JPH11169171A - 新規モノクローナル抗体およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 ＳＳＩ−１蛋白質に特異的に親和性を有
するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を産生
するハイブリドーマ、該ハイブリドーマの製造方法、該
ハイブリドーマを培養してその培養上清を採取すること
による当該モノクローナル抗体の製造方法。当該モノク
ローナル抗体を使用することを特徴とする試料中のＳＳ
Ｉ−１蛋白質を測定する方法、該モノクローナル抗体を
含む試薬。ＳＳＩファミリーに特異的に親和性を有する
モノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を産生する
ハイブリドーマ、および該モノクローナル抗体の用途。 【効果】 ＳＳＩ−１蛋白質ならびにＳＳＩファミリー
の諸性質を解析することが可能となる。さらに当該蛋白
質分子の分子学的及び生理学的機能の研究にプローブと
して利用でき、細胞内情報伝達系の制御メカニズムの解
析、基礎医学ならびに臨床医学分野での利用、医薬品お
よび診断薬開発等の研究に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、インターロイキン
−６（以下ＩＬ−６と略す）やインターロイキン−４
（以下ＩＬ−４と略す）などのサイトカインによって活
性化される細胞内情報伝達の調節および制御に関与する
蛋白質でありＳＴＡＴによりその発現が誘導され、且つ
ＳＴＡＴのシグナルを阻害する、相同性の高い一連の蛋
白質、就中ＳＳＩ−１蛋白質（以下単にＳＳＩ−１とも
いう）に対して特異的に親和性を有するモノクローナル
抗体およびその製造方法ならびにそれらの用途に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】細胞内情報伝達において、ＩＬ−６、イ
ンターロイキン１１（以下ＩＬ−１１と略す）、白血病
阻害因子（以下ＬＩＦと略す）、毛様体神経栄養因子
（以下ＣＮＴＦと略す）やオンコスタチンＭ（以下ＯＳ
Ｍと略す）等のサイトカインの刺激により活性化される
ｇｐ１３０（特開平１−２００２３０号明細書参照）
は、ＪＡＫ２やＴＹＫ２を活性化する。活性化をうけた
ＪＡＫ２やＴＹＫ２はさらにＳＴＡＴ(signal transduc
ers and activators of transcription)ファミリーの一
員であるＳＴＡＴ３のＣ末側のチロシン残基をリン酸化
する。リン酸化をうけたＳＴＡＴ３はホモまたはヘテロ
ダイマーを形成し、細胞質から核へ移行してＤＮＡの特
異的な配列に結合することにより転写を活性化すること
が知られている。しかし、ＳＴＡＴ活性化機序の全貌が
明らかにされているわけではない。

【０００３】ＳＳＩ−１（STAT-induced STAT inhibito
r-1 ）は、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＬＩＦ、顆粒球コロニ
ー刺激因子（以下Ｇ−ＣＳＦと略す）等のサイトカイン
によって発現誘導されるマウス由来の蛋白質であり、Ｓ
ＴＡＴ３により発現誘導され、ｇｐ１３０及びＳＴＡＴ
３のチロシンリン酸化を阻害することによりこれらの蛋
白質の活性化を阻害する、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ信号経路の
負のフィードバック調節の役割を担っている蛋白質であ
ることが報告された(Naka et al., Nature, vol 387, p
p924-929, 1997) 。

【０００４】ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＬＩＦ、Ｇ−ＣＳＦ
等のサイトカインにより発現誘導され、ＳＳＩ−１と同
様の働きを有する蛋白質として他に、ＳＳＩ−２〜ＳＳ
Ｉ−７（仲哲治ら，第２７回日本免疫学会総会・学術集
会プログラム(1997), P97 、池亀和博ら, 第２７回日本
免疫学会総会・学術集会プログラム(1997), P253等）、
ｍｍＳＯＣＳ−１、ｈｓＳＯＣＳ−１、ｒｒＳＯＣＳ−
１、ｍｍＳＯＣＳ−２、ｍｍＳＯＣＳ−３、ｍｍＣＩＳ
(R. Starr et al., Nature, vol 387, pp917-921, 199
7) 及びＪＡＢ(Takaho A. Endo et al., Nature, vol 3
87, pp921-924,1997) が報告されている。これらはＳＳ
Ｉ−１を含め、１８６〜２５７残基のアミノ酸配列から
構成され、核酸データーベースから推定されるアミノ酸
配列検索の解析によれば、これらの蛋白質分子のＮ末端
側領域におけるアミノ酸配列の相同性はやや低いもの
の、いずれの蛋白質分子も配列の中央部分にはサークホ
モロジー−２（ＳＨ２）領域を持ち、さらにＣ末端側領
域には相同性の高い領域（ＳＯＣＳ ｂｏｘ）を共通に
持っている。これらの知見より、上記一連の蛋白質は、
発現誘導される様式の類似性、蛋白質のアミノ酸配列レ
ベルから推定される構造的な類似性に基づいてＪＡＫ−
ＳＴＡＴ経路を調節するファミリーを形成していること
が明らかとなった。すなわち、１）サイトカイン（ひい
てはＳＴＡＴ）により誘導されること、２）ＳＴＡＴシ
グナルを抑制すること、３）配列に相同性を有する（前
述参照）こと、この３点が当該ファミリーの定義である
とされている（以下、その特性に基づいて、当該ファミ
リーをＳＳＩ（STAT-induced STAT inhibitor ）ファミ
リーという）。なかでもマウス由来のＳＳＩ−１、ＪＡ
ＢおよびｍｍＳＯＣＳ−１とラット由来のｒｒＳＯＣＳ
−１（それぞれ２１２個のアミノ酸配列より構成され
る）、およびヒト由来のｈｓＳＯＣ−１（２１１個のア
ミノ酸配列より構成される）はアミノ酸配列レベルでの
相同性が９５〜９９％と極めて高く、種をこえたアミノ
酸配列の保存が特徴的である。

