JPH11165066A - リポ多糖、核酸および微生物の吸着体 - Google Patents
リポ多糖、核酸および微生物の吸着体Info
- Publication number
- JPH11165066A JPH11165066A JP9366128A JP36612897A JPH11165066A JP H11165066 A JPH11165066 A JP H11165066A JP 9366128 A JP9366128 A JP 9366128A JP 36612897 A JP36612897 A JP 36612897A JP H11165066 A JPH11165066 A JP H11165066A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lipopolysaccharide
- derivative
- nucleic acid
- immobilized
- hollow fiber
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Distillation Of Fermentation Liquor, Processing Of Alcohols, Vinegar And Beer (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 短時間、省エネルギー、省スペース、高吸着
性能のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体を提供す
る。 【解決手段】 化学療法剤を固定化した多孔性構造体
（多孔性膜および多孔性中空繊維）、および化学療法剤
を固定化した無孔構造体（無孔膜および無孔性中空繊
維）。医療用途に主として多孔性構造体を使用し、産業
用途に主として無孔構造体を使用する。
性能のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体を提供す
る。 【解決手段】 化学療法剤を固定化した多孔性構造体
（多孔性膜および多孔性中空繊維）、および化学療法剤
を固定化した無孔構造体（無孔膜および無孔性中空繊
維）。医療用途に主として多孔性構造体を使用し、産業
用途に主として無孔構造体を使用する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、リポ多糖、核酸、
および微生物の吸着体とそれを用いたリポ多糖、核酸、
および微生物の吸着除去方法に関し、更に詳しくは、化
学療法剤を固定化した多孔性膜、無孔膜、多孔性中空繊
維または無孔中空繊維から成るリポ多糖、核酸および微
生物の吸着体と当該吸着体を用いるリポ多糖、核酸およ
び微生物の吸着分離方法に関する。
および微生物の吸着体とそれを用いたリポ多糖、核酸、
および微生物の吸着除去方法に関し、更に詳しくは、化
学療法剤を固定化した多孔性膜、無孔膜、多孔性中空繊
維または無孔中空繊維から成るリポ多糖、核酸および微
生物の吸着体と当該吸着体を用いるリポ多糖、核酸およ
び微生物の吸着分離方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】リポポリサッカライド（以下リポ多糖：
エンドトキシンとも呼称される）は、グラム陰性菌の細
胞壁を構成する生理活性物質で、蛋白質と結合した分子
量約２，０００のＬｉｐｉｄＡが活性の中心である。当
該リポ多糖の吸着除去方法が種々検討され、例えば、特
開平３−１０９３９７号公報、特開平３−１０９９４０
号公報に開示される、キトサンによる核酸およびエンド
トキシンの吸着除去方法が知られている。また、本発明
の発明者らも、リポ多糖の吸着除去方法を発明し、出願
に及んでいる（特許第１８６５２８４号）。更に、本発
明の発明者らは、アミノ糖系抗生物質以外の化学療法剤
を固定化したリポ多糖の吸着剤、光化学反応により化学
療法剤を固定化したリポ多糖の吸着剤についても出願済
である。更にまた、本発明の発明者らはリポ多糖の定量
方法を発明し、出願に及んでいる（特許第２６９０４１
５号）。
エンドトキシンとも呼称される）は、グラム陰性菌の細
胞壁を構成する生理活性物質で、蛋白質と結合した分子
量約２，０００のＬｉｐｉｄＡが活性の中心である。当
該リポ多糖の吸着除去方法が種々検討され、例えば、特
開平３−１０９３９７号公報、特開平３−１０９９４０
号公報に開示される、キトサンによる核酸およびエンド
トキシンの吸着除去方法が知られている。また、本発明
の発明者らも、リポ多糖の吸着除去方法を発明し、出願
に及んでいる（特許第１８６５２８４号）。更に、本発
明の発明者らは、アミノ糖系抗生物質以外の化学療法剤
を固定化したリポ多糖の吸着剤、光化学反応により化学
療法剤を固定化したリポ多糖の吸着剤についても出願済
である。更にまた、本発明の発明者らはリポ多糖の定量
方法を発明し、出願に及んでいる（特許第２６９０４１
５号）。
【０００３】注射液等を介して、リポ多糖がヒト体内に
侵入した場合には、悪寒、発熱等を引き起こす。また、
免疫能が低下したヒト体内にグラム陰性細菌が侵入し、
ヒト体内で大量のリポ多糖が産生された際に生ずるエン
ドトキシン血症に対しては、エンドトキシン除去の為の
種々の対策が講じられ、動物実験では、エンドトキシン
除去の有効性が報告されている。
侵入した場合には、悪寒、発熱等を引き起こす。また、
免疫能が低下したヒト体内にグラム陰性細菌が侵入し、
ヒト体内で大量のリポ多糖が産生された際に生ずるエン
ドトキシン血症に対しては、エンドトキシン除去の為の
種々の対策が講じられ、動物実験では、エンドトキシン
除去の有効性が報告されている。
【０００４】現在、ヒト体内のリポ多糖の除去には、物
抗生物質であるポリミキシンＢをポリスチレンに共有結
合したポリミキシン固定化繊維が、直接血液潅流法（Ｄ
ＨＰ）によって使用されている。ポリミキシン固定化繊
維充填カラム内には、５６グラムのポリミキシン固定化
繊維が生理食塩液と共に充填され、理論上は１．１マイ
クログラムのリポ多糖の吸着が可能であるとされている
が実際には、２００ピコグラムのリポ多糖の吸着が精々
である。また、ポリミキシン固定化繊維（ポリスチレ
ン）の生体適合性は必ずしも充分ではなく、血小板の吸
着が認められたり、補体の活性化がおこるものと考えら
れている。
抗生物質であるポリミキシンＢをポリスチレンに共有結
合したポリミキシン固定化繊維が、直接血液潅流法（Ｄ
ＨＰ）によって使用されている。ポリミキシン固定化繊
維充填カラム内には、５６グラムのポリミキシン固定化
繊維が生理食塩液と共に充填され、理論上は１．１マイ
クログラムのリポ多糖の吸着が可能であるとされている
が実際には、２００ピコグラムのリポ多糖の吸着が精々
である。また、ポリミキシン固定化繊維（ポリスチレ
ン）の生体適合性は必ずしも充分ではなく、血小板の吸
着が認められたり、補体の活性化がおこるものと考えら
れている。
【０００５】上記のポリミキシン固定化繊維充填カラム
へのリポ多糖の吸着量が少ない原因は、ポリミキシン固
定化繊維充填カラム上のリガンドの絶対量が少ないこ
と、血液とポリミキシン固定化繊維充填カラムとの接触
時間が短いことが考えられる。また、血小板の吸着が認
められる原因、および補体の活性化が起こる原因は、ポ
リミキシン固定化繊維の血液適合性が不充分であるこ
と、血液とポリミキシン固定化繊維充填カラムとの接触
時間速度が早いことが考えられる。
へのリポ多糖の吸着量が少ない原因は、ポリミキシン固
定化繊維充填カラム上のリガンドの絶対量が少ないこ
と、血液とポリミキシン固定化繊維充填カラムとの接触
時間が短いことが考えられる。また、血小板の吸着が認
められる原因、および補体の活性化が起こる原因は、ポ
リミキシン固定化繊維の血液適合性が不充分であるこ
と、血液とポリミキシン固定化繊維充填カラムとの接触
時間速度が早いことが考えられる。
【０００６】本発明の発明者らの発明になるリポ多糖の
吸着除去剤（特許第１８６５２８４号）は、ゲル（ビー
ズ）にアミノ糖系抗生物質を固定化している為、高流速
を得る為には高圧をかけることが必要で、高流速では動
的吸着容量が減少するという欠点があった。
吸着除去剤（特許第１８６５２８４号）は、ゲル（ビー
ズ）にアミノ糖系抗生物質を固定化している為、高流速
を得る為には高圧をかけることが必要で、高流速では動
的吸着容量が減少するという欠点があった。
【０００７】膜で分離を行なうことによる最大の利点
は、省エネルギーにある。それ故に、逆浸透膜（Ｒ
Ｏ）、限外ろ過膜（ＵＦ）、精密ろ過膜（ＭＦ）等のろ
過分離膜は、半導体工業、医薬品工業、食品工業等の分
野で幅広く使用されている。一方、多孔質膜を上記の様
なろ過膜としてではなく、吸着体として利用しようとす
ることがＢｒａｎｄｔらによって提案されている（Ｓ．
Ｂｒａｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ，６，７７９−７８２，１９８８）。
は、省エネルギーにある。それ故に、逆浸透膜（Ｒ
Ｏ）、限外ろ過膜（ＵＦ）、精密ろ過膜（ＭＦ）等のろ
過分離膜は、半導体工業、医薬品工業、食品工業等の分
野で幅広く使用されている。一方、多孔質膜を上記の様
なろ過膜としてではなく、吸着体として利用しようとす
ることがＢｒａｎｄｔらによって提案されている（Ｓ．
Ｂｒａｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ
ｏｇｙ，６，７７９−７８２，１９８８）。
【０００８】Ｂｒａｎｄｔらは、蛋白質をクロマトグラ
フィーの様に吸着回収する為の理想的な吸着体は、厚み
が薄く、面積が大きな多孔性構造体すなわち多孔性膜で
あると記述している。Ｂｒａｎｄｔらの提案する理想的
な吸着体とは、短時間、省エネルギー、省スペースで、
高回収率で蛋白質を行なうということであり、現在セフ
ァロースゲル等のゲルを用いてアフィニティー吸着、分
離が実施されている分野に多孔性構造体を応用すること
で効率化（省エネルギー）を図ろうとする提案と解釈で
きる。Ｂｒａｎｄｔらは、蛋白吸着のリガンドとしてプ
ロテインＡを固定化した多孔性膜を作製している（上記
文献）。また、斎藤らも蛋白質回収を目的とした、リガ
ンドを放射線グラフト重合した多孔性中空糸膜を提案し
ている。当該方法は、リガンドの固定密度を高くでき
る、リガンドが脱離しにくい、大量作製が可能である等
の利点がある。
フィーの様に吸着回収する為の理想的な吸着体は、厚み
が薄く、面積が大きな多孔性構造体すなわち多孔性膜で
あると記述している。Ｂｒａｎｄｔらの提案する理想的
な吸着体とは、短時間、省エネルギー、省スペースで、
高回収率で蛋白質を行なうということであり、現在セフ
ァロースゲル等のゲルを用いてアフィニティー吸着、分
離が実施されている分野に多孔性構造体を応用すること
で効率化（省エネルギー）を図ろうとする提案と解釈で
きる。Ｂｒａｎｄｔらは、蛋白吸着のリガンドとしてプ
ロテインＡを固定化した多孔性膜を作製している（上記
文献）。また、斎藤らも蛋白質回収を目的とした、リガ
ンドを放射線グラフト重合した多孔性中空糸膜を提案し
ている。当該方法は、リガンドの固定密度を高くでき
る、リガンドが脱離しにくい、大量作製が可能である等
の利点がある。
【０００９】血液透析用の多孔性中空糸膜では、透析膜
１本当たりの血液処理量を４ｍｌ／ｍｉｎ〜６ｍｌ／ｍ
ｉｎにすることにより、血小板の粘着量を最小にするこ
とが可能であると言われている（小久保謙一ら：ハイパ
フォーマンスメンブレン’９６，５２〜５５）。当該血
液処理量は透析膜１０，０００本の血液透析器に換算す
ると血液処理量２００ｍｌ／ｍｉｎ〜３００ｍｌ／ｍｉ
ｎに相当する。当該血液処理量をゲルで実現しようとし
て、流速を早くするとリガンドへの被吸着物質の結合量
が極端に少なくなり、上記ポリミキシン固定化繊維充填
カラムの様に、充分な吸着活性が発揮できない。
１本当たりの血液処理量を４ｍｌ／ｍｉｎ〜６ｍｌ／ｍ
ｉｎにすることにより、血小板の粘着量を最小にするこ
とが可能であると言われている（小久保謙一ら：ハイパ
フォーマンスメンブレン’９６，５２〜５５）。当該血
液処理量は透析膜１０，０００本の血液透析器に換算す
ると血液処理量２００ｍｌ／ｍｉｎ〜３００ｍｌ／ｍｉ
ｎに相当する。当該血液処理量をゲルで実現しようとし
て、流速を早くするとリガンドへの被吸着物質の結合量
が極端に少なくなり、上記ポリミキシン固定化繊維充填
カラムの様に、充分な吸着活性が発揮できない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は前記問
題点の解決にある。即ち、現在セファロース等のゲルを
用いてアフィニティー吸着、分離が実施されている分野
のうち、医療用途には多孔性構造体を応用し、産業用途
に無孔構造体を応用することで効率化（省エネルギー）
を図ろうとすることにある。換言すれば、短時間、省エ
ネルギー、省スペース、高吸着性能のリポ多糖、核酸お
よび微生物吸着体を提供することにある。
題点の解決にある。即ち、現在セファロース等のゲルを
用いてアフィニティー吸着、分離が実施されている分野
のうち、医療用途には多孔性構造体を応用し、産業用途
に無孔構造体を応用することで効率化（省エネルギー）
を図ろうとすることにある。換言すれば、短時間、省エ
ネルギー、省スペース、高吸着性能のリポ多糖、核酸お
よび微生物吸着体を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成する為、
本発明の発明者は種々研究を重ねた結果、化学療法剤を
固定化した多孔性構造体（および無孔構造体）が、リポ
多糖、核酸および微生物を良好に吸着除去し、短時間、
省エネルギー、省スペースの条件をも満たすことを発見
し、本発明を完成した。
本発明の発明者は種々研究を重ねた結果、化学療法剤を
固定化した多孔性構造体（および無孔構造体）が、リポ
多糖、核酸および微生物を良好に吸着除去し、短時間、
省エネルギー、省スペースの条件をも満たすことを発見
し、本発明を完成した。
【００１２】即ち、本発明は以下の様な構成を有するも
のである。 （１）不溶性担体に化学療法剤を固定化したことを特徴
とする、リポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （２）不溶性担体が多孔性膜であることを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （３）不溶性担体が無孔膜であることを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （４）不溶性担体が多孔性中空繊維であることを特徴と
する、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸
着体。 （５）不溶性担体が無孔中空繊維であることを特徴とす
る、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着
体。 （６）不溶性担体が血液適合性素材からなることを特徴
とする、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の
吸着体。 （７）化学療法剤をアミノ糖系抗生物質およびその誘導
体、アミノサイクリトール系抗生物質およびその誘導
体、アクラルビシンおよびその誘導体、アクチノマイシ
ンＤおよびその誘導体、バシトラシンおよびその誘導
体、ブレオマイシンおよびその誘導体、ポリペプチド系
抗生物質およびその誘導体、ドキソルビシンおよびその
誘導体、ドキシサイクリンおよびその誘導体、マイトマ
イシンＣおよびその誘導体、ストレプトスリシンおよび
その誘導体からなる群から選択することを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （８）化学療法剤と担体との結合がスペーサーを介して
なされることを特徴とする、（１）に記載の液体中のリ
ポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （９）リポ多糖および／または、核酸および／または、
微生物を含有する液体と、（１）に記載の化学療法剤を
固定化した担体とを接触させた後、当該化学療法剤を固
定化した担体と、当該液体とを分離することを特徴とす
る、リポ多糖、核酸および微生物の吸着除去方法。
のである。 （１）不溶性担体に化学療法剤を固定化したことを特徴
とする、リポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （２）不溶性担体が多孔性膜であることを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （３）不溶性担体が無孔膜であることを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （４）不溶性担体が多孔性中空繊維であることを特徴と
する、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸
着体。 （５）不溶性担体が無孔中空繊維であることを特徴とす
る、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着
体。 （６）不溶性担体が血液適合性素材からなることを特徴
とする、（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の
吸着体。 （７）化学療法剤をアミノ糖系抗生物質およびその誘導
体、アミノサイクリトール系抗生物質およびその誘導
体、アクラルビシンおよびその誘導体、アクチノマイシ
ンＤおよびその誘導体、バシトラシンおよびその誘導
体、ブレオマイシンおよびその誘導体、ポリペプチド系
抗生物質およびその誘導体、ドキソルビシンおよびその
誘導体、ドキシサイクリンおよびその誘導体、マイトマ
イシンＣおよびその誘導体、ストレプトスリシンおよび
その誘導体からなる群から選択することを特徴とする、
（１）に記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （８）化学療法剤と担体との結合がスペーサーを介して
なされることを特徴とする、（１）に記載の液体中のリ
ポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 （９）リポ多糖および／または、核酸および／または、
微生物を含有する液体と、（１）に記載の化学療法剤を
固定化した担体とを接触させた後、当該化学療法剤を固
定化した担体と、当該液体とを分離することを特徴とす
