JPH1087662A - リゼルギン酸ジエチルアミドのイムノアッセイ用試薬 - Google Patents
リゼルギン酸ジエチルアミドのイムノアッセイ用試薬Info
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- JPH1087662A JPH1087662A JP9175880A JP17588097A JPH1087662A JP H1087662 A JPH1087662 A JP H1087662A JP 9175880 A JP9175880 A JP 9175880A JP 17588097 A JP17588097 A JP 17588097A JP H1087662 A JPH1087662 A JP H1087662A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 ＬＳＤ及びその代謝産物を検出するためのイ
ムノアッセイにおいて使用するために、優れた性能特性
を有する抗原性試薬、抗体試薬及びトレーサー試薬の調
製のために有用なハプテン誘導体を提供する。 【解決手段】 下記式Ｉ 〔式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してＨまたはＲ３Ｒ４か
ら選択され、但し、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはＨ
であって、Ｒ１及びＲ２の両者が同時にＨであることは
なく；Ｒ３は、Ｒ４がＣＯＲ５である場合には、結合ま
たは１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化
水素であるか、あるいはＲ４がＮＨＲ５である場合に
は、１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化
水素であり；Ｒ５はＨ、ＬまたはＬＸから選択され；Ｌ
は結合基であり；並びにＸはＬを介して結合される検出
子または担体分子である〕を有する化合物を提供する。
ムノアッセイにおいて使用するために、優れた性能特性
を有する抗原性試薬、抗体試薬及びトレーサー試薬の調
製のために有用なハプテン誘導体を提供する。 【解決手段】 下記式Ｉ 〔式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してＨまたはＲ３Ｒ４か
ら選択され、但し、Ｒ１及びＲ２の少なくとも一つはＨ
であって、Ｒ１及びＲ２の両者が同時にＨであることは
なく；Ｒ３は、Ｒ４がＣＯＲ５である場合には、結合ま
たは１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化
水素であるか、あるいはＲ４がＮＨＲ５である場合に
は、１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化
水素であり；Ｒ５はＨ、ＬまたはＬＸから選択され；Ｌ
は結合基であり；並びにＸはＬを介して結合される検出
子または担体分子である〕を有する化合物を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、新規リゼルギン
酸ジエチルアミド誘導体、並びにこれらの誘導体の抗−
リゼルギン酸ジエチルアミド抗体の生成における使用、
並びにこれらの抗体の、生物学的液体試料中のリゼルギ
ン酸ジエチルアミド及びその代謝産物についての改良さ
れたイムノアッセイにおける試薬としての使用に関する
ものである。
酸ジエチルアミド誘導体、並びにこれらの誘導体の抗−
リゼルギン酸ジエチルアミド抗体の生成における使用、
並びにこれらの抗体の、生物学的液体試料中のリゼルギ
ン酸ジエチルアミド及びその代謝産物についての改良さ
れたイムノアッセイにおける試薬としての使用に関する
ものである。
【０００２】
【従来の技術】ＬＳＤとして知られる（＋）−リゼルギ
ン酸ジエチルアミド、９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，Ｎ−
ジエチル−６−メチルエルゴリン−８β−カルボキサミ
ドは、中枢神経系に作用する幻覚薬であり、知覚認知を
変化させる。２０〜８０μｇのＬＳＤの摂取は幻覚を誘
導するに充分である（Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．及びＦｏｌｔ
ｚ，Ｒ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６４，１５７８−１５８
５，１９９２）。ＬＳＤの使用は、世界中において薬剤
及び法律関連省庁の問題であり続けている。血清及び尿
等の生物学的液体中のＬＳＤ及びその代謝産物、例えば
Ｎ−デスメチルＬＳＤ（ノル−ＬＳＤ）の濃度を測定す
るために使用される現在の方法は、蛍光分光法、ＧＣ／
タンデムＭＳ、ＨＰＬＣ及び放射イムノアッセイ（ＲＩ
Ａ）を含む。しかしながら、蛍光分光法は、非特異的な
干渉を示し、ＬＳＤ、その代謝産物及び他の麦角アルカ
ロイド類の間を識別しない。ＨＰＬＣは、抗体結合によ
る低い非特異的干渉を生じる。しかしながら、この方法
は、時間を消費し、多数の試料の日常的スクリーニング
には適当ではない。イムノアッセイは、迅速な薬剤スク
リーニング及び最も重要なこととしては高い感度を含め
て、前述した分析方法を凌ぐ多くの優位点を提供するも
のである。
ン酸ジエチルアミド、９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，Ｎ−
ジエチル−６−メチルエルゴリン−８β−カルボキサミ
ドは、中枢神経系に作用する幻覚薬であり、知覚認知を
変化させる。２０〜８０μｇのＬＳＤの摂取は幻覚を誘
導するに充分である（Ｎｅｌｓｏｎ，Ｃ．及びＦｏｌｔ
ｚ，Ｒ．Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６４，１５７８−１５８
５，１９９２）。ＬＳＤの使用は、世界中において薬剤
及び法律関連省庁の問題であり続けている。血清及び尿
等の生物学的液体中のＬＳＤ及びその代謝産物、例えば
Ｎ−デスメチルＬＳＤ（ノル−ＬＳＤ）の濃度を測定す
るために使用される現在の方法は、蛍光分光法、ＧＣ／
タンデムＭＳ、ＨＰＬＣ及び放射イムノアッセイ（ＲＩ
Ａ）を含む。しかしながら、蛍光分光法は、非特異的な
干渉を示し、ＬＳＤ、その代謝産物及び他の麦角アルカ
ロイド類の間を識別しない。ＨＰＬＣは、抗体結合によ
る低い非特異的干渉を生じる。しかしながら、この方法
は、時間を消費し、多数の試料の日常的スクリーニング
には適当ではない。イムノアッセイは、迅速な薬剤スク
リーニング及び最も重要なこととしては高い感度を含め
て、前述した分析方法を凌ぐ多くの優位点を提供するも
のである。
【０００３】ＬＳＤ等の薬剤のイムノアッセイにおいて
は、前記薬剤またはその代謝産物を含むと考えられる生
物学的液体試料を、標識ＬＳＤ誘導体（標識）の存在下
に抗体と接触させる。薬剤またはその代謝産物が試料中
に存在する限り、抗体に対する結合について競争が起こ
り、結合したまま残る標識誘導体の量は、試料中の薬剤
またはその代謝産物との競合の程度に比例して減少する
であろう。
は、前記薬剤またはその代謝産物を含むと考えられる生
物学的液体試料を、標識ＬＳＤ誘導体（標識）の存在下
に抗体と接触させる。薬剤またはその代謝産物が試料中
に存在する限り、抗体に対する結合について競争が起こ
り、結合したまま残る標識誘導体の量は、試料中の薬剤
またはその代謝産物との競合の程度に比例して減少する
であろう。
【０００４】ＬＳＤについての蛍光イムノアッセイは、
記述がなされている（Ｂ．Ｌａｗ等、Ａｎａｌ．Ｐｒｏ
ｃ．２０，６０６，１９８３）。抗体生成のために使用
される免疫接合体は、リゼルギン酸のカルボキシル基か
ら調製され（例えば、Ｈ．Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６８，１４８３−
１４８７，１９７１参照）、それから誘導される抗体
は、多くの麦角アルカロイドと高い交差反応性を有する
ものと考えられる。この方法に使用されるトレーサー
は、フルオレセインアミンを分子の酸残基に接合するこ
とによって製造される。該アッセイ系の感度は、ＬＳＤ
の５−４０ｎｇ／ｍｌの範囲である。この方法は、迅速
であるという優位点を持つものではあるが、ＲＩＡに比
べて検出限界においては乏しい。
記述がなされている（Ｂ．Ｌａｗ等、Ａｎａｌ．Ｐｒｏ
ｃ．２０，６０６，１９８３）。抗体生成のために使用
される免疫接合体は、リゼルギン酸のカルボキシル基か
ら調製され（例えば、Ｈ．Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６８，１４８３−
１４８７，１９７１参照）、それから誘導される抗体
は、多くの麦角アルカロイドと高い交差反応性を有する
ものと考えられる。この方法に使用されるトレーサー
は、フルオレセインアミンを分子の酸残基に接合するこ
とによって製造される。該アッセイ系の感度は、ＬＳＤ
の５−４０ｎｇ／ｍｌの範囲である。この方法は、迅速
であるという優位点を持つものではあるが、ＲＩＡに比
べて検出限界においては乏しい。
【０００５】ＬＳＤについての放射イムノアッセイは記
述されており、それにおいてはＬＳＤ免疫接合体はリゼ
ルギン酸のカルボキシル基から調製される（例えば、
Ｈ．Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．６８，１４８３−１４８７，１９７１参
照）。しかしながら、該免疫接合体から誘導される抗体
は、ＬＳＤに対して高い特異性を持つものではない。エ
ルゴシン、エルゴノビン、エルゴタミン及びメチゼルギ
ド（メチルエルゴノビンとしても知られる）等の数種の
麦角アルカロイドは、ＬＳＤ抗体に対する結合について
競合を示し、望ましからぬ擬陽性の結果を生じている。
述されており、それにおいてはＬＳＤ免疫接合体はリゼ
ルギン酸のカルボキシル基から調製される（例えば、
Ｈ．Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．６８，１４８３−１４８７，１９７１参
照）。しかしながら、該免疫接合体から誘導される抗体
は、ＬＳＤに対して高い特異性を持つものではない。エ
ルゴシン、エルゴノビン、エルゴタミン及びメチゼルギ
ド（メチルエルゴノビンとしても知られる）等の数種の
麦角アルカロイドは、ＬＳＤ抗体に対する結合について
競合を示し、望ましからぬ擬陽性の結果を生じている。
【０００６】血清及び尿中のＬＳＤに対する別の放射イ
ムノアッセイが記述されており（Ｗ．Ａ．Ｒａｔｃｌｉ
ｆｆｅ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２３（２），１６９−１
７４，１９７４参照）、これにおいては免疫接合体はホ
ルムアルデヒドの存在下でＬＳＤとウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を縮合させることによる（Ｔａｕｔｏｎ−Ｒ
ｉｇｂｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８１，１６５，１９７３
参照）、マンニッヒ型反応（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａ
ｎｃｅｄ Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４版，９００，１９９２
参照）によって調製される。製造された免疫接合体は、
多くの麦角アルカロイドに対して低い交差反応性を有す
るＬＳＤ抗体を生じる。縮合において形成される結合
は、ＬＳＤ分子のインドール基から誘導される。
ムノアッセイが記述されており（Ｗ．Ａ．Ｒａｔｃｌｉ
ｆｆｅ，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２３（２），１６９−１
７４，１９７４参照）、これにおいては免疫接合体はホ
ルムアルデヒドの存在下でＬＳＤとウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）を縮合させることによる（Ｔａｕｔｏｎ−Ｒ
ｉｇｂｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８１，１６５，１９７３
参照）、マンニッヒ型反応（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａ
ｎｃｅｄ Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４版，９００，１９９２
参照）によって調製される。製造された免疫接合体は、
多くの麦角アルカロイドに対して低い交差反応性を有す
るＬＳＤ抗体を生じる。縮合において形成される結合
は、ＬＳＤ分子のインドール基から誘導される。
【０００７】
【化２】
【０００８】この結合は、インドールの窒素保護基とし
て作用するアセタール及びイミダゾリン（“アミノケタ
ール”と称する）に類似する。これらの基は、それぞれ
酸性媒体中で加水分解に対して感受性であるので、この
結合は酸性媒体中で加水分解により容易に切断される
（例えば、Ａ．Ｊ．Ｓｔｅｒｎ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．５４，２９５３（１９８９）；Ｄ．Ａ．Ｅｖａｎｓ
等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０３，５８１３
（１９８１）；及びＡ．Ｇｉａｎｎｉｓ等、Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ，４４，７１７７（１９８８）参照）。
“アミノケタール”結合を有するＮ，Ｎ’−ジイソプロ
ピリデンフェニルアラニルロイシンは、単にこの物質の
１０％水溶液を中性のｐＨで６０℃にて加熱することに
より切断される（Ｐ．Ｍ．Ｈａｒｄｙ等、Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，１９５４（１９７７）参
照）。従って、この不安定な結合を生じる方法は、イム
ノアッセイのためのハプテン及び安定な結合を有する試
薬の調製において使用されるべきＬＳＤ誘導体の作成の
ためには適当ではない。
て作用するアセタール及びイミダゾリン（“アミノケタ
ール”と称する）に類似する。これらの基は、それぞれ
酸性媒体中で加水分解に対して感受性であるので、この
結合は酸性媒体中で加水分解により容易に切断される
（例えば、Ａ．Ｊ．Ｓｔｅｒｎ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅ
ｍ．５４，２９５３（１９８９）；Ｄ．Ａ．Ｅｖａｎｓ
等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０３，５８１３
（１９８１）；及びＡ．Ｇｉａｎｎｉｓ等、Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ，４４，７１７７（１９８８）参照）。
“アミノケタール”結合を有するＮ，Ｎ’−ジイソプロ
ピリデンフェニルアラニルロイシンは、単にこの物質の
１０％水溶液を中性のｐＨで６０℃にて加熱することに
より切断される（Ｐ．Ｍ．Ｈａｒｄｙ等、Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，１９５４（１９７７）参
照）。従って、この不安定な結合を生じる方法は、イム
ノアッセイのためのハプテン及び安定な結合を有する試
薬の調製において使用されるべきＬＳＤ誘導体の作成の
ためには適当ではない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】従って、特には尿試料
中のＬＳＤ及びその代謝産物を迅速に検出するための非
−放射同位体的なイムノアッセイ方法が大いに望まれ
る。また、安定なハプテン及び免疫原を生成し得る安定
で切断されない結合をもったＬＳＤ誘導体を得ることが
望まれる。更に、ＬＳＤ及びその代謝産物の検出の使用
される抗体は、高度に特異的であるべきで、かつ、他の
麦角アルカロイドと交差反応するべきではない。
中のＬＳＤ及びその代謝産物を迅速に検出するための非
−放射同位体的なイムノアッセイ方法が大いに望まれ
る。また、安定なハプテン及び免疫原を生成し得る安定
で切断されない結合をもったＬＳＤ誘導体を得ることが
望まれる。更に、ＬＳＤ及びその代謝産物の検出の使用
される抗体は、高度に特異的であるべきで、かつ、他の
麦角アルカロイドと交差反応するべきではない。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、リゼルギン酸
ジエチルアミド（ＬＳＤ）及びその代謝産物を検出する
ためのイムノアッセイにおいて使用するために優れた性
能特性を有する抗原性試薬、抗体試薬及びトレーサー試
薬の調製のために有用なハプテン誘導体を提供するもの
である。本発明の他の実施態様において、ＬＳＤ核は、
アミノアルキルハプテン誘導体を形成するためにインド
ール窒素から誘導される。他の実施態様において、該誘
導体は、ノル−ＬＳＤ分子のピペリジン窒素から生成さ
れる。好ましい誘導は、官能基を形成するアルキル化に
より行われ、これは更にイムノアッセイのための安定な
試薬を提供するために適切な結合、抗原性または標識基
を得るべく修飾され得る。
ジエチルアミド（ＬＳＤ）及びその代謝産物を検出する
ためのイムノアッセイにおいて使用するために優れた性
能特性を有する抗原性試薬、抗体試薬及びトレーサー試
薬の調製のために有用なハプテン誘導体を提供するもの
である。本発明の他の実施態様において、ＬＳＤ核は、
アミノアルキルハプテン誘導体を形成するためにインド
ール窒素から誘導される。他の実施態様において、該誘
導体は、ノル−ＬＳＤ分子のピペリジン窒素から生成さ
れる。好ましい誘導は、官能基を形成するアルキル化に
より行われ、これは更にイムノアッセイのための安定な
試薬を提供するために適切な結合、抗原性または標識基
を得るべく修飾され得る。
【００１１】本発明の化合物は、ＬＳＤから誘導され、
式、
式、
【００１２】
【化３】
【００１３】式中、Ｒ1 及びＲ2 は、独立してＨまたは
Ｒ3 Ｒ4 から選択され、但し、Ｒ1 及びＲ2 の少なくと
も一つはＨであって、Ｒ1 及びＲ2 の両者が同時にＨで
あることはなく；Ｒ3 は、Ｒ4 がＣＯＲ5 である場合に
は結合または１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分
枝鎖炭化水素であるか、あるいはＲ4 がＮＨＲ5 である
