してＳＲＴ−Ｋを
隔日７回追加投与ｎ＝７）９）固型投与中止群（ＳＲＴ−Ｋの投与を中止して生理
食塩水を隔日７回投与ｎ＝６）

【００７７】III. 試験結果 III −１．腹水型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋの抗腫瘍効果
は下記の表７〜１２に示す通りであった。１）腹水型腫瘍各群の体重変動は下記表７に示すとおり
である。ＳＲＴ−Ｋ投与群の体重は、腫瘍移植後１４日
目まで各群合計（ｎ＝２４）した数値で表示し、１５日
以後はＳＲＴ−Ｋ投与継続群（ｎ＝７）ならびに投与中
止群（ｎ＝８）に分けて示した。

【００７８】

【表７】

【００７９】尚、表７中において、１）：正常対照群
（無処置対照群）、２）：腹水型腫瘍対照群（生理食塩
水０．２ｍｌ／マウス投与）、３）：ＳＲＴ−Ｋ投与群
（ＳＲＴ−Ｋ原液０．１ｍｌを生理食塩水で希釈し、
０．２ｍｌ／マウス投与隔日７回投与ｎ＝２４）、
４）：ＳＲＴ−Ｋ継続投与群（継続してＳＲＴ−Ｋ０．
２ｍｌ／マウスを隔日７回追加投与ｎ＝８）、５）：Ｓ
ＲＴ−Ｋ投与中止群（ＳＲＴ−Ｋの投与を中止して生理
食塩水０．２ｍｌ／マウスを隔日７回投与ｎ＝８）を示
す。生理食塩水およびＳＲＴ−Ｋは腫瘍細胞を腹腔に接
種後２日目より投与を開始した。正常対照群に対する有
意差（１６日以後は投与継続群に対する有意差）＊：ｐ
＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．０
０１。

【００８０】上記表７から明らかなように、腫瘍細胞を
移植前の各群の平均体重は２９．２〜２９．９ｇの範囲
にあり、統計的な有意差は見られなかった。腹腔内に腫
瘍移植後４日目より移植各群（腹水対照群・ＳＲＴ−Ｋ
投与群）の体重は正常対照群に対して有意（ｐ＜０．０
０１、ｐ＜０．０１）な増加が見られ、移植８日目以後
は腹水対照群にのみ有意（ｐ＜０．０１〜ｐ＜０．００
１）な増加が認められ、その傾向は１４日目（１２９
％、ｐ＜０．００１まで継続した。一方、腫瘍移植１５
日目以降のＳＲＴ−Ｋ投与継続群およびＳＲＴ−Ｋ投与
中止群の間では体重の有意差は認められなかった。

【００８１】２）腹水型マウス各群の延命効果は下記表
８に示すとおりである。

【００８２】

【表８】

【００８３】尚、上記表８中において、↓：矢印はＳＲ
Ｔ−Ｋおよび生理食塩水の投与日を示す。１）：正常対
照群（無処置対照群）、２）：腹水型腫瘍対照群（生理
食塩水０．２ｍｌ／マウス投与）、３）：ＳＲＴ−Ｋ投
与群（ＳＲＴ−Ｋ０．２ｍｌ／マウス投与）を示す。

【００８４】上記表８から明らかなように、腫瘍移植後
１４日目までの各群の生存率は、腹水対照群では移植後
１２日目より死亡例（生存率７／８、８８％）が見ら
れ、１３日目でさらに１匹（６／８、７５％）、１４日
目で２匹（４／８、５０％）の死亡例が確認された。ま
た、ＳＲＴ−Ｋ投与群では移植後１２日目まで全個体が
生存（２４／２４、１００％）し、翌１３日目に１匹の
死亡例（２３／２４、９６％）が見られた。

【００８５】

【表９】

【００８６】尚、上記表９中において、↓：矢印はＳＲ
Ｔ−Ｋおよび生理食塩水の投与日を示す。１）：ＳＲＴ
−Ｋ継続投与群（ＳＲＴ−Ｋ０．２ｍｌ／マウスを継続
して隔日７回投与）、２）：ＳＲＴ−Ｋ投与中止群（Ｓ
ＲＴ−Ｋの投与を中止して生理食塩水０．２ｍｌ／マウ
スを隔日７回投与）を示す。

【００８７】上記表９から明らかなように、腫瘍移植後
１５日以降の生存率は、ＳＲＴ−Ｋ投与継続群で１８日
（６／７）、２１日（５／７）、２２日（４／７）、２
４日（３／７）、２６日（２／７）目にそれぞれ１匹の
死亡例が見られた。ＳＲＴ−Ｋの投与中止群において
も、１８日（７／８）、１９日（６／８）２２日（５／
８）、２４日（４／８）、２６日（３／８）、２７日
（２／８）目に各１匹ずつの死亡例が確認され、実験最
終日（２８日目）では両群に生存率の差は見られなかっ
た。

【００８８】３）腹水型腫瘍マウス各群の白血球・赤血
球数およびヘモグロビン量は下記表１０に示すとおりで
ある。

【００８９】

【表１０】尚、上記表１０中において、正常対照群に対する有意差
＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【００９０】上記表１０から明らかなように、ＳＲＴ−
Ｋ７回投与（１４日目）の腹水対照群の白血球数は正常
対照群（８５２５±２２２／μｌ）に対して約３．６倍
の有意の（ｐ＜０．００１）増加が見られ、ＳＲＴ−Ｋ
投与群でも３．３倍の有意（ｐ＜０．００１）の増加が
認められた。また、ＳＲＴ−Ｋ継続投与群ならびに投与
中止群（２８日目）でも約３．０倍および１．４倍の増
加傾向が見られた。

【００９１】更に、前記表１０から明らかなように、赤
血球数ならびにヘモグロビン量では、正常対照群（ＲＢ
Ｃ：８０６±２．８×１０⁴、Ｈｂ：１３．８±０．２
０ｇ／ｄｌ）に対して低下傾向が見られ、ＳＲＴ−Ｋ７
回投与群（１４日目）に有意差（ｐ＜０．００１）を伴
う低下が認められた。

【００９２】４）腹水型マウス各群の臓器および腫瘍重
量は下記表１１および表１２に示すとおりである。

【００９３】

【表１１】

【００９４】尚、表１１中において、腫瘍接種後１４日
目および２８日目（最終腹腔内投与後２４時間）の臓器
・腹水重量（ｍｇ）。対照群に対する有意差（腹水量で
は腹水対照群に対する有意差）＊：ｐ＜０．０５、＊
＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【００９５】上記表１１から明らかなように、正常対照
群の主要臓器重量（１００％）に対して腹水対照群（１
４日目）の臓器重量は、肝臓（８６％、ｐ＜０．０
５）、腎臓（７０％、ｐ＜０．０１）、脾臓（６８％、
ｐ＜０．０１）、胸腺（３１％、ｐ＜０．００１）と有
意の減少が認められた。ＳＲＴ−Ｋ０．２ｍｌ投与群
（１４日目）では、腎臓（７８％、ｐ＜０．０５）、胸
腺（５６％、ｐ＜０．００１）と正常対照群に対し、有
意の減少が見られたが脾臓重量は１９９％（ｐ＜０．０
１）と有意差を伴う増加が見られた。

【００９６】一方、２８日目のＳＲＴ−Ｋ投与継続群な
らびに投与中止群では、肝臓（１００％、１０５％）：
腎臓（９８％、１０９％）、胸腺（９６％、１３７％）
の重量が正常対照群の数値にまで回復し、脾臓の重量は
さらに増加（２３８％、２００％）する傾向を示した。

【００９７】

【表１２】尚、腹水減少効果の判定は、解剖時の腹水対照群平均体
重の２０％ならびに腹水対照群の平均腹水量の５０％
（腹水重量９０００ｍｇ）以下のマウスを有効例とし
た。

【００９８】上記表１２から明らかなように、腹水貯留
量は腹水対照群（ｎ＝４１４日目有効例２５％）の平
均１８７２５±３８１８ｍｇに対し、ＳＲＴ−Ｋ０．２
ｍｌ投与群（ｎ＝８１４日目、有効例７５％）ではそ
の平均は５４３０ｍｇ±２９ｍｇで約２９％の減少が認
められた。また、２８日目の投与継続群ならびに投与中
止群では、生存マウスはともに２匹のみで、腹水量の平
均はそれぞれ９０４５ｍｇと４５０ｍｇでＳＲＴ−Ｋの
投与中止群で腹水量の貯留が少ない印象を与えるが、生
存例が少なく明らかな結果は得られなかった。

