JPH1080290A - ＭｕｒＡ−１ - Google Patents
ＭｕｒＡ−１Info
- Publication number
- JPH1080290A JPH1080290A JP9215404A JP21540497A JPH1080290A JP H1080290 A JPH1080290 A JP H1080290A JP 9215404 A JP9215404 A JP 9215404A JP 21540497 A JP21540497 A JP 21540497A JP H1080290 A JPH1080290 A JP H1080290A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- polynucleotide
- mura
- dna
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 255
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 244
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 239
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 158
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 158
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 157
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 104
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 44
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 87
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 76
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 65
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 60
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 49
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 28
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 21
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 20
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 15
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 13
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 12
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 11
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 7
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims description 6
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 6
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 5
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 4
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 abstract description 26
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 50
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 16
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 16
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 15
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 14
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 14
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 13
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 12
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 12
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 10
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 8
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 7
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N UDP-N-acetyl-alpha-D-glucosamine Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N 0.000 description 5
- LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N UNPD164450 Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC(=O)C)C1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 4
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 3
- -1 Enol pyruvate Chemical class 0.000 description 3
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- 208000033809 Suppuration Diseases 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 3
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 2
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011203 antimicrobial therapy Methods 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- DQJCHOQLCLEDLL-UHFFFAOYSA-N tricyclazole Chemical compound CC1=CC=CC2=C1N1C=NN=C1S2 DQJCHOQLCLEDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N (9Z)-octadecen-1-ol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCO ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 1
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 101100310856 Drosophila melanogaster spri gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 108010074124 Escherichia coli Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010002231 IgA-specific serine endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000969137 Mus musculus Metallothionein-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N N-formyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC=O PYUSHNKNPOHWEZ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 206010037651 Pyometra Diseases 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108010085193 UDP-N-acetylglucosamine 1-carboxyvinyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 244000156473 Vallaris heynei Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010048038 Wound infection Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000010516 arginylation Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 101150055766 cat gene Proteins 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000003221 ear drop Substances 0.000 description 1
- 229940047652 ear drops Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007247 enzymatic mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 1
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000037362 glycan biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical group 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012188 high-throughput screening assay Methods 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000010249 in-situ analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000013038 irreversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 101150109249 lacI gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 1
- XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N oleyl alcohol Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCCCCO XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055577 oleyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108010082406 peptide permease Proteins 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K phosphonatoenolpyruvate Chemical compound [O-]C(=O)C(=C)OP([O-])([O-])=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 201000002765 pyometritis Diseases 0.000 description 1
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ストレプトコッカス・ニューモニエの関与す
る感染、機能不全および疾患にて、抗生物質活性を有す
る化合物をスクリーニングし、さらにその発病における
役割を測定するのに用いることのできるファクターに対
する要求がある。 【解決手段】 本発明は、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドお
よびかかるＭｕｒＡ−１をコードするＤＮＡ（またはＲ
ＮＡ）および組換え技法によるかかるポリぺプチドの産
生方法を開示するものであり、感染、特に細菌感染の治
療にかかるＭｕｒＡ−１を用いる方法を開示する。さら
には、かかるＭｕｒＡ−１に拮抗するアンタゴニストお
よび感染、特に細菌感染を治療するための治療薬として
の使用も開示する。
る感染、機能不全および疾患にて、抗生物質活性を有す
る化合物をスクリーニングし、さらにその発病における
役割を測定するのに用いることのできるファクターに対
する要求がある。 【解決手段】 本発明は、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドお
よびかかるＭｕｒＡ−１をコードするＤＮＡ（またはＲ
ＮＡ）および組換え技法によるかかるポリぺプチドの産
生方法を開示するものであり、感染、特に細菌感染の治
療にかかるＭｕｒＡ−１を用いる方法を開示する。さら
には、かかるＭｕｒＡ−１に拮抗するアンタゴニストお
よび感染、特に細菌感染を治療するための治療薬として
の使用も開示する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一部、新規同定さ
れたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；そのポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの変種および誘導体；そ
のポリヌクレオチドおよびポリペプチド、および、その
変種および誘導体の製造方法；そのポリペプチドのアゴ
ニストおよびアンタゴニスト；およびそのポリヌクレオ
チド、ポリペプチド、変種、誘導体、アゴニストおよび
アンタゴニストの使用に関する。特に、これらおよび他
の点において、本発明は、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコ
サミン・エノールピルビルトランスフェラーゼ酵素（以
下、「ＭｕｒＡ−１」と称する）の、およびそれに相同
的なポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する。
れたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；そのポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの変種および誘導体；そ
のポリヌクレオチドおよびポリペプチド、および、その
変種および誘導体の製造方法；そのポリペプチドのアゴ
ニストおよびアンタゴニスト；およびそのポリヌクレオ
チド、ポリペプチド、変種、誘導体、アゴニストおよび
アンタゴニストの使用に関する。特に、これらおよび他
の点において、本発明は、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコ
サミン・エノールピルビルトランスフェラーゼ酵素（以
下、「ＭｕｒＡ−１」と称する）の、およびそれに相同
的なポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する。
【０００２】
【従来技術および発明が解決しようとする課題】ストレ
プトコッカス（Ｓtreptococci）は、中耳炎、肺炎およ
び髄膜炎を含め、ヒトにおいて数種の疾患の原因となる
ことが知られている微生物の医学的に重要な属を形成す
る。その単離は１００年以上前であるため、ストレプト
コッカス・ニューモニエ（Ｓtreptococcus pneumonia
e）はより精力的に研究されている微生物の一つであ
る。例えば、ＤＮＡが、実際、遺伝物質であるという初
期の認識の大部分は、この微生物を用いる、Ｇriffith
の研究、Ａvery、ＭacleadおよびＭcＣartyの研究に基
づいて断定された。エス・ニューモニエを用いる膨大な
量の研究にもかかわらず、この微生物のビルレンスに関
する課題が多く残っている。
プトコッカス（Ｓtreptococci）は、中耳炎、肺炎およ
び髄膜炎を含め、ヒトにおいて数種の疾患の原因となる
ことが知られている微生物の医学的に重要な属を形成す
る。その単離は１００年以上前であるため、ストレプト
コッカス・ニューモニエ（Ｓtreptococcus pneumonia
e）はより精力的に研究されている微生物の一つであ
る。例えば、ＤＮＡが、実際、遺伝物質であるという初
期の認識の大部分は、この微生物を用いる、Ｇriffith
の研究、Ａvery、ＭacleadおよびＭcＣartyの研究に基
づいて断定された。エス・ニューモニエを用いる膨大な
量の研究にもかかわらず、この微生物のビルレンスに関
する課題が多く残っている。
【０００３】病原性に関与するある種のストレプトコッ
カス因子、例えば、夾膜多糖類、ペプチドグリカン、ニ
ューモリジン、ＰｓｐＡ補体因子Ｈ結合成分、自己融解
素、ノイラミニダーゼ、ペプチド透過酵素、過酸化水
素、ＩｇＡ１プロテアーゼが同定されているが、そのリ
ストは決して完全なものではない。さらには、哺乳動物
宿主において感染および疾患進行の間にかかる遺伝子の
一時的な発現が関与していることはほとんど知られてい
ない。細菌は感染の種々の段階で、特に感染が確立され
ている場合、発現するようであり、遺伝子の配置につい
ての知見は、病原性を妨げることのできる新規な抗菌剤
をスクリーニングすることおよび特性化することについ
て臨界的な情報を提供する。公知蛋白質のさらなる理解
に加えて、このようなアプローチで未だ認識されていな
い標的も識別されるであろう。
カス因子、例えば、夾膜多糖類、ペプチドグリカン、ニ
ューモリジン、ＰｓｐＡ補体因子Ｈ結合成分、自己融解
素、ノイラミニダーゼ、ペプチド透過酵素、過酸化水
素、ＩｇＡ１プロテアーゼが同定されているが、そのリ
ストは決して完全なものではない。さらには、哺乳動物
宿主において感染および疾患進行の間にかかる遺伝子の
一時的な発現が関与していることはほとんど知られてい
ない。細菌は感染の種々の段階で、特に感染が確立され
ている場合、発現するようであり、遺伝子の配置につい
ての知見は、病原性を妨げることのできる新規な抗菌剤
をスクリーニングすることおよび特性化することについ
て臨界的な情報を提供する。公知蛋白質のさらなる理解
に加えて、このようなアプローチで未だ認識されていな
い標的も識別されるであろう。
【０００４】遺伝子ＭｕｒＡ（ＭｕｒＺ）によりコード
される酵素ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノー
ルピルビルトランスフェラーゼは、ぺプチドグリカンの
生合成の第１段階を触媒する。該遺伝子はエシェリキア
・コリ（Ｅscherichia coli）よりクローンされ、かつ
配列決定され、対応する酵素（４１９アミノ酸）が過剰
発現され、かつ精製された（Ｍarquardt,Ｊ.Ｌ.,Ｓiege
le,Ｄ.Ａ.,Ｋolter,Ｒ.＆Ｗalsh,Ｃ.Ｔ.（１９９２）
Ｊ.Ｂacteriol.174,5748−5752）。この酵素の運動機構
は十分に特性化されている。エノールピルベートは、無
機燐酸塩を放出しながら、ホスホエノールピルベート
（ＰＥＰ）からＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｕ
ＤＰＧｌｃＮＡｃ）に変わる。該酵素の活性部位にある
システイン残基（１１５）が酵素機構において重要であ
る事が分かっており、該酵素の非可逆性阻害剤、ホスホ
マイシンが結合する残基である（Ｗanke,Ｃ.＆Ａmerhei
n,Ｎ.,（1993）Ｅur Ｊ.Ｂiochem.218 861−870；Ｍarq
uardt,Ｊ.Ｌ.,Ｂrown,Ｅ.Ｄ.,Ｌane,Ｗ.Ｓ.,Ｈaley,Ｔ.
Ｍ.,Ｉchikawa,Ｙ.,Ｗong,Ｃ−Ｈ.,Ｗalch,Ｃ.Ｔ.（199
4）Ｂiochemistry 33 10646−10651；Ｋim,Ｄ.Ｈ.,Ｌee
s,Ｗ.Ｊ.,Ｋempsell,Ｋ.Ｅ.,Ｌane,Ｗ.Ｓ.,Ｄuncan,Ｋ.
＆Ｗalsh,Ｃ.Ｔ.（1996）Ｂiochemistry 35 4923−492
8）。ＭｕｒＡ遺伝子がイー・コリにて不可欠であるこ
とが示され（Ｂrown,Ｅ.Ｄ.,Ｖivas,Ｅ.Ｉ.,Ｗalsh,Ｃ.
Ｔ.＆Ｋolter,Ｒ.（1995）Ｊ.Ｂacteriol.177,4194−41
97）、さらにバシラス・サチリス（Ｂacillus subtili
s）、エンテロバクター・クロアケ（Ｅnterobacter clo
acae）（Ｗanke,Ｃ.,Ｆalchetto,Ｒ.＆Ａmerhein,Ｎ.
（1992）ＦＥＢＳ Ｌett 301,271−276）、マイコバク
テリウム・ツベルクローシス（Ｍycobacterium tubercu
losis）およびアシネトバクター・カルコセチカス（Ａc
inetobacter calcoaceticus）（Ｅhrt,Ｓ.＆Ｈillen,
Ｗ.（1994）ＦＥＭＳ Ｍicrobiol.Ｌett，117,137−14
2）。ヒト病原体、ストレプトコッカス・ニューモニエ
中のＭｕｒＡ相同体の発見は、以下に記載する新規な抗
生物質をスクリーンするのに用いることのできるＵＤＰ
−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトラン
スフェラーゼ酵素の産生を可能とする。この蛋白質の阻
害剤は、該阻害剤が細菌の細胞壁の構築を防止する場
合、抗菌治療にて有用である。
される酵素ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノー
ルピルビルトランスフェラーゼは、ぺプチドグリカンの
生合成の第１段階を触媒する。該遺伝子はエシェリキア
・コリ（Ｅscherichia coli）よりクローンされ、かつ
配列決定され、対応する酵素（４１９アミノ酸）が過剰
発現され、かつ精製された（Ｍarquardt,Ｊ.Ｌ.,Ｓiege
le,Ｄ.Ａ.,Ｋolter,Ｒ.＆Ｗalsh,Ｃ.Ｔ.（１９９２）
Ｊ.Ｂacteriol.174,5748−5752）。この酵素の運動機構
は十分に特性化されている。エノールピルベートは、無
機燐酸塩を放出しながら、ホスホエノールピルベート
（ＰＥＰ）からＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン（Ｕ
ＤＰＧｌｃＮＡｃ）に変わる。該酵素の活性部位にある
システイン残基（１１５）が酵素機構において重要であ
る事が分かっており、該酵素の非可逆性阻害剤、ホスホ
マイシンが結合する残基である（Ｗanke,Ｃ.＆Ａmerhei
n,Ｎ.,（1993）Ｅur Ｊ.Ｂiochem.218 861−870；Ｍarq
uardt,Ｊ.Ｌ.,Ｂrown,Ｅ.Ｄ.,Ｌane,Ｗ.Ｓ.,Ｈaley,Ｔ.
Ｍ.,Ｉchikawa,Ｙ.,Ｗong,Ｃ−Ｈ.,Ｗalch,Ｃ.Ｔ.（199
4）Ｂiochemistry 33 10646−10651；Ｋim,Ｄ.Ｈ.,Ｌee
s,Ｗ.Ｊ.,Ｋempsell,Ｋ.Ｅ.,Ｌane,Ｗ.Ｓ.,Ｄuncan,Ｋ.
＆Ｗalsh,Ｃ.Ｔ.（1996）Ｂiochemistry 35 4923−492
8）。ＭｕｒＡ遺伝子がイー・コリにて不可欠であるこ
とが示され（Ｂrown,Ｅ.Ｄ.,Ｖivas,Ｅ.Ｉ.,Ｗalsh,Ｃ.
Ｔ.＆Ｋolter,Ｒ.（1995）Ｊ.Ｂacteriol.177,4194−41
97）、さらにバシラス・サチリス（Ｂacillus subtili
s）、エンテロバクター・クロアケ（Ｅnterobacter clo
acae）（Ｗanke,Ｃ.,Ｆalchetto,Ｒ.＆Ａmerhein,Ｎ.
（1992）ＦＥＢＳ Ｌett 301,271−276）、マイコバク
テリウム・ツベルクローシス（Ｍycobacterium tubercu
losis）およびアシネトバクター・カルコセチカス（Ａc
inetobacter calcoaceticus）（Ｅhrt,Ｓ.＆Ｈillen,
Ｗ.（1994）ＦＥＭＳ Ｍicrobiol.Ｌett，117,137−14
2）。ヒト病原体、ストレプトコッカス・ニューモニエ
中のＭｕｒＡ相同体の発見は、以下に記載する新規な抗
生物質をスクリーンするのに用いることのできるＵＤＰ
−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトラン
スフェラーゼ酵素の産生を可能とする。この蛋白質の阻
害剤は、該阻害剤が細菌の細胞壁の構築を防止する場
合、抗菌治療にて有用である。
【０００５】抗生物質活性について化合物をスクリーン
するのに用いることのできる、かつ感染、機能不全およ
び疾患の病因論にてその役割を決定するのに用いること
のできるファクターに関する要求がある。したがって、
感染、機能不全または疾患の防止、改善または治癒にて
役割を果たすことのできるファクターを同定かつ特性化
する必要がある。
するのに用いることのできる、かつ感染、機能不全およ
び疾患の病因論にてその役割を決定するのに用いること
のできるファクターに関する要求がある。したがって、
感染、機能不全または疾患の防止、改善または治癒にて
役割を果たすことのできるファクターを同定かつ特性化
する必要がある。
【０００６】本発明のポリぺプチドは、公知ＵＤＰ−Ｎ
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼに相同的なアミノ酸配列を有する。配列番号：
２のアミノ酸配列は、配列番号：１の翻訳されたオープ
ンリーディングフレーム配列であり、イー・コリ由来の
ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビル
トランスフェラーゼと相同性（５１％同一性）を示す。
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼに相同的なアミノ酸配列を有する。配列番号：
２のアミノ酸配列は、配列番号：１の翻訳されたオープ
ンリーディングフレーム配列であり、イー・コリ由来の
ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビル
トランスフェラーゼと相同性（５１％同一性）を示す。
【０００７】
【課題を解決するための手段】これらおよび他の目的の
ために、特に、図４に示したアミノ酸配列とイー・コリ
などの他の蛋白質の公知アミノ酸配列の間の相同性によ
って、新規ＭｕｒＡ−１ぺプチドとして同定されたポリ
ペプチドを提供することが本発明の目的である。
ために、特に、図４に示したアミノ酸配列とイー・コリ
などの他の蛋白質の公知アミノ酸配列の間の相同性によ
って、新規ＭｕｒＡ−１ぺプチドとして同定されたポリ
ペプチドを提供することが本発明の目的である。
【０００８】さらに、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドをコー
ドするポリヌクレオチド、特に、本明細書にてＭｕｒＡ
−１として示されるポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドを提供することが、本発明のさらなる目的であ
る。本発明のこの態様の特に好ましい具体例において、
ポリヌクレオチドは、図１ないし３に示した配列のＭｕ
ｒＡ−１ポリぺプチド（配列番号：１）、またはそのフ
ラグメント、アナログまたは誘導体をコードする領域を
有してなる。
ドするポリヌクレオチド、特に、本明細書にてＭｕｒＡ
−１として示されるポリペプチドをコードするポリヌク
レオチドを提供することが、本発明のさらなる目的であ
る。本発明のこの態様の特に好ましい具体例において、
ポリヌクレオチドは、図１ないし３に示した配列のＭｕ
ｒＡ−１ポリぺプチド（配列番号：１）、またはそのフ
ラグメント、アナログまたは誘導体をコードする領域を
有してなる。
【０００９】本発明の別の特に好ましい具体例は、図４
のアミノ酸配列（配列番号：２）あるいはそのフラグメ
ント、アナログまたは誘導体を有してなるストレプトコ
ッカス・ニューモニエ由来の新規のＵＤＰ−Ｎ−アセチ
ルグルコサミン・エノールピルビルトランスフェラーゼ
蛋白質である。本発明のこの態様に従って、ＮＣＩＭＢ
寄託番号４０７９４に含まれるストレプトコッカス・ニ
ューモニエのエス・ニューモニエ０１００９３クロー
ン、ストレプトコッカス・ニューモニエ０１００９９３
によって発現可能な成熟ポリペプチドをコードする単離
された核酸分子が提供される。
のアミノ酸配列（配列番号：２）あるいはそのフラグメ
ント、アナログまたは誘導体を有してなるストレプトコ