場合には、１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝
鎖炭化水素であり；Ｒ5はＨ、ＬまたはＬＸから選択さ
れ；Ｌは結合基であり；ＸはＬを介して結合される検出
子または担体分子である、を有する。
Ｒ3 Ｒ4 から選択され、但し、Ｒ1 及びＲ2 の少なくと
も一つはＨであって、Ｒ1 及びＲ2 の両者が同時にＨで
あることはなく；Ｒ3 は、Ｒ4 がＣＯＲ5 である場合に
は結合または１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分
枝鎖炭化水素であるか、あるいはＲ4 がＮＨＲ5 である
場合には、１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝
鎖炭化水素であり；Ｒ5はＨ、ＬまたはＬＸから選択さ
れ；Ｌは結合基であり；ＸはＬを介して結合される検出
子または担体分子である、を有する。
【００１４】これらの化合物の安定性は、薬剤分子及び
結合基、担体蛋白質または検出子分子の間の好適な結合
の導入によって与えられる。
結合基、担体蛋白質または検出子分子の間の好適な結合
の導入によって与えられる。
【００１５】結合基は、この技術において既知である。
それらは、ハプテン合成のための薬剤誘導体の活性化、
即ち利用可能な部位を付与するために使用される。結合
基の使用は、特定のハプテン及び担体対に依存して、優
位であるか、または必要とされる場合があるであろう。
適当な結合基の選択は、この技術における技量の範囲に
ある。例えば、米国特許５，１４４，０３０及び米国特
許５，２３７，０５７参照。化学的に両立する原子の組
合せのみが、結合基を持つことができる、例えば、担体
及びハプテン間の共有結合を可能にし得て、使用する結
合基の性質に依存してアミド、チオウレア、またはチオ
エーテル結合の形成をもたらすことは当業者には周知で
ある。
それらは、ハプテン合成のための薬剤誘導体の活性化、
即ち利用可能な部位を付与するために使用される。結合
基の使用は、特定のハプテン及び担体対に依存して、優
位であるか、または必要とされる場合があるであろう。
適当な結合基の選択は、この技術における技量の範囲に
ある。例えば、米国特許５，１４４，０３０及び米国特
許５，２３７，０５７参照。化学的に両立する原子の組
合せのみが、結合基を持つことができる、例えば、担体
及びハプテン間の共有結合を可能にし得て、使用する結
合基の性質に依存してアミド、チオウレア、またはチオ
エーテル結合の形成をもたらすことは当業者には周知で
ある。
【００１６】同質二官能性及び異質二官能性リンカーを
含む、慣用の結合基は、本発明のＬＳＤアミン誘導体
を、更に本発明の新規ＬＳＤハプテン及び免疫原合成の
ために活性化すべく、該誘導体に結合するに好適であ
る。好適な官能性リンカーＬの例は、ジメチルスベリミ
デート（ＤＭＳ）、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２−
ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）、ジイ
ソチオシアナトベンゼン、４−イソチオシアナト−ベン
ゾイルクロライド及びｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド エステル（ＭＢＳ）（Ｐｉ
ｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）、４−
（２，５−ジオキソ−１−ピリジニルカルボニル）オキ
ソ−１，１−ビフェニル−１，４−カルボニル クロラ
イド及び５−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）
オキソ−５−オキソペンタノイル クロライドを含む。
このような二官能性リンカーを有する式Ｉの好適な化合
物は、例えば１−［［［（４−イソチオシアナトフェニ
ル）カルボニル］アミノ］−ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチ
ル−Ｄ−リゼルグアミド、１−［３−［［［４’−
［［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］
カルボニル］［１，１’−ビフェニル］−４−イル］カ
ルボニル］アミノ］プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ
−リゼルグアミド、１−［［５−［８ｂ−９，１０−ジ
デヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エル
ゴリン−６−イル］−１，５−ジオキソペンチル］オキ
シ］−２，５−ピロリジンジオン及び１−［［［４’−
［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジ
エチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］プ
ロピル］アミノ］カルボニル］［１，１’−ビフェニ
ル］−４−イル］カルボニル］オキシ］−２，５−ピロ
リジンジオンである。
含む、慣用の結合基は、本発明のＬＳＤアミン誘導体
を、更に本発明の新規ＬＳＤハプテン及び免疫原合成の
ために活性化すべく、該誘導体に結合するに好適であ
る。好適な官能性リンカーＬの例は、ジメチルスベリミ
デート（ＤＭＳ）、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２−
ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）、ジイ
ソチオシアナトベンゼン、４−イソチオシアナト−ベン
ゾイルクロライド及びｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミド エステル（ＭＢＳ）（Ｐｉ
ｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、ＵＳＡ）、４−
（２，５−ジオキソ−１−ピリジニルカルボニル）オキ
ソ−１，１−ビフェニル−１，４−カルボニル クロラ
イド及び５−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）
オキソ−５−オキソペンタノイル クロライドを含む。
このような二官能性リンカーを有する式Ｉの好適な化合
物は、例えば１−［［［（４−イソチオシアナトフェニ
ル）カルボニル］アミノ］−ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチ
ル−Ｄ−リゼルグアミド、１−［３−［［［４’−
［［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］
カルボニル］［１，１’−ビフェニル］−４−イル］カ
ルボニル］アミノ］プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ
−リゼルグアミド、１−［［５−［８ｂ−９，１０−ジ
デヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エル
ゴリン−６−イル］−１，５−ジオキソペンチル］オキ
シ］−２，５−ピロリジンジオン及び１−［［［４’−
［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジ
エチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］プ
ロピル］アミノ］カルボニル］［１，１’−ビフェニ
ル］−４−イル］カルボニル］オキシ］−２，５−ピロ
リジンジオンである。
【００１７】ここにおいて使用されるように、“担体分
子”なる用語は、宿主動物において独立して免疫原応答
を引き出す性質を有し、かつここに記述されるハプテン
誘導体に対して共有的に結合しうる材料を含む。好適な
担体材料は、例えば、蛋白質、ポリペプチド等の天然ま
たは合成高分子化合物等を含む。特に好ましい担体材料
は、蛋白質である。
子”なる用語は、宿主動物において独立して免疫原応答
を引き出す性質を有し、かつここに記述されるハプテン
誘導体に対して共有的に結合しうる材料を含む。好適な
担体材料は、例えば、蛋白質、ポリペプチド等の天然ま
たは合成高分子化合物等を含む。特に好ましい担体材料
は、蛋白質である。
【００１８】本発明の免疫原の調製において使用される
蛋白質材料の正体は、臨界的なものではない。本発明の
実施において有用な好適な蛋白質の例は、ウシガンマグ
ロブリン、ウシチログロブリン（ＢＴＧ）及びウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）を含み、あとの２種の蛋白質が好
ましい。必須ではないが、ＬＳＤまたはその代謝産物及
び誘導体に対する抗体が誘導されるべき動物宿主に対し
て、外来性である蛋白質が使用されることが一般には好
ましい。
蛋白質材料の正体は、臨界的なものではない。本発明の
実施において有用な好適な蛋白質の例は、ウシガンマグ
ロブリン、ウシチログロブリン（ＢＴＧ）及びウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）を含み、あとの２種の蛋白質が好
ましい。必須ではないが、ＬＳＤまたはその代謝産物及
び誘導体に対する抗体が誘導されるべき動物宿主に対し
て、外来性である蛋白質が使用されることが一般には好
ましい。
【００１９】本発明のハプテン誘導体を免疫原担体材料
からなる基に結合させることにより、抗血清及びポリク
ローナル抗体、並びにモノクローナル抗体が生成及び単
離され得、これらはＬＳＤ及びその代謝産物検出のため
のイムノアッセイ用に有用な試薬である。担体は、低分
子量化合物（ここにおいてはハプテン）が、それら自体
を投与した場合には、一般に免疫原性ではないため、担
体が典型的には使用される。担体がハプテンに対して接
合され、該接合体が免疫原として使用される場合に、ハ
プテンのみを用いた免疫によっては生成されないであろ
う抗体が該ハプテンに対して生成される。
からなる基に結合させることにより、抗血清及びポリク
ローナル抗体、並びにモノクローナル抗体が生成及び単
離され得、これらはＬＳＤ及びその代謝産物検出のため
のイムノアッセイ用に有用な試薬である。担体は、低分
子量化合物（ここにおいてはハプテン）が、それら自体
を投与した場合には、一般に免疫原性ではないため、担
体が典型的には使用される。担体がハプテンに対して接
合され、該接合体が免疫原として使用される場合に、ハ
プテンのみを用いた免疫によっては生成されないであろ
う抗体が該ハプテンに対して生成される。
【００２０】ハプテン等の誘導体は、異なるイムノアッ
セイ様式において有用な種々の試薬を提供するために、
種々のトレーサー、検出子または担体分子とこの分野で
周知の方法により結合され得る。検出のために、例えば
トレーサー分子を生成するフルオレセイン等の蛍光剤、
または放射標識もしくは化学発光基等の検出子分子と結
合されうる。ハプテンは、分光測定的またはラテックス
凝集もしくはクロマトグラフィー的試験片等の直接的光
学検出様式において使用するために、着色ラテックスを
含む微粒子に結合され得る。結合される基は、更なる化
学反応によって検出されるエネルギー輸送パートナー、
酵素または他の分子等間接的検出分子に結合されてもよ
い。
セイ様式において有用な種々の試薬を提供するために、
種々のトレーサー、検出子または担体分子とこの分野で
周知の方法により結合され得る。検出のために、例えば
トレーサー分子を生成するフルオレセイン等の蛍光剤、
または放射標識もしくは化学発光基等の検出子分子と結
合されうる。ハプテンは、分光測定的またはラテックス
凝集もしくはクロマトグラフィー的試験片等の直接的光
学検出様式において使用するために、着色ラテックスを
含む微粒子に結合され得る。結合される基は、更なる化
学反応によって検出されるエネルギー輸送パートナー、
酵素または他の分子等間接的検出分子に結合されてもよ
い。
【００２１】本発明において、ＬＳＤハプテン誘導体
は、活性化され、免疫原を形成するために例えばＢＳＡ
またはＢＴＧ等の担体蛋白質に結合される。
は、活性化され、免疫原を形成するために例えばＢＳＡ
またはＢＴＧ等の担体蛋白質に結合される。
【００２２】加えて、これらの担体基は、イムノアッセ
イのための試薬、即ち、ハプテンの固体担体に対する固
定化のための鎖、または微粒子、放射標識等の標識接合
体を形成する標識基を形成するために使用される。標識
接合体は、イムノアッセイにおける、または抗体への結
合について薬剤と競合するＥＬＩＳＡマイクロタイター
プレートアッセイにおける試薬として使用される。該標
識接合物は、例えばある種のアッセイ様式においてマイ
クロタイター・アッセイプレートを被覆するために使用
され得る。好適な標識接合体の例は、１−［［［（４−
チオウレアフェニル）カルボニル］アミノ］ブチル］−
Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド−ＢＴＧ、１−
［［［３−カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イ
ル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド
−ＢＳＡ、５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−
［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イ
ル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＴＧ及び５−［８β
−９，１０−ジデヒドロ−８−「（ジエチルアミノ）カ
ルボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペ
ンチル−ＢＳＡである。
イのための試薬、即ち、ハプテンの固体担体に対する固
定化のための鎖、または微粒子、放射標識等の標識接合
体を形成する標識基を形成するために使用される。標識
接合体は、イムノアッセイにおける、または抗体への結
合について薬剤と競合するＥＬＩＳＡマイクロタイター
プレートアッセイにおける試薬として使用される。該標
識接合物は、例えばある種のアッセイ様式においてマイ
クロタイター・アッセイプレートを被覆するために使用
され得る。好適な標識接合体の例は、１−［［［（４−
チオウレアフェニル）カルボニル］アミノ］ブチル］−
Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド−ＢＴＧ、１−
［［［３−カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イ
ル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド
−ＢＳＡ、５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−
［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イ
ル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＴＧ及び５−［８β
−９，１０−ジデヒドロ−８−「（ジエチルアミノ）カ
ルボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペ
ンチル−ＢＳＡである。
【００２３】本発明は、生物学的液体試料中のリゼルギ
ン酸ジエチルアミド及びその代謝産物の免疫定量（即
ち、イムノアッセイによる定量）のための試薬にも関す
るもので、Ｘがウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはウ
シチログロブリン（ＢＴＧ）からなる担体分子である式
Ｉの化合物である標識接合体を含んでなる。好適な標識
接合体は、１−［［［（４−チオウレアフェニル）カル
ボニル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リ
ゼルグアミド−ＢＴＧ及び５−［８β−９，１０−ジデ
ヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴ
リン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＴＧ、
並びに特には１−［［［３−カルボニル（１，１’−ビ
フェニル−４−イル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ
−リゼルグアミド−ＢＳＡ及び５−［８β−９，１０−
ジデヒドロ−８−「（ジエチルアミノ）カルボニル］エ
ルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳ
Ａである。
ン酸ジエチルアミド及びその代謝産物の免疫定量（即
ち、イムノアッセイによる定量）のための試薬にも関す
るもので、Ｘがウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはウ
シチログロブリン（ＢＴＧ）からなる担体分子である式
Ｉの化合物である標識接合体を含んでなる。好適な標識
接合体は、１−［［［（４−チオウレアフェニル）カル
ボニル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リ
ゼルグアミド−ＢＴＧ及び５−［８β−９，１０−ジデ
ヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴ
リン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＴＧ、
並びに特には１−［［［３−カルボニル（１，１’−ビ
フェニル−４−イル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ
−リゼルグアミド−ＢＳＡ及び５−［８β−９，１０−
ジデヒドロ−８−「（ジエチルアミノ）カルボニル］エ
ルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳ
Ａである。
【００２４】本発明は、このような試薬を使用するイム
ノアッセイにも関連する。
ノアッセイにも関連する。
【００２５】
【発明の実施の形態】本発明の一実施態様において、我
々は予期せずに式Ｉの新規誘導体が、ＬＳＤ残基のイン