【００９９】III −２．固型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋ投
与の抗腫瘍効果については表１３〜表１６に示す通りで
ある。１）固型腫瘍各群の体重変動は下記表１３に示すとおり
である。

【０１００】

【表１３】

【０１０１】尚、上記表１３中において、１）：正常対
照群（無処置対照群）、２）：固型腫瘍対照群（生理食
塩水２０μｌ／マウスを２週間７回投与）、３）：ＳＲ
Ｔ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ原液２０μｌ／マウスを隔日
７回投与ｎ＝２４）、４）：ＳＲＴ−Ｋ継続投与群（継
続してＳＲＴ−Ｋ原液２０μｌ／マウスを隔日７回追加
投与ｎ＝７）、５）：ＳＲＴ−Ｋ投与中止群（ＳＲＴ−
Ｋの投与を中止して生理食塩水２０μｌ／マウスを隔日
７回投与ｎ＝６）を示す。生理食塩水およびＳＲＴ−Ｋ
は腫瘍細胞を腹腔に接種後２日目より投与を開始した。
正常対照群に対する有意差（１６日以後は投与継続群に
対する有意差）＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．０
０１。

【０１０２】上記表１３から明らかなように、腫瘍細胞
を移植前の各群の平均体重は２９．２〜２９．３ｇの範
囲にあり、統計的な差は見られなかった。ＳＲＴ−Ｋ投
与群では左大腿部皮下に腫瘍移植後２〜４および８日目
に正常対照群に対して有意な体重の減少（ｐ＜０．００
１）が見られた以外、１５日以降の各群にも有意差を伴
う体重の増減は認められなかった。

【０１０３】２）固型型マウス各群の延命効果固型腫瘍移植後１４日目までの各群の生存率は表１３に
体重の変動とともに示した。固型対照群で移植後１４日
目の解剖当日に死亡例４匹（生存率４／８、５０％）が
見られ、ＳＲＴ−Ｋ投与群では１２日目に１匹（２３／
２４、９５％）、１４日目で２匹（２１／２４、８７
％）の死亡例が確認された。一方、腫瘍移植後１５日以
降ではＳＲＴ−Ｋ投与継続群（ｎ＝７）およびＳＲＴ−
Ｋの投与中止群（ｎ＝６）において実験最終日（２８日
目）まで死亡例は見られなかった。

【０１０４】３）固型マウス各群の白血球・赤血球数お
よびヘモグロビン量について下記表１４に示した。

【０１０５】

【表１４】

【０１０６】尚、表１４中において、腫瘍接種後１４日
目（最終腫瘍内投与後２４時間）の血液より測定。正常
対照群に対する有意差＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜
０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１０７】上記表１４から明らかなように、固型対照
群（１４日目）の白血球数は正常対照群（８５２５±２
２２、１００％）に対して有意の増加（２５８％、ｐ＜
０．０５）が見られ、ＳＲＴ−Ｋ投与群（１４日目）に
おいても同様に有意の増加（１９７％、ｐ＜０．０１）
が認められた。２８日目のＳＲＴ−Ｋ投与継続群では１
２１％とやや増加傾向が見られるものの有意差は認めら
れず、投与中止群では２４７％と有意差（ｐ＜０．００
１）と伴う増加が認められた。

【０１０８】一方、赤血球数では正常対照群（８０６±
２．８×１０⁴、１００％）に対して固型対照群（１４
日目、９４％）およびＳＲＴ−Ｋ投与継続群（２１日
目、８８％）と減少傾向を示したが、有意差を伴うもの
ではなく、他の各群では正常対照群と近似な数値であっ
た。また、ヘモグロビン量は正常対照群（１３．８±
０．２０ｇ／ｄｌ、１００％）に対して各群とも低値
（８２〜９７％）を示し、固型対照群（１４日目、９０
％、ｐ＜０．０５）、ＳＲＴ−Ｋ投与継続群（２８日
目、８３％、ｐ＜０．０１）および投与中止群（２８日
目、８８％、ｐ＜０．０５）の各投与群で有意な減少が
認められた。

【０１０９】４）固型マウス各群の臓器および腫瘍重量
については表１５および表１６に示す通りである。固型
腫瘍マウスの臓器および腫瘍重量（ｍｇ）については下
記表１５に示すとおりである。

【０１１０】

【表１５】

【０１１１】尚、表１５中において、腫瘍接種後１４〜
２８日目（最終腹腔内投与後２４時間）の臓器・腫瘍重
量（ｍｇ）。正常対照群に対する有意差（腫瘍では固型
対照群に対して）＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０
１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１１２】上記表１５から明らかなように、正常対照
群の臓器重量（１００％）に対して固型対照群（１４日
目）では、肝臓（１１０％）、腎臓（９６％）、脾臓
（２４９％、Ｐ＜０．０１）、胸腺（９４％）で重量の
増減が見られた。ＳＲＴ−Ｋ投与群（１４日目）では、
肝臓（９６％）および腎臓（８２％、ｐ＜０．００１）
重量の減少が見られ、脾臓（２０９％、ｐ＜０．００
１）で有意な増加が認められたが、胸腺（９８％）では
重量に変化は見られなかった。

【０１１３】また、２８日目解剖のＳＲＴ−Ｋ投与継続
群ならびに投与中止群においても脾臓（２０６％、ｐ＜
０．００１ならびに２２６％、ｐ＜０．０５）の有意な
増加傾向を示し、腎臓（９４％、９５％）ならびに胸腺
（７６％、７８％）では有意差を伴わない重量の低下が
見られた。

【０１１４】固型腫瘍マウスのＳＲＴ−Ｋ投与による腫
瘍縮小効果については、下記表１６に示すとおりであ
る。

【０１１５】

【表１６】尚、判定は固型対照群の平均腫瘍重量の５０％（１０４
０ｍｇ）以下に低下した腫瘍を縮小例とした。

【０１１６】上記表１６から明らかなように、腫瘍につ
いては固型対照群（１４日目）で２０８１±７７７（１
００％）の重量を示し、ＳＲＴ−Ｋ投与群（１４日目）
で平均６４１ｍｇ（３０％）、投与継続群（２８日目）
で平均３９７ｍｇ（１９％）および投与中止群（２８日
目）で平均１３５６ｍｇ（６５％）と減少し、腫瘍縮小
効果が認められたが個体により差が見られ、有意差は認
められなかった。

【０１１７】固型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋの腫瘍効果を
まとめると、固型対照群の個々の腫瘍重量は１２３〜５
７６９ｍｇの範囲にあり、この平均腫瘍重量の５０％
（１０４０ｍｇ）以下に縮小した腫瘍を縮小例（有効
例）と設定したとき、固型対照群では８匹中４匹（５０
％）が縮小例であった。

【０１１８】ＩＶ．考察ＩＶ−１．Ｓ−１８０腹水型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋ長
期投与による抗腫瘍効果について：実施例ではＳＲＴ−
Ｋ（原液０．１ｍｌ：総タンパク量５１３μｇ／０．１
ｍｌ／マウスを生理食塩水に２倍希釈して０．２ｍｌ／
マウス投与）の長期連続投与（ＳＲＴ−Ｋ投与継続群：
２８日間、１４回投与）による抗腫瘍効果を途中で中止
した群（ＳＲＴ−Ｋ投与中止群：１４日間、７回投与）
と比較検討した。２８日間（４週）の観察に耐え得る担
癌マウスを作成するためにＳ−１８０癌細胞の移植数を
制限した細胞数（腹水型：５×１０⁶／０．２ｍｌ／マ
ウス）腹腔内に移植した。

【０１１９】本試験の腹水型対照群マウスの生存率は、
移植後１１日目まで１００％（８／８）であり、１２日
目で始めて死亡例（１匹）が見られ、移植細胞数の多い
報告（５×１０⁸／マウス、７×１０⁷マウス）におい
て７日目より死亡例が確認されていることから、移植細
胞数の制限により死亡例の発生が５日間遅延した結果と
なった。また、ＳＲＴ−Ｋ投与群では移植後１３日目に
２４匹中１匹（２３／２４、生存率９６％）に死亡例が
見られたが、１５日以後の投与継続群ならびに投与中止
群では移植１７日目まで死亡例が見られず、移植１８日
以後よりこの両群には死亡例の出現に差異は見られなか
った。

