JPH11239483A - ＮＥ−ｄｌｇと結合する蛋白質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＮＥ−ｄｌｇに結合する蛋白質を提供するこ
と、該蛋白質をコードするポリヌクレオチドを提供する
ことおよび該蛋白質を認識する抗体を提供すること。 【解決手段】 ＮＥ−ｄｌｇと結合しかつ既知の哺乳類
蛋白質とホモロジーを有さず分子量が５１ｋＤである蛋
白質ネダシンを提供する。ネダシンは、ＮＥ−ｄｌｇを
固定したカラムを使用して各組織の蛋白質粗分画をアフ
ィニティー精製することにより得ることができる。ま
た、ネダシンをコードするポリヌクレオチドを提供す
る。また、このポリヌクレオチドにより遺伝子工学的手
法で作製されたネダシンを提供する。また、ネダシンを
認識する抗体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ＮＥ−ｄｌｇと結
合する蛋白質（そのスプライシングアイソフォームを含
む）に関する。また、前記の蛋白質をコードするポリヌ
クレオチドに関する。また、前記の蛋白質またはポリヌ
クレオチドのホモログに関する。また、前記の蛋白質を
認識する抗体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ショウジョウバエの癌抑制遺伝子である
ｄｌｇ遺伝子は、その欠失により成虫盤新生の過増殖を
引き起こす遺伝子である。該ｄｌｇ遺伝子とホモロジー
を持つ遺伝子群は、ＭＡＧＵＫファミリーと呼ばれ、細
胞接着部位や神経末端に局在し、特定の蛋白質を集積さ
せる機能を持つと考えられている。本発明者らは、ヒト
の遺伝子であってショウジョウバエのｄｌｇ遺伝子にホ
モロジーを有する遺伝子であるＮＥ−ｄｌｇ遺伝子を単
離し、さらに該ＮＥ−ｄｌｇ遺伝子がコードするＮＥ−
ｄｌｇ蛋白質（以下、ＮＥ−ｄｌｇと略記することがあ
る。）がＡＰＣ癌抑制蛋白質のＣ末端領域と相互作用す
ることを明らかにして、該ＮＥ−ｄｌｇ蛋白質が細胞の
増殖に対して負の制御をすることを示した（Ｏｎｃｏｇ
ｅｎｅ，１４，２４２５−２４３３）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記ＮＥ−
ｄｌｇに結合する蛋白質を提供すること、該蛋白質をコ
ードするポリヌクレオチドを提供すること、該蛋白質を
認識する抗体を提供することを課題とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、ＮＥ−ｄｌｇ
と結合しかつ既知の哺乳類蛋白質とホモロジーを有さず
分子量が５１ｋＤである蛋白質（ネダシンと名付けた）
を提供する。ネダシンは、ＮＥ−ｄｌｇを固定したカラ
ムを使用して各組織の蛋白質粗分画をアフィニティー精
製することにより得ることができる。

【０００５】また、本発明は、配列表の配列番号１、
３、５または７のいずれかに記載のアミノ酸配列からな
る蛋白質を提供する。これらはヒトにおけるネダシン
（スプライシングアイソフォーマを含む）である。

【０００６】また、本発明は、配列表の配列番号１に記
載のアミノ酸配列において一または複数のアミノ酸を置
換、欠失または付加してなるアミノ酸配列からなり、か
つＮＥ−ｄｌｌｇと結合する蛋白質を提供する。これ
は、ヒトネダシンＳの変異体である。

【０００７】また、本発明は、前記のネダシン（変異体
を含む）をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【０００８】また、本発明は、前記ポリヌクレオチドの
塩基配列の相補塩基配列からなるアンチセンスポリヌク
レオチドをも提供する。

【０００９】また、本出願において、ネダシンの作製方
法が開示される。具体的には、ネダシンｃＤＮＡを導入
した形質転換体にネダシンを作製させる方法が開示され
る。また、その作製方法により作製した組み換えネダシ
ンが開示される。

【００１０】また、本発明は、前記ネダシンをコードす
るポリヌクレオチドまたはネダシン変異体をコードする
ポリヌクレオチドの塩基配列の相補塩基配列からなるア
ンチセンスポリヌクレオチドをも提供するものである。
アンチセンスポリヌクレオチドはポリヌクレオチドに含
まれるものであるが、本出願において、特にアンチセン
ス鎖の塩基配列からなるポリヌクレオチドであることを
明示する場合にアンチセンスポリヌクレオチドという。
アンチセンスポリヌクレオチドは、代表的なものとして
アンチセンスＤＮＡとアンチセンスＲＮＡがある。

【００１１】また、本発明は、ネダシンもしくはネダシ
ン変異体をコードするポリヌクレオチドの全部または１
２塩基以上からなる一部であるポリヌクレオチドを提供
するものである。このポリヌクレオチドは、コード領域
の部分のものについては、それぞれネダシンまたはネダ
シン変異体の部分長蛋白質を作製するために使用可能で
ある。また、プローブとしても使用可能である。

【００１２】また、本発明は、ネダシンまたはネダシン
変異体のアンチセンスポリヌクレオチドの全部または１
２塩基以上からなる一部であるアンチセンスポリヌクレ
オチドを提供するものである。このアンチセンスポリヌ
クレオチドは、それぞれネダシンまたはネダシン変異体
の生合成を阻害することが可能である。また、プローブ
としても使用可能である。

【００１３】また、本発明は、前記のポリヌクレオチド
（アンチセンスポリヌクレオチドを含む）を化学修飾し
たポリヌクレオチドを提供するものである。

【００１４】また、本出願は、ＤＮＡプローブを用いた
ノーザンブロットハイブリダイゼーション法による解析
により、各組織からネダシンのｍＲＮＡを検出できるこ
とおよび天然にネダシンのｍＲＮＡが発現していること
を開示するものである。

【００１５】また、本発明は、ネダシン遺伝子のホモロ
グ遺伝子がコードするネダシンのホモログ蛋白質を提供
するものである。なお、本出願において、由来する動物
名を示さない場合は、各脊椎動物におけるネダシンを集
合的に指す。前記のネダシンは、ネダシン遺伝子を導入
した形質転換体に作製させることが可能である。

【００１６】本発明は、ヒトネダシンをコードするポリ
ヌクレオチドまたは１２塩基以上からなるその一部（コ
ード領域の部分）をプローブとして用いて、他の脊椎動
物、好ましくは哺乳類動物のｃＤＮＡライブラリーから
もネダシンｃＤＮＡを取得する方法およびその方法によ
り得られたネダシンｃＤＮＡをも含むものである。

【００１７】また、本発明は、前記ネダシンｃＤＮＡが
コードするヒトネダシンのホモログであるネダシン蛋白
質を提供する。

【００１８】また、本発明は、前記ネダシンおよびネダ
シンの変異体を認識する抗体を提供する。本出願におい
て、ネダシンの抗原性、すなわち、ネダシンから抗体を
作製することが可能であることが開示される。

【００１９】

【発明の実施の形態】以下本発明を詳細に説明する。 （ネダシンの精製）本発明に係るネダシンは、ヒトだけ
ではなく、各種動物の組織由来細胞から抽出した蛋白質
粗分画をＮＥ−ｄｌｇと結合させて、さらに、透析、硫
安沈殿またはゲル濾過カラム、イオン交換カラムもしく
はハイドロキシアパタイトを吸着体としたクロマトグラ
フィー、またはグリセロール密度勾配遠心法等の操作で
単一に精製することが可能である。また、各種クロマト
グラフィーを組み合わせることにより、ネダシンの精製
は可能である。精製したネダシン画分はＮＥ−ｄｌｇと
結合する。精製したネダシンを含む画分を、ＳＤＳ−ポ
リアクリルアミド電気泳動法（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，ｐ６３６−６４０）や、Ｏ’Ｆａｒｒｅｌｌ等
による２次元電気泳動により分離した後、ゲルをクマシ
ー染色すると、分子量約５１ｋＤのバンドが観察され
る。

【００２０】（ネダシンの単離）前記ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
や２次元電気泳動によるバンドからネダシンを単離する
には、分子量約５１ｋＤａのバンドから蛋白質を抽出す
ることにより可能である。すなわち電気泳動法より分離
同定されたネダシンをポリビニリデンジフルオライド
（ＰＶＤＦ）等にトランスファーすることが可能であ
る。

【００２１】（プローブの作成）前記の処理後のネダシ
ンを、リジルエンドペプチダーゼなどによる各種酵素処
理によりポリペプチドフラグメントの混合物とし、得ら
れたペプチドフラグメントの混合物を高速液体クロマト
グラフィーで分離する。前記得られたポリペプチドフラ
グメントのいくつかのフラグメントのアミノ酸配列を自
動アミノ酸シークエンサー等を用いて決定することが可
能である。前記の解析によって得られたアミノ酸配列を
コードするポリペプチドフラグメントのうち縮重頻度の
低いものを選択し、これに対応する相補的ポリヌクレオ
チドを、合成して作成することにより可能である。この
合成ポリヌクレオチドを、ネダシンをコードするポリヌ
クレオチドの検索のためのプローブとして使用できる。
また、複数のアミノ酸配列が得られた場合は、対応する
相補的ポリヌクレオチドを組み合わせて、ｃＤＮＡを鋳
型にして、ＰＣＲ法により、より長い断片のＤＮＡプロ
ーブを得ることが可能である。以上のようにして、ネダ
シンをコードするポリヌクレオチドをスクリーニングす
るためのポリヌクレオチドプローブが得られる。

【００２２】（ｃＤＮＡライブラリーの作製およびスク
リーニング）本発明のネダシンをコードするポリヌクレ
オチドをスクリーニングするためのｃＤＮＡライブラリ
ーの作製には、一般的な方法を使用可能であり例えば次
のステップにより可能である。すなわち、（ｉ）細胞か
らメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を分離し、（ｉ
ｉ）該ｍＲＮＡから、一本鎖の相補鎖ポリヌクレオチド
（ｃＤＮＡ）を、次いで２重鎖ポリヌクレオチドを合成
し、（ｉｉｉ）二本鎖ポリヌクレオチドをプラスミドま
たはファージに組み込み、（ｉｖ）得られた組換えプラ
スミドまたはファージにより適当な宿主細胞を形質転換
し、（ｖ）得られた形質転換体を培養後、形質転換体か
ら、適当な方法、例えばコロニーハイブリダイゼーショ
ンまたはプラークハイブリダイゼーションにより、目的
とするポリヌクレオチドを含有するプラスミドまたはフ
ァージを単離し、（ｖｉ）そのプラスミドまたはファー
ジから目的とするポリヌクレオチドを切り出し、（ｖｉ
ｉ）切り出したポリヌクレオチド（クローン化ポリヌク
レオチド）を適当なプラスミドにサブクローニングす
る、というステップである。

【００２３】各ステップについてさらに詳しく説明す
る。 ステップ（ｉ）：ネダシンのポリペプチドをコードする
ｍＲＮＡは、種々の動物の組織、器官、産生細胞から、
より具体的には、脳、胎盤、肝臓、腎臓などから得るこ
とができる。また前記細胞から全ＲＮＡを調製する方法
としては、グアニジウム／セシウムクロライド法（Ｇｕ
ａｎｉｄｉｕｍｕ／Ｃｅｓｉｕｍｕ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ
ｍｅｔｈｏｄ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ，ｐ７．１９−７．２３，１９８９）やグアニジウム
チオシアネート法（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ，１６２，ｐ１５６−１５９，１９８
７）等が一般に用いられる。前記操作により得られる全
ＲＮＡからのｍＲＮＡの分離、精製は例えば、オリゴｄ
Ｔ−セルロース（コラボレイティブ リサーチ社（Ｃｏ
ｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ社））やオ
リゴテックス−ｄＴ３０（タカラ社）等を用いて吸着カ
ラム法またはバッチ法により実施できる。

【００２４】ステップ（ｉｉ）：このようにして得られ
たｍＲＮＡを鋳型として逆転写酵素を用いて、例えばオ
カヤマ−バーグ法（Ｏｋａｙａｍａ，Ｈ．ａｎｄ Ｂｅ
ｒｇ，Ｐ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３，ｐ２８０，１９８３）や
グブラーとホフマンの方法（Ｇｕｂｌｅｒ，Ｖ．ａｎｄ
Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｂ．Ｊ．，Ｇｅｎｅ，２５，ｐ２６
３−２６９，１９８３）等に従いｃＤＮＡを合成する。

【００２５】ステップ（ｉｉｉ）：得られたｃＤＮＡを
プラスミドやファージに組み込み、ｃＤＮＡのライブラ
リーを調製する。ｃＤＮＡを組み込むプラスミドベクタ
ーとしては、例えば、ＰＢＲ３２２（Ｇｅｎｅ，２，９
５，１９７７）、ＰＢＲ３２５（Ｇｅｎｅ，４，１２
１，１９７８）、ＰＵＣ１２もしくはＰＵＣ１３（Ｇｅ
ｎｅ，１９，２５９，１９８２）、ＰＵＣ１８もしくは
ＰＵＣ１９（Ｇｅｎｅ，３３，１０３，１９８５）、Ｐ
ＵＣ１１８もしくはＰＵＣ１１９（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３，３，１９８７）、
Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄｓ．Ｒｅｓ．，１７，９４９４，１９８９）などが挙
げられるが、その他のものであっても、宿主内で複製保
持されるものであれば、いずれも用いることができる。

【００２６】また、ｃＤＮＡを組み込むファージベクタ
ーとしては、例えば、λｇｔ１０（Ｈｕｙｎｈ，Ｔ．
Ｖ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｒ．Ａ．ａｎｄ Ｄａｖｉｓ，Ｒ．
Ｗ．，ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａ
ｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬＰｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒ
ｄ，１，４９，１９８５）、λｇｔ１１（Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０，１
１９４，１９８３）またはλＺＡＰＩＩ（Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，１７，９４９４，１９８
９）などが使用可能であるが、その他のベクターであっ
ても、適当な宿主内で増殖できるものであれば良い。

【００２７】プラスミドにｃＤＮＡを組み込む方法とし
ては、例えば、サンブルーク（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，
Ｊ．）らの方法（前掲のＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎ
ｉｎｇＳｅｃｏｎｄ Ｅｄｔ．，ｐ１．５３−１．７
３，１９８９）などが挙げられる。また、ファージベク
ターにｃＤＮＡを組み込む方法としては、例えば、Ｈｙ
ｕｎｈ，Ｔ．Ｖ．等の方法（前掲のＤＮＡ ｃｌｏｎｉ
ｎｇ）などが使用可能である。

【００２８】ステップ（ｉｖ）：前記の方法により得ら
れたプラスミドやファージベクターは、これを適当な宿
主たとえば、エシェリヒアコリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａＣｏｌｉ）、バチルススブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、サッカロミセスセレビシアエ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ）等に導入して、これを形質転換できる。プラスミド
ベクターで宿主を形質転換する方法としては、例えば、
モレキュラークローニング（前掲のＭｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ、１．７４−１．８４ページ）記載の
エレクトロポーレーション法あるいはカルシウムクロラ
イド法などが挙げられる。また、ファージベクターに
は、例えば、増殖させた大腸菌にインビトロパッケージ
ング法を用いて導入することができる。