ドール窒素から外へスペーサ・アームを導入することに
より調製され得、式、
々は予期せずに式Ｉの新規誘導体が、ＬＳＤ残基のイン
ドール窒素から外へスペーサ・アームを導入することに
より調製され得、式、
【００２６】
【化４】
【００２７】式中、Ｒ1 はＲ3 Ｒ4 であり；Ｒ3 は１−
１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であ
り；Ｒ4 はＮＨＲ5 であり；Ｒ5 はＨ、ＬまたはＬＸか
ら選択され；Ｌは結合基であり；ＸはＬを介して結合さ
れる検出子または担体分子である、を有するＬＳＤ誘導
体を生成することを見い出した。好ましくはＬは、ジメ
チルスベリミデート、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２
−ピリジルジチオ）−プロピオネート、ジイソチオシア
ナトベンゼン、４−イソチオシアナトベンゾイルクロラ
イド及びｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミド エステルからなる群から選択され；また
Ｘは担体分子、例えばＢＳＡまたはＢＴＧである。
１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であ
り；Ｒ4 はＮＨＲ5 であり；Ｒ5 はＨ、ＬまたはＬＸか
ら選択され；Ｌは結合基であり；ＸはＬを介して結合さ
れる検出子または担体分子である、を有するＬＳＤ誘導
体を生成することを見い出した。好ましくはＬは、ジメ
チルスベリミデート、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２
−ピリジルジチオ）−プロピオネート、ジイソチオシア
ナトベンゼン、４−イソチオシアナトベンゾイルクロラ
イド及びｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミド エステルからなる群から選択され；また
Ｘは担体分子、例えばＢＳＡまたはＢＴＧである。
【００２８】ＬＳＤ分子にスペーサ・アームまたはスペ
ーサーを導入するための好ましい方法は、アルキル化を
介するものである。スペーサーは、この技術分野で既知
であり、ハプテンと担体分子との間に付加的に空間を与
えるために一般に使用される。典型的なスペーサーは、
１−２０個の炭素原子から得られ、０−１０個のヘテロ
原子または、例えばＮ、Ｏ、ＣＯＯＨもしくはＳ等のヘ
テロ原子含有基を有することができ、また直鎖もしくは
分枝鎖であってもよい。本発明においては、スペーサー
はＬＳＤ分枝上に、例えば、４−ブロモエチルブチレー
ト、アイオドエチルアセテート、４−ブロモメチル安息
香酸、アクリル酸及びアクリロインから選択される適当
なアルキル化剤により導入される。インドール窒素のア
ルキル化は、メチルアイオダイドまたはｎ−ブチルブロ
マイド等のアルキル化剤を使用して（Ｅ．Ｓａｎｔａｎ
ｉｅｌｌｏ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，６１７（１９７９）
参照）；ベンジルアイオダイドによるベンジル化（Ｙ．
Ｋｉｇｕａｗａ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４２１（１９８
１）参照）；アリルブロマイドによる３−アセチルイン
ドールのＮ−アルキル化（Ｔ．Ｋｕｒｉｈａｒａ，Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、４：３９６（１
９８７）参照）；ＤＭＳＯ中で粉末ＫＯＨを使用するシ
クロペンチルトシレートによるインドール窒素における
ジヒドロリゼルギン酸のＮ−アルキル化（Ｇ．Ｍａｒｚ
ｏｎｉ等、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，
７：６５１（１９８７）参照）；エルゴリンのＮ−メチ
ル誘導体の調製（米国特許４，７５４，０３７参照）等
について記述されている。インドール窒素中心における
Ｎ−（４−アイオドブチル）フタルイミドを用いるアル
キル化を含め、このような条件（例えばＧ．Ｍａｒｚｏ
ｎｉ等、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，
７：６５１（１９８７））を使用して、アルキル化ＬＳ
Ｄ誘導体は得られなかった。既知の方法のいずれも、本
発明の安定なＬＳＤ誘導体を創製するインドール窒素に
おけるＬＳＤの成功裏の誘導を記述していない。
ーサーを導入するための好ましい方法は、アルキル化を
介するものである。スペーサーは、この技術分野で既知
であり、ハプテンと担体分子との間に付加的に空間を与
えるために一般に使用される。典型的なスペーサーは、
１−２０個の炭素原子から得られ、０−１０個のヘテロ
原子または、例えばＮ、Ｏ、ＣＯＯＨもしくはＳ等のヘ
テロ原子含有基を有することができ、また直鎖もしくは
分枝鎖であってもよい。本発明においては、スペーサー
はＬＳＤ分枝上に、例えば、４−ブロモエチルブチレー
ト、アイオドエチルアセテート、４−ブロモメチル安息
香酸、アクリル酸及びアクリロインから選択される適当
なアルキル化剤により導入される。インドール窒素のア
ルキル化は、メチルアイオダイドまたはｎ−ブチルブロ
マイド等のアルキル化剤を使用して（Ｅ．Ｓａｎｔａｎ
ｉｅｌｌｏ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，６１７（１９７９）
参照）；ベンジルアイオダイドによるベンジル化（Ｙ．
Ｋｉｇｕａｗａ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４２１（１９８
１）参照）；アリルブロマイドによる３−アセチルイン
ドールのＮ−アルキル化（Ｔ．Ｋｕｒｉｈａｒａ，Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、４：３９６（１
９８７）参照）；ＤＭＳＯ中で粉末ＫＯＨを使用するシ
クロペンチルトシレートによるインドール窒素における
ジヒドロリゼルギン酸のＮ−アルキル化（Ｇ．Ｍａｒｚ
ｏｎｉ等、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，
７：６５１（１９８７）参照）；エルゴリンのＮ−メチ
ル誘導体の調製（米国特許４，７５４，０３７参照）等
について記述されている。インドール窒素中心における
Ｎ−（４−アイオドブチル）フタルイミドを用いるアル
キル化を含め、このような条件（例えばＧ．Ｍａｒｚｏ
ｎｉ等、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，
７：６５１（１９８７））を使用して、アルキル化ＬＳ
Ｄ誘導体は得られなかった。既知の方法のいずれも、本
発明の安定なＬＳＤ誘導体を創製するインドール窒素に
おけるＬＳＤの成功裏の誘導を記述していない。
【００２９】本発明においては、所望の安定な連結を与
えるために、４−（ブロモメチル）ｔ−ブチルベンゾエ
ート、ハロアルキルニトリル、ブロモアセトニトリル及
びブロモ−ｔ−ブチルアセテート等の既知のアルキル化
剤が使用され得る。インドール窒素においてアルキル化
するために、我々は最初にインドール窒素において陰イ
オンを創製する必要があることを見い出した。該陰イオ
ンは、次いで適当なアルキル化剤によって消去されてア
ミンを形成する。
えるために、４−（ブロモメチル）ｔ−ブチルベンゾエ
ート、ハロアルキルニトリル、ブロモアセトニトリル及
びブロモ−ｔ−ブチルアセテート等の既知のアルキル化
剤が使用され得る。インドール窒素においてアルキル化
するために、我々は最初にインドール窒素において陰イ
オンを創製する必要があることを見い出した。該陰イオ
ンは、次いで適当なアルキル化剤によって消去されてア
ミンを形成する。
【００３０】図１〜４は、本発明の化合物を調製するた
めの好適なスキームＩ〜IVを示す。これらのスキームに
おいて興味ある中間体は、例えば１−（３−アミノブチ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド（中間体
５）、１−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル
−Ｄ−リゼルグアミド（中間体１０）及び８β−６−
（３−アミノプロピル）−９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，
Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミド（中間体
２３）である。
めの好適なスキームＩ〜IVを示す。これらのスキームに
おいて興味ある中間体は、例えば１−（３−アミノブチ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド（中間体
５）、１−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル
−Ｄ−リゼルグアミド（中間体１０）及び８β−６−
（３−アミノプロピル）−９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，
Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミド（中間体
２３）である。
【００３１】図１のスキームＩに示されるＬＳＤ誘導体
の創製のための好ましい方法において、インドール窒素
陰イオンが、ヘキサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ）あ
るいは好ましくはより毒性の強いＨＭＰＡに代えてＮ，
Ｎ’−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）の存在下
でｎ−ブチルリチウムにより生成される。生じた陰イオ
ンは、次いでＮ−（４−アイオドブチル）フタルイミド
により消去されて化合物４を生じる。無水ヒドラジン中
でのフタルイミドの脱保護は、官能性ＬＳＤ誘導体５を
与え、これは対応するハプテン及び免疫原を創製するた
めに使用された。
の創製のための好ましい方法において、インドール窒素
陰イオンが、ヘキサメチルホスホラミド（ＨＭＰＡ）あ
るいは好ましくはより毒性の強いＨＭＰＡに代えてＮ，
Ｎ’−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）の存在下
でｎ−ブチルリチウムにより生成される。生じた陰イオ
ンは、次いでＮ−（４−アイオドブチル）フタルイミド
により消去されて化合物４を生じる。無水ヒドラジン中
でのフタルイミドの脱保護は、官能性ＬＳＤ誘導体５を
与え、これは対応するハプテン及び免疫原を創製するた
めに使用された。
【００３２】我々は、アミンをハプテンに変換するため
に、二官能性リンカー、４−イソチオシアナトベンゾイ
ルクロライド、化合物６を選択した（Ｋ．Ｚｉｅｇｌａ
ｒ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７
７３：１１−２２（１９８４）参照）。このハプテン
は、図１のスキームＩに例示されるように、更に対応す
るＬＳＤ免疫原８、１−［［［（４−チオウレアフェニ
ル）カルボニル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル
−Ｄ−リゼルグアミド−ＢＴＧに変換された。免疫原８
は、次いでＧ６４８及びＧ６５１と称される抗−ＬＳＤ
抗体を創製するために、例２６に記述される方法に従っ
て、使用された。
に、二官能性リンカー、４−イソチオシアナトベンゾイ
ルクロライド、化合物６を選択した（Ｋ．Ｚｉｅｇｌａ
ｒ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．７
７３：１１−２２（１９８４）参照）。このハプテン
は、図１のスキームＩに例示されるように、更に対応す
るＬＳＤ免疫原８、１−［［［（４−チオウレアフェニ
ル）カルボニル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル
−Ｄ−リゼルグアミド−ＢＴＧに変換された。免疫原８
は、次いでＧ６４８及びＧ６５１と称される抗−ＬＳＤ
抗体を創製するために、例２６に記述される方法に従っ
て、使用された。
【００３３】合成の別法において、該ＬＳＤ誘導体は、
ＬＳＤ及びその代謝産物を検出するためのイムノアッセ
イにおいて使用するために、安定なハプテン標識及び標
識−接合体を形成するために活性化された。ＬＳＤは、
光及びアルカリ性ｐＨに対して感受性である。７を越え
るｐＨにおいては、該分子はＣ−８位においてエピマー
形成を起こし、イソ−ＬＳＤの部分的形成を生じる。長
時間の光への曝露によって、ＬＳＤはＣ−９位において
酸化され、オレフィン基の滅失を生じる。従って、長期
間の保存に耐え得る安定したハプテン標識及び標識−接
合体を創製する活性誘導体を調製すること、即ち製造の
環境においての使用に好都合な試薬を組み立てるに際し
ての最高の配慮が望まれる。
ＬＳＤ及びその代謝産物を検出するためのイムノアッセ
イにおいて使用するために、安定なハプテン標識及び標
識−接合体を形成するために活性化された。ＬＳＤは、
光及びアルカリ性ｐＨに対して感受性である。７を越え
るｐＨにおいては、該分子はＣ−８位においてエピマー
形成を起こし、イソ−ＬＳＤの部分的形成を生じる。長
時間の光への曝露によって、ＬＳＤはＣ−９位において
酸化され、オレフィン基の滅失を生じる。従って、長期
間の保存に耐え得る安定したハプテン標識及び標識−接
合体を創製する活性誘導体を調製すること、即ち製造の
環境においての使用に好都合な試薬を組み立てるに際し
ての最高の配慮が望まれる。
【００３４】新規ハプテン１３の合成が、図２のスキー
ムIIに例示されている。ハプテン合成のために、インド
ール窒素がＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド
により消去され、無水ヒドラジンにより処理されて結合
基が結合されたアミン１０を生じる。イソチオシアナト
ベンジルクロライド、ＤＳＳ及びＳＰＤＰ等の慣用の結
合基が、該ハプテン合成のために好適である。しかしな
がら、最も好ましい結合基は、ヘテロ二官能性リンカー
であり、これは全体として良好な安定性を化合物に与え
ることが見い出された。無水条件下における結合基１２
とＬＳＤ−アミン１０の結合は、ハプテン１３を生じ
た。該新規ハプテン１３は、例１４に記述されるよう
に、ＢＳＡと結合され、下記に示される標識接合体１
４、１−［［［３−カルボニル（１，１’−ビフェニル
−４−イル］カルボニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼ
ルグアミド−ＢＳＡを与えた。
ムIIに例示されている。ハプテン合成のために、インド
ール窒素がＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド
により消去され、無水ヒドラジンにより処理されて結合
基が結合されたアミン１０を生じる。イソチオシアナト
ベンジルクロライド、ＤＳＳ及びＳＰＤＰ等の慣用の結
合基が、該ハプテン合成のために好適である。しかしな
がら、最も好ましい結合基は、ヘテロ二官能性リンカー
であり、これは全体として良好な安定性を化合物に与え
ることが見い出された。無水条件下における結合基１２
とＬＳＤ−アミン１０の結合は、ハプテン１３を生じ
た。該新規ハプテン１３は、例１４に記述されるよう
に、ＢＳＡと結合され、下記に示される標識接合体１
４、１−［［［３−カルボニル（１，１’−ビフェニル
−４−イル］カルボニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼ
ルグアミド−ＢＳＡを与えた。
【００３５】
【化５】
【００３６】該新規試薬は、例２７に記述されるように
ＥＬＩＳＡイムノアッセイにおいて試験された。ビフェ
ニルリンカーを含むＮ−インドール誘導ＬＳＤ−ＢＳＡ
標識接合体１４は、ＬＳＤ免疫原８に対して生じた抗−
ＬＳＤ抗体、Ｇ６４８及びＧ６５１に対する結合におい
て、既知濃度のＬＳＤと競合させるために使用された。
例２７に示されるデータは、図４に示される投与量応答
曲線を生じた。
ＥＬＩＳＡイムノアッセイにおいて試験された。ビフェ
ニルリンカーを含むＮ−インドール誘導ＬＳＤ−ＢＳＡ
標識接合体１４は、ＬＳＤ免疫原８に対して生じた抗−
ＬＳＤ抗体、Ｇ６４８及びＧ６５１に対する結合におい
て、既知濃度のＬＳＤと競合させるために使用された。
例２７に示されるデータは、図４に示される投与量応答
曲線を生じた。
【００３７】図５の曲線は、ＬＳＤ免疫原８に対して生
じた抗−ＬＳＤ抗体が、ＬＳＤ標識−接合体１４に結合
することを例示している。遊離のＬＳＤは、抗−ＬＳＤ
抗体との結合についてＬＳＤの存在が、抗体−抗原結合
を減少させ、または阻害するようにＢＳＡ標識−接合体
と競合する。結果は、新規ＬＳＤ標識−接合体１４が、
異なった結合基を有するＬＳＤ誘導体との組合せにおい
てＬＳＤの測定のためのＥＬＩＳＡにおける試薬として
使用し得ることを例示している。
じた抗−ＬＳＤ抗体が、ＬＳＤ標識−接合体１４に結合
することを例示している。遊離のＬＳＤは、抗−ＬＳＤ
抗体との結合についてＬＳＤの存在が、抗体−抗原結合
を減少させ、または阻害するようにＢＳＡ標識−接合体
と競合する。結果は、新規ＬＳＤ標識−接合体１４が、
異なった結合基を有するＬＳＤ誘導体との組合せにおい
てＬＳＤの測定のためのＥＬＩＳＡにおける試薬として
使用し得ることを例示している。
【００３８】ＬＳＤ免疫原に対して生成された２種類の
抗体Ｇ６４８及びＧ６５１は、ＬＳＤの主要な代謝産物
であるノル−ＬＳＤに結合することも示された。図６
は、例２７に記述されるように、ノル−ＬＳＤを標準と
して使用してＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートアッ
セイにより作成された曲線を与えるものである。
抗体Ｇ６４８及びＧ６５１は、ＬＳＤの主要な代謝産物
であるノル−ＬＳＤに結合することも示された。図６
は、例２７に記述されるように、ノル−ＬＳＤを標準と
して使用してＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートアッ
セイにより作成された曲線を与えるものである。
【００３９】図６の阻害曲線は、例２７に示されたデー
タから作成されたものであるが、ＬＳＤ分子のインドー
ル窒素から調製されたＬＳＤ誘導体が、ＬＳＤ免疫原８
から生成された抗体との結合についてノル−ＬＳＤと投