ッカス・ニューモニエ由来の新規のＵＤＰ−Ｎ−アセチ
ルグルコサミン・エノールピルビルトランスフェラーゼ
蛋白質である。本発明のこの態様に従って、ＮＣＩＭＢ
寄託番号４０７９４に含まれるストレプトコッカス・ニ
ューモニエのエス・ニューモニエ０１００９３クロー
ン、ストレプトコッカス・ニューモニエ０１００９９３
によって発現可能な成熟ポリペプチドをコードする単離
された核酸分子が提供される。
【００１０】本発明のこの態様に従って、ｍＲＮＡ、ｃ
ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および本発明のこの態様のさら
なる具体例において、生物学的、診断学的、予防学的、
臨床的、または治療的に有用なその変種、アナログまた
は誘導体、または変種、アナログおよび誘導体のフラグ
メントを包含するそれのフラグメントならびにそれらを
含有してなる組成を含む、ＭｕｒＡ−１、特にストレプ
トコッカスＭｕｒＡ−１をコードする単離された核酸分
子が提供される。
ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および本発明のこの態様のさら
なる具体例において、生物学的、診断学的、予防学的、
臨床的、または治療的に有用なその変種、アナログまた
は誘導体、または変種、アナログおよび誘導体のフラグ
メントを包含するそれのフラグメントならびにそれらを
含有してなる組成を含む、ＭｕｒＡ−１、特にストレプ
トコッカスＭｕｒＡ−１をコードする単離された核酸分
子が提供される。
【００１１】本発明の別の態様に従って、治療または予
防目的、特に遺伝的免疫処置のために、本発明のポリヌ
クレオチドの使用が提供される。ＭｕｒＡ−１の天然に
存在する対立遺伝子変種およびそれによりコードされる
ポリぺプチドが本発明のこの態様の特に好ましい具体例
である。
防目的、特に遺伝的免疫処置のために、本発明のポリヌ
クレオチドの使用が提供される。ＭｕｒＡ−１の天然に
存在する対立遺伝子変種およびそれによりコードされる
ポリぺプチドが本発明のこの態様の特に好ましい具体例
である。
【００１２】本発明のこの態様に従って、本明細書中、
ＭｕｒＡ−１と称されるストレプトコッカスの新規ポリ
ぺプチドならびにその生物学的、診断学的、予防学的、
臨床的または治療的に有用なフラグメント、変種および
誘導体、フラグメントの変種および誘導体、およびこれ
らのアナログおよびそれらを含有してなる組成が提供さ
れる。
ＭｕｒＡ−１と称されるストレプトコッカスの新規ポリ
ぺプチドならびにその生物学的、診断学的、予防学的、
臨床的または治療的に有用なフラグメント、変種および
誘導体、フラグメントの変種および誘導体、およびこれ
らのアナログおよびそれらを含有してなる組成が提供さ
れる。
【００１３】ＭｕｒＡ−１遺伝子の天然の対立遺伝子に
よってコードされるＭｕｒＡ−１ポリぺプチドの変種
は、本発明のこの態様の特に好ましい具体例である。本
発明のこの態様の好ましい具体例において、前記したＭ
ｕｒＡ−１ポリぺプチドの産生方法が提供される。本発
明のさらに別の態様に従って、例えば、抗体を包含する
抗菌剤として有用な、かかるポリぺプチドに対する阻害
剤が提供される。
よってコードされるＭｕｒＡ−１ポリぺプチドの変種
は、本発明のこの態様の特に好ましい具体例である。本
発明のこの態様の好ましい具体例において、前記したＭ
ｕｒＡ−１ポリぺプチドの産生方法が提供される。本発
明のさらに別の態様に従って、例えば、抗体を包含する
抗菌剤として有用な、かかるポリぺプチドに対する阻害
剤が提供される。
【００１４】本発明のこの態様のある好ましい具体例に
従って、特に、とりわけ：ＭｕｒＡ−１発現を評価し；
中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、胸
腔蓄膿および心内膜炎、特に例えば、脳脊髄流体の感染
などの髄膜炎を治療し；遺伝的変異を検定し；およびＭ
ｕｒＡ−１ポリぺプチドまたはポリヌクレオチドを生物
に投与し、細菌、特にストレプトコッカスに対する免疫
学的応答を亢進させる、産物、組成物および方法が提供
される。
従って、特に、とりわけ：ＭｕｒＡ−１発現を評価し；
中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、胸
腔蓄膿および心内膜炎、特に例えば、脳脊髄流体の感染
などの髄膜炎を治療し；遺伝的変異を検定し；およびＭ
ｕｒＡ−１ポリぺプチドまたはポリヌクレオチドを生物
に投与し、細菌、特にストレプトコッカスに対する免疫
学的応答を亢進させる、産物、組成物および方法が提供
される。
【００１５】本発明のこのおよび他の態様のある好まし
い具体例に従って、ＭｕｒＡ−１ポリヌクレオチド配列
にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドが提供
される。本発明のこの態様のさらに好ましいある具体例
において、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドに対する抗体が提
供される。
い具体例に従って、ＭｕｒＡ−１ポリヌクレオチド配列
にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドが提供
される。本発明のこの態様のさらに好ましいある具体例
において、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドに対する抗体が提
供される。
【００１６】本発明のもう一つの態様に従って、好まし
くはまた、静菌剤または殺菌剤であるＭｕｒＡ−１アゴ
ニストが提供される。本発明のさらにもう一つ別の態様
に従って、好ましくはまた、静菌剤または殺菌剤である
ＭｕｒＡ−１アンタゴニストが提供される。
くはまた、静菌剤または殺菌剤であるＭｕｒＡ−１アゴ
ニストが提供される。本発明のさらにもう一つ別の態様
に従って、好ましくはまた、静菌剤または殺菌剤である
ＭｕｒＡ−１アンタゴニストが提供される。
【００１７】本発明のさらなる態様において、細胞また
は多細胞生物に投与するための、ＭｕｒＡ−１ポリヌク
レオチドまたはＭｕｒＡ−１ポリぺプチドを含有してな
る組成物が提供される。以下の記載を読むこと、本開示
の別の部分を読むことで、開示されている本発明の精神
および範囲内にある種々の変形および修飾は当業者にと
って明らかになるであろう。
は多細胞生物に投与するための、ＭｕｒＡ−１ポリヌク
レオチドまたはＭｕｒＡ−１ポリぺプチドを含有してな
る組成物が提供される。以下の記載を読むこと、本開示
の別の部分を読むことで、開示されている本発明の精神
および範囲内にある種々の変形および修飾は当業者にと
って明らかになるであろう。
【００１８】用語の説明 以下に示す説明は、本明細書、特に実施例において頻繁
に用いられるある用語の理解を容易にするために提供さ
れるものである。説明は便宜上提供されるのであって、
本発明を限定するものではない。
に用いられるある用語の理解を容易にするために提供さ
れるものである。説明は便宜上提供されるのであって、
本発明を限定するものではない。
【００１９】本明細書にて用いるＭｕｒＡ−１結合分子
は、例えば、酵素基質、細胞膜成分および古典的レセプ
ターを含め、本発明のＭｕｒＡ−１ポリぺプチドまたは
ポリヌクレオチドと特異的に結合するかまたは相互作用
する分子またはイオンをいう。本発明のポリぺプチド
と、結合または結合もしくは相互作用分子を含め、かか
る分子の間の結合は、本発明のポリぺプチドに対して独
占的であることが好ましく、あるいはまた本発明のポリ
ぺプチドに対して高度に特異的であることも好ましく、
または本発明のポリぺプチドを含む一群の蛋白質に高度
に特異的であることが好ましく、あるいは本発明のポリ
ぺプチドのうち少なくとも１つを含む数群の蛋白質に特
異的であってもよい。結合分子はまた、本発明のポリぺ
プチドに特異的に結合する抗体および抗体誘導の試薬を
包含する。
は、例えば、酵素基質、細胞膜成分および古典的レセプ
ターを含め、本発明のＭｕｒＡ−１ポリぺプチドまたは
ポリヌクレオチドと特異的に結合するかまたは相互作用
する分子またはイオンをいう。本発明のポリぺプチド
と、結合または結合もしくは相互作用分子を含め、かか
る分子の間の結合は、本発明のポリぺプチドに対して独
占的であることが好ましく、あるいはまた本発明のポリ
ぺプチドに対して高度に特異的であることも好ましく、
または本発明のポリぺプチドを含む一群の蛋白質に高度
に特異的であることが好ましく、あるいは本発明のポリ
ぺプチドのうち少なくとも１つを含む数群の蛋白質に特
異的であってもよい。結合分子はまた、本発明のポリぺ
プチドに特異的に結合する抗体および抗体誘導の試薬を
包含する。
【００２０】遺伝性エレメントは、一般に、ポリペプチ
ドをコードする領域、または複製、転写または翻訳また
は宿主細胞におけるポリペプチドの発現に重要な他のプ
ロセスを調節する領域を含んでなるポリヌクレオチド領
域、またはポリペプチドをコードする領域、およびそれ
に作動可能に連結された発現を調節する領域の両方を含
んでなるポリヌクレオチドを意味する。遺伝性エレメン
トは、エピソーム・エレメントとして、即ち、宿主細胞
ゲノムとは物理的に独立した分子として複製すれるベク
ターに含まれていてもよい。その遺伝性エレメントはプ
ラスミドに含まれていてもよい。遺伝性エレメントはま
た、宿主細胞ゲノムに含まれていてもよいが、それは天
然の状態ではなく、むしろ以下の、単離、クローニング
および精製ＤＮＡの形態で、またはベクターで宿主細胞
への導入といった操作を受けている。
ドをコードする領域、または複製、転写または翻訳また
は宿主細胞におけるポリペプチドの発現に重要な他のプ
ロセスを調節する領域を含んでなるポリヌクレオチド領
域、またはポリペプチドをコードする領域、およびそれ
に作動可能に連結された発現を調節する領域の両方を含
んでなるポリヌクレオチドを意味する。遺伝性エレメン
トは、エピソーム・エレメントとして、即ち、宿主細胞
ゲノムとは物理的に独立した分子として複製すれるベク
ターに含まれていてもよい。その遺伝性エレメントはプ
ラスミドに含まれていてもよい。遺伝性エレメントはま
た、宿主細胞ゲノムに含まれていてもよいが、それは天
然の状態ではなく、むしろ以下の、単離、クローニング
および精製ＤＮＡの形態で、またはベクターで宿主細胞
への導入といった操作を受けている。
【００２１】宿主細胞は、外因性ポリヌクレオチド配列
によりトランスフォーメイションまたはトランスフェク
ションされているか、またはトランスフォーメイション
またはトランスフェクションされる能力を有する細胞で
ある。
によりトランスフォーメイションまたはトランスフェク
ションされているか、またはトランスフォーメイション
またはトランスフェクションされる能力を有する細胞で
ある。
【００２２】同一性または類似性は、当該分野に置いて
知られているごとく、配列を比較することによって決定
される、２またはそれ以上のポリペプチド配列あるいは
２またはそれ以上のポリヌクレオチド配列の間の関係で
ある。当該分野においては、同一性はまた、かかる配列
の鎖の間の一致によって決定されるように、場合によっ
ては、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の間の
配列の関連性の度合いを意味する。同一性も類似性も容
易に計算できる（Ｃomputational ＭolecularＢiology,
Ｌesk, Ａ. Ｍ.編, Ｏxford Ｕniversity Ｐress, Ｎe
w Ｙork,1988；Ｂiocomputing：Ｉnformatics and Ｇen
ome Ｐojects, Ｓmith, Ｄ. Ｗ.編,Ａcademic Ｐress,
Ｎew Ｙork, 1993; Ｃomputer Ａnalysis of Ｓequence
Ｄata, Ｐart Ｉ, Ｇriffin, Ａ. Ｗ.およびＧriffin
Ｈ. Ｇ.編, Ｈumana Ｐress,Ｎew Ｊersey, 1994; Ｓeq
uence Ａnalysis in Ｍolecular Ｂiology, von Ｈeinj
e, Ｇ., Ａcademic Ｐress, 1987; およびＳequence Ａ
nalysis Ｐrimer, Ｇribskov, Ｍ. およびＤevereux,
Ｊ.編, Ｍ Ｓtockton Ｐress, Ｎew Ｙork, 1991）。２
つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列間
の同一性および類似性を測定する多くの方法が存在する
一方、「同一性」および「類似性」という語は当業者に
よく知られている（Ｓequence Ａnalysis in Ｍolecula
r Ｂiology, von Ｈeinje, Ｇ., Ａcademic Ｐress, 19
87; Ｓequence Ａnalysis Ｐrimer, Ｇribskov, Ｍ. お
よびＤevereux, Ｊ.編, Ｍ Ｓtockton Ｐress, Ｎew Ｙ
ork, 1991；およびＣarillo Ｈ.およびＬipman, Ｄ.,
ＳＩＡＭ Ｊ. Ａpplied Ｍath., 48：1073（1988））。
同一性を決定するのに好ましい方法は、試験する配列の
間で最も大きな一致を得るように設計する。同一性およ
び類似性を決定する方法は、コンピュータープログラム
に書き込まれている。２つの配列間の同一性および類似
性を決定する好ましいコンピュータープログラムの方法
は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄevereux, Ｊ.ら、
Ｎucleic Ａcids Ｒesearch 12(1)：387（1984））、Ｂ
ＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａtschu
l. Ｓ.Ｆ.ら、Ｊ. Ｍolec. Ｂiol. 215：403（1990））
を包含するが、これに限定されない。
知られているごとく、配列を比較することによって決定
される、２またはそれ以上のポリペプチド配列あるいは
２またはそれ以上のポリヌクレオチド配列の間の関係で
ある。当該分野においては、同一性はまた、かかる配列
の鎖の間の一致によって決定されるように、場合によっ
ては、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の間の
配列の関連性の度合いを意味する。同一性も類似性も容
易に計算できる（Ｃomputational ＭolecularＢiology,
Ｌesk, Ａ. Ｍ.編, Ｏxford Ｕniversity Ｐress, Ｎe
w Ｙork,1988；Ｂiocomputing：Ｉnformatics and Ｇen
ome Ｐojects, Ｓmith, Ｄ. Ｗ.編,Ａcademic Ｐress,
Ｎew Ｙork, 1993; Ｃomputer Ａnalysis of Ｓequence
Ｄata, Ｐart Ｉ, Ｇriffin, Ａ. Ｗ.およびＧriffin
Ｈ. Ｇ.編, Ｈumana Ｐress,Ｎew Ｊersey, 1994; Ｓeq
uence Ａnalysis in Ｍolecular Ｂiology, von Ｈeinj
e, Ｇ., Ａcademic Ｐress, 1987; およびＳequence Ａ
nalysis Ｐrimer, Ｇribskov, Ｍ. およびＤevereux,
Ｊ.編, Ｍ Ｓtockton Ｐress, Ｎew Ｙork, 1991）。２
つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド配列間
の同一性および類似性を測定する多くの方法が存在する
一方、「同一性」および「類似性」という語は当業者に
よく知られている（Ｓequence Ａnalysis in Ｍolecula
r Ｂiology, von Ｈeinje, Ｇ., Ａcademic Ｐress, 19
87; Ｓequence Ａnalysis Ｐrimer, Ｇribskov, Ｍ. お
よびＤevereux, Ｊ.編, Ｍ Ｓtockton Ｐress, Ｎew Ｙ
ork, 1991；およびＣarillo Ｈ.およびＬipman, Ｄ.,
ＳＩＡＭ Ｊ. Ａpplied Ｍath., 48：1073（1988））。
同一性を決定するのに好ましい方法は、試験する配列の
間で最も大きな一致を得るように設計する。同一性およ
び類似性を決定する方法は、コンピュータープログラム
に書き込まれている。２つの配列間の同一性および類似
性を決定する好ましいコンピュータープログラムの方法
は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄevereux, Ｊ.ら、
Ｎucleic Ａcids Ｒesearch 12(1)：387（1984））、Ｂ
ＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ（Ａtschu
l. Ｓ.Ｆ.ら、Ｊ. Ｍolec. Ｂiol. 215：403（1990））
を包含するが、これに限定されない。
【００２３】単離とは、「人工的に」天然状態から変化
させられていること、すなわち、天然にある場合には、
その最初の環境から変化させられ、あるいはその最初の
環境から取り出されていること、あるいはその両方を意
味する。例えば、天然状態の生物中に天然に存在する天
然のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」さ
れていないが、天然状態における共存物質から分離され
ている同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、そ
の語を本明細書中で用いる場合、「単離」されている。
単離の一部として、あるいは単離後に、例えば、突然変
異誘発し、融合タンパク質を形成するために、および宿
主中での増殖または発現のために、かかるポリヌクレオ
チドをＤＮＡのごとき他のポリヌクレオチドに結合させ
ることができる。単離されたポリヌクレオチドは、単独
またはベクターのごとき他のポリヌクレオチドと結合し
て、培養中または生物そのものにおける宿主細胞に導入
することができる。培養または生物そのものにおける宿
主細胞へ導入された場合、その語を本明細書において用
いる場合、かかるＤＮＡはやはり単離されている。とい
うのも、それらは天然に存在する形態でなく、あるいは
天然環境に存在するものではないからである。同様に、
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、培地処方、ポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドの、例えば細胞への
導入のための溶液、化学反応または酵素反応のための組
成物または溶液のごとき組成物の中に存在してもよく、
例えば、それらは天然には存在しない組成物であり、そ
の中で単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは本明
細書にいう単離された状態のままである。
させられていること、すなわち、天然にある場合には、
その最初の環境から変化させられ、あるいはその最初の
環境から取り出されていること、あるいはその両方を意
味する。例えば、天然状態の生物中に天然に存在する天
然のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」さ
れていないが、天然状態における共存物質から分離され
ている同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、そ
の語を本明細書中で用いる場合、「単離」されている。
単離の一部として、あるいは単離後に、例えば、突然変
異誘発し、融合タンパク質を形成するために、および宿
主中での増殖または発現のために、かかるポリヌクレオ
チドをＤＮＡのごとき他のポリヌクレオチドに結合させ
ることができる。単離されたポリヌクレオチドは、単独
またはベクターのごとき他のポリヌクレオチドと結合し
て、培養中または生物そのものにおける宿主細胞に導入
することができる。培養または生物そのものにおける宿
主細胞へ導入された場合、その語を本明細書において用
いる場合、かかるＤＮＡはやはり単離されている。とい
うのも、それらは天然に存在する形態でなく、あるいは
天然環境に存在するものではないからである。同様に、
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、培地処方、ポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドの、例えば細胞への
導入のための溶液、化学反応または酵素反応のための組
成物または溶液のごとき組成物の中に存在してもよく、
例えば、それらは天然には存在しない組成物であり、そ
の中で単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは本明
細書にいう単離された状態のままである。
【００２４】一般的には、ポリヌクレオチドとは、ポリ
リボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド
をいい、未修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡ
またはＤＮＡであってよい。かくして、例えば、本明細
書で用いるポリヌクレオチドは、特に、１本鎖および２
本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混ざったまたは
１本鎖、２本鎖および３本鎖領域の混ざったＤＮＡ、１
本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領
域の混ざったＲＮＡ、１本鎖であるＤＮＡおよびＲＮＡ
を含んでなるハイブリッド分子をいい、より典型的に
は、２本鎖のものまたは３本鎖のもの、あるいは１本鎖
および２本鎖領域の混ざったものをいう。加えて、本明
細書で用いるポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ
あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含んでなる３本鎖
領域をいう。かかる領域中の鎖は同じ分子由来であって
もよく、また異なる分子由来であってもよい。その領域
は１つまたはそれ以上の分子の全体を含んでいてもよい
が、より典型的には、分子のいくつかの領域のみを含
む。３本鎖らせん領域の分子の１つは、しばしば、オリ
ゴヌクレオチドである。本明細書で用いる場合、ポリヌ
クレオチドなる語は、１個またはそれ以上の修飾塩基を
含む前記したＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。かくし
て、安定性または他の理由のために修飾された骨格を有
するＤＮＡまたはＲＮＡは、その語を本明細書にていう
場合の「ポリヌクレオチド」である。さらに、例えばイ
ノシンまたはトリチル化されたような修飾塩基のごと
き、異常塩基を有してなるＤＮＡまたはＲＮＡも、その
語を本明細書でいう場合のポリヌクレオチドである。非
常に様々な修飾をＤＮＡおよびＲＮＡに対して行い、当
業者に知られた多くの有用な目的を果たしていることが
認識されるであろう。本明細書にて用いる場合のポリヌ
クレオチドなる語は、かかる化学的、酵素的、または代
謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、同様に、特
に、ウイルス、および、単一および複合細胞を包含する
細胞の特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。
リボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド
をいい、未修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡ
またはＤＮＡであってよい。かくして、例えば、本明細
書で用いるポリヌクレオチドは、特に、１本鎖および２
本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混ざったまたは
１本鎖、２本鎖および３本鎖領域の混ざったＤＮＡ、１
本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領
域の混ざったＲＮＡ、１本鎖であるＤＮＡおよびＲＮＡ
を含んでなるハイブリッド分子をいい、より典型的に
は、２本鎖のものまたは３本鎖のもの、あるいは１本鎖
および２本鎖領域の混ざったものをいう。加えて、本明
細書で用いるポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ
あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含んでなる３本鎖
領域をいう。かかる領域中の鎖は同じ分子由来であって
もよく、また異なる分子由来であってもよい。その領域
は１つまたはそれ以上の分子の全体を含んでいてもよい
が、より典型的には、分子のいくつかの領域のみを含
む。３本鎖らせん領域の分子の１つは、しばしば、オリ
ゴヌクレオチドである。本明細書で用いる場合、ポリヌ
クレオチドなる語は、１個またはそれ以上の修飾塩基を
含む前記したＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。かくし
て、安定性または他の理由のために修飾された骨格を有
するＤＮＡまたはＲＮＡは、その語を本明細書にていう
場合の「ポリヌクレオチド」である。さらに、例えばイ
ノシンまたはトリチル化されたような修飾塩基のごと
き、異常塩基を有してなるＤＮＡまたはＲＮＡも、その
語を本明細書でいう場合のポリヌクレオチドである。非
常に様々な修飾をＤＮＡおよびＲＮＡに対して行い、当
業者に知られた多くの有用な目的を果たしていることが
認識されるであろう。本明細書にて用いる場合のポリヌ
クレオチドなる語は、かかる化学的、酵素的、または代
謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、同様に、特
に、ウイルス、および、単一および複合細胞を包含する
細胞の特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。
【００２５】本明細書にて用いる場合、「ポリペプチ
ド」なる語は、以下に説明するごときすべてのポリペプ
チドを包含する。ポリペプチドの基本的構造はよく知ら
れており、当該分野の多数の教科書および他の刊行物に
記載されている。この意味において、この用語は、本明
細書中、ペプチド結合により互いに直鎖状に結合した２
個またはそれ以上のアミノ酸を含んでなるペプチドまた
はタンパク質をいう。本明細書において用いる場合、該
用語は、例えば、当該分野において通常ペプチド、オリ
ゴペプチドおよびオリゴマーと称される短い鎖、およ
び、当該分野において一般に、多くのタイプが存在する
蛋白質と称される長い鎖の両方をいう。ポリペプチド
は、しばしば、一般に２０個の天然アミノ酸と称される
２０アミノ酸以外のアミノ酸を含んでいること、およ
び、プロセッシングおよび他の翻訳後修飾のごとき天然
プロセスのみならず当該分野でよく知られた化学的修飾
法によっても、末端アミノ酸を包含する多くのアミノ酸
を所定のポリペプチド中で修飾してもよいことが理解さ
れよう。ポリペプチドにおいて自然に起こる普通の修飾
でさえも膨大すぎてここに列挙できないが、それらは基
本的な教科書およびさらに詳細な研究論文、同様に、膨
大な研究文献にも記載されており、それらは当業者によ
く知られている。
ド」なる語は、以下に説明するごときすべてのポリペプ
チドを包含する。ポリペプチドの基本的構造はよく知ら
れており、当該分野の多数の教科書および他の刊行物に
記載されている。この意味において、この用語は、本明
細書中、ペプチド結合により互いに直鎖状に結合した２
個またはそれ以上のアミノ酸を含んでなるペプチドまた
はタンパク質をいう。本明細書において用いる場合、該
用語は、例えば、当該分野において通常ペプチド、オリ
ゴペプチドおよびオリゴマーと称される短い鎖、およ
び、当該分野において一般に、多くのタイプが存在する
蛋白質と称される長い鎖の両方をいう。ポリペプチド
は、しばしば、一般に２０個の天然アミノ酸と称される
２０アミノ酸以外のアミノ酸を含んでいること、およ
び、プロセッシングおよび他の翻訳後修飾のごとき天然
プロセスのみならず当該分野でよく知られた化学的修飾
法によっても、末端アミノ酸を包含する多くのアミノ酸
を所定のポリペプチド中で修飾してもよいことが理解さ
れよう。ポリペプチドにおいて自然に起こる普通の修飾
でさえも膨大すぎてここに列挙できないが、それらは基
本的な教科書およびさらに詳細な研究論文、同様に、膨
大な研究文献にも記載されており、それらは当業者によ
く知られている。
【００２６】本発明のポリペプチド中に存在してもよい
既知の修飾のうち少し例を挙げると、アセチル化、アシ
ル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有
結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレ
オチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有
結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環
化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合に
よる架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの
形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシ
レーション、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨ
ウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解
的プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、
セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごとき転移−Ｒ
ＮＡにより媒介される蛋白質へのアミノ酸付加およびユ
ビキチン化がある。かかる修飾は当業者によく知られて
おり、科学文献に非常に詳細に記載されている。いくつ
かの特によく行われる修飾、例えばグリコシレーショ
ン、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カ
ルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル
化は、PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES,
2nd Ed.,T.E.Creighton,W.H.Freemen and Company,New
York(1993)のごとき最も基本的な教科書に記載されてい
る。多くの報文がこの問題について利用でき、例えば、
POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEIN
S,B.C.Johnson,Ed.,Academic Press,NewYork(1983)中、
Wold,F.,Posttranslational Protein Modifications:Pr
espectives and Prospects,pgs.1-12；Seifterら、Met
h.Enzymol.182:626-646(1990)およびRattmanら、Protei
n Synthesis:Posttranslational Modifications and Ag
ing.Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992)によって提供さ
れる。よく知られ、上記したごとく、ポリペプチドは常
に全体が直鎖状であるとは限らないことが理解されよ
う。例えば、ポリペプチドは、一般に、天然に起こるプ
ロセッシング事象および自然には起こらないヒトによる
操作による事象を包含する、翻訳後の事象の結果とし
て、得られてもよい。同様に、非翻訳的天然プロセスお
よび全くの合成法によっても、環状、分枝および分枝環
状のポリペプチドが合成されてもよい。ペプチド骨格、
アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシル末端
を包含する、ポリペプチドのいずれの場所においても修
飾が起こり得る。実際、ポリペプチド中のアミノまたは
カルボキシル基、あるいはそれら両方の共有結合の修飾
による遮断は、一般に天然および合成ポリペプチドにお
いて起こるものであり、同様にかかる修飾が本発明ポリ
ペプチド中に存在してもよい。例えば、蛋白質分解プロ
セッシングの前にイー・コリまたは他の細胞において作
られるポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんど例外
なくＮ−ホルミルメチオニンである。ぺプチドの翻訳後
の修飾の間に、ＮＨ2−末端のメチオニン残基が欠失さ
れてもよい。従って、本発明は、本発明の蛋白質のメチ
オニン含有の、およびメチオニンを欠くアミノ末端変種
の両方の使用を意図する。ポリペプチドにおいて生じる
修飾は、しばしば、それがいかにして作られるのかとい
うことに関係しているであろう。例えば、宿主中でクロ
ーン化された遺伝子を発現することにより作られるポリ
ペプチドに関して、修飾の性質および程度の大部分は、
宿主細胞での翻訳後修飾能およびポリペプチドのアミノ
酸配列に存在する修飾シグナルによって決定されるであ
ろう。例えば、よく知られているように、グリコシレー
ションは、しばしばイー・コリのごとき細菌宿主では起
こらない。従って、グリコシレーションが望ましい場合
には、ポリペプチドを、グリコシレーションする宿主、
一般には真核細胞中で発現させるべきである。昆虫細胞
は、しばしば哺乳動物と同じ翻訳後グリコシレーション
を行うので、昆虫細胞発現系は、特に元来のグリコシレ
ーションパターンを有する哺乳動物蛋白質を効率よく発
現するために開発された。同じタイプの修飾が、所定の
ポリペプチドにおいていくつかの部位において同じまた
は様々な程度に存在してもよいことが理解されよう。ま
た、所定のポリペプチドは多くのタイプの修飾を含んで
いてもよい。一般には、本明細書にて用いる場合、ポリ
ペプチドなる語はかかる修飾すべてを包含し、特に宿主
細胞中でポリヌクレオチドを発現させることにより組み
換え的に合成されるポリペプチド中に存在する修飾を包
含する。
既知の修飾のうち少し例を挙げると、アセチル化、アシ
ル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有
結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレ
オチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有
結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環
化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合に
よる架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの
形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシ
レーション、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨ
ウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白質分解
的プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、
セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごとき転移−Ｒ
ＮＡにより媒介される蛋白質へのアミノ酸付加およびユ
ビキチン化がある。かかる修飾は当業者によく知られて
おり、科学文献に非常に詳細に記載されている。いくつ
かの特によく行われる修飾、例えばグリコシレーショ
ン、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カ
ルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル
化は、PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES,
2nd Ed.,T.E.Creighton,W.H.Freemen and Company,New
York(1993)のごとき最も基本的な教科書に記載されてい
る。多くの報文がこの問題について利用でき、例えば、
POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEIN
S,B.C.Johnson,Ed.,Academic Press,NewYork(1983)中、
Wold,F.,Posttranslational Protein Modifications:Pr
espectives and Prospects,pgs.1-12；Seifterら、Met
h.Enzymol.182:626-646(1990)およびRattmanら、Protei
n Synthesis:Posttranslational Modifications and Ag
ing.Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992)によって提供さ
れる。よく知られ、上記したごとく、ポリペプチドは常
に全体が直鎖状であるとは限らないことが理解されよ
う。例えば、ポリペプチドは、一般に、天然に起こるプ
ロセッシング事象および自然には起こらないヒトによる
操作による事象を包含する、翻訳後の事象の結果とし
て、得られてもよい。同様に、非翻訳的天然プロセスお
よび全くの合成法によっても、環状、分枝および分枝環
状のポリペプチドが合成されてもよい。ペプチド骨格、
アミノ酸側鎖およびアミノ末端またはカルボキシル末端
を包含する、ポリペプチドのいずれの場所においても修
飾が起こり得る。実際、ポリペプチド中のアミノまたは
カルボキシル基、あるいはそれら両方の共有結合の修飾
による遮断は、一般に天然および合成ポリペプチドにお
いて起こるものであり、同様にかかる修飾が本発明ポリ
ペプチド中に存在してもよい。例えば、蛋白質分解プロ
セッシングの前にイー・コリまたは他の細胞において作
られるポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんど例外
なくＮ−ホルミルメチオニンである。ぺプチドの翻訳後
の修飾の間に、ＮＨ2−末端のメチオニン残基が欠失さ
れてもよい。従って、本発明は、本発明の蛋白質のメチ
オニン含有の、およびメチオニンを欠くアミノ末端変種
の両方の使用を意図する。ポリペプチドにおいて生じる
修飾は、しばしば、それがいかにして作られるのかとい
うことに関係しているであろう。例えば、宿主中でクロ
ーン化された遺伝子を発現することにより作られるポリ
ペプチドに関して、修飾の性質および程度の大部分は、
宿主細胞での翻訳後修飾能およびポリペプチドのアミノ
酸配列に存在する修飾シグナルによって決定されるであ
ろう。例えば、よく知られているように、グリコシレー
ションは、しばしばイー・コリのごとき細菌宿主では起
こらない。従って、グリコシレーションが望ましい場合
には、ポリペプチドを、グリコシレーションする宿主、
一般には真核細胞中で発現させるべきである。昆虫細胞
は、しばしば哺乳動物と同じ翻訳後グリコシレーション
を行うので、昆虫細胞発現系は、特に元来のグリコシレ
ーションパターンを有する哺乳動物蛋白質を効率よく発
現するために開発された。同じタイプの修飾が、所定の
ポリペプチドにおいていくつかの部位において同じまた
は様々な程度に存在してもよいことが理解されよう。ま
た、所定のポリペプチドは多くのタイプの修飾を含んで
いてもよい。一般には、本明細書にて用いる場合、ポリ
ペプチドなる語はかかる修飾すべてを包含し、特に宿主
細胞中でポリヌクレオチドを発現させることにより組み
換え的に合成されるポリペプチド中に存在する修飾を包
含する。
【００２７】本明細書にて用いる場合、ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種とは、各々、標準となるポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なる、ポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドをいう。この意味におけ
る変種は、本開示の以下の部分およびいずれかの部分に
おいてより詳細に説明される。（１）もう一つのもの、
即ち、標準のポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が
異なるポリヌクレオチド。一般に、相違は、標準のヌク
レオチド配列と変種のヌクレオチド配列が全体的に極め
て類似し、多くの領域において同一であるようなものに
限られる。以下のごとく、変種におけるヌクレオチド配
列の変化がサイレントであってもよい。すなわち、それ
らは、ポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸を
変化させなくてもよい。変化がこのタイプのサイレント
変化に限定される場合、変種は標準のポリペプチドと同
じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている
であろう。また、以下に示すごとく、変種のヌクレオチ
ド配列における変化が、標準のポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させた
ものであってもよい。後記のごとく、かかるヌクレオチ
ド変化は、標準配列によりコードされるポリペプチド中
のアミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断をもたら
してもよい。（２）もう一つ別の標準ポリペプチドとは
アミノ酸配列が異なるポリペプチド。一般に、相違は、
標準のアミノ酸配列と変種アミノ酸配列が全体的に極め
て類似し、多くの領域において同一であるようなものに
限られる。変種および標準のポリペプチドとは、１個ま
たはそれ以上の置換、付加、欠失、融合および切断によ
りアミノ酸配列が異なっていてもよく、それらはいずれ
の組み合わせにおいて存在してもよい。
ドまたはポリペプチドの変種とは、各々、標準となるポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なる、ポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドをいう。この意味におけ
る変種は、本開示の以下の部分およびいずれかの部分に
おいてより詳細に説明される。（１）もう一つのもの、
即ち、標準のポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が
異なるポリヌクレオチド。一般に、相違は、標準のヌク
レオチド配列と変種のヌクレオチド配列が全体的に極め
て類似し、多くの領域において同一であるようなものに
限られる。以下のごとく、変種におけるヌクレオチド配
列の変化がサイレントであってもよい。すなわち、それ
らは、ポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸を
変化させなくてもよい。変化がこのタイプのサイレント
変化に限定される場合、変種は標準のポリペプチドと同
じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしている
であろう。また、以下に示すごとく、変種のヌクレオチ
ド配列における変化が、標準のポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させた
ものであってもよい。後記のごとく、かかるヌクレオチ
ド変化は、標準配列によりコードされるポリペプチド中
のアミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断をもたら
してもよい。（２）もう一つ別の標準ポリペプチドとは
アミノ酸配列が異なるポリペプチド。一般に、相違は、
標準のアミノ酸配列と変種アミノ酸配列が全体的に極め
て類似し、多くの領域において同一であるようなものに
限られる。変種および標準のポリペプチドとは、１個ま
たはそれ以上の置換、付加、欠失、融合および切断によ
りアミノ酸配列が異なっていてもよく、それらはいずれ
の組み合わせにおいて存在してもよい。
【００２８】
【発明の実施の形態】本発明は、とりわけ、以下にさら
に詳細に記載するように、新規なＭｕｒＡ−１ポリペプ
チドおよびポリヌクレオチドに関する。特に、本発明
は、エシェリキア・コリのポリペプチドに対して相同的
なアミノ酸配列に関連する、ストレプトコッカス・ニュ
ーモニエの新規なＭｕｒＡ−１のポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドに関する。本発明は、特に、各々、図１
ないし３および図４に示されるヌクレオチドおよびアミ
ノ酸配列を有するＭｕｒＡ−１に、および本明細書にて
「寄託されたエス・ニューモニエ０１００９３クロー
ン」と、または「寄託されたエス・ニューモニエ０１０
０９３クローンのＤＮＡ」と称される、ＮＣＩＭＢ受託
番号４０７９４におけるＤＮＡのＭｕｒＡ−１ヌクレオ
チドおよびアミノ酸配列に関する。図１ないし３（配列
番号：１）および図４（配列番号：２）に示されるヌク
レオチドおよびアミノ酸配列を、寄託されたエス・ニュ
ーモニエ０１００９３クローンのＤＮＡを配列決定する
ことにより得た。かくして、その配列（およびそれがコ
ードする配列）と、図１ないし３（配列番号：１）およ
び図４（配列番号：２）の配列の間にあるいずれの矛盾
についても、寄託されたエス・ニューモニエ０１００９
３クローンのＭｕｒＡ−１の配列に基づいて調節されて
いる。
に詳細に記載するように、新規なＭｕｒＡ−１ポリペプ
チドおよびポリヌクレオチドに関する。特に、本発明
は、エシェリキア・コリのポリペプチドに対して相同的
なアミノ酸配列に関連する、ストレプトコッカス・ニュ
ーモニエの新規なＭｕｒＡ−１のポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドに関する。本発明は、特に、各々、図１
ないし３および図４に示されるヌクレオチドおよびアミ
ノ酸配列を有するＭｕｒＡ−１に、および本明細書にて
「寄託されたエス・ニューモニエ０１００９３クロー
ン」と、または「寄託されたエス・ニューモニエ０１０
０９３クローンのＤＮＡ」と称される、ＮＣＩＭＢ受託
番号４０７９４におけるＤＮＡのＭｕｒＡ−１ヌクレオ
チドおよびアミノ酸配列に関する。図１ないし３（配列
番号：１）および図４（配列番号：２）に示されるヌク
レオチドおよびアミノ酸配列を、寄託されたエス・ニュ
ーモニエ０１００９３クローンのＤＮＡを配列決定する
ことにより得た。かくして、その配列（およびそれがコ
ードする配列）と、図１ないし３（配列番号：１）およ
び図４（配列番号：２）の配列の間にあるいずれの矛盾
についても、寄託されたエス・ニューモニエ０１００９
３クローンのＭｕｒＡ−１の配列に基づいて調節されて
いる。
【００２９】細菌における一時的遺伝子発現を評価する
のに、特に、実験室および宿主感染の条件下での生存能
力に適用する場合、種々の技法を利用することができ
る。多数の方法を用いて、生存それ自体に不可欠な、ま
たは感染の確立／維持に不可欠な遺伝子を同定すること
ができる。これら方法のうち一つの方法で配列の発現を
同定することによりその機能についてさらなる情報が得
られ、スクリーニング標的としてさらなる開発のための
そのような配列の選択が可能となる。簡単には、これら
の方法として以下の方法が挙げられる：
のに、特に、実験室および宿主感染の条件下での生存能
力に適用する場合、種々の技法を利用することができ
る。多数の方法を用いて、生存それ自体に不可欠な、ま
たは感染の確立／維持に不可欠な遺伝子を同定すること
ができる。これら方法のうち一つの方法で配列の発現を
同定することによりその機能についてさらなる情報が得
られ、スクリーニング標的としてさらなる開発のための
そのような配列の選択が可能となる。簡単には、これら
の方法として以下の方法が挙げられる：
【００３０】１）サイン・タグ化突然変異誘法 この方法は、従来技術の説明を目的として、その内容を
出典明示により本明細書の一部とする、Ｈenselら、Sci
ence 269：400−403（1995）に記載されている。サイン
・タグ化突然変異誘発法は所定の感染モデルにおける感
染の確立／維持に必要な遺伝子を同定するものである。
出典明示により本明細書の一部とする、Ｈenselら、Sci
ence 269：400−403（1995）に記載されている。サイン
・タグ化突然変異誘発法は所定の感染モデルにおける感
染の確立／維持に必要な遺伝子を同定するものである。
【００３１】この技法の基礎は、独特なDNA配列のタグ
が突然変異の部位の極近くに挿入されるように、種々の
手段（例えば、トランスポゾン）によって標的生物をラ
ンダムに突然変異誘発することにある。細菌突然変異体
と感染宿主から回収した細菌の混合母体からのタグを、
増幅、放射性標識化およびハイブリダイゼーション分析
により検出する。ビルレンスにて弱毒化された突然変異
体は、感染宿主より回収された細菌のプールにタグがな
いことにより明らかにされる。
が突然変異の部位の極近くに挿入されるように、種々の
手段（例えば、トランスポゾン）によって標的生物をラ
ンダムに突然変異誘発することにある。細菌突然変異体
と感染宿主から回収した細菌の混合母体からのタグを、
増幅、放射性標識化およびハイブリダイゼーション分析
により検出する。ビルレンスにて弱毒化された突然変異
体は、感染宿主より回収された細菌のプールにタグがな
いことにより明らかにされる。
【００３２】ストレプトコッカス・ニューモニエにて、
トランスポゾン系はあまり開発されていないため、タグ
を付した変異体を産生するより効果的な方法は、バック
グラウンドを目的として、出典明示によりその内容を本
明細書の一部とする、Morrisonら、J.Bacteriol. 159：
8 70（1984）に記載されている挿入−重複突然変異誘発
法を用いることである。
トランスポゾン系はあまり開発されていないため、タグ
を付した変異体を産生するより効果的な方法は、バック
グラウンドを目的として、出典明示によりその内容を本
明細書の一部とする、Morrisonら、J.Bacteriol. 159：
8 70（1984）に記載されている挿入−重複突然変異誘発
法を用いることである。
【００３３】２）イン・ビボ発現技術（IVET） この技法は、従来技術の説明を目的として、その内容を
出典明示により本明細書の一部とする、Camilliら、Pro
c.Nat'l.Acad.Sci.USA．91：2634−2638（1994）に記載
されている。IVETは、実験室培養と比較して、感染の間
に活性亢進された、感染にて重要な役割を暗示する遺伝
子を同定する。この技法にて同定された配列は感染の確
立／維持において重要な役割を有することがわかる。
出典明示により本明細書の一部とする、Camilliら、Pro
c.Nat'l.Acad.Sci.USA．91：2634−2638（1994）に記載
されている。IVETは、実験室培養と比較して、感染の間
に活性亢進された、感染にて重要な役割を暗示する遺伝
子を同定する。この技法にて同定された配列は感染の確
立／維持において重要な役割を有することがわかる。
【００３４】この技法では、標的生物のランダムな染色
体フラグメントを、プラスミドベクター中におけるプロ
モーター不含のレセプター遺伝子の上流にクローンさせ
る。そのプールを宿主に導入し、感染後の様々な時期に
細菌を回収し、レセプター遺伝子発現の存在について評
価する。発現したレセプター遺伝子の上流にある染色体
フラグメントは、プロモーターまたは感染の間に正常に
活性亢進された遺伝子の一部を有するはずである。レセ
プター遺伝子の上流を配列決定することで、活性亢進さ
れた遺伝子を同定することができる。
体フラグメントを、プラスミドベクター中におけるプロ
モーター不含のレセプター遺伝子の上流にクローンさせ
る。そのプールを宿主に導入し、感染後の様々な時期に
細菌を回収し、レセプター遺伝子発現の存在について評
価する。発現したレセプター遺伝子の上流にある染色体
フラグメントは、プロモーターまたは感染の間に正常に
活性亢進された遺伝子の一部を有するはずである。レセ
プター遺伝子の上流を配列決定することで、活性亢進さ
れた遺伝子を同定することができる。
【００３５】３）判別表示 この技法は、従来技術の説明を目的として、その内容を
出典明示により本明細書の一部とする、Chuangら、J.Ba
cteriol. 175：2026−2036（1993）に記載されている。
この方法は、ランダムにプライムされたRT-PCRを用いて
存在するｍRNAを同定することにより、生物にて発現さ
れている遺伝子を同定するものである。感染前と感染後
のプロフィールを比 較することにより、感染の間に活
性亢進および減少した遺伝子を同定し、RT-PCR産物を配
列決定し、ライブラリー配列に一致させることができ
る。
出典明示により本明細書の一部とする、Chuangら、J.Ba
cteriol. 175：2026−2036（1993）に記載されている。
この方法は、ランダムにプライムされたRT-PCRを用いて
存在するｍRNAを同定することにより、生物にて発現さ
れている遺伝子を同定するものである。感染前と感染後
のプロフィールを比 較することにより、感染の間に活
性亢進および減少した遺伝子を同定し、RT-PCR産物を配
列決定し、ライブラリー配列に一致させることができ
る。
【００３６】４）トランスポゾン突然変異誘発による条
件致死突然変異体の生成 de Lorenzo,V.ら、Gene 123：17−24（1993）に記載さ
れているこの方法は、従来技術の説明を目的として、そ
の内容を出典明示により本明細書の一部とするものであ
り、その発現が細胞の生存に不可欠な遺伝子を同定する
ものである。
件致死突然変異体の生成 de Lorenzo,V.ら、Gene 123：17−24（1993）に記載さ
れているこの方法は、従来技術の説明を目的として、そ
の内容を出典明示により本明細書の一部とするものであ
り、その発現が細胞の生存に不可欠な遺伝子を同定する
ものである。
【００３７】この方法では、トランスポゾンから一また
は両方向にて外側への転写を供給する、調節可能なプロ
モーターを有するトランスポゾンが生成される。これら
トランスポゾンを標的生物にランダムに挿入し、その
後、プロモーター活性の誘発剤の存在下で挿入突然変異
体を単離することは、その発現が細胞の生存に不可欠で
ある遺伝子のコーディング領域からプロモーターを分離
する挿入体が回収されるであろうことを確実なものとす
る。つづいて、誘発剤の不存在下でレプリカ平板は、該
挿入体が生存していないため、かかる挿入を同定する。
トランスポゾンのフランキング領域の配列決定は挿入部
位の同定および分裂した遺伝子の同定を可能とする。誘
発剤の不在下、増殖の間の細胞プロセス／形態学におけ
る変化を厳密にモニター観察すれば、遺伝子の可能性の
ある機能についての情報が得られる。かかるモニター観
察はフローサイトメトリー（細胞分裂、溶菌、レドック
ス電位、DNA複写）、放射性化学的に標識化された先駆
体のDNA、RNA、蛋白質、脂質、ペプチドグリカンへの組
み込み、公知の細胞ストレスに応答するレセプター酵素
遺伝子融合をモニターすることを包含する。
は両方向にて外側への転写を供給する、調節可能なプロ
モーターを有するトランスポゾンが生成される。これら
トランスポゾンを標的生物にランダムに挿入し、その
後、プロモーター活性の誘発剤の存在下で挿入突然変異
体を単離することは、その発現が細胞の生存に不可欠で
ある遺伝子のコーディング領域からプロモーターを分離
する挿入体が回収されるであろうことを確実なものとす
る。つづいて、誘発剤の不存在下でレプリカ平板は、該
挿入体が生存していないため、かかる挿入を同定する。
トランスポゾンのフランキング領域の配列決定は挿入部
位の同定および分裂した遺伝子の同定を可能とする。誘
発剤の不在下、増殖の間の細胞プロセス／形態学におけ
る変化を厳密にモニター観察すれば、遺伝子の可能性の
ある機能についての情報が得られる。かかるモニター観
察はフローサイトメトリー（細胞分裂、溶菌、レドック
ス電位、DNA複写）、放射性化学的に標識化された先駆
体のDNA、RNA、蛋白質、脂質、ペプチドグリカンへの組
み込み、公知の細胞ストレスに応答するレセプター酵素
遺伝子融合をモニターすることを包含する。
【００３８】５）化学的突然変異誘発による条件致死突
然変異体の生成 この方法は、従来技術の説明を目的として、その内容を
出典明示により本明細書の一部とする、Beckwith,J.、M
ethods in Enzymology 204：3−18（1991）に記載され
ている。この方法では、生理学的温度以外の温度（許容
温度）で増殖させ、その後にレプリカ平板および種々の
温度（例えば、ｔｓを同定するのに４２℃、ｃｓを同定
するのに２５℃）で増殖させた標的生物をランダムな化
学的突然変異誘発法を用いて、今は増殖していないそれ
らの単離体（条件的突然変異体）を同定する。前記した
ように、許容できない温度で増殖させた後の変化を厳重
なモニター観察に付し、突然変異した遺伝子の機能につ
いての情報を得る。標的生物由来のライブラリーによっ
て条件致死突然変異を相補し、相補している遺伝子を配
列決定してライブラリー配列と一致させる。
然変異体の生成 この方法は、従来技術の説明を目的として、その内容を
出典明示により本明細書の一部とする、Beckwith,J.、M
ethods in Enzymology 204：3−18（1991）に記載され
ている。この方法では、生理学的温度以外の温度（許容
温度）で増殖させ、その後にレプリカ平板および種々の
温度（例えば、ｔｓを同定するのに４２℃、ｃｓを同定
するのに２５℃）で増殖させた標的生物をランダムな化
学的突然変異誘発法を用いて、今は増殖していないそれ
らの単離体（条件的突然変異体）を同定する。前記した
ように、許容できない温度で増殖させた後の変化を厳重
なモニター観察に付し、突然変異した遺伝子の機能につ
いての情報を得る。標的生物由来のライブラリーによっ
て条件致死突然変異を相補し、相補している遺伝子を配
列決定してライブラリー配列と一致させる。
【００３９】これらの方法は、各々、個々の適用に応じ
て利点または不利な点を有する。当業者であれば、ここ
の最終目的と最も関連している方法を選択するであろ
う。例えば、ある遺伝子は感染について不可欠であると
認識されているが、実際には、感染の発病について不可
欠であるにすぎず、そのような産物は確立された慢性感
染を治癒するのに開発された抗菌剤について相対的に魅
力に欠ける標的物質であろう。
て利点または不利な点を有する。当業者であれば、ここ
の最終目的と最も関連している方法を選択するであろ
う。例えば、ある遺伝子は感染について不可欠であると
認識されているが、実際には、感染の発病について不可
欠であるにすぎず、そのような産物は確立された慢性感
染を治癒するのに開発された抗菌剤について相対的に魅
力に欠ける標的物質であろう。
【００４０】６）RT-PCR 細菌メッセンジャーRNA、好ましくはストレプトコッカ
ス・ニューモニエの細菌メッセンジャーRNAを、例えば4
8時間後のネズミ肺感染の細菌感染した組織から単離
し、各ｍRNA種の数をランダムヘキサヌクレオチドでプ
ライムされたRNAサンプルの逆転写により、つづいて遺
伝子特異的プライマー対を用いるPCRにより評価した。
得られたPCR産物を定量することによって個々のｍRNA種