【０１２０】ＳＲＴ−Ｋの７回投与後（移植１４日目）
における腹水量はＳＲＴ−Ｋ投与群で５４３０±２１０
ｍｇであり、腹水対照群の腹水量（１８７２５±３８１
８ｍｇ）の約２９％にまで減少して、ＳＲＴ−Ｋの有効
例は６／８（７５％）と判定された。移植１４日目以後
のＳＲＴ−Ｋ投与継続群ならびに中止群については、経
時的な生存率の差はなく、また生存マウスが各群とも２
匹と少なく腹水量についてもその差異を判定することが
できなかった。

【０１２１】これらの結果を総合的に考えると、大量の
腫瘍細胞を移植されたマウスの腹腔内で急激な増殖を示
す細胞に対してはＳＲＴ−Ｋ原液０．１ｍｌの投与は抗
腫瘍効果を示すに至らないが、本試験のごとく移植腫瘍
細胞数を制限し、ヒトの場合により近い緩やかに発育し
た腫瘍細胞には抗腫瘍効果を示すことが明らかとなっ
た。また、移植する細胞数を制限した場合においても腹
腔内で十分に発育した腹水型腫瘍（移植１５日目以後）
にはＳＲＴ−Ｋの抗腫瘍効果が期待できないと思われ
た。

【０１２２】血液の性状からみると、本試験では正常対
照群に対してＳＲＴ−Ｋ投与群の白血球数の増加と赤血
球数・ヘモグロビン量の減少傾向が見られ、ＳＲＴ−Ｋ
投与の影響と思われる。すなわち、ＳＲＴ−Ｋを投与し
ていない腹水対照群にも同様な結果が得られており、担
癌マウスにも現れる影響であるが、投与量に依存して発
現していることからＳＲＴ−Ｋの投与による影響が示唆
された。臓器の重量では腹水対照群で有意な減少（ｐ＜
０．０１）を示した脾臓重量がＳＲＴ−Ｋの投与により
顕著な増加（ｐ＜０．０１）が認められた。また、胸腺
重量も明らかな減少（ｐ＜０．００１）が見られた。

【０１２３】ＩＶ−２．Ｓ−１８０固型腫瘍に対するＳ
ＲＴ−Ｋ長期投与による抗腫瘍効果について：Ｓ−１８
０固型腫瘍では、腫瘍細胞を左大腿部外側皮下に５×１
０⁵／２０μｌ／マウスの腫瘍細胞を移植して数日の後
に自然治癒が認められた個体（約１０％）をデータより
削除したが、固型腫瘍対照群で７匹中２匹に腫瘍重量２
００ｍｇ前後の個体が存在した。

【０１２４】ＳＲＴ−Ｋ投与群で移植後１２〜１４日目
に２匹（２／１２）の死亡例が見られた以外、実験最終
日の２８日目まで各実験群とも死亡例は認められなかっ
た。これらより、移植細胞数が制限された場合には自然
治癒の個体が増加し、腫瘍細胞が生着したマウスでは比
較的順調に増殖する個体と遅延する個体が出現すると思
われた。

【０１２５】ＳＲＴ−Ｋ投与による抗腫瘍効果は、固型
対照群の腫瘍重量（２０８１±７７７ｍｇ）に対してＳ
ＲＴ−Ｋの７回投与群（６４１±１４６ｍｇ）で約３０
％の縮小が認められ、効果の判定では固型対照群の４／
８（５０％）に対してＳＲＴ−Ｋ投与群７／８（８８
％）が有効と明らかであった。また、移植２８日目のＳ
ＲＴ−Ｋ連続投与群（ＳＲＴ−Ｋ１４回投与）と投与中
止群においても、投与中止群の腫瘍重量（１３５６±１
２１２ｍｇ）に対して投与継続群の腫瘍重量（３９７±
２９９ｍｇ）は約２９％であり、顕著な縮小効果が見ら
れた。しかし、実験開始時の移植細胞数が少ないことか
ら腫瘍重量に個体差が発生し、有意差は見られなかっ
た。

【０１２６】血球数の増減や臓器重量の変動に関して
は、固型腫瘍においても白血球の増加傾向ならびに赤血
球数・ヘモグロビン量の減少、さらには脾臓重量の増加
および胸腺重量の低下傾向が見られ、腹水型腫瘍と同様
ＳＲＴ−Ｋ投与の影響が示唆された。

【０１２７】Ｖ．まとめ１．ＳＲＴ−Ｋの原液０．１ｍｌ（タンパク量５１３μ
ｇ）の投与は、移植細胞数を制限され増殖速度の比較的
遅いＳ−１８０腹水型腫瘍マウスに対して有効であっ
た。２．腹腔内に投与されたＳＲＴ−Ｋは、担癌マウス（腹
水型）の白血球数の増加と赤血球数およびヘモグロビン
量の減少に関与することが認められた。

【０１２８】３．腹水型腫瘍マウスに投与されたＳＲＴ
−Ｋは、脾臓重量を顕著に増加させ胸腺重量を減少させ
ることが認められた。４．ＳＲＴ−Ｋ原液２０μｌ（タンパク量１０２μｇ）
の投与は、移植細胞数の少ないＳ−１８０固型腫瘍に対
して顕著な抗腫瘍作用を示し、その効果は投与回数に依
存することが示唆された。

【０１２９】５．固型腫瘍マウスにおいてもＳＲＴ−Ｋ
の投与は、白血球数を増加ならびに赤血球数およびヘモ
グロビン量を減少させ、また脾臓重量の増加と胸腺重量
の減少に関与することが認められた。

【０１３０】実施例４ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）並びにＳＲＴ−Ｋ
Ａ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）の形状（液体保存／凍結
乾燥）の差異による抗腫瘍効果試験Ｉ．目的ＳＲＴ−Ｋの製造ロット（ｌｏｔ．９６０７０５／ｌｏ
ｔ．９７０５０３Ａ）の抗腫瘍効果と形状、すなわち液
体保存試料および凍結乾燥試料の抗腫瘍効果について検
討する目的で動物実験を行った。ＳＲＴ−Ｋの腫瘍効果
については、既にマウスの実験腫瘍（Ｓ−１８０）を腹
腔内（腹水型）・皮下（固型）に移植して、ＳＲＴ−Ｋ
の隔日５回（１０間）の投与により抗腫瘍効果を認めて
いる（実施例３、特願平８−２５５５８８号）。

【０１３１】本試験も同様に腫瘍（Ｓ−１８０）を用い
た実験系で実施し、ＳＲＴ−Ｋのロット並びに保存形状
の差異による腫瘍の発育抑制効果に及ぼす影響について
検討を行った。また、各投与群の体重、赤血球数、白血
球数、ヘモグロビン量、臓器重量を計測して、ＳＲＴ−
Ｋ投与の影響を既報の結果と比較した。

【０１３２】ＩＩ. 材料および方法１）供試動物マウス（ｄｄＹ雄８６匹：ＳＬＣ）を４週齢で購入して
１週間の予備飼育を行った後、５週齢で実験に用いた。２）ＳＲＴ−Ｋ製造ロット本実験には以下の２ロットのＳＲＴ−Ｋを使用した。ａ）ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５；以下、ＳＲＴ
−Ｋ７０５と略称する）原液：１９９６年７月５日に製
造されたロットで、総タンパク量５．１３ｍｇ／ｍｌの
淡褐色透明水溶液である。ｂ）ＳＲＴ−ＫＡ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ；以下、Ｓ
ＲＴ−ＫＡ５０３Ａと略称する）原液：１９９７年５月
３日に製造されたロットでＳＲＴ−Ｋ７０５に比べやや
褐色の透明水溶液である。

【０１３３】３）ＳＲＴ−Ｋの形状各ロットとも液体（液状）の状態で凍結保存した液体保
存試料と凍結乾燥した状態で保存した凍結乾燥試料の２
種類で比較実験を行った。４）投与量と投与方法２種類のＳＲＴ−Ｋの投与量は一定量の凍結乾燥された
各試料より乾燥重量を求め、ＳＲＴ−Ｋ７０５の乾燥重
量（２１．４３３ｍｇ／ｍｌ）にＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ
の乾燥重量を合わせて調整（１：１．８８４）し原液と
した。