与量依存的な様式で競合することを例示しており、従っ
て、ノル−ＬＳＤの検出用のイムノアッセイにおいて有
用であることを示している。
タから作成されたものであるが、ＬＳＤ分子のインドー
ル窒素から調製されたＬＳＤ誘導体が、ＬＳＤ免疫原８
から生成された抗体との結合についてノル−ＬＳＤと投
与量依存的な様式で競合することを例示しており、従っ
て、ノル−ＬＳＤの検出用のイムノアッセイにおいて有
用であることを示している。
【００４０】ＬＳＤのインドール窒素から誘導され多上
記の新規ＬＳＤ誘導体に加えて、我々は、ＬＳＤ分子の
ピペリジン窒素から、他の種類のＬＳＤ誘導体を合成
し、式、
記の新規ＬＳＤ誘導体に加えて、我々は、ＬＳＤ分子の
ピペリジン窒素から、他の種類のＬＳＤ誘導体を合成
し、式、
【００４１】
【化６】
【００４２】式中、Ｒ2 は、Ｒ3 Ｒ4 であり；Ｒ3 は、
Ｒ4 がＣＯＲ5 である場合には結合または１−１０個の
炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であるか、あ
るいはＲ4 がＮＨＲ5 である場合には、１−１０個の炭
素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であり；Ｒ5 は
Ｈ、ＬまたはＬＸから選択され；Ｌは結合基であり；Ｘ
はＬを介して結合される検出子または担体分子である、
を有するＬＳＤ誘導体を生成させた。
Ｒ4 がＣＯＲ5 である場合には結合または１−１０個の
炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であるか、あ
るいはＲ4 がＮＨＲ5 である場合には、１−１０個の炭
素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素であり；Ｒ5 は
Ｈ、ＬまたはＬＸから選択され；Ｌは結合基であり；Ｘ
はＬを介して結合される検出子または担体分子である、
を有するＬＳＤ誘導体を生成させた。
【００４３】Ｌは、ジメチルスベリミデート、Ｎ−スク
シンイミジル ３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオ
ネート、ジイソチオシアナトベンゼン、４−イソチオシ
アナトベンゾイルクロライド及びｍ−マレイミドベンゾ
イル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド エステルからな
る群から選択され；またＸは担体分子、例えばＢＳＡま
たはＢＴＧである。これらの誘導体は、マイクロタイタ
ー・プレート様式を含む種々のＬＳＤイムノアッセイ様
式における試薬として有用な、更なるハプテン及び免疫
原を合成するために使用された。
シンイミジル ３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオ
ネート、ジイソチオシアナトベンゼン、４−イソチオシ
アナトベンゾイルクロライド及びｍ−マレイミドベンゾ
イル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド エステルからな
る群から選択され；またＸは担体分子、例えばＢＳＡま
たはＢＴＧである。これらの誘導体は、マイクロタイタ
ー・プレート様式を含む種々のＬＳＤイムノアッセイ様
式における試薬として有用な、更なるハプテン及び免疫
原を合成するために使用された。
【００４４】ピペリジン窒素からの誘導体合成は、誘導
に先行してノル−ＬＳＤの形成を必要とする。図３のス
キームIII は、ノル−ＬＳＤ１６並びにピペラジン窒素
から形成されるＬＳＤハプテン１９、ＬＳＤ免疫原２０
及び標識−接合体２１の合成を例示する。この合成のた
めに、ＬＳＤはＢｒＣＮによって処理されてシアノ誘導
体１５を生じ、これは更に酢酸（ＨＯＡｃ）中でのＺｎ
を用いる処理にてノル−ＬＳＤ１６を生じた。ノル−Ｌ
ＳＤは、トリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下で二官能
性リンカー１８と結合されてピペリジン−Ｎ誘導ＬＳＤ
ハプテン１９を生じ、これは更にＢＳＡと結合されて、
最も好適な標識−接合体２１、５−［８β−９，１０−
ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エ
ルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳ
Ａを与えた。図３参照。この接合体は、免疫原８により
生じた抗体と共に使用した場合に、ＬＳＤイムノアッセ
イにおける別の試薬として有用であろうことが示され
た。例２７に記述されるＥＬＩＳＡにおいて、投与応答
曲線がＬＳＤを標準として使用して作成された。図７
は、例２７に示されるデータから作成されたＢＳＡ標識
接合体２１によるＬＳＤの阻害曲線を例示する。
に先行してノル−ＬＳＤの形成を必要とする。図３のス
キームIII は、ノル−ＬＳＤ１６並びにピペラジン窒素
から形成されるＬＳＤハプテン１９、ＬＳＤ免疫原２０
及び標識−接合体２１の合成を例示する。この合成のた
めに、ＬＳＤはＢｒＣＮによって処理されてシアノ誘導
体１５を生じ、これは更に酢酸（ＨＯＡｃ）中でのＺｎ
を用いる処理にてノル−ＬＳＤ１６を生じた。ノル−Ｌ
ＳＤは、トリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下で二官能
性リンカー１８と結合されてピペリジン−Ｎ誘導ＬＳＤ
ハプテン１９を生じ、これは更にＢＳＡと結合されて、
最も好適な標識−接合体２１、５−［８β−９，１０−
ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エ
ルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳ
Ａを与えた。図３参照。この接合体は、免疫原８により
生じた抗体と共に使用した場合に、ＬＳＤイムノアッセ
イにおける別の試薬として有用であろうことが示され
た。例２７に記述されるＥＬＩＳＡにおいて、投与応答
曲線がＬＳＤを標準として使用して作成された。図７
は、例２７に示されるデータから作成されたＢＳＡ標識
接合体２１によるＬＳＤの阻害曲線を例示する。
【００４５】図７の結果は、遊離のＬＳＤが、抗−ＬＳ
Ｄ抗体との結合についてＬＳＤの存在が、抗体−抗原結
合を減少（または阻害）するようにＢＳＡ標識−接合体
と競合することを示している。従って、ＬＳＤ標識−接
合体は、ＬＳＤの測定のためのＥＬＩＳＡアッセイにお
ける試薬として有用である。
Ｄ抗体との結合についてＬＳＤの存在が、抗体−抗原結
合を減少（または阻害）するようにＢＳＡ標識−接合体
と競合することを示している。従って、ＬＳＤ標識−接
合体は、ＬＳＤの測定のためのＥＬＩＳＡアッセイにお
ける試薬として有用である。
【００４６】ビフェニルリンカーを含むピペリジン窒素
から誘導された他のＬＳＤハプテンも合成された。この
ハプテンの合成は、図４の下記スキームIVに示されてい
る。ノル−ＬＳＤ１６が、Ｋ2 ＣＯ3 中で３−アイオド
フタルイミドとの反応に付されて化合物２２を生じた。
ヒドラジン分解は、アミン２３を与え、これは更にリン
カー１２を用いて処理され、ＬＳＤハプテン２４、１−
［［［４’−［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ
−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴリン
−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］［１，
１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オキシ］
−２，５−ピロリジンジオンを与えた。モノフェニル脂
肪族結合基よりも光耐性に優るビフェニル結合基は、よ
り安定なＬＳＤ誘導体を与える。
から誘導された他のＬＳＤハプテンも合成された。この
ハプテンの合成は、図４の下記スキームIVに示されてい
る。ノル−ＬＳＤ１６が、Ｋ2 ＣＯ3 中で３−アイオド
フタルイミドとの反応に付されて化合物２２を生じた。
ヒドラジン分解は、アミン２３を与え、これは更にリン
カー１２を用いて処理され、ＬＳＤハプテン２４、１−
［［［４’−［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ
−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴリン
−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］［１，
１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オキシ］
−２，５−ピロリジンジオンを与えた。モノフェニル脂
肪族結合基よりも光耐性に優るビフェニル結合基は、よ
り安定なＬＳＤ誘導体を与える。
【００４７】Ｎ−アミノプロピル ノル−ＬＳＤ２３の
調製に加えて、ノル−ＬＳＤ窒素原子において官能化さ
れるカルボキシアルキルも合成された。得られた酪酸誘
導体の調製は、例２４及び２５に記述されている。
調製に加えて、ノル−ＬＳＤ窒素原子において官能化さ
れるカルボキシアルキルも合成された。得られた酪酸誘
導体の調製は、例２４及び２５に記述されている。
【００４８】
例 以下の例は、本発明の実施態様を更に例示するであろ
う。以下の記述は、図１−７を参照することにより、よ
り良く理解されるであろう。
う。以下の記述は、図１−７を参照することにより、よ
り良く理解されるであろう。
【００４９】図１〜４は、例において使用されている本
発明の化合物を調製するための好適なスキームＩ〜IVを
示す。
発明の化合物を調製するための好適なスキームＩ〜IVを
示す。
【００５０】図５は、ＬＳＤ及び１−［［［３−カルボ
ニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］
−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの間
の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量応
答曲線を示す。
ニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］
−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの間
の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量応
答曲線を示す。
【００５１】図６は、ノル−ＬＳＤ及び１−［［［３−
カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボ
ニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡ
の間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与
量応答曲線を示す。
カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボ
ニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡ
の間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与
量応答曲線を示す。
【００５２】図７は、ＬＳＤ及び５−［８β−９，１０
−ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］
エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−Ｂ
ＳＡの間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の
投与量応答曲線を示す。
−ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］
エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−Ｂ
ＳＡの間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の
投与量応答曲線を示す。
【００５３】例１−２５の表題中の化合物の番号名は、
例において、また図５−７において図１−４（スキーム
Ｉ−IV）に示す構造式を引用するものである。
例において、また図５−７において図１−４（スキーム
Ｉ−IV）に示す構造式を引用するものである。
【００５４】例１ Ｄ−リゼルギン酸ジエチルアミド１の合成 ４．０ｇ（０．０１５モル）のＤ−リゼルギン酸及び２
００ｍｌの乾燥ＤＭＦの混合物を、アルゴン下で３．６
ｇ（０．０２２モル）のカルボニルジイミダゾール（Ｃ
ＤＩ）により処理し、室温にて１時間撹拌した。該反応
物を、１５．２ｍｌ（０．１５モル）のジエチルアミン
により処理し、室温にて一夜撹拌した。該反応物を、減
圧下で濃縮した。残渣を２５０ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2 に取
り、２５０ｍｌのＨ2 Ｏで洗浄した。不溶性の物質を濾
去し、層を分離させた。有機性部分を２５０ｍｌの飽和
食塩水で洗浄し、無水Ｎａ2 ＳＯ4 にて乾燥させ、減圧
下で濃縮した。残渣を、溶出液としてＣＨ2 Ｃｌ2 中の
３％ＣＨ3 ＯＨを用いて５００ｇのシリカゲルにてクロ
マトグラフィーにかけ、３．６５ｇ（７５．７％）のＤ
−ＬＳＤ、［α］D ＝＋５０．４゜（濃度１％；ＣＨＣ
ｌ3 ）を、淡褐色の無定形固体として得た。８−α−エ
ピマ−（イソＬＳＤともいう）は［α］D ＝＋２２６°
（濃度１％；ＣＨＣｌ3 ）を有する。
００ｍｌの乾燥ＤＭＦの混合物を、アルゴン下で３．６
ｇ（０．０２２モル）のカルボニルジイミダゾール（Ｃ
ＤＩ）により処理し、室温にて１時間撹拌した。該反応
物を、１５．２ｍｌ（０．１５モル）のジエチルアミン
により処理し、室温にて一夜撹拌した。該反応物を、減
圧下で濃縮した。残渣を２５０ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2 に取
り、２５０ｍｌのＨ2 Ｏで洗浄した。不溶性の物質を濾
去し、層を分離させた。有機性部分を２５０ｍｌの飽和
食塩水で洗浄し、無水Ｎａ2 ＳＯ4 にて乾燥させ、減圧
下で濃縮した。残渣を、溶出液としてＣＨ2 Ｃｌ2 中の
３％ＣＨ3 ＯＨを用いて５００ｇのシリカゲルにてクロ
マトグラフィーにかけ、３．６５ｇ（７５．７％）のＤ
−ＬＳＤ、［α］D ＝＋５０．４゜（濃度１％；ＣＨＣ
ｌ3 ）を、淡褐色の無定形固体として得た。８−α−エ
ピマ−（イソＬＳＤともいう）は［α］D ＝＋２２６°
（濃度１％；ＣＨＣｌ3 ）を有する。
【００５５】例２ Ｎ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド２の合成 ２４０ｍｌのアセトン中の１０．０ｇ（０．０４モル）
のＮ−（３−ブロモプロピル）フタルイミド溶液を、４
１．７ｇ（０．２５モル）のヨウ化カリウムにより処理
し、室温にて４日間撹拌した。該反応混合物を濾過し、
濾液を８００ｍｌのエーテルで希釈し、珪藻土を通して
再度濾過した。次いで濾液を減圧下で濃縮した。得られ
た黄色固体を５５０ｍｌのヘキサンから再結晶（熱濾過
して３００ｍｌまで沸騰させる）して、１０．７１ｇ
（９１．１％）の２を灰白色の針状晶として得た。
のＮ−（３−ブロモプロピル）フタルイミド溶液を、４
１．７ｇ（０．２５モル）のヨウ化カリウムにより処理
し、室温にて４日間撹拌した。該反応混合物を濾過し、
濾液を８００ｍｌのエーテルで希釈し、珪藻土を通して
再度濾過した。次いで濾液を減圧下で濃縮した。得られ
た黄色固体を５５０ｍｌのヘキサンから再結晶（熱濾過
して３００ｍｌまで沸騰させる）して、１０．７１ｇ
（９１．１％）の２を灰白色の針状晶として得た。
【００５６】例３ Ｎ−（４−アイオドブチル）フタルイミド３の合成 １１６ｍｌのアセトン中の５．０ｇ（０．０１８モル）
のＮ−（４−ブロモブチル）フタルイミド溶液を、２
０．７ｇ（０．１２５モル）のヨウ化カリウムにより処
理し、室温にて５日間撹拌した。該反応混合物を濾過
し、濾液を４００ｍｌのエーテルで希釈し、珪藻土を通
して再度濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた
固体を３００ｍｌのヘキサンから再結晶（熱濾過して１
５０ｍｌまで沸騰させる）して、４．０ｇ（６８．６
％）の３を白色の針状晶として得た。
のＮ−（４−ブロモブチル）フタルイミド溶液を、２
０．７ｇ（０．１２５モル）のヨウ化カリウムにより処
理し、室温にて５日間撹拌した。該反応混合物を濾過
し、濾液を４００ｍｌのエーテルで希釈し、珪藻土を通
して再度濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた
固体を３００ｍｌのヘキサンから再結晶（熱濾過して１
５０ｍｌまで沸騰させる）して、４．０ｇ（６８．６
％）の３を白色の針状晶として得た。
【００５７】例４ １−［３−（１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２
Ｈ−イソインドール−２−イル）ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジ
エチル］−Ｄ−リゼルグアミド４の合成 ４０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２．０ｇ（６．１８ミリモ
ル）のＤ−ＬＳＤ溶液を、アルゴン下でドライアイス・
アセトン浴にて−７８℃まで冷却した。該溶液を６．０
ｍｌの１．６Ｍ ｎ−ブチルリチウム、次いで２０ｍｌ
のジメチルプロピルウレアにより処理し、−７８℃にて
１５分間撹拌した。該反応混合物を、６ｍｌのＮ，Ｎ’
−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）中の３．０ｇ
（９．１ミリモル）のＮ−（４−アイオドブチル）フタ
ルイミド３の溶液により処理し、−７８℃にて２時間、
次いで室温にて９０分間撹拌した。該反応混合物を減圧
下で油状になるまで濃縮した。油状物を１００ｍｌの酢
酸エチルにて希釈し、５ｘ５０ｍｌのＨ2 Ｏにて洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し
た。残渣を、メチレンクロライド中の３％メタノールを