【００２９】ステップ（ｖ）：前記方法によるｃＤＮＡ
から目的のネダシンのｃＤＮＡを選択するには、例えば
ラベル化したプローブを用いたコロニーハイブリダイゼ
ーション法または、プラークハイブリダイゼーション法
（前掲のＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ Ｓｅｃｏ
ｎｄ Ｅｄｉｔ．，１．８５−１．１０４ページまたは
２．１１２−２．１２０ページ）などが使用可能であ
る。前記のハイブリダイゼーションにおけるプローブと
して用いるポリヌクレオチドとしては、ネダシンとハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドであれば、何でもよ
く、例えばネダシンのアミノ酸配列に基づいて化学合成
したポリヌクレオチドが使用可能である。以上のように
して、ネダシンをコードするポリヌクレオチドが調製可
能となる。

【００３０】（塩基配列の決定）前記に従い得られたｃ
ＤＮＡの塩基配列の決定は、例えば、マキサム−ギルバ
ート（Ｍａｘｉａｍ−Ｇｉｌｂｅｒｔ）法（Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，６５，４９９−５
６０，１９８０）、ジデオキシ法（Ｍｅｓｓｉｎｇ，
Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，９，３０９，１９８１）、蛍光色素を用
いたＴａｑサイクルシークエンシング法（Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ，７，４９４−４９９，１９８９）によ
り可能である。

【００３１】（ヒトネダシン）決定されたヒトのネダシ
ンには４つのスプライシングアイソフォームがある。Ｃ
末端がＳＳＶ構造のネダシンＳはＮＥ−ｄｌｇとの結合
性を有している。ネダシンＳをコードするｃＤＮＡの塩
基配列は、配列表の配列番号２に記載したように、２０
４０残基からなり、オープンリーディングフレームは８
６番目のＡから１４５０番目のＡまでの１３６５塩基で
あり、４５４アミノ酸をコードする。ＮＥ−ｄｌｇと結
合することを構造の点から述べると、Ｃ末端がＳＳＶ構
造となっているということである。ネダシンＶ１をコー
ドするｃＤＮＡの塩基配列は、配列表の配列番号４に記
載したように、１９２６残基からなり、オープンリーデ
ィングフレームは１番目のＡから１４１６番目のＡまで
の１４１６塩基であり、４７１アミノ酸をコードする。
ネダシンＶ２をコードするｃＤＮＡの塩基配列は、配列
表の配列番号６に記載したように、１５１８残基からな
るオープンリーディングフレームを有していて、５０５
アミノ酸をコードする。ネダシンＶ３をコードするｃＤ
ＮＡの塩基配列は、配列表の配列番号８に記載したよう
に、１３８３残基からなるオープンリーディングフレー
ムを有していて、４６０アミノ酸をコードする。

【００３２】本発明に係る前記ｃＤＮＡは、前記配列の
オープンリーディングフレームの５’末端にＡＴＧが結
合していない塩基配列からなるｃＤＮＡを含む。また、
ｃＤＮＡに限らず、配列表の配列番号２、４、６または
８に記載の塩基配列を一次構造とするＤＮＡおよび該塩
基配列に対応する塩基配列からなるＲＮＡも、本発明の
ヒトネダシンをコードするポリヌクレオチドに含まれ
る。本発明のポリヌクレオチドは、ヒトネダシンのシグ
ナルペプチドの部分または全部をコードする５’−フラ
ンキングポリヌクレオチドを含むＤＮＡも含む。さら
に、遺伝暗号の縮重に従い、ポリヌクレオチドから生産
されるポリペプチドのアミノ酸配列を変えることなくそ
のポリヌクレオチドの塩基配列の少なくとも一つの塩基
を他の種類の塩基に置換することができる。従って、本
発明のポリヌクレオチドはまた、遺伝暗号の縮重に基づ
く置換によって、その塩基配列がコードするアミノ酸配
列が配列表の配列番号１、３、５または７に記載のアミ
ノ酸配列であるもの全てを含む。

【００３３】本発明のヒトネダシンＳのアミノ酸配列
は、配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列である。
該アミノ酸配列からなる蛋白質の計算上の分子量は、５
１．０ｋＤであり、等電点は、５．３５である。本発明
のヒトネダシンＶ１のアミノ酸配列は、配列表の配列番
号３に記載のアミノ酸配列である。該アミノ酸配列から
なる蛋白質の計算上の分子量は、５２．８ｋＤであり、
等電点は、５．４８である。本発明のヒトネダシンＶ２
のアミノ酸配列は、配列表の配列番号３に記載のアミノ
酸配列である。該アミノ酸配列からなる蛋白質の計算上
の分子量は、５６．８ｋＤであり、等電点は、５．３６
である。本発明のヒトネダシンＶ１のアミノ酸配列は、
配列表の配列番号３に記載のアミノ酸配列である。該ア
ミノ酸配列からなる蛋白質の計算上の分子量は、５２．
１ｋＤであり、等電点は、５．９０である。

【００３４】本発明に係るヒトネダシンは、前記のアミ
ノ酸配列のＮ末端にメチオニンが結合していないポリペ
プチドを含む。また、前記アミノ酸配列のＮ末端にヒト
ネダシンのためのシグナルペプチドの一部分もしくは全
部が結合または欠損した中間体も含む。

【００３５】また、自然の変異により、または人工の変
異によりポリペプチドの主たる活性に変化を与えること
なく、蛋白質をコードするＤＮＡの構造の一部を変化さ
せることが可能である。人工の変異としては、例えばポ
イントミューテーションの技術がある。この技術を利用
して、目的とする蛋白質をコードするＤＮＡの構造を変
化させたＤＮＡ変異体を作製し、該ＤＮＡ変異体を適当
な宿主に導入して形質転換体を作製し、該形質転換体に
目的とする蛋白質の変異体を作製させることができる。
この技術を利用して、本発明のネダシンについてもその
構造を変化させた変態を作製することができる。したが
って、本発明は、ネダシンＳの変異体については、その
アミノ酸配列のＣ末端のＳＳＶ構造が保存されながら変
化させられており、かつＮＥ−ｄｌｇと結合する蛋白質
をを含み、そのスプライシングアイソフォームであるネ
ダシンＶ１、ネダシンＶ２またはネダシンＶ３のそれぞ
れの変異体も含む。

【００３６】また、本発明は、ネダシン変異体をコード
する塩基配列からなるポリヌクレオチドを含有する。ネ
ダシンをコードするｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡは、目
的により、そのままあるいは制限酵素で切断して使用す
ることが可能である。

【００３７】（アンチセンスポリヌクレオチド）また、
本発明は、前記塩基配列の相補塩基配列からなるアンチ
センスポリヌクレオチドをも含むものである。本発明の
アンチセンスポリヌクレオチドは、ヒトネダシンの生合
成を阻害するのに使用可能であり、またプローブとして
も使用可能である。

【００３８】一般に、アンチセンスポリヌクレオチドは
ポリヌクレオチドに含まれる。本出願においても、アン
チセンスポリヌクレオチドはポリヌクレオチドに含まれ
るものとして説明するが、特に、アンチセンス鎖のポリ
ヌクレオチドであるものを明確に指す場合に、アンチセ
ンスポリヌクレオチドという。ポリペプチドの生合成を
阻害するためのアンチセンスポリヌクレオチドは、１５
塩基以上からなることが好ましい。一方、あまりに長い
アンチセンスポリヌクレオチドは、細胞内に取り込まれ
るには不適である。一般に、細胞内にアンチセンスポリ
ヌクレオチドを取り込ませ、目的とする蛋白質の生合成
を阻害させる場合、１２塩基以上３０塩基以下、好まし
くは１５塩基以上２５塩基以下、より好ましくは１８塩
基以上２２塩基以下の塩基からなるアンチセンスポリヌ
クレオチドを用いるのがよい。本発明のヒトネダシンに
対するアンチセンスポリヌクレチドにおいても、１２塩
基以上３０塩基以下、好ましくは１５塩基以上２５塩基
以下、より好ましくは１８塩基以上２２塩基以下の塩基
からなるアンチセンスポリヌクレオチドを用いるのがよ
い。

【００３９】本発明のアンチセンスポリヌクレオチド
は、塩基、リン酸、糖からなるヌクレオチドが複数結合
したものが、天然には存在しないものを含めて全て含ま
れる。代表的なものは、アンチセンスＤＮＡとアンチセ
ンスＲＮＡである。

【００４０】本発明のアンチセンスポリヌクレオチドに
ついて、公知のアンチセンス技術を用いて、目的とする
ＤＮＡやｍＲＮＡとの結合力、組織選択制、細胞透過
性、ヌクレアーゼ耐性、または細胞内安定性の高い様々
なアンチセンスポリヌクレオチド誘導体が得られる。現
在一般的に知られている誘導体は、ヌクレアーゼ耐性、
組織選択性、細胞透過性、結合力の少なくとも一が高め
られた誘導体であることが好ましい。特に好ましくは、
フォスフォロチオエート結合を骨格構造として有する誘
導体である。本発明のポリヌクレオチドおよびその誘導
体についても、これらの機能または構造を有する誘導体
が含まれる。

【００４１】ハイブリダイズのし易さの点では、一般的
には、ステムループを形成している領域の塩基配列に相
補的な塩基配列を持つアンチセンスポリヌクレオチドま
たはその誘導体を設計するとよいとされている。本発明
のアンチセンスポリヌクレオチドおよびその誘導体は、
必要に応じ、ステムループを形成することが可能であ
る。

【００４２】また、翻訳開始コドン付近、リボソーム結
合部位、キャッピング部位、スプライス部位の配列に相
補的な配列を有するようなアンチセンスポリヌクレオチ
ドは、一般に高い発現抑制効果が期待できる。したがっ
て、本発明のアンチセンスポリヌクレオチドまたはその
誘導体であって、ネダシンをコードするＤＮＡまたはｍ
ＲＮＡの翻訳開始コドン付近、リボソーム結合部位、キ
ャッピング部位、スプライス部位の相補的な配列を含む
ものは、高い発現抑制効果が期待される。

【００４３】天然型のアンチセンスポリヌクレオチドで
あれば、化学合成機を使用して合成したり、ヒトネダシ
ンをコードする遺伝子を鋳型とするＰＣＲ法により本発
明のアンチセンスポリヌクレオチドを作製することがで
きる。また、メチルフォスフォネート型やフォスフォロ
チオエート型等、誘導体の中には、化学合成できるもの
もある。この場合には、化学合成機に添付されている説
明書にしたがって操作を行い、得られた合成産物を逆相
クロマトグラフィー等を用いたＨＰＬＣ法により精製す
ることによっても、目的のアンチセンスポリヌクレオチ
ドまたはその誘導体を得ることができる。

【００４４】（ポリヌクレオチドプローブ）本発明のネ
ダシンをコードするポリヌクレオチドもしくはその一部
（連続する９以上の塩基からなるポリヌクレオチド）、
または該ポリヌクレオチドのアンチセンス鎖のアンチセ
ンスポリヌクレオチドもしくはその誘導体（連続する９
以上の塩基からなるアンチセンスポリヌクレオチドもし
くはその誘導体）は、ｃＤＮＡライブラリー等からネダ
シン遺伝子をスクリーニングするためのプローブとして
使用可能である。このときＧＣ含有率が３０ないし７０
％のものが好適に使用可能である。また、連続する１２
以上の塩基からなるポリヌクレオチドがより好ましく、
１５塩基以上であればさらに好ましい。プローブとして
用いる該ポリヌクレオチドは誘導体であってもよい。通
常、前記の塩基数以上の配列は特異性のある配列である
と認識されている。該プローブを用いたスクリーニング
において使用するｃＤＮＡライブラリーとしては、ｍＲ
ＮＡから作製されたものが好ましく使用できる。これら
のｃＤＮＡライブラリーからランダムサンプリングによ
り選択された一群のｃＤＮＡを検索の試料とすることが
できる。例えば、配列表の配列番号２に記載の塩基配列
のうちの連続する９以上の塩基からなるＤＮＡまたは該
ＤＮＡにハイブリダイズするポリヌクレオチド（アンチ
センスポリヌクレオチド）は、ｃＤＮＡライブラリー等
からネダシン遺伝子をスクリーニングするためのプロー
ブとして使用可能である。また、本発明のネダシンをコ
ードするポリヌクレオチドもしくはその一部をプローブ
として、各組織由来のｍＲＮＡについてノザンブロット
ハイブリダイゼーション解析を行うことにより、ネダシ
ンを遺伝子由来のｍＲＮＡが発現している組織を見出す
ことが可能である。

【００４５】（化学修飾されたポリヌクレオチド）ＤＮ
Ａ又はＲＮＡをを化学合成するときに、側鎖をメチル化
すること、あるいはビオチン化すること、またはリン酸
基部分のＯ（酸素）をＳ（硫黄）に置換すること等の化
学的に修飾することはよく知られている。また、ｃＤＮ
Ａライブラリーから取得されたｃＤＮＡであっても放射
性同位体で標識することも可能である。したがって、本
発明のＤＮＡ及びＲＮＡは、前記の化学修飾されたＤＮ
Ａ、ＲＮＡまたはアンチセンスポリヌクレオチドをその
範囲に含むものである。ここでいう化学修飾されたＤＮ
ＡまたはＲＮＡは、蛋白質をコードする機能またはプロ
ーブとしての機能をいずれも発揮可能なものであり、化
学修飾されたアンチセンスポリヌクレオチドは、プロー
ブまたは蛋白質の生合成を阻害する機能またはプローブ
としての機能をいずれも発揮可能なものである。

【００４６】（組換ネダシンの作製）また、本発明は、
前記のネダシン遺伝子を導入した形質転換体によって作
製された組換ネダシンを含むものである。また本発明の
開示によりネダシンのアミノ酸配列のうち一または複数
のアミノ酸を置換、欠失または付加したネダシン変異体
の作製が可能となる。形質転換に用いるベクターや宿主
は前記ｃＤＮＡライブラリーの作製およびスクリーニン
グの項で説明したものが使用可能である。また、ネダシ
ンまたはネダシン変異体の精製方法は、前記ネダシンの
精製の項で説明した方法が使用可能である。また、製造
段階において、製造するネダシンまたはネダシン変異体
は、他のポリペプチドとの融合ペプチドとして形質転換
体に作製させてもよい。この場合は、精製工程におい
て、ブロムシアン等の化学物質やプロテアーゼ等の酵素
で処理して、ネダシンまたはネダシン変異体を切り出す
操作が必要になる。

【００４７】（ネダシンを認識する抗体）さらに本発明
において得られたネダシンに対するポリクロナールまた
はモノクロナール抗体を作成することが可能である。本
発明は、ネダシンの抗原性について、実施例７に例示す
るように、本発明のネダシンの一部分であるペプチドを
ヒト以外の動物に免疫することでネダシンを認識する抗
体が得られるものであることを明らかにするものであ
る。また、全長のネダシンを免疫してもネダシンを認識
する抗体が得られる。したがって、本発明のネダシンを
認識する抗体（以降、ヒトネダシン抗体ということがあ
る）は、ネダシンをヒト以外の動物に免疫感作すること
により得られる抗体であって、該抗体が本発明のネダシ
ンを認識することがウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ
法や免疫染色法（例えばＦＡＣＳでの測定）等により確
認される抗体をその範囲内に含む。