【０００５】ＪＡＫ−ＳＴＡＴ系の細胞内情報伝達に関
わる調節機構の生理的役割をさらに深く解析するために
は、これを調節する物質であるＳＳＩファミリーの機能
解析が不可欠であり、また今後、ＩＬ−６及びＩＬ−４
の作用を制御する治療薬を開発するためにもＳＳＩファ
ミリーの生理的機序の解明が重要である。しかしなが
ら、ＳＳＩ−１をはじめ、ＳＳＩファミリーの生体内で
の存在量は極めて微量であり、大量のＳＳＩファミリー
を得るためには遺伝子工学的手法を用いる必要があり、
この遺伝子のクローニングによる発現、蛋白質の確認及
び精製の為にはＳＳＩファミリーをファミリー全体とし
て、またファミリーを構成する個々の蛋白質分子をそれ
ぞれ特異的に迅速に同定出来るモノクローナル抗体の開
発が望まれる。また、ＳＳＩファミリーと相互作用する
ＪＡＫファミリーおよびＴＹＫ２との作用機序を解析
し、一連の細胞内情報伝達系の調節を解明するために
も、迅速にＳＳＩファミリーを認識し、同定できるモノ
クローナル抗体の開発が望まれる。もし、ＳＳＩファミ
リーに対する種々のモノクローナル抗体が開発されたな
らば、ＩＬ−６に代表されるｇｐ１３０を介した細胞の
活性化及び細胞内情報伝達を抑制する生理的機能の解明
や、ＩＬ−６等の働きを抑制する治療薬開発の応用に不
可欠な材料を提供することが可能である。しかしなが
ら、ＳＳＩ−１をはじめ、ＳＳＩファミリーを特異的に
認識するモノクローナル抗体はこれまでのところ知られ
ていないのが現状である。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ＳＳ
Ｉファミリー、就中ＳＳＩ−１に特異的に親和性を有す
る種々のタイプのモノクローナル抗体の提供ならびに当
該モノクローナル抗体の用途を提供することにある。ま
た、本発明の別の目的は、当該モノクローナル抗体を産
生するハイブリドーマ細胞系を提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、種をこえてそのアミノ酸配列がよく保存されて
いることが知られているＳＳＩ−１のアミノ酸配列か
ら、既報の蛋白質とアミノ酸相同性の低い、当該ＳＳＩ
−１に特異的な配列を有する領域を選択し、さらにアミ
ノ酸配列から推定される蛋白質の構造解析により、上述
の領域の内、高度に親水性を有する領域を選択し、当該
領域のオリゴペプチドを免疫原とすることで、ＳＳＩ−
１を特異的に認識するモノクローナル抗体（以下、単に
抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体ともいう）を得ること
に成功し、当該モノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマ細胞系を確立し、さらに当該モノクローナル抗体
の用途を見い出した。すなわち本発明は以下のとおりで
ある。 (1) 以下の性質を有するＳＳＩファミリー蛋白質のう
ち、少なくとも１種の蛋白質に対して特異的に親和性を
有するモノクローナル抗体： １）ＳＴＡＴによりその発現が誘導される ２）ＳＴＡＴシグナルを抑制する ３）ｓｒｃホモロジー（ＳＨ２）領域を有する。 (2) ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有する
上記(1) 記載のモノクローナル抗体。 (3) ＳＳＩ−１蛋白質の４３番目のアミノ酸から６９番
目のアミノ酸までの領域に存在するエピトープを認識す
ることを特徴とする上記(2) 記載のモノクローナル抗
体。 (4) 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列内に存在す
るエピトープを認識することを特徴とする上記(2) 記載
のモノクローナル抗体。 (5) 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列の全部また
は一部を有する蛋白質に対して特異的に親和性を有する
上記(2) 記載のモノクローナル抗体。 (6) 受託番号がＦＥＲＭ Ｐ−１６４４５であるハイブ
リドーマにより産生される、上記(1) 〜(5) に記載のモ
ノクローナル抗体。 (7) 上記(1) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ。 (8) 受託番号がＦＥＲＭ Ｐ−１６４４５である上記
(7) 記載のハイブリドーマ。 (9) ＳＳＩファミリー蛋白質のうちの、少なくとも１種
の蛋白質の全部またはその一部からなるオリゴペプチド
で免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエローマ細胞株と融
合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩファミリー蛋白質の
うちの少なくとも１種の蛋白質に対して特異的に親和性
を有するモノクローナル抗体を産生する株をクローニン
グすることを特徴とするハイブリドーマの製造方法。 (10)ＳＳＩ−１蛋白質の全部またはその一部からなるオ
リゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエロー
マ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩ−１蛋
白質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗
体を産生する株をクローニングすることを特徴とするハ
イブリドーマの製造方法。 (11)配列表配列番号１のアミノ酸配列または配列表配列
番号１のアミノ酸配列において１乃至数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるオ
リゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエロー
マ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩ−１蛋
白質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗
体を産生する株をクローニングすることを特徴とするハ
イブリドーマの製造方法。 (12)上記(9) に記載の製造方法により製造されるハイブ
リドーマを培養し、該培養物からモノクローナル抗体を
取得することを特徴とする、ＳＳＩファミリー蛋白質の
少なくとも１種の蛋白質に特異的に親和性を有するモノ
クローナル抗体の製造方法。 (13)上記(10)または(11)に記載の製造方法により製造さ
れるハイブリドーマを培養し、該培養物からモノクロー
ナル抗体を取得することを特徴とする、ＳＳＩ−１蛋白
質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗体
の製造方法。 (14)上記(1) に記載のモノクローナル抗体と試料とを反
応させる工程を含む、試料中のＳＳＩファミリー蛋白質
のうちの少なくとも１種の蛋白質の測定方法。 (15)上記(2) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体と試料とを反応させる工程を含む、試料中のＳＳＩ
−１蛋白質の測定方法。 (16)上記(2) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体と試料とを反応させる工程を含む、配列表配列番号
１に記載のアミノ酸配列の全部または一部を有する蛋白
質の測定方法。 (17)上記(1) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体を含む試薬。

【０００８】

【発明の実施の形態】ＳＳＩ−１に特異的に親和性を有
することを特徴とする本発明のモノクローナル抗体（本
発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体）は、ヒト、マ
ウス、ラット等の動物の由来にかかわらずそのアミノ酸
配列が高度に保存されている領域を認識していることを
特徴としている。当該モノクローナル抗体が認識するＳ
ＳＩ−１とは遺伝子工学的に発現された蛋白質、または
サイトカイン等により細胞質内で発現誘導される天然型
のＳＳＩ−１のいずれかあるいは両方を意味する。本発
明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体が認識するエピト
ープは、該モノクローナル抗体がＳＳＩ−１を特異的に
認識し得る限り特に限定されないが、好ましくはＳＳＩ
−１の４３番目のアミノ酸から６９番目のアミノ酸まで
の領域（配列表配列番号１）内に存在している。該領域
は、ＳＳＩ−１のアミノ酸配列を、既報の蛋白質のアミ
ノ酸と比較した場合、アミノ酸相同性が低く、且つ構造
解析により高度に親水性を有すると想定される領域であ
る。

【０００９】また、本発明のモノクロナール抗体の別の
態様としては、配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列
の全部あるいは一部を有する蛋白質に特異的に親和性を
有するモノクローナル抗体が挙げられる。当該蛋白質と
しては、具体的には上述したように、マウス由来のＪＡ
ＢおよびｍｍＳＯＣＳ−１、ラット由来のｒｒＳＯＣＳ
−１およびヒト由来のｈｓＳＯＣＳ−１等が挙げられ、
アミノ酸配列レベルで極めて高い相同性を有する蛋白質
である。

【００１０】さらに本発明のモノクローナル抗体の別の
態様は、ＳＳＩファミリーに属する蛋白質のうち、少な
くとも１種に対して特異的に親和性を有するものであ
る。ここでＳＳＩファミリーは前述のとおり、１）ＳＴ
ＡＴによりその発現が誘導され、２）ＳＴＡＴシグナル
を抑制し、３）ｓｒｃホモロジー（ＳＨ２）領域を有す
る一連の蛋白質群を意味する。該ＳＳＩファミリーに属
する蛋白質としては、具体的には前述のものが挙げられ
るが、例えばＳＳＩ−１、ＳＳＩ−２、ＳＳＩ−３、Ｓ
ＳＩ−４、ＳＳＩ−５、ＳＳＩ−６およびＳＳＩ−７等
が挙げられる。当該抗体としては、ＳＳＩファミリーに
属する蛋白質群全てに特異的な親和性を有するもの、該
ファミリーに属する蛋白質の個々を、あるいは幾つかを
認識するもの等が挙げられる。

【００１１】本発明のモノクローナル抗体は、当分野で
通常実施されている方法により調製される。即ち、ＳＳ
Ｉ−１ならびにＳＳＩファミリー、ＳＳＩファミリーに
属する各蛋白質に特異的に親和性を有する抗体産生細胞
を、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを形成さ
せ、該ハイブリドーマをクローン化し、各蛋白質に特異
的な抗体を産生するクローンを選択することによって製
造される。

【００１２】抗原としては目的とする特異性によって異
なるが、ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有
する抗体を得る場合には、ＳＳＩ−１の全部またはその
一部、ＳＳＩ−１の４３番目のアミノ酸から６９番目の
アミノ酸までの領域を有するオリゴペプチド等が用いら
れる。特異性を高めるためには、よりＳＳＩ−１に特異
的な配列であるＳＳＩ−１の４３番目のアミノ酸から６
９番目のアミノ酸までの領域のオリゴペプチドを用いる
ことが好ましい。又、抗原性を保持している限りは、当
該抗原は、そのアミノ酸配列において、１乃至数個のア
ミノ酸の欠失や置換、若しくは付加といった変更がなさ
れていてもよい。

【００１３】ＳＳＩファミリーに対して特異的に親和性
を有する抗体を得る場合には、該ファミリーに属する各
蛋白質の間で極めて高い相同性を有するアミノ酸配列部
分が抗原として用いられる。具体的には、例えば各蛋白
質分子の中央部分に存在するＳＨ２領域や、Ｃ末端側領
域のＳＯＣＳ ｂｏｘが用いられる。又、ＳＳＩファミ
リーに属する各蛋白質分子を個々に、あるいはその幾つ
かに特異的な親和性を有する抗体を得る場合も上述と同
様に、目的とする蛋白質分子に特徴的な配列を有する領
域を選択し抗原として用いることができる。