溶出液として使用して４００ｇのシリカゲルにてクロマ
トグラフィーにかけ、９００ｍｇの４を黄色無定形固体
として、また８００ｍｇの若干純度の低い物質を、合計
の収率５２％で得た。
Ｈ−イソインドール−２−イル）ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジ
エチル］−Ｄ−リゼルグアミド４の合成 ４０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２．０ｇ（６．１８ミリモ
ル）のＤ−ＬＳＤ溶液を、アルゴン下でドライアイス・
アセトン浴にて−７８℃まで冷却した。該溶液を６．０
ｍｌの１．６Ｍ ｎ−ブチルリチウム、次いで２０ｍｌ
のジメチルプロピルウレアにより処理し、−７８℃にて
１５分間撹拌した。該反応混合物を、６ｍｌのＮ，Ｎ’
−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）中の３．０ｇ
（９．１ミリモル）のＮ−（４−アイオドブチル）フタ
ルイミド３の溶液により処理し、−７８℃にて２時間、
次いで室温にて９０分間撹拌した。該反応混合物を減圧
下で油状になるまで濃縮した。油状物を１００ｍｌの酢
酸エチルにて希釈し、５ｘ５０ｍｌのＨ2 Ｏにて洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮し
た。残渣を、メチレンクロライド中の３％メタノールを
溶出液として使用して４００ｇのシリカゲルにてクロマ
トグラフィーにかけ、９００ｍｇの４を黄色無定形固体
として、また８００ｍｇの若干純度の低い物質を、合計
の収率５２％で得た。
【００５８】例５ １−（３−アミノブチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リ
ゼルグアミド５の合成 ２５ｍｌのメタノール中の９００ｍｇ（１．７ミリモ
ル）の４の溶液を、０．３８５ｍｌ（１２．３ミリモ
ル）の無水ヒドラジンにて処理し、室温にて一夜撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を２５ｍｌ
の９：１メチレンクロライド−メタノール混合物にて処
理し、不溶性固体を濾去した。濾液を、２００ｇのシリ
カゲルについて、最初に移動する不純物を溶出するため
にメチレンクロライド中の２５％メタノールを溶出液と
して使用し、次いで生成物を溶出するためにメチレンク
ロライド中の２％トリエチルアミン及び２５％メタノー
ルを溶出液として使用してクロマトグラフィーにかけ、
５６３ｍｇ（８３％）の５を黄色無定形固体として得
た。
ゼルグアミド５の合成 ２５ｍｌのメタノール中の９００ｍｇ（１．７ミリモ
ル）の４の溶液を、０．３８５ｍｌ（１２．３ミリモ
ル）の無水ヒドラジンにて処理し、室温にて一夜撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を２５ｍｌ
の９：１メチレンクロライド−メタノール混合物にて処
理し、不溶性固体を濾去した。濾液を、２００ｇのシリ
カゲルについて、最初に移動する不純物を溶出するため
にメチレンクロライド中の２５％メタノールを溶出液と
して使用し、次いで生成物を溶出するためにメチレンク
ロライド中の２％トリエチルアミン及び２５％メタノー
ルを溶出液として使用してクロマトグラフィーにかけ、
５６３ｍｇ（８３％）の５を黄色無定形固体として得
た。
【００５９】例６ ４−イソチオシアナトベンゾイルクロライド６の合成 ５００ｍｇ（２．７９ミリモル）の４−カルボキシフェ
ニルイソチオシアネート及び５ｍｌの塩化チオニルの混
合物を、６時間還流した。該反応混合物を減圧下で濃縮
し、得られた黄褐色の固体を高真空に一夜引いた。該固
体を、少量のヘキサン中に破砕し、吸引濾過により回収
して５１６ｍｇ（９３％）の６を灰白色の固体として得
た。
ニルイソチオシアネート及び５ｍｌの塩化チオニルの混
合物を、６時間還流した。該反応混合物を減圧下で濃縮
し、得られた黄褐色の固体を高真空に一夜引いた。該固
体を、少量のヘキサン中に破砕し、吸引濾過により回収
して５１６ｍｇ（９３％）の６を灰白色の固体として得
た。
【００６０】例７ １−［［［４−イソチオシアナトフェニル）カルボニ
ル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼル
グアミド７の合成 １５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の３７０ｍｇ（０．９４ミリモ
ル）の５の溶液を０℃に冷却し、５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中
の１９０ｍｇ（０．９６ミリモル）の６の溶液により処
理し、０℃にて３０分間、次いで室温にて一夜、撹拌し
た。該反応混合物を、０．１４ｍｌ（１．０ミリモル）
のトリエチルアミンにて処理し、室温にて２時間撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をメチレン
クロライドに溶解し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナト
リウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、メチ
レンクロライド中の３％メタノールを溶出液として使用
する２００ｇのシリカゲル上でクロマトグラフィーにか
け、３２５ｍｇ（６２％）の７を黄褐色の無定形固体、
［α］D ＝４７．５゜（濃度＝０．９１％：ＣＨＣ
ｌ3 ）として得た。
ル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼル
グアミド７の合成 １５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の３７０ｍｇ（０．９４ミリモ
ル）の５の溶液を０℃に冷却し、５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中
の１９０ｍｇ（０．９６ミリモル）の６の溶液により処
理し、０℃にて３０分間、次いで室温にて一夜、撹拌し
た。該反応混合物を、０．１４ｍｌ（１．０ミリモル）
のトリエチルアミンにて処理し、室温にて２時間撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をメチレン
クロライドに溶解し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナト
リウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、メチ
レンクロライド中の３％メタノールを溶出液として使用
する２００ｇのシリカゲル上でクロマトグラフィーにか
け、３２５ｍｇ（６２％）の７を黄褐色の無定形固体、
［α］D ＝４７．５゜（濃度＝０．９１％：ＣＨＣ
ｌ3 ）として得た。
【００６１】例８ １−［［［（４−チオウレアフェニル）カルボニル］ア
ミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミ
ド−ＢＴＧ８の合成 ２０ｍｌの５ｍＭリン酸緩衝溶液中の６９８ｍｇのＢＴ
Ｇ溶液を０℃に冷却し、５８ｍｌのＤＭＳＯを２時間で
極めてゆっくり添加して処理した。該混合物を室温にて
１８時間撹拌し、５０Ｋ遮断の透析バッグに注入し、次
の通りに透析した：５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝溶液
（ＫＰｉ）、ｐＨ７．５中の７５％ＤＭＳＯ、２リット
ルに、室温にて２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５
中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２時間；
５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の３０％ＤＭＳＯ、２
リットルに、室温にて２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５中の１５％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２
時間；及び４回の５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、４リ
ットルに、４℃にて各６時間。得られた接合体を０．２
２μｍの滅菌フィルターを通して濾過し、１１６ｍｌの
ＬＳＤ−ＢＴＧ接合体８を得た。クーマシーブルー蛋白
アッセイにより決定された蛋白質濃度は、５．３ｍｇ／
ｍｌであった。ＴＮＢＳアッセイは、ＢＴＧ上の利用可
能なリジンの６３．８％の修飾を示した。
ミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミ
ド−ＢＴＧ８の合成 ２０ｍｌの５ｍＭリン酸緩衝溶液中の６９８ｍｇのＢＴ
Ｇ溶液を０℃に冷却し、５８ｍｌのＤＭＳＯを２時間で
極めてゆっくり添加して処理した。該混合物を室温にて
１８時間撹拌し、５０Ｋ遮断の透析バッグに注入し、次
の通りに透析した：５０ｍＭのリン酸カリウム緩衝溶液
（ＫＰｉ）、ｐＨ７．５中の７５％ＤＭＳＯ、２リット
ルに、室温にて２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５
中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２時間；
５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の３０％ＤＭＳＯ、２
リットルに、室温にて２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５中の１５％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２
時間；及び４回の５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、４リ
ットルに、４℃にて各６時間。得られた接合体を０．２
２μｍの滅菌フィルターを通して濾過し、１１６ｍｌの
ＬＳＤ−ＢＴＧ接合体８を得た。クーマシーブルー蛋白
アッセイにより決定された蛋白質濃度は、５．３ｍｇ／
ｍｌであった。ＴＮＢＳアッセイは、ＢＴＧ上の利用可
能なリジンの６３．８％の修飾を示した。
【００６２】例９ １−［３−（１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２
Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］−Ｎ，Ｎ−
ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド９の合成 ７０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の３．５７ｇ（０．０１１モ
ル）のＤ−ＬＳＤ溶液を、アルゴン下でドライアイス・
アセトン浴中で−７８℃に冷却した。該溶液を６．７ｍ
ｌの２．５Ｍｎ−ブチルリチウム、次いで３５ｍｌの
Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）によ
り処理し、−７８℃にて１５分間撹拌した。該反応混合
物を、１０ｍｌのＤＭＰＵ中の５．４ｇ（０．０１７モ
ル）のＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド２
（例２に記述されるように調製）の溶液にて処理し、−
７８℃にて９０分間、次いで室温で２時間撹拌した。Ｔ
ＨＦを減圧下で除去した。油状物を２００ｍｌの酢酸エ
チルにて希釈し、５ｘ１００ｍｌのＨ2 Ｏにて洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残
渣を、メチレンクロライド中の３％メタノールを溶出液
として使用する５００ｇのシリカゲル上のクロマトグラ
フィーにかけ、１．５ｇの生成物を無定形固体として得
た。混合フラクションを合わせ、２５０ｇのシリカゲル
にて２回の再クロマトグラフィーを行って、追加的に
０．６ｇの生成物を得、９の合わせた収率は２．１ｇ
（３７．５％）であった。
Ｈ−イソインドール−２−イル）プロピル］−Ｎ，Ｎ−
ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド９の合成 ７０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の３．５７ｇ（０．０１１モ
ル）のＤ−ＬＳＤ溶液を、アルゴン下でドライアイス・
アセトン浴中で−７８℃に冷却した。該溶液を６．７ｍ
ｌの２．５Ｍｎ−ブチルリチウム、次いで３５ｍｌの
Ｎ，Ｎ’−ジメチルプロピレンウレア（ＤＭＰＵ）によ
り処理し、−７８℃にて１５分間撹拌した。該反応混合
物を、１０ｍｌのＤＭＰＵ中の５．４ｇ（０．０１７モ
ル）のＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド２
（例２に記述されるように調製）の溶液にて処理し、−
７８℃にて９０分間、次いで室温で２時間撹拌した。Ｔ
ＨＦを減圧下で除去した。油状物を２００ｍｌの酢酸エ
チルにて希釈し、５ｘ１００ｍｌのＨ2 Ｏにて洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残
渣を、メチレンクロライド中の３％メタノールを溶出液
として使用する５００ｇのシリカゲル上のクロマトグラ
フィーにかけ、１．５ｇの生成物を無定形固体として得
た。混合フラクションを合わせ、２５０ｇのシリカゲル
にて２回の再クロマトグラフィーを行って、追加的に
０．６ｇの生成物を得、９の合わせた収率は２．１ｇ
（３７．５％）であった。
【００６３】例１０ １−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−
リゼルグアミド１０の合成 ３５ｍｌのメタノール中の２．１ｇ（４．１ミリモル）
の溶液を、０．９２ｍｌ（２９．３ミリモル）の無水ヒ
ドラジンにより処理し、室温にて一夜撹拌した。該反応
物を減圧下で濃縮した。残渣を２５ｍｌのメチレンクロ
ライドにて希釈し、不溶性の固体を濾去し、濾液を、２
００ｇのシリカゲルについて、最初に移動する不純物を
溶出するためにメチレンクロライド中の１５％メタノー
ルを溶出液として使用し、次いで生成物を溶出するため
にメチレンクロライド中の２％トリエチルアミン及び１
５％メタノールを溶出液として使用してクロマトグラフ
ィーにかけ、１．２４ｇ（７９．５％）の１０を黄色無
定形固体として得た。
リゼルグアミド１０の合成 ３５ｍｌのメタノール中の２．１ｇ（４．１ミリモル）
の溶液を、０．９２ｍｌ（２９．３ミリモル）の無水ヒ
ドラジンにより処理し、室温にて一夜撹拌した。該反応
物を減圧下で濃縮した。残渣を２５ｍｌのメチレンクロ
ライドにて希釈し、不溶性の固体を濾去し、濾液を、２
００ｇのシリカゲルについて、最初に移動する不純物を
溶出するためにメチレンクロライド中の１５％メタノー
ルを溶出液として使用し、次いで生成物を溶出するため
にメチレンクロライド中の２％トリエチルアミン及び１
５％メタノールを溶出液として使用してクロマトグラフ
ィーにかけ、１．２４ｇ（７９．５％）の１０を黄色無
定形固体として得た。
【００６４】例１１ １，１’−ビフェニル−４，４’−ジカルボニルクロラ
イド１１の合成 ４０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２．０ｇ（８．２ミリモル）
の４，４’−ビフェニルジカルボン酸の混合物を、５．
０ｍｌ（５５．０ミリモル）のオキサリルクロライド、
次いで０．０２ｍｌの乾燥ＤＭＦにて処理した。該反応
物を室温にて１０分間撹拌し、次いで還流下に９０分間
加熱した。該反応混合物を減圧下で濃縮して黄色油状物
を得た。これをＴＨＦ及びエーテルの混合物から再結晶
して１．６７ｇ（７３％）の１１を黄色針状晶として得
た。
イド１１の合成 ４０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２．０ｇ（８．２ミリモル）
の４，４’−ビフェニルジカルボン酸の混合物を、５．
０ｍｌ（５５．０ミリモル）のオキサリルクロライド、
次いで０．０２ｍｌの乾燥ＤＭＦにて処理した。該反応
物を室温にて１０分間撹拌し、次いで還流下に９０分間
加熱した。該反応混合物を減圧下で濃縮して黄色油状物
を得た。これをＴＨＦ及びエーテルの混合物から再結晶
して１．６７ｇ（７３％）の１１を黄色針状晶として得
た。
【００６５】例１２ ４’−［［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オ
キシ］カルボニル］［１，１’−ビフェニル］−４−カ
ルボニルクロライド１２の合成 ６５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の１．６７ｇ（６．０ミリモ
ル）の１１の溶液を、７１０ｍｇ（６．１７ミリモル）
のＮ−ヒドロキシスクシンイミド、次いで０．８３５ｍ
ｌ（６．０ミリモル）のトリエチルアミンにより処理し
た。該反応物を室温にて２時間撹拌し、その後にトリエ
チルアミンＨＣｌを除去するために濾過した。濾液を減
圧下で濃縮して、２．０ｇ（９３％）の１２を淡黄色固
体として得た。
キシ］カルボニル］［１，１’−ビフェニル］−４−カ
ルボニルクロライド１２の合成 ６５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の１．６７ｇ（６．０ミリモ
ル）の１１の溶液を、７１０ｍｇ（６．１７ミリモル）
のＮ−ヒドロキシスクシンイミド、次いで０．８３５ｍ
ｌ（６．０ミリモル）のトリエチルアミンにより処理し
た。該反応物を室温にて２時間撹拌し、その後にトリエ
チルアミンＨＣｌを除去するために濾過した。濾液を減
圧下で濃縮して、２．０ｇ（９３％）の１２を淡黄色固
体として得た。
【００６６】例１３ １−［３−［［［４’−［［（２，５−ジオキソ−１−
ピロリジニル）オキシ］カルボニル］［１，１’−ビフ
ェニル］−４−イル］カルボニル］アミノ］プロピル］
−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド１３の合成 ６５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の８５０ｍｇ（２．３７５ミリ
モル）の１２の溶液をアルゴン下で氷浴中にて０℃に冷