【０１３４】投与経路は下記の２系統について実施し
た。ａ）腹水型腫瘍マウスにはＳＲＴ−Ｋ７０５及びＳＲＴ
−ＫＡ５０３Ａの各原液０．１ｍｌを生理食塩水で２倍
に希釈して腹腔内（０．２ｍｌ／マウス）に隔日投与を
行った。対照群にも生理食塩水（０．２ｍｌ／マウス）
の隔日投与を実施した。ｂ）固型腫瘍マウスには各原液を２０μｌをマイクロシ
リンジ（ＭＳ−Ｎ１００、伊藤製作所社製）を用いて固
型腫瘍局所中央に隔日投与した。同様に対照群にも同容
量（２０μｌ）の生理食塩水の投与を行った。また、腹
水型腫瘍および固型腫瘍ともにＳＲＴ−Ｋの投与は５回
（１０日間）とし、腫瘍細胞の移植後２日目より毎回同
時刻に実施した。

【０１３５】５）実験腫瘍マウスの多形細胞肉腫であるサルコーマ１８０（Ｓ−１
８０）を用いた。本試験では腹水型には腫瘍細胞３×１
０⁷／０．２ｍｌを腹腔内に接種し、固型腫瘍作成には
右大腿部外側筋肉内に４．４×１０⁶／２０μｌの細胞
を接種した。

【０１３６】６）体重の測定マウスの体重は、１０：００〜１２：００のＳＲＴ−Ｋ
投与前に実施した。７）赤血球数、白血球数およびヘモグロビン量の測定腫瘍移植後１１日目にマウスをエチルエーテルを用いて
薬殺し、心臓尖刺によるヘパリン加採血を行い、直ちに
自動血球計数機（ＳｙｓｍｅｘＦ−／３００、東亜医
療電子社製）にて測定した。

【０１３７】８）臓器と腫瘍重量の測定採血終了後、肝臓、腎臓、脾臓、胸腺および腫瘍の重量
を測定した。腹水型腫瘍は、腹腔内の腫瘍（腹水）を乾
綿に吸着させ体重より減じた重量を腹水量とした。ま
た、固型腫瘍は右大腿部より腫瘍を摘出して、その重量
を計測した。９）統計処理個々の項目の測定値は、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ−ｔｅ
ｓｔによる処理を行い、５％（ｐ＜０．０５）、１％
（ｐ＜０．０１）および０．１％（ｐ＜０．００１）水
準で有意差を検討した。

【０１３８】１０）実験群の作成ＳＲＴ−Ｋの各ロットおよび形状により以下の１１群を
作成した。Ａ）正常対照群１）無処置対照群（ｎ＝７）Ｂ）腹水型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より腹腔内に投与
開始、隔日５回投与）２）腹水型対照群（生理食塩水腹腔内投与０．２ｍｌ／
マウスｎ＝７）３）腹水型ＳＲＴ−Ｋ７０５投与群（液体保存試料原液
０．１ｍｌ／マウス、腹腔内投与ｎ＝８）

【０１３９】４）腹水型ＳＲＴ−Ｋ７０５投与群（凍結
乾燥試料原液０．１ｍｌ／マウス、腹腔内投与ｎ＝
８）５）腹水型ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ投与群（液体保存試料
原液０．１ｍｌ／マウス、腹腔内投与ｎ＝８）６）腹水型ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ投与群（凍結乾燥試料
原液０．１ｍｌ／マウス、腹腔内投与ｎ＝８）

【０１４０】Ｃ）固型腫瘍（腫瘍細胞移植２日目より腫
瘍内に投与開始隔日５回投与）７）固型対照群（生理食塩液腫瘍内投与２０μｌ／マウ
スｎ＝８）８）固型ＳＲＴ−Ｋ７０５投与群（液体保存試料原液２
０μｌ／マウス、腫瘍内投与ｎ＝８）

【０１４１】９）固型ＳＲＴ−Ｋ７０５投与群（凍結乾
燥試料原液２０μｌ／マウス、腫瘍内投与ｎ＝８）１０）固型ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ投与群（液体保存試料
原液２０μｌ／マウス、腫瘍内投与ｎ＝８）１１）固型ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ投与群（凍結乾燥試料
原液２０μｌ／マウス、腫瘍内投与ｎ＝８）

【０１４２】III. 試験結果 III −１．腹水型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋ各ロットの抗
腫瘍効果は表１７〜表２０に示す通りである。１）腹水型腫瘍マウスの体重の変動についての実験結果
は下記表１７に示す通りである。

【０１４３】

【表１７】

【０１４４】尚、表１７中において、↓：矢印は投与
（腹腔内）を示す。１）：正常対照群（無処置対照
群）、２）：腹水型腫瘍対照群（生理食塩水０．２ｍｌ
／マウス投与）、３）：ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−
Ｋ、ｌｏｔ．７０５液体保存、原液０．１ｍｌ／マウス
投与）、４）：ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ、ｌｏ
ｔ．７０５凍結乾燥、原液０．１ｍｌ／マウス投与）、
５）：ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−ＫＡ、ｌｏｔ．５０
３Ａ液体保存、原液０．１ｍｌ／マウス投与）、６）：
ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−ＫＡ、ｌｏｔ．５０３Ａ凍
結乾燥、原液０．１ｍｌ／マウス投与）を示す。

【０１４５】生理食塩水および各ＳＲＴ−Ｋは腫瘍細胞
を腹腔に接種後２日目より投与を開始して隔日に５回実
施した。正常対照群に対する有意差＊：ｐ＜０．０５、
＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１４６】上記表１７から明らかなように、腫瘍細胞
を移植前の各群の平均体重は２９．２〜２９．６ｇの範
囲にあり、統計的な有意差は見られなかった。また、正
常対照群（無処置対照群）は本実験の飼育環境下で実験
期間中を通して正常な発育が見られた。実験群では、腹
腔内に腫瘍移植後４日目より移植各群（腹水対照群：Ｓ
ＲＴ−Ｋ７０５、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ投与各群）の体
重は正常対照群に対して有意（ｐ＜０．０５、ｐ＜０．
００１）な増加が見られた。

【０１４７】しかし、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ（凍結乾燥
試料）投与群では、移植６日目以後１０日目まで、ＳＲ
Ｔ−ＫＡ５０３Ａ（液体保存試料）投与群では、移植１
０日目に正常対照群に対して平均体重の増加が見られた
ものの有意差は認められなかった。また、本実験では腫
瘍移植後１０日目までに実験各群で死亡例は見られなか
った。

【０１４８】２）腹水型マウス各群の白血球・赤血球数
およびヘモグロビン量についての実験結果は下記表１８
に示す通りである。

【０１４９】

【表１８】

【０１５０】尚、上記表１８中において、Ａ：各ＳＲＴ
−Ｋロットの液体保存試料、Ｂ：各ＳＲＴ−Ｋロットの
凍結乾燥試料。腫瘍接種後１１日目（最終腹腔内投与後
２４時間）の血液より測定。正常対照群に対する有意差
＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１５１】本実験の解剖時（腫瘍移植後１１日目）に
おける正常対照群の白血球数は、３５１４±２３６／μ
ｌであり、この数値を指数（１００％）で表示すると、
腹水対照群で４７５％（ｐ＜０．００１）、ＳＲＴ−Ｋ
７０５（液体保存試料）で６４８％（ｐ＜０．００
１）、ＳＲＴ−Ｋ７０５（凍結乾燥試料）で４６７％
（ｐ＜０．００１）ならびにＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ（液
体保存試料）で５１７％、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ（凍結
保存試料）で５４４％（ｐ＜０．００１）と有意の増加
が見られた。

【０１５２】また、赤血球数ならびにヘモグロビン量で
は、正常対照群（ＲＢＣ：７８５±１４．４×１０⁴／
μｌ、Ｈｂ：１２．８±０．１６ｇ／ｄｌ：各１００
％）に対して腹水対照群で赤血球数３６％（ｐ＜０．０
０１）、ヘモグロビン量４４％（ｐ＜０．００１）と有
意な低下傾向が見られ、ＳＲＴ−Ｋ投与各群でも赤血球
数６１〜７１％（ｐ＜０．０１〜Ｐ＜０．００１）及び
ヘモグロビン量６８〜７７％（ｐ＜０．０１〜ｐ＜０．
００１）と正常対照群に対して有意差を伴う低下が認め
られた。