の存在および数を測定し、感染組織中に転写されている
細菌遺伝子についての情報を得る。遺伝子転写の解析
は、遺伝子産物が新しい抗菌剤をスクリーンするための
標的であることをより明確に理解することを考慮して、
細菌病原論における遺伝子調節の詳細な知識を得るため
に感染の様々な時点で行うことができる。使用するPCR
プライマーの遺伝子特異的属性のため、細菌ｍRNA調製
は哺乳動物RNAを含んでいてもよいことを認識すべきで
ある。このことは、研究者が、細菌中にて非常に短命
（半減期が2分）である細菌ｍRNA種を得るために感染組
織から簡便かつ迅速なRNA調製を行うことを可能とす
る。最適には、細菌ｍRNAを、TRIzole（GIBCO-BRL）の
存在下、非常に短時間の機構分裂により感染ネズミの肺
組織より調製し、つづいてTRIzole試薬の製造主の指示
に従って処理し、DNAase処理を行い、汚染DNAを除去す
る。好ましくは、該方法は、オリゴヌクレオチドプロー
ブに特異的な適宜標識された配列でノーザン（Northern
s）をプローブすることにより検出されるような、細菌
１６SリボソームRNA、好ましくはストレプトコッカス・
ニューモニエのリボソームRNAを最大数得る条件を見つ
けることにより最適化される。典型的には、５’色素標
識化プライマーを、最適には8および25の間のサイクル
で終えるPCR反応ににおける各PCRプライマー対に用い
る。そのPCR産物は、GeneScanner（ABI製）を用い、検
出および定量について、６％ポリアクリルアミドゲル上
で分離される。
ス・ニューモニエの細菌メッセンジャーRNAを、例えば4
8時間後のネズミ肺感染の細菌感染した組織から単離
し、各ｍRNA種の数をランダムヘキサヌクレオチドでプ
ライムされたRNAサンプルの逆転写により、つづいて遺
伝子特異的プライマー対を用いるPCRにより評価した。
得られたPCR産物を定量することによって個々のｍRNA種
の存在および数を測定し、感染組織中に転写されている
細菌遺伝子についての情報を得る。遺伝子転写の解析
は、遺伝子産物が新しい抗菌剤をスクリーンするための
標的であることをより明確に理解することを考慮して、
細菌病原論における遺伝子調節の詳細な知識を得るため
に感染の様々な時点で行うことができる。使用するPCR
プライマーの遺伝子特異的属性のため、細菌ｍRNA調製
は哺乳動物RNAを含んでいてもよいことを認識すべきで
ある。このことは、研究者が、細菌中にて非常に短命
（半減期が2分）である細菌ｍRNA種を得るために感染組
織から簡便かつ迅速なRNA調製を行うことを可能とす
る。最適には、細菌ｍRNAを、TRIzole（GIBCO-BRL）の
存在下、非常に短時間の機構分裂により感染ネズミの肺
組織より調製し、つづいてTRIzole試薬の製造主の指示
に従って処理し、DNAase処理を行い、汚染DNAを除去す
る。好ましくは、該方法は、オリゴヌクレオチドプロー
ブに特異的な適宜標識された配列でノーザン（Northern
s）をプローブすることにより検出されるような、細菌
１６SリボソームRNA、好ましくはストレプトコッカス・
ニューモニエのリボソームRNAを最大数得る条件を見つ
けることにより最適化される。典型的には、５’色素標
識化プライマーを、最適には8および25の間のサイクル
で終えるPCR反応ににおける各PCRプライマー対に用い
る。そのPCR産物は、GeneScanner（ABI製）を用い、検
出および定量について、６％ポリアクリルアミドゲル上
で分離される。
【００４１】本発明の配列に適用するこれら技法の使用
は、感染の間に発現される細菌蛋白質の同定を可能と
し、その阻害剤は抗菌治療法にて有用性を有する。
は、感染の間に発現される細菌蛋白質の同定を可能と
し、その阻害剤は抗菌治療法にて有用性を有する。
【００４２】ポリヌクレオチド本発明の一の態様に従っ
て、図4の推定アミノ酸配列（配列番号：２）を有するM
urA-1ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレ
オチドが提供される。
て、図4の推定アミノ酸配列（配列番号：２）を有するM
urA-1ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレ
オチドが提供される。
【００４３】図1ないし３に示されるポリヌクレオチド
配列（配列番号：１）などの本明細書にて付与される情
報を用いる場合、MurA-1ポリペプチドをコードする本発
明のポリヌクレオチドは、標準的クローニングおよびス
クリーニング操作、例えば出発物質としてのストレプト
コッカス・ニューモニエ０１００９９３細胞由来の染色
体DNAフラグメントをクローンし、配列決定する操作を
用いて得られる。例えば、図1ないし３に示される配列
（配列番号：１）などの本発明の配列のポリペプチドを
得るために、典型的には、イー・コリまたは他の適当な
宿主におけるストレプトコッカス・ニューモニエ０１０
０９９３の染色体DNAのクローンのライブラリーを、好
ましくは部分配列由来の１７−merまたはそれ以上の放
射性標識したオリゴヌクレオチドでプローブする。つい
で、プローブのDNAと同一のDNAを有するクローンは非常
に厳重な洗浄操作を用いて区別できる。このように、最
初の配列より設計されたプライマーを配列決定すること
で同定された個々のクローンを配列決定することによ
り、その配列を両方向に伸ばし、完全な遺伝子配列を決
定することが可能である。都合よくは、このような配列
決定は、プラスミドクローンより調製した変性した二本
鎖DNAを用いて行われる。適当な技法はManiatis,T.、Fr
itsch,E.F.およびSambrookら、MOLECULAR CLONIN G，Ａ
LABORATORY MANUAL, ２nd Ed；Cold Spring Harbor La
boratory Press, Cold Sprin g Harbor、New York（198
9）に記載されている。（ハイブリダイゼーション１.９
０および 変性二本鎖DNA鋳型１３.７０によるスクリー
ニングを参照のこと）。本発明の例示である、図1ない
し３に示されるポリヌクレオチド（配列番号：１）は、
ストレプトコッカス・ニ ューモニエ０１００９９３に
由来のDNAライブラリー中に見出された。
配列（配列番号：１）などの本明細書にて付与される情
報を用いる場合、MurA-1ポリペプチドをコードする本発
明のポリヌクレオチドは、標準的クローニングおよびス
クリーニング操作、例えば出発物質としてのストレプト
コッカス・ニューモニエ０１００９９３細胞由来の染色
体DNAフラグメントをクローンし、配列決定する操作を
用いて得られる。例えば、図1ないし３に示される配列
（配列番号：１）などの本発明の配列のポリペプチドを
得るために、典型的には、イー・コリまたは他の適当な
宿主におけるストレプトコッカス・ニューモニエ０１０
０９９３の染色体DNAのクローンのライブラリーを、好
ましくは部分配列由来の１７−merまたはそれ以上の放
射性標識したオリゴヌクレオチドでプローブする。つい
で、プローブのDNAと同一のDNAを有するクローンは非常
に厳重な洗浄操作を用いて区別できる。このように、最
初の配列より設計されたプライマーを配列決定すること
で同定された個々のクローンを配列決定することによ
り、その配列を両方向に伸ばし、完全な遺伝子配列を決
定することが可能である。都合よくは、このような配列
決定は、プラスミドクローンより調製した変性した二本
鎖DNAを用いて行われる。適当な技法はManiatis,T.、Fr
itsch,E.F.およびSambrookら、MOLECULAR CLONIN G，Ａ
LABORATORY MANUAL, ２nd Ed；Cold Spring Harbor La
boratory Press, Cold Sprin g Harbor、New York（198
9）に記載されている。（ハイブリダイゼーション１.９
０および 変性二本鎖DNA鋳型１３.７０によるスクリー
ニングを参照のこと）。本発明の例示である、図1ない
し３に示されるポリヌクレオチド（配列番号：１）は、
ストレプトコッカス・ニ ューモニエ０１００９９３に
由来のDNAライブラリー中に見出された。
【００４４】本発明のMurA-1は、寄託されたエス・ニュ
ーモニエ０１００９３クローンのMurA-1をコ ードするD
NAを配列決定する結果からわかるように、構造的に他の
UDP-N-アセチルグルコサ ミンと関連付けられる。こう
して得られたDNA配列を図1ないし３（配列番号：１）に
示す。それは、当該分野にて周知のアミノ酸残基分子量
を用いて計算できる推定分子量を有する図4に記載のア
ミノ酸残基（配列番号：２）のほとんどの数を有する蛋
白質をコードする オープンリーディングフレームを含
有する。該蛋白質は、公知の蛋白質のうちエシェリキア
・コリの蛋白質と最も大きな相同性を示した。図4のMur
-1（配列番号：２）はエシェリキア・コリのアミノ酸配
列とその全長にわたって約５１％の同一性を有する。
ーモニエ０１００９３クローンのMurA-1をコ ードするD
NAを配列決定する結果からわかるように、構造的に他の
UDP-N-アセチルグルコサ ミンと関連付けられる。こう
して得られたDNA配列を図1ないし３（配列番号：１）に
示す。それは、当該分野にて周知のアミノ酸残基分子量
を用いて計算できる推定分子量を有する図4に記載のア
ミノ酸残基（配列番号：２）のほとんどの数を有する蛋
白質をコードする オープンリーディングフレームを含
有する。該蛋白質は、公知の蛋白質のうちエシェリキア
・コリの蛋白質と最も大きな相同性を示した。図4のMur
-1（配列番号：２）はエシェリキア・コリのアミノ酸配
列とその全長にわたって約５１％の同一性を有する。
【００４５】本発明ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡのご
ときＲＮＡの形態であってもよく、または、例えばクロ
ーニングまたは化学合成法またはそれらの組み合わせに
より得られるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを包含するＤ
ＮＡの形態であってもよい。ＤＮＡは２本鎖または１本
鎖であってよい。１本鎖ＤＮＡはセンス鎖としても知ら
れる、コーディング鎖であってもよく、またはアンチ−
センス鎖としても知られる、非コーディング鎖であって
もよい。
ときＲＮＡの形態であってもよく、または、例えばクロ
ーニングまたは化学合成法またはそれらの組み合わせに
より得られるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを包含するＤ
ＮＡの形態であってもよい。ＤＮＡは２本鎖または１本
鎖であってよい。１本鎖ＤＮＡはセンス鎖としても知ら
れる、コーディング鎖であってもよく、またはアンチ−
センス鎖としても知られる、非コーディング鎖であって
もよい。
【００４６】ポリペプチドをコードしているコーディン
グ配列は、図１ないし３のポリヌクレオチドのコーディ
ング配列（配列番号：１）と同じであってもよい。コー
ディング配列は、別の配列を有するポリヌクレオチドで
あってもよく、それは、遺伝コードの重複（縮重）の結
果として図４のポリペプチド（配列番号：２）をコード
しているものであってもよい。
グ配列は、図１ないし３のポリヌクレオチドのコーディ
ング配列（配列番号：１）と同じであってもよい。コー
ディング配列は、別の配列を有するポリヌクレオチドで
あってもよく、それは、遺伝コードの重複（縮重）の結
果として図４のポリペプチド（配列番号：２）をコード
しているものであってもよい。
【００４７】図４のポリペプチドをコードしている本発
明ポリヌクレオチドは、それにより示される成熟ポリペ
プチドに関するコーディング配列；成熟ポリペプチドの
コーディング配列、およびプレ−またはプロ−またはプ
レプロ−蛋白質配列のごとき、リーダー配列または分泌
配列をコードする配列のような、付加的コーディング配
列；例えば、転写（例えば、末端シグナルを包含す
る）、リボソーム結合、ｍＲＮＡ安定性因子において役
割を果たす、転写されるが翻訳されない配列などの非コ
ーディング５’および３’配列を包含するが、これに限
定されない付加的、非コーディング配列を有する、前記
した付加的コーディング配列と共にまたはなしの成熟ポ
リペプチドのコーディング配列；付加的機能性を付与す
るコーディング配列のごとき付加的アミノ酸をコードし
ている付加的コーディング配列、を包含してもよいが、
これに限定されない。かくして、例えば、ポリペプチド
が、融合ポリペプチドの精製を促進する、ペプチドのご
ときマーカー配列に融合していてもよい。本発明のこの
態様のある具体例において、マーカー配列は、特にｐＱ
Ｅベクター（Qiagen,Inc）中のタグのごときヘキサヒス
チジンペプチドであり、それらの多くが市販されてい
る。例えば、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 86：8
21-824(1989)に記載されているように、ヘキサヒスチジ
ンは融合タンパク質の精製を便利にする。ＨＡタグはま
た、融合蛋白質を産生するのに用いてよく、インフルエ
ンザ・赤血球凝集素蛋白質由来のエピトープに対応する
ものであり、例えば、Wilsonら、Cell 37:767(1984)に
記載されている。本発明のポリヌクレオチドはまた、構
造遺伝子およびその自然に結合する遺伝因子を有してな
るポリヌクレオチドを包含するが、これに限定されな
い。
明ポリヌクレオチドは、それにより示される成熟ポリペ
プチドに関するコーディング配列；成熟ポリペプチドの
コーディング配列、およびプレ−またはプロ−またはプ
レプロ−蛋白質配列のごとき、リーダー配列または分泌
配列をコードする配列のような、付加的コーディング配
列；例えば、転写（例えば、末端シグナルを包含す
る）、リボソーム結合、ｍＲＮＡ安定性因子において役
割を果たす、転写されるが翻訳されない配列などの非コ
ーディング５’および３’配列を包含するが、これに限
定されない付加的、非コーディング配列を有する、前記
した付加的コーディング配列と共にまたはなしの成熟ポ
リペプチドのコーディング配列；付加的機能性を付与す
るコーディング配列のごとき付加的アミノ酸をコードし
ている付加的コーディング配列、を包含してもよいが、
これに限定されない。かくして、例えば、ポリペプチド
が、融合ポリペプチドの精製を促進する、ペプチドのご
ときマーカー配列に融合していてもよい。本発明のこの
態様のある具体例において、マーカー配列は、特にｐＱ
Ｅベクター（Qiagen,Inc）中のタグのごときヘキサヒス
チジンペプチドであり、それらの多くが市販されてい
る。例えば、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 86：8
21-824(1989)に記載されているように、ヘキサヒスチジ
ンは融合タンパク質の精製を便利にする。ＨＡタグはま
た、融合蛋白質を産生するのに用いてよく、インフルエ
ンザ・赤血球凝集素蛋白質由来のエピトープに対応する
ものであり、例えば、Wilsonら、Cell 37:767(1984)に
記載されている。本発明のポリヌクレオチドはまた、構
造遺伝子およびその自然に結合する遺伝因子を有してな
るポリヌクレオチドを包含するが、これに限定されな
い。
【００４８】前記によれば、本明細書にて用いる「ポリ
ペプチドをコードしているポリヌクレオチド」なる語
は、本発明のポリペプチド、詳細には、細菌、さらに詳
細には図４に示すアミノ酸配列（配列番号：２）を有す
るストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ−１をコ
ードしている配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
該用語は、コーディングおよび／または非コーディング
配列を含んでいてもよい、さらなる領域を伴ったポリペ
プチド（例えば、組み込みファージまたは挿入配列によ
り分断されているか、または修正されている）をコード
している単一の連続領域または不連続領域を含むポリヌ
クレオチドを包含する。
ペプチドをコードしているポリヌクレオチド」なる語
は、本発明のポリペプチド、詳細には、細菌、さらに詳
細には図４に示すアミノ酸配列（配列番号：２）を有す
るストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ−１をコ
ードしている配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
該用語は、コーディングおよび／または非コーディング
配列を含んでいてもよい、さらなる領域を伴ったポリペ
プチド（例えば、組み込みファージまたは挿入配列によ
り分断されているか、または修正されている）をコード
している単一の連続領域または不連続領域を含むポリヌ
クレオチドを包含する。
【００４９】さらに本発明は、図４の推定アミノ酸配列
（配列番号：２）を有するポリペプチドのフラグメン
ト、アナログおよび誘導体をコードする、前記したポリ
ヌクレオチドの変種に関する。ポリヌクレオチドの変種
は、天然に存在する対立遺伝子変種のごとき天然に存在
する変種であってもよく、あるいは天然に存在すること
が知られていない変種であってもよい。かかるポリヌク
レオチドの天然に存在しない変種を、ポリヌクレオチ
ド、細胞または生物に適用される技法を含む、突然変異
法により調製してもよい。
（配列番号：２）を有するポリペプチドのフラグメン
ト、アナログおよび誘導体をコードする、前記したポリ
ヌクレオチドの変種に関する。ポリヌクレオチドの変種
は、天然に存在する対立遺伝子変種のごとき天然に存在
する変種であってもよく、あるいは天然に存在すること
が知られていない変種であってもよい。かかるポリヌク
レオチドの天然に存在しない変種を、ポリヌクレオチ
ド、細胞または生物に適用される技法を含む、突然変異
法により調製してもよい。
【００５０】この点における変種の中には、ヌクレオチ
ド置換、欠失または付加による前記したポリヌクレオチ
ドと異なる変種がある。置換、欠失または付加には１個
またはそれ以上のヌクレオチドが関与しているかもしれ
ない。変種は、コーディング配列または非コーディング
配列あるいはそれらの両方において変化していてもよ
い。コーディング配列の変化により、保存的または非保
存的アミノ酸置換、欠失または付加を生じてもよい。
ド置換、欠失または付加による前記したポリヌクレオチ
ドと異なる変種がある。置換、欠失または付加には１個
またはそれ以上のヌクレオチドが関与しているかもしれ
ない。変種は、コーディング配列または非コーディング
配列あるいはそれらの両方において変化していてもよ
い。コーディング配列の変化により、保存的または非保
存的アミノ酸置換、欠失または付加を生じてもよい。
【００５１】この点において本発明の特に好ましい具体
例は、図４に示すＭｕｒＡ−１のアミノ酸配列（配列番
号：２）を有するポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチド；その変種、アナログ、誘導体およびフラグ
メント、およびその変種、アナログおよび誘導体のフラ
グメントである。
例は、図４に示すＭｕｒＡ−１のアミノ酸配列（配列番
号：２）を有するポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチド；その変種、アナログ、誘導体およびフラグ
メント、およびその変種、アナログおよび誘導体のフラ
グメントである。
【００５２】さらに、この点において、図４のＭｕｒＡ
−１ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号：２）を有
する、ＭｕｒＡ−１変種、アナログ、誘導体およびフラ
グメント、ならびにそのフラグメントの変種、アナログ
および誘導体をコードしているポリヌクレオチドが特に
好ましく、該アミノ酸中、数個の、少数の、５ないし１
０個、１ないし５個、１ないし３、２、１個または０個
のアミノ酸残基が置換、欠失または付加されており、あ
るいはそれらが組み合わされている。これらのうち特に
好ましいのは、ＭｕｒＡ−１の特性および活性を変化さ
せないサイレント置換、付加および欠失である。また、
この点において、保存的置換が特に好ましい。置換を有
しない図４のアミノ酸配列（配列番号：２）を有するポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドが最も好まし
い。
−１ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号：２）を有
する、ＭｕｒＡ−１変種、アナログ、誘導体およびフラ
グメント、ならびにそのフラグメントの変種、アナログ
および誘導体をコードしているポリヌクレオチドが特に
好ましく、該アミノ酸中、数個の、少数の、５ないし１
０個、１ないし５個、１ないし３、２、１個または０個
のアミノ酸残基が置換、欠失または付加されており、あ
るいはそれらが組み合わされている。これらのうち特に
好ましいのは、ＭｕｒＡ−１の特性および活性を変化さ
せないサイレント置換、付加および欠失である。また、
この点において、保存的置換が特に好ましい。置換を有
しない図４のアミノ酸配列（配列番号：２）を有するポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチドが最も好まし
い。
【００５３】本発明のさらに好ましい具体例は、図４に
示すアミノ酸配列（配列番号：２）を有するＭｕｒＡ−
１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して
その全長にわたって少なくとも６０％または７０％同一
であるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチ
ドに相補的なポリヌクレオチドである。また、寄託され
たエス・ニューモニエ０１００９３クローンのストレプ
トコッカス・ニューモニエＤＮＡのＭｕｒＡ−１ポリぺ
プチドをコードするポリヌクレオチドに対してその全長
にわたって少なくとも８０％同一である領域を含んでな
るポリヌクレオチド、およびそれに相補的なポリヌクレ
オチドが最高に好ましい。この点において、同じポリペ
プチドに対して全長にわたって少なくとも９０％同一で
あるポリヌクレオチドが特に好ましく、これらのうちで
も特に好ましいのは、少なくとも９５％同一のものであ
る。さらに、少なくとも９５％同一のものの中でも少な
くとも９７％同一のものが非常に好ましく、その中でも
少なくとも９８％同一のものおよび少なくとも９９％同
一のものが特に非常に好ましく、少なくとも９９％のも
のがより好ましい。
示すアミノ酸配列（配列番号：２）を有するＭｕｒＡ−
１ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに対して
その全長にわたって少なくとも６０％または７０％同一
であるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチ
ドに相補的なポリヌクレオチドである。また、寄託され
たエス・ニューモニエ０１００９３クローンのストレプ
トコッカス・ニューモニエＤＮＡのＭｕｒＡ−１ポリぺ
プチドをコードするポリヌクレオチドに対してその全長
にわたって少なくとも８０％同一である領域を含んでな
るポリヌクレオチド、およびそれに相補的なポリヌクレ
オチドが最高に好ましい。この点において、同じポリペ
プチドに対して全長にわたって少なくとも９０％同一で
あるポリヌクレオチドが特に好ましく、これらのうちで
も特に好ましいのは、少なくとも９５％同一のものであ
る。さらに、少なくとも９５％同一のものの中でも少な
くとも９７％同一のものが非常に好ましく、その中でも
少なくとも９８％同一のものおよび少なくとも９９％同
一のものが特に非常に好ましく、少なくとも９９％のも
のがより好ましい。
【００５４】さらに、この点において特に好ましい具体
例は、図１ないし３のｃＤＮＡによりコードされる成熟
ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を
保持しているポリペプチドをコードしているポリヌクレ
オチドである（配列番号：１）。
例は、図１ないし３のｃＤＮＡによりコードされる成熟
ポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を
保持しているポリペプチドをコードしているポリヌクレ
オチドである（配列番号：１）。
【００５５】本発明はさらに、本明細書において前記し
た配列とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド
に関する。この点において、本発明は、特に、厳密な条
件下で本明細書において前記したポリヌクレオチドとハ
イブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。
本明細書にて用いる場合、「厳密な条件」なる語は、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起こ
るであろうことを意味する。
た配列とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド
に関する。この点において、本発明は、特に、厳密な条
件下で本明細書において前記したポリヌクレオチドとハ
イブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。
本明細書にて用いる場合、「厳密な条件」なる語は、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起こ
るであろうことを意味する。
【００５６】本発明のポリヌクレオチドアッセイに関し
てさらに本明細書で議論するように、例えば、前記した
本発明のポリヌクレオチドをＲＮＡ、ｃＤＮＡおよびゲ
ノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして
用い、ＭｕｒＡ−１をコードしている完全長のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離し、およびＭｕｒＡ−１遺
伝子に対して高度の配列類似性を有する他の遺伝子のｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離してもよい。一般的
には、かかるプローブは少なくとも１５個の塩基を含ん
でなるであろう。好ましくは、かかるプローブは少なく
とも３０個の塩基を有し、少なくとも５０個の塩基を有
していてもよい。特に好ましいプローブは少なくとも３
０個の塩基を有し、５０個またはそれ以下の塩基を有す
るであろう。
てさらに本明細書で議論するように、例えば、前記した
本発明のポリヌクレオチドをＲＮＡ、ｃＤＮＡおよびゲ
ノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして
用い、ＭｕｒＡ−１をコードしている完全長のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離し、およびＭｕｒＡ−１遺
伝子に対して高度の配列類似性を有する他の遺伝子のｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離してもよい。一般的
には、かかるプローブは少なくとも１５個の塩基を含ん
でなるであろう。好ましくは、かかるプローブは少なく
とも３０個の塩基を有し、少なくとも５０個の塩基を有
していてもよい。特に好ましいプローブは少なくとも３
０個の塩基を有し、５０個またはそれ以下の塩基を有す
るであろう。
【００５７】例えば、オリゴヌクレオチドプローブを合
成するための既知ＤＮＡ配列を用いるスクリーニングす
ることによって、ＭｕｒＡ−１遺伝子の暗号領域を単離
してもよい。ついで、本発明の遺伝子配列に相補的な配
列を有する標識されたオリゴヌクレオチドを用いて、ｃ
ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーを
スクリーニングして、ライブラリーのどのメンバーがプ
ローブにハイブリダイゼーションするかを決定する。
成するための既知ＤＮＡ配列を用いるスクリーニングす
ることによって、ＭｕｒＡ−１遺伝子の暗号領域を単離
してもよい。ついで、本発明の遺伝子配列に相補的な配
列を有する標識されたオリゴヌクレオチドを用いて、ｃ
ＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーを
スクリーニングして、ライブラリーのどのメンバーがプ
ローブにハイブリダイゼーションするかを決定する。
【００５８】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドを、特に、ポリヌクレオチドアッセイに関して本明
細書でさらに議論するごとく、疾患、特にヒトの疾患の
治療および診断の発見のための研究試薬および材料とし
て用いてもよい。
チドを、特に、ポリヌクレオチドアッセイに関して本明
細書でさらに議論するごとく、疾患、特にヒトの疾患の
治療および診断の発見のための研究試薬および材料とし
て用いてもよい。
【００５９】配列番号：３および４を含め、配列番号：
１および２の配列に由来のオリゴヌクレオチドである本
発明のポリヌクレオチドは、本明細書にて前記されてい
るが、好ましくはＰＣＲについての方法を用いて、本明
細書にて同定したストレプトコッカス・ニューモニエ遺
伝子が、すべてまたは部分的に、感染組織にて転写され
ているかいないかを決定してもよい。かかる配列がま
た、感染の段階および病原体がもたらした感染の型を診
断するにおいて有用性を有することがわかる。
１および２の配列に由来のオリゴヌクレオチドである本
発明のポリヌクレオチドは、本明細書にて前記されてい
るが、好ましくはＰＣＲについての方法を用いて、本明
細書にて同定したストレプトコッカス・ニューモニエ遺
伝子が、すべてまたは部分的に、感染組織にて転写され
ているかいないかを決定してもよい。かかる配列がま
た、感染の段階および病原体がもたらした感染の型を診
断するにおいて有用性を有することがわかる。
【００６０】ポリヌクレオチドは、当該成熟タンパク質
＋付加的アミノもしくはカルボキシル末端アミノ酸、あ