却し、次いで５０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の９００ｍｇ
（２．３６５ミリモル）の１０の溶液により処理し、
０．６ｍｌ（４．３ミリモル）のトリエチルアミンを２
０分間で滴下して加えた。該反応混合物を０℃にて１時
間撹拌し、次いで撹拌しつつ１時間で室温まで昇温させ
た。該混合物を減圧下で濃縮し、残渣を１００ｍｌのメ
チレンクロライドに溶解した。溶液を１００ｍｌのＨ2
Ｏ、１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、飽和食塩
溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥させ、減
圧下で褐色残渣となるまで濃縮した。これを、１００ｇ
のシリカゲルの短カラムで、最初に移動する不純物を溶
出するために始めにメチレンクロライドを溶出液とし、
次ぎにメチレンクロライド−エーテルの９：１を溶出液
として使用し、次いで生成物を溶出するためにメチレン
クロライド−イソプロピルアルコールの１４：１を溶出
液として使用してクロマトグラフィーにかけ、６５０ｍ
ｇ（３９％）の１３をクリーム色の固体［α］D ＝＋３
４．３゜（濃度＝０．４５％：ＣＨＣｌ3 ）として得
た。
ピロリジニル）オキシ］カルボニル］［１，１’−ビフ
ェニル］−４−イル］カルボニル］アミノ］プロピル］
−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド１３の合成 ６５ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の８５０ｍｇ（２．３７５ミリ
モル）の１２の溶液をアルゴン下で氷浴中にて０℃に冷
却し、次いで５０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の９００ｍｇ
（２．３６５ミリモル）の１０の溶液により処理し、
０．６ｍｌ（４．３ミリモル）のトリエチルアミンを２
０分間で滴下して加えた。該反応混合物を０℃にて１時
間撹拌し、次いで撹拌しつつ１時間で室温まで昇温させ
た。該混合物を減圧下で濃縮し、残渣を１００ｍｌのメ
チレンクロライドに溶解した。溶液を１００ｍｌのＨ2
Ｏ、１００ｍｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液、飽和食塩
溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥させ、減
圧下で褐色残渣となるまで濃縮した。これを、１００ｇ
のシリカゲルの短カラムで、最初に移動する不純物を溶
出するために始めにメチレンクロライドを溶出液とし、
次ぎにメチレンクロライド−エーテルの９：１を溶出液
として使用し、次いで生成物を溶出するためにメチレン
クロライド−イソプロピルアルコールの１４：１を溶出
液として使用してクロマトグラフィーにかけ、６５０ｍ
ｇ（３９％）の１３をクリーム色の固体［α］D ＝＋３
４．３゜（濃度＝０．４５％：ＣＨＣｌ3 ）として得
た。
【００６７】例１４ １−［［［３−カルボニル（１，１’−ビフェニル−４
−イル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ−リゼルグア
ミド−ＢＳＡ１４の合成 ＬＳＤハプテンを、１００％ＤＭＦ中に濃度５ｍｇ／ｍ
ｌで溶解し、ＢＳＡ溶液に最終濃度２００μｇＬＳＤ誘
導体／ｍｌ、及び５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２
０％ＤＭＦとなるように添加した。次いで、この接合体
をＭＷ２５，０００ドルトン遮断の透析チューブ中で、
２種類の条件下、（１）２０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰ
ｉ、ｐＨ７．５、１０倍透析、次いで１０％ＤＭＦ／５
０ｍＭＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０倍透析及び０％ＤＭＦ
／５０ｍＭ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０3 倍透析、
（２）２０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、
１０ 2 倍透析、次いで１０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰ
ｉ、ｐＨ７．５、１０2 倍透析及び０％ＤＭＦ／５０ｍ
Ｍ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０3 倍透析で透析した。Ｌ
ＳＤ−ＢＳＡ接合体中のＢＳＡあたりのＬＳＤ分子数
を、ＬＳＤ−ビフェニル−ＢＳＡ接合体１４の蛍光を測
定することにより決定した。非−薬剤−ＢＳＡの蛍光
も、ＬＳＤ−ビフェニル−ＢＳＡ接合体と同じ濃度にて
記録された。ＬＳＤ−ビフェニル−誘導体１３を、蛍光
標準として使用した。ＢＳＡの濃度は、５０ｍｇ／ｍｌ
の天然ＢＳＡを標準として使用し、Ｒｏｃｈｅ全蛋白
（製品番号４４９０３／４４０２６）により決定した。
−イル］カルボニル］アミノプロピル］Ｄ−リゼルグア
ミド−ＢＳＡ１４の合成 ＬＳＤハプテンを、１００％ＤＭＦ中に濃度５ｍｇ／ｍ
ｌで溶解し、ＢＳＡ溶液に最終濃度２００μｇＬＳＤ誘
導体／ｍｌ、及び５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２
０％ＤＭＦとなるように添加した。次いで、この接合体
をＭＷ２５，０００ドルトン遮断の透析チューブ中で、
２種類の条件下、（１）２０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰ
ｉ、ｐＨ７．５、１０倍透析、次いで１０％ＤＭＦ／５
０ｍＭＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０倍透析及び０％ＤＭＦ
／５０ｍＭ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０3 倍透析、
（２）２０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、
１０ 2 倍透析、次いで１０％ＤＭＦ／５０ｍＭ ＫＰ
ｉ、ｐＨ７．５、１０2 倍透析及び０％ＤＭＦ／５０ｍ
Ｍ ＫＰｉ、ｐＨ７．５、１０3 倍透析で透析した。Ｌ
ＳＤ−ＢＳＡ接合体中のＢＳＡあたりのＬＳＤ分子数
を、ＬＳＤ−ビフェニル−ＢＳＡ接合体１４の蛍光を測
定することにより決定した。非−薬剤−ＢＳＡの蛍光
も、ＬＳＤ−ビフェニル−ＢＳＡ接合体と同じ濃度にて
記録された。ＬＳＤ−ビフェニル−誘導体１３を、蛍光
標準として使用した。ＢＳＡの濃度は、５０ｍｇ／ｍｌ
の天然ＢＳＡを標準として使用し、Ｒｏｃｈｅ全蛋白
（製品番号４４９０３／４４０２６）により決定した。
【００６８】例１５ ８β−６−シアノ−９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジ
エチルエルゴリン−８−カルボキサミド１５の合成 ２００ｍｌの乾燥クロロホルム中の３．０ｇ（２８．３
ミリモル）のシアノゲンブロマイドの還流溶液を、アル
ゴン下で、２０分間で滴下にて添加される１００ｍｌの
乾燥クロロホルム中の２．０ｇ（６．２ミリモル）の１
（Ｄ−ＬＳＤ）により処理した。該反応混合物を１時間
還流し、次いで室温に冷却した。該反応混合物を１００
ｍｌの１％酒石酸水溶液により２回洗浄した。合わせた
水性洗浄液を５０ｍｌのクロロホルムにて抽出した。有
機部分の両者を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、減圧下で濃縮して黒色残渣とした。これを、２５０
ｇのシリカゲル上で酢酸エチルを溶出液として使用して
クロマトグラフィーにかけ、１．５ｇ（７３％）の１５
を、淡黄色無定形固体として得た。
エチルエルゴリン−８−カルボキサミド１５の合成 ２００ｍｌの乾燥クロロホルム中の３．０ｇ（２８．３
ミリモル）のシアノゲンブロマイドの還流溶液を、アル
ゴン下で、２０分間で滴下にて添加される１００ｍｌの
乾燥クロロホルム中の２．０ｇ（６．２ミリモル）の１
（Ｄ−ＬＳＤ）により処理した。該反応混合物を１時間
還流し、次いで室温に冷却した。該反応混合物を１００
ｍｌの１％酒石酸水溶液により２回洗浄した。合わせた
水性洗浄液を５０ｍｌのクロロホルムにて抽出した。有
機部分の両者を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、減圧下で濃縮して黒色残渣とした。これを、２５０
ｇのシリカゲル上で酢酸エチルを溶出液として使用して
クロマトグラフィーにかけ、１．５ｇ（７３％）の１５
を、淡黄色無定形固体として得た。
【００６９】例１６ ８β−９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴ
リン−８−カルボキサミド１６及び８α−９，１０−ジ
デヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキ
サミド１７の合成 １．２ｇ（３．６ミリモル）の１５、２．１ｍｇ（３
２．１ミリモル）の亜鉛末、１１ｍｌの酢酸（ＨＯＡ
ｃ）及び２．１ｍｌのＨ2 Ｏの混合物を、アルゴン下で
４時間、還流加熱した。該反応混合物を、冷却し、デカ
ントして亜鉛残渣から分離し、次いで小体積となるまで
減圧下で濃縮した。該濃縮物を１０ｍｌのＨ 2 Ｏにて希
釈し、濃水酸化アンモニウムにてｐＨ９に塩基性化し、
氷浴にて冷却した。得られたゴム状沈殿を、４ｘ５０ｍ
ｌのメチレンクロライドにて抽出した。１回目の抽出の
後に、追加量の濃水酸化アンモニウムを添加してｐＨ９
に調整した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウム
にて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を１５０ｇのシ
リカゲル上で、アセトン中の１０％メタノールを溶出液
として使用してクロマトグラフィーにかけ、５００ｍｇ
（４５％）の１６（ノル−ＬＳＤ）を淡褐色無定形固体
として得、また２００ｍｇ（１８％）の１７（ノルイソ
−ＬＳＤ）を淡褐色無定形固体として得た。また両者の
エピマーの混合物、４００ｍｇも得た。１６：［α］D
＝＋３４．３゜（濃度＝０．４５５％：ＣＨＣｌ3 ）；
１７：［α］D ＝＋２０８．９゜（濃度＝１．３７％：
ＣＨＣｌ3）。
リン−８−カルボキサミド１６及び８α−９，１０−ジ
デヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキ
サミド１７の合成 １．２ｇ（３．６ミリモル）の１５、２．１ｍｇ（３
２．１ミリモル）の亜鉛末、１１ｍｌの酢酸（ＨＯＡ
ｃ）及び２．１ｍｌのＨ2 Ｏの混合物を、アルゴン下で
４時間、還流加熱した。該反応混合物を、冷却し、デカ
ントして亜鉛残渣から分離し、次いで小体積となるまで
減圧下で濃縮した。該濃縮物を１０ｍｌのＨ 2 Ｏにて希
釈し、濃水酸化アンモニウムにてｐＨ９に塩基性化し、
氷浴にて冷却した。得られたゴム状沈殿を、４ｘ５０ｍ
ｌのメチレンクロライドにて抽出した。１回目の抽出の
後に、追加量の濃水酸化アンモニウムを添加してｐＨ９
に調整した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウム
にて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を１５０ｇのシ
リカゲル上で、アセトン中の１０％メタノールを溶出液
として使用してクロマトグラフィーにかけ、５００ｍｇ
（４５％）の１６（ノル−ＬＳＤ）を淡褐色無定形固体
として得、また２００ｍｇ（１８％）の１７（ノルイソ
−ＬＳＤ）を淡褐色無定形固体として得た。また両者の
エピマーの混合物、４００ｍｇも得た。１６：［α］D
＝＋３４．３゜（濃度＝０．４５５％：ＣＨＣｌ3 ）；
１７：［α］D ＝＋２０８．９゜（濃度＝１．３７％：
ＣＨＣｌ3）。
【００７０】例１７ ５−［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキ
シ］−５−オキソ−ペンタノイルクロライド１８の合成 ５０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の１０．０ｇ（０．０８８モ
ル）の無水グルタール酸溶液を、１０．０ｇ（０．０８
７モル）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドにより処理
し、３．５時間還流加熱した。該反応物を、減圧下で油
状物となるまで濃縮した。該油状物を５０ｍｌの酢酸エ
チルから結晶化して、９．２ｇ（４６％）の５−
［（２，５−ジオキソ−１−ピリジニル）オキシ］−５
−オキソペンタン酸を得、これを１６ｍｌの塩化チオニ
ルにて処理してアルゴン下で４５℃にて３時間加熱し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮して白色固体とし、こ
れを少量のエーテルにて破砕して吸引濾過により回収し
た。生成物を高真空下で一夜乾燥させて、８．７ｇ（８
８％）の１８を白色固体として得た。
シ］−５−オキソ−ペンタノイルクロライド１８の合成 ５０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の１０．０ｇ（０．０８８モ
ル）の無水グルタール酸溶液を、１０．０ｇ（０．０８
７モル）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドにより処理
し、３．５時間還流加熱した。該反応物を、減圧下で油
状物となるまで濃縮した。該油状物を５０ｍｌの酢酸エ
チルから結晶化して、９．２ｇ（４６％）の５−
［（２，５−ジオキソ−１−ピリジニル）オキシ］−５
−オキソペンタン酸を得、これを１６ｍｌの塩化チオニ
ルにて処理してアルゴン下で４５℃にて３時間加熱し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮して白色固体とし、こ
れを少量のエーテルにて破砕して吸引濾過により回収し
た。生成物を高真空下で一夜乾燥させて、８．７ｇ（８
８％）の１８を白色固体として得た。
【００７１】例１８ １−［［５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−
［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イ
ル］−１，５−ジオキソペンチル］オキシ］−２，５−
ピロリジンジオン１９の合成 １０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２００ｍｇ（０．６５ミリモ
ル）の１６の溶液を、アルゴン下で１６１ｍｇ（０．６
５ミリモル）の１８、次いで０．２ｍｌ（１．４ミリモ
ル）の乾燥トリメチルアミンにより処理した。該反応混
合物を室温にて３０分間撹拌し、次いで減圧下で濃縮し
た。残渣をメチレンクロライドに溶解し、Ｈ2 Ｏ及び重
炭酸ナトリウム水溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウム
にて乾燥させ、減圧下で濃縮して３３０ｍｇ（９８％）
の１９を、黄色無定形固体として得た。
［（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イ
ル］−１，５−ジオキソペンチル］オキシ］−２，５−
ピロリジンジオン１９の合成 １０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中の２００ｍｇ（０．６５ミリモ
ル）の１６の溶液を、アルゴン下で１６１ｍｇ（０．６
５ミリモル）の１８、次いで０．２ｍｌ（１．４ミリモ
ル）の乾燥トリメチルアミンにより処理した。該反応混
合物を室温にて３０分間撹拌し、次いで減圧下で濃縮し
た。残渣をメチレンクロライドに溶解し、Ｈ2 Ｏ及び重
炭酸ナトリウム水溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウム
にて乾燥させ、減圧下で濃縮して３３０ｍｇ（９８％）
の１９を、黄色無定形固体として得た。
【００７２】例１９ ５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジエチル
アミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］−１，５
−ジオキソペンチル−ＢＴＧ２０の合成 １３ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝溶液ｐＨ７．５中の７０
０ｍｇのＢＴＧ溶液を０℃に冷却し、１３ｍｌのＤＭＳ
Ｏを極めてゆっくり滴下、添加することにより処理し
た。添加完了後、１ｍｌのＤＭＳＯ中の８４ｍｇ（０．
１６ミリモル）の１９の溶液を極めてゆっくり滴下添加
した。該反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、５０ｋ
Ｄａ遮断の透析バッグに注入し、５０ｍＭのＫＰｉ、ｐ
Ｈ７．５中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて
２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２５％ＤＭ
ＳＯ、２リットルに、室温にて２時間；１００％の５０
ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、２リットルに、室温にて２
時間；および７ｘ４リットルの５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５に、４℃にてそれぞれ６時間透析した。得られた
接合体を、０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過
し、ＬＳＤ−ＢＴＧ接合体２０を得た。クーマシーブル
ー蛋白アッセイにより決定された蛋白質濃度は、１２．
１ｍｇ／ｍｌであった。ＴＮＢＳアッセイは、ＢＴＧ上
の利用可能なリジンの４５％の修飾を示した。
アミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］−１，５
−ジオキソペンチル−ＢＴＧ２０の合成 １３ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝溶液ｐＨ７．５中の７０