【０１５３】３）腹水型マウス各群の臓器および腫瘍重
量についての実験結果は下記の表１９に示す通りであ
る。

【０１５４】

【表１９】

【０１５５】尚、上記表１９中において、Ａ：各ＳＲＴ
−Ｋロットの液体保存試料、Ｂ：各ＳＲＴ−Ｋロットの
凍結乾燥試料。腫瘍接種後１１日目（最終腹内投与後２
４時間）の臓器・腹水重量。正常対照群に対する有意差
（腹水量では腹水対照群に対する有意差）＊：ｐ＜０．
０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１．

【０１５６】上記表１９から明らかなように、正常対照
群の主要臓器重量（１００％）に対して腹水対照群の臓
器重量は、肝臓（７０％、ｐ＜０．００１）、腎臓（６
４％、ｐ＜０．００１）、胸腺（６４％、ｐ＜０．００
１）と有意の減少が認められた。ＳＲＴ−Ｋ７０５の液
体保存試料、凍結乾燥試料投与群では正常対照群に対し
て肝重量で９８％および９５％と有意差を伴わない減少
傾向が見られたが、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａの液体保存試
料、凍結乾燥試料投与群ではそれぞれ８８％、８２％と
有意（ｐ＜０．０５）な減少が認められた。

【０１５７】また、ＳＲＴ−Ｋ７０５、ＳＲＴ−ＫＡ５
０３Ａ投与各群の腎臓（６８〜７０％）、胸腺（１９〜
３０％）では正常対照群に対して有意（すべてｐ＜０．
００１）の減少が見られた。一方、脾重量は正常対照群
（１００％）に対して腹水対照群で１７７％（ｐ＜０．
０１）およびＳＲＴ−Ｋ７０５、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ
投与各群で１６１〜２０８％と有意差（ｐ＜０．０５〜
ｐ＜０．００１）を伴う増加がすべての群に見られた。

【０１５８】腹水型腫瘍マウスのＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．
７０５）及びＳＲＴ−ＫＡ（ｌｏｔ．５０３Ａ）投与に
よる腹水減少効果は下記表２０に示す通りである。

【０１５９】

【表２０】

【０１６０】尚、上記表２０中において、Ａ：ＳＲＴ−
Ｋ各ロットの液体保存試料、Ｂ：ＳＲＴ−Ｋ各ロットの
凍結乾燥試料。腹水減少効果の判定基準は、解剖時の腹
水対照群の平均腹水量の５０％（腹水重量９９１０ｍ
ｇ）以下のマウスを有効例とした。腹水対照群における
有意差＊：ｐ＜０．０５、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１６１】上記表２０から明らかなように、腹水対照
群（ｎ＝７）の腹水貯水量は、平均１９８２０±１３５
１ｍｇ（１００％）であり、その平均腹水量の５０％
（９９１０ｍｇ）以下に減少した個体を有効例とした。
腹水対照群に対して、ＳＲＴ−Ｋ７０５液体保存試料投
与群（ｎ＝８有効例１／８）では平均１５１３０ｍｇ
±１３２７ｍｇ（７６％）で約２３％の減少（ｐ＜０．
０５）、ＳＲＴ−Ｋ７０５凍結乾燥試料投与群（ｎ＝８
有効例１／８）では１４８９０ｍｇ±１１４５ｍｇ
（７５％）で約２５％の減少（ｐ＜０．０５）が認めら
れた。

【０１６２】また、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ液体保存試料
投与群（ｎ＝８有効例３／８）では、平均１１６８０
ｍｇ±２２７５ｍｇ（５８％）で約４２％の減少（ｐ＜
０．０５）、更にＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ凍結乾燥試料投
与群（ｎ＝８有効例５／８）では９９００ｍｇ±１７
３５ｍｇ（４９％）で約５１％の減少（ｐ＜０．００
１）が認められた。尚、ＳＲＴ−Ｋのロット別での腹水
減少効果有効率は、ＳＲＴ−Ｋ７０５（液体保存試料＋
凍結乾燥試料）で、１２．５％（２／１６）、ＳＲＴ−
ＫＡ５０３Ａ（液体保存試料＋凍結乾燥試料）では、５
０％（８／１６）であった。

【０１６３】III −２．固型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋ投
与の抗腫瘍効果は表２１〜表２４に示す通りである。１）固型腫瘍各群の体重の変動についての実験結果は下
記表２１に示す通りであった。

【０１６４】

【表２１】

【０１６５】尚、表２１中において、↓：矢印は投与
（腫瘍内）を示す。１）：正常対照群（無処置対照
群）、２）：固型腫瘍対照群（生理食塩水２０μｌ／マ
ウス投与）、3)：ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ、ｌｏ
ｔ．７０５液体保存原液２０μｌ／マウス投与）、
４）：ＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−Ｋ、ｌｏｔ．７０５
凍結乾燥原液２０μｌ／マウス投与）、５）：ＳＲＴ
−Ｋ投与群（ＳＲＴ−ＫＡ、ｌｏｔ．５０３Ａ液体保存
原液２０μｌ／マウス投与）、６）：ＳＲＴ−Ｋ投与
群（ＳＲＴ−ＫＡ、ｌｏｔ．５０３Ａ凍結乾燥原液２
０μｌ／マウス投与）を示す。

【０１６６】生理食塩水およびＳＲＴ−Ｋは腫瘍細胞を
右大腿部筋肉内に接種後２日目より投与を開始して隔日
に５回実施した。正常対照群に対する有意差＊：ｐ＜
０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１。

【０１６７】上記表２１から明らかなように、腫瘍細胞
の移植前の各群の平均体重は、２９．２〜２９．５ｇの
範囲にあり統計的な差は見られなかった。右大腿部に腫
瘍を移植された各群では、移植後２日目に正常対照群に
対して一過性の体重減少が見られたが、移植後４日目よ
り増加傾向が見られ、特に固型対照群およびＳＲＴ−Ｋ
７０５液体保存試料投与群に有意な体重増加（ｐ＜０．
０５）が認められ、この傾向は移植１０日目まで継続し
た。他のＳＲＴ−Ｋ投与各群では有意差を伴う変動は見
られなかった。

【０１６８】２）固型腫瘍マウス各群の白血球・赤血球
数およびヘモグロビン量についての実験結果は下記表２
２に示す通りである。

【０１６９】

【表２２】

【０１７０】尚、表２２中において、Ａ：各ＳＲＴ−Ｋ
ロットの液体保存試料、Ｂ：各ＳＲＴ−Ｋロットの凍結
乾燥試料。腫瘍接種後１１日目（最終腫瘍内投与後２４
時間）の血液より測定。正常対照群に対する有意差＊：
ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．
００１。

【０１７１】上記表２２から明らかなように、固型対照
群の白血球数は正常対照群（３５１４±２３６μｌ、１
００％）に対して有意の増加（３３５％、ｐ＜０．００
１）が見られ、ＳＲＴ−Ｋ投与各群（ＳＲＴ−Ｋ、ＳＲ
Ｔ−ＫＡ）においても同様に有意の増加（４０１〜５２
４％、ｐ＜０．００１）が認められた。赤血球数では正
常対照群（７８５±１４．４×１０⁴μｌ、１００％）
に対して固型対照群（８４％、ｐ＜０．０１）で有意な
減少がみられ、ＳＲＴ−Ｋ７０５凍結乾燥試料投与群
（９８％）以外、すべてのＳＲＴ−Ｋ投与群（ＳＲＴ−
Ｋ、ＳＲＴ−ＫＡ）で有意差を伴う減少が認められた
（８０〜８９％、ｐ＜０．０１〜ｐ＜０．００１）。

【０１７２】またヘモグロビン量は正常対照群（１２．
８±０．１６ｇ／ｄｌ、１００％）に対して固型対照群
（８２％、ｐ＜０．００１）ならびにＳＲＴ−ＫＡ５０
３Ａ投与各群（８７〜９６％、ｐ＜０．０１〜ｐ＜０．
０５）で有意な減少が見られたが、ＳＲＴ−Ｋ７０５投
与各群（９４〜１００％）では有意差を伴う数値の変動
は見られなかった。

【０１７３】３）固型マウス各群の臓器および腫瘍重量
についての実験結果は下記表２３および表２４に示す通
りである。固型腫瘍マウスの臓器重量および腹水重量の
実験結果は下記表２３に示す通りである。