【００４８】また、免疫原として、該蛋白質の一部をウ
シ血清アルブミンなどの他のキャリア蛋白質に結合させ
たものを用いることは、よく用いられる方法である。該
蛋白質の一部は、例えばペプチド合成機を用いて合成し
てもよい。なお、蛋白質の一部としては、８アミノ酸残
基以上であることが好ましい。抗原性が明らかとなった
物質については、免疫感作によってポリクローナル抗体
が得られるならば、該免疫した動物のリンパ球を用いた
ハイブリドーマによりモノクローナル抗体が産生される
ことはよく知られている（前掲のＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第６
章）。したがって本発明のネダシン抗体はモノクローナ
ル抗体もその範囲内に含むものである。

【００４９】本発明においては、抗体は活性フラグメン
トをも包含するものである。活性フラグメントとは、抗
原抗体反応活性を有する抗体のフラグメントを意味し、
具体的には、Ｆ（ａｂ′）₂ 、Ｆａｂ′、Ｆａｂ、Ｆｖ
などを挙げることができる。例えば、本発明の抗体をペ
プシンで分解するとＦ（ａｂ’）₂ が得られ、パパイン
で分解するとＦａｂが得られる。Ｆ（ａｂ’）₂ を２−
メルカプトエタノールなどの試薬で還元して、モノヨー
ド酢酸でアルキル化するとＦａｂ’が得られる。Ｆｖは
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とをリンカーで結合させた
一価の抗体活性フラグメントである。これらの活性フラ
グメントを保持し、その他の部分を他の動物のフラグメ
ントに置換することでキメラ抗体が得られる。

【００５０】得られた抗体を用いた免疫的測定法によ
り、各種細胞中の該サブユニットの変化を定量的に測定
する手段が与えられる。抗体を用いる方法としては具体
的には、標識されたネダシン抗体を用いてネダシンを検
出する方法、ネダシン抗体および該抗体の標識二次抗体
を用いてネダシンを検出する方法が挙げられる。標識と
しては、例えば放射性同位元素（ＲＩ）、酵素、アビジ
ン又はビオチン、もしくは蛍光物質（ＦＩＴＣやローダ
ミン等）が利用される。酵素反応を利用する方法として
は、例えば、ＥＬＩＳＡ法、免疫凝集法、ウェスタンブ
ロット法、フローサイトメトリーを用いた免疫反応分子
の同定方法又はそれらに類似する方法が挙げられる。

【００５１】

【実施例】以下に実施例を示し、さらに詳細に本発明を
説明する。 ＜実施例１＞ ＮＥ−ｄｌｇ結合性蛋白質の単離 １．ＧＳＴ−ＮＥ−ｄｌｇカラムの作製 ＧＳＴ遺伝子を組み込んだベクターｐＧＥＸ−２ＴＨ
（ファルマシア社製）のＢａｍＨＩとＨｉｎｄＩＩＩ間
に、配列表の配列番号１０記載の塩基配列からなるＮＥ
−ｄｌｇ遺伝子の４２０番目のＧから１９３７番目のＡ
までの塩基配列部分を挿入し、該ベクターを大腸菌ＤＨ
５αに導入して形質転換体を作製した。該形質転換体に
ＮＥ−ｄｌｇ蛋白質（配列表の配列番号９に記載のアミ
ノ酸配列からなる蛋白質）の６３番目のＡｌａから５６
８番目のＧｌｕまでのアミノ酸配列からなるＰＤＺ１領
域からＳＨ３領域までの部分のＮ末端にＧＳＴを結合さ
せたＧＳＴ−ＮＥ−ｄｌｇ融合蛋白質を作製させた。な
お、ＮＥ−ｄｌｇの各領域の位置関係は図２に示す。該
ＧＳＴ−ＮＥ−ｄｌｇ融合蛋白質をグルタチオンアガロ
ースビーズに固定した後、該ビーズをカラムに詰めて、
アフィニティーカラムを作製した。

【００５２】２．アフィニティー精製 ウシの脳細胞から蛋白質を抽出し、抽出された粗分画４
℃でを前記アフィニティーカラムにアプライし、通過さ
せた。

【００５３】反応後、カラム中のビーズに結合した蛋白
質を溶出緩衝液（０．５Ｍ ＮａＣｌ、３０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ
ＭｇＣｌ₂ 、１ｍＭ ＤＴＴ）ｐＨ７．５で洗い出
し、ラエムリのサンプル緩衝液中で加熱し、１００℃に
５分間おいた。

【００５４】得られたサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥに展
開して電気泳動した。ゲルをそのまま銀染色した結果、
分子量が５１ｋＤの蛋白質が単離された。結果を図３に
示す。１のレーンはＧＳＴのみを電気泳動したレーンで
あり、２のレーンはＧＳＴ−ＮＥ−ｄｌｇ融合蛋白質を
電気泳動したレーンである。

【００５５】３．ＮＥ−ｄｌｇのデリーション変異体と
の結合性の確認 前記１．と同様にして、以下の４種類のＮＥ−ｄｌｇの
部分蛋白質および全長蛋白質をＧＳＴと結合させた融合
蛋白質を作製し、それぞれの蛋白質をビーズを詰めたア
フィニティーカラムを作製した。 １：ＮＥ−ｄｌｇのＳＨ３領域部分（配列表の配列番号
９に記載のアミノ酸配列の５０３番目のＳｅｒから５６
８番目のＧｌｕまでのアミノ酸配列）を含む蛋白質。 ２：全長ＮＥ−ｄｌｇ。 ３：ＮＥ−ｄｌｇのＧＵＫ領域（配列表の配列番号９に
記載のアミノ酸配列の６２８番目のＡｒｇから８０３番
目のＡｓｐまでのアミノ酸配列）の欠失した蛋白質。 ４：ＮＥ−ｄｌｇのＮ末端およびＧＵＫ領域を欠失させ
た蛋白質。 前記１ないし４のＮＥ−ｄｌｇの部分または全長の関係
を図４の（Ｂ）に示す。

【００５６】これらのカラムに前記２．と同様にウシの
脳細胞から抽出した蛋白質粗分画をアプライし、前記
３．と同様にビーズに固定した融合蛋白質と結合した蛋
白質を電気泳動した。この結果を図４（Ａ）に示す。図
４（Ａ）中矢印で示したのが５１ｋＤの蛋白質のバンド
である。これより、前記の５１ｋＤの蛋白質は、ＳＨ３
領域には結合せず、Ｎ末端を欠失したＮＥ−ｄｌｇおよ
びＧＵＫ領域を欠失したＮＥ−ｄｌｇとは結合すること
が分かった。したがって、前記５１ｋＤの蛋白質は、Ｎ
Ｅ−ｄｌｇとは、そのＰＤＺ領域と結合することが分か
った。

【００５７】＜実施例２＞ＮＥ−ｄｌｇ結合性蛋白質の
アミノ酸配列およびそれをコードする遺伝子の塩基配列
の決定 １．部分アミノ酸シークエンス 前記実施例１の２．でアフィニティー精製した５１ｋＤ
の蛋白質について電気泳動が終わったゲルを、イモビロ
ン−ＰＶＤＦメンブラン（ミリポア社製）にセミドライ
エレクトロブロティング装置ザルトブロットＩＩ−Ｓ
（ザルトリウス社製）を用いてトランスファーした。蛋
白質をブロットした膜フィルターは、蒸留水で洗浄した
後、ポンソーＳ（Ｐｏｎｃｅａｕ Ｓ）染色液（０．１
％ポンソーＳ、１％酢酸溶液）で染色後、蒸留水に浸
し、振盪してバックグラウンドを脱色した。

【００５８】このメンブラン上の５１ｋＤの位置のスポ
ットを切り出し、ｉｎ ｓｉｔｕでＬｙｓ−Ｃプロテア
ーゼ（ベーリンガーマンハイム社製）により酵素処理し
た。生成したペプチドはＨＰＬＣ（パーキンエルマー社
製）によって分離精製した（流速５００μｌ／ｍｉｎ、
０．１％ＴＦＡを溶媒とし０−７５％のアセトニトリル
によるグラジエント、（μボンドスフィアＣ８孔径３０
０オングストローム（日本エイドー社製）ＲＰ３００カ
ラム（２．１×１００ｍｍ））。得られた５１ｋＤの蛋
白質の断片のポリペプチドフラグメントのいくつかをペ
プチドシークエンサー（パーキンエルマー社製プロテイ
ンシークエンサー４９７型分析装置）により解析を行っ
た。以上のアミノ酸解析によりペプチドフラグメントと
して以下のアミノ酸配列を決定した。

【００５９】ペプチドフラグメント１：Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ＡｌａＳｅｒ Ｇｌｎ Ｇ
ｌｎ Ｇｌｕ Ｌｙｓ（配列表の配列番号１に記載のア
ミノ酸配列の４３番目から５３番目までの配列） ペプチドフラグメント２：Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｃｙｓ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ（配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
列の４７番目から５１番目までの配列） ペプチドフラグメント３：Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌ
ｅｕ Ｈｉｓ ＩｌｅＧｌｎ Ｓｅｒ Ｈｉｓ（配列表
の配列番号１に記載のアミノ酸配列の２３２番目から２
４０番目までの配列） ペプチドフラグメント４：Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｐ
ｒｏ Ｓｅｒ ＴｙｒＬｙｓ（配列表の配列番号１に記
載のアミノ酸配列の２５３番目から２５９番目までの配
列） ペプチドフラグメント５：Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ａ
ｌａ Ｉｌｅ ＬｅｕＩｌｅ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
（配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の３９４番
目から４０３番目までの配列） ペプチドフラグメント６：Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐ
ｒｏ Ｐｈｅ Ｓｅｒ（配列表の配列番号１に記載のア
ミノ酸配列の４４６番目から４５１番目までの配列）

【００６０】２．部分遺伝子の塩基配列のシークエンス （１）ＰＣＲ 前記ペプチドフラグメントの配列をもとにインターネッ
トのＥＳＴデータベース（ｍＲＮＡの断片の配列を登録
してあるデータベース、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂ
ｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．／ｄｂＥＳＴ）検索を行
ったところ、登録番号Ｈ１４３９６の配列および登録番
号Ｒ３９８２０の配列が選別された。この塩基配列をも
とにＰＣＲプライマーを作製した。ＰＣＲの鋳型にはヒ
ト胎児脳ｃＤＮＡライブラリー（クローンテック社製）
を用いた。センスプライマーとして、Ｐ１プライマー：
５’−ＡＴＧＣＣＴＧＧＧＣＴＧＧＴＴＧＡＴＡＣＡＣ
ＡＣ−３’（配列表の配列番号１１に記載の塩基配
列）、アンチセンスプライマ−としてＰ２プライマー：
５’−ＣＡＴＣＡＣＴＧＴＣＴＴＡＴＴＴＧＴＣＡＡＡ
ＡＧ−３’（配列表の配列番号１２に記載の塩基配列）
を設計し、ＤＮＡ合成機（ＡＢＩ社製、モデル３９２）
にて合成した。合成したプライマーは、蒸留水で１０ｐ
ｍｏｌ／μｌに調製した（以降のプライマーの合成も同
様に行った。）。これらのプライマーを用いて、ＰＣＲ
を行った時に、６０９ｂｐのｃＤＮＡフラグメントが得
られた。このフラグメントを、以降、フラグメントＡと
いう。

【００６１】（２）形質転換体の作製 上記で得たフラグメントＡをミニゲル電気泳動（０．７
５％アガロースゲル）させて、該ＤＮＡのバンド（６０
９ｂｐ）をゲルから切り出した。透析膜でｃＤＮＡを回
収して、ミニゲル電気泳動でバンドをチェックした。ｃ
ＤＮＡを１μｌ取り、９９μｌのＴＥにて希釈した。２
６０ｎｍでの吸光度（Ａ２６０）を測定し、ＤＮＡ濃度
を計算した（Ａ２６０が１．０のときのＤＮＡ濃度を５
０μｌ／ｍｌとした。）。ＤＮＡ濃度が１μｇ／μｌに
なるようにＴＥでＤＮＡを希釈した。

【００６２】（３）塩基配列の決定 フラグメントＡをＰ１センスプライマーおよびＰ２アン
チセンスプライマーを用いてダイレクトシークエンスを
行った。ダイターミネーター法により、オートシークエ
ンサー（ＡＢＩモデル３７３Ａ）を用いて、ＤＮＡシー
クエンスを行い、フラグメントＡのｃＤＮＡの塩基配列
を決定した。

【００６３】３．プライマーの合成 ヒトｃＤＮＡライブラリーから、さらにＤＮＡフラグメ
ントを取得するために以下のプライマーを合成した。Ｐ
１プライマー より３’側にＰ３プラマー：５’−ＴＧ
ＡＴＴＴＧＣＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＣＣＡＴＡＴ−３’
（配列表の配列番号１３に記載の塩基配列）、Ｐ２プラ
イマーより５’側にＰ４プライマー：５’−ＡＧＧＴＣ
ＴＡＴＧＣＴＡＣＴＴＣＣＡＧＣＡＡＡＧ−３’（配列
表の配列番号１４に記載の塩基配列）を設計し、ＤＮＡ
合成機（ＡＢＩ社製、モデル３９２）にて合成した。合
成したプライマーは、蒸留水で１０ｐｍｏｌ／μｌに調
製した。

【００６４】４．ＰＣＲ ｃＤＮＡライブラリーには、ヒト胎児脳のｃＤＮＡライ
ブラリー（クローンテック社製）を用い、ｃＤＮＡライ
ブラリーのリンカーに設定されているＡＰ−１プライマ
ー：５’−ＣＣＡＴＣＣＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴ
ＡＴＡＧＧＧＣ−３’（配列表の配列番号１５に記載の
塩基配列）、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４プライマーを
用いてツーステップＰＣＲを行った。

【００６５】（１）３’側クローニング Ｐ１プライマーを用いてＰＣＲで３’側の一本差ＤＮＡ
を伸長した。 ｃＤＮＡ １．０μｌ ｄＮＴＰｍｉｘ（各２．５ｍＭ） １．２μｌ Ｐ１プライマー １．０μｌ ３．３×ＰＣＲ緩衝液 ４．５μｌ ２５ｍＭ Ｍｇ（ＯＡｃ）₂ ０．６μｌ 蒸留水 ６．４μｌ 合計 １４．７μｌ 上記組成の液にミネラルオイル１０μｌを重層し、９５
℃で５分間放置した後、ＸＬポリメラーゼ０．３μｌ
（登録商標、パーキンエルマー社製）を加え、「９６℃
で３０秒間、６０℃で３０秒間、続いて７２℃で２分
間」のサイクルを４０回繰り返し反応させた。最後に７
２℃で７分間断片の伸長反応を行いＰＣＲを完了した。