る、リポ多糖、核酸および微生物の吸着除去方法。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明のリポ多糖、核酸および微
生物の吸着体に使用される多孔性構造体および無孔性構
造体の膜素材は、銅アンモニア法再生セルロース、酢酸
セルロース法再生セルロース、ポリメタクリル酸メチル
のステレオコンプレックス、ポリアクリルニトリル系、
エチレン−ビニルアルコール系共重合体、キトサン−ビ
ニルアルコール系共重合体、合成ポリアミノ酸、再生コ
ラーゲン、ポリエーテルカーボネート、ポリスルホン、
ポリエーテルスルホン、キチン、キトサン、ポリマーア
ロイ、ポリスルホン、ポリメチルメタクリレートの何れ
かであることが好ましいが、必ずしもこれらに限定され
る訳ではない。当該膜素材のうち、血液適合性を欠如す
る素材については、血液適合性を付与して使用すること
が好ましい。
生物の吸着体に使用される多孔性構造体および無孔性構
造体の膜素材は、銅アンモニア法再生セルロース、酢酸
セルロース法再生セルロース、ポリメタクリル酸メチル
のステレオコンプレックス、ポリアクリルニトリル系、
エチレン−ビニルアルコール系共重合体、キトサン−ビ
ニルアルコール系共重合体、合成ポリアミノ酸、再生コ
ラーゲン、ポリエーテルカーボネート、ポリスルホン、
ポリエーテルスルホン、キチン、キトサン、ポリマーア
ロイ、ポリスルホン、ポリメチルメタクリレートの何れ
かであることが好ましいが、必ずしもこれらに限定され
る訳ではない。当該膜素材のうち、血液適合性を欠如す
る素材については、血液適合性を付与して使用すること
が好ましい。
【００１４】また、膜形態は非対称膜または複合膜であ
ることが好ましい。更に、モジュールの形式は、スパイ
ラル、中空糸または管状であることが好ましい。また、
孔構造は、均質構造、グラジェント構造、または対称グ
ラジェント構造であることが好ましいが、必ずしもこれ
らに限定される訳ではない。医療用途以外に用いる無孔
性構造体を充填するモジュールは、透析液の出入口を必
要としない。
ることが好ましい。更に、モジュールの形式は、スパイ
ラル、中空糸または管状であることが好ましい。また、
孔構造は、均質構造、グラジェント構造、または対称グ
ラジェント構造であることが好ましいが、必ずしもこれ
らに限定される訳ではない。医療用途以外に用いる無孔
性構造体を充填するモジュールは、透析液の出入口を必
要としない。
【００１５】本発明のリポ多糖、核酸および微生物の吸
着体に使用される化学療法剤は、アミノ糖系抗生物質お
よびその誘導体、アミノサイクリトール系抗生物質およ
びその誘導体、アクラルビシンおよびその誘導体、アク
チノマイシンＤおよびその誘導体、バシトラシンおよび
その誘導体、ブレオマイシンおよびその誘導体、ポリペ
プチド系抗生物質およびその誘導体、ドキソルビシンお
よびその誘導体、ドキシサイクリンおよびその誘導体、
マイトマイシンＣおよびその誘導体、ストレプトスリシ
ンおよびその誘導体からなる群から選択することが好ま
しい。産業用途として大量に使用する場合は、これらの
群のなかから、低価格のストレプトマイシン、アミカシ
ン、コリスチン等を選択することがより好ましい。
着体に使用される化学療法剤は、アミノ糖系抗生物質お
よびその誘導体、アミノサイクリトール系抗生物質およ
びその誘導体、アクラルビシンおよびその誘導体、アク
チノマイシンＤおよびその誘導体、バシトラシンおよび
その誘導体、ブレオマイシンおよびその誘導体、ポリペ
プチド系抗生物質およびその誘導体、ドキソルビシンお
よびその誘導体、ドキシサイクリンおよびその誘導体、
マイトマイシンＣおよびその誘導体、ストレプトスリシ
ンおよびその誘導体からなる群から選択することが好ま
しい。産業用途として大量に使用する場合は、これらの
群のなかから、低価格のストレプトマイシン、アミカシ
ン、コリスチン等を選択することがより好ましい。
【００１６】本発明のリポ多糖、核酸および微生物の吸
着体に使用される多孔性構造体および無孔構造体と化学
療法剤との固定化は、リガンドである化学療法剤が剥離
することのない共有結合法が好ましい。共有結合法であ
れば、臭化シアン法、オキシラン法、ジビニルスルホン
法、グルタルアルデヒド法、酸無水物法、Ｎ−ヒドロキ
シサクシイミド法、ジアゾカップリング法、同反応性二
価試薬を用いる方法、異反応性二価試薬を用いる方法、
光化学反応法等のうち何れの方法を用いても良い。多孔
性構造体が反応性官能基を有する場合には、共有結合法
を用い、反応性官能基を有しない場合には、光化学反応
法、グラフト重合法等を用いることが好ましい。また、
多孔性構造体および無孔構造体と化学療法剤との固定化
は、ポリエチレングリコール、ヘキサチレンジアミン等
のスペーサーを介して行なうことが好ましく、スペーサ
ーは親水性スペーサーであることがより好ましい。
着体に使用される多孔性構造体および無孔構造体と化学
療法剤との固定化は、リガンドである化学療法剤が剥離
することのない共有結合法が好ましい。共有結合法であ
れば、臭化シアン法、オキシラン法、ジビニルスルホン
法、グルタルアルデヒド法、酸無水物法、Ｎ−ヒドロキ
シサクシイミド法、ジアゾカップリング法、同反応性二
価試薬を用いる方法、異反応性二価試薬を用いる方法、
光化学反応法等のうち何れの方法を用いても良い。多孔
性構造体が反応性官能基を有する場合には、共有結合法
を用い、反応性官能基を有しない場合には、光化学反応
法、グラフト重合法等を用いることが好ましい。また、
多孔性構造体および無孔構造体と化学療法剤との固定化
は、ポリエチレングリコール、ヘキサチレンジアミン等
のスペーサーを介して行なうことが好ましく、スペーサ
ーは親水性スペーサーであることがより好ましい。
【００１７】上記方法により調製した本発明にかかわる
多孔性構造体および無孔構造体は、モジュールとし滅菌
した後使用に供する。当該多孔性構造体は、医療領域で
は敗血症患者の救命、パイロジェンフリー溶媒の調製等
に使用され、当該無孔構造体は、医薬品工業、食品工業
等の分野ではパイロジェンフリーの製品の調製、パイロ
ジェンフリーの溶媒の調製等に使用される。
多孔性構造体および無孔構造体は、モジュールとし滅菌
した後使用に供する。当該多孔性構造体は、医療領域で
は敗血症患者の救命、パイロジェンフリー溶媒の調製等
に使用され、当該無孔構造体は、医薬品工業、食品工業
等の分野ではパイロジェンフリーの製品の調製、パイロ
ジェンフリーの溶媒の調製等に使用される。
【００１８】
【実施例】本発明を実施例により更に詳細に説明する。
本発明は実施例により、何ら限定されるものではない。
本発明は実施例により、何ら限定されるものではない。
【００１９】《実施例１．》 −− ストレプトマイシン固定化中空糸膜の調製 −− キトサン製中空糸を充填したモジュール（内径２００マ
イクロメーター、膜厚２０マイクロメーター、有効長１
９５ｍｍ、ポア半径８０オングストローム、有効膜面積
１．６ｍ２、血液容量９４ｍｌ）を筏等の方法（岸田晶
夫、筏義人：人工臓器、１７：４７〜５０、１９８８）
に準じて、ストレプトマイシン燐酸緩衝液を処理するこ
とにより、中空糸膜内部の表面にストレプトマイシンを
固定化したモジュールを調製した。当該中空糸膜の内部
を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄
した後、当該中空糸膜の内部を更に、注射用蒸留水１，
０００ ｍｌで洗浄した。当該モジュールは４°Ｃで保
存した。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化
量は８マイクログラム／ｃｍ−２であった。
イクロメーター、膜厚２０マイクロメーター、有効長１
９５ｍｍ、ポア半径８０オングストローム、有効膜面積
１．６ｍ２、血液容量９４ｍｌ）を筏等の方法（岸田晶
夫、筏義人：人工臓器、１７：４７〜５０、１９８８）
に準じて、ストレプトマイシン燐酸緩衝液を処理するこ
とにより、中空糸膜内部の表面にストレプトマイシンを
固定化したモジュールを調製した。当該中空糸膜の内部
を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄
した後、当該中空糸膜の内部を更に、注射用蒸留水１，
０００ ｍｌで洗浄した。当該モジュールは４°Ｃで保
存した。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化
量は８マイクログラム／ｃｍ−２であった。
【００２０】《実施例２．》 −− ストレプトマイシン固定化中空糸膜によるリポ多
糖の吸着 −− リポ多糖を含有する１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｏ１５由来：１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを調製
し、実施例１で調製したストレプトマイシン固定化中空
糸膜充填モジュールを組み込んだ１，０００ｍｌの閉鎖
回路を作製した。ＱＢ＝１００ｍｌにて再循環させ、サ
ンプリングは開始時、３０分後、６０分後、１２０分後
に行なった。透析液流量は５００ｍｌ／ｍｉｎで流し
た。サンプリング液についてＬＡＬ活性を測定した。Ｌ
ＡＬ活性はエンドスペーシー、カイネティック法（生化