【０１７４】

【表２３】

【０１７５】尚、表２３中において、Ａ：各ＳＲＴ−Ｋ
ロットの液体保存試料、Ｂ：各ＳＲＴ−Ｋロットの凍結
乾燥試料。腫瘍接種後１１日目（最終腹腔内投与後２４
時間）の臓器・腫瘍重量。正常対照群に対する有意差
（腫瘍重量では固型対照群に対する有意差）＊：ｐ＜
０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００
１。

【０１７６】上記表２３から明らかなように、正常対照
群の臓器重量（１００％）に対して固型対照群では、肝
臓（１５９％、ｐ＜０．００１）、脾臓（４１８％、ｐ
＜０．００１）で有意な増加、腎臓（９３％）、胸腺
（６９％、ｐ＜０．０５）で減少が見られた。この傾向
はＳＲＴ−Ｋ投与各群（ＳＲＴ−Ｋ、ＳＲＴ−ＫＡ）に
おいても肝臓（１２９〜１３９％、ｐ＜０．００１）お
よび脾臓（３７２〜４２４％、ｐ＜０．００１）重量が
すべての群で有意に増加し、腎臓（８６〜９９％、ｐ＜
０．０５）および胸腺（５７〜７８％、ｐ＜０．０５〜
ｐ＜０．００１）で重量の減少が見られた。

【０１７７】４）固型腫瘍マウスのＳＲＴ−Ｋ（ｌｏ
ｔ．７０５）およびＳＲＴ−ＫＡ（ｌｏｔ．５０３Ａ）
投与による腫瘍縮小効果についての実験結果は下記表２
４に示す通りである。

【０１７８】

【表２４】

【０１７９】尚、表２４中において、Ａ：各ＳＲＴ−Ｋ
ロットの液体保存試料、Ｂ：各ＳＲＴ−Ｋロットの凍結
乾燥試料。腫瘍縮小効果の判定基準は、解剖時の固型対
照群の平均腫瘍重量の５０％（２３７１ｍｇ）以下のマ
ウスを有効例とした。固型対照群に対する有意差＊＊：
ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１。

【０１８０】上記表２４から明らかなように、腫瘍重量
では固型対照群４７４３±２６７ｍｇ（１００％）と比
較的に個体差の少ない重量を示した。ＳＲＴ−Ｋ液体保
存試料投与群の腫瘍重量平均は２７９４ｍｇ（５８％、
ｐ＜０．００１）、ＳＲＴ−Ｋ凍結乾燥試料投与群で３
１２４ｍｇ（６５％、ｐ＜０．０１）、ＳＲＴ−ＫＡ５
０３Ａ液体保存試料では２８５６ｍｇ（６０％、ｐ＜
０．００１）およびＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ凍結乾燥試料
で３０６４ｍｇ（６４％、ｐ＜０．０１）と有意差を伴
う縮小効果が認められた。

【０１８１】固型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋの抗腫瘍効果
は表２４から明らかなように、固型対照群の個々の腫瘍
重量は３６３２〜６１４０ｍｇの範囲にあり、この平均
腫瘍重量の５０％（２３７１ｍｇ）以下に縮小した腫瘍
を有効例と設定したとき、ＳＲＴ−Ｋ投与各群で８匹中
１〜３匹（１２．２〜３７．５％）に腫瘍縮小効果が認
められた。尚、ＳＲＴ−Ｋのロット別の有効率は、ＳＲ
Ｔ−Ｋ７０５（液体保存試料＋凍結乾燥試料）で１８．
７％（３／１６）であり、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ（液体
保存試料＋凍結乾燥試料）で２５％（４／１６）であっ
た。

【０１８２】ＩＶ．考察ＩＶ−１．Ｓ−１８０腹水型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋロ
ットならびに形状の差異による抗腫瘍効果について：Ｓ
ＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）ならびにＳＲＴ−Ｋ
Ａ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）のロット間ならびに形状
（液体保存／凍結乾燥）の差異による抗腫瘍効果につい
て検討を加えた。実施例では上記のＳＲＴ−Ｋ２ロット
抗腫瘍効果とその安定性について液体（凍結）保存と凍
結乾燥保存による抗腫瘍効果いついて試験を実施した。
２ロットのＳＲＴ−Ｋは凍結乾燥処理を行って乾燥重量
を求め、両ロットとも１ｍｌ中２１．４３３ｍｇに調整
して試料とした。各ＳＲＴ−Ｋ試料の投与経路は、腹腔
内ならびに腫瘍局所として隔日５回（１０日間）の投与
を実施して腫瘍移植後１１日目に解剖を行った。

【０１８３】本試験では腹水型腫瘍および固型腫瘍各群
のマウスに死亡例が見られず実験終了日まですべて生存
した。腹水腫瘍におけるＳＲＴ−Ｋの効果は、腹水対照
群の腹水量平均（１９８２０±１３５１ｍｇ）に対して
有意に抑制しており、特にＳＲＴ−ＫＡ凍結乾燥試料投
与群で顕著（腹水量９９００±１７３５ｍｇ）であっ
た。

【０１８４】ＳＲＴ−Ｋ７０５とＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ
の２ロット間の腹水腫瘍に対する抗腫瘍効果は、有効例
（前者は１６匹中２匹、１２．５％、後者は１６匹中８
匹、５０％）および腹水貯留量（前者は平均１５０１０
ｍｇ／マウス、後者は平均１０７９０ｍｇ／マウス）か
らＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａが高いと判定された。また、液
体保存試料と凍結乾燥試料との間には明らかな抗腫瘍効
果の差異は認められなかった。

【０１８５】血液の性状からみると、本試験では正常対
照群に対してＳＲＴ−Ｋ投与群の白血球数の増加と赤血
球数・ヘモグロビン量の減少傾向が見られる。ＳＲＴ−
Ｋを投与していない腹水対照群にも同様な結果が得られ
ており、担癌マウスに現れる影響であるが、投与量に依
存して発現していることから、ＳＲＴ−Ｋの投与による
影響が示唆された。

【０１８６】しかし、本試験では赤血球数ならびにヘモ
グロビン量が腹水対照群の数値よりいずれも高値であ
り、生体の貧血症状が改善されている結果が得られ、こ
の原因がＳＲＴ−Ｋ投与による直接的影響か、もしくは
担癌状態が改善されたことに起因する二次的な反応かは
不明である。臓器の重量では、腹水対照群で見られた肝
臓、腎臓、胸腺重量の有意な低下および脾臓重量の有意
な増加傾向がＳＲＴ−Ｋの投与により各群認められた。

【０１８７】ＩＶ−２．Ｓ−１８０固型腫瘍に対するＳ
ＲＴ−Ｋロットならびに形状の差異による抗腫瘍効果に
ついて：Ｓ−１８０固型腫瘍では、腫瘍細胞を右大腿部
外側筋肉内に４．４×１０⁶／マウスの腫瘍細胞を移植
して２日後よりＳＲＴ−Ｋ各試料を腫瘍中心部に２０μ
ｌ投与した。

【０１８８】ＳＲＴ−Ｋ投与による抗腫瘍効果は固型対
照群の腫瘍重量（４７４３±２６７ｍｇ）に対してＳＲ
Ｔ−Ｋの投与各群では２７９４〜３１２４ｍｇの範囲に
あり、すべての群で有意な減少（４２〜３５％の縮小）
が認められた。縮小した腫瘍の重量よりＳＲＴ−Ｋのロ
ット（ＳＲＴ−Ｋ７０５、ＳＲＴ−ＫＡ５０３Ａ）間お
よび形状（液体保存試料と凍結乾燥試料）に明らかな抗
腫瘍効果の差は見られなかった。また、有効例の判定で
は固型対照群では自然に縮小した例が見られず、ＳＲＴ
−Ｋ投与各群では、８匹中１〜３の有効例が見られたが
ロット間（ＳＲＴ−Ｋ７０５は３／１６、１８％、ＳＲ
Ｔ−ＫＡ５０３Ａは４／１６、２５％）で差が見られな
かった。

【０１８９】血球数の増減や臓器重量の変動に関して
は、固型腫瘍においても本試験の腹水型腫瘍のＳＲＴ−
Ｋ投与各群と同じく、白血球の増加傾向ならびに赤血球
数・ヘモグロビン量の減少、更には肝臓、腎臓、胸腺重
量の低下、脾臓重量の増加傾向が見られた。また、この
傾向はＳＲＴ−ＫＡ凍結乾燥試料投与群で顕著であり、
抗腫瘍効果と合わせ考えると本試料の活性の一部と推察
された。