０ｍｇのＢＴＧ溶液を０℃に冷却し、１３ｍｌのＤＭＳ
Ｏを極めてゆっくり滴下、添加することにより処理し
た。添加完了後、１ｍｌのＤＭＳＯ中の８４ｍｇ（０．
１６ミリモル）の１９の溶液を極めてゆっくり滴下添加
した。該反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、５０ｋ
Ｄａ遮断の透析バッグに注入し、５０ｍＭのＫＰｉ、ｐ
Ｈ７．５中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて
２時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２５％ＤＭ
ＳＯ、２リットルに、室温にて２時間；１００％の５０
ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、２リットルに、室温にて２
時間；および７ｘ４リットルの５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５に、４℃にてそれぞれ６時間透析した。得られた
接合体を、０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過
し、ＬＳＤ−ＢＴＧ接合体２０を得た。クーマシーブル
ー蛋白アッセイにより決定された蛋白質濃度は、１２．
１ｍｇ／ｍｌであった。ＴＮＢＳアッセイは、ＢＴＧ上
の利用可能なリジンの４５％の修飾を示した。
【００７３】例２０ ５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジエチル
アミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］−１，５
−ジオキソペンチル−ＢＳＡ２１の合成 ２２ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝溶液ｐＨ７．５中の１．
１ｇのＢＳＡ溶液を０℃に冷却し、２２ｍｌのＤＭＳＯ
を極めてゆっくり滴下、添加することにより処理した。
添加完了後、４ｍｌを取り出し、対照として別におい
た。残る４０ｍｌ（１ｇのＢＳＡ）に、０．５ｍｌのＤ
ＭＳＯ中の１２ｍｇ（０．０２ミリモル）の１９の溶液
を極めてゆっくり滴下添加した。該反応混合物を室温に
て１８時間撹拌し、５０ｋＤａ遮断の透析バッグに注入
し、以下の通りに透析した：５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２
時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２５％ＤＭＳ
Ｏ、２リットルに、室温にて２時間；１００％の５０ｍ
ＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、２リットルに、室温にて２時
間；および７ｘ４リットルの５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５に、４℃にてそれぞれ６時間。得られた接合体
を、０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過し、Ｌ
ＳＤ−ＢＳＡ接合体２１を得た。クーマシーブルー蛋白
アッセイにより決定された蛋白質濃度は、１４．６ｍｇ
／ｍｌであった。ハプテン／ＢＳＡ比は０．８であっ
た。
アミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］−１，５
−ジオキソペンチル−ＢＳＡ２１の合成 ２２ｍｌの５０ｍＭリン酸緩衝溶液ｐＨ７．５中の１．
１ｇのＢＳＡ溶液を０℃に冷却し、２２ｍｌのＤＭＳＯ
を極めてゆっくり滴下、添加することにより処理した。
添加完了後、４ｍｌを取り出し、対照として別におい
た。残る４０ｍｌ（１ｇのＢＳＡ）に、０．５ｍｌのＤ
ＭＳＯ中の１２ｍｇ（０．０２ミリモル）の１９の溶液
を極めてゆっくり滴下添加した。該反応混合物を室温に
て１８時間撹拌し、５０ｋＤａ遮断の透析バッグに注入
し、以下の通りに透析した：５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５中の５０％ＤＭＳＯ、２リットルに、室温にて２
時間；５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５中の２５％ＤＭＳ
Ｏ、２リットルに、室温にて２時間；１００％の５０ｍ
ＭのＫＰｉ、ｐＨ７．５、２リットルに、室温にて２時
間；および７ｘ４リットルの５０ｍＭのＫＰｉ、ｐＨ
７．５に、４℃にてそれぞれ６時間。得られた接合体
を、０．２２μｍの滅菌フィルターを通して濾過し、Ｌ
ＳＤ−ＢＳＡ接合体２１を得た。クーマシーブルー蛋白
アッセイにより決定された蛋白質濃度は、１４．６ｍｇ
／ｍｌであった。ハプテン／ＢＳＡ比は０．８であっ
た。
【００７４】例２１ ８β−９，１０−ジデヒドロ−６−［３−（１，３−ジ
ヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２
−イル）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８
−カルボキサミド２２の合成 １７ｍｌの乾燥ＤＭＦ中の５６８ｍｇ（１．８４ミリモ
ル）の１６の溶液を、４１３ｍｇ（４．２ミリモル）の
無水炭酸カリウム、次いで６５３ｍｇ（２．１ミリモ
ル）のＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド２に
より処理し、４０℃にて一夜撹拌した。該反応混合物を
減圧下で濃縮し、残渣をメチレンクロライドにて希釈
し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥さ
せ、減圧下で濃縮した。次いで生成物を１５０ｇのシリ
カゲル上で、酢酸エチルを溶出液として使用するクロマ
トグラフィーにかけ、８３３ｍｇ（９１％）の２２を黄
色無定形固体として得た。
ヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２
−イル）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８
−カルボキサミド２２の合成 １７ｍｌの乾燥ＤＭＦ中の５６８ｍｇ（１．８４ミリモ
ル）の１６の溶液を、４１３ｍｇ（４．２ミリモル）の
無水炭酸カリウム、次いで６５３ｍｇ（２．１ミリモ
ル）のＮ−（３−アイオドプロピル）フタルイミド２に
より処理し、４０℃にて一夜撹拌した。該反応混合物を
減圧下で濃縮し、残渣をメチレンクロライドにて希釈
し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥さ
せ、減圧下で濃縮した。次いで生成物を１５０ｇのシリ
カゲル上で、酢酸エチルを溶出液として使用するクロマ
トグラフィーにかけ、８３３ｍｇ（９１％）の２２を黄
色無定形固体として得た。
【００７５】例２２ ８β−６−（３−アミノプロピル）−９，１０−ジデヒ
ドロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミ
ド２３の合成 ３０ｍｌのメタノール中の８２０ｍｇ（１．６５ミリモ
ル）の２２の溶液を、０．４ｍｌ（１２．７ミリモル）
の無水ヒドラジンにて処理し、室温にて一夜撹拌した。
該反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、１
００ｇのシリカゲル上で、メチレンクロライド中の２％
トリエチルアミン−１５％メタノールを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけた。生成物を含む分画
を合わせ、１５０ｇのシリカゲル上で、クロロホルム中
の２％トリエチルアミン−１５％メタノールを溶出液と
して使用する再クロマトグラフィーにかけ、５６０ｍｇ
（９３％）の２３を黄色無定形固体として得た。
ドロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミ
ド２３の合成 ３０ｍｌのメタノール中の８２０ｍｇ（１．６５ミリモ
ル）の２２の溶液を、０．４ｍｌ（１２．７ミリモル）
の無水ヒドラジンにて処理し、室温にて一夜撹拌した。
該反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、１
００ｇのシリカゲル上で、メチレンクロライド中の２％
トリエチルアミン−１５％メタノールを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけた。生成物を含む分画
を合わせ、１５０ｇのシリカゲル上で、クロロホルム中
の２％トリエチルアミン−１５％メタノールを溶出液と
して使用する再クロマトグラフィーにかけ、５６０ｍｇ
（９３％）の２３を黄色無定形固体として得た。
【００７６】例２３ １−［［［４’−［［［３−［８β−９，１０−ジデヒ
ドロ−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴ
リン−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］
［１，１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オ
キシ］−２，５−ピロリジンジオン２４の合成 ５０ｍｌの乾燥メチレンクロライド中の１．３２ｇ
（３．７ミリモル）の１２の溶液を、アルゴン下で０℃
に冷却し、５０ｍｌのメチレンクロライド中の５３５ｍ
ｇ（１．４６ミリモル）の溶液を３０分間で滴下添加し
て処理した。添加完了後、該反応混合物を飽和重炭酸ナ
トリウム水溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾
燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、１００ｇのシリカ
ゲル上で５％イソプロピルアルコールを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけた。生成物を含む分画
を合わせ、減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。該固体
をエーテル中に取り、５倍に濃縮して残留するイソプロ
ピルアルコールを除去し、２８０ｍｇ（２８％）の２４
を黄色固体として得た。
ドロ−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴ
リン−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］
［１，１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オ
キシ］−２，５−ピロリジンジオン２４の合成 ５０ｍｌの乾燥メチレンクロライド中の１．３２ｇ
（３．７ミリモル）の１２の溶液を、アルゴン下で０℃
に冷却し、５０ｍｌのメチレンクロライド中の５３５ｍ
ｇ（１．４６ミリモル）の溶液を３０分間で滴下添加し
て処理した。添加完了後、該反応混合物を飽和重炭酸ナ
トリウム水溶液にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾
燥させ、真空下で濃縮した。残渣を、１００ｇのシリカ
ゲル上で５％イソプロピルアルコールを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけた。生成物を含む分画
を合わせ、減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。該固体
をエーテル中に取り、５倍に濃縮して残留するイソプロ
ピルアルコールを除去し、２８０ｍｇ（２８％）の２４
を黄色固体として得た。
【００７７】例２４ ８β−６−酪酸エチルエステル−９，１０−ジデヒドロ
−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミド２
５の合成 ３５ｍｌの乾燥ＤＭＦ中の１．１ｇ（３．５ミリモル）
の１６の溶液を、アルゴン下で８００ｍｇの無水炭酸カ
リウム、次いで２ｍｌのエチルブロモブチレートにより
処理し、４０℃にて６時間、次いで室温にて一夜撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をメチレン
クロライドにて希釈し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、２
００ｇのシリカゲル上で、酢酸エチルを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけ、７８０ｍｇ（５２
％）の２５、８βエピマーを、黄色無定形固体として得
た。８４ｍｇの８α−エピマー、並びに３９５ｍｇの８
α−及び８β−エピマーの混合物も得た。
−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミド２
５の合成 ３５ｍｌの乾燥ＤＭＦ中の１．１ｇ（３．５ミリモル）
の１６の溶液を、アルゴン下で８００ｍｇの無水炭酸カ
リウム、次いで２ｍｌのエチルブロモブチレートにより
処理し、４０℃にて６時間、次いで室温にて一夜撹拌し
た。該反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をメチレン
クロライドにて希釈し、Ｈ2 Ｏにて洗浄し、無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、２
００ｇのシリカゲル上で、酢酸エチルを溶出液として使
用するクロマトグラフィーにかけ、７８０ｍｇ（５２
％）の２５、８βエピマーを、黄色無定形固体として得
た。８４ｍｇの８α−エピマー、並びに３９５ｍｇの８
α−及び８β−エピマーの混合物も得た。
【００７８】例２５ ８β−６−酪酸−９，１０−ジデヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジエ
チルエルゴリン−８−カルボキサミド２６の合成 １６ｍｌのメタノール及び８ｍｌのＨ2 Ｏ中の４００ｍ
ｇ（０．９４ミリモル）の２５の溶液を、１．６ｇの炭
酸カリウムにて処理し、室温にて３日間撹拌した。該反
応混合物を分離ロートに入れ、５０ｍｌのメチレンクロ
ライド及び５０ｍｌのＨ2 Ｏで希釈した。水性層を６Ｎ
ＨＣｌにてｐＨ７に中和した。該混合物を分離ロート
中で激しく振とうした。層を分離させ、水性部分をメチ
レンクロライドにて更に２回抽出した。合わせた有機抽
出物を無水硫酸ナトリウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮
し、３３０ｍｇ（８８％）の２６を淡褐色の固体として
得た。
チルエルゴリン−８−カルボキサミド２６の合成 １６ｍｌのメタノール及び８ｍｌのＨ2 Ｏ中の４００ｍ
ｇ（０．９４ミリモル）の２５の溶液を、１．６ｇの炭
酸カリウムにて処理し、室温にて３日間撹拌した。該反
応混合物を分離ロートに入れ、５０ｍｌのメチレンクロ
ライド及び５０ｍｌのＨ2 Ｏで希釈した。水性層を６Ｎ
ＨＣｌにてｐＨ７に中和した。該混合物を分離ロート
中で激しく振とうした。層を分離させ、水性部分をメチ
レンクロライドにて更に２回抽出した。合わせた有機抽
出物を無水硫酸ナトリウムにて乾燥させ、減圧下で濃縮
し、３３０ｍｇ（８８％）の２６を淡褐色の固体として
得た。
【００７９】例２６ 動物免疫プロトコール 免疫原をフロイントアジュバントと１：１で混合した。
５頭のヤギは、各々、背を横切って複数の部位に以下の
ように注射を受けた。
５頭のヤギは、各々、背を横切って複数の部位に以下の
ように注射を受けた。
【００８０】
【表１】 第１週 完全フロイント １．０ｍｇ 背を横切って 第２週 不完全 １．０ｍｇ 背を横切って 第３週 不完全 １．０ｍｇ 背を横切って 第４週 不完全 １．０ｍｇ 背を横切って 第８週 不完全 ０．５ｍｇ 背を横切って 月毎 不完全 ０．５ｍｇ 背を横切って
【００８１】動物が適切な免疫を受けて６カ月後に試験
的採血をし、抗血清を例２７に記述されるように適切な
ＬＳＤ−ＢＳＡ接合体をプレート被覆物質として使用し
たＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートアッセイにおい
て評価した。
的採血をし、抗血清を例２７に記述されるように適切な
ＬＳＤ−ＢＳＡ接合体をプレート被覆物質として使用し
たＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートアッセイにおい
て評価した。
【００８２】例２７ 抗−ＬＳＤ抗体及びＬＳＤ−ＢＳＡ標識−接合体を使用
するＬＳＤ用のＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートア
ッセイ 高結合９６ウエル・ポリスチレンマイクロタイタープレ
ートのウエル（Ｃｏｓｔｅｒ，ＭＡ）を、各５０μｌの
ＬＳＤ−ＢＳＡ接合体（ＰＢＳアジド緩衝溶液ｐＨ７．
２に希釈）により被覆し、室温にて２時間、または２℃
〜８℃にて一夜インキュベートした。プレートを、ＰＢ
Ｓ緩衝溶液にて３回洗浄した。ＰＢＳアジド緩衝溶液中
の１％ＢＳＡ、１００μｌを、各ウエルに分配し、プレ
ートを室温にて２時間インキュベートした。該プレート
を、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（Ｓｉ
ｇｍａ）を含有するＰＢＳにて３回洗浄した。ＢＳＡ−
ＰＢＳアジド緩衝溶液に希釈したＬＳＤ、もしくはノル
−ＬＳＤの５０μｌ、または対照として薬剤を含まない
１％ＢＳＡ−ＰＢＳアジド緩衝溶液５０μｌを添加し
た。１％ＢＳＡ−ＰＢＳアジド緩衝溶液中の適切な抗血
清、５０μｌを各ウエルに加えた。該プレートを、３７
℃にて１時間インキュベートし、次いでＰＢＳ−ＴＷＥ
ＥＮ（登録商標）−２０により３回洗浄した。５０μｌ
の抗−ヤギ−アルカリホスファターゼ接合体（Ｆｉｓｈ
ｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を各ウエルに加え、プレ
ートを３７℃にて１時間インキュベートした。該プレー
トを、ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０緩衝溶液
にて洗浄し、各ウエルに５０μｌのｐ−ニトロフェニル
ホスフェート（Ｓｉｇｍａ）を添加した。該プレート
を、室温にて３０分間インキュベートした。反応を、５