【００６６】反応後、ＰＣＲ産物を鋳型にして３’側の
クローニングを行い二本鎖ＤＮＡを合成した。 ＰＣＲ産物 ０．５μｌ ｄＮＴＰｍｉｘ（各２．５ｍＭ） １．２μｌ Ｐ３プライマー １．０μｌ ＡＰ−１プライマー １．０μｌ ３．３×ＰＣＲ緩衝液 ４．５μｌ ２５ｍＭ Ｍｇ（ＯＡｃ）₂ ０．６μｌ 蒸留水 ５．９μｌ 合計 １４．７μｌ 上記組成の液にミネラルオイル１０μｌを重層し、９５
℃で５分間放置した後、ＸＬポリメラーゼ０．３μｌ
（登録商標、パーキンエルマー社製）を加え、「９６℃
で３０秒間、６０℃で３０秒間、続いて７２℃で２分
間」のサイクルを４０回繰り返し反応させた。最後に７
２℃で７分間断片の伸長反応を行いＰＣＲを完了した。
反応後、ＰＣＲ産物についてミニゲル電気泳動を１．５
％アガロースゲルで行った。約１．２ｋｂのＤＮＡ断片
をコードする断片を切り出しＰＣＲ産物を回収した。さ
らに、前記回収物の一部について前記ミニゲル電気泳動
を再度行い、約１．２ｋｂにバンドが現れることを確認
した。以下、このＤＮＡ断片を、以降、フラグメントＢ
という。

【００６７】（２）ＤＮＡシークエンス 前記で得たフラグメントＢを１μｌを取り、９９μｌの
ＴＥにて希釈した。２６０ｎｍでの吸光度（Ａ２６０）
を測定し、ＤＮＡ値を計算した（Ａ２６０の値１．０を
５０μｇ／ｍｌとして算出した）。Ａ２６０値よりＤＮ
Ａが１μｇ／ｍｌとなるようにサンプルを調製した。Ｐ
３プライマーおよびＡＰ−１プライマーの３’側に設定
されているＡＰ−２プライマー：５’−ＡＣＴＣＡＣＴ
ＡＴＡＧＧＧＣＴＣＧＡＧＣＧＧＣ−３’（配列表の配
列番号１６に記載の塩基配列）を用いて、ＡＢＩ社製の
オートシンクエンサーモデル３７３Ｓを使用してダイタ
ーミネーター法により、フラグメントＣの塩基配列を決
定した。

【００６８】（３）５’側クローニング Ｐ２プライマーを用いてＰＣＲで３’側の一本差ＤＮＡ
を伸長した。 ｃＤＮＡ １．０μｌ ｄＮＴＰｍｉｘ（各２．５ｍＭ） １．２μｌ Ｐ２プライマー １．０μｌ ３．３×ＰＣＲ緩衝液 ４．５μｌ ２５ｍＭ Ｍｇ（ＯＡｃ）₂ ０．６μｌ 蒸留水 ６．４μｌ 合計 １４．７μｌ 上記組成の液にミネラルオイル１０μｌを重層し、９５
℃で５分間放置した後、ＸＬポリメラーゼ０．３μｌ
（登録商標、パーキンエルマー社製）を加え、「９６℃
で３０秒間、６０℃で３０秒間、続いて７２℃で２分
間」のサイクルを４０回繰り返し反応させた。最後に７
２℃で７分間断片の伸長反応を行いＰＣＲを完了した。

【００６９】反応後、ＰＣＲ産物を鋳型にして５’側の
クローニングを行い二本鎖ＤＮＡを合成した。 ＰＣＲ産物 ０．５μｌ ｄＮＴＰｍｉｘ（各２．５ｍＭ） １．２μｌ Ｐ４プライマー １．０μｌ ＡＰ−１プライマー １．０μｌ ３．３×ＰＣＲ緩衝液 ４．５μｌ ２５ｍＭ Ｍｇ（ＯＡｃ）₂ ０．６μｌ 蒸留水 ５．９μｌ 合計 １４．７μｌ 上記組成の液にミネラルオイル１０μｌを重層し、９５
℃で５分間放置した後、ＸＬポリメラーゼ０．３μｌ
（登録商標、パーキンエルマー社製）を加え、「９６℃
で３０秒間、６０℃で３０秒間、続いて７２℃で２分
間」のサイクルを４０回繰り返し反応させた。最後に７
２℃で７分間断片の伸長反応を行いＰＣＲを完了した。
反応後、ＰＣＲ産物についてミニゲル電気泳動を１．５
％アガロースゲルで行った。約０．５ｋｂのＤＮＡ断片
をコードする断片を切り出しＰＣＲ産物を回収した。さ
らに、前記回収物の一部について前記ミニゲル電気泳動
を再度行い、約０．５ｋｂにバンドが現れることを確認
した。以下、このＤＮＡ断片を、以降、フラグメントＣ
という。

【００７０】（４）ＤＮＡシークエンス 前記で得たフラグメントＣを１μｌを取り、９９μｌの
ＴＥにて希釈した。２６０ｎｍでの吸光度（Ａ２６０）
を測定し、ＤＮＡ値を計算した（Ａ２６０の値１．０を
５０μｇ／ｍｌとして算出した）。Ａ２６０値よりＤＮ
Ａが１μｇ／ｍｌとなるようにサンプルを調製した。Ｐ
４プライマーおよびＡＰ−２プライマーを用いて、ＡＢ
Ｉ社製のオートシンクエンサーモデル３７３Ｓを使用し
てダイターミネーター法により、フラグメントＣの塩基
配列を決定した。

【００７１】５．全長ｃＤＮＡ化 フラグメントＡ、ＢおよびＣの塩基配列をもとに、セン
スプライマーとしてＰ５プライマー：５’−ＴＧＣＧＣ
ＧＡＡＴＴＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＧＴＧＣＣＧＣＴＣ
ＡＧＡＴＧＣＣＧ−３’（配列表の配列番号１７に記載
の塩基配列）を、アンチセンスプライマーとしてＰ６プ
ライマー：５’−ＡＡＡＴＡＧＧＡＴＣＣＡＡＧＣＴＴ
ＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＴＧＧＡＧＧＡＴＧＧＧＧＴ−
３’（配列表の配列番号１８に記載の塩基配列）を設定
し、これを用いてヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーを鋳
型として、下記の条件でＰＣＲを行った。 ｃＤＮＡ １．０μｌ ｄＮＴＰｍｉｘ １．２μｌ センスプライマー １．０μｌ アンチセンスプライマー １．０μｌ ３．３×ＰＣＲ緩衝液 ４．５μｌ ２５ｍＭ Ｍｇ（ＯＡｃ）₂ ０．６μｌ 蒸留水 ５．４μｌ 合計 １４．７μｌ

【００７２】前記組成の液にミネラルオイル１５μｌを
重層し、９６℃で５分間放置した後、ＸＬポリメラーゼ
０．３μｌ（登録商標、パーキンエルマー社製）を加
え、「９６℃で３０秒間、６０℃で３０秒間、続いて７
２℃で１．５分間」のサイクルを４０回繰り返し反応さ
せた。最後に７２℃で７分間断片の伸長反応を行いＰＣ
Ｒを完了した。この全長ｃＤＮＡをダイターミネーター
法でシークエンスした。全長のコード領域を含む目的の
ｃＤＮＡが取れたことを確認し、このｃＤＮＡを、ＮＥ
−ｄｌｇに結合する蛋白質（この蛋白質をネダシン（Ｎ
ＥＤＡＳＩＮ、ＮＥ−Ｄｌｇ ＡＳｓｏｃｉａｔｅｄ
ｐｒｏｔｅＩＮ）と名付けた。）をコードするｃＤＮＡ
と認定した。この塩基配列を配列表の配列番号２に示
す。この塩基配列からなる遺伝子をネダシンＳ遺伝子と
名付けた。ネダシンＳ遺伝子とホモロジーを有するよう
な既知の哺乳類遺伝子は認められなかった。ネダシンＳ
のｃＤＮＡとクローニングの過程で得られた各フラグメ
ントおよび各プライマーとの位置関係を図１に示す。

【００７３】またこの遺伝子がコードするネダシンＳ蛋
白質（以下、単にネダシンＳと略記する場合がある。）
のアミノ酸配列を配列表の配列番号１に示す。ネダシン
ＳのＣ末端はＰＤＺ領域に結合できるＳＳＶモチーフで
あった。このネダシンＳとホモロジーを有するような哺
乳類蛋白質は認められなかったが、酵母のＹＤＬ２３８
ｃ蛋白質とは４０％程度の相同性があった。

【００７４】６．形質転換体の作製 上記で得られた全長のネダシンｃＤＮＡを、プラスミド
ベクターｐＧＥＭ（登録商標）−Ｔ Ｅａｓｙ（プロメ
ガ社製）マルチクローニングサイトに挿入した。このプ
ラスミドベクターを大腸菌ＮＭ５２２に導入して、形質
転換体を作製した。

【００７５】前記ネダシンＳのｃＤＮＡが組み込まれた
大腸菌をＮｅｄａｓｉｎ Ｓと名付け、工業技術院生命
工学工業技術研究所に平成１０年２月２５日に寄託し
た。

【００７６】＜実施例３＞各組織におけるネダシンの発
現 ヒトの各組織のポリＡ＋ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）およびヒト
の各種細胞のポリＡ＋ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）それぞれにつ
いて、各２μｇをブロットしたメンブレン（Ｈｕｍａｎ
Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ
Ｂｌｏｔ 、同ＩＩおよび同ＩＩＩ（クローンテック
社製））に、標識化した全長のネダシンＳ遺伝子をＭｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙＭａｎｕａｌ Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ
７．３９ページないし７．５２ページの記載にしたがっ
て、４３℃で１６時間ハイブリダイズさせ、ノーザンブ
ロットハイブリダイゼーション法による解析を行った。

【００７７】ネダシン遺伝子の標識化は以下の操作によ
り行った。 １）Ｔａｋａｒａ ＭＥＧＡ ＬＡＢＥＬキット（登録
商標、宝酒造社製）を用いて取扱説明書の通りに標識し
た。 ２）次に、下記の組成のＤＮＡ反応液を調製し、この液
を３７℃で２０分間インキュベートした後、ＴＥを２５
μｌ加え、酵素を失活させた。 ＤＮＡプローブ（２ｐｍｏｌ／μｌ） １４μｌ １０倍ホスホライレイション緩衝液 ２．５μｌ ＣＮＴＰ混合物（ｍｉｘｔｕｒｅ） ２．５μｌ 〔γ−３２Ｐ〕ＣＬＴＰ（３７０ＭＢｑ／ｍｌ）（アマシャム製）５μｌ クレノーフラグメント １μｌ 合計２５μｌ

【００７８】３）ＴＥ５０（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ
ｐＨ８．０、１ｍＭ ＥＤＴＡ）で平衡化されたＳｅ
ｐｈａｄｅｘＧ−２５（登録商標、ファルマシア社製）
を１．５ｍｌポリプレップカラム（バイオラッド社製）
にベッドボリュームが１ｍｌになるように詰め、２）で
熱処理をしたＤＮＡ反応液を該カラムに載せた。 ４）その後、２００μｌＴＥ５０をカラムに４回流し、
２回目の２００μｌで溶出した画分から標識化ＤＮＡプ
ローブを得た。

【００７９】ノーザンブロットハイブリダイゼーション
法による解析の結果を図５に示す。これより、ネダシン
のｍＲＮＡは脳、胎盤、肝臓、腎臓での発現が強いこと
が分かった。

【００８０】＜実施例４＞スプライシングアイソフォー
ムの同定 ネダシンの発現が見られた各組織からマイクロファスト
トラック（登録商標）キット（インビトロゲン社製）ｍ
ＲＮＡ精製キットを用いてｍＲＮＡを抽出し、ＲＴ−Ｐ
ＣＲ法（新細胞実験工学プロトコール、秀潤社、１９９
３年発行、１７５−１７６ページに記載）を行った。得
られた遺伝子産物を前記と同様にダイターミネータ法に
よりシークエンスした。その結果、３つのスプライシン
グアイソフォームが存在することが分かった。これらを
ネダシンＶ１、ネダシンＶ２、ネダシンＶ３と名付け
た。

【００８１】ネダシンＶ１のアミノ酸配列を配列表の配
列番号３に、ネダシンＶ１遺伝子の塩基配列を配列表の
配列番号４に示す。ネダシンＶ２のアミノ酸配列を配列
表の配列番号５に、ネダシンＶ２遺伝子の塩基配列（コ
ード領域のみ）を配列表の配列番号６に示す。ネダシン
Ｖ３のアミノ酸配列を配列表の配列番号７に、ネダシン
Ｖ３遺伝子の塩基配列（コード領域のみ）を配列表の配
列番号８に示す。

【００８２】ネダシンＶ１遺伝子を、プラスミドベクタ
ーｐＧＥＭ（登録商標）−Ｔ Ｅａｓｙ（プロメガ社
製）マルチクローニングサイトに挿入した。このプラス
ミドベクターを大腸菌ＤＨ５αに導入した形質転換体を
Ｎｅｄａｓｉｎ Ｖ１と名付け工業技術院生命工学工業
技術研究所に平成１０年２月２５日に寄託した。

【００８３】各細胞についてもＲＴ−ＰＣＲを行い、ネ
ダシンのスプライシングアイソフォームの発現を調べ
た。各組織および各細胞についてのＲＴーＰＣＲの結果
を図６に示す。これより、ヒト胎児脳や胎盤ではネダシ
ンＳが優位に発現しており、それ以外の組織ではネダシ
ンＶ１が優位に発現していることが確認された。

【００８４】＜実施例５＞ＮＥ−ｄｌｇとネダシンの結
合の確認 １．免疫沈降 全長のネダシンＳｃＤＮＡおよびネダシンＶ１ｃＤＮＡ
をそれぞれ、プラスミドベクターｐＢｊ−１のＥｃｏＲ
Ｉ−ＢａｍＨＩサイトにｍｙｃタグを含む６３ｍｅｒの
リンカーを挿入したｐＢｊ−ｍｙｃのＢａｍＨＩサイト
に挿入した。これらをそれぞれ、ＧＵＫ領域を欠失させ
たＮＥ−ｄｌｇ遺伝子を組み込んだベクターｐＣＧＮ
（ＨＡタグ付）とともにＣＯＳ細胞に導入して、形質転
換体を作製した。この形質転換体を培養した後、細胞を
ＴＮＮ緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．５、０．５％ ＮＰ−４０）を
用いて溶解して、細胞抽出液を得た。この細胞抽出液に
抗ｍｙｃ抗体を加え、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離
して、免疫沈降物を取り分けた。

【００８５】２．ウェスタンブロット この免疫沈降物を９％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動し
た。電気泳動後、トランスブロットシステム（マリソル
社製）を用い、ニトロセルロース膜に転写した。ニトロ
セルロース膜を１０％スキムミルク／ＰＢＳ、０．１％
Ｔｗｅｅｎ２０に浸し、１時間放置し、ブロッキングし
た。その後、０．３％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳで５分間
ずつ２回洗浄した。

【００８６】抗ｍｙｃ抗体を１μｇ／ｍｌにＰＢＳで希
釈した後、ニトロセルロース膜に加え、室温で６０分間
反応させた。その後、０．３％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ
で５分間ずつ３回洗浄した。次いで、ペルオキシダーゼ
標識抗マウスＩｇＧ（アマシャム社製）をＰＢＳで２０
０００倍希釈した液を、ニトロセルロース膜に加え、さ
らに４０分間室温にて反応させた。その後、０．３％Ｔ
ｗｅｅｎ２０／ＰＢＳで５分間ずつ３回洗浄した。