【００１４】当該抗原は遺伝子工学的に、あるいは選択
した部分的なアミノ酸配列に基づいて合成することによ
っても調製できる。感作抗原としては、得られたＳＳＩ
−１等の蛋白質分子あるいは選択した部分的なアミノ酸
配列に基づいたオリゴペプチドをリン酸緩衝液（ＰＢ
Ｓ）等の適当な緩衝液中に溶解、あるいは懸濁したもの
が用いられる。抗原溶液は通常抗原物質の量として５０
〜５００μｇ／ｍｌ程度の濃度に調製すればよい。ま
た、ペプチド抗原等、それだけでは抗原性が低い場合
は、アルブミンやキーホールリンペットヘモシアニン等
の適当なキャリヤータンパク質に架橋して用いることが
好ましい。該抗原を免疫感作させる動物としてはマウ
ス、ラット、ウマ、ヤギ、ウサギなどが例示される。好
ましくはマウス、より好ましくはＢＡＬＢ／ｃマウスで
ある。このとき、被免疫動物の抗原への応答性を高める
ため、当該抗原溶液をアジュバントと混合して投与する
ことができる。本発明において用いられるアジュバント
としては、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）、フ
ロイント不完全アジュバント（ＦＩＡ）、Ｒｉｂｉ（Ｍ
ＰＬ）、Ｒｉｂｉ（ＴＤＭ）、Ｒｉｂｉ（ＭＰＬ＋ＴＤ
Ｍ）、百日咳ワクチン(Bordetella pertussis vaccin
e)、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、アルミニウムアジ
ュバント（ＡＬＵＭ）、およびこれらの組合せが例示さ
れるが、初回免疫時にＦＣＡ、追加免疫時にＦＩＡを使
用する組み合わせが特に好ましい。

【００１５】免疫方法は、使用する抗原の種類やアジュ
バント混合の有無等により、注射部位、スケジュールな
どを適宜変化させることができるが、例えば、被免疫動
物としてマウスを用いる場合は、アジュバント混合抗原
溶液０．０５〜１ｍｌ（抗原物質１０〜２００μｇ）を
腹腔内、皮下、筋肉内または（尾）静脈内に注射し、初
回免疫から約４〜１４日毎に１〜４回追加免疫を行い、
さらに約１〜４週間後に最終免疫を行う。該抗原溶液を
アジュバントを使用せずに投与する場合には、抗原量を
多くして腹腔内注射してもよい。抗体価は追加免疫の約
５〜６日後に採血して調べる。抗体価の測定は、後述の
抗体アッセイに準じ、通常行われる方法で行うことがで
きる。最終免疫より約３〜５日後、該免疫動物から脾細
胞を分離して抗体産生細胞を得る。

【００１６】骨髄腫細胞としては、マウス、ラット、ヒ
ト等由来のものが使用される。例えばマウスミエローマ
Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８−Ｕ１、Ｐ３
ＮＳ１−Ａｇ４、ＳＰ２／０−Ａｇ１４、Ｐ３Ｘ６３−
Ａｇ８・６５３等が例示されるが、抗体産生細胞と骨髄
腫細胞とは同種動物、特に同系統の動物由来であること
が好ましい。骨髄腫細胞は凍結保存するか、ウマ、ウサ
ギまたはウシ胎児血清を添加した一般的な培地で継代し
て維持することができる。細胞融合には対数増殖期の細
胞を用いるのが好ましい。

【００１７】抗体産生細胞と骨髄腫細胞とを融合させて
ハイブリドーマを形成させる方法としては、ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）を用いる方法、センダイウイル
スを用いる方法、電気融合装置を用いる方法などが例示
される。例えばＰＥＧ法の場合、約３０〜６０％のＰＥ
Ｇ（平均分子量１０００〜６０００）を含む適当な培地
または緩衝液中に脾細胞と骨髄腫細胞を１〜１０：１、
好ましくは５〜１０：１の混合比で懸濁し、温度約２５
〜３７℃、ｐＨ６〜８の条件下で、約３０秒〜３分間程
度反応させればよい。反応終了後、ＰＥＧ溶液を除いて
培地に再懸濁し、セルウェルプレート中に播種して培養
を続ける。

【００１８】融合操作後の細胞を選択培地で培養して、
ハイブリドーマの選択を行う。選択培地は、親細胞株が
死滅し、融合細胞のみが増殖し得る培地であり、通常ヒ
ポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培
地が使用される。ハイブリドーマの選択は、通常融合操
作の１〜７日後に、培地の一部、好ましくは約半量を選
択培地と交換することによって開始し、さらに２、３日
毎に同様の培地交換を繰り返しながら培養することによ
り行う。顕微鏡観察によりコロニーが生育しているウェ
ルを確認する。

【００１９】生育しているハイブリドーマが所望の抗体
を産生しているかどうかを知るには、培養上清を採取し
て抗体アッセイを行えばよい。抗体価は、例えば固相化
したＳＳＩ−１蛋白質に該上清を加えて反応させ、さら
に蛍光物質、酵素、ＲＩ等で標識した二次抗体（抗グロ
ブリン、抗ＩｇＧ、抗ＩｇＭ血清等）を反応させて測定
することができる。このようにして適切な抗体を産生し
ているウェルを得る。さらに限界希釈法、軟寒天法、蛍
光励起セルソーターを用いた方法等により単一クローン
を分離する。例えば限界希釈法の場合、ハイブリドーマ
コロニーを１細胞／ウェル前後となるように培地で段階
希釈し、培養することにより目的とするモノクローナル
抗体を産生するクローンを単離することができる。得ら
れた抗体産生ハイブリドーマは、約１０％（ｖ／ｖ）ジ
メチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）あるいはグリセリン等
の凍結保護剤の共存下に凍結させて−７０〜−１９６℃
で保存すると、約半年〜半永久的に保存可能である。細
胞は用時３７℃前後の恒温槽中で急速融解して使用す
る。凍結保護剤の細胞毒性が残存しないようによく洗浄
してから使用するのが望ましい。

【００２０】上記の方法で得られる本発明のモノクロー
ナル抗体は、具体的には、例えばマウス由来かつＩｇＧ
クラスのモノクローナル抗体であって、ＳＩ−１２６２
Ｂと命名されたものである。ハイブリドーマが産生する
抗体のサブクラスを調べるためには、該ハイブリドーマ
を一般的な条件で培養し、その培養上清中に分泌された
抗体のクラスを市販の抗体クラス・サブクラス判定用キ
ットなどを用いて分析することにより知ることができ
る。

【００２１】本発明のモノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマのうち、モノクローナル抗体ＳＩ−１２６
２Ｂを産生するハイブリドーマＳＩ−１２６２Ｂ株は本
発明者らによって新たに分離され、具体的には、ブタペ
スト条約に基づく国際寄託機関である通商産業省工業技
術院生命工学工業技術院（〒３０５ 茨城県つくば市東
１丁目１番３号）に１９９７年９月２５日付けで国内寄
託され、受託番号としてＦＥＲＭ Ｐ−１６４４５が付
されている。

【００２２】モノクローナル抗体の取得は、その必要量
やハイブリドーマの性状等によってマウス腹水から取得
するか、細胞培養によるか適宜選択できる。マウス腹腔
内で増殖可能なハイブリドーマは腹水から数ｍｇ／ｍｌ
の高濃度で得ることができる。インビボで増殖できない
ハイブリドーマは細胞培養の培養上清から取得する。細
胞培養によれば、抗体産生量はインビボより低いが、腹
腔内に含まれる免疫グロブリンや他の夾雑物質の混入が
少なく、精製が容易であるという利点がある。

【００２３】マウス腹腔内から取得する場合、例えば、
予めプリスタン（２，６，１０，１４−テトラメチルペ
ンタデカン）等の免疫抑制作用を有する物質を投与した
ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内へハイブリドーマ（約１０
⁶ 個以上）を移植し、約１〜３週間後に貯留した腹水を
採取する。異種ハイブリドーマ（例えばマウスとラッ
ト）の場合には、ヌードマウス、放射線処理マウスを使
用することが好ましい。

【００２４】一方、細胞培養上清から抗体を取得する場
合、例えば、細胞維持に用いられる静置培養法の他に、
高密度培養方法あるいはスピンナーフラスコ培養方法な
どの培養法を用い、当該ハイブリドーマを培養し抗体を
含有する培養上清を得る。血清には、他の抗体やアルブ
ミン等の夾雑物が含まれ、抗体精製に不便な点が多いの
で培養液への添加は少なくすることが望ましい。

【００２５】腹水、培養上清からのモノクローナル抗体
の精製は、免疫グロブリンの精製法として従来既知の硫
酸アンモニウムや硫酸ナトリウムを用いた塩析による分
画法、ポリエチレングリコール分画法、エタノール分画
法、ＤＥＡＥイオン交換クロマトグラフィー法、ゲル濾
過法等を応用することで、容易に達成される。さらに、
本発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体が、マウスＩ
ｇＧ抗体である場合には、プロテインＡ結合担体あるい
は抗マウスイムノグロブリン結合担体を用いたアフィニ
ティークロマトグラフィーにより精製することが可能で
あり、簡便である。