【０１９０】Ｖ．まとめ１．ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）及びＳＲＴ−
ＫＡ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）の２ロットの原液０．
１ｍｌ（乾燥重量ともに２１．４ｍｇ／ｍｌ）の腹腔内
投与は、Ｓ−１８０腹水腫瘍に対してともに有効であ
り、特に後者ＳＲＴ−ＫＡ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）
に強い抗腫瘍効果が認められた。

【０１９１】２．Ｓ−１８０固型腫瘍に対してＳＲＴ−
Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）およびＳＲＴ−ＫＡ（ｌｏ
ｔ．９７０５０３Ａ）のＳＲＴ−Ｋ原液２０μｌ（乾燥
重量ともに２１．４ｍｇ／ｍｌ）の腫瘍内投与は、とも
に明らかな抗腫瘍効果を示し、上記２ロット間でその効
果に差は見られなかった。

【０１９２】３．Ｓ−１８０腹水型腫瘍ならびにＳ−１
８０固型腫瘍に対するＳＲＴ−Ｋ（２ロット）の抗腫瘍
効果は、形状（液体保存、凍結乾燥）によって変化する
ことなく安定であった。４．ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）およびＳＲＴ
−ＫＡ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）の投与は、担癌マウ
ス（腹水型・固型）の白血球数の増加、赤血球数および
ヘモグロビン量の減少に関与することが示唆された。５．ＳＲＴ−Ｋ（ｌｏｔ．９６０７０５）およびＳＲＴ
−ＫＡ（ｌｏｔ．９７０５０３Ａ）の投与は、担癌マウ
ス（腹水型・固型）脾重量を顕著に増加させ胸腺重量を
減少させることが認められた。

【０１９３】実施例５本発明生理活性物質による癌細胞のアポプトシス誘導作
用実験操作１．アガロースゲル電気泳動法アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）に伴うＤＮＡ断片
は、１８０〜２００ｂｐの整数倍の小さなフラグメント
であるため、１．５〜２％という高濃度のアガロースゲ
ルを用いた。泳動は水平な位置にゲルを置き上を泳動バ
ッフアーで覆うサブマリン型の方式で行った。

【０１９４】２．器具（１）電子レンジ（三菱電子レンジＲＲ−５０、三菱
電気社製、日本）（２）ＵＶトランスイルミネータ（ＤＴ型卓上照射装置
ＰＡ３型及び写真撮影装置（ＭＰ−４Ｘ型ポラロイドカ
メラ一式）（３）インスタントフイルム（ポラロイド６６７、日本
ポラロイド社製）

【０１９５】３．試薬（１）アガロース（２）エチジウムブロマイド溶液１０ｍｇ／ｍｌ（３）ＤＮＡマーカー１２３塩基対ラダー（Ｇｉｂｃｏ
ＢＲＬ社製）

【０１９６】４．試薬の調製（１）トリスホウ酸ＥＤＴＡ（ＴＢＥ泳動用バッフアー）保存液：ＴＢＥ１０溶液Ｔｒｉｓｂａｓｅ１０８ｇホウ酸５５ｇ０．５ＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）４０ｍｌ ──────────────── 計１リットル室温保存（本溶液用の試薬錠剤が市販されている）、用時１０倍希釈

【０１９７】（２）ゲルローディング液（６倍溶液）（最終濃度）ブロムフェノールブルー（ＢＰＢ）２５ｍｇ（０．２５％）ショ糖４ｇ ────────────────── 計１０ｍｌ

【０１９８】操作下記の１）〜６）の工程を順次行う。１）アガロース２ｇにゲル泳動用バッフアー１００ｍｌ
を加え、電子レンジで加温溶解させた。７０℃位になっ
たらゲルメーカー板に流し、直ちにコームを差し込みゲ
ルメーカー板、小で１５ｍｌ、大で２５ｍｌ、厚さ４〜
５ｍｍのゲルを作製した。アガロースが冷却後コームを
外した（低温で保存可能）。２）次にＤＮＡ試料は前記でのＤＮＡ抽出液＋ＴＥバッ
フアー５：ゲルローディング液１となるように混合する
（全量で６〜１５μｌ）。

【０１９９】３）上記の混合サンプルおよびＤＮＡ分子
量マーカーの試料をゲル上のウエルに入れる。４）泳動槽に泳動バッフアーを入れ、エチジンブロマイ
ド１２ｍｌを加え混合した。試料をつけたアガロースゲ
ルプレートをセット後、５０Ｖで５分間位泳動を行い、
ＢＰＢ（和光純薬社製）がゲルに入るのを確認してから
（泳動方向確認）一時停止し、ゲル上に泳動バッフアー
を３〜５ｍｍ覆う程度に追加した。

【０２００】５）５０Ｖで泳動を続け、マーカー色素が
先端付近にきたら終了する。６）バックグランドの蛍光を落とすためゲルを水に浸
し、２０〜３０分ゆっくりと振とう後、ＵＶトランスイ
ルミネーターでＤＮＡの蛍光を検出し、写真撮影を行っ
た（ポラロイドカメラ使用）。

【０２０１】ＤＮＡＺｏｌ試薬細胞溶解１）ＤＮＡｚｏｌ１ｍｌ＋１．０×１０⁷ｃｅｌｌｓ
（０．１ｍｌの液体サンプル）をピペッテイングで混ぜ
た。２）全量１００ｍｌになるように遠心して上清を除き、
０．９％ＮａＣｌで細胞を洗浄した。

【０２０２】３）遠心して上清を除き、４℃の低温液
（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ８．０、１０ｍＭ
ＥＤＴＡ）中に浮遊させた。４）４０００ｒｐｍ、１０分間遠心し上清を除き、１．
０×１０⁷ｃｅｌｌｓに対して１ｍｌＤＮＡｚｏｌを
加え、ピペッテイングで混ぜた。

【０２０３】ＤＮＡの沈殿１）ＤＮＡｚｏｌ１ｍｌに対して０．５ｍｌ１００
％エタノールを添加すると、ＤＮＡの沈殿が起き分離し
た。２）サンプルを横にして静かにシエイクし、これを１〜
３分間室温においた。３）ＤＮＡの沈殿をピペットのチップで巻き付けるよう
にして取り出し、新しいチューブの壁に沿って移した。

【０２０４】４）静かに注意深く上清をすて、ＤＮＡの
沈殿をチューブの底に移した。５）１分間程チューブを立てておき、チューブの底に溜
まっているものを吸引した。６）ＤＮＡの存在が確認されないときは４℃、１〜２分
間、４０００ｇで遠心し、ＤＮＡをペレットにした。

【０２０５】ＤＮＡ洗浄１）ＤＮＡ沈殿を２回、９５％エタノールで洗浄した。２）各洗浄では３〜６回チューブを横にし、静かにシエ
イクしてＤＮＡを浮遊させた。３）チューブの底に落ちつかせるために０．５〜１分間
チューブを立てておき、後エタノールをピペッテイング
又は注ぐことで移した。

【０２０６】ＤＮＡ溶解１）５〜１５分間室温でチューブの蓋を開けてＤＮＡを
乾燥させた。２）ＤＮＡを８ｍＭＮａＯＨにピペットのチップを通
してゆっくりと注ぎ入れて完全に溶解させた。３）８ｍＭＮａＯＨを加えてＤＮＡが０．２〜０．３
μｇ／ｍｌの濃度になるようにする。

【０２０７】種類ヒト腎臓の癌細胞；ＫＵ−２１１）培養方法培地：１０％仔牛血清培養液細胞数：１×１０⁶／ｍｌ／１０ｍｌ、６枚（コントロ
ール３枚、ＫＵ−２１３枚）時間：１０時間程度（ｏｖｅｒｎｉｇｈｔｃｕｌｔ
ｕｒｅ）

【０２０８】２）ＳＲＴ−Ｋの感作処理ｌｏｔ．９７０５０３Ａ感作量：１ｍｌ濃度：最終濃度を約１０パーセント／ｔｏｔａｌとす
る時間：６時間コントロールとしてＰＢＳ（−）緩衝液１ｍｌ／ｔｏ
ｔａｌ（１０％）