【００８７】次いで、ＥＣＬキット（アマシャム社製）
の発色液を５ｍｌだけニトロセルロース膜に加え、１分
間反応させた。その後、このメンブレンをＸ線フィルム
に２０秒間露光し、現像した後、写真撮影した。結果を
図７に示す。

【００８８】この結果、Ｃ末端がＳＳＶのネダシンＳは
ＮＥ−ｄｌｇと結合するが、Ｃ末端がＰＦＰのネダシン
Ｖ１はＮＥ−ｄｌｇとは結合しないことが分かった。す
なわちｖｉｖｏでも、ネダシンとＮＥ−ｄｌｇとの結合
が証明され、さらにその結合はネダシンのＣ末端側の変
化によって制御されていることが分かった。

【００８９】＜実施例６＞染色体マッピング ネダシンＳの全長遺伝子の染色体マッピングを以下のよ
うにして行った。 １．ＰＣＲ ＰＣＲは、ジーンブリッジ４ラジエーションハイブリッ
ドスクリーニングパネル（ＧＥＮＥＢＲＩＤＧＥ ４
Ｒｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｈｙｂｒｉｄ Ｓｃｒｅｅｎｉ
ｎｇ Ｐａｎｅｌ（リサーチジェネティクス社製）を鋳
型にして、ネダシンＳ遺伝子の一部をプライマーとして
行った。プライマーは、Ｓ１プライマー（センス方
向）：５’−ＡＴＴＧＡＡＧＡＧＧＴＴＴＡＴＧＴＧＴ
ＴＣ−３’（配列表の配列番号１９に記載の塩基配列）
とＡＳ１プライマー（アンチセンス方向）：５’−ＣＡ
ＡＧＧＧＡＧＡＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＧＣＴＡ−３’
（配列表の配列番号２０に記載の塩基配列）をＤＮＡ合
成機により合成し、それぞれ蒸留水中に１０ｐｍｏｌ／
μｌとなるように溶解したものを用いた。

【００９０】ＰＣＲ操作は、以下のように行った。下記
の組成からなる液を試験管に入れ、９６℃で９分間放置
した。 キットのパネル １μｌ ｄＮＴＰ混合液 １．５μｌ Ｓ１プライマー １μｌ ＡＳ１プライマー １μｌ １０倍濃度のＰＣＲ緩衝液 １．５μｌ ２５ｍＭ ＭｇＣｌ₂ １．５μｌ 蒸留水 ７．４μｌ アンプリＴａｑゴールド（登録商標、パーキンエルマー社製） ０．１μｌ 合計 １５μｌ その後、「９６℃で３０秒間、続いて５４℃で３０秒
間、続いて７２℃で１５秒間」のサイクルを３５回繰り
返して反応を行った。最後に７２℃で７分間反応させ
て、断片の伸長反応を行いＰＣＲ操作を完了した。その
後、ＰＣＲ産物の５μｌを、２．５％アガロースゲル電
気泳動した。

【００９１】２．マッピング その結果、前記プライマー（Ｓ１またはＡＳ１）がハイ
ブリダイズしたパネルのセクション番号を、Ｗｈｉｔｅ
ｈｅａｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＭＩＴ Ｃｅｎｔｅｒ
ｆｏｒ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ｈｔｔ
ｐ：ｗｗｗ−ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃ
ｇｉ−ｂｉｎ／ｃｏｎｔｉｇ／ｒｈｍａｐｐｅｒ．ｐ
ｌ．）へ電子メールで送り、該番号のパネルの染色体位
置および塩基配列の情報を得た。その結果、ネダシンＳ
遺伝子は、９番染色体短腕上に位置づけられた。

【００９２】＜実施例７＞ネダシンを認識する抗体の作
製 １．抗原の作製 ネダシンのアミノ酸配列に基づき、以下のペプチドをペ
プチド合成機で合成した。 ペプチドＡ：ＲＮＩＥＥＶＹＶＧＧＫＱＶＶＰＦＳＳＳ
Ｖ（配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の４３５
番目から４５４番目までのアミノ酸配列） ペプチドＢ：ＬＹＰＳＹＫＮＹＴＳＶＹＤＫＮＮＬＬＴ
（配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列の２５４番
目から２７２番目までのアミノ酸配列） 作製したペプチド２ｍｇをマレイミド化ＫＬＨ（ピアス
社製）２ｍｇに結合させ反応液を作製した。反応はピア
ス社のキットの説明書に記載の方法にしたがった。

【００９３】２．免疫 前記ペプチドＡ、ペプチドＢを含む抗原液（１μｇ／ｍ
ｌ）それぞれについて、１００μｌ、ＰＢＳ ０．５ｍ
ｌ及びフロイントコンプリートアジュバンド（ディフコ
社製）０．５ｍｌをシリンジに取り、混合してエマルジ
ョンとし、ウサギの背に４箇所に分けて皮下接種した。
１週間後、２回目の免疫を行った。２回目からはアジュ
バンドをフロイントインコンプリートアジュバンド（デ
ィフコ社製）に変えて免疫を行った。その他の操作は１
回目と同様である。２回目以降は１週間間隔を開けて、
合計６回免疫を行った。

【００９４】３．抗体の精製 最終免疫の１週間後、採血した。この血液を室温で３時
間静置し、十分に血液凝固を行った後、３，０００ｒｐ
ｍで５分間遠心分離を行い、上清（血清）を回収した。
この血清に飽和硫安を最終濃度が５０％になるように加
えて塩析した。このサンプルを遠心分離して、抗体が含
まれる画分を沈殿させた。その後、沈殿物をＰＢＳに溶
解し、さらにＰＢＳに対して塩析した。その後、プロテ
インＧセファロースカラム（登録商標、ファルマシア社
製）を用いて、抗体をアフィニティー精製した。その結
果、全量で５ｍｇのペプチド特異的抗体が得られた。

【００９５】

【発明の効果】本発明のネダシン（スプライシングアイ
ソフォームを含む）またはその変異体はＮＥ−ｄｌｇの
機序解析に有効である。

【００９６】本発明のネダシンまたはその変異体をコー
ドするポリヌクレオチド、そのうちの連続する１２塩基
以上の塩基配列からなるポリヌクレオチドまたはそれら
のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオ
チド（アンチセンスポリヌクレオチド）は、ｃＤＮＡラ
イブラリー等からネダシンまたはその変異体遺伝子をス
クリーニングするためのプローブとして使用可能であ
る。

【００９７】さらに本発明のアンチセンスポリヌクレオ
チドはネダシンまたはその変異体の生合成を阻害するこ
とができる。

【００９８】本発明の抗体は、ネダシンの発現等の機能
の解明や悪性腫瘍の形成機構の解明のために使用可能で
ある。

【００９９】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：４５４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Cys Ala Ala Gln Met Pro Pro Leu Ala His Ile Phe Arg Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val His Ser Thr Trp Thr Cys Pro Met Glu Val Leu Arg Asp His 20 25 30 Leu Leu Gly Val Ser Asp Ser Gly Lys Ile Val Phe Leu Glu Glu Ala 35 40 45 Ser Gln Gln Glu Lys Leu Ala Lys Glu Trp Cys Phe Lys Pro Cys Glu 50 55 60 Ile Arg Glu Leu Ser His His Glu Phe Phe Met Pro Gly Leu Val Asp 65 70 75 80 Thr His Ile His Ala Ser Gln Tyr Ser Phe Ala Gly Ser Ser Ile Asp 85 90 95 Leu Pro Leu Leu Glu Trp Leu Thr Lys Tyr Thr Phe Pro Ala Glu His 100 105 110 Arg Phe Gln Asn Ile Asp Phe Ala Glu Glu Val Tyr Thr Arg Val Val 115 120 125 Arg Arg Thr Leu Lys Asn Gly Thr Thr Thr Ala Cys Tyr Phe Ala Thr 130 135 140 Ile His Thr Asp Ser Ser Leu Leu Leu Ala Asp Ile Thr Asp Lys Phe 145 150 155 160 Gly Gln Arg Ala Phe Val Gly Lys Val Cys Met Asp Leu Asn Asp Thr 165 170 175 Phe Pro Glu Tyr Lys Glu Thr Thr Glu Glu Ser Ile Lys Glu Thr Glu 180 185 190 Arg Phe Val Ser Glu Met Leu Gln Lys Asn Tyr Ser Arg Val Lys Pro 195 200 205 Ile Val Thr Pro Arg Phe Ser Leu Ser Cys Ser Glu Thr Leu Met Gly 210 215 220 Glu Leu Gly Asn Ile Ala Lys Thr Arg Asp Leu His Ile Gln Ser His 225 230 235 240 Ile Ser Glu Asn Arg Asp Glu Val Glu Ala Val Lys Asn Leu Tyr Pro 245 250 255 Ser Tyr Lys Asn Tyr Thr Ser Val Tyr Asp Lys Asn Asn Leu Leu Thr 260 265 270 Asn Lys Thr Val Met Ala His Gly Cys Tyr Leu Ser Ala Glu Glu Leu 275 280 285 Asn Val Phe His Glu Arg Gly Ala Ser Ile Ala His Cys Pro Asn Ser 290 295 300 Asn Leu Ser Leu Ser Ser Gly Phe Leu Asn Val Leu Glu Val Leu Lys 305 310 315 320 His Glu Val Lys Ile Gly Leu Gly Thr Asp Val Ala Gly Gly Tyr Ser 325 330 335 Tyr Ser Met Leu Asp Ala Ile Arg Arg Ala Val Met Val Ser Asn Ile 340 345 350 Leu Leu Ile Asn Lys Val Asn Glu Lys Ser Leu Thr Leu Lys Glu Val 355 360 365 Phe Arg Leu Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gln Ala Leu Gly Leu Asp Gly 370 375 380 Glu Ile Gly Asn Phe Glu Val Gly Lys Glu Phe Asp Ala Ile Leu Ile 385 390 395 400 Asn Pro Lys Ala Ser Asp Ser Pro Ile Asp Leu Phe Tyr Gly Asp Phe 405 410 415 Phe Gly Asp Ile Ser Glu Ala Val Ile Gln Lys Phe Leu Tyr Leu Gly 420 425 430 Asp Asp Arg Asn Ile Glu Glu Val Tyr Val Gly Gly Lys Gln Val Val 435 440 445 Pro Phe Ser Ser Ser Val 450

【０１００】配列番号：２ 配列の長さ：２０４０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 GCCCGCAGCT GCAGAGAGTC CCGCTGCGTC TCCGCCGCGT GCGCCCTCCT CGACCAGCAG 60 ACCCGCGCTG CGCTCCGCCG CTGAC ATG TGT GCC GCT CAG ATG CCG CCC CTG 112 GCG CAC ATC TTC CGA GGG ACG TTC GTC CAC TCC ACC TGG ACC TGC CCC 160 ATG GAG GTG CTG CGG GAT CAC CTC CTC GGC GTG AGC GAC AGC GGC AAA 208 ATA GTG TTT TTA GAA GAA GCA TCT CAA CAG GAA AAA CTG GCC AAA GAA 256 TGG TGC TTC AAG CCG TGT GAA ATA AGA GAA CTG AGC CAC CAT GAG TTC 304 TTC ATG CCT GGG CTG GTT GAT ACA CAC ATC CAT GCC TCT CAG TAT TCC 352 TTT GCT GGA AGT AGC ATA GAC CTG CCA CTC TTG GAG TGG CTG ACC AAG 400 TAC ACA TTT CCT GCA GAA CAC AGA TTC CAG AAC ATC GAC TTT GCA GAA 448 GAA GTA TAT ACC AGA GTT GTC AGG AGA ACA CTA AAG AAT GGA ACA ACC 496 ACA GCT TGT TAC TTT GCA ACA ATT CAC ACT GAC TCA TCT CTG CTC CTT 544 GCC GAC ATT ACA GAT AAA TTT GGA CAG CGG GCA TTT GTG GGC AAA GTT 592 TGC ATG GAT TTG AAT GAC ACT TTT CCA GAA TAC AAG GAG ACC ACT GAG 640 GAA TCG ATC AAG GAA ACT GAG AGA TTT GTG TCA GAA ATG CTC CAA AAG 688 AAC TAT TCT AGA GTG AAG CCC ATA GTG ACA CCA CGT TTT TCC CTC TCC 736 TGC TCT GAG ACT TTG ATG GGT GAA CTG GGC AAC ATT GCT AAA ACC CGT 784 GAT TTG CAC ATT CAG AGC CAT ATA AGT GAA AAT CGT GAT GAA GTT GAA 832 GCT GTG AAA AAC TTA TAC CCC AGT TAT AAA AAC TAC ACA TCT GTG TAT 880 GAT AAA AAC AAT CTT TTG ACA AAT AAG ACA GTG ATG GCA CAC GGC TGC 928 TAC CTC TCT GCA GAA GAA CTG AAC GTA TTC CAT GAA CGA GGA GCA TCC 976 ATC GCA CAC TGT CCC AAT TCT AAT TTA TCG CTC AGC AGT GGA TTT CTA 1024 AAT GTG CTA GAA GTC CTG AAA CAT GAA GTC AAG ATA GGG CTG GGT ACA 1072 GAC GTG GCT GGT GGC TAT TCA TAT TCC ATG CTT GAT GCA ATC AGA AGA 1120 GCA GTG ATG GTT TCC AAT ATC CTT TTA ATT AAT AAG GTA AAT GAG AAA 1168 AGC CTC ACC CTC AAA GAA GTC TTC AGA CTA GCT ACT CTT GGA GGA AGC 1216 CAA GCC CTG GGG CTG GAT GGT GAG ATT GGA AAC TTT GAA GTG GGC AAG 1264 GAA TTT GAT GCC ATC CTG ATC AAC CCC AAA GCA TCC GAC TCT CCC ATT 1312 GAC CTG TTT TAT GGG GAC TTT TTT GGT GAT ATT TCT GAG GCT GTT ATC 1360 CAG AAG TTC CTC TAT CTA GGA GAT GAT CGA AAT ATT GAA GAG GTT TAT 1408 GTG GGC GGA AAG CAG GTG GTT CCG TTT TCC AGC TCA GTG TAA GACCCTCGGG 1460 CGTCTACAAA GTTCTCCTGG GATTAGCGTG GTTGTGCATC TCCCTTGTGC CCAGGAAAGA 1520 AACAATTCAC TTACCAGCCT CCTCACCCCA TCCTCCACCA TTTCCTTAAT GTTCCATGGT 1580 ATTTTCAACG GAATACACTT TGAAAGACCT GAGTGTGAAA GACTGAGAGT TGAGGAGTTA 1640 CTTTGTGGAT CTTGTCCAAA TTTAGTGAAA TGTGGAAGTC AACCAGACCA ATGATGGAAT 1700 TAAATGTAAA TTCCAAGAGG GCTTTCACAG TCCACAGGGT TCAAATGACT TGGGTAACAG 1760 AAGTTATTCT TAGCTTACCT GTTATGTGAC AGTGATTTAC CTGTCCATTT CCAACCCAAA 1820 AGCCTGTCAG AAAGCATTCT TTAGAGAAAA CCACTTAACA TTTGTTGTTA AACTCCTGAT 1880 CGCTACTCTT AAGAATATAC ATGTATGTAT TCATAGGAAC ATTTTTTCTC AATATTTGTA 1940 TGATTCGCTT ACTGTTATTG TGCTGAGTGA GCTCCTGTGT GCTTCAGACA AAAATAAATG 2000 AGACTTTGTG TTTACGTTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 2040