るいは成熟ポリペプチドに対する内部アミノ酸（例え
ば、成熟形態が１種よりも多いポリペプチド鎖を有する
場合）であるポリペプチドをコードしていてもよい。か
かる配列は、前駆体から成熟形態への蛋白質のプロセッ
シングにおいて役割を果たしており、蛋白質輸送を促進
し、蛋白質の半減期を延長または短縮し、あるいは特
に、蛋白質のアッセイまたは製造操作を容易にするかも
しれない。一般に、in situにおける場合には、細胞酵
素により、付加的アミノ酸がプロセッシングにより成熟
タンパク質から除去されてもよい。
＋付加的アミノもしくはカルボキシル末端アミノ酸、あ
るいは成熟ポリペプチドに対する内部アミノ酸（例え
ば、成熟形態が１種よりも多いポリペプチド鎖を有する
場合）であるポリペプチドをコードしていてもよい。か
かる配列は、前駆体から成熟形態への蛋白質のプロセッ
シングにおいて役割を果たしており、蛋白質輸送を促進
し、蛋白質の半減期を延長または短縮し、あるいは特
に、蛋白質のアッセイまたは製造操作を容易にするかも
しれない。一般に、in situにおける場合には、細胞酵
素により、付加的アミノ酸がプロセッシングにより成熟
タンパク質から除去されてもよい。
【００６１】１つまたはそれ以上のプロ配列に融合した
成熟形態のポリペプチドを有する前駆体蛋白質は、その
ポリペプチドの不活性形態であってもよい。プロ配列が
除去されると、かかる不活性前駆体は、一般に、活性化
される。プロ配列のいくつかまたはすべてを活性化前に
除去してもよい。一般に、かかる前駆体はプロ蛋白質と
呼ばれる。
成熟形態のポリペプチドを有する前駆体蛋白質は、その
ポリペプチドの不活性形態であってもよい。プロ配列が
除去されると、かかる不活性前駆体は、一般に、活性化
される。プロ配列のいくつかまたはすべてを活性化前に
除去してもよい。一般に、かかる前駆体はプロ蛋白質と
呼ばれる。
【００６２】要約すると、本発明のポリヌクレオチド
は、成熟蛋白質、成熟蛋白質＋リーダー配列（プレ蛋白
質と呼んでもよい）、プレ蛋白質のリーダー配列でない
１個またはそれ以上のプロ配列を有する成熟蛋白質の前
駆体、あるいはリーダー配列および一般にポリペプチド
の活性および成熟形態を生じるプロセッシング工程の間
に除去される１個またはそれ以上のプロ配列を有する、
プロ蛋白質の前駆体であるプレプロ蛋白質をコードして
いてもよい。
は、成熟蛋白質、成熟蛋白質＋リーダー配列（プレ蛋白
質と呼んでもよい）、プレ蛋白質のリーダー配列でない
１個またはそれ以上のプロ配列を有する成熟蛋白質の前
駆体、あるいはリーダー配列および一般にポリペプチド
の活性および成熟形態を生じるプロセッシング工程の間
に除去される１個またはそれ以上のプロ配列を有する、
プロ蛋白質の前駆体であるプレプロ蛋白質をコードして
いてもよい。
【００６３】寄託物質 寄託は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に対す
るブダペスト条約に基づく規則の下になされた。該菌株
は特許付与後に取り消されることなく、かつ制限または
条件なしで公衆に開放される。該寄託は単に当業者の便
宜のためになされるものであって、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１
１２の下に要求されるように、寄託が実施のために必要
とされるものではない。
るブダペスト条約に基づく規則の下になされた。該菌株
は特許付与後に取り消されることなく、かつ制限または
条件なしで公衆に開放される。該寄託は単に当業者の便
宜のためになされるものであって、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１
１２の下に要求されるように、寄託が実施のために必要
とされるものではない。
【００６４】ストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒ
Ａ−１を含有する寄託株、エス・ニューモニエ０１００
９３クローンは、１９９６年４月１１日にスコットラン
ド、アバディーンＡＢ２ １ＲＹ、ストリート・マチャ
ー・ドライブ２３番、Ｎational Ｃollections of Ｉnd
ustrial and Ｍarine Ｂacteria Ｌtd.（ＮＣＩＭＢ）
に寄託し、ＮＣＩＭＢ受託番号４０７９４が付与され
た。そのストレプトコッカス・ニューモニエ、エス・ニ
ューモニエ０１００９３クローン寄託株を、本明細書に
て、「寄託されたエス・ニューモニエ０１００９３クロ
ーン」または「寄託されたエス・ニューモニエ０１００
９３クローンのＤＮＡ」と称する。
Ａ−１を含有する寄託株、エス・ニューモニエ０１００
９３クローンは、１９９６年４月１１日にスコットラン
ド、アバディーンＡＢ２ １ＲＹ、ストリート・マチャ
ー・ドライブ２３番、Ｎational Ｃollections of Ｉnd
ustrial and Ｍarine Ｂacteria Ｌtd.（ＮＣＩＭＢ）
に寄託し、ＮＣＩＭＢ受託番号４０７９４が付与され
た。そのストレプトコッカス・ニューモニエ、エス・ニ
ューモニエ０１００９３クローン寄託株を、本明細書に
て、「寄託されたエス・ニューモニエ０１００９３クロ
ーン」または「寄託されたエス・ニューモニエ０１００
９３クローンのＤＮＡ」と称する。
【００６５】寄託された物質は、寄託して「ＮＣＩＭＢ
４０７９４」が付与された、完全長のＭｕｒＡ−１ＤＮ
Ａを含有するエス・ニューモニエ０１００９３クローン
である。その寄託された物質に含まれるポリヌクレオチ
ドの配列ならびにそれによりコードされるポリぺプチド
のアミノ酸配列は、本明細書において配列の記載が不一
致の場合に調整するものである。寄託された物質を製造
し、使用し、販売するにはライセンスが必要であり、そ
のようなライセンスは本明細書で付与されるものではな
い。
４０７９４」が付与された、完全長のＭｕｒＡ−１ＤＮ
Ａを含有するエス・ニューモニエ０１００９３クローン
である。その寄託された物質に含まれるポリヌクレオチ
ドの配列ならびにそれによりコードされるポリぺプチド
のアミノ酸配列は、本明細書において配列の記載が不一
致の場合に調整するものである。寄託された物質を製造
し、使用し、販売するにはライセンスが必要であり、そ
のようなライセンスは本明細書で付与されるものではな
い。
【００６６】ポリペプチド さらに、本発明は、図４に示される長さが４２７アミノ
酸の推定アミノ酸配列を有するＭｕｒＡ−１ポリぺプチ
ドに関する。
酸の推定アミノ酸配列を有するＭｕｒＡ−１ポリぺプチ
ドに関する。
【００６７】本発明はまた、これらのポリペプチドのフ
ラグメント、アナログおよび誘導体にも関する。「フラ
グメント」、「誘導体」および「アナログ」なる語は、
図４のポリペプチド（配列番号：２）についていう場
合、かかるポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能ま
たは活性を保持しているポリペプチドを意味する。かく
して、アナログは、プロ蛋白質部分の開裂により活性化
されて活性成熟ポリペプチドを産生しうるプロ蛋白質を
包含する。
ラグメント、アナログおよび誘導体にも関する。「フラ
グメント」、「誘導体」および「アナログ」なる語は、
図４のポリペプチド（配列番号：２）についていう場
合、かかるポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能ま
たは活性を保持しているポリペプチドを意味する。かく
して、アナログは、プロ蛋白質部分の開裂により活性化
されて活性成熟ポリペプチドを産生しうるプロ蛋白質を
包含する。
【００６８】図４のポリペプチドのフラグメント、誘導
体またはアナログは、（ｉ）１個またはそれ以上のアミ
ノ酸残基が保存的または非保存的アミノ酸残基（好まし
くは、保存的アミノ酸残基）で置換されており、かかる
置換アミノ酸残基は遺伝コードによりコードされている
ものであっても、なくてもよいもの、あるいは（ii）１
個またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、
あるいは（iii）ポリペプチドの半減期を延長させる化
合物（例えば、ポリエチレングリコール）のごときもう
一つの化合物に成熟ポリペプチドが融合しているもの、
あるいは（iv）リーダーまたは分泌配列、または成熟ポ
リペプチドの精製に用いられる配列、またはプロ蛋白質
配列のごとき、付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融
合しているものであってもよい。かかるフラグメント、
誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の
範囲内であると考えられる。
体またはアナログは、（ｉ）１個またはそれ以上のアミ
ノ酸残基が保存的または非保存的アミノ酸残基（好まし
くは、保存的アミノ酸残基）で置換されており、かかる
置換アミノ酸残基は遺伝コードによりコードされている
ものであっても、なくてもよいもの、あるいは（ii）１
個またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、
あるいは（iii）ポリペプチドの半減期を延長させる化
合物（例えば、ポリエチレングリコール）のごときもう
一つの化合物に成熟ポリペプチドが融合しているもの、
あるいは（iv）リーダーまたは分泌配列、または成熟ポ
リペプチドの精製に用いられる配列、またはプロ蛋白質
配列のごとき、付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融
合しているものであってもよい。かかるフラグメント、
誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の
範囲内であると考えられる。
【００６９】この点において、図４に示されるＭｕｒＡ
−１のアミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、
アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラ
グメントの変種、アナログおよび誘導体は、本発明の特
に好ましい具体例に属する。あるいはまた、この点にお
いて、本発明の特に好ましい具体例は、ＭｕｒＡ−１の
アミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、アナロ
グ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグメン
トの変種、アナログおよび誘導体である。
−１のアミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、
アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラ
グメントの変種、アナログおよび誘導体は、本発明の特
に好ましい具体例に属する。あるいはまた、この点にお
いて、本発明の特に好ましい具体例は、ＭｕｒＡ−１の
アミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、アナロ
グ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグメン
トの変種、アナログおよび誘導体である。
【００７０】保存的アミノ酸置換によって標準体から変
化した変種も好ましい変種である。かかる置換は、ポリ
ペプチド中の所定のアミノ酸を同様の特性の別のアミノ
酸で置換したものである。保存的置換として典型的に見
られるのは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕお
よびＩｌｅの間での相互置換；水酸基を有するＳｅｒお
よびＴｈｒの相互置換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの
交換、アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎの間の置換、塩基
性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換、ならびに芳香族残基
Ｐｈｅ、Ｔｙｒの間の置換である。
化した変種も好ましい変種である。かかる置換は、ポリ
ペプチド中の所定のアミノ酸を同様の特性の別のアミノ
酸で置換したものである。保存的置換として典型的に見
られるのは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕお
よびＩｌｅの間での相互置換；水酸基を有するＳｅｒお
よびＴｈｒの相互置換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの
交換、アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎの間の置換、塩基
性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換、ならびに芳香族残基
Ｐｈｅ、Ｔｙｒの間の置換である。
【００７１】さらに、この点において特に好ましいの
は、数個の、少数の、５ないし１０個の、１ないし５個
の、１ないし３個の、２、１または０個のアミノ酸残基
が置換、欠失または付加されているか、それらのいずれ
かの組み合わせを有する、図４のＭｕｒＡ−１ポリペプ
チドのアミノ酸配列（配列番号：２）を有する変種、ア
ナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグ
メントの変種、アナログおよび誘導体である。ＭｕｒＡ
−１の性質および活性を変化させない置換、付加および
欠失がこれらのうちで特に好ましい。またこの点におい
て、保存的置換が特に好ましい。最高に好ましいのは、
置換のない図４のアミノ酸配列（配列番号：２）を有す
るポリペプチドである。
は、数個の、少数の、５ないし１０個の、１ないし５個
の、１ないし３個の、２、１または０個のアミノ酸残基
が置換、欠失または付加されているか、それらのいずれ
かの組み合わせを有する、図４のＭｕｒＡ−１ポリペプ
チドのアミノ酸配列（配列番号：２）を有する変種、ア
ナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグ
メントの変種、アナログおよび誘導体である。ＭｕｒＡ
−１の性質および活性を変化させない置換、付加および
欠失がこれらのうちで特に好ましい。またこの点におい
て、保存的置換が特に好ましい。最高に好ましいのは、
置換のない図４のアミノ酸配列（配列番号：２）を有す
るポリペプチドである。
【００７２】本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは、好ましくは、単離形態で提供され、好ましくは
均一に精製されている。本発明のポリペプチドは、図４
のポリペプチド（配列番号：２）（特に、成熟ポリペプ
チド）ならびに図４のポリペプチド（配列番号：２）に
対して少なくとも６０％または７０％の同一性、好まし
くは図４のポリぺプチド（配列番号：２）に対して少な
くとも８０％の同一性を有し、より好ましくは図４のポ
リペプチド（配列番号：２）に対して少なくとも９０％
の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）
を有し、さらにより好ましくは図４のポリペプチド（配
列番号：２）に対して少なくとも９５％の類似性（より
好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有するポリペ
プチドを包含し、また、一般に少なくとも３０個のアミ
ノ酸、より好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸を含
むかかるポリペプチドの部分を有するそのようなポリペ
プチドの部分も包含する。
チドは、好ましくは、単離形態で提供され、好ましくは
均一に精製されている。本発明のポリペプチドは、図４
のポリペプチド（配列番号：２）（特に、成熟ポリペプ
チド）ならびに図４のポリペプチド（配列番号：２）に
対して少なくとも６０％または７０％の同一性、好まし
くは図４のポリぺプチド（配列番号：２）に対して少な
くとも８０％の同一性を有し、より好ましくは図４のポ
リペプチド（配列番号：２）に対して少なくとも９０％
の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）
を有し、さらにより好ましくは図４のポリペプチド（配
列番号：２）に対して少なくとも９５％の類似性（より
好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有するポリペ
プチドを包含し、また、一般に少なくとも３０個のアミ
ノ酸、より好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸を含
むかかるポリペプチドの部分を有するそのようなポリペ
プチドの部分も包含する。
【００７３】本発明のポリペプチドのフラグメントまた
は部分を、ペプチド合成による対応する完全長のポリペ
プチドの合成に使用してもよい；従って、該フラグメン
トを完全長のポリペプチドの製造のための中間体として
使用してもよい。本発明のポリヌクレオチドのフラグメ
ントまたは部分を用いて本発明の完全長のポリヌクレオ
チドを合成してもよい。
は部分を、ペプチド合成による対応する完全長のポリペ
プチドの合成に使用してもよい；従って、該フラグメン
トを完全長のポリペプチドの製造のための中間体として
使用してもよい。本発明のポリヌクレオチドのフラグメ
ントまたは部分を用いて本発明の完全長のポリヌクレオ
チドを合成してもよい。
【００７４】フラグメント ＭｕｒＡ−１のフラグメント、最も詳細には図４に示さ
れるアミノ酸配列（配列番号：２）を有するＭｕｒＡ−
１のフラグメントを含んでなるポリペプチド、および、
図４のＭｕｒＡ−１（配列番号：２）の変種および誘導
体のフラグメントを含んでなるポリペプチドも、本発明
のこの態様の好ましい具体例に含まれる。
れるアミノ酸配列（配列番号：２）を有するＭｕｒＡ−
１のフラグメントを含んでなるポリペプチド、および、
図４のＭｕｒＡ−１（配列番号：２）の変種および誘導
体のフラグメントを含んでなるポリペプチドも、本発明
のこの態様の好ましい具体例に含まれる。
【００７５】この点において、フラグメントは、前記し
たＭｕｒＡ−１ポリペプチドおよびその変種または誘導
体のアミノ酸配列のすべてではないが、一部と完全に同
じであるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
たＭｕｒＡ−１ポリペプチドおよびその変種または誘導
体のアミノ酸配列のすべてではないが、一部と完全に同
じであるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
【００７６】かかるフラグメントは、「フリー−スタン
ディング（free-standing）」、すなわち、他のアミノ
酸またはポリペプチドの一部でなく、または、それらに
融合しておらず、あるいはかかるフラグメントが大きな
ポリペプチド中に含まれていてその一部分または領域と
なっていてもよい。大きなポリペプチド中に含まれてい
る場合、今検討中のフラグメントは、最も好ましくは単
一の連続した領域を形成する。しかしながら、いくつか
のフラグメントが、単一のより大きなポリペプチド中に
含まれていてもよい。例えば、ある好ましい具体例は、
宿主中での発現のためにデザインされた前駆体ポリペプ
チド中に含まれていて、ＭｕｒＡ−１フラグメントのア
ミノ末端に融合した異種プレおよびプロ−ポリペプチド
領域、および該フラグメントのカルボキシル末端に融合
した付加的領域を有している、本発明のＭｕｒＡ−１ポ
リペプチドのフラグメントに関する。従って、本明細書
にて意図される意味の１つの態様において、フラグメン
トは、ＭｕｒＡ−１由来の融合ポリペプチドまたは融合
蛋白質の一部または部分をいう。
ディング（free-standing）」、すなわち、他のアミノ
酸またはポリペプチドの一部でなく、または、それらに
融合しておらず、あるいはかかるフラグメントが大きな
ポリペプチド中に含まれていてその一部分または領域と
なっていてもよい。大きなポリペプチド中に含まれてい
る場合、今検討中のフラグメントは、最も好ましくは単
一の連続した領域を形成する。しかしながら、いくつか
のフラグメントが、単一のより大きなポリペプチド中に
含まれていてもよい。例えば、ある好ましい具体例は、
宿主中での発現のためにデザインされた前駆体ポリペプ
チド中に含まれていて、ＭｕｒＡ−１フラグメントのア
ミノ末端に融合した異種プレおよびプロ−ポリペプチド
領域、および該フラグメントのカルボキシル末端に融合
した付加的領域を有している、本発明のＭｕｒＡ−１ポ
リペプチドのフラグメントに関する。従って、本明細書
にて意図される意味の１つの態様において、フラグメン
トは、ＭｕｒＡ−１由来の融合ポリペプチドまたは融合
蛋白質の一部または部分をいう。
【００７７】本発明のポリペプチドフラグメントの代表
例として、例えば、アミノ酸の数が１−２０個、２１−
４０個、４１−６０個、６１−８０個、８１−１００個
および１０１−４２７個からのフラグメントが挙げら
れ、これら２０個のアミノ酸フラグメントのいずれの組
み合わせてをも包含する。
例として、例えば、アミノ酸の数が１−２０個、２１−
４０個、４１−６０個、６１−８０個、８１−１００個
および１０１−４２７個からのフラグメントが挙げら
れ、これら２０個のアミノ酸フラグメントのいずれの組
み合わせてをも包含する。
【００７８】本明細書中、「約」とは、数個、少数、
５、４、３、２、１個のアミノ酸だけ大きいまたは小さ
い特記される範囲であって、上限または下限、あるいは
それらの両方の範囲を包含する。
５、４、３、２、１個のアミノ酸だけ大きいまたは小さ
い特記される範囲であって、上限または下限、あるいは
それらの両方の範囲を包含する。
【００７９】本発明の好ましいフラグメントは、例え
ば、ＭｕｒＡ−１の切断されたポリぺプチドを包含す
る。切断されたポリぺプチドは、図４のアミノ酸配列を
有するＭｕｒＡ−１ポリペプチド、またはその変種また
は誘導体を包含するが、アミノ末端を含む連続した一連
の残基（すなわち、連続した領域、部分または一部分）
の欠失、またはカルボキシル末端を含む連続した一連の
残基の欠失、あるいは１つはアミノ末端を含み、もう１
つはカルボキシル末端を含む、二重切断変異種中にある
ような２つの連続した一連の残基の欠失は除く。おおよ
そ示したサイズ範囲のフラグメントも切断されたフラグ
メントの好ましい具体例であり、一般に、それらはフラ
グメントのなかでも特に好ましいものである。宿主細
胞、特にストレプトコッカスにおける本発明のポリぺプ
チドの分解された形態もまた好ましい。
ば、ＭｕｒＡ−１の切断されたポリぺプチドを包含す
る。切断されたポリぺプチドは、図４のアミノ酸配列を
有するＭｕｒＡ−１ポリペプチド、またはその変種また
は誘導体を包含するが、アミノ末端を含む連続した一連
の残基（すなわち、連続した領域、部分または一部分）
の欠失、またはカルボキシル末端を含む連続した一連の
残基の欠失、あるいは１つはアミノ末端を含み、もう１
つはカルボキシル末端を含む、二重切断変異種中にある
ような２つの連続した一連の残基の欠失は除く。おおよ
そ示したサイズ範囲のフラグメントも切断されたフラグ
メントの好ましい具体例であり、一般に、それらはフラ
グメントのなかでも特に好ましいものである。宿主細
胞、特にストレプトコッカスにおける本発明のポリぺプ
チドの分解された形態もまた好ましい。
【００８０】本発明のこの態様において、ＭｕｒＡ−１
の構造的または機能的属性によって特徴づけられるフラ
グメントも好ましい。この点において本発明の好ましい
具体例は、ＭｕｒＡ−１のアルファ−ヘリックスおよび
アルファ−ヘリックス形成領域、ベータ−シートおよび
ベータ−シート形成領域、ターンおよびターン形成領
域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性
領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可
動性領域、表面形成領域、基質結合領域および高抗原性
インデックス領域を有してなるフラグメントおよびその
ようなフラグメントの組み合わせを包含する。
の構造的または機能的属性によって特徴づけられるフラ
グメントも好ましい。この点において本発明の好ましい
具体例は、ＭｕｒＡ−１のアルファ−ヘリックスおよび
アルファ−ヘリックス形成領域、ベータ−シートおよび
ベータ−シート形成領域、ターンおよびターン形成領
域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性
領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可
動性領域、表面形成領域、基質結合領域および高抗原性
インデックス領域を有してなるフラグメントおよびその
ようなフラグメントの組み合わせを包含する。
【００８１】好ましい領域はＭｕｒＡ−１の活性を媒介
する領域である。この点において、類似活性または改良
活性を含め、ＭｕｒＡ−１の化学的、生物学的活性また
は他の活性を有し、望ましくない活性が減じられている
フラグメントが最も好ましい。さらに好ましいポリぺプ
チドフラグメントは、動物、特にヒトにおける抗原また
は免疫原的であるものである。
する領域である。この点において、類似活性または改良
活性を含め、ＭｕｒＡ−１の化学的、生物学的活性また
は他の活性を有し、望ましくない活性が減じられている
フラグメントが最も好ましい。さらに好ましいポリぺプ
チドフラグメントは、動物、特にヒトにおける抗原また
は免疫原的であるものである。
【００８２】本発明はさらに、特に、前記したフラグメ
ントをコードしているポリヌクレオチド、該フラグメン
トをコードしているポリヌクレオチドにハイブリダイゼ
ーションするポリヌクレオチド、特に厳密な条件下でハ
イブリダイゼーションするもの、および該フラグメント
をコードしているポリペプチドを増幅するためのＰＣＲ
プライマーのごときポリヌクレオチドにも関することが
理解されよう。これらの点において、好ましいポリヌク
レオチドは、前記したような好ましいフラグメントに対
応するポリヌクレオチドである。
ントをコードしているポリヌクレオチド、該フラグメン
トをコードしているポリヌクレオチドにハイブリダイゼ
ーションするポリヌクレオチド、特に厳密な条件下でハ
イブリダイゼーションするもの、および該フラグメント
をコードしているポリペプチドを増幅するためのＰＣＲ
プライマーのごときポリヌクレオチドにも関することが
理解されよう。これらの点において、好ましいポリヌク
レオチドは、前記したような好ましいフラグメントに対
応するポリヌクレオチドである。
【００８３】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを有してなるベクター、本発明のベクターを
用いて遺伝子操作された宿主細胞および組換え技法によ
る本発明のポリペプチドの製造にも関する。
クレオチドを有してなるベクター、本発明のベクターを
用いて遺伝子操作された宿主細胞および組換え技法によ
る本発明のポリペプチドの製造にも関する。
【００８４】宿主細胞を遺伝子操作して、ポリヌクレオ
チドを組み込み、本発明のポリペプチドを発現させるこ
とができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、
燐酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキ
ストラン媒介トランスフェクション、トランスベクショ
ン、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トラ
ンスフェクション、エレクトロポレーション、トランス
ダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入、感
染および他の方法により行うことができる。かかる方法
は、多くの標準的実験室マニュアル、例えばＤavisら、
ＢＡＳＩＣ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ，（１９８６）およびＳambrookら、Ｍ
ＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴ
ＯＲＹＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpring Ｈarbo
r Ｌaboratory Ｐress，ＣoldＳpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.
（１９８９）に記載されている。
チドを組み込み、本発明のポリペプチドを発現させるこ
とができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、
燐酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキ
ストラン媒介トランスフェクション、トランスベクショ
ン、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トラ
ンスフェクション、エレクトロポレーション、トランス
ダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入、感
染および他の方法により行うことができる。かかる方法
は、多くの標準的実験室マニュアル、例えばＤavisら、
ＢＡＳＩＣ ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ，（１９８６）およびＳambrookら、Ｍ
ＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴ
ＯＲＹＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpring Ｈarbo
r Ｌaboratory Ｐress，ＣoldＳpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.