【０２０９】３）結果処理前の細胞は図８のように底面に着床し、一定の形態
をとっている。また、球状は分列前のものである。これ
はＳＲＴ−Ｋの感作処理をすることによってほぼ１００
％分裂状態になる（図９参照）。この形状はしばらく続
くがやがて縮小し消滅してゆく。これらのことから、細
胞の増殖にはＧ₁（合成準備期）、Ｓ期（合成期）、Ｇ
₂期（分裂準備期）、Ｍ期（分裂期）を繰り返して行く
が、癌細胞に関しては分裂が不可能であり、合成ができ
ないと判断させれる。従って、形態学的にみて細胞死は
ネクロース様ではなく、アポトーシス様である。

【０２１０】種類ヒト歯肉由来正常線維芽細胞：ＧＦ１）培養方法培地：１０％仔牛血清培養液細胞数：１×１０⁶／ｍｌ／１０ｍｌ、６枚（コントロ
ール３枚、ＧＦ３枚）時間：１０時間程度

【０２１１】２）ＳＲＴ−Ｋの感作処理ｌｏｔ．９７０５０３Ａ感作量：１ｍｌ濃度：最終濃度を約１０パーセント／ｔｏｔａｌとす
る時間：６時間コントロールとしてＰＢＳ（−）緩衝液１ｍｌ／ｔｏ
ｔａｌ（１０％）

【０２１２】３）結果細胞形状は一定の形態をとっている（図１０参照）。感
作処理をすると細胞は一時ダメージを受けるが、感作時
間内に復活し分裂を開始する。コントロールと比較して
あまり大きな差異がなくなる。時間経過とともに同じ形
状をもち（図１１参照）、明らかに癌細胞とは異なるこ
とが認められる。従って、形態学的に細胞はネクロース
様に破壊されず、アポトーシス様に起こっていることが
判断される。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明による生理活性物質（培養５日間による
ＳＲＴ−ＫＡ）のＵＶスペクトルである。

【図２】本発明による生理活性物質（培養１２日間によ
るＳＲＴ−ＫＢ）のＵＶスペクトルである。

【図３】本発明による生理活性物質の菌体破砕液の等電
点電気泳動図であり、符号１は５日間培養したＳＲＴ−
ＫＡの等電点電気泳動図であり、符号２は１２日間培養
したＳＲＴ−ＫＢの等電点電気泳動図であり、符号３は
等電点マーカーを示すものである。

【図４】本発明による生理活性物質の菌体破砕液のＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミド電気泳動図であり、符号１は５
日間培養したＳＲＴ−ＫＡの電気泳動図であり、符号２
は１２日間培養した試料ＳＲＴ−ＫＢの電気泳動図であ
る。

【図５】本発明による生理活性物質（ＳＲＴ−ＫＡ）の
Ｃｏｎ．Ａ−アガロースによる菌体破砕液の分離結果を
示すものである。

【図６】本発明による生理活性物質（ＳＲＴ−ＫＢ）の
Ｃｏｎ．Ａ−アガロースによる菌体破砕液の分離結果を
示すものである。

【図７】本発明による生理活性物質のＤＮＡ濃度と吸光
度との関係を示す。

【図８】ヒト腎臓の癌細胞（ＫＵ−２１）をＳＲＴ−Ｋ
で処理する前の細胞の状態を示したものである。

【図９】ヒト腎臓の癌細胞（ＫＵ−２１）をＳＲＴ−Ｋ
で処理した後の細胞の状態を示したものである。

【図１０】ヒト歯肉由来正常線維芽細胞（ＧＦ）をＳＲ
Ｔ−Ｋで処理する前の細胞の状態を示したものである。

【図１１】ヒト歯肉由来正常線維芽細胞（ＧＦ）をＳＲ
Ｔ−Ｋで処理した後の細胞の状態を示したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:67） (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:67）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖
鎖を有する、分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、
またはそれらの混合物。
【請求項２】分子量が７４ｋＤａであることを特徴と
する請求項１に記載の糖タンパク質。
【請求項３】分子量が６５ｋＤａであることを特徴と
する請求項１に記載の糖タンパク質。
【請求項４】分子量が５２ｋＤａであることを特徴と
する請求項１に記載の糖タンパク質。
【請求項５】分子量が４１ｋＤａであることを特徴と
する請求項１に記載の糖タンパク質。
【請求項６】分子量が３４ｋＤａであることを特徴と
する請求項１に記載の糖タンパク質。
【請求項７】分子量がそれぞれ、７４ｋＤａ、６５ｋ
Ｄａ、５２ｋＤａ、４１ｋＤａ、３４ｋＤａであること
を特徴とする請求項１に記載の糖タンパク質の混合物。
【請求項８】アスペルギルス属の微生物に由来するこ
とを特徴とする請求項１に記載の糖タンパク質、または
それらの混合物。
【請求項９】アスペルギルス属の微生物がアスペルギ
ルスフラブスであることを特徴とする請求項８に記載
の糖タンパク質、またはそれらの混合物。
【請求項１０】アスペルギルスフラブスがアスペル
ギルスフラブスＳＲＴであることを特徴とする請求項
９に記載の糖タンパク質、またはそれらの混合物。
【請求項１１】アスペルギルスフラブスがアスペル
ギルスフラブスＳＲＴ（ＦＥＲＭＢＰ−５０３０）
であることを特徴とする請求項１０に記載の糖タンパク
質、またはそれらの混合物。
【請求項１２】制癌作用を有することを特徴とする請
求項１に記載の糖タンパク質、またはそれらの混合物。
【請求項１３】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型
糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質を
生産することができるアスペルギルス属に属することを
特徴とする微生物。
【請求項１４】アスペルギルス属の微生物がアスペル
ギルスフラブスであることを特徴とする請求項１３に
記載の微生物。
【請求項１５】アスペルギルスフラブスがアスペル
ギルスフラブスＳＲＴ（ＦＥＲＭＢＰ−５０３０）
であることを特徴とする請求項１４に記載の微生物。
【請求項１６】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型
糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質を
生産することができるアスペルギルス属に属する微生物
を培養し、該培養物からＣｏｎ．Ａに吸着するアスパラ
ギン型糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパ
ク質、またはそれらの混合物を採取することを特徴とす
るＣｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する分
子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、またはそれらの
混合物の製造方法。
【請求項１７】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型
糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質を
生産することができるアスペルギルス属の微生物の培養
菌体を酵素および界面活性剤で処理することにより破壊
し、Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する
分子量３４〜８３ｋＤａｎの糖タンパク質、またはそれ
らの混合物を採取することを特徴とする請求項１６に記
載の製造方法。
【請求項１８】酵素がノボザイムおよびセルラーゼで
あることを特徴とする請求項１７に記載の製造方法。
【請求項１９】ノボザイムとセルラーゼが１：１０
（ｗ／ｗ）の比率であることを特徴とする請求項１８に
記載の製造方法。
【請求項２０】Ｃｏｎ．Ａに吸着するアスパラギン型
糖鎖を有する分子量３４〜８３ｋＤａの糖タンパク質を
生産することができるアスペルギルス属に属する微生
物、その菌体破砕物、またはそれから採取されたＣｏ
ｎ．Ａに吸着するアスパラギン型糖鎖を有する分子量３
４〜８３ｋＤａの糖タンパク質、またはそれらの混合物
を有効成分として含有することを特徴とする制癌剤。
【請求項２１】固型癌の治療に使用されることを特徴
とする請求項２０に記載の制癌剤。
【請求項２２】腹水型癌の治療に使用されることを特
徴とする請求項２０に記載の制癌剤。
【請求項２３】多形細胞肉腫の治療に使用されること
を特徴とする請求項２０に記載の制癌剤。
【請求項２４】癌の転移を抑制するために使用される
ことを特徴とする請求項２０に記載の制癌剤。
【請求項２５】口腔腫瘍の治療に使用されることを特
徴とする請求項２０に記載の制癌剤。
【請求項２６】菌糸の破砕が物理的手段による破砕で
ある請求項１７に記載の製造方法。
【請求項２７】培養が５〜１２日間であることを特徴
とする請求項１６に記載の製造方法。
【請求項２８】ＤＮＡ合成抑制作用または阻害作用を
有することを特徴とする請求項１に記載の糖タンパク
質、またはそれらの混合物。
【請求項２９】癌細胞に対してアポトーシスを起こ
し、正常細胞に対してはアポトーシスを起こす確率が低
い性質を有することを特徴とする請求項１に記載の糖タ
ンパク質、またはそれらの混合物。
【請求項３０】プロテアーゼ活性を有することを特徴
とする請求項１に記載の糖タンパク質、またはそれらの
混合物。