【００２６】本発明の新規モノクローナル抗体を用いて
試料中のＳＳＩ−１蛋白質をはじめＳＳＩファミリーを
迅速に測定することが可能である。測定方法としては、
通常当分野で行われる各種のイムノアッセイが利用され
得る。該方法は検体と該抗体とを反応させ、形成される
免疫複合体を測定する工程を含むものであれば特に限定
されず、沈降反応や凝集反応を光学的に検出する免疫比
濁法や、分別検出の容易な物質で標識した抗体を用いる
標識化免疫測定法などがある。後者には、免疫複合体の
検出に標識としてＲＩを用いるラジオイムノアッセイ、
アルカリホスファターゼやパーオキシダーゼ等の酵素を
用いるエンザイムイムノアッセイ、蛍光物質を用いる蛍
光イムノアッセイなどが含まれる。標識する対象によっ
て、検出すべき抗体を直接標識する直接法の他、検出す
べき抗体の抗体つまり二次抗体を標識する間接法などが
ある。間接法を用いる場合、例えば本発明の抗ＳＳＩ−
１モノクローナル抗体がマウスＩｇＧモノクローナル抗
体である場合、二次抗体としては例えば抗マウスＩｇＧ
ポリクローナル抗体等を使用すればよい。該二次抗体の
調製法、並びに抗体の蛍光物質、ＲＩおよび酵素等によ
る標識は、当分野で慣用の方法を用いて行うことができ
る。また、当該測定法にビオチン−アビジン（又はスト
レプトアビジン）の反応を利用する方法も可能であり、
高い感度が要求される測定の場合には好ましく採用され
る。当該方法としては、例えばビオチンで標識した抗Ｓ
ＳＩ−１モノクローナル抗体と蛍光物質等で標識したス
トレプトアビジンとを組み合わせて用いるものが挙げら
れる。抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体のビオチンでの
標識、ストレプトアビジンの蛍光物質等での標識は、当
分野で通常行われる方法を用いて行うことができ、例え
ば蛍光物質等で標識したストレプトアビジンは商業的に
も入手可能である。

【００２７】本発明の測定方法により測定される検体は
特に制限はないが、ＬＩＦ等のサイトカインでＳＳＩ−
１をはじめＳＳＩ−１ファミリーを発現誘導した細胞や
当該蛋白質を遺伝子工学的に強制発現させた細胞などが
例示される。当該測定は細胞、組織レベルで測定可能で
ある他、当該細胞、組織からの抽出物を用いても測定可
能である。細胞、組織レベルでの測定としては光学およ
び電子顕微鏡等により観察する免疫組織化学や免疫細胞
化学を利用することにより行われる。細胞、組織からの
抽出物を用いた測定としては、免疫沈降法や電気泳動法
等を利用したイムノブロット法（ウエスタンブロット
法）等を利用することにより行われる。これらの測定方
法は通常当分野で行われている方法を適用し得る。

【００２８】さらに本発明においては、本発明の新規モ
ノクローナル抗体を試薬に含めることができる。ここで
いう試薬には、例えば試料中のＳＳＩ−１をはじめとし
たＳＳＩファミリーの検出用試薬、当該蛋白質に密接に
関与する分子の検出用試薬、当該蛋白質の精製の為の試
薬等が挙げられる。

【００２９】ＳＳＩ−１をはじめとしたＳＳＩファミリ
ーの検出用試薬としては、測定原理として直接法を用い
る場合、該試薬は、例えばＲＩ、酵素、蛍光物質等で標
識された該モノクローナル抗体を適当な緩衝液中に溶解
した溶液の他、標識検出用試薬、ブロッキング液、洗浄
液等から構成される。洗浄液としては、ドデシル硫酸ナ
トリウム（ＳＤＳ）やポリオキシエチレンソルビタンモ
ノラウレートなどのイオン性または非イオン性界面活性
剤あるいはゼラチン等を含有するＰＢＳ等の緩衝液（さ
らにアジ化ナトリウムを含有してもよい）が、ブロッキ
ング液としてはウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）や非イオ
ン性界面活性剤（例えばポリオキシエチレンソルビタン
モノラウレート等）などを含有するＰＢＳ等の緩衝液
（さらにアジ化ナトリウムを含有してもよい）が例示さ
れる。バックグラウンドの高い試料を測定する場合など
には、ブロッキング液はさらにヤギ等の動物由来血清を
含んでいることが好ましい。一方、間接法を用いる場合
には、該試薬は、例えば未標識の該モノクローナル抗体
および該モノクローナル抗体に特異性を有する、ＲＩ、
酵素、蛍光物質等で標識された二次抗体、ブロッキング
液、洗浄液等から構成される。さらに、電気泳動法等と
組み合わせて測定を行う場合、該電気泳動法に使用する
試薬等を共に梱包しておくことも可能である。蛍光顕微
鏡による蛍光測定を行う為の試薬には、試料（細胞や組
織など）の封入剤を共に梱包しておくこともでき、かか
る封入剤としては、グリセロール含有ＰＢＳ、ポリビニ
ルアルコール含有ＰＢＳ等が好ましく例示される。

【００３０】ＳＳＩ−１をはじめとしたＳＳＩファミリ
ーの精製用の試薬としては、例えば当該モノクローナル
抗体の他に、当分野で一般的に行われているアフィニテ
ィー精製の方法に従って、必要なものを含めることがで
きる。具体的には、本発明のモノクローナル抗体の他、
当該モノクローナル抗体を固定化する場合にはその為の
担体や試薬、洗浄用や抗原溶出用の緩衝液等が挙げられ
る。

【００３１】ＳＳＩ−１をはじめとしたＳＳＩファミリ
ーに密接に関与する分子の検出用試薬としては、目的と
する分子の性質によっても異なるが、例えば、免疫沈降
法を利用した検出法に用いられる試薬が挙げられる。具
体的には、本発明のモノクローナル抗体の他、当該モノ
クローナル抗体を固定化する為の担体、洗浄用の緩衝液
等が挙げられ、沈降後の当該分子及びＳＳＩ−１（ＳＳ
Ｉファミリー）の検出には通常の電気泳動用試薬や前述
のウエスタンブロット法で用いる試薬と同様のものが例
示される。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、これによって本発明の範囲をなんら制限するも
のではない。 実施例１：ハイブリドーマならびに抗ＳＳＩ−１モノク
ローナル抗体の作製ハイブリドーマの作製方法 （１）マウス ５乃至８週令の近交系ＢＡＬＢ／ｃ系マウス雌を、動物
飼育チェンバー内（２３±１℃、湿度７０％）で、標準
ペレットを使用して飼育し、任意に給水して飼育した。

【００３３】（２）免疫原の調製 ＳＴＡＴによりその発現が誘導され、ＳＴＡＴシグナル
を抑制し、かつｓｒｃホモロジー（ＳＨ２）領域を有す
ることが既に知られているＳＳＩ−１蛋白質のアミノ酸
配列から、既報の蛋白質とアミノ酸相同性の低い、当該
ＳＳＩ−１に特異的な配列を有し、且つアミノ酸配列か
ら推定される蛋白質の構造解析により、高度に親水性を
有すると推定される領域（４３−６９残基）を選択した
（以下ＳＳＩ−１−Ｉと命名する）。２７ｍｅｒのＳＳ
Ｉ−１−ＩのオリゴペプチドをＦｍｏｃ法によりペプチ
ド合成装置４２１Ａ（アプライドバイオシステムズ社
製）を用いて合成した。調製したオリゴペプチドはオリ
ゴＴ−１２０ＯＤＳカラム（ＴＯＳＯ社製）を用いた逆
相ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥した。精製したオリ
ゴペプチドを乾燥重量として２ｍｇ秤取り結合用緩衝液
（ピアス社製）に溶解し、２ｍｇのマレイミド化したキ
ーホールリンペットヘモシアニン（ピアス社製、以下Ｋ
ＬＨと略す）と結合させた。結合の後、未反応のオリゴ
ペプチドをＧ−２５カラム（１×１０ｃｍ）により除去
し、ＫＬＨ結合ＳＳＩ−１−Ｉを分離し、さらにリン酸
緩衝生理食塩液ｐＨ７．０（ＰＢＳ）でＫＬＨ当たりの
濃度で１ｍｇ／ｍｌに調製して免疫原とした。