学工業製）で測定した。その結果、開始時サンプルのリ
ポ多糖含量は、０．９３ｎｇ／ｍｌであった。また、３
０分後、６０分後、１２０分後サンプルのリポ多糖含量
は、何れも検出限界以下であった。
糖の吸着 −− リポ多糖を含有する１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｏ１５由来：１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを調製
し、実施例１で調製したストレプトマイシン固定化中空
糸膜充填モジュールを組み込んだ１，０００ｍｌの閉鎖
回路を作製した。ＱＢ＝１００ｍｌにて再循環させ、サ
ンプリングは開始時、３０分後、６０分後、１２０分後
に行なった。透析液流量は５００ｍｌ／ｍｉｎで流し
た。サンプリング液についてＬＡＬ活性を測定した。Ｌ
ＡＬ活性はエンドスペーシー、カイネティック法（生化
学工業製）で測定した。その結果、開始時サンプルのリ
ポ多糖含量は、０．９３ｎｇ／ｍｌであった。また、３
０分後、６０分後、１２０分後サンプルのリポ多糖含量
は、何れも検出限界以下であった。
【００２１】《実施例３．》 −− コリスチン固定化中空糸膜の調製 −− セルロース膜（キュプロファン膜）の内部の表面に筏等
の方法（岸田晶夫、筏義人：人工臓器、１７：４７〜５
０、１９８８）に準じて、ポリエチレングリコールを介
してコリスチンを固定化したダイアライザー（ＭＣ１２
０）を調製した。当該ダイアライザーの内部を１規定水
酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、当
該中空糸膜の内部を更に、注射用蒸留水１，０００ ｍ
ｌで洗浄した。当該中空糸膜へのコリスチンの固定化量
は１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
の方法（岸田晶夫、筏義人：人工臓器、１７：４７〜５
０、１９８８）に準じて、ポリエチレングリコールを介
してコリスチンを固定化したダイアライザー（ＭＣ１２
０）を調製した。当該ダイアライザーの内部を１規定水
酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、当
該中空糸膜の内部を更に、注射用蒸留水１，０００ ｍ
ｌで洗浄した。当該中空糸膜へのコリスチンの固定化量
は１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
【００２２】《実施例４．》 −− コリスチン固定化中空糸膜によるリポ多糖の吸着
−− リポ多糖を含有するヘパリン添加ウシ血液（Ａｃｉｎｅ
ｔｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ由来：
１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを調製し、実施例３で調
製したコリスチン固定化中空糸膜充填モジュールを組み
込んだ１，０００ｍｌの閉鎖回路を作製した。ＱＢ＝１
００ｍｌにて再循環させ、サンプリングは開始時、３０
分後、６０分後、１２０分後に行なった。透析液流量は
５００ｍｌ／ｍｉｎで流した。サンプリング液について
ＬＡＬ活性を測定した。ＬＡＬ活性はエンドスペーシ
ー、カイネティック法（生化学工業製）で測定した。そ
の結果、開始時サンプルのリポ多糖含量は、０．９２ｎ
ｇ／ｍｌであった。また、３０分後、６０分後、１２０
分後サンプルのリポ多糖含量は、何れも検出限界以下で
あった。
−− リポ多糖を含有するヘパリン添加ウシ血液（Ａｃｉｎｅ
ｔｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ由来：
１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを調製し、実施例３で調
製したコリスチン固定化中空糸膜充填モジュールを組み
込んだ１，０００ｍｌの閉鎖回路を作製した。ＱＢ＝１
００ｍｌにて再循環させ、サンプリングは開始時、３０
分後、６０分後、１２０分後に行なった。透析液流量は
５００ｍｌ／ｍｉｎで流した。サンプリング液について
ＬＡＬ活性を測定した。ＬＡＬ活性はエンドスペーシ
ー、カイネティック法（生化学工業製）で測定した。そ
の結果、開始時サンプルのリポ多糖含量は、０．９２ｎ
ｇ／ｍｌであった。また、３０分後、６０分後、１２０
分後サンプルのリポ多糖含量は、何れも検出限界以下で
あった。
【００２３】《実施例５．》 −− セルロース平膜へのアミカシングラフト重合反応
−− 銅アンモニア法により再生したキュプロファン膜（ＥＮ
ＫＡ製）を共栓付試験管に入れ、アミカシン燐酸緩衝液
（濃度：１０ｍｇ／ｍｌ）２０ｍｌと０．１ｍｍｏｌの
Ｃｅ２＋水溶液（硝酸酸性）１ｍｌとを添加した。次
に、当該共栓付試験管にアルゴンガスを１５分間吹き込
んだ。次に、当該共栓付試験管を４０°Ｃの恒温槽で１
時間反応させた。次に、当該キュプロファン膜を注射用
蒸留水１００ｍｌで洗浄した。更に、当該キュプロファ
ン膜を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間
洗浄した後、当該キュプロファン膜を更に、注射用蒸留
水１，０００ ｍｌで洗浄した。当該中空糸膜へのアミ
カシンの固定化量は１２マイクログラム／ｃｍ−２であ
った。
−− 銅アンモニア法により再生したキュプロファン膜（ＥＮ
ＫＡ製）を共栓付試験管に入れ、アミカシン燐酸緩衝液
（濃度：１０ｍｇ／ｍｌ）２０ｍｌと０．１ｍｍｏｌの
Ｃｅ２＋水溶液（硝酸酸性）１ｍｌとを添加した。次
に、当該共栓付試験管にアルゴンガスを１５分間吹き込
んだ。次に、当該共栓付試験管を４０°Ｃの恒温槽で１
時間反応させた。次に、当該キュプロファン膜を注射用
蒸留水１００ｍｌで洗浄した。更に、当該キュプロファ
ン膜を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間
洗浄した後、当該キュプロファン膜を更に、注射用蒸留
水１，０００ ｍｌで洗浄した。当該中空糸膜へのアミ
カシンの固定化量は１２マイクログラム／ｃｍ−２であ
った。
【００２４】《実施例６．》 −− アミカシングラフトセルロース平膜によるリポ多
糖の吸着 −− 実施例５で調製したアミカシングラフトセルロース平膜
をスパイラル型モジュール（２枚の平膜を封筒状に接着
し、開放された一端を集水管（穴の多数あいた中心パイ
プ）に接続して供給水を流すスペーサー（プラスチック
ネット等）と共に中心パイプにのり巻き状に巻き込んだ
構造のもの）とし、当該スパイラル型モジュールの内部
を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄
した後、更に、注射用蒸留水１，０００ ｍｌで洗浄
し、パイロジェンフリーとした。当該スパイラル型モジ
ュールにリポ多糖１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｏ１１１ 由来：１ｎｇ／ｍｌ）１００ｍｌをアプライ
した。流出液についてＬＡＬ活性を測定した。ＬＡＬ活
性はエンドスペーシー、カイネティック法（生化学工業
製）で測定した。流出液のリポ多糖含量は、検出限界以
下であった。
糖の吸着 −− 実施例５で調製したアミカシングラフトセルロース平膜
をスパイラル型モジュール（２枚の平膜を封筒状に接着
し、開放された一端を集水管（穴の多数あいた中心パイ
プ）に接続して供給水を流すスペーサー（プラスチック
ネット等）と共に中心パイプにのり巻き状に巻き込んだ
構造のもの）とし、当該スパイラル型モジュールの内部
を１規定水酸化ナトリウム溶液１００ｍｌで５分間洗浄
した後、更に、注射用蒸留水１，０００ ｍｌで洗浄
し、パイロジェンフリーとした。当該スパイラル型モジ
ュールにリポ多糖１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｏ１１１ 由来：１ｎｇ／ｍｌ）１００ｍｌをアプライ
した。流出液についてＬＡＬ活性を測定した。ＬＡＬ活
性はエンドスペーシー、カイネティック法（生化学工業
製）で測定した。流出液のリポ多糖含量は、検出限界以
下であった。
【００２５】《実施例７．》 −− ストレプトスリシン固定化キトサン中空糸膜の調
製 −− キトサン製中空糸を充填したミニモジュール（乾燥状態
での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８０ｍｍ、有効長１
５ｃｍ、本数１２０本、モジュール末端接着部の外径７
ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１５ｍｍ）にグルタ
ルアルデヒド法により、ストレプトスリシンを固定化し
た。当該中空糸膜へのストレプトスリシンの固定化量は
１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
製 −− キトサン製中空糸を充填したミニモジュール（乾燥状態
での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８０ｍｍ、有効長１
５ｃｍ、本数１２０本、モジュール末端接着部の外径７
ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１５ｍｍ）にグルタ