０μｌの３Ｎ ＮａＯＨの添加により停止させ、得られ
た光学密度を４０５ｎｍの波長において、マイクロタイ
タープレート読取り装置により測定した。アッセイにお
いて作成されたデータを下記に示す。得られたＬＳＤに
ついての阻害または置換曲線を、図５−７に示す。
するＬＳＤ用のＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートア
ッセイ 高結合９６ウエル・ポリスチレンマイクロタイタープレ
ートのウエル（Ｃｏｓｔｅｒ，ＭＡ）を、各５０μｌの
ＬＳＤ−ＢＳＡ接合体（ＰＢＳアジド緩衝溶液ｐＨ７．
２に希釈）により被覆し、室温にて２時間、または２℃
〜８℃にて一夜インキュベートした。プレートを、ＰＢ
Ｓ緩衝溶液にて３回洗浄した。ＰＢＳアジド緩衝溶液中
の１％ＢＳＡ、１００μｌを、各ウエルに分配し、プレ
ートを室温にて２時間インキュベートした。該プレート
を、０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（Ｓｉ
ｇｍａ）を含有するＰＢＳにて３回洗浄した。ＢＳＡ−
ＰＢＳアジド緩衝溶液に希釈したＬＳＤ、もしくはノル
−ＬＳＤの５０μｌ、または対照として薬剤を含まない
１％ＢＳＡ−ＰＢＳアジド緩衝溶液５０μｌを添加し
た。１％ＢＳＡ−ＰＢＳアジド緩衝溶液中の適切な抗血
清、５０μｌを各ウエルに加えた。該プレートを、３７
℃にて１時間インキュベートし、次いでＰＢＳ−ＴＷＥ
ＥＮ（登録商標）−２０により３回洗浄した。５０μｌ
の抗−ヤギ−アルカリホスファターゼ接合体（Ｆｉｓｈ
ｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を各ウエルに加え、プレ
ートを３７℃にて１時間インキュベートした。該プレー
トを、ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０緩衝溶液
にて洗浄し、各ウエルに５０μｌのｐ−ニトロフェニル
ホスフェート（Ｓｉｇｍａ）を添加した。該プレート
を、室温にて３０分間インキュベートした。反応を、５
０μｌの３Ｎ ＮａＯＨの添加により停止させ、得られ
た光学密度を４０５ｎｍの波長において、マイクロタイ
タープレート読取り装置により測定した。アッセイにお
いて作成されたデータを下記に示す。得られたＬＳＤに
ついての阻害または置換曲線を、図５−７に示す。
【００８３】
【表２】 図５の阻害曲線を生じるデータ 濃度（ｎｇ／ｍｌ） Ｇ６４８（ＯＤ） Ｇ６５１（ＯＤ） ０ １．０５ １．１７ ０．５ ０．８ １．０５ １ ０．３３ ０．７５ ５ ０．２５ ０．３９
【００８４】
【表３】 図６の阻害曲線を生じるデータ ノル−ＬＳＤ（ｎｇ／ｍｌ） Ｇ６５１（ＯＤ） ０ １．３８ １ １．２ ５ ０．８８ ５（ＬＳＤ） ０．６３
【００８５】
【表４】 図７の阻害曲線を生じるデータ 濃度（ｎｇ／ｍｌ） Ｇ６５１（ＯＤ） Ｇ６４８（ＯＤ） ０ ０．６７ ０．７ ０．５ ０．５ ０．５２ １ ０．３３ ０．３７ ５ ０．１９ ０．１７
【図１】図１は、本発明のＬＳＤ誘導体、１−
［［［（４−チオウレアフェニル）カルボニル］アミ
ノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド
−ＢＴＧ等の合成のためのスキームＩを示す図である。
［［［（４−チオウレアフェニル）カルボニル］アミ
ノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド
−ＢＴＧ等の合成のためのスキームＩを示す図である。
【図２】図２は、本発明のＬＳＤ誘導体、１−［［［３
−カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カル
ボニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳ
Ａ等の合成のためのスキームIIを示す図である。
−カルボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カル
ボニル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳ
Ａ等の合成のためのスキームIIを示す図である。
【図３】図３は、本発明のＬＳＤ誘導体、５−［８β−
９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カル
ボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペン
チル−ＢＳＡ等の合成のためのスキームIII を示す図で
ある。
９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カル
ボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペン
チル−ＢＳＡ等の合成のためのスキームIII を示す図で
ある。
【図４】図４は、本発明のＬＳＤ誘導体、１−
［［［４’−［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ
−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴリン
−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］［１，
１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オキシ］
−２，５−ピロリジンジオン等の合成のためのスキーム
IVを示す図である。
［［［４’−［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ
−８−［（ジエチル−アミノ）カルボニル］エルゴリン
−６−イル］プロピル］アミノ］カルボニル］［１，
１’−ビフェニル］−４−イル］カルボニル］オキシ］
−２，５−ピロリジンジオン等の合成のためのスキーム
IVを示す図である。
【図５】図５は、ＬＳＤ及び１−［［［３−カルボニル
（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］−ア
ミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの間の、抗
−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量応答曲線
を示すグラフである。
（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］−ア
ミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの間の、抗
−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量応答曲線
を示すグラフである。
【図６】図６は、ノル−ＬＳＤ及び１−［［［３−カル
ボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニ
ル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの
間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量
応答曲線を示すグラフである。
ボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニ
ル］−アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡの
間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与量
応答曲線を示すグラフである。
【図７】図７は、ＬＳＤ及び５−［８β−９，１０−ジ
デヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エル
ゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳＡ
の間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与
量応答曲線を示すグラフである。
デヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エル
ゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳＡ
の間の、抗−ＬＳＤ抗体への結合についての競合の投与
量応答曲線を示すグラフである。
フロントページの続き (72)発明者 スチーブン エス．ビトン アメリカ合衆国ニュージャージー州ピスカ タウェイ，ダネレン アベニュー 147 (72)発明者 ロバート サンドロ ウー アメリカ合衆国ニュージャージー州ウエス ト オレンジ，ラルフ ロード 25
Claims (10)
- 【請求項１】 式、 【化１】 式中、Ｒ1 及びＲ2 は、独立してＨまたはＲ3 Ｒ4 から
選択され、但し、Ｒ1 及びＲ2の少なくとも一つはＨで
あって、Ｒ1 及びＲ2 の両者が同時にＨであることはな
く；Ｒ3 は、Ｒ4 がＣＯＲ5 である場合には、結合また
は１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水
素であるか、あるいはＲ4 がＮＨＲ5 である場合には、
１−１０個の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖炭化水素
であり；Ｒ5 はＨ、ＬまたはＬＸから選択され；Ｌは結
合基であり；並びにＸはＬを介して結合される検出子ま
たは担体分子である、を有する化合物。 - 【請求項２】 Ｌが、ジメチルスベリミデート、Ｎ−ス
クシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピ
オネート、ジイソチオシアナトベンゼン、４−イソチオ
シアナトベンゾイルクロライド、ｍ−マレイミドベンゾ
イル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド エステル、４−
（２，５−ジオキソ−１−ピリジニルカルボニル）オキ
シ−１，１−ビフェニル−１，４−カルボニルクロライ
ド及び５−（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オ
キシ−５−オキソペンタノイルクロライドからなる群か
ら選択される請求項１に記載の化合物。 - 【請求項３】 １−［［［（４−イソチオシアナトフェ
ニル）カルボニル］アミノ］−ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエ
チル−Ｄ−リゼルグアミド、１−［３−［［［４’−
［［（２，５−ジオキソ−１−ピロリジニル）オキシ］
カルボニル］［１，１’−ビフェニル］−４−イル］カ
ルボニル］アミノ］プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ
−リゼルグアミド、１−［［５−［８ｂ−９，１０−ジ
デヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カルボニル］エル
ゴリン−６−イル］−１，５−ジオキソペンチル］オキ
シ］−２，５−ピロリジンジオン及び１−［［［４’−
［［［３−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジ
エチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル］プ
ロピル］アミノ］カルボニル］［１，１’−ビフェニ
ル］−４−イル］カルボニル］オキシ］−２，５−ピロ
リジンジオンからなる群から選択される請求項２に記載
の化合物。 - 【請求項４】 １−（３−アミノブチル）−Ｎ，Ｎ−ジ
エチル−Ｄ−リゼルグアミド、１−（３−アミノプロピ
ル）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ−リゼルグアミド及び８β
−６−（３−アミノプロピル）−９，１０−ジデヒドロ
−Ｎ，Ｎ−ジエチルエルゴリン−８−カルボキサミドか
らなる群から選択される請求項１に記載の化合物。 - 【請求項５】 Ｘが、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）ま
たはウシチログロブリン（ＢＴＧ）からなる担体分子で
ある請求項１に記載の化合物。 - 【請求項６】 １−［［［（４−チオウレアフェニル）
カルボニル］アミノ］ブチル］−Ｎ，Ｎ−ジエチル−Ｄ
−リゼルグアミド−ＢＴＧ、１−［［［３−カルボニル
（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］アミ
ノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡ、５−［８β
−９，１０−ジデヒドロ−８−［（ジエチルアミノ）カ
ルボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジオキソペ
ンチル−ＢＴＧ及び５−［８β−９，１０−ジデヒドロ
−８−「（ジエチルアミノ）カルボニル］エルゴリン−
６−イル−１，５−ジオキソペンチル−ＢＳＡからなる
群から選択される請求項５に記載の化合物。 - 【請求項７】 請求項５または６に記載の化合物である
標識−接合体を含んでなる、生物学的液体試料中のリゼ
ルギン酸ジエチルアミド及びその代謝産物の免疫定量用
試薬。 - 【請求項８】 標識−接合体が、１−［［［３−カルボ
ニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニル］
アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡ、及び５
−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−「（ジエチルア
ミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル−１，５−ジ
オキソペンチル−ＢＳＡからなる群から選択される請求
項７に記載の試薬。 - 【請求項９】 請求項５または６に記載の化合物である
標識−接合体を使用することを含んでなる、生物学的液
体試料中のリゼルギン酸ジエチルアミド及びその代謝産
物の定量のためのイムノアッセイ。 - 【請求項１０】 標識−接合体が、１−［［［３−カル
ボニル（１，１’−ビフェニル−４−イル］カルボニ
ル］アミノプロピル］Ｄ−リゼルグアミド−ＢＳＡ、及
び５−［８β−９，１０−ジデヒドロ−８−「（ジエチ
ルアミノ）カルボニル］エルゴリン−６−イル−１，５
−ジオキソペンチル−ＢＳＡからなる群から選択される
請求項９に記載のイムノアッセイ。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018502888A (ja) * | 2015-01-20 | 2018-02-01 | エックスオーシー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＸｏｃ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ | エルゴリン化合物およびその使用 |
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|---|---|---|---|---|
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| DE19955582B4 (de) * | 1999-11-18 | 2004-07-22 | Jandratek Gmbh | Gegenstand mit einer ungeladenen, funktionalisierten Oberfläche umfassend ein Hydrogel, Verfahren zur Herstellung und Verwendung des Gegenstandes sowie Verbindungen zur Herstellung der Oberfläche |
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| US8785179B2 (en) * | 2002-05-22 | 2014-07-22 | Texas Instruments Incorporated | Biosensor and method |
| US20060223998A1 (en) * | 2005-03-30 | 2006-10-05 | Fang-Jie Zhang | Synthetic LSD metabolite for preparing haptens used in an LSD metabolite immunoassay |
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Family Cites Families (10)
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-
2000
- 2000-02-17 US US09/502,254 patent/US6476199B1/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018502888A (ja) * | 2015-01-20 | 2018-02-01 | エックスオーシー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＸｏｃ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ | エルゴリン化合物およびその使用 |
| US10703753B2 (en) | 2015-01-20 | 2020-07-07 | Xoc Pharmaceuticals, Inc. | Ergoline compounds and uses thereof |
| US10815235B2 (en) | 2017-06-01 | 2020-10-27 | Xoc Pharmaceuticals | Polycyclic compounds and uses thereof |
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