（１９８９）に記載されている。
【００８５】宿主細胞におけるポリヌクレオチド構築
は、常套手段に従って、組換え配列によりコードされる
遺伝子産物を産生することができる。また、本発明のポ
リぺプチドは、従来のぺプチド合成器を用いて合成的に
産生することがでいる。
は、常套手段に従って、組換え配列によりコードされる
遺伝子産物を産生することができる。また、本発明のポ
リぺプチドは、従来のぺプチド合成器を用いて合成的に
産生することがでいる。
【００８６】成熟蛋白質は、適当なプロモーターの制御
下、哺乳動物細胞、酵母、細菌または他の細胞にて発現
させることができる。さらに、無細胞翻訳系を利用し、
本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを用いてかかる
蛋白質を産生することができる。原核宿主および真核宿
主で用いる適当なクローニングおよび発現ベクターは、
Ｓambrookら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ
ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃol
d Ｓpring Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓprin
g Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.（１９８９）に記載されている。
下、哺乳動物細胞、酵母、細菌または他の細胞にて発現
させることができる。さらに、無細胞翻訳系を利用し、
本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを用いてかかる
蛋白質を産生することができる。原核宿主および真核宿
主で用いる適当なクローニングおよび発現ベクターは、
Ｓambrookら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ
ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃol
d Ｓpring Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓprin
g Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.（１９８９）に記載されている。
【００８７】本発明のこの態様によれば、ベクターは、
例えばプラスミドベクター、１本鎖または２本鎖のファ
ージベクター、１本鎖または２本鎖のＲＮＡまたはＤＮ
Ａウイルスベクターであってもよい。プラスミドは、一
般に、当業者に馴染みの標準的命名慣習にしたがって、
前部に小文字ｐを付し、および／またはつづいて大文字
および／または数で表される。本明細書に開示の出発プ
ラスミドは、市販されているか、公に入手可能である
か、または周知の公開操作を慣用的に適用することによ
り利用できるプラスミドから構築することができるかの
いずれかである。本発明に従って用いることのできる、
多くのプラスミドおよび他のクローニングおよび発現ベ
クターは周知であり、当業者であれば容易に利用するこ
とができる。
例えばプラスミドベクター、１本鎖または２本鎖のファ
ージベクター、１本鎖または２本鎖のＲＮＡまたはＤＮ
Ａウイルスベクターであってもよい。プラスミドは、一
般に、当業者に馴染みの標準的命名慣習にしたがって、
前部に小文字ｐを付し、および／またはつづいて大文字
および／または数で表される。本明細書に開示の出発プ
ラスミドは、市販されているか、公に入手可能である
か、または周知の公開操作を慣用的に適用することによ
り利用できるプラスミドから構築することができるかの
いずれかである。本発明に従って用いることのできる、
多くのプラスミドおよび他のクローニングおよび発現ベ
クターは周知であり、当業者であれば容易に利用するこ
とができる。
【００８８】ある種の態様において、本発明のポリヌク
レオチドおよびポリペプチドの発現用ベクターが好まし
い。一般に、かかるベクターは、発現されるべきポリヌ
クレオチドに作動可能に連結された宿主中での発現に効
果的なシス−作用性制御領域を含んでなる。適当なトラ
ンス−作用性因子は、宿主、または、相補的ベクター、
または、宿主中への導入によりベクター自身のいずれか
によって提供される。
レオチドおよびポリペプチドの発現用ベクターが好まし
い。一般に、かかるベクターは、発現されるべきポリヌ
クレオチドに作動可能に連結された宿主中での発現に効
果的なシス−作用性制御領域を含んでなる。適当なトラ
ンス−作用性因子は、宿主、または、相補的ベクター、
または、宿主中への導入によりベクター自身のいずれか
によって提供される。
【００８９】この点において、ある種の好ましい具体例
において、ベクターは特異的発現を提供する。かかる特
異的発現は誘導可能な発現であってもよく、またはある
種のタイプの細胞においてのみ起こる発現であってもよ
く、または誘導可能であって、細胞特異的の両方であっ
てもよい。温度および栄養添加物のごとき操作容易な環
境因子によって発現のために誘導されうるベクターが、
特に好ましい誘導可能ベクターである。原核細胞および
真核細胞宿主において使用される構成的および誘導可能
発現ベクターを包含する、本発明のこの態様に適した種
々のベクターは当業者によく知られており、日常的に使
用されている。
において、ベクターは特異的発現を提供する。かかる特
異的発現は誘導可能な発現であってもよく、またはある
種のタイプの細胞においてのみ起こる発現であってもよ
く、または誘導可能であって、細胞特異的の両方であっ
てもよい。温度および栄養添加物のごとき操作容易な環
境因子によって発現のために誘導されうるベクターが、
特に好ましい誘導可能ベクターである。原核細胞および
真核細胞宿主において使用される構成的および誘導可能
発現ベクターを包含する、本発明のこの態様に適した種
々のベクターは当業者によく知られており、日常的に使
用されている。
【００９０】非常に多種にわたる発現ベクターを用い
て、本発明ポリペプチドを発現させることができる。か
かるベクターは、とりわけ、染色体、エピソームおよび
ウイルス由来のベクター、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、バキュロウイルスのごときウイルス、Ｓ
Ｖ４０のごときパポーバウイルス、ワクシニアウイル
ス、アデノウイルス、ニワトリポックスウイルス、偽狂
犬病ウイルスおよびレトロウイルスなどのウイルス由
来、ならびにコスミドおよびファージミドのごときプラ
スミドおよびバクテリオファージの遺伝エレメント由来
のベクターのごときそれらの組み合わせ由来のベクター
を包含し、それらすべてを本発明のこの態様による発現
に使用してもよい。この点において、一般に、宿主中で
ポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチドを維
持、増殖または発現するのに適したベクターを発現に用
いることができる。
て、本発明ポリペプチドを発現させることができる。か
かるベクターは、とりわけ、染色体、エピソームおよび
ウイルス由来のベクター、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、バキュロウイルスのごときウイルス、Ｓ
Ｖ４０のごときパポーバウイルス、ワクシニアウイル
ス、アデノウイルス、ニワトリポックスウイルス、偽狂
犬病ウイルスおよびレトロウイルスなどのウイルス由
来、ならびにコスミドおよびファージミドのごときプラ
スミドおよびバクテリオファージの遺伝エレメント由来
のベクターのごときそれらの組み合わせ由来のベクター
を包含し、それらすべてを本発明のこの態様による発現
に使用してもよい。この点において、一般に、宿主中で
ポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチドを維
持、増殖または発現するのに適したベクターを発現に用
いることができる。
【００９１】例えば、Ｓambrookら、ＭＯＬＥＣＵＬＡ
Ｒ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮ
ＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpring Ｈarbor Ｌaborator
y Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.（１９８
９）に記載されているような、種々のよく知られた慣用
的方法のいずれによっても、適当なＤＮＡ配列をベクタ
ー中に挿入することができる。
Ｒ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮ
ＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpring Ｈarbor Ｌaborator
y Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.（１９８
９）に記載されているような、種々のよく知られた慣用
的方法のいずれによっても、適当なＤＮＡ配列をベクタ
ー中に挿入することができる。
【００９２】発現ベクターにおけるＤＮＡ配列は、例え
ば、ｍＲＮＡ転写を指令するプロモーターを含め、適当
な発現調節配列に作動可能に連結する。かかるプロモー
ターの代表例は、ファージラムダＰＬプロモーター、E.
coli lac、trpおよびtacプロモーター、ＳＶ４０初期お
よび後期プロモーターならびにレトロウイルスＬＴＲｓ
のプロモーターを包含するが、これに限定されるもので
はない。
ば、ｍＲＮＡ転写を指令するプロモーターを含め、適当
な発現調節配列に作動可能に連結する。かかるプロモー
ターの代表例は、ファージラムダＰＬプロモーター、E.
coli lac、trpおよびtacプロモーター、ＳＶ４０初期お
よび後期プロモーターならびにレトロウイルスＬＴＲｓ
のプロモーターを包含するが、これに限定されるもので
はない。
【００９３】一般に、発現構築物は、転写開始部位およ
び停止部位、および、転写領域に翻訳のためのリボソー
ム結合部位を含むであろう。構築物により発現される成
熟転写物の暗号部分は、翻訳されるべきポリペプチドの
初めの部分に翻訳開始ＡＵＧを、さらに終わりの部分に
適当に位置している終止コドンを含むであろう。
び停止部位、および、転写領域に翻訳のためのリボソー
ム結合部位を含むであろう。構築物により発現される成
熟転写物の暗号部分は、翻訳されるべきポリペプチドの
初めの部分に翻訳開始ＡＵＧを、さらに終わりの部分に
適当に位置している終止コドンを含むであろう。
【００９４】加えて、構築物は、発現を調節ならびに発
生させる制御領域を含んでいてもよい。一般に、多くの
通常行われる手順によれば、かかる領域は、特に、転写
因子、リプレッサー結合部位および終結などの転写調節
により作動するであろう。
生させる制御領域を含んでいてもよい。一般に、多くの
通常行われる手順によれば、かかる領域は、特に、転写
因子、リプレッサー結合部位および終結などの転写調節
により作動するであろう。
【００９５】一般に、増殖および発現のためのベクター
は選択可能マーカーおよび増幅領域、例えば、Ｓambroo
kら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢ
ＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpri
ng Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarb
or，Ｎ.Ｙ.（１９８９）に記載されているものを含むで
あろう。
は選択可能マーカーおよび増幅領域、例えば、Ｓambroo
kら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢ
ＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、２nd Ｅd．Ｃold Ｓpri
ng Ｈarbor Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarb
or，Ｎ.Ｙ.（１９８９）に記載されているものを含むで
あろう。
【００９６】適当な宿主の代表例は、ストレプトコッカ
ス、スタフィロコッカス、イー・コリ、ストレプトマイ
セスおよびバシラス・サチリス細胞のごとき細菌細胞；
酵母細胞およびアスペルギルス細胞のごとき真菌細胞；
ドロソフィラＳ２およびスポドプテラＳｆ９細胞のごと
き昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３
Ｔ３、ＢＨＫ２９３およびボウエス（Bowes）メラノー
マ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞を包含す
る。
ス、スタフィロコッカス、イー・コリ、ストレプトマイ
セスおよびバシラス・サチリス細胞のごとき細菌細胞；
酵母細胞およびアスペルギルス細胞のごとき真菌細胞；
ドロソフィラＳ２およびスポドプテラＳｆ９細胞のごと
き昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３
Ｔ３、ＢＨＫ２９３およびボウエス（Bowes）メラノー
マ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞を包含す
る。
【００９７】市販されている下記ベクターを例示する。
それらのうち、細菌での使用に適するベクターは、Qiag
enから市販されている、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０および
ｐＱＥ−９；Stratageneから市販されている、ｐＢＳベ
クター、Phagescriptベクター、Bluescriptベクター、
ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６
Ａ；ならびに、Pharmaciaから市販されている、ｐｔｒ
ｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤ
Ｒ５４０およびｐＲＩＴ５、ならびにｐＢＲ３２２（Ａ
ＴＣＣ３７０１７）である。好ましい真核細胞ベクター
には、Stratageneから市販のｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２Ｃ
ＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ；ならびに、
Pharmaciaから市販のｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ
およびｐＳＶＬがある。これらのベクターは、多くの市
販ベクター、および、本発明のこの態様により使用する
ために当業者によく知られたベクターを例示するために
のみ列挙する。例えば、宿主中における本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドの導入、維持、増殖また
は発現に適する他のプラスミドまたはベクターを本発明
のこの態様に使用してもよいことが理解されよう。
それらのうち、細菌での使用に適するベクターは、Qiag
enから市販されている、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０および
ｐＱＥ−９；Stratageneから市販されている、ｐＢＳベ
クター、Phagescriptベクター、Bluescriptベクター、
ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６
Ａ；ならびに、Pharmaciaから市販されている、ｐｔｒ
ｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤ
Ｒ５４０およびｐＲＩＴ５、ならびにｐＢＲ３２２（Ａ
ＴＣＣ３７０１７）である。好ましい真核細胞ベクター
には、Stratageneから市販のｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２Ｃ
ＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ；ならびに、
Pharmaciaから市販のｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ
およびｐＳＶＬがある。これらのベクターは、多くの市
販ベクター、および、本発明のこの態様により使用する
ために当業者によく知られたベクターを例示するために
のみ列挙する。例えば、宿主中における本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドの導入、維持、増殖また
は発現に適する他のプラスミドまたはベクターを本発明
のこの態様に使用してもよいことが理解されよう。
【００９８】制限部位、または、候補プロモーターフラ
グメント；すなわち、プロモーターを含み得るフラグメ
ントを導入するための部位の下流の、クロラムフェニコ
ールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）転写ユニッ
トのごとき、プロモーター領域を欠くレポーター転写ユ
ニットを含むベクターを用いて、プロモーター領域をい
ずれか所望の遺伝子から選択できる。よく知られている
ごとく、プロモーター含有フラグメントをベクター中の
ｃａｔ遺伝子上流の制限部位へ導入することにより、Ｃ
ＡＴ活性を生じさせ、それを標準的ＣＡＴアッセイによ
り検出することができる。この目的に適するベクターは
よく知られており、例えば、ｐＫＫ２３２−８およびｐ
ＣＭ７として容易に入手可能である。本発明のポリヌク
レオチドの発現用のプロモーターはよく知られていて容
易に入手できるプロモーターだけでなく、レポーター遺
伝子を用いて前記した方法により容易に得ることのでき
るプロモーターも包含する。
グメント；すなわち、プロモーターを含み得るフラグメ
ントを導入するための部位の下流の、クロラムフェニコ
ールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）転写ユニッ
トのごとき、プロモーター領域を欠くレポーター転写ユ
ニットを含むベクターを用いて、プロモーター領域をい
ずれか所望の遺伝子から選択できる。よく知られている
ごとく、プロモーター含有フラグメントをベクター中の
ｃａｔ遺伝子上流の制限部位へ導入することにより、Ｃ
ＡＴ活性を生じさせ、それを標準的ＣＡＴアッセイによ
り検出することができる。この目的に適するベクターは
よく知られており、例えば、ｐＫＫ２３２−８およびｐ
ＣＭ７として容易に入手可能である。本発明のポリヌク
レオチドの発現用のプロモーターはよく知られていて容
易に入手できるプロモーターだけでなく、レポーター遺
伝子を用いて前記した方法により容易に得ることのでき
るプロモーターも包含する。
【００９９】イー・コリｌacＩおよびｌacＺプロモータ
ーおよびＴ３およびＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモー
ター、ラムダＰＲ、ＰＬプロモーター、ならびにｔｒｐ
プロモーターは、本発明によるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの発現に適した既知原核細胞プロモーター
である。
ーおよびＴ３およびＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモー
ター、ラムダＰＲ、ＰＬプロモーター、ならびにｔｒｐ
プロモーターは、本発明によるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの発現に適した既知原核細胞プロモーター
である。
【０１００】この点において適する公知真核細胞プロモ
ーターには、ＣＭＶ即時初期プロモーター、ＨＳＶチミ
ジンキナーゼプロモーター、初期および後期ＳＶ４０プ
ロモーター、例えばＲｏｕｓサルコーマウイルス（ＲＳ
Ｖ）のごときレトロウイルスＬＴＲｓのプロモーター、
ならびにマウス・メタロチオネイン−Ｉプロモーターの
ごときメタロチオネインプロモーターがある。
ーターには、ＣＭＶ即時初期プロモーター、ＨＳＶチミ
ジンキナーゼプロモーター、初期および後期ＳＶ４０プ
ロモーター、例えばＲｏｕｓサルコーマウイルス（ＲＳ
Ｖ）のごときレトロウイルスＬＴＲｓのプロモーター、
ならびにマウス・メタロチオネイン−Ｉプロモーターの
ごときメタロチオネインプロモーターがある。
【０１０１】組換え発現ベクターは、例えば、複製開始
点、好ましくは下流構造配列の転写を指令するように高
度に発現した遺伝子由来のプロモーター、およびベクタ
ーへの暴露後に細胞含有のベクターの単離を可能とする
選択可能なマーカーを包含する。
点、好ましくは下流構造配列の転写を指令するように高
度に発現した遺伝子由来のプロモーター、およびベクタ
ーへの暴露後に細胞含有のベクターの単離を可能とする
選択可能なマーカーを包含する。
【０１０２】一般に、本発明のポリペプチドの異種構造
配列をコードしている本発明のポリヌクレオチドを、発
現用プロモーターに作動可能に連結されるように標準的
方法を用いてベクター中に挿入する。転写開始部位がリ
ボソーム結合部位の５’付近に位置するようにポリヌク
レオチドを配置する。リボソーム結合部位は、発現され
るポリペプチドの翻訳を開始するＡＵＧの５’にある。
一般に、通常、ＡＵＧである開始コドンから始まり、お
よびリボソーム結合部位と開始コドンの間に位置するオ
ープン・リーディング・フレームは存在しないであろ
う。また、一般に、ポリペプチド末端に翻訳終止コドン
が存在し、真核宿主にて用いるための構築物中にポリア
デニレーションシグナルがあるであろう。転写される領
域の３’末端に適当に散在する転写終止シグナルもまた
ポリヌクレオチド構築物に含まれているかもしれない。
配列をコードしている本発明のポリヌクレオチドを、発
現用プロモーターに作動可能に連結されるように標準的
方法を用いてベクター中に挿入する。転写開始部位がリ
ボソーム結合部位の５’付近に位置するようにポリヌク
レオチドを配置する。リボソーム結合部位は、発現され
るポリペプチドの翻訳を開始するＡＵＧの５’にある。
一般に、通常、ＡＵＧである開始コドンから始まり、お
よびリボソーム結合部位と開始コドンの間に位置するオ
ープン・リーディング・フレームは存在しないであろ
う。また、一般に、ポリペプチド末端に翻訳終止コドン
が存在し、真核宿主にて用いるための構築物中にポリア
デニレーションシグナルがあるであろう。転写される領
域の３’末端に適当に散在する転写終止シグナルもまた
ポリヌクレオチド構築物に含まれているかもしれない。
【０１０３】翻訳された蛋白質の小胞体ルーメン中、ペ
リプラスム空間中または細胞外環境中への分泌のため
に、適当な分泌シグナルを発現されるポリペプチド中に
取り込ませることができる。これらのシグナルは、ポリ
ペプチドに対して内在性のものであってもよく、あるい
は異種シグナルであってもよい。
リプラスム空間中または細胞外環境中への分泌のため
に、適当な分泌シグナルを発現されるポリペプチド中に
取り込ませることができる。これらのシグナルは、ポリ
ペプチドに対して内在性のものであってもよく、あるい
は異種シグナルであってもよい。
【０１０４】ポリペプチドを、融合蛋白質のごとき修飾
形態で発現させてもよく、それは分泌シグナルのみなら
ずさらなる異種機能領域を含んでいてもよい。かくし
て、例えば、付加的アミノ酸の領域、特に荷電アミノ酸
の領域をポリペプチドのＮ末端に付加して、宿主細胞に
おいて、精製中またはさらなる取り扱いおよび保存中の
安定性および維持を改善してもよい。また、精製を容易
にする領域をポリペプチド付加してもよい。最終的なポ
リペプチドの調製の前にかかる領域を除去してもよい。
特に、分泌または外分泌を引き起こすための、安定性を
改善するための、そして精製を容易にするためのペプチ
ド部分のポリペプチドへの付加は当業者によく知られて
いる慣用的方法である。好ましい融合蛋白質は、ポリぺ
プチドを安定化または精製するのに有用な免疫グロブリ
ン由来の異種領域を有してなる。例えば、ＥＰ−Ａ−０
４６４５３３（カナダ国２０４５８６９）は免疫グロブ
リン分子の定常領域と、別の蛋白質またはその部分を有
してなる融合蛋白質を開示する。薬物の発見において
は、例えば、アンタゴニストを同定する高処理量のスク
リーニング検定の目的のため、蛋白質が抗体Ｆｃ蛋白質
と融合される。Ｄ.Ｂennettら、Ｊournal of Ｂiologic
al Ｃhemistry，Ｖol．270，Ｎo.16，9459−9471（199
5）を参照のこと。
形態で発現させてもよく、それは分泌シグナルのみなら
ずさらなる異種機能領域を含んでいてもよい。かくし
て、例えば、付加的アミノ酸の領域、特に荷電アミノ酸
の領域をポリペプチドのＮ末端に付加して、宿主細胞に
おいて、精製中またはさらなる取り扱いおよび保存中の
安定性および維持を改善してもよい。また、精製を容易
にする領域をポリペプチド付加してもよい。最終的なポ
リペプチドの調製の前にかかる領域を除去してもよい。
特に、分泌または外分泌を引き起こすための、安定性を
改善するための、そして精製を容易にするためのペプチ
ド部分のポリペプチドへの付加は当業者によく知られて
いる慣用的方法である。好ましい融合蛋白質は、ポリぺ
プチドを安定化または精製するのに有用な免疫グロブリ
ン由来の異種領域を有してなる。例えば、ＥＰ−Ａ−０
４６４５３３（カナダ国２０４５８６９）は免疫グロブ
リン分子の定常領域と、別の蛋白質またはその部分を有
してなる融合蛋白質を開示する。薬物の発見において
は、例えば、アンタゴニストを同定する高処理量のスク
リーニング検定の目的のため、蛋白質が抗体Ｆｃ蛋白質
と融合される。Ｄ.Ｂennettら、Ｊournal of Ｂiologic
al Ｃhemistry，Ｖol．270，Ｎo.16，9459−9471（199
5）を参照のこと。
【０１０５】次いで、典型的には、細胞を遠心分離によ
り集め、物理的または化学的手段により破壊し、得られ
た粗抽出物をさらなる精製に供する。凍結−融解繰り返
し、ソニケーション、機械的破壊を包含する慣用的方
法、または細胞溶解剤の使用により、蛋白質発現に使用
する微生物細胞を破壊することができ、かかる方法は当
業者によく知られている。
り集め、物理的または化学的手段により破壊し、得られ
た粗抽出物をさらなる精製に供する。凍結−融解繰り返
し、ソニケーション、機械的破壊を包含する慣用的方
法、または細胞溶解剤の使用により、蛋白質発現に使用
する微生物細胞を破壊することができ、かかる方法は当
業者によく知られている。
【０１０６】哺乳動物発現ベクターは、複製開始点、適
当なプロモーターおよびエンハンサー、および必要なリ
ボソーム結合部位、ポリアデニル化領域、スプライスド
ナーおよびアクセプター部位、転写終結配列および発現
に必要とされる５’フランキング非転写配列を有してな
るであろう。
当なプロモーターおよびエンハンサー、および必要なリ
ボソーム結合部位、ポリアデニル化領域、スプライスド
ナーおよびアクセプター部位、転写終結配列および発現
に必要とされる５’フランキング非転写配列を有してな
るであろう。
【０１０７】硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、
酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィ
ー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互
作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーお
よびレクチンクロマトグラフィーを含め、よく知られた
方法により、ＭｕｒＡ−１ポリペプチドを組み換え細胞
培養物から回収し、精製することができる。最も好まし
くは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精
製に用いる。単離および／または精製中にポリペプチド
が変性している場合には、蛋白質を再生するためによく
知られた方法を用いて活性コンフォメーションを再生す
ることができる。
酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィ
ー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互
作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーお
よびレクチンクロマトグラフィーを含め、よく知られた
方法により、ＭｕｒＡ−１ポリペプチドを組み換え細胞
培養物から回収し、精製することができる。最も好まし
くは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精
製に用いる。単離および／または精製中にポリペプチド
が変性している場合には、蛋白質を再生するためによく
知られた方法を用いて活性コンフォメーションを再生す
ることができる。
【０１０８】ポリヌクレオチドアッセイ 本発明はまた、例えば診断試薬としての相補的ポリヌク
レオチドの検出のためのＭｕｒＡ−１ポリヌクレオチド
の使用に関する。真核生物、特に哺乳動物、さらに言え
ばヒトにおけるＭｕｒＡ−１の検出は、病気を診断する
ための診断方法を提供する。ＭｕｒＡ−１遺伝子を有し
てなる生物に感染した真核生物（本明細書にて、「個
体」とも称する）、特に哺乳動物、さらに言えば、ヒト
は、種々の方法により、ＤＮＡレベルにおいて検出する
ことができる。診断のための核酸を、骨、血液、筋肉、
軟骨および皮膚などの感染個体の細胞および組織から得
てもよい。ゲノムＤＮＡを検出用に直接使用してもよ
く、または分析前にＰＣＲを用いることにより酵素的に
増幅してもよい（Ｓaikiら、Ｎature，324：163−166
（1986））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同じように使用し
てもよい。一例として、ＭｕｒＡ−１をコードする核酸
に相補的なＰＣＲプライマーを用いて、ＭｕｒＡ−１の
存在および／または発現を同定および分析することがで
きる。ＰＣＲを用いて、真核生物、特に哺乳動物、さら
に言えばヒトの中に存在する原核細胞の菌株の特性化
を、原核細胞遺伝子の遺伝子型を分析することにより行
ってもよい。例えば、対照標準配列の遺伝子型との比較
における増幅産物の大きさの変化により、欠失および挿
入を検出することができる。増幅したＤＮＡを放射性標
識されたＭｕｒＡ−１とハイブリダイゼーションさせる
ことにより、あるいは別法として放射性標識されたＭｕ
ｒＡ−１アンチセンスＤＮＡ配列とハイブリダイゼーシ
ョンさせることにより、点突然変異を同定することがで
きる。好ましくは、ＲＮase Ａ消化または融点の相違に
より、マッチした配列をミスマッチの２本鎖と区別する
ことができる。
レオチドの検出のためのＭｕｒＡ−１ポリヌクレオチド
の使用に関する。真核生物、特に哺乳動物、さらに言え
ばヒトにおけるＭｕｒＡ−１の検出は、病気を診断する
ための診断方法を提供する。ＭｕｒＡ−１遺伝子を有し
てなる生物に感染した真核生物（本明細書にて、「個
体」とも称する）、特に哺乳動物、さらに言えば、ヒト
は、種々の方法により、ＤＮＡレベルにおいて検出する
ことができる。診断のための核酸を、骨、血液、筋肉、
軟骨および皮膚などの感染個体の細胞および組織から得
てもよい。ゲノムＤＮＡを検出用に直接使用してもよ
く、または分析前にＰＣＲを用いることにより酵素的に
増幅してもよい（Ｓaikiら、Ｎature，324：163−166
（1986））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同じように使用し
てもよい。一例として、ＭｕｒＡ−１をコードする核酸
に相補的なＰＣＲプライマーを用いて、ＭｕｒＡ−１の
存在および／または発現を同定および分析することがで
きる。ＰＣＲを用いて、真核生物、特に哺乳動物、さら
に言えばヒトの中に存在する原核細胞の菌株の特性化
を、原核細胞遺伝子の遺伝子型を分析することにより行
ってもよい。例えば、対照標準配列の遺伝子型との比較
における増幅産物の大きさの変化により、欠失および挿
入を検出することができる。増幅したＤＮＡを放射性標
識されたＭｕｒＡ−１とハイブリダイゼーションさせる
ことにより、あるいは別法として放射性標識されたＭｕ
ｒＡ−１アンチセンスＤＮＡ配列とハイブリダイゼーシ
ョンさせることにより、点突然変異を同定することがで
きる。好ましくは、ＲＮase Ａ消化または融点の相違に
より、マッチした配列をミスマッチの２本鎖と区別する
ことができる。
【０１０９】直接ＤＮＡ配列決定により、対照標準の遺
伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の相違も明らか
にされる。加えて、クローン化されたＤＮＡセグメント
をプローブとして用いて特異的ＤＮＡセグメントを検出
してもよい。ＰＣＲまたは他の増幅方法を適当に用いる
ことにより、かかる方法の感度をおおいに向上させるこ
とができる。例えば、配列決定用プライマーを、２本鎖
ＰＣＲ産物または修飾ＰＣＲにより得られた１本鎖鋳型
分子と共に使用する。放射性標識されたヌクレオチドを
用いる慣用的操作により、または蛍光タグを用いる自動
配列決定法により配列決定を行う。
伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の相違も明らか
にされる。加えて、クローン化されたＤＮＡセグメント
をプローブとして用いて特異的ＤＮＡセグメントを検出
してもよい。ＰＣＲまたは他の増幅方法を適当に用いる
ことにより、かかる方法の感度をおおいに向上させるこ
とができる。例えば、配列決定用プライマーを、２本鎖
ＰＣＲ産物または修飾ＰＣＲにより得られた１本鎖鋳型
分子と共に使用する。放射性標識されたヌクレオチドを
用いる慣用的操作により、または蛍光タグを用いる自動
配列決定法により配列決定を行う。
【０１１０】変性剤と共にまたは無しでゲル中のＤＮＡ
フラグメントの電気泳動度の変化を検出することによ
り、ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝的特性化を行うこと
ができる。高分解能ゲル電気泳動により、小規模な配列
の欠失および挿入を可視化することができる。その特定
の融点または部分的に融解する温度によって、異なるＤ
ＮＡフラグメントの移動がゲル中の異なる位置で遅延
し、変性ホルムアミドグラジエントゲル上で異なる配列
のＤＮＡフラグメントを識別することができる（例え
ば、Ｍyersら、Ｓcience，230：1242（1985）を参照の
こと）。
フラグメントの電気泳動度の変化を検出することによ
り、ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝的特性化を行うこと
ができる。高分解能ゲル電気泳動により、小規模な配列
の欠失および挿入を可視化することができる。その特定
の融点または部分的に融解する温度によって、異なるＤ
ＮＡフラグメントの移動がゲル中の異なる位置で遅延
し、変性ホルムアミドグラジエントゲル上で異なる配列
のＤＮＡフラグメントを識別することができる（例え
ば、Ｍyersら、Ｓcience，230：1242（1985）を参照の
こと）。
【０１１１】ＲＮaseおよびＳ１保護のごときヌクレア
ーゼ保護アッセイまたは化学的開裂法により、特定の位
置における配列の変化も明らかとなる（例えば、Ｃotto
nら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.,USA，85：4397−4401
（1985））。
ーゼ保護アッセイまたは化学的開裂法により、特定の位
置における配列の変化も明らかとなる（例えば、Ｃotto
nら、Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.,USA，85：4397−4401
（1985））。
【０１１２】かくして、ハイブリダイゼーション、ＲＮ
ase保護、化学的開裂、直接ＤＮＡ配列決定または制限
酵素の使用，例えば、制限フラグメント長多型性（ＲＦ
ＬＰ）およびゲノムＤＮＡのサザンブロッティングなど
の方法により、特定のＤＮＡ配列の検出を行うことがで
きる。より慣用的なゲル電気泳動およびＤＮＡ配列決定
に加えて、突然変異は、in situ分析によっても検出す
ることができる。
ase保護、化学的開裂、直接ＤＮＡ配列決定または制限
酵素の使用，例えば、制限フラグメント長多型性（ＲＦ
ＬＰ）およびゲノムＤＮＡのサザンブロッティングなど
の方法により、特定のＤＮＡ配列の検出を行うことがで
きる。より慣用的なゲル電気泳動およびＤＮＡ配列決定
に加えて、突然変異は、in situ分析によっても検出す
ることができる。
【０１１３】本発明の遺伝子に突然変異または多形性を
有する細胞はまた、種々の方法によって、例えばセトタ
イピングすることにより、ＤＮＡレベルで検出すること
ができる。例えばＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出
することもできる。ＲＴ−ＰＣＲを自動検出系、例えば
ＧeneＳcanと組み合わせて用いるのが特に好ましい。一
例として、ＭｕｒＡ−１をコードする核酸に相補的なＰ
ＣＲプライマーを公知方法により製造し、突然変異を同
定し、分析するのに用いることができる。かかるプライ
マーは個体由来のサンプルから単離したＭｕｒＡ−１Ｄ
ＮＡを増幅するのに用いることができる。本発明はま
た、５'および／または３'末端から１、２、３または4
個のヌクレオチドを除去した表１のプライマーを提供す
る。そのプライマーを用いて個体から単離した遺伝子を
増幅して、次いで、遺伝子を種々の方法に供してＤＮＡ
配列を調べることができる。このようにして、ＤＮＡ配
列における変異を診断することができる。
有する細胞はまた、種々の方法によって、例えばセトタ
イピングすることにより、ＤＮＡレベルで検出すること
ができる。例えばＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出
することもできる。ＲＴ−ＰＣＲを自動検出系、例えば
ＧeneＳcanと組み合わせて用いるのが特に好ましい。一
例として、ＭｕｒＡ−１をコードする核酸に相補的なＰ
ＣＲプライマーを公知方法により製造し、突然変異を同
定し、分析するのに用いることができる。かかるプライ
マーは個体由来のサンプルから単離したＭｕｒＡ−１Ｄ
ＮＡを増幅するのに用いることができる。本発明はま
た、５'および／または３'末端から１、２、３または4
個のヌクレオチドを除去した表１のプライマーを提供す
る。そのプライマーを用いて個体から単離した遺伝子を
増幅して、次いで、遺伝子を種々の方法に供してＤＮＡ
配列を調べることができる。このようにして、ＤＮＡ配
列における変異を診断することができる。
【０１１４】本発明は、疾患、好ましくは細菌感染、さ
らに好ましくはストレプトコッカス・ニューモニエによ
る感染、最も好ましくは、中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血
症、髄膜炎、静脈洞炎、胸腔蓄膿および心内膜炎、最も
詳しくは、例えば脳脊髄流体の感染などの髄膜炎の診断
方法であって、図１ないし３の配列（配列番号：１）を
有するポリヌクレオチドの発現レベルの増加を、個体由
来のサンプルより決定することからなる診断方法を提供
する。ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドの発現の増加は、例え
ば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮase保護、ノーザンブ
ロッティングおよび他のハイブリダイゼーション法等
の、ポリヌクレオチドの定量にて当該分野にて周知の方
法のうちいずれか1つの方法を用いて測定することがで
きる。
らに好ましくはストレプトコッカス・ニューモニエによ
る感染、最も好ましくは、中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血
症、髄膜炎、静脈洞炎、胸腔蓄膿および心内膜炎、最も
詳しくは、例えば脳脊髄流体の感染などの髄膜炎の診断
方法であって、図１ないし３の配列（配列番号：１）を
有するポリヌクレオチドの発現レベルの増加を、個体由
来のサンプルより決定することからなる診断方法を提供
する。ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドの発現の増加は、例え
ば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮase保護、ノーザンブ
ロッティングおよび他のハイブリダイゼーション法等
の、ポリヌクレオチドの定量にて当該分野にて周知の方
法のうちいずれか1つの方法を用いて測定することがで
きる。
【０１１５】ポリペプチドアッセイ 本発明はまた、正常および異常なレベルの測定を含め、
細胞および組織中のＭｕｒＡ−１蛋白質レベルの検出の
ための定量および診断アッセイのごとき診断アッセイに
関する。かくして、例えば、正常な対照組織サンプルと
比較してＭｕｒＡ−１蛋白質の過剰発現を検出するため
の本発明に係る診断アッセイを用いて、例えば感染の存
在を検出してもよい。宿主由来のサンプル中のＭｕｒＡ
−１蛋白質のレベルを決定するのに用いることのできる
アッセイ法は当業者によく知られている。かかるアッセ
イ法は、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウ
ェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含
する。これらのうち、ＥＬＩＳＡが好ましいことが多
い。ＥＬＩＳＡアッセイは、最初にＭｕｒＡ−１に対し
て特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製
することを含んでなる。加えて、一般に、モノクローナ
ル抗体に結合するレポーター抗体を調製する。レポータ
ー抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または酵素試薬のごと
き検出可能試薬、この例ではセイヨウワサビ・ペルオキ
シダーゼ酵素に結合している。
細胞および組織中のＭｕｒＡ−１蛋白質レベルの検出の
ための定量および診断アッセイのごとき診断アッセイに
関する。かくして、例えば、正常な対照組織サンプルと
比較してＭｕｒＡ−１蛋白質の過剰発現を検出するため
の本発明に係る診断アッセイを用いて、例えば感染の存
在を検出してもよい。宿主由来のサンプル中のＭｕｒＡ
−１蛋白質のレベルを決定するのに用いることのできる
アッセイ法は当業者によく知られている。かかるアッセ
イ法は、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウ
ェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含
する。これらのうち、ＥＬＩＳＡが好ましいことが多
い。ＥＬＩＳＡアッセイは、最初にＭｕｒＡ−１に対し
て特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製
することを含んでなる。加えて、一般に、モノクローナ
ル抗体に結合するレポーター抗体を調製する。レポータ
ー抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または酵素試薬のごと
き検出可能試薬、この例ではセイヨウワサビ・ペルオキ
シダーゼ酵素に結合している。
【０１１６】抗体 ポリペプチド、それのフラグメントまたは他の誘導体、
またはそのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免
疫原として用い、それらに対する抗体を製造することが
できる。本発明は、例えばモノクローナルおよびポリク
ローナル抗体、キメラ、１本鎖およびヒト化抗体ならび
にＦａｂフラグメント、またはＦａｂ発現ライブラリー
の生成物を包含する。
またはそのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免
疫原として用い、それらに対する抗体を製造することが
できる。本発明は、例えばモノクローナルおよびポリク
ローナル抗体、キメラ、１本鎖およびヒト化抗体ならび
にＦａｂフラグメント、またはＦａｂ発現ライブラリー
の生成物を包含する。
【０１１７】ポリペプチドを動物に直接注射することに
より、あるいはポリペプチドを動物、好ましくはヒト以
外の動物に投与することにより、本発明の配列に対応し
たポリペプチドに拮抗して産生される抗体を得ることが
できる。こうして得られた抗体はポリペプチド自体と結
合するであろう。このようにして、ポリペプチドのフラ
グメントのみをコードする配列であっても、それを用い
て無傷のポリペプチド全体に結合する抗体を得ることが
できる。次いで、かかる抗体を用いて、ポリペプチドを
発現する組織からそのポリペプチドを単離することがで
きる。
より、あるいはポリペプチドを動物、好ましくはヒト以
外の動物に投与することにより、本発明の配列に対応し
たポリペプチドに拮抗して産生される抗体を得ることが
できる。こうして得られた抗体はポリペプチド自体と結
合するであろう。このようにして、ポリペプチドのフラ
グメントのみをコードする配列であっても、それを用い
て無傷のポリペプチド全体に結合する抗体を得ることが
できる。次いで、かかる抗体を用いて、ポリペプチドを
発現する組織からそのポリペプチドを単離することがで
きる。
【０１１８】モノクローナル抗体の調製のために、連続
的セルライン培養により製造される抗体を提供するいず
れの公知方法も用いることができる。例として、Ｋohle
r,Ｇ.およびＭilstein,Ｃ. Ｎature 256：495−497（19
75））；Ｋozborら、Ｉmmunology Ｔoday 4：72（198
3））；Ｃoleら、pg.77-96 in MONOCLONAL ANTIBODIES
AND CANCER THERAPY，Ａlan Ｒ.Ｌiss,Ｉnc.（1985））
が挙げられる。
的セルライン培養により製造される抗体を提供するいず
れの公知方法も用いることができる。例として、Ｋohle
r,Ｇ.およびＭilstein,Ｃ. Ｎature 256：495−497（19
75））；Ｋozborら、Ｉmmunology Ｔoday 4：72（198
3））；Ｃoleら、pg.77-96 in MONOCLONAL ANTIBODIES
AND CANCER THERAPY，Ａlan Ｒ.Ｌiss,Ｉnc.（1985））
が挙げられる。
【０１１９】１本鎖抗体の製造に関して記載された方法
（米国特許第４,９４６,７７８号）を適用して、本発明
の免疫原性ポリペプチド産物に対する１本鎖抗体を製造
することができる。また、トランスジェニックマウス、
または他の哺乳動物のごとき他の生物を用いて、本発明
の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化抗体を発現
させてもよい。
（米国特許第４,９４６,７７８号）を適用して、本発明
の免疫原性ポリペプチド産物に対する１本鎖抗体を製造
することができる。また、トランスジェニックマウス、
または他の哺乳動物のごとき他の生物を用いて、本発明
の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化抗体を発現
させてもよい。
【０１２０】別法として、ファージディスプレイ技法を
利用して、抗ＭｕｒＡ−１を有することについてスクリ
ーニングしたヒト由来リンパ球のＰＣＲ増幅したｖ−遺
伝子のレパートリーからの、または元来のライブラリー
からのポリぺプチドに対して結合活性を有する抗体遺伝
子を選択することができる（ＭcＣafferty，Ｊ.ら、Ｎa
ture 348，552−554；Ｍarks，Ｊ.ら、（1992）Ｂiotec
hnology 10，779-783）。これらの抗体の親和性はチェ
インシャフィリング（chain shuffling）（Ｃlackson，
Ｔ.ら、（1991）Ｎature 352，624-628）。
利用して、抗ＭｕｒＡ−１を有することについてスクリ
ーニングしたヒト由来リンパ球のＰＣＲ増幅したｖ−遺
伝子のレパートリーからの、または元来のライブラリー
からのポリぺプチドに対して結合活性を有する抗体遺伝
子を選択することができる（ＭcＣafferty，Ｊ.ら、Ｎa
ture 348，552−554；Ｍarks，Ｊ.ら、（1992）Ｂiotec
hnology 10，779-783）。これらの抗体の親和性はチェ
インシャフィリング（chain shuffling）（Ｃlackson，
Ｔ.ら、（1991）Ｎature 352，624-628）。
【０１２１】２つの抗原結合ドメインが存在する場合、
各ドメインは「二特異的」抗体と称する異なるエピトー
プに拮抗するように指令される。前記した抗体をアフィ
ニティクロマトグラフィーにより単離および／または精
製するために固体支持体に結合させることにより、該抗
体を用いて、本発明のポリぺプチドを発現するクローン
を単離または同定するために、または該ポリぺプチドを
精製してもよい。
各ドメインは「二特異的」抗体と称する異なるエピトー
プに拮抗するように指令される。前記した抗体をアフィ
ニティクロマトグラフィーにより単離および／または精
製するために固体支持体に結合させることにより、該抗
体を用いて、本発明のポリぺプチドを発現するクローン
を単離または同定するために、または該ポリぺプチドを
精製してもよい。
【０１２２】かくして、とりわけ、ＭｕｒＡ−１に対す
る抗体を用いて、感染、特に細菌感染、詳細には、中耳
炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、胸腔蓄
膿および心内膜炎、最も詳細には、例えば脳脊髄流体の
感染を予防および／または治療することができる。
る抗体を用いて、感染、特に細菌感染、詳細には、中耳
炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、胸腔蓄
膿および心内膜炎、最も詳細には、例えば脳脊髄流体の
感染を予防および／または治療することができる。
【０１２３】ポリぺプチド誘導体は、抗原的、エピトー
プ的または免疫学的に等価な誘導体を包含し、本発明の
特定の態様を形成する。本明細書で用いる「抗原的に等
価菜誘導体」なる語は、本発明に従って蛋白質またはポ
リぺプチドにまで高められた場合、病原および哺乳動物
宿主の間で即時的物理的相互作用で干渉するある種の抗
体により特異的に認識されるポリぺプチドまたはその等
価物を包含する。本明細書にて用いる場合、「免疫的に
等価な誘導体」なる語は、脊椎動物にて抗体を亢進させ
る適当な処方にて用いる場合、抗体が病原および哺乳動
物宿主の間に即時的物理的相互作用で干渉するように作
用する、ぺプチドまたはその等価物を包含する。
プ的または免疫学的に等価な誘導体を包含し、本発明の
特定の態様を形成する。本明細書で用いる「抗原的に等
価菜誘導体」なる語は、本発明に従って蛋白質またはポ
リぺプチドにまで高められた場合、病原および哺乳動物
宿主の間で即時的物理的相互作用で干渉するある種の抗
体により特異的に認識されるポリぺプチドまたはその等
価物を包含する。本明細書にて用いる場合、「免疫的に
等価な誘導体」なる語は、脊椎動物にて抗体を亢進させ
る適当な処方にて用いる場合、抗体が病原および哺乳動
物宿主の間に即時的物理的相互作用で干渉するように作
用する、ぺプチドまたはその等価物を包含する。
【０１２４】ポリぺプチド、例えば抗原的または免疫学
的に等価な誘導体またはその融合蛋白質を抗原として用
い、マウスまたはラットまたはニワトリなどの他の動物
を免疫化する。融合蛋白質はポリぺプチドに安定性を付
与できる。抗原を、例えば、抱合させることで、免疫原
性キャリアー蛋白質、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）またはキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ke
yhole limpet haemocyanin）（ＫＬＨ）に結合させるこ
とができる。また、蛋白質もしくはポリぺプチド、また
はそれらに抗原的または免疫学的に等価なポリぺプチド
の多重コピーを含む多重抗原ぺプチドは、免疫原性を改
良するための十分な抗原性を有しているので、キャリア
ーを使用しなくてすむ。
的に等価な誘導体またはその融合蛋白質を抗原として用
い、マウスまたはラットまたはニワトリなどの他の動物
を免疫化する。融合蛋白質はポリぺプチドに安定性を付
与できる。抗原を、例えば、抱合させることで、免疫原
性キャリアー蛋白質、例えばウシ血清アルブミン（ＢＳ
Ａ）またはキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ke
yhole limpet haemocyanin）（ＫＬＨ）に結合させるこ
とができる。また、蛋白質もしくはポリぺプチド、また
はそれらに抗原的または免疫学的に等価なポリぺプチド
の多重コピーを含む多重抗原ぺプチドは、免疫原性を改
良するための十分な抗原性を有しているので、キャリア
ーを使用しなくてすむ。
【０１２５】好ましくは、抗体またはその変種を個体に
おける免疫原性を減じるために修飾する。例えば、個体
がヒトである場合、抗体は、最も好ましくは、「ヒト
化」されており；この場合、ハイブリドーマ由来の抗体
の相補的決定領域が、例えば、Ｊones，Ｐ.ら、（198
6），Ｎature 321，522−525またはTempestら、（199
1）Ｂiotechnology 9，266−273に記載されているよう
に、ヒトモノクローナル抗体に移植されている。
おける免疫原性を減じるために修飾する。例えば、個体
がヒトである場合、抗体は、最も好ましくは、「ヒト
化」されており；この場合、ハイブリドーマ由来の抗体
の相補的決定領域が、例えば、Ｊones，Ｐ.ら、（198
6），Ｎature 321，522−525またはTempestら、（199
1）Ｂiotechnology 9，266−273に記載されているよう
に、ヒトモノクローナル抗体に移植されている。
【０１２６】本発明のポリヌクレオチドを遺伝学的免疫
化において使用する場合、例えば直接的なプラスミドＤ
ＮＡの筋肉への注射（Ｗolffら、Ｈum.Ｍol.Ｇenet.
１：363；Ｍanthorpeら、Ｈum.Ｇene Ｔher.1963：４，
419）、特異的蛋白質キャリアーとのＤＮＡ複合体の送
達（Ｗuら、Ｊ.Ｂiol.Ｃhem．1989：264，16985）、リ
ン酸カルシウムとのＤＮＡ共沈（Ｂenvenisty＆Ｒeshe
f，ＰＮＡＳ，1986：83，9551）、種々の形態のリポソ
ーム中へのＤＮＡ封入（Ｋanedaら、Ｓcience1989：24
3，375）、粒子爆撃（Ｔangら、Ｎature 1992，356：15
2、Ｅisenbraunら、ＤＮＡ Ｃell Ｂiol 1993，12：79
1）およびクローン化レトロウイルスベクターを用いる
イン・ビボ感染（Ｓeegerら、ＰＮＡＳ 1984：81，584
9）等の適当な送達方法を用いるのが好ましい。
化において使用する場合、例えば直接的なプラスミドＤ
ＮＡの筋肉への注射（Ｗolffら、Ｈum.Ｍol.Ｇenet.