ルアルデヒド法により、ストレプトスリシンを固定化し
た。当該中空糸膜へのストレプトスリシンの固定化量は
１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
【００２６】《実施例８．》 −−ストレプトスリシン固定化キトサン中空糸膜による
リポ多糖の吸着−− 実施例７で調製したストレプトスリシン固定化キトサン
中空糸膜充填モジュールにリポ多糖含有ヘパリン添加ウ
シ血液（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１由来リポ多糖：２０ｎ
ｇ／ｍｌ含有）をアプライし、流速３ｍｌ／ｍｉｎで当
該モジュールを通過させた。透析液には燐酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）を用いた。過塩素酸処理したモジュール通過
ウシ血液について、リムルステスト（凝固法：和光純薬
製）、および発色基質による方法（エンドスペーシー：
生化学工業製）でリポ多糖を定量した。何れの方法でも
リポ多糖は検出出来なかった（検出限界以下であっ
た）。また、当該モジュール通過ウシ血液について、本
発明者らの方法（特許第２６９０４１５号）によりリポ
多糖の定量を行なった。当該方法でもリポ多糖は検出出
来なかった（検出限界以下であった）。
リポ多糖の吸着−− 実施例７で調製したストレプトスリシン固定化キトサン
中空糸膜充填モジュールにリポ多糖含有ヘパリン添加ウ
シ血液（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１由来リポ多糖：２０ｎ
ｇ／ｍｌ含有）をアプライし、流速３ｍｌ／ｍｉｎで当
該モジュールを通過させた。透析液には燐酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．０）を用いた。過塩素酸処理したモジュール通過
ウシ血液について、リムルステスト（凝固法：和光純薬
製）、および発色基質による方法（エンドスペーシー：
生化学工業製）でリポ多糖を定量した。何れの方法でも
リポ多糖は検出出来なかった（検出限界以下であっ
た）。また、当該モジュール通過ウシ血液について、本
発明者らの方法（特許第２６９０４１５号）によりリポ
多糖の定量を行なった。当該方法でもリポ多糖は検出出
来なかった（検出限界以下であった）。
【００２７】《実施例９．》 −− キュプロファン平膜へのアミカシングラフト重合
反応 −− ラジカル重合により２−（４−アジドベンゾイルオキ
シ）エチルメタクリレート：スチレン：Ｏ−ニトロベン
ジルアクリレートの三元共重合体（仕込モル比３：６：
１）（以下ＰＡＳＮ）を合成した。銅アンモニア法によ
り再生したキュプロファン膜に、前記ＰＡＳＮを塗布、
薄膜を形成した後、紫外線を照射した。次に当該キュプ
ロファン膜を１％のアミカシンと水溶性カルボジイミド
を含有するリン酸緩衝液に浸漬し、３７℃で１６時間反
応させた。次に、注射用蒸留水１，０００ｍｌで洗浄し
た。次に当該キュプロファン膜を１規定の水酸化ナトリ
ウム水溶液で５分間洗浄した後、注射用蒸留水１，００
０ ｍｌで洗浄、乾燥した。
反応 −− ラジカル重合により２−（４−アジドベンゾイルオキ
シ）エチルメタクリレート：スチレン：Ｏ−ニトロベン
ジルアクリレートの三元共重合体（仕込モル比３：６：
１）（以下ＰＡＳＮ）を合成した。銅アンモニア法によ
り再生したキュプロファン膜に、前記ＰＡＳＮを塗布、
薄膜を形成した後、紫外線を照射した。次に当該キュプ
ロファン膜を１％のアミカシンと水溶性カルボジイミド
を含有するリン酸緩衝液に浸漬し、３７℃で１６時間反
応させた。次に、注射用蒸留水１，０００ｍｌで洗浄し
た。次に当該キュプロファン膜を１規定の水酸化ナトリ
ウム水溶液で５分間洗浄した後、注射用蒸留水１，００
０ ｍｌで洗浄、乾燥した。
【００２８】《実施例１０．》 −− アミカシングラフトキュプロファン平膜による大
腸菌の吸着 −− 実施例９で調製したアミカシングラフトキュプロファン
平膜をスパラル型モジュール（２枚の平膜を封筒状に接
着し、開放された一端を集水管（穴の多数あいた中心パ
イプ）に接続して供給水を流すスペーサー（プラスチッ
クネット等）と共に中心パイプにのり巻き状に巻き込ん
だ構造のもの）とし、１規定の水酸化ナトリウム水溶液
１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジェンフリ
ー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）懸濁液（１ｘ１０４ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライし流出させた。流出液
０．１ｍｌを普通寒天平板に撒き、２４時間後にコロニ
ーの形成を観察した（流出液１０ｍｌ：１００枚につい
て実施）。その結果、流出液１０ｍｌについて大腸菌は
検出出来なかった。
腸菌の吸着 −− 実施例９で調製したアミカシングラフトキュプロファン
平膜をスパラル型モジュール（２枚の平膜を封筒状に接
着し、開放された一端を集水管（穴の多数あいた中心パ
イプ）に接続して供給水を流すスペーサー（プラスチッ
クネット等）と共に中心パイプにのり巻き状に巻き込ん
だ構造のもの）とし、１規定の水酸化ナトリウム水溶液
１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジェンフリ
ー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）懸濁液（１ｘ１０４ｃｅｌ
ｌｓ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライし流出させた。流出液
０．１ｍｌを普通寒天平板に撒き、２４時間後にコロニ
ーの形成を観察した（流出液１０ｍｌ：１００枚につい
て実施）。その結果、流出液１０ｍｌについて大腸菌は
検出出来なかった。
【００２９】《実施例１１．》 −−ストレプトマイシン固定化カルボキシルメチルキチ
ン中空糸膜の調製−− カルボキシルメチルキチン製中空糸を充填したミニモジ
ュール（乾燥状態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８
０ｍｍ、有効長１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末
端接着部の外径７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１
５ｍｍ）の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、
１％の濃度に調製したＢＩＳ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎ
ｉｍｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ）（Ｐｉｅｒｃｅ ｃ
ｈｅｍｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）溶液を６０分間循
環させた。次に、当該中空糸膜の内部にリン酸緩衝液を
３０分間循環させ、洗浄した。次に、当該中空糸膜の内
部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、１％の濃度に
調製したストレプトマイシン溶液を４℃で終夜、循環さ
せた。最後に、当該中空糸膜の内部にグリシン溶液−ト
リス緩衝液（ｐＨ８．０）を９時間循環させ、未反応の
活性基をブロックし、燐酸緩衝液１００ｍｌで洗浄し
た。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化量は
９マイクログラム／ｃｍ−２であった。
ン中空糸膜の調製−− カルボキシルメチルキチン製中空糸を充填したミニモジ
ュール（乾燥状態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８
０ｍｍ、有効長１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末
端接着部の外径７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１
５ｍｍ）の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、
１％の濃度に調製したＢＩＳ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎ
ｉｍｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ）（Ｐｉｅｒｃｅ ｃ
ｈｅｍｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ社製）溶液を６０分間循
環させた。次に、当該中空糸膜の内部にリン酸緩衝液を
３０分間循環させ、洗浄した。次に、当該中空糸膜の内
部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、１％の濃度に
調製したストレプトマイシン溶液を４℃で終夜、循環さ