【００３４】（３）免疫方法 上記（２）で調製した抗原、すなわちＫＬＨ結合ＳＳＩ
−１−Ｉを１００μｇ／０．５ｍｌとなる様にＰＢＳで
調製し、同量（０．５ｍｌ）のフロイント完全アジュバ
ント（Freund's complete adjuvant) （Ｄｉｆｃｏ社
製）を混合して乳化した。この乳化状の抗原を５週令の
４匹の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔に１匹あたり２０
０μｌ投与した。さらに２週間毎に、ＧＥＲＢＵＶＡＮ
Ｔ（ＧＥＲＢＵ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｋ，ＧｍｂＨ，Ｄ
−６９０１ Ｇｕｉｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ製）で１
００μｇ／ｍｌとなるように調製した上記抗原をマウス
あたり２０μｇずつ４回投与した。さらに１ヶ月後、Ｇ
ＥＲＢＵＶＡＮＴで１００μｇ／ｍｌとなるように調製
した上記抗原を同様に追加免疫した後、マウスの抗体価
を測定した。抗体価の高いマウスはさらに２週間後にＰ
ＢＳで１００μｇ／ｍｌに調製したＫＬＨ結合ＳＳＩ−
１−Ｉを、マウス尾静脈より注射して最終免疫とした。
尚、抗体価の測定は、当該抗原で免疫したマウスの血清
を用いて、後述のスクリーニングの方法に準じて行っ
た。

【００３５】（４）細胞融合 最終免疫から３日後にＢＡＬＢ／ｃマウスの摘脾を行
い、ＥＭＥＭ培養液中で脾細胞を浮遊させて、脾細胞の
浮遊液を作製した。ついで、脾細胞をＥＭＥＭ培養液で
４回洗浄した後、細胞数を算定し、５．９×１０⁸ 個の
脾細胞を得た。細胞融合は、２−アミノ−６−オキシ−
８−アザプリン（８−アザグアニン［2-amino-6-oxy-8-
azaprine] ）耐性のＢＡＬＢ／ｃマウス由来骨髄腫培養
細胞株（Ｐ３−Ｘ６３−Ａｇ８・６５３、以下Ｘ６３細
胞ともいう）を親細胞株として用いた。Ｘ６３細胞は、
非働化した牛胎児血清（fetal calf serum: ＦＣＳ）１
０％を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液（２０μｇ／ｍ
ｌ、８−アザグアニン含有）で継代培養し、細胞融合の
３日前より８−アザグアニンを含有しない１０％ＦＣＳ
含有ＲＰＭＩ−１６４０培養液でさらに培養し、対数増
殖期の細胞を用いた。Ｘ６３細胞はＲＰＭＩ−１６４０
培養液で３回洗浄した後、細胞数を算定し、７×１０⁷
個の生細胞を得た。ＲＰＭＩ−１６４０培養液で、ポリ
エチレングリコール−４０００が５０（ｗ／ｖ）％濃度
となるように溶解し、上記の脾細胞とＸ６３細胞の比が
１０：１となるように混合し、公知の方法（ケラーとミ
ルスタイン共著，Nature, 第256 巻, 495-497 頁, 1975
年、Eur. J. Immunol. 第6 巻, 511-519 頁, 1976年）
に準じて細胞融合を行った。その後、１０％ＦＣＳを添
加したＲＰＭＩ−１６４０培養液に、１×１０^-4Ｍのヒ
ポキサンチン、４×１０^-7Ｍのアミノプテリン及び１．
６×１０^-5Ｍのチミジンを含有するＨＡＴ選択培地に、
脾細胞が２．０×１０⁶ 個／ｍｌとなるように浮遊させ
た。ついで、この細胞浮遊液の５０μｌを、９６ウエル
のマイクロタイタープレートの各ウエルに分注した後、
ＣＯ₂ 無菌培養器において温度３７℃、湿度９５％、８
％のＣＯ₂ 雰囲気下で培養を行った。培養開始後、１日
目と２日目にＨＡＴ培地を各ウエルに１滴ずつ、また培
養開始後７日目と９日目にＨＡＴ培地を各ウエルに２滴
ずつ添加してさらに培養を行った。その後、ＨＡＴを含
まない培養液で育成させ、約１０〜２週間後に、目的の
抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体を産生するクローン
を、各種合成ペプチド（後述）を固相に吸着させたマイ
クロプレートを用いたエライザ法によるスクリーニング
によって検索した。

【００３６】（５）スクリーニング 上記ハイブリドーマ細胞の培養上清を用いて、各種合成
ペプチドエライザ法により行った。即ち、ハイブリドー
マ細胞系の培養上清とオブアルブミン（以下ＯＶＡと略
す）結合ＳＳＩ−１−Ｉ抗原固定化エライザプレートと
の反応により選択した。尚、非特異オリゴペプチド固相
化エライザプレートに反応する非特異反応性クローンを
除去し、ＳＳＩ−１−Ｉ抗原にのみ特異的に反応するク
ローンを選別した。実施例１の（２）免疫原の調製の項
に記載の方法に準じて、ＳＳＩ−１−Ｉ合成オリゴペプ
チドおよび非特異合成オリゴペプチドとマレイミド化し
たＯＶＡとを結合させた。抗原液として、ＯＶＡ結合Ｓ
ＳＩ−１−Ｉ合成ペプチドおよびＯＶＡ結合非特異合成
ペプチドをそれぞれ２μｇ／ｍｌの濃度に調製し、各
々、１ウエル当たり５０μｌずつマイクロタイタープレ
ートに添加し、一晩吸着させた後、Ｔｗｅｅｎ−２０を
０．０５％含むリン酸緩衝液（以下洗浄液と略す）で３
回洗浄し、さらに１％ＢＳＡを含むリン酸緩衝液でブロ
ッキングし各ＯＶＡ結合合成ペプチド抗原固相化プレー
トを調製した。上記で得られたハイブリドーマ細胞系の
培養上清を、当該固相化プレートに添加し、室温で１時
間反応させた後、洗浄液で３回洗浄し、さらにホースラ
ディッシュペルオキシダーゼ（以下ＨＲＰと略す）標識
した抗マウスイムノグロブリン抗体（ヤギ由来）を室温
で３０分反応させた。この反応の後、洗浄液で４回洗浄
し、基質液（ｏ−フェニレンジアミン２ｍｇ／ｍｌ及び
４ｍＭ Ｈ₂ Ｏ₂ を含む）を室温で５分間反応させた
後、この反応を２Ｎ硫酸で停止させ、主波長４９２ｎ
ｍ、副波長６９０ｎｍでエライザ用プレートリーダーに
て吸光度を測定した。非特異合成オリゴペプチドを固相
化したエライザプレートには反応せず、ＳＳＩ−１−Ｉ
抗原を固相化したエライザプレートに特異的に反応する
ハイブリドーマ細胞系を選別し、当該ハイブリドーマよ
り培養上清として抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体を得
た。

【００３７】ＳＳＩ−１−Ｉ配列内およびその近辺で、
領域の異なる各種オリゴペプチドを調製し、得られた抗
ＳＳＩ−１モノクローナル抗体の反応するエピトープ解
析を上記と同様にＥＬＩＳＡ法により実施した。すなわ
ち、ＳＳＩ−１−Ｉのアミノ酸配列内であるＳＳＩ−１
のアミノ酸配列の４３番目から５３番目のアミノ酸の１
１残基（以下、ＳＳＩ−１−Ａとする）、５１番目から
６５番目のアミノ酸の１５残基（以下、ＳＳＩ−１−Ｂ
とする）さらにＳＳＩ−１のアミノ酸配列の４８番目か
ら７０番目のアミノ酸の２３残基（以下、Ｎｏ．１０−
１−ＡＰとする）のそれぞれのオリゴペプチドを調製し
マレイミド化したＯＶＡと結合させ、各々ＯＶＡ結合オ
リゴペプチドを調製した。（尚、ＳＳＩ−１−Ｂおよび
Ｎｏ．１０−１−ＡＰについてはキャリアーと結合させ
る為にＮ末端側にシステイン残基をつけた状態で調製し
た。） さらに、２μｇ／ｍｌの濃度に調製した各々のＯＶＡ結
合−オリゴペプチドを１ウエル当たり、５０μｌずつマ
イクロタイタープレートに入れて一晩吸着させた後、洗
浄液で３回洗浄し、さらに１％ＢＳＡを含むＰＢＳでブ
ロッキングし各種ＯＶＡ結合オリゴペプチド（ＳＳＩ−
１−Ｉ、ＳＳＩ−１−Ａ、ＳＳＩ−１−Ｂ及びＮｏ．１
０−１−ＡＰ）抗原固相化プレートを調製した。上記で
スクリーニングした抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体産
生ハイブリドーマ細胞系の培養上清を、各ＯＶＡ結合オ
リゴペプチド固相と室温で１時間反応させた後、洗浄液
で３回洗浄し、さらにＨＲＰ標識した抗マウスイムノグ
ロブリン抗体（ヤギ由来）を室温で３０分間反応させ
た。この反応の後、洗浄液で４回洗浄し、ｏ−フェニレ
ンジアミン基質液と反応させた後、この反応を２Ｎ硫酸
で停止させ、主波長４９２ｎｍ、副波長６９０ｎｍでエ
ライザ用プレートリーダーにて吸光度を測定した。