【０１０１】配列番号：３ 配列の長さ：４７１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Cys Ala Ala Gln Met Pro Pro Leu Ala His Ile Phe Arg Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val His Ser Thr Trp Thr Cys Pro Met Glu Val Leu Arg Asp His 20 25 30 Leu Leu Gly Val Ser Asp Ser Gly Lys Ile Val Phe Leu Glu Glu Ala 35 40 45 Ser Gln Gln Glu Lys Leu Ala Lys Glu Trp Cys Phe Lys Pro Cys Glu 50 55 60 Ile Arg Glu Leu Ser His His Glu Phe Phe Met Pro Gly Leu Val Asp 65 70 75 80 Thr His Ile His Ala Ser Gln Tyr Ser Phe Ala Gly Ser Ser Ile Asp 85 90 95 Leu Pro Leu Leu Glu Trp Leu Thr Lys Tyr Thr Phe Pro Ala Glu His 100 105 110 Arg Phe Gln Asn Ile Asp Phe Ala Glu Glu Val Tyr Thr Arg Val Val 115 120 125 Arg Arg Thr Leu Lys Asn Gly Thr Thr Thr Ala Cys Tyr Phe Ala Thr 130 135 140 Ile His Thr Asp Ser Ser Leu Leu Leu Ala Asp Ile Thr Asp Lys Phe 145 150 155 160 Gly Gln Arg Ala Phe Val Gly Lys Val Cys Met Asp Leu Asn Asp Thr 165 170 175 Phe Pro Glu Tyr Lys Glu Thr Thr Glu Glu Ser Ile Lys Glu Thr Glu 180 185 190 Arg Phe Val Ser Glu Met Leu Gln Lys Asn Tyr Ser Arg Val Lys Pro 195 200 205 Ile Val Thr Pro Arg Phe Ser Leu Ser Cys Ser Glu Thr Leu Met Gly 210 215 220 Glu Leu Gly Asn Ile Ala Lys Thr Arg Asp Leu His Ile Gln Ser His 225 230 235 240 Ile Ser Glu Asn Arg Asp Glu Val Glu Ala Val Lys Asn Leu Tyr Pro 245 250 255 Ser Tyr Lys Asn Tyr Thr Ser Val Tyr Asp Lys Asn Asn Leu Leu Thr 260 265 270 Asn Lys Thr Val Met Ala His Gly Cys Tyr Leu Ser Ala Glu Glu Leu 275 280 285 Asn Val Phe His Glu Arg Gly Ala Ser Ile Ala His Cys Pro Asn Ser 290 295 300 Asn Leu Ser Leu Ser Ser Gly Phe Leu Asn Val Leu Glu Val Leu Lys 305 310 315 320 His Glu Val Lys Ile Gly Leu Gly Thr Asp Val Ala Gly Gly Tyr Ser 325 330 335 Tyr Ser Met Leu Asp Ala Ile Arg Arg Ala Val Met Val Ser Asn Ile 340 345 350 Leu Leu Ile Asn Lys Val Asn Glu Lys Ser Leu Thr Leu Lys Glu Val 355 360 365 Phe Arg Leu Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gln Ala Leu Gly Leu Asp Gly 370 375 380 Glu Ile Gly Asn Phe Glu Val Gly Lys Glu Phe Asp Ala Ile Leu Ile 385 390 395 400 Asn Pro Lys Ala Ser Asp Ser Pro Ile Asp Leu Phe Tyr Gly Asp Phe 405 410 415 Phe Gly Asp Ile Ser Glu Ala Val Ile Gln Lys Phe Leu Tyr Leu Gly 420 425 430 Asp Asp Arg Asn Ile Glu Glu Val Tyr Val Gly Gly Lys Gln Val Val 435 440 445 Pro Phe Ser Ser Ser Val Lys Glu Thr Ile His Leu Pro Ala Ser Ser 450 455 460 Pro His Pro Pro Pro Phe Pro 465 470

【０１０２】配列番号：４ 配列の長さ：１９２６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ ATG TGT GCC GCT CAG ATG CCG CCC CTG GCG CAC ATC TTC CGA GGG ACG 48 TTC GTC CAC TCC ACC TGG ACC TGC CCC ATG GAG GTG CTG CGG GAT CAC 96 CTC CTC GGC GTG AGC GAC AGC GGC AAA ATA GTG TTT TTA GAA GAA GCA 144 TCT CAA CAG GAA AAA CTG GCC AAA GAA TGG TGC TTC AAG CCG TGT GAA 192 ATA AGA GAA CTG AGC CAC CAT GAG TTC TTC ATG CCT GGG CTG GTT GAT 240 ACA CAC ATC CAT GCC TCT CAG TAT TCC TTT GCT GGA AGT AGC ATA GAC 288 CTG CCA CTC TTG GAG TGG CTG ACC AAG TAC ACA TTT CCT GCA GAA CAC 336 AGA TTC CAG AAC ATC GAC TTT GCA GAA GAA GTA TAT ACC AGA GTT GTC 384 AGG AGA ACA CTA AAG AAT GGA ACA ACC ACA GCT TGT TAC TTT GCA ACA 432 ATT CAC ACT GAC TCA TCT CTG CTC CTT GCC GAC ATT ACA GAT AAA TTT 480 GGA CAG CGG GCA TTT GTG GGC AAA GTT TGC ATG GAT TTG AAT GAC ACT 528 TTT CCA GAA TAC AAG GAG ACC ACT GAG GAA TCG ATC AAG GAA ACT GAG 576 AGA TTT GTG TCA GAA ATG CTC CAA AAG AAC TAT TCT AGA GTG AAG CCC 624 ATA GTG ACA CCA CGT TTT TCC CTC TCC TGC TCT GAG ACT TTG ATG GGT 672 GAA CTG GGC AAC ATT GCT AAA ACC CGT GAT TTG CAC ATT CAG AGC CAT 720 ATA AGT GAA AAT CGT GAT GAA GTT GAA GCT GTG AAA AAC TTA TAC CCC 768 AGT TAT AAA AAC TAC ACA TCT GTG TAT GAT AAA AAC AAT CTT TTG ACA 816 AAT AAG ACA GTG ATG GCA CAC GGC TGC TAC CTC TCT GCA GAA GAA CTG 864 AAC GTA TTC CAT GAA CGA GGA GCA TCC ATC GCA CAC TGT CCC AAT TCT 912 AAT TTA TCG CTC AGC AGT GGA TTT CTA AAT GTG CTA GAA GTC CTG AAA 960 CAT GAA GTC AAG ATA GGG CTG GGT ACA GAC GTG GCT GGT GGC TAT TCA 1008 TAT TCC ATG CTT GAT GCA ATC AGA AGA GCA GTG ATG GTT TCC AAT ATC 1056 CTT TTA ATT AAT AAG GTA AAT GAG AAA AGC CTC ACC CTC AAA GAA GTC 1104 TTC AGA CTA GCT ACT CTT GGA GGA AGC CAA GCC CTG GGG CTG GAT GGT 1152 GAG ATT GGA AAC TTT GAA GTG GGC AAG GAA TTT GAT GCC ATC CTG ATC 1200 AAC CCC AAA GCA TCC GAC TCT CCC ATT GAC CTG TTT TAT GGG GAC TTT 1248 TTT GGT GAT ATT TCT GAG GCT GTT ATC CAG AAG TTC CTC TAT CTA GGA 1296 GAT GAT CGA AAT ATT GAA GAG GTT TAT GTG GGC GGA AAG CAG GTG GTT 1344 CCG TTT TCC AGC TCA GTG AAA GAA ACA ATT CAC TTA CCA GCC TCC TCA 1392 CCC CAT CCT CCA CCA TTT CCT TAA TGTTCCATGG TATTTTCAAC GGAATACACT 1446 TTGAAAGACC TGAGTGTGAA AGACTGAGAG TTGAGGAGTT ACTTTGTGGA TCTTGTCCAA 1506 ATTTAGTGAA ATGTGGAAGT CAACCAGACC AATGATGGAA TTAAATGTAA ATTCCAAGAG 1566 GGCTTTCACA GTCCACAGGG TTCAAATGAC TTGGGTAACA GAAGTTATTC TTAGCTTACC 1626 TGTTATGTGA CAGTGATTTA CCTGTCCATT TCCAACCCAA AAGCCTGTCA GAAAGCATTC 1686 TTTAGAGAAA ACCACTTAAC ATTTGTTGTT AAACTCCTGA TCGCTACTCT TAAGAATATA 1746 CATGTATGTA TTCATAGGAA CATTTTTTCT CAATATTTGT ATGATTCGCT TACTGTTATT 1806 GTGCTGAGTG AGCTCCTGTG TGCTTCAGAC AAAAATAAAT GAGACTTTGT GTTTACGTTA 1866 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1926

【０１０３】配列番号：５ 配列の長さ：５０５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Cys Ala Ala Gln Met Pro Pro Leu Ala His Ile Phe Arg Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val His Ser Thr Trp Thr Cys Pro Met Glu Val Leu Arg Asp His 20 25 30 Leu Leu Gly Val Ser Asp Ser Gly Lys Ile Val Phe Leu Glu Glu Ala 35 40 45 Ser Gln Gln Glu Lys Leu Ala Lys Glu Trp Cys Phe Lys Pro Cys Glu 50 55 60 Ile Arg Glu Leu Ser His His Glu Phe Phe Met Pro Gly Leu Val Asp 65 70 75 80 Thr His Ile His Ala Ser Gln Tyr Ser Phe Ala Gly Ser Ser Ile Asp 85 90 95 Leu Pro Leu Leu Glu Trp Leu Thr Lys Tyr Thr Phe Pro Ala Glu His 100 105 110 Arg Phe Gln Asn Ile Asp Phe Ala Glu Glu Val Tyr Thr Arg Val Val 115 120 125 Arg Arg Thr Leu Lys Asn Gly Thr Thr Thr Ala Cys Tyr Phe Ala Thr 130 135 140 Ile His Thr Asp Ser Ser Leu Leu Leu Ala Asp Ile Thr Asp Lys Phe 145 150 155 160 Gly Gln Arg Ala Phe Val Gly Lys Val Cys Met Asp Leu Asn Asp Thr 165 170 175 Phe Pro Glu Tyr Lys Glu Thr Thr Glu Glu Ser Ile Lys Glu Thr Glu 180 185 190 Arg Phe Val Ser Glu Met Leu Gln Lys Asn Tyr Ser Arg Val Lys Pro 195 200 205 Ile Val Thr Pro Arg Phe Ser Leu Ser Cys Ser Glu Thr Leu Met Gly 210 215 220 Glu Leu Gly Asn Ile Ala Lys Thr Arg Asp Leu His Ile Gln Ser His 225 230 235 240 Ile Ser Glu Asn Arg Asp Glu Val Glu Ala Val Lys Asn Leu Tyr Pro 245 250 255 Ser Tyr Lys Asn Tyr Thr Ser Val Tyr Asp Lys Asn Asn Leu Leu Thr 260 265 270 Asn Lys Thr Val Met Ala His Gly Cys Tyr Leu Ser Ala Glu Glu Leu 275 280 285 Asn Val Phe His Glu Arg Gly Ala Ser Ile Ala His Cys Pro Asn Ser 290 295 300 Asn Leu Ser Leu Ser Ser Gly Phe Leu Asn Val Leu Glu Val Leu Lys 305 310 315 320 His Glu Val Lys Ile Gly Leu Gly Thr Asp Val Ala Gly Gly Tyr Ser 325 330 335 Tyr Ser Met Leu Asp Ala Ile Arg Arg Ala Val Met Val Ser Asn Ile 340 345 350 Leu Leu Ile Asn Lys Val Asn Glu Lys Ser Leu Thr Leu Lys Glu Val 355 360 365 Phe Arg Leu Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gln Ala Leu Gly Leu Asp Gly 370 375 380 Glu Ile Gly Asn Phe Glu Val Gly Lys Glu Phe Asp Ala Ile Leu Ile 385 390 395 400 Asn Pro Lys Ala Ser Asp Ser Pro Ile Asp Leu Phe Tyr Gly Asp Phe 405 410 415 Phe Gly Asp Ile Ser Glu Ala Val Ile Gln Lys Phe Leu Tyr Leu Gly 420 425 430 Asp Asp Arg Asn Ile Glu Glu Val Tyr Val Gly Gly Lys Gln Glu Arg 435 440 445 Asn Asn Ser Leu Thr Ser Leu Leu Thr Pro Ser Ser Thr Ile Ser Leu 450 455 460 Met Phe His Gly Ile Phe Asn Gly Ile His Phe Glu Arg Pro Glu Cys 465 470 475 480 Glu Arg Leu Arg Val Glu Glu Leu Leu Cys Gly Ser Cys Pro Asn Leu 485 490 495 Val Lys Cys Gly Ser Gln Pro Asp Gln 500 505