せた。最後に、当該中空糸膜の内部にグリシン溶液−ト
リス緩衝液（ｐＨ８．０）を９時間循環させ、未反応の
活性基をブロックし、燐酸緩衝液１００ｍｌで洗浄し
た。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化量は
９マイクログラム／ｃｍ−２であった。
【００３０】《実施例１２．》 −− ストレプトマイシン固定化カルボキシルメチルキ
チン中空糸膜による大腸菌由来ＤＮＡの吸着 −− 実施例１１で調製したストレプトマイシン固定化カルボ
キシルメチルキチン中空糸膜を１規定の水酸化ナトリウ
ム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジ
ェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（Ｄ
ＡＮ濃度：１マイクログラム／ｍｌ）５０ｍｌをアプラ
イ、流出させた。流出液についてＤＡＮの検出を行なっ
たが、ＤＡＮは検出されなかった。
チン中空糸膜による大腸菌由来ＤＮＡの吸着 −− 実施例１１で調製したストレプトマイシン固定化カルボ
キシルメチルキチン中空糸膜を１規定の水酸化ナトリウ
ム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジ
ェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（Ｄ
ＡＮ濃度：１マイクログラム／ｍｌ）５０ｍｌをアプラ
イ、流出させた。流出液についてＤＡＮの検出を行なっ
たが、ＤＡＮは検出されなかった。
【００３１】《実施例１３．》 −−ストレプトマイシン固定化カルボキシルメチルキチ
ン中空糸膜の調製−− カルボキシルメチルキチン製中空糸を充填したミニモジ
ュール（乾燥状態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８
０ｍｍ、有効長１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末
端接着部の外径７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１
５ｍｍ）の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、
１％の濃度に調製した１−ｅｔｈｙ１−３（３−ｄｉｅ
ｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍ
ｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＥＣＤ）溶液を６
０分間循環させた。次に、当該中空糸膜の内部にリン酸
緩衝液を３０分間循環させ、洗浄した。次に、当該中空
糸膜の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、１％
の濃度に調製したストレプトマイシン溶液を４℃で１０
時間循環させた。最後に、当該中空糸膜の内部にグリシ
ン溶液−トリス緩衝液（ｐＨ８．０）を９時間循環さ
せ、未反応の活性基をブロックし、燐酸緩衝液で３回洗
浄した。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化
量は１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
ン中空糸膜の調製−− カルボキシルメチルキチン製中空糸を充填したミニモジ
ュール（乾燥状態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８
０ｍｍ、有効長１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末
端接着部の外径７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１
５ｍｍ）の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、
１％の濃度に調製した１−ｅｔｈｙ１−３（３−ｄｉｅ
ｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍ
ｉｄｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＥＣＤ）溶液を６
０分間循環させた。次に、当該中空糸膜の内部にリン酸
緩衝液を３０分間循環させ、洗浄した。次に、当該中空
糸膜の内部にｐＨ７．４のリン酸緩衝液に溶解し、１％
の濃度に調製したストレプトマイシン溶液を４℃で１０
時間循環させた。最後に、当該中空糸膜の内部にグリシ
ン溶液−トリス緩衝液（ｐＨ８．０）を９時間循環さ
せ、未反応の活性基をブロックし、燐酸緩衝液で３回洗
浄した。当該中空糸膜へのストレプトマイシンの固定化
量は１０マイクログラム／ｃｍ−２であった。
【００３２】《実施例１４．》 −− ストレプトマイシン固定化カルボキシルメチルキ
チン中空糸膜による大腸菌由来ＤＮＡの吸着 −− 実施例１３で調製したストレプトマイシン固定化カルボ
キシルメチルキチン中空糸膜を１規定の水酸化ナトリウ
ム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジ
ェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（Ｄ
ＡＮ濃度：１０ｐｇ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライ、流出
させた。流出液についてＤＡＮの検出を行なったが、Ｄ
ＡＮは検出されなかった。
チン中空糸膜による大腸菌由来ＤＮＡの吸着 −− 実施例１３で調製したストレプトマイシン固定化カルボ
キシルメチルキチン中空糸膜を１規定の水酸化ナトリウ
ム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジ
ェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該モジュールに
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（Ｄ
ＡＮ濃度：１０ｐｇ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライ、流出
させた。流出液についてＤＡＮの検出を行なったが、Ｄ
ＡＮは検出されなかった。
【００３３】《実施例１５．》 −− ストレプトマイシン固定化無孔中空糸膜の調製
−− キトサン製無孔中空糸を充填したモジュール（内径２０
０マイクロメーター、膜厚２０マイクロメーター、有効
長１９５ｍｍ、有効膜面積１．５ｍ２、血液容量９０ｍ
ｌ）を筏等の方法（岸田晶夫、筏義人：人工臓器、１
７：４７〜５０、１９８８）に準じて、ストレプトマイ
シン燐酸緩衝液を処理することにより、表面にストレプ
トマイシンを固定化したモジュールを調製した。当該ダ
イアライザーの内部を１規定の水酸化ナトリウム水溶液
１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジェンフリ
ー蒸留水で充分に洗浄した。当該無孔中空糸膜へのスト
レプトマイシンの固定化量は１２マイクログラム／ｃｍ
−２であった。
−− キトサン製無孔中空糸を充填したモジュール（内径２０
０マイクロメーター、膜厚２０マイクロメーター、有効
長１９５ｍｍ、有効膜面積１．５ｍ２、血液容量９０ｍ
ｌ）を筏等の方法（岸田晶夫、筏義人：人工臓器、１
７：４７〜５０、１９８８）に準じて、ストレプトマイ
シン燐酸緩衝液を処理することにより、表面にストレプ
トマイシンを固定化したモジュールを調製した。当該ダ
イアライザーの内部を１規定の水酸化ナトリウム水溶液
１００ｍｌで５分間洗浄した後、更にパイロジェンフリ
ー蒸留水で充分に洗浄した。当該無孔中空糸膜へのスト
レプトマイシンの固定化量は１２マイクログラム／ｃｍ
−２であった。
【００３４】《実施例１６．》 −− ストレプトマイシン固定化無孔中空糸膜によるリ
ポ多糖の吸着 −− リポ多糖を含有する３％インターフェロン溶液（Ｅ．ｃ
ｏｌｉ Ｏ１５由来：１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを
調製し、実施例１５で調製したストレプトマイシン固定
化無孔中空糸膜充填モジュールを組み込んだ１，０００
ｍｌの閉鎖回路を作製し、ＱＢ＝１００ｍｌにて再循環
させた。サンプリングは開始時、３０分後、６０分後、
１２０分後に行なった。サンプリング液についてＬＡＬ
活性を測定した。ＬＡＬ活性はエンドスペーシー、カイ
ネティック法（生化学工業製）で測定した。その結果、
開始時サンプルのリポ多糖含量は、０．９８ｎｇ／ｍｌ
であった。また、３０分後、６０分後、１２０分後サン
プルのリポ多糖含量は、何れも検出限界以下であった。
ポ多糖の吸着 −− リポ多糖を含有する３％インターフェロン溶液（Ｅ．ｃ
ｏｌｉ Ｏ１５由来：１ｎｇ／ｍｌ）１，０００ｍｌを
調製し、実施例１５で調製したストレプトマイシン固定
化無孔中空糸膜充填モジュールを組み込んだ１，０００
ｍｌの閉鎖回路を作製し、ＱＢ＝１００ｍｌにて再循環
させた。サンプリングは開始時、３０分後、６０分後、