【００３８】モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細
胞系の樹立 上記の検討より、各種合成ペプチドエライザ法を用いた
スクリーニング法によりＳＳＩ−１蛋白質の４３番目か
ら６９番目までの合成オリゴペプチドＳＳＩ−１−Ｉに
反応するハイブリドーマ細胞系クローンが４０株スクリ
ーニングされた。このうち、オリゴペプチドＳＳＩ−１
−Ａ（４３−５３残基）に陽性のクローンが１４クロー
ン、オリゴペプチドＳＳＩ−１−Ｂ（５１−６５残基）
に陽性のクローンが２１クローン、さらにオリゴペプチ
ドＮｏ．１０−１−ＡＰ（４８−７０残基）およびＳＳ
Ｉ−１−Ｉと両方に反応し、ＳＳＩ−１−Ａ及びＳＳＩ
−１−Ｂに反応しないクローン、５クローンを選んだ。
即ち、表１に示す様に、（１）ＳＳＩ−１−Ａ（４３−
５３残基）のオリゴペプチドに反応するクローン２１
株、（２）ＳＳＩ−１−Ｂ（５１−６５残基）のオリゴ
ペプチドに反応するクローン１４株、（３）ＳＳＩ−１
分子の６５−７０残基のオリゴペプチドに反応するクロ
ーン５株、の反応するアミノ酸配列を互いに異にする３
グループのモノクローナル抗体を得るに至った。

【００３９】マウスイムノグロブリンサブクラスの同定 上記、クローニングにより単一クローンとして得られた
ハイブリドーマ細胞系の産生するモノクローナル抗体の
マウスイムノグロブリンサブクラスを決定した。マウス
イムノグロブリンサブクラスの同定には、各ハイブリド
ーマ細胞系の培養上清を用い、ザイメッド（Ｚｙｍｅ
ｄ）社製ＭＯＮＯＡｂ ｔｙｐｉｎｇ ｋｉｔを用い
た。その結果を表１に示した。

【００４０】

【表１】

【００４１】以下、実施例１で得られた抗ＳＳＩ−１モ
ノクローナル抗体を用いて、ＳＳＩ−１の検出への応用
例を示す。当該モノクローナル抗体の標的となるＳＳＩ
─１蛋白質は、ＳＴＡＴによりその発現が誘導され、Ｓ
ＴＡＴシグナルを抑制し、且つｓｒｃホモロジー（ＳＨ
２）領域を有する蛋白質であり、ＳＳＩファミリーに属
する。又、以下に示す実施例で用いた抗ＳＳＩ−１モノ
クローナル抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）は、本発明におい
て得られたモノクローナル抗体の代表例を示すものであ
って、当クローンに限定されるものではない。

【００４２】実施例２：ウエスタンブロット法によるＳ
ＳＩ−１蛋白質の検出 ＳＳＩ−１蛋白質を遺伝子工学的に強制発現させた細胞
を用い、同時に発現させたＪａｋ２またはＴｙｋ２蛋白
質とともにＳＳＩ−１蛋白質を共沈させ、当該発現蛋白
質に対する本発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体の
結合活性をウエスタンブロット法にて確認する実験を実
施した。

【００４３】１×１０⁶ 個のＣＯＳ７細胞に、１０μ
ｇのＳＳＩ−１ ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔ
ｏｒ （S. Mizushima and S. Nagata, pEF-BOS, a pow
erful mammalian expression vector, Nucleic Acid Re
search, p5322, vol.18, No.17, 1990) のみ、２０μ
ｇのＪａｋ２ ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏ
ｒのみ、および１０μｇのＳＳＩ−１ ｃＤＮＡ／Ｐ
ＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏｒと２０μｇのＪａｋ２ ｃ
ＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏｒ、または１０μ
ｇのＳＳＩ−１ ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔ
ｏｒと２０μｇのＴｙｋ２ ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ
ｖｅｃｔｏｒを同時にそれぞれリン酸カルシウム法で
遺伝子導入した(Naka et al., Nature, vol 387, pp924
-929, 1997) 。７２時間後、細胞を集め、上清をできる
限り除去し、１ｍｌの細胞溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１
％（ｖ／ｖ） Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、３０ｍＭ Ｎ
ａ₄ Ｐ₂ Ｏ₇ 、５０ｍＭ ＮａＦ、１ｍＭ ｏｒｔｈｏ
ｖａｎａｄａｔｅ）でよく懸濁した後、氷上で３０分間
静置する。１５，０００ｒｐｍ、２０分間遠心後、上清
を別のチューブに移し、１μｇの抗Ｊａｋ２抗体または
抗Ｔｙｋ２抗体（サンタクルズ バイオテクノロジー社
製）を添加し、４℃で２４時間インキュベートした。さ
らに５０μｌの５０％Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ（ｖ／ｖ）を加え、４時間インキュベートし
た。７，０００ｒｐｍ、２０分間遠心後、上清をすて
て、１ｍｌの細胞溶解緩衝液で４回洗浄した後、上清を
できるだけ除去し、５０μｌのＳＤＳ処理液（６０ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ６．８、１０％（ｖ／ｖ）グ
リセロール、２％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、６５０ｍＭ β−
メルカプトエタノール、０．００２％（ｗ／ｖ）ブロモ
フェノールブルー）を加え攪拌後、９６℃で３分間煮沸
した。煮沸処理後の混合液をＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ドゲルにて電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）し、ゲルから
ニトロセルロースメンブレンに泳動分画した蛋白質を転
写した。このメンブレンをブロッキング緩衝液（５％
（ｗ／ｖ）スキムミルク／ＰＢＳ）にて、室温で３０分
間ブロッキング処理した。その後、当該メンブレンを、
１μｇ／ｍｌに希釈した抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体（ＳＩ−１２６２Ｂ）で、１時間、室温でインキュベ
ートした。さらに、このメンブレンを１５分間１回、５
分間２回洗浄し、２次抗体（ホースラディッシュペルオ
キシダーゼ（ＨＲＰ）標識した抗マウスイムノグロブリ
ンＧ抗体）で、室温、３０分間インキュベートした。さ
らに洗浄液にて、このメンブレンを１５分間１回、５分
間２回洗浄し、エンハンストケミルミネッセンス（ＥＣ
Ｌ）検出キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）で検出した。
Ｊａｋ２と共沈させた場合の結果を図１に、Ｔｙｋ２と
共沈させた場合の結果を図２に示す。（図１、２の上
段）

【００４４】また、１×１０⁶ 個のＣＯＳ７細胞に、上
記〜の発現ベクターをそれぞれリン酸カルシウム法
で遺伝子導入した後、７２時間培養した。培養後、細胞
を集め、上清をできる限り除去した後、５０μｌの細胞
溶解緩衝液を添加して細胞を可溶化し、さらに５０μｌ
のＳＤＳ処理液を加え攪拌後、９６℃で３分間煮沸し
た。煮沸処理後の混合液をＳＤＳ−ポリアクリルアミド
ゲルにて電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）し、上記と同様
にしてニトロセルロースメンブレンに泳動分画した蛋白
質を転写した後、ブロッキング緩衝液にて、室温で３０
分間ブロッキング処理した。その後、当該メンブレンを
抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）
で１時間、室温でインキュベートした。さらに、このメ
ンブレンを１５分間１回、５分間２回洗浄し、２次抗体
（ＨＲＰ標識した抗マウスイムノグロブリンＧ抗体）
で、室温、３０分間インキュベートした。さらに洗浄液
にて、このメンブレンを１５分間１回、５分間２回洗浄
し、エンハンストケミルミネッセンス（ＥＣＬ）検出キ
ット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）で検出した（図１、２の
下段）。