【０１０４】配列番号：６ 配列の長さ：１５１８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ ATG TGT GCC GCT CAG ATG CCG CCC CTG GCG CAC ATC TTC CGA GGG ACG 48 TTC GTC CAC TCC ACC TGG ACC TGC CCC ATG GAG GTG CTG CGG GAT CAC 96 CTC CTC GGC GTG AGC GAC AGC GGC AAA ATA GTG TTT TTA GAA GAA GCA 144 TCT CAA CAG GAA AAA CTG GCC AAA GAA TGG TGC TTC AAG CCG TGT GAA 192 ATA AGA GAA CTG AGC CAC CAT GAG TTC TTC ATG CCT GGG CTG GTT GAT 240 ACA CAC ATC CAT GCC TCT CAG TAT TCC TTT GCT GGA AGT AGC ATA GAC 288 CTG CCA CTC TTG GAG TGG CTG ACC AAG TAC ACA TTT CCT GCA GAA CAC 336 AGA TTC CAG AAC ATC GAC TTT GCA GAA GAA GTA TAT ACC AGA GTT GTC 384 AGG AGA ACA CTA AAG AAT GGA ACA ACC ACA GCT TGT TAC TTT GCA ACA 432 ATT CAC ACT GAC TCA TCT CTG CTC CTT GCC GAC ATT ACA GAT AAA TTT 480 GGA CAG CGG GCA TTT GTG GGC AAA GTT TGC ATG GAT TTG AAT GAC ACT 528 TTT CCA GAA TAC AAG GAG ACC ACT GAG GAA TCG ATC AAG GAA ACT GAG 576 AGA TTT GTG TCA GAA ATG CTC CAA AAG AAC TAT TCT AGA GTG AAG CCC 624 ATA GTG ACA CCA CGT TTT TCC CTC TCC TGC TCT GAG ACT TTG ATG GGT 672 GAA CTG GGC AAC ATT GCT AAA ACC CGT GAT TTG CAC ATT CAG AGC CAT 720 ATA AGT GAA AAT CGT GAT GAA GTT GAA GCT GTG AAA AAC TTA TAC CCC 768 AGT TAT AAA AAC TAC ACA TCT GTG TAT GAT AAA AAC AAT CTT TTG ACA 816 AAT AAG ACA GTG ATG GCA CAC GGC TGC TAC CTC TCT GCA GAA GAA CTG 864 AAC GTA TTC CAT GAA CGA GGA GCA TCC ATC GCA CAC TGT CCC AAT TCT 912 AAT TTA TCG CTC AGC AGT GGA TTT CTA AAT GTG CTA GAA GTC CTG AAA 960 CAT GAA GTC AAG ATA GGG CTG GGT ACA GAC GTG GCT GGT GGC TAT TCA 1008 TAT TCC ATG CTT GAT GCA ATC AGA AGA GCA GTG ATG GTT TCC AAT ATC 1056 CTT TTA ATT AAT AAG GTA AAT GAG AAA AGC CTC ACC CTC AAA GAA GTC 1104 TTC AGA CTA GCT ACT CTT GGA GGA AGC CAA GCC CTG GGG CTG GAT GGT 1152 GAG ATT GGA AAC TTT GAA GTG GGC AAG GAA TTT GAT GCC ATC CTG ATC 1200 AAC CCC AAA GCA TCC GAC TCT CCC ATT GAC CTG TTT TAT GGG GAC TTT 1248 TTT GGT GAT ATT TCT GAG GCT GTT ATC CAG AAG TTC CTC TAT CTA GGA 1296 GAT GAT CGA AAT ATT GAA GAG GTT TAT GTG GGC GGA AAG CAG GAA AGA 1344 AAC AAT TCA CTT ACC AGC CTC CTC ACC CCA TCC TCC ACC ATT TCC TTA 1392 ATG TTC CAT GGT ATT TTC AAC GGA ATA CAC TTT GAA AGA CCT GAG TGT 1440 GAA AGA CTG AGA GTT GAG GAG TTA CTT TGT GGA TCT TGT CCA AAT TTA 1488 GTG AAA TGT GGA AGT CAA CCA GAC CAA TGA 1518

【０１０５】配列番号：７ 配列の長さ：４６０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met Cys Ala Ala Gln Met Pro Pro Leu Ala His Ile Phe Arg Gly Thr 1 5 10 15 Phe Val His Ser Thr Trp Thr Cys Pro Met Glu Val Leu Arg Asp His 20 25 30 Leu Leu Gly Val Ser Asp Ser Gly Lys Ile Val Phe Leu Glu Glu Ala 35 40 45 Ser Gln Gln Glu Lys Leu Ala Lys Glu Trp Cys Phe Lys Pro Cys Glu 50 55 60 Ile Arg Glu Leu Ser His His Glu Phe Phe Met Pro Gly Leu Val Asp 65 70 75 80 Thr His Ile His Ala Ser Gln Tyr Ser Phe Ala Gly Ser Ser Ile Asp 85 90 95 Leu Pro Leu Leu Glu Trp Leu Thr Lys Tyr Thr Phe Pro Ala Glu His 100 105 110 Arg Phe Gln Asn Ile Asp Phe Ala Glu Glu Val Tyr Thr Arg Val Val 115 120 125 Arg Arg Thr Leu Lys Asn Gly Thr Thr Thr Ala Cys Tyr Phe Ala Thr 130 135 140 Ile His Thr Asp Ser Ser Leu Leu Leu Ala Asp Ile Thr Asp Lys Phe 145 150 155 160 Gly Gln Arg Ala Phe Val Gly Lys Val Cys Met Asp Leu Asn Asp Thr 165 170 175 Phe Pro Glu Tyr Lys Glu Thr Thr Glu Glu Ser Ile Lys Glu Thr Glu 180 185 190 Arg Phe Val Ser Glu Met Leu Gln Lys Asn Tyr Ser Arg Val Lys Pro 195 200 205 Ile Val Thr Pro Arg Phe Ser Leu Ser Cys Ser Glu Thr Leu Met Gly 210 215 220 Glu Leu Gly Asn Ile Ala Lys Thr Arg Asp Leu His Ile Gln Ser His 225 230 235 240 Ile Ser Glu Asn Arg Asp Glu Val Glu Ala Val Lys Asn Leu Tyr Pro 245 250 255 Ser Tyr Lys Asn Tyr Thr Ser Val Tyr Asp Lys Asn Asn Leu Leu Thr 260 265 270 Asn Lys Thr Val Met Ala His Gly Cys Tyr Leu Ser Ala Glu Glu Leu 275 280 285 Asn Val Phe His Glu Arg Gly Ala Ser Ile Ala His Cys Pro Asn Ser 290 295 300 Asn Leu Ser Leu Ser Ser Gly Phe Leu Asn Val Leu Glu Val Leu Lys 305 310 315 320 His Glu Val Lys Ile Gly Leu Gly Thr Asp Val Ala Gly Gly Tyr Ser 325 330 335 Tyr Ser Met Leu Asp Ala Ile Arg Arg Ala Val Met Val Ser Asn Ile 340 345 350 Leu Leu Ile Asn Lys Val Asn Glu Lys Ser Leu Thr Leu Lys Glu Val 355 360 365 Phe Arg Leu Ala Thr Leu Gly Gly Ser Gln Ala Leu Gly Leu Asp Gly 370 375 380 Glu Ile Gly Asn Phe Glu Val Gly Lys Glu Phe Asp Ala Ile Leu Ile 385 390 395 400 Asn Pro Lys Ala Ser Asp Ser Pro Ile Asp Leu Phe Tyr Gly Asp Phe 405 410 415 Phe Gly Asp Ile Ser Glu Ala Val Ile Gln Lys Phe Leu Tyr Leu Gly 420 425 430 Lys Lys Gln Phe Thr Tyr Gln Pro Pro His Pro Ile Leu His His Phe 435 440 445 Leu Asn Val Pro Trp Tyr Phe Gln Arg Asn Thr Leu 450 455 460

【０１０６】配列番号：８ 配列の長さ：１３８３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ ATG TGT GCC GCT CAG ATG CCG CCC CTG GCG CAC ATC TTC CGA GGG ACG 48 TTC GTC CAC TCC ACC TGG ACC TGC CCC ATG GAG GTG CTG CGG GAT CAC 96 CTC CTC GGC GTG AGC GAC AGC GGC AAA ATA GTG TTT TTA GAA GAA GCA 144 TCT CAA CAG GAA AAA CTG GCC AAA GAA TGG TGC TTC AAG CCG TGT GAA 192 ATA AGA GAA CTG AGC CAC CAT GAG TTC TTC ATG CCT GGG CTG GTT GAT 240 ACA CAC ATC CAT GCC TCT CAG TAT TCC TTT GCT GGA AGT AGC ATA GAC 288 CTG CCA CTC TTG GAG TGG CTG ACC AAG TAC ACA TTT CCT GCA GAA CAC 336 AGA TTC CAG AAC ATC GAC TTT GCA GAA GAA GTA TAT ACC AGA GTT GTC 384 AGG AGA ACA CTA AAG AAT GGA ACA ACC ACA GCT TGT TAC TTT GCA ACA 432 ATT CAC ACT GAC TCA TCT CTG CTC CTT GCC GAC ATT ACA GAT AAA TTT 480 GGA CAG CGG GCA TTT GTG GGC AAA GTT TGC ATG GAT TTG AAT GAC ACT 528 TTT CCA GAA TAC AAG GAG ACC ACT GAG GAA TCG ATC AAG GAA ACT GAG 576 AGA TTT GTG TCA GAA ATG CTC CAA AAG AAC TAT TCT AGA GTG AAG CCC 624 ATA GTG ACA CCA CGT TTT TCC CTC TCC TGC TCT GAG ACT TTG ATG GGT 672 GAA CTG GGC AAC ATT GCT AAA ACC CGT GAT TTG CAC ATT CAG AGC CAT 720 ATA AGT GAA AAT CGT GAT GAA GTT GAA GCT GTG AAA AAC TTA TAC CCC 768 AGT TAT AAA AAC TAC ACA TCT GTG TAT GAT AAA AAC AAT CTT TTG ACA 816 AAT AAG ACA GTG ATG GCA CAC GGC TGC TAC CTC TCT GCA GAA GAA CTG 864 AAC GTA TTC CAT GAA CGA GGA GCA TCC ATC GCA CAC TGT CCC AAT TCT 912 AAT TTA TCG CTC AGC AGT GGA TTT CTA AAT GTG CTA GAA GTC CTG AAA 960 CAT GAA GTC AAG ATA GGG CTG GGT ACA GAC GTG GCT GGT GGC TAT TCA 1008 TAT TCC ATG CTT GAT GCA ATC AGA AGA GCA GTG ATG GTT TCC AAT ATC 1056 CTT TTA ATT AAT AAG GTA AAT GAG AAA AGC CTC ACC CTC AAA GAA GTC 1104 TTC AGA CTA GCT ACT CTT GGA GGA AGC CAA GCC CTG GGG CTG GAT GGT 1152 GAG ATT GGA AAC TTT GAA GTG GGC AAG GAA TTT GAT GCC ATC CTG ATC 1200 AAC CCC AAA GCA TCC GAC TCT CCC ATT GAC CTG TTT TAT GGG GAC TTT 1248 TTT GGT GAT ATT TCT GAG GCT GTT ATC CAG AAG TTC CTC TAT CTA GGA 1296 AAG AAA CAA TTC ACT TAC CAG CCT CCT CAC CCC ATC CTC CAC CAT TTC 1344 CTT AAT GTT CCA TGG TAT TTT CAA CGG AAT ACA CTT TGA 1383

【０１０７】配列番号：９ 配列の長さ：８１７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 配列 Met His Lys His G1n His Cys Cys Lys Cys Pro G1u Cys Tyr G1u Val 1 5 10 15 Thr Arg Leu A1a A1a Leu Arg Arg Leu G1u Pro Pro G1y Tyr G1y Asp 20 25 30 Trp G1n Val Pro Asp Pro Tyr Gly Pro G1y G1y G1y Asn G1y A1a Ser 35 40 45 A1a G1y Tyr G1y Gly Tyr Ser Ser G1n Thr Leu Pro Ser G1n A1a G1y 50 55 60 Ala Thr Pro Thr Pro Arg Thr Lys A1a Lys Leu I1e Pro Thr GIy Arg 65 70 75 80 Asp Val Gly Pro Val Pro Leu Lys Pro Val Pro Gly Lys Ser Thr Pro 85 90 95 Lys Leu Asn Gly Ser Gly Pro Ser Trp Trp Pro Glu Cys Thr Cys Thr 100 105 110 Asn Arg Asp Trp Tyr Glu Gln Val Asn Gly Ser Asp Gly Met Phe Lys 115 120 125 Tyr G1u GIu Ile Val Leu Glu Arg Gly Asn Ser Gly Leu Gly Phe Ser 130 135 140 Ile Ala Gly Gly Ile Asp Asn Pro His Val Pro Asp Asp Pro G1y Ile 145 150 l55 160 Phe Ile Thr Lys Ile Ile Pro Gly Gly A1a Ala Ala Met Asp G1y Arg 165 170 175 Leu Gly Val Asn Asp Cys Val Leu Arg Val Asn G1u Val G1u Val Ser 180 185 190 Glu Val Val His Ser Arg A1a Val G1u A1a Leu Lys G1u A1a G1y Pro 195 200 205 Val Val Arg Leu Val Val Arg Arg Arg G1n Pro Pro Pro G1u Thr I1e 210 215 220 Met G1u Val Asn Leu Leu Lys G1y Pro Lys G1y Leu G1y Phe Ser I1e 225 230 235 240 Ala Gly Gly Ile Gly Asn Gln His Ile Pro Gly Asp Asn Ser Ile Tyr 245 250 255 Ile Thr Lys I1e Ile G1u Gly G1y A1a A1a G1n Lys Asp G1y Arg Leu 260 265 270 Gln Ile G1y Asp Arg Leu Leu A1a Va1 Asn Asn Thr Asn Leu G1n Asp 275 280 285 Val Arg His G1u G1u A1a Val A1a Ser Leu Lys Asn Thr Ser Asp Met 290 295 300 Val Tyr Leu Lys Val A1a Lys Pro G1y Ser Leu His Leu Asn Asp Met 305 310 315 320 Tyr A1a Pro Pro Asp Tyr A1a Ser Thr Phe Thr A1a Leu A1a Asp Asn 325 330 335 His Ile Ser His Asn Ser Ser Leu G1y Tyr Leu Gly A1a Va1 G1u Ser 340 345 350 Lys Val Ser Tyr Pro A1a Pro Pro G1n Val Pro Pro Thr Arg Tyr Ser 355 360 365 Pro I1e Pro Arg His Met Leu A1a Glu G1u Asp Phe Thr Arg G1u Pro 370 375 380 Arg Lys Ile Ile Leu His Lys Gly Ser Thr Gly Leu Gly Phe Asn Ile 385 390 395 400 Val Gly Gly G1u Asp Gly G1u G1y I1e Phe Val Ser Phe I1e Leu Ala 405 410 415 Gly Gly Pro A1a Asp Leu Ser G1y G1u Leu Arg Arg G1y Asp Arg Ile 420 425 430 Leu Ser Val Asn Gly Val Asn Leu Arg Asn Ala Thr His G1u Gln Ala 435 440 445 A1a A1a A1a Leu Lys Arg A1a G1y G1n Ser Val Thr I1e Val A1a G1n 450 455 460 Tyr Arg Pro Glu G1u Tyr Ser Arg Phe G1u Ser Lys Ile His Asp Leu 465 470 475 480 Arg G1u G1n Met Met Asn Ser Ser Met Ser Ser G1y Ser G1y Ser Leu 485 490 495 Arg Thr Ser G1u Lys Arg Ser Leu Tyr Val Arg A1a Leu Phe Asp Tyr 500 505 510 Asp Arg Thr Arg Asp Ser Cys Leu Pro Ser G1n G1y Leu Ser Phe Ser 515 520 525 Tyr G1y Asp I1e Leu His Va1 I1e Asn A1a Ser Asp Asp Glu Trp Trp 530 535 540 G1n A1a Arg Leu Val Thr Pro His G1y G1u Ser Glu G1n I1e Gly Val 545 550 555 560 Ile Pro Ser Lys Lys Arg Val G1u Lys Lys G1u Arg A1a Arg Leu Lys 565 570 575 Thr Val Lys Phe His A1a Arg Thr Gly Met Ile G1u Ser Asn Arg Asp 580 585 590 Phe Pro G1y Leu Ser Asp Asp Tyr Tyr Gly Ala Lys Asn Leu Lys Gly 595 600 605 G1n GIu Asp Ala Ile Leu Ser Tyr G1u Pro Val Thr Arg G1n G1u Ile 610 615 620 His Tyr A1a Arg Pro Val Iie Ile Leu G1y Pro Met Lys Asp Arg Val 625 630 635 640 Asn Asp Asp Leu Ile Ser Glu Phe Pro His Lys Phe Gly Ser Cys Val 645 650 655 Pro His Thr Thr Arg Pro Arg Arg Asp Asn Glu Val Asp Gly Gln Asp 660 665 670 Tyr His Phe Val Val Ser Arg G1u G1n Met G1u Lys Asp I1e G1n Asp 675 680 685 Asn Lys Phe Ile G1u A1a G1y G1n Phe Asn Asp Asn Leu Tyr G1y Thr 690 695 700 Ser I1e G1n Ser Val Arg A1a Val A1a G1u Arg G1y Lys His Cys I1e 705 7l0 715 72O Leu Asp Val Ser Gly Asn A1a I1e Lys Arg Leu G1n G1n A1a G1n Leu 725 730 735 Tyr Pro Ile A1a Ile Phe Ile Lys Pro Lys Ser Ile G1u A1a Leu Het 740 745 750 G1u Met Asn Arg Arg G1n Thr Tyr G1u G1n A1a Asn Lys I1e Tyr Asp 755 760 765 Lys A1a Met Lys Leu G1u Gln Glu Phe G1y G1u Tyr Phe Thr A1a I1e 770 775 780 Val G1n Gly Asp Ser Leu Glu Glu Ile Tyr Asn Lys I1e Lys GIn I1e 785 790 795 800 Ile Glu Asp Gln Ser Gly His Tyr Ile Trp Val Pro Ser Pro Glu Lys 805 810 815 Leu