１２０分後に行なった。サンプリング液についてＬＡＬ
活性を測定した。ＬＡＬ活性はエンドスペーシー、カイ
ネティック法（生化学工業製）で測定した。その結果、
開始時サンプルのリポ多糖含量は、０．９８ｎｇ／ｍｌ
であった。また、３０分後、６０分後、１２０分後サン
プルのリポ多糖含量は、何れも検出限界以下であった。
【００３５】《実施例１７．》 −− ストレプトマイシン固定化無孔中空糸膜の再生
−− 実施例１６で使用したストレプトマイシン固定化無孔中
空糸膜充填モジュールの内部を酢酸緩衝液（ｐＨ４．０
５＋ＮａＣｌ １Ｍ）１，０００ｍｌで洗浄した。次に
当該モジュールの内部をトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
８．０＋ＮａＣｌ１Ｍ）１，０００ｍｌで洗浄した。更
に当該モジュールの内部を注射用蒸留水１，０００ｍｌ
で洗浄した。更に当該モジュールの内部を１規定の水酸
化ナトリウム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更
にパイロジェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該方
法により洗浄したモジュールは、新規調製品と同程度の
吸着活性を示した。当該方法により洗浄したモジュール
は、洗浄１０回迄新規調製品の９０％の吸着活性を維持
することが可能であった。
−− 実施例１６で使用したストレプトマイシン固定化無孔中
空糸膜充填モジュールの内部を酢酸緩衝液（ｐＨ４．０
５＋ＮａＣｌ １Ｍ）１，０００ｍｌで洗浄した。次に
当該モジュールの内部をトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
８．０＋ＮａＣｌ１Ｍ）１，０００ｍｌで洗浄した。更
に当該モジュールの内部を注射用蒸留水１，０００ｍｌ
で洗浄した。更に当該モジュールの内部を１規定の水酸
化ナトリウム水溶液１００ｍｌで５分間洗浄した後、更
にパイロジェンフリー蒸留水で充分に洗浄した。当該方
法により洗浄したモジュールは、新規調製品と同程度の
吸着活性を示した。当該方法により洗浄したモジュール
は、洗浄１０回迄新規調製品の９０％の吸着活性を維持
することが可能であった。
【００３６】《比較例１．》 −− ベンベルグ製中空糸を充填したミニモジュールに
よる大腸菌、大腸菌由来リポ多糖および大腸菌由来ＤＮ
Ａの吸着試験 −− ベンベルグ製中空糸を充填したミニモジュール（乾燥状
態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８０ｍｍ、有効長
１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末端接着部の外径
７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１５ｍｍ：旭化成
製）をパイロジェンフリー蒸留水で充分に洗浄し、パイ
ロジェンフリーとした。当該モジュールに大腸菌（Ｅ．
ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（ＤＡＮ濃度：８
ｐｇ／１マイクログラム／ｍｌ）５０ｍｌをアプライし
流出させた。透析液流量は５００ｍｌ／ｍｉｎで流し
た。流出液についてＤＡＮの検出を行なったが、ＤＡＮ
は殆ど吸着されなかった。当該ミニモジュールについ
て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）懸濁液（１ｘ１
０２ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライ、流出させ
た。流出液について大腸菌の検出を行なったが、大腸菌
は殆ど吸着されなかった。当該モジュールにリポ多糖含
有１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１由来：
１０ｎｇ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライした。流出液につ
いてリムルステスト（凝固法：和光純薬製）、および発
色基質による方法（エンドスペーシー：生化学工業製）
でリポ多糖を定量を行なったが、何れの方法でも９〜１
０ｎｇ／ｍｌのリポ多糖が検出された。
よる大腸菌、大腸菌由来リポ多糖および大腸菌由来ＤＮ
Ａの吸着試験 −− ベンベルグ製中空糸を充填したミニモジュール（乾燥状
態での膜面積０．０１ｍｍ２、内径１８０ｍｍ、有効長
１６ｃｍ、本数１００本、モジュール末端接着部の外径
７ｍｍ、モジュール末端接着部の長さ１５ｍｍ：旭化成
製）をパイロジェンフリー蒸留水で充分に洗浄し、パイ
ロジェンフリーとした。当該モジュールに大腸菌（Ｅ．
ｃｏｌｉ Ｏ１５７）由来ＤＮＡ溶液（ＤＡＮ濃度：８
ｐｇ／１マイクログラム／ｍｌ）５０ｍｌをアプライし
流出させた。透析液流量は５００ｍｌ／ｍｉｎで流し
た。流出液についてＤＡＮの検出を行なったが、ＤＡＮ
は殆ど吸着されなかった。当該ミニモジュールについ
て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１５７）懸濁液（１ｘ１
０２ｃｅｌｌｓ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライ、流出させ
た。流出液について大腸菌の検出を行なったが、大腸菌
は殆ど吸着されなかった。当該モジュールにリポ多糖含
有１％アルブミン溶液（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１由来：
１０ｎｇ／ｍｌ）５０ｍｌをアプライした。流出液につ
いてリムルステスト（凝固法：和光純薬製）、および発
色基質による方法（エンドスペーシー：生化学工業製）
でリポ多糖を定量を行なったが、何れの方法でも９〜１
０ｎｇ／ｍｌのリポ多糖が検出された。
【００３７】《比較例２．》 −− セルロースジアセテート膜ダイアライザーとアミ
カシン結合セルロファインとの比較 −− セルロースジアセテート膜ダイアライザー（Ｍｅｌｔｒ
ａｘ１６０：膜面積１．６ｍ２、中空糸内径１９５マイ
クロメーター、膜厚３０マイクロメーター：泉工医科
製）に福井等の方法（福井博義等、透析会誌、２６：１
２６７〜１２７３（１９９３））に準じて、アミカシン
をグラフト重合させた。当該ダイアライザーの内側に、
クエン酸ナトリウム（１０ｍｌ／ｌ血液）を加えたリポ
多糖含有ウシ血液２００ｍｌ（リポ多糖含量１ｎｇ／ｍ
ｌ）を２時間循環させた。中空糸外側には、生理食塩液
を流した。循環開始３０分、１時間、２時間後に５ｍｌ
のバルク血液を分取した。循環液について、リムルステ
スト（凝固法：和光純薬製）、および発色基質による方
法（エンドスペーシー：生化学工業製）でリポ多糖を定
量した。循環開始３０分後のバルク血液、循環開始１時
間後のバルク血液、循環開始２時間後のバルク血液の何
れからもリポ多糖は検出されなかった。次に、本発明の
発明者らの方法（特許第１８６５２８４号）により調製
したアミカシン結合セルロファイン（アミカシン結合
量：５ｍｇ／ｍｌ）に上記クエン酸ナトリウム（１０ｍ
ｌ／ｌ血液）を加えたリポ多糖含有ウシ血液２００ｍｌ
（リポ多糖含量１ｎｇ／ｍｌ）をアプライし、流速１ｍ
ｌ／ｍｉｎで流下させた。流下開始１時間後の流下液に
ついて、リムルステスト（凝固法：和光純薬製）、およ
び発色基質による方法（エンドスペーシー：生化学工業
製）でリポ多糖の定量を行なったが、何れの方法でもリ
ポ多糖は検出されなかったが、当該ゲルによる流下開始
１時間後のウシ血液の回収量は、６０ ｍｌであった。
一方、上記アミカシングラフト膜充填ダイアライザーに
より、循環開始１時間後に得られたウシ血液は２００ｍ
ｌ（リポ多糖含量：１ｐｇ／ｍｌ以下）であった。
カシン結合セルロファインとの比較 −− セルロースジアセテート膜ダイアライザー（Ｍｅｌｔｒ
ａｘ１６０：膜面積１．６ｍ２、中空糸内径１９５マイ
クロメーター、膜厚３０マイクロメーター：泉工医科
製）に福井等の方法（福井博義等、透析会誌、２６：１
２６７〜１２７３（１９９３））に準じて、アミカシン
をグラフト重合させた。当該ダイアライザーの内側に、
クエン酸ナトリウム（１０ｍｌ／ｌ血液）を加えたリポ
多糖含有ウシ血液２００ｍｌ（リポ多糖含量１ｎｇ／ｍ
ｌ）を２時間循環させた。中空糸外側には、生理食塩液
を流した。循環開始３０分、１時間、２時間後に５ｍｌ
のバルク血液を分取した。循環液について、リムルステ
スト（凝固法：和光純薬製）、および発色基質による方
法（エンドスペーシー：生化学工業製）でリポ多糖を定
量した。循環開始３０分後のバルク血液、循環開始１時
間後のバルク血液、循環開始２時間後のバルク血液の何
れからもリポ多糖は検出されなかった。次に、本発明の
発明者らの方法（特許第１８６５２８４号）により調製
したアミカシン結合セルロファイン（アミカシン結合
量：５ｍｇ／ｍｌ）に上記クエン酸ナトリウム（１０ｍ
ｌ／ｌ血液）を加えたリポ多糖含有ウシ血液２００ｍｌ
（リポ多糖含量１ｎｇ／ｍｌ）をアプライし、流速１ｍ
ｌ／ｍｉｎで流下させた。流下開始１時間後の流下液に
ついて、リムルステスト（凝固法：和光純薬製）、およ
び発色基質による方法（エンドスペーシー：生化学工業
製）でリポ多糖の定量を行なったが、何れの方法でもリ