【００４５】実施例３：抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体によるＳＳＩ−１蛋白質の免疫沈降法によるＳＳＩ−
１蛋白質の検出。 実施例２に記載した方法に準じて、１×１０⁶ 個のＣＯ
Ｓ７細胞に、１０μｇのＳＳＩ−１ ｃＤＮＡ／ＰＥ
Ｆ−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏｒのみ、２０μｇのＪａｋ２
ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏｒのみ、およ
び１０μｇのＳＳＩ−１ ｃＤＮＡ／ＰＥＦ−ＢＯＳ
ｖｅｃｔｏｒと２０μｇのＪａｋ２ｃＤＮＡ／ＰＥＦ
−ＢＯＳ ｖｅｃｔｏｒとを同時にそれぞれリン酸カル
シウム法で遺伝子導入した。７２時間後、細胞を集め、
上清をできる限り除去し、１ｍｌの細胞溶解緩衝液でよ
く懸濁した後、氷上で３０分静置し、１５，０００ｒｐ
ｍ、２０分間遠心分離し沈澱させた後、上清を別のチュ
ーブに移し、１μｇの抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体
（ＳＩ−１２６２Ｂ）を添加し、４℃で２４時間インキ
ュベートした。さらに、５０μｌの５０（ｖ／ｖ）％Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅを加え、４時間
インキュベートした。７，０００ｒｐｍ、２０分間遠心
後、上清をすてて、１ｍｌの細胞溶解緩衝液で４回洗浄
した後、上清をできるだけ除去し、５０μｌのＳＤＳ処
理液を加え、攪拌後、９６℃で３分間煮沸し、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥし、上記と同様の方法でゲルからニトロセルロ
ースメンブレンに転写を行った。転写後、該メンブレン
フィルターをブロッキング緩衝液にて、室温で３０分間
ブロッキング処理した。その後、さらに当該メンブレン
を１μｇ／ｍｌに希釈した抗ＳＳＩ−１モノクローナル
抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）で、１時間、室温でインキュ
ベートした。さらに、このメンブレンを１５分間１回、
５分間２回洗浄し、２次抗体（ＨＲＰ標識した抗マウス
イムノグロブリンＧ抗体）で、室温、３０分間インキュ
ベートした。さらに洗浄液にて、このメンブレンを１５
分間１回、５分間２回洗浄し、エンハンストケミルミネ
ッセンス（ＥＣＬ）検出キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ社
製）で検出した。結果を図３に示す。

【００４６】

【発明の効果】本発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体は、ＳＳＩ−１蛋白質抗原分子を特異的に認識するモ
ノクローナル抗体である。当該モノクローナル抗体を用
いることにより、自然状態では極めて微量にしか産生さ
れないＳＳＩ−１蛋白質の諸性質を解析することが可能
になる。即ち、本発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体を用いることにより、（１）ウエスタンブロット法に
よるＳＳＩ−１蛋白質の迅速な検出及び同定、（２）免
疫沈降法(Immunoprecipitation法) による、発現したＳ
ＳＩ−１蛋白質の検出及び同定、さらに、ＳＳＩ−１蛋
白質と結合性を有する他の蛋白質の検出及び解析、
（３）ＳＳＩ−１蛋白質が細胞内情報伝達の調節に関わ
る蛋白質、例えばＪＡＫキナーゼファミリー（ＪＡＫ
１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３およびＴＹＫ２）との相互作用
の解析、さらに（４）それらの成果に基づく治療薬、診
断薬等の開発等に大きな意義を持つ。

【００４７】更に、該モノクローナル抗体は、上記の実
施例の他に、遺伝子工学的に発現誘導した細胞抽出液か
らアフィニティー精製により純度の高いＳＳＩ−１蛋白
質分子の精製にも応用でき、ＳＳＩ−１蛋白質の結晶解
析などに用いる有用な材料を提供する可能性を有してい
ることが示唆され、その応用範囲は広い。

【００４８】以上のことから、本発明の抗ＳＳＩ−１モ
ノクローナル抗体をはじめとしたＳＳＩファミリーに対
するモノクローナル抗体は、ＳＳＩ−１蛋白質ならびに
各種のＳＳＩファミリー蛋白質の分子学的及び生理学的
機能の解析等の研究に有用なプローブとしての応用が可
能である。さらに該モノクローナル抗体は、細胞内情報
伝達系の制御メカニズムを免疫学的及び組織学的に解析
するにとどまらず、基礎医学、臨床医学分野のみならず
医薬品及び診断薬開発分野等での広範囲な研究に有用な
手段を提供する新規のモノクローナル抗体である。

【００４９】

【配列表】

配列番号: １ 配列の長さ :２７ 配列の型 :アミノ酸 鎖の数 :１本鎖 トポロジー :直鎖状 配列の種類 :ペプチド 配列 Cys Pro Gly Val Pro Ala Pro Ala Pro Gly Asp Thr His Phe Arg Thr 5 10 15 Phe Arg Ser His Ser Asp Tyr Arg Arg Ile Thr 20 25

【図面の簡単な説明】

【図１】遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＪａｋ
２蛋白質を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞
における、ＳＳＩ−１蛋白質の発現状況および解析を示
す電気泳動の写真である。（ウエスタンブロット像） 遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＪａｋ２蛋白質
を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞の抽出液
をそれぞれ調製した。 （上段）得られた抽出液を用いて、抗Ｊａｋ２抗体によ
り免疫沈降し、当該沈降物で抗ＳＳＩ−１モノクローナ
ル抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）を用いてウエスタンブロッ
トを行い、ＳＳＩ−１蛋白質を検出した。ＳＳＩ−１蛋
白質はＪａｋ２蛋白質と共沈することから両者が会合し
ていることがわかる。 （下段）同じ抽出液で、抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体（ＳＩ−１２６２Ｂ）を用いてウエスタンブロットを
行い、ＳＳＩ−１蛋白質を検出した。 図中の用語の説明 ｃＤＮＡ：発現ベクターが担持している導入すべき遺伝
子の種類 レーン１：ＳＳＩ−１蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン２：Ｊａｋ２蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン３：ＳＳＩ−１とＪａｋ２を同時に発現させたＣ
ＯＳ７細胞 ＩＰ：免疫沈降 (immunoprecipitation) Ｂｌｏｔ：ウエスタンブロット Ｌｙｓａｔｅ：細胞可溶化抽出液を試料としたウエスタ
ンブロット像

【図２】遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＴｙｋ
２蛋白質を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞
における、ＳＳＩ−１蛋白質の発現状況および解析を示
す電気泳動の写真である。（ウエスタンブロット像） 遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＴｙｋ２蛋白質
を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞の抽出液
をそれぞれ調製した。 （上段）得られた抽出液を用いて、抗Ｔｙｋ２抗体によ
り免疫沈降し、当該沈降物で抗ＳＳＩ−１モノクローナ
ル抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）を用いてウエスタンブロッ
トを行い、ＳＳＩ−１蛋白質を検出した。ＳＳＩ−１蛋
白質はＴｙｋ２蛋白質と共沈することから両者が会合し
ていることがわかる。 （下段）同じ抽出液で、抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗
体（ＳＩ−１２６２Ｂ）を用いてウエスタンブロットを
行い、ＳＳＩ−１蛋白質を検出した。 図中の用語の説明 ｃＤＮＡ：発現ベクターが担持している導入すべき遺伝
子の種類 レーン１：ＳＳＩ−１蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン２：Ｔｙｋ２蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン３：ＳＳＩ−１とＴｙｋ２を同時に発現させたＣ
ＯＳ７細胞 ＩＰ：免疫沈降 (immunoprecipitation) Ｂｌｏｔ：ウエスタンブロット Ｌｙｓａｔｅ：細胞可溶化抽出液を試料としたウエスタ
ンブロット像

【図３】遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＪａｋ
２蛋白質を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞
における、ＳＳＩ−１蛋白質の発現状況および解析を示
す電気泳動の写真である。（ウエスタンブロット像） 遺伝子工学的にＳＳＩ−１蛋白質およびＪａｋ２蛋白質
を単独または同時に発現誘導したＣＯＳ７細胞の抽出液
をそれぞれ調製した。得られた抽出液を用いて、抗ＳＳ
Ｉ−１モノクローナル抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）により
免疫沈降し、当該沈降物で抗ＳＳＩ−１モノクローナル
抗体（ＳＩ−１２６２Ｂ）を用いてウエスタンブロット
を行い、ＳＳＩ−１蛋白質を検出した。ＳＳＩ−１蛋白
質を発現誘導した細胞にのみＳＳＩ−１蛋白質が沈降さ
れＳＳＩ−１蛋白質のバンドが検出された。このことか
ら、本発明の抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体がウエス
タンブロット法のみならず、免疫沈降法にも有用である
ことが示された。 図中の用語の説明 ｃＤＮＡ：発現ベクターが担持している導入すべき遺伝
子 レーン１：ＳＳＩ−１蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン２：Ｊａｋ２蛋白質を発現させたＣＯＳ７細胞 レーン３：ＳＳＩ−１とＪａｋ２を同時に発現させたＣ
ＯＳ７細胞 ＩＰ：免疫沈降 (immunoprecipitation) Ｂｌｏｔ：ウエスタンブロット Ｌｙｓａｔｅ：細胞可溶化抽出液を試料としたウエスタ
ンブロット像