【０１０８】配列番号：１０ 配列の長さ：３１００ 配列の型:核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ―:直鎖状 配列の種類 : ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 配列 TGCTGGAGGG GGAGCCGTGG GTGCGGGGCA CCGTGGGGGC CGAGGCCCCG GGACGCCCGC 60 CCGGCCCCAG GCCCCGCTCA GCCCGGGCGC CCCCACGGGT GCCCCCCCCT TCTTGGTCCG 120 AGCAGTGTGA GTGTGCCAGG GAGCCCGGCG GCGGCGGCGG CGGTGGTGGC GGCGGTGGCG 180 GCGGCGTGGA ATCCGGCGTG GGCTGGGGGG TCCGAGCCGC GGGGGGCAGT GCC 233 ATG CAC AAG CAC CAG CAC TGC TGT AAG TGC CCT GAG TGC TAT GAG GTG 281 ACC CGC CTG GCC GCC CTG CGG CGC CTC GAG CCT CCG GGG TAC GGC GAC 329 TGG CAA GTC CCC GAC CCT TAC GGG CCA GGT GGG GGC AAC GGC GCC AGC 377 GCG GGT TAT GGG GGC TAC AGC TCG CAG ACC TTG CCC TCG CAG GCG GGG 425 GCC ACC CCC ACC CCT CGC ACC AAG GCC AAG CTC ATC CCC ACC GGC CGG 473 GAT GTG GGG CCG GTG CCT CTT AAG CCA GTC CCG GGC AAG AGC ACC CCC 521 AAA CTC AAC GGC AGC GGC CCC AGC TGG TGG CCA GAG TGC ACC TGT ACC 569 AAC CGG GAC TGG TAT GAG CAG GTG AAT GGC AGT GAT GGC ATG TTC AAA 617 TAT GAG GAA ATC GTA CTT GAG AGG GGC AAC TCT GGC CTG GGC TTC AGT 665 ATC GCA GGT GGC ATC GAC AAT CCC CAT GTC CCT GAT GAC CCT GGC ATT 713 TTT ATT ACC AAG ATT ATC CCT GGT GGA GCA GCT GCC ATG GAT GGG AGG 761 CTG GGG GTG AAT GAC TGT GTG CTG CGG GTG AAT GAG GTG GAA GTG TCG 809 GAG GTG GTA CAC AGC CGG GCG GTG GAG GCG CTG AAA GAG GCA GGC CCT 857 GTG GTG CGA TTG GTG GTG CGG AGG CGA CAG CCT CCA CCC GAG ACC ATC 905 ATG GAG GTC AAC CTG CTC AAA GGG CCC AAA GGC CTG GGT TTC AGC ATT 953 GCT GGG GGT ATT GGC AAC CAG CAC ATC CCA GGA GAC AAC AGC ATC TAC 1001 ATC ACC AAG ATC ATT GAG GGG GGT GCT GCT CAG AAG GAT GGA CGC CTA 1049 CAG ATT GGG GAC CGG CTG CTG GCG GTG AAC AAC ACC AAT CTG CAG GAT 1097 GTG AGG CAC GAG GAA GCT GTG GCC TCA CTG AAG AAC ACA TCT GAT ATG 1145 GTG TAT TTG AAG GTG GCC AAG CCA GGC AGC CTC CAC CTC AAC GAC ATG 1193 TAC GCT CCC CCT GAC TAC GCC AGC ACT TTT ACT GCC TTG GCT GAC AAC 1241 CAC ATA AGC CAT AAT TCC AGC CTG GGT TAT CTC GGG GCT GTG GAG AGC 1289 AAG GTC AGC TAC CCT GCT CCT CCT CAG GTT CCC CCC ACC CGC TAC TCT 1337 CCT ATT CCC AGG CAC ATG CTG GCT GAG GAG GAC TTC ACC AGA GAG CCT 1385 CGC AAG ATC ATC CTG CAC AAA GGC TCC ACA GGC CTG GGC TTC AAC ATC 1433 GTA GGA GGA GAG GAT GGA GAA GGC ATT TTT GTC TCC TTC ATC CTG GCA 1481 GGA GGC CCA GCT GAC CTG AGT GGG GAG CTG CGC AGG GGA GAC CGG ATC 1529 TTA TCG GTG AAT GGA GTG AAT CTG AGG AAT GCA ACT CAT GAG CAG GCT 1577 GCA GCT GCT CTG AAA CGG GCC GGC CAG TCA GTC ACC ATT GTG GCC CAG 1625 TAC AGA CCT GAA GAA TAC AGT CGC TTT GAA TCG AAG ATA CAT GAC TTA 1673 CGA GAA CAA ATG ATG AAC AGC AGC ATG AGC TCT GGG TCT GGG TCC CTC 1721 CGA ACA AGT GAA AAG AGG TCC TTG TAT GTC AGG GCC CTG TTT GAT TAT 1769 GAT CGG ACT CGG GAC AGC TGC CTG CCA AGC CAG GGG CTC AGC TTC TCT 1817 TAT GGT GAC ATT CTG CAT GTC ATT AAT GCC TCT GAT GAT GAG TGG TGG 1865 CAG GCA AGG CTG GTG ACC CCA CAC GGA GAA AGT GAG CAG ATC GGT GTG 1913 ATC CCC AGT AAG AAG AGG GTG GAA AAG AAA GAA AGA GCT CGA TTG AAA 1961 ACT GTG AAG TTC CAT GCC AGG ACG GGG ATG ATT GAG TCT AAC AGG GAC 2009 TTC CCG GGG TTA AGT GAC GAT TAT TAT GGA GCA AAG AAC CTG AAA GGA 2057 CAA GAG GAT GCT ATT TTG TCA TAT GAG CCA GTG ACA CGG CAA GAA ATT 2105 CAC TAT GCA AGG CCT GTG ATC ATC CTG GGC CCA ATG AAG GAC CGA GTC 2153 AAT GAT GAC CTG ATC TCC GAA TTT CCA CAT AAA TTT GGA TCC TGT GTG 2201 CCA CAT ACT ACC CGG CCT CGA CGT GAT AAT GAG GTG GAT GGA CAA GAC 2249 TAC CAC TTT GTG GTG TCC CGA GAA CAA ATG GAG AAA GAT ATT CAG GAC 2297 AAC AAG TTC ATC GAG GCG GGC CAA TTT AAT GAT AAC CTC TAT GGG ACC 2345 AGC ATC CAG TCA GTG CGG GCA GTT GCA GAG AGG GGC AAG CAC TGC ATC 2393 TTA GAT GTT TCC GGC AAT GCT ATC AAG AGA CTG CAG CAA GCA CAA CTT 2441 TAC CCC ATT GCC ATT TTC ATC AAG CCC AAG TCC ATT GAA GCC CTT ATG 2489 GAA ATG AAC CGA AGG CAG ACA TAT GAA CAA GCA AAT AAG ATC TAT GAC 2537 AAA GCC ATG AAA CTG GAG CAG GAA TTT GGA GAG TAC TTT ACA GCC ATT 2585 GTA CAG GGT GAC TCA CTG GAA GAG ATT TAT AAC AAA ATC AAA CAA ATC 2633 ATT GAG GAC CAG TCT GGG CAC TAC ATT TGG GTC CCA TCC CCT GAA AAA 2681 CTC TGA AGAATCCCCT CCAACCATTC TCTTGTGAAC AGAAGAAATC AAGTCCCTCT 2737 TCCCTCCTCC CTCTTCATTC CTGTCCCCAT GGGGAGAACA AATGCTACTG TTCTTGTCCC 2797 CTTTTTTAGA TATGTCAAAA AAAATTAAGT TTTCTAGTCC TGTTCTTTTT TTTTTTTAAG 2857 TTTTTGTTTG TTTCAGTTTA TTTTTTGGGA TGATGCCATC TCATTCATCA TGTGACTGTG 2917 CCCATTCCTG CATGGACCTT TCCCAAGCGC TAGCATAGGT GCAAAATCCA TCAGAGCCAT 2977 TGTTTTCATA AAAACCAAGC AGAAGTGAAG AGAAAAGAGG AGGACTGATG GAAAGACAGA 3037 CTCTGGACAG CTGCACGGCT TGTGAAGTGA GCTAAATGCA CCACATGATG AGATGCTCCT 3097 GGG 3100

【０１０９】配列番号：１１ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 ATGCCTGGGC TGGTTGATAC ACAC 24

【０１１０】配列番号：１２ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 CATCACTGTC TTATTTGTCA AAAG 24

【０１１１】配列番号：１３ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 TGATTTGCAC ATTCAGAGCC ATAT 24

【０１１２】配列番号：１４ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 AGGTCTATGC TACTTCCAGC AAAG 24

【０１１３】配列番号：１５ 配列の長さ：２７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 CCATCCTAAT ACGACTCACT ATAGGGC 27

【０１１４】配列番号：１６ 配列の長さ：２３ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 ACTCACTATA GGGCTCGAGC GGC 23

【０１１５】配列番号：１７ 配列の長さ：３８ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 TGCGCGAATT CGGATCCATG TGTGCCGCTC AGATGCCG 38

【０１１６】配列番号：１８ 配列の長さ：４０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 AAATAGGATC CAAGCTTAAG GAAATGGTGG AGGATGGGGT 40

【０１１７】配列番号：１９ 配列の長さ：２１ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 ATTGAAGAGG TTTATGTGTT C 21

【０１１８】配列番号：２０ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：その他の核酸 配列 CAAGGGAGAT GCACAACCAC GCTA 24

【図面の簡単な説明】

【図１】ネダシンＳのｃＤＮＡとクローニングの過程で
得られた各フラグメントおよび各プライマーとの位置関
係を示す図である。

【図２】ＮＥ−ｄｌｇの各領域の位置関係を示す図であ
る。

【図３】ＮＥ−ｄｌｇと結合するウシの脳細胞から抽出
した蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動してゲルをその
まま銀染色した結果を示す電気栄泳動写真である。

【図４】（Ａ）は、ＮＥ−ｄｌｇのデリーション変異体
と結合したウシの脳細胞から抽出した蛋白質を電気泳動
した結果を示す電気泳動写真である。（Ｂ）は、ＮＥ−
ｄｌｇのデリーション変異体の部分または全長の関係を
示す図である。

【図５】ネダシンｍＲＮＡの各組織で発現についてノー
ザンブロットハイブリダイゼーション法により解析した
結果を示す電気泳動写真である。

【図６】ネダシンｍＲＮＡの各組織および各細胞での発
現についてのＲＴーＰＣＲにより解析した結果を示す電
気泳動写真である。

【図７】ネダシンとＮＥ−ｄｌｇとを含む免疫沈降物を
電気泳動した結果を示す電気泳動写真である。

【手続補正書】

【提出日】平成１０年３月４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００７５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００７５】前記ネダシンＳのｃＤＮＡが組み込まれた
大腸菌をＮｅｄａｓｉｎ Ｓと名付け、工業技術院生命
工学工業技術研究所に平成１０年２月２５日に寄託し
た。受託番号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６６６３である。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００８２

【補正方法】変更

【補正内容】

【００８２】ネダシンＶ１遺伝子を、プラスミドベクタ
ーｐＧＥＭ（登録商標）−Ｔ Ｅａｓｙ（プロメガ社
製）マルチクローニングサイトに挿入した。このプラス
ミドベクターを大腸菌ＤＨ５αに導入した形質転換体を
Ｎｅｄａｓｉｎ Ｖ１と名付け工業技術院生命工学工業
技術研究所に平成１０年２月２５日に寄託した。受託番
号は、ＦＥＲＭ Ｐ−１６６６４である。 ─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１０年３月４日

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図３

【補正方法】変更

【補正内容】

【図３】

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図４

【補正方法】変更

【補正内容】

【図４】

【手続補正３】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５】

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６

【補正方法】変更

【補正内容】

【図６】

【手続補正５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図７

【補正方法】変更

【補正内容】

【図７】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＮＥ−ｄｌｇと結合する分子量５１ｋＤ
   の蛋白質。
2. 【請求項２】 配列表の配列番号１、３、５または７に
   記載のアミノ酸配列からなる蛋白質。
3. 【請求項３】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列において一または複数のアミノ酸を置換、欠失または
   付加させたアミノ酸配列からなり、かつＮＥ−ｄｌｇと
   結合する蛋白質。
4. 【請求項４】 請求項１ないし３のいずれか一項に記載
   の蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 請求項４に記載のポリヌクレオチドのう
   ちの一部であって、連続する１２塩基以上からなるポリ
   ヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項４に記載のポリヌクレオチドのア
   ンチセンス鎖の塩基配列からなるアンチセンスポリヌク
   レオチドまたは該アンチセンスポリヌクレオチドの誘導
   体のうちの一部であって、連続する１２塩基以上からな
   るポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 化学修飾された請求項４ないし６のいず
   れか一項に記載のポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】 配列表の配列番号２、４、６または８に
   記載の塩基配列からなるＤＮＡのホモログであるｃＤＮ
   Ａを取得する方法であって、請求項５ないし７のいずれ
   か一項に記載のポリヌクレオチドのコード領域部分から
   なるポリヌクレオチドをプローブとして、ｃＤＮＡライ
   ブラリーから該プローブとしたポリヌクレオチドとハイ
   ブリダイズするｃＤＮＡを取得する方法。
9. 【請求項９】 配列表の配列番号２、４、６または８に
   記載の塩基配列からなるＤＮＡのホモログであって、請
   求項８に記載の方法によって取得されるｃＤＮＡ。
10. 【請求項１０】 請求項２または３に記載の蛋白質のホ
    モログであって、請求項９に記載のｃＤＮＡがコードす
    るアミノ酸配列からなる蛋白質。
11. 【請求項１１】 請求項１、２．３または１０に記載の
    蛋白質を認識する抗体。