ポ多糖は検出されなかったが、当該ゲルによる流下開始
１時間後のウシ血液の回収量は、６０ ｍｌであった。
一方、上記アミカシングラフト膜充填ダイアライザーに
より、循環開始１時間後に得られたウシ血液は２００ｍ
ｌ（リポ多糖含量：１ｐｇ／ｍｌ以下）であった。
【００３８】
【発明の効果】本発明にかかわる化学療法剤を固定化し
た多孔性構造体（多孔性膜および多孔性中空繊維）、お
よび化学療法剤を固定化した無孔構造体（無孔膜および
無孔性中空繊維：医療用途に主として多孔性構造体を使
用し、産業用途に主として無孔構造体を使用する。）に
より、短時間、省エネルギー、省スペース、高吸着性能
でリポ多糖、核酸および微生物の吸着が可能である。更
に、本発明にかかわる多孔性構造体および無孔構造体
は、将来は、現在アフィニティー吸着分離が実施されて
いる分野で、セファロース等の担体に置換されるものと
考えられる。
た多孔性構造体（多孔性膜および多孔性中空繊維）、お
よび化学療法剤を固定化した無孔構造体（無孔膜および
無孔性中空繊維：医療用途に主として多孔性構造体を使
用し、産業用途に主として無孔構造体を使用する。）に
より、短時間、省エネルギー、省スペース、高吸着性能
でリポ多糖、核酸および微生物の吸着が可能である。更
に、本発明にかかわる多孔性構造体および無孔構造体
は、将来は、現在アフィニティー吸着分離が実施されて
いる分野で、セファロース等の担体に置換されるものと
考えられる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｚ 19/34 19/34 Ｚ // Ｃ０７Ｈ 21/00 Ｃ０７Ｈ 21/00
Claims (9)
- 【請求項１】 不溶性担体に化学療法剤を固定化したこ
とを特徴とする、リポ多糖、核酸および微生物の吸着
体。 - 【請求項２】 不溶性担体が多孔性膜であることを特徴
とする、請求項１記載のリポ多糖、核酸および微生物の
吸着体。 - 【請求項３】 不溶性担体が無孔膜であることを特徴と
する、請求項１記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸
着体。 - 【請求項４】 不溶性担体が多孔性中空繊維であること
を特徴とする、請求項１記載のリポ多糖、核酸および微
生物の吸着体。 - 【請求項５】 不溶性担体が無孔中空繊維であることを
特徴とする、請求項１記載のリポ多糖、核酸および微生
物の吸着体。 - 【請求項６】 不溶性担体が血液適合性素材からなるこ
とを特徴とする、請求項１記載のリポ多糖、核酸および
微生物の吸着体。 - 【請求項７】 化学療法剤をアミノ糖系抗生物質および
その誘導体、アミノサイクリトール系抗生物質およびそ
の誘導体、アクラルビシンおよびその誘導体、アクチノ
マイシンＤおよびその誘導体、バシトラシンおよびその
誘導体、ブレオマイシンおよびその誘導体、ポリペプチ
ド系抗生物質およびその誘導体、ドキソルビシンおよび
その誘導体、ドキシサイクリンおよびその誘導体、マイ
トマイシンＣおよびその誘導体、ストレプトスリシンお
よびその誘導体からなる群から選択することを特徴とす
る、請求項１記載のリポ多糖、核酸および微生物の吸着
体。 - 【請求項８】 化学療法剤と担体との結合がスペーサー
を介してなされることを特徴とする、請求項１記載の液
体中のリポ多糖、核酸および微生物の吸着体。 - 【請求項９】 リポ多糖および／または、核酸および／
または、微生物を含有する液体と、請求項１記載の化学
療法剤を固定化した担体とを接触させた後、当該化学療
法剤を固定化した担体と、当該液体とを分離することを
特徴とする、リポ多糖、核酸および微生物の吸着除去方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9366128A JPH11165066A (ja) | 1997-12-02 | 1997-12-02 | リポ多糖、核酸および微生物の吸着体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9366128A JPH11165066A (ja) | 1997-12-02 | 1997-12-02 | リポ多糖、核酸および微生物の吸着体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11165066A true JPH11165066A (ja) | 1999-06-22 |
Family
ID=18485995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9366128A Pending JPH11165066A (ja) | 1997-12-02 | 1997-12-02 | リポ多糖、核酸および微生物の吸着体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11165066A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9068979B2 (en) | 2007-05-21 | 2015-06-30 | Seiko Epson Corporation | Micro bio sensor and method for manufacturing the micro bio sensor |
-
1997
- 1997-12-02 JP JP9366128A patent/JPH11165066A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9068979B2 (en) | 2007-05-21 | 2015-06-30 | Seiko Epson Corporation | Micro bio sensor and method for manufacturing the micro bio sensor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2040827B1 (en) | Use of a colloidal suspension of a cationic polymer to treat a semipermeable membrane for medical use | |
| US5667684A (en) | Material for removing HIV and its related substances | |
| KR20140015124A (ko) | 체액으로부터 생물학적 유해 물질을 제거하기 위한 장치 및 방법 | |
| EP0880544A1 (en) | Surface modified affinity separation membrane | |
| US6090292A (en) | Device for purifying solutions containing proteins and use of the device | |
| JP2000217575A (ja) | 生理活性物質、ヒト血球分化細胞およびヒト細胞の吸着体。 | |
| JPH11165066A (ja) | リポ多糖、核酸および微生物の吸着体 | |
| CN114669282B (zh) | 一种内毒素吸附剂及其制备方法和应用 | |
| JP2777604B2 (ja) | 体液処理用吸着材 | |
| JPH0615167A (ja) | 多孔性分離膜 | |
| Chandy et al. | Preparation and performance of chitosan encapsulated activated charcoal (ACCB) adsorbents for small molecules | |
| JP2814399B2 (ja) | 全血処理用吸着器 | |
| JP3353945B2 (ja) | 被覆担体 | |
| CN106512749B (zh) | 一种用于血液净化的双面改性分离膜及其制备、使用方法 | |
| Beena et al. | Chitosan: A novel matrix for hemoperfusion | |
| JPH0245064A (ja) | インターロイキン２レセプターの除去装置およびそれを備えた血液体外循環装置 | |
| JPH11216360A (ja) | リガンド固定化無孔性構造体 | |
| JP3157026B2 (ja) | 血液浄化用吸着材 | |
| JP2003135596A (ja) | 病原性微粒子吸着性中空糸及び病原性微粒子除去装置 | |
| WO2000041718A1 (en) | Method and apparatus for selectively removing xenoreactive antibodies from blood, serum or plasma | |
| JP2000189792A (ja) | リポ多糖吸着体およびリポ多糖の吸着除去方法。 | |
| JP2575487B2 (ja) | 血液処理材及び血液浄化器 | |
| JPS5929197B2 (ja) | 蛋白質の捕集法 | |
| JP5214857B2 (ja) | 多孔質基材 | |
| JPH0611324B2 (ja) | 多孔質中空糸膜 |