【手続補正書】

【提出日】平成１１年２月８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項６

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項８

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００７

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、種をこえてそのアミノ酸配列がよく保存されて
いることが知られているＳＳＩ−１のアミノ酸配列か
ら、既報の蛋白質とアミノ酸相同性の低い、当該ＳＳＩ
−１に特異的な配列を有する領域を選択し、さらにアミ
ノ酸配列から推定される蛋白質の構造解析により、上述
の領域の内、高度に親水性を有する領域を選択し、当該
領域のオリゴペプチドを免疫原とすることで、ＳＳＩ−
１を特異的に認識するモノクローナル抗体（以下、単に
抗ＳＳＩ−１モノクローナル抗体ともいう）を得ること
に成功し、当該モノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマ細胞系を確立し、さらに当該モノクローナル抗体
の用途を見い出した。すなわち本発明は以下のとおりで
ある。 (1) 以下の性質を有するＳＳＩファミリー蛋白質のう
ち、少なくとも１種の蛋白質に対して特異的に親和性を
有するモノクローナル抗体： １）ＳＴＡＴによりその発現が誘導される ２）ＳＴＡＴシグナルを抑制する ３）ｓｒｃホモロジー（ＳＨ２）領域を有する。 (2) ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有する
上記(1) 記載のモノクローナル抗体。 (3) ＳＳＩ−１蛋白質の４３番目のアミノ酸から６９番
目のアミノ酸までの領域に存在するエピトープを認識す
ることを特徴とする上記(2) 記載のモノクローナル抗
体。 (4) 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列内に存在す
るエピトープを認識することを特徴とする上記(2) 記載
のモノクローナル抗体。 (5) 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列の全部また
は一部を有する蛋白質に対して特異的に親和性を有する
上記(2) 記載のモノクローナル抗体。 (6) 受託番号がＦＥＲＭ ＢＰ−６４９８であるハイブ
リドーマにより産生される、上記(1) 〜(5) に記載のモ
ノクローナル抗体。 (7) 上記(1) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマ。 (8) 受託番号がＦＥＲＭ ＢＰ−６４９８である上記
(7) 記載のハイブリドーマ。 (9) ＳＳＩファミリー蛋白質のうちの、少なくとも１種
の蛋白質の全部またはその一部からなるオリゴペプチド
で免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエローマ細胞株と融
合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩファミリー蛋白質の
うちの少なくとも１種の蛋白質に対して特異的に親和性
を有するモノクローナル抗体を産生する株をクローニン
グすることを特徴とするハイブリドーマの製造方法。 (10)ＳＳＩ−１蛋白質の全部またはその一部からなるオ
リゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエロー
マ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩ−１蛋
白質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗
体を産生する株をクローニングすることを特徴とするハ
イブリドーマの製造方法。 (11)配列表配列番号１のアミノ酸配列または配列表配列
番号１のアミノ酸配列において１乃至数個のアミノ酸が
欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなるオ
リゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエロー
マ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩ−１蛋
白質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗
体を産生する株をクローニングすることを特徴とするハ
イブリドーマの製造方法。 (12)上記(9) に記載の製造方法により製造されるハイブ
リドーマを培養し、該培養物からモノクローナル抗体を
取得することを特徴とする、ＳＳＩファミリー蛋白質の
少なくとも１種の蛋白質に特異的に親和性を有するモノ
クローナル抗体の製造方法。 (13)上記(10)または(11)に記載の製造方法により製造さ
れるハイブリドーマを培養し、該培養物からモノクロー
ナル抗体を取得することを特徴とする、ＳＳＩ−１蛋白
質に対して特異的に親和性を有するモノクローナル抗体
の製造方法。 (14)上記(1) に記載のモノクローナル抗体と試料とを反
応させる工程を含む、試料中のＳＳＩファミリー蛋白質
のうちの少なくとも１種の蛋白質の測定方法。 (15)上記(2) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体と試料とを反応させる工程を含む、試料中のＳＳＩ
−１蛋白質の測定方法。 (16)上記(2) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体と試料とを反応させる工程を含む、配列表配列番号
１に記載のアミノ酸配列の全部または一部を有する蛋白
質の測定方法。 (17)上記(1) 〜(6) のいずれかに記載のモノクローナル
抗体を含む試薬。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２１】本発明のモノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマのうち、モノクローナル抗体ＳＩ−１２６
２Ｂを産生するハイブリドーマＳＩ−１２６２Ｂ株は本
発明者らによって新たに分離され、具体的には、ブタペ
スト条約に基づく国際寄託機関である通商産業省工業技
術院生命工学工業技術研究所（〒３０５−８５６６茨城
県つくば市東１丁目１番３号）に国際寄託され、受託番
号としてＦＥＲＭＢＰ−６４９８が付されている（国際
寄託移管日平成１０年９月１０日、元の国内寄託日平成
９年９月２５日、元の国内寄託番号：ＦＥＲＭ Ｐ−１
６４４５）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ 33/577 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の性質を有するＳＳＩファミリー蛋
   白質のうち、少なくとも１種の蛋白質に対して特異的に
   親和性を有するモノクローナル抗体： １）ＳＴＡＴによりその発現が誘導される ２）ＳＴＡＴシグナルを抑制する ３）ｓｒｃホモロジー（ＳＨ２）領域を有する。
2. 【請求項２】 ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和
   性を有する請求項１記載のモノクローナル抗体。
3. 【請求項３】 ＳＳＩ−１蛋白質の４３番目のアミノ酸
   から６９番目のアミノ酸までの領域に存在するエピトー
   プを認識することを特徴とする請求項２記載のモノクロ
   ーナル抗体。
4. 【請求項４】 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列
   内に存在するエピトープを認識することを特徴とする請
   求項２記載のモノクローナル抗体。
5. 【請求項５】 配列表配列番号１に記載のアミノ酸配列
   の全部または一部を有する蛋白質に対して特異的に親和
   性を有する請求項２記載のモノクローナル抗体。
6. 【請求項６】 受託番号がＦＥＲＭ Ｐ−１６４４５で
   あるハイブリドーマにより産生される、請求項１〜５に
   記載のモノクローナル抗体。
7. 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかに記載のモノク
   ローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
8. 【請求項８】 受託番号がＦＥＲＭ Ｐ−１６４４５で
   ある請求項７記載のハイブリドーマ。
9. 【請求項９】 ＳＳＩファミリー蛋白質のうちの、少な
   くとも１種の蛋白質の全部またはその一部からなるオリ
   ゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細胞をミエローマ
   細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、ＳＳＩファミリ
   ー蛋白質のうちの少なくとも１種の蛋白質に対して特異
   的に親和性を有するモノクローナル抗体を産生する株を
   クローニングすることを特徴とするハイブリドーマの製
   造方法。
10. 【請求項１０】 ＳＳＩ−１蛋白質の全部またはその一
    部からなるオリゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細
    胞をミエローマ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、
    ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有するモノ
    クローナル抗体を産生する株をクローニングすることを
    特徴とするハイブリドーマの製造方法。
11. 【請求項１１】 配列表配列番号１のアミノ酸配列また
    は配列表配列番号１のアミノ酸配列において１乃至数個
    のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配
    列からなるオリゴペプチドで免疫した哺乳動物の免疫細
    胞をミエローマ細胞株と融合せしめ、該融合細胞から、
    ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有するモノ
    クローナル抗体を産生する株をクローニングすることを
    特徴とするハイブリドーマの製造方法。
12. 【請求項１２】 請求項９に記載の製造方法により製造
    されるハイブリドーマを培養し、該培養物からモノクロ
    ーナル抗体を取得することを特徴とする、ＳＳＩファミ
    リー蛋白質の少なくとも１種の蛋白質に特異的に親和性
    を有するモノクローナル抗体の製造方法。
13. 【請求項１３】 請求項１０または１１に記載の製造方
    法により製造されるハイブリドーマを培養し、該培養物
    からモノクローナル抗体を取得することを特徴とする、
    ＳＳＩ−１蛋白質に対して特異的に親和性を有するモノ
    クローナル抗体の製造方法。
14. 【請求項１４】 請求項１に記載のモノクローナル抗体
    と試料とを反応させる工程を含む、試料中のＳＳＩファ
    ミリー蛋白質のうちの少なくとも１種の蛋白質の測定方
    法。
15. 【請求項１５】 請求項２〜６のいずれかに記載のモノ
    クローナル抗体と試料とを反応させる工程を含む、試料
    中のＳＳＩ−１蛋白質の測定方法。
16. 【請求項１６】 請求項２〜６のいずれかに記載のモノ
    クローナル抗体と試料とを反応させる工程を含む、配列
    表配列番号１に記載のアミノ酸配列の全部または一部を
    有する蛋白質の測定方法。
17. 【請求項１７】 請求項１〜６のいずれかに記載のモノ
    クローナル抗体を含む試薬。