１：363；Ｍanthorpeら、Ｈum.Ｇene Ｔher.1963：４，
419）、特異的蛋白質キャリアーとのＤＮＡ複合体の送
達（Ｗuら、Ｊ.Ｂiol.Ｃhem．1989：264，16985）、リ
ン酸カルシウムとのＤＮＡ共沈（Ｂenvenisty＆Ｒeshe
f，ＰＮＡＳ，1986：83，9551）、種々の形態のリポソ
ーム中へのＤＮＡ封入（Ｋanedaら、Ｓcience1989：24
3，375）、粒子爆撃（Ｔangら、Ｎature 1992，356：15
2、Ｅisenbraunら、ＤＮＡ Ｃell Ｂiol 1993，12：79
1）およびクローン化レトロウイルスベクターを用いる
イン・ビボ感染（Ｓeegerら、ＰＮＡＳ 1984：81，584
9）等の適当な送達方法を用いるのが好ましい。
【０１２７】ＭｕｒＡ−１結合分子およびアッセイ 本発明はまた、ＭｕｒＡ−１に結合する、結合分子のご
とき、分子の同定方法を提供する。当業者に知られた多
くの方法、例えば、リガンドパンニング（panning）お
よびＦＡＣＳソーティングにより、ＭｕｒＡ−１に結合
する蛋白質をコードする遺伝子を同定することができ
る。かかる方法は多くの研究室用マニュアル、例えば、
Ｃoliganら、Ｃurrent Ｐrotocols in Ｉmmunology 1
(2)：第５章（１９９１年）に記載されている。また、
標識化したリガンドは、細胞抽出物に光親和性結合させ
ることができる。また、本発明のポリぺプチドを用い
て、細胞または無細胞調製物における、ＭｕｒＡ−１結
合分子のＭｕｒＡ−１結合力を評価することができる。
とき、分子の同定方法を提供する。当業者に知られた多
くの方法、例えば、リガンドパンニング（panning）お
よびＦＡＣＳソーティングにより、ＭｕｒＡ−１に結合
する蛋白質をコードする遺伝子を同定することができ
る。かかる方法は多くの研究室用マニュアル、例えば、
Ｃoliganら、Ｃurrent Ｐrotocols in Ｉmmunology 1
(2)：第５章（１９９１年）に記載されている。また、
標識化したリガンドは、細胞抽出物に光親和性結合させ
ることができる。また、本発明のポリぺプチドを用い
て、細胞または無細胞調製物における、ＭｕｒＡ−１結
合分子のＭｕｒＡ−１結合力を評価することができる。
【０１２８】さらに、本発明のポリぺプチドを用いて、
例えば、細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび
天然生成物の混合物における、小分子基質とリガンドの
結合を評価してもよい。これらの基質とリガンドは天然
の基質またはリガンドであってもよく、または構造的ま
たは機能的模倣体であってもよい。
例えば、細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび
天然生成物の混合物における、小分子基質とリガンドの
結合を評価してもよい。これらの基質とリガンドは天然
の基質またはリガンドであってもよく、または構造的ま
たは機能的模倣体であってもよい。
【０１２９】アンタゴニストおよびアゴニスト−アッセ
イおよび分子 本発明はまた、そのＭｕｒＡ−１結合分子との相互作用
のような、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドまたはポリヌクレ
オチドの作用を亢進（アゴニスト）または阻害（アンタ
ゴニスト）する化合物を同定するための化合物のスクリ
ーニング法を提供する。
イおよび分子 本発明はまた、そのＭｕｒＡ−１結合分子との相互作用
のような、ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドまたはポリヌクレ
オチドの作用を亢進（アゴニスト）または阻害（アンタ
ゴニスト）する化合物を同定するための化合物のスクリ
ーニング法を提供する。
【０１３０】例えば、アゴニストまたはアンタゴニスト
についてスクリーンするために、合成反応混合物、細胞
コンパートメント、例えば、膜、細胞エンベロープまた
は細胞壁、またはそのいずれかの調製物を、ＭｕｒＡ−
１に結合する分子を発現する細胞より調製する。Ｍｕｒ
Ａ−１アゴニストまたはアンタゴニストである候補分子
の存在下または不存在下において、調製物を標識したＭ
ｕｒＡ−１と一緒にインキュベーションする。結合分子
に結合する候補分子の能力は、標識リガンドの結合低下
に反映される。理由なく、すなわちＭｕｒＡ−１結合分
子への結合に対するＭｕｒＡ−１の効果を誘発せずに結
合する分子は、良好なアンタゴニストである可能性が最
も高い。結合が良好で、ＭｕｒＡ−１と同じ効果または
ＭｕｒＡ−１と密接に関連した効果を誘起する分子はア
ゴニストである。
についてスクリーンするために、合成反応混合物、細胞
コンパートメント、例えば、膜、細胞エンベロープまた
は細胞壁、またはそのいずれかの調製物を、ＭｕｒＡ−
１に結合する分子を発現する細胞より調製する。Ｍｕｒ
Ａ−１アゴニストまたはアンタゴニストである候補分子
の存在下または不存在下において、調製物を標識したＭ
ｕｒＡ−１と一緒にインキュベーションする。結合分子
に結合する候補分子の能力は、標識リガンドの結合低下
に反映される。理由なく、すなわちＭｕｒＡ−１結合分
子への結合に対するＭｕｒＡ−１の効果を誘発せずに結
合する分子は、良好なアンタゴニストである可能性が最
も高い。結合が良好で、ＭｕｒＡ−１と同じ効果または
ＭｕｒＡ−１と密接に関連した効果を誘起する分子はア
ゴニストである。
【０１３１】例えば、候補分子と細胞または適当な細胞
調製物との相互作用の後にレポーター系の活性を測定
し、ＭｕｒＡ−１またはＭｕｒＡ−１と同じ効果を誘起
する分子の効果と比較することにより、潜在的アゴニス
トおよびアンタゴニストのＭｕｒＡ−１様効果を測定し
てもよい。この点において有用でありうるレポーター
は、プロダクトに変換される比色定量標識化基質、Ｍｕ
ｒＡ−１活性の変化に応答するレポーター遺伝子、およ
び当該分野において公知の結合アッセイを包含するが、
これに限定されない。
調製物との相互作用の後にレポーター系の活性を測定
し、ＭｕｒＡ−１またはＭｕｒＡ−１と同じ効果を誘起
する分子の効果と比較することにより、潜在的アゴニス
トおよびアンタゴニストのＭｕｒＡ−１様効果を測定し
てもよい。この点において有用でありうるレポーター
は、プロダクトに変換される比色定量標識化基質、Ｍｕ
ｒＡ−１活性の変化に応答するレポーター遺伝子、およ
び当該分野において公知の結合アッセイを包含するが、
これに限定されない。
【０１３２】ＭｕｒＡ−１アンタゴニストに関するアッ
セイのもう１つ別の例は、競合的阻害アッセイに適した
条件下で、ＭｕｒＡ−１および潜在的アゴニストを膜結
合ＭｕｒＡ−１分子、組換えＭｕｒＡ−１結合分子、天
然基質またはリガンド、あるいは基質またはリガンド模
倣体と結合させる競合アッセイである。結合分子に結合
しているか、またはプロダクトに変換されたＭｕｒＡ−
１分子の数を正確に決定して潜在的アンタゴニストの有
効性を評価できるように、例えば、放射活性または比色
定量化合物によりＭｕｒＡ−１を標識することができ
る。
セイのもう１つ別の例は、競合的阻害アッセイに適した
条件下で、ＭｕｒＡ−１および潜在的アゴニストを膜結
合ＭｕｒＡ−１分子、組換えＭｕｒＡ−１結合分子、天
然基質またはリガンド、あるいは基質またはリガンド模
倣体と結合させる競合アッセイである。結合分子に結合
しているか、またはプロダクトに変換されたＭｕｒＡ−
１分子の数を正確に決定して潜在的アンタゴニストの有
効性を評価できるように、例えば、放射活性または比色
定量化合物によりＭｕｒＡ−１を標識することができ
る。
【０１３３】潜在的アンタゴニストは、本発明のポリペ
プチドに結合し、そのことによりその活性を阻害または
消失させる小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよ
び抗体を包含する。潜在的アンタゴニストはまた、小型
有機分子、ペプチド、密接に関連した蛋白質のごときポ
リペプチド、または結合分子のごとき結合分子と同じ部
位に結合し、そのことによりＭｕｒＡ−１誘発活性を誘
発することなく、それにより結合からＭｕｒＡ−１を排
除することよりＭｕｒＡ−１の作用を防止する抗体であ
ってもよい。
プチドに結合し、そのことによりその活性を阻害または
消失させる小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよ
び抗体を包含する。潜在的アンタゴニストはまた、小型
有機分子、ペプチド、密接に関連した蛋白質のごときポ
リペプチド、または結合分子のごとき結合分子と同じ部
位に結合し、そのことによりＭｕｒＡ−１誘発活性を誘
発することなく、それにより結合からＭｕｒＡ−１を排
除することよりＭｕｒＡ−１の作用を防止する抗体であ
ってもよい。
【０１３４】潜在的アンタゴニストは、ポリペプチドの
結合部位に結合し、これを占領し、そのことにより細胞
性結合分子の結合を防止して正常な生物学的活性を妨げ
る小型分子を包含する。小型分子の例は、小型有機分
子、ペプチドまたはペプチド様分子を包含するが、これ
らに限定されない。
結合部位に結合し、これを占領し、そのことにより細胞
性結合分子の結合を防止して正常な生物学的活性を妨げ
る小型分子を包含する。小型分子の例は、小型有機分
子、ペプチドまたはペプチド様分子を包含するが、これ
らに限定されない。
【０１３５】その他の潜在的なアンタゴニストはアンチ
センス分子を包含する（これらの分子についての記載に
関しては、Ｏkano,Ｊ.，Ｎeurochem.56:560（1991）；O
LUGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GE
NE EXPRESSION，CRC プレス、ボッカラートン、フロリ
ダ州（1988）を参照のこと）。好ましい潜在的アンタゴ
ニストは、ＭｕｒＡ−１に関連する化合物およびその誘
導体を包含する。
センス分子を包含する（これらの分子についての記載に
関しては、Ｏkano,Ｊ.，Ｎeurochem.56:560（1991）；O
LUGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GE
NE EXPRESSION，CRC プレス、ボッカラートン、フロリ
ダ州（1988）を参照のこと）。好ましい潜在的アンタゴ
ニストは、ＭｕｒＡ−１に関連する化合物およびその誘
導体を包含する。
【０１３６】特定の態様において、本発明は、感染の続
発症に関与する、病原および哺乳動物宿主の間の最初の
物理的相互作用を妨害するための本発明のポリペプチ
ド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤の使用を提供する。
とりわけ本発明の分子を、i）細菌、特にグラム陽性細
菌の内在装置上の哺乳動物細胞外マトリックス蛋白質、
または創傷の細胞外マトリックス蛋白質への付着の防
御；ii）例えば、哺乳動物チロシンキナーゼのリン酸化
の開始により、哺乳動物細胞侵入を媒介するＵＤＰ−Ｎ
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼ蛋白質の遮断（Ｒosenshineら、Ｉnfect.Ｉmmu
n.60：2211（1992））；iii）哺乳動物細胞外マトリッ
クス蛋白質および組織損傷を媒介する細菌性ＵＤＰ−Ｎ
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼ蛋白質の間の細菌付着の遮断；iv）内在デバイ
スの埋め込みまたはその他の外科的手技以外により開始
した感染における病因の通常の進行の遮断に使用するこ
とができる。
発症に関与する、病原および哺乳動物宿主の間の最初の
物理的相互作用を妨害するための本発明のポリペプチ
ド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤の使用を提供する。
とりわけ本発明の分子を、i）細菌、特にグラム陽性細
菌の内在装置上の哺乳動物細胞外マトリックス蛋白質、
または創傷の細胞外マトリックス蛋白質への付着の防
御；ii）例えば、哺乳動物チロシンキナーゼのリン酸化
の開始により、哺乳動物細胞侵入を媒介するＵＤＰ−Ｎ
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼ蛋白質の遮断（Ｒosenshineら、Ｉnfect.Ｉmmu
n.60：2211（1992））；iii）哺乳動物細胞外マトリッ
クス蛋白質および組織損傷を媒介する細菌性ＵＤＰ−Ｎ
−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトランスフ
ェラーゼ蛋白質の間の細菌付着の遮断；iv）内在デバイ
スの埋め込みまたはその他の外科的手技以外により開始
した感染における病因の通常の進行の遮断に使用するこ
とができる。
【０１３７】本明細書で提供する各々のＤＮＡ配列は抗
菌化合物の発見および開発に用いることができる。発現
によりコードされた蛋白質は、抗菌薬物のスクリーニン
グのための標的として用いることができる。加えて、コ
ードされた蛋白質もしくはShine-Delgarnoまたはその他
の個々のｍＲＮＡの翻訳促進配列のアミノ末端領域をコ
ードするＤＮＡ配列を用いて、目的のコーディング配列
の発現を調節するアンチセンス配列を構築することがで
きる。
菌化合物の発見および開発に用いることができる。発現
によりコードされた蛋白質は、抗菌薬物のスクリーニン
グのための標的として用いることができる。加えて、コ
ードされた蛋白質もしくはShine-Delgarnoまたはその他
の個々のｍＲＮＡの翻訳促進配列のアミノ末端領域をコ
ードするＤＮＡ配列を用いて、目的のコーディング配列
の発現を調節するアンチセンス配列を構築することがで
きる。
【０１３８】アンタゴニストおよびアゴニストは、例え
ば、中耳炎，結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、胸腔蓄膿および心内膜炎、さらに詳細には、例え
ば、脳脊髄流体の感染のような髄膜炎を阻害するのに用
いることができる。
ば、中耳炎，結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、胸腔蓄膿および心内膜炎、さらに詳細には、例え
ば、脳脊髄流体の感染のような髄膜炎を阻害するのに用
いることができる。
【０１３９】ワクチン 本発明の別の態様は、個体、特に哺乳動物における免疫
学的反応を誘起する方法であって、個体にＭｕｒＡ−
１、またはそのフラグメントもしくは変種を接種し、該
個体が感染、特に細菌感染、さらに詳細にはストレプト
コッカス感染から保護する抗体を十分に産生させること
からなる方法に関する。本発明のまた別の態様は、個体
に免疫学的反応を誘起する方法であって、遺伝子治療に
よりＭｕｒＡ−１またはそのフラグメントもしくは変種
をコードする遺伝子を送達し、ＭｕｒＡ−１またはその
フラグメントもしくは変種をインビボで発現させ、該個
体を疾患から保護する抗体を産生する免疫学的反応を誘
起することからなる方法に関する。
学的反応を誘起する方法であって、個体にＭｕｒＡ−
１、またはそのフラグメントもしくは変種を接種し、該
個体が感染、特に細菌感染、さらに詳細にはストレプト
コッカス感染から保護する抗体を十分に産生させること
からなる方法に関する。本発明のまた別の態様は、個体
に免疫学的反応を誘起する方法であって、遺伝子治療に
よりＭｕｒＡ−１またはそのフラグメントもしくは変種
をコードする遺伝子を送達し、ＭｕｒＡ−１またはその
フラグメントもしくは変種をインビボで発現させ、該個
体を疾患から保護する抗体を産生する免疫学的反応を誘
起することからなる方法に関する。
【０１４０】本発明のさらなる態様は、免疫学的反応を
宿主内に誘起できる、または誘起した宿主に導入した場
合、該宿主にてＭｕｒＡ−１またはそこからコードされ
た蛋白質に対する免疫学的反応を誘起する免疫学的組成
物であって、組換えＭｕｒＡ−１またはそれからコード
された蛋白質を含み、該ＭｕｒＡ−１の抗原をコード
し、発現するＤＮＡ、またはそれからコードされる蛋白
質を有してなる組成物に関する。
宿主内に誘起できる、または誘起した宿主に導入した場
合、該宿主にてＭｕｒＡ−１またはそこからコードされ
た蛋白質に対する免疫学的反応を誘起する免疫学的組成
物であって、組換えＭｕｒＡ−１またはそれからコード
された蛋白質を含み、該ＭｕｒＡ−１の抗原をコード
し、発現するＤＮＡ、またはそれからコードされる蛋白
質を有してなる組成物に関する。
【０１４１】ＭｕｒＡ−１またはそのフラグメントは、
それ自身は抗体を産生しないが、第１の蛋白質を安定化
し、免疫原的および保護特性を有する融合蛋白質を産生
する能力のある補蛋白質（co-protein）と融合できる。
このように融合した組換え蛋白質には、さらに抗原補蛋
白質、例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ
（ＧＳＴ）またはベーターガラクトシダーゼ、蛋白質を
可溶化し、それらの産生および精製を促進する比較的大
きな補蛋白質等が含まれるのがより好ましい。さらに、
補蛋白質は免疫系において普遍的な刺激を提供するとい
う意味で、アジュバントとして作用してもよい。補蛋白
質は第１の蛋白質のアミノまたはカルボキシル末端のど
ちらかに付着できる。
それ自身は抗体を産生しないが、第１の蛋白質を安定化
し、免疫原的および保護特性を有する融合蛋白質を産生
する能力のある補蛋白質（co-protein）と融合できる。
このように融合した組換え蛋白質には、さらに抗原補蛋
白質、例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ
（ＧＳＴ）またはベーターガラクトシダーゼ、蛋白質を
可溶化し、それらの産生および精製を促進する比較的大
きな補蛋白質等が含まれるのがより好ましい。さらに、
補蛋白質は免疫系において普遍的な刺激を提供するとい
う意味で、アジュバントとして作用してもよい。補蛋白
質は第１の蛋白質のアミノまたはカルボキシル末端のど
ちらかに付着できる。
【０１４２】本発明は、ストレプトコッカス・ニューモ
ニエで感染した動物モデルにおける、このような遺伝的
免疫化実験で用いるＤＮＡ構築物の、細菌細胞表面蛋白
質の非可変領域をコードすることが示されている、記載
したポリヌクレオチドまたは特にそのフラグメントを用
いる方法であって、とりわけ予防的または治療的免疫反
応を生じることができる蛋白質エピトープを同定するの
に有用であろう方法を提供する。この方法は、哺乳動
物、特にヒトにおけるストレプトコッカス・ニューモニ
エ感染の予防薬または治療的処置の開発のために、その
後、感染に抵抗し一掃するのに成功した動物の必須器官
から特に価値あるモノクローナル抗体を調製することを
可能にすると思われる。
ニエで感染した動物モデルにおける、このような遺伝的
免疫化実験で用いるＤＮＡ構築物の、細菌細胞表面蛋白
質の非可変領域をコードすることが示されている、記載
したポリヌクレオチドまたは特にそのフラグメントを用
いる方法であって、とりわけ予防的または治療的免疫反
応を生じることができる蛋白質エピトープを同定するの
に有用であろう方法を提供する。この方法は、哺乳動
物、特にヒトにおけるストレプトコッカス・ニューモニ
エ感染の予防薬または治療的処置の開発のために、その
後、感染に抵抗し一掃するのに成功した動物の必須器官
から特に価値あるモノクローナル抗体を調製することを
可能にすると思われる。
【０１４３】該ポリペプチドは、宿主のワクチン処理の
ための抗原として用いることができ、例えば細菌の損傷
組織への付着を阻害することにより、細菌の侵入に対し
て保護する特異的抗体を産生する。組織損傷の例として
は、例えば機械的、化学的もしくは熱損傷により、また
は内在デバイスの埋め込みにより、引き起こされた皮膚
または結合組織の創傷、または粘膜、例えば口、乳腺、
尿道または膣の創傷等が挙げられる。
ための抗原として用いることができ、例えば細菌の損傷
組織への付着を阻害することにより、細菌の侵入に対し
て保護する特異的抗体を産生する。組織損傷の例として
は、例えば機械的、化学的もしくは熱損傷により、また
は内在デバイスの埋め込みにより、引き起こされた皮膚
または結合組織の創傷、または粘膜、例えば口、乳腺、
尿道または膣の創傷等が挙げられる。
【０１４４】本発明にはまた免疫原性組換え蛋白質を適
当な担体と共に有してなるワクチン処方を包含する。蛋
白質は胃で分解するので、非経口的、例えば皮下、筋肉
内、静脈内または皮内に投与するのが好ましい。非経口
投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および
処方を個体の体液、好ましくは血液と等張にする溶質を
含有していてもよい、水性または非水性滅菌注射液；お
よび懸濁化剤または増粘剤を含有していてもよい、水性
または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方は単位投与ま
たは複数回投与用容器、例えばシールしたアンプルおよ
びバイアルに入れてよく、使用直前に滅菌液体担体の添
加だけである凍結乾燥状態にて貯蔵してもよい。ワクチ
ン処方はまた、処方の免疫原性を高めるアジュバント系
を含有してもよく、例えば水中油系または当該分野で周
知のその他の系等がある。投与量はワクチンの特異的活
性に依存し、通常の実験法により容易に決定できる。
当な担体と共に有してなるワクチン処方を包含する。蛋
白質は胃で分解するので、非経口的、例えば皮下、筋肉
内、静脈内または皮内に投与するのが好ましい。非経口
投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および
処方を個体の体液、好ましくは血液と等張にする溶質を
含有していてもよい、水性または非水性滅菌注射液；お
よび懸濁化剤または増粘剤を含有していてもよい、水性
または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方は単位投与ま
たは複数回投与用容器、例えばシールしたアンプルおよ
びバイアルに入れてよく、使用直前に滅菌液体担体の添
加だけである凍結乾燥状態にて貯蔵してもよい。ワクチ
ン処方はまた、処方の免疫原性を高めるアジュバント系
を含有してもよく、例えば水中油系または当該分野で周
知のその他の系等がある。投与量はワクチンの特異的活
性に依存し、通常の実験法により容易に決定できる。
【０１４５】本発明はある種のＭｕｒＡ−１に関して記
載したが、これは天然に存在する蛋白質および、実質的
に組換え蛋白質の免疫原特性に影響しない付加、欠失ま
たは置換を施した類似の蛋白質のフラグメントを包含す
ることが理解されよう。
載したが、これは天然に存在する蛋白質および、実質的
に組換え蛋白質の免疫原特性に影響しない付加、欠失ま
たは置換を施した類似の蛋白質のフラグメントを包含す
ることが理解されよう。
【０１４６】組成物 本発明はまた、前記したポリヌクレオチドもしくはポリ
ペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを
含んでなる組成物に関する。かくして、本発明のポリペ
プチドは、非滅菌もしくは滅菌担体または細胞、組織も
しくは生物に用いられる担体、例えば対象への投与に適
した医薬担体と組み合わせて用いることができる。この
ような組成物は、例えば溶媒添加物または治療上有効量
の本発明のポリペプチド、および医薬上許容される担体
または賦形剤を含む。このような担体は、生理食塩水、
緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エ
タノールおよびそれらの組み合わせを包含するが、これ
らに限定されるものではない。処方は投与法に適したも
のにすべきである。
ペプチド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを
含んでなる組成物に関する。かくして、本発明のポリペ
プチドは、非滅菌もしくは滅菌担体または細胞、組織も
しくは生物に用いられる担体、例えば対象への投与に適
した医薬担体と組み合わせて用いることができる。この
ような組成物は、例えば溶媒添加物または治療上有効量
の本発明のポリペプチド、および医薬上許容される担体
または賦形剤を含む。このような担体は、生理食塩水、
緩衝化生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エ
タノールおよびそれらの組み合わせを包含するが、これ
らに限定されるものではない。処方は投与法に適したも
のにすべきである。
【０１４７】キット 本発明はさらに、本発明の前記した組成物の成分を１ま
たはそれ以上を充填した１またはそれ以上の容器からな
る診断用および医薬用パックおよびキットに関する。か
かる容器に、ヒト投与用製品の製造、使用または販売の
行政機関による承認を反映する、医薬または生物学製品
の製造、使用または販売を規制する機関により規定され
る形態の注意書を添付することができる。
たはそれ以上を充填した１またはそれ以上の容器からな
る診断用および医薬用パックおよびキットに関する。か
かる容器に、ヒト投与用製品の製造、使用または販売の
行政機関による承認を反映する、医薬または生物学製品
の製造、使用または販売を規制する機関により規定され
る形態の注意書を添付することができる。
【０１４８】投与 本発明のポリペプチドおよびその他の化合物は、単独で
または治療用化合物等のその他の化合物と組み合わせて
用いることができる。医薬組成物は任意の有効な、利便
的な方法、例えば、とりわけ局所、経口、経膣、静脈
内、腹膜腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または皮内の経路
で投与できる。
または治療用化合物等のその他の化合物と組み合わせて
用いることができる。医薬組成物は任意の有効な、利便
的な方法、例えば、とりわけ局所、経口、経膣、静脈
内、腹膜腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または皮内の経路
で投与できる。
【０１４９】医薬組成物は、一般に、個々の適応症の治
療または予防に有効な量にて投与する。一般に、該化合
物を少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重の量にて投与す
る。大抵の場合、一日に約８ｍｇ／ｋｇ体重を越えない
量を投与する。好ましくは、大抵の場合、投与量は、一
日に約１０μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重である。最
適投与量は、その適応症、重度、投与経路、複合症状な
どを考慮して、各治療のモダリティーおよび兆候につい
ての標準方法により決定されるであろう。
療または予防に有効な量にて投与する。一般に、該化合
物を少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重の量にて投与す
る。大抵の場合、一日に約８ｍｇ／ｋｇ体重を越えない
量を投与する。好ましくは、大抵の場合、投与量は、一
日に約１０μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重である。最
適投与量は、その適応症、重度、投与経路、複合症状な
どを考慮して、各治療のモダリティーおよび兆候につい
ての標準方法により決定されるであろう。
【０１５０】治療において、または予防として、活性物
質を注射用組成物として、例えば、好ましくは等張の、
滅菌水性分散物として個体に投与できる。
質を注射用組成物として、例えば、好ましくは等張の、
滅菌水性分散物として個体に投与できる。
【０１５１】また、組成物は局所用、例えば軟膏、クリ
ーム、ローション、眼軟膏、点眼液、点耳液、洗口剤、
染み込ませた包帯および縫合用の糸、ならびにエアロゾ
ール等の形態に処方でき、適当な慣用的添加物、例えば
保存剤、薬物の浸透を補助する溶媒、ならびに軟膏およ
びクリームには軟化剤を含有してよい。このような局所
用処方はまた、適合した慣用的な担体、例えばクリーム
または軟膏基剤、およびローションにはエタノールまた
はオレイルアルコールを含有してよい。このような担体
は処方の約１重量％から約９８重量％でよく；より一般
的には処方の約８０重量％までにする。
ーム、ローション、眼軟膏、点眼液、点耳液、洗口剤、
染み込ませた包帯および縫合用の糸、ならびにエアロゾ
ール等の形態に処方でき、適当な慣用的添加物、例えば
保存剤、薬物の浸透を補助する溶媒、ならびに軟膏およ
びクリームには軟化剤を含有してよい。このような局所
用処方はまた、適合した慣用的な担体、例えばクリーム
または軟膏基剤、およびローションにはエタノールまた
はオレイルアルコールを含有してよい。このような担体
は処方の約１重量％から約９８重量％でよく；より一般
的には処方の約８０重量％までにする。
【０１５２】哺乳動物、特にヒトに投与するた場合、活
性物質の1日あたりの投与量は、０.０１ｍｇ／ｋｇから
１０ｍｇ／ｋｇであり、典型的には約１ｍｇ／ｋｇであ
る。あらゆる場合において、医者は個体に最も適した実
際の投与量を決定し、年齢、体重および個々の個体の応
答に応じて変化させる。前記した投与量は、平均的なケ
ースの模範例である。もちろん、高量および低量の範囲
が好ましい個々の例もあり、これらは本発明の範囲内で
ある。
性物質の1日あたりの投与量は、０.０１ｍｇ／ｋｇから
１０ｍｇ／ｋｇであり、典型的には約１ｍｇ／ｋｇであ
る。あらゆる場合において、医者は個体に最も適した実
際の投与量を決定し、年齢、体重および個々の個体の応
答に応じて変化させる。前記した投与量は、平均的なケ
ースの模範例である。もちろん、高量および低量の範囲
が好ましい個々の例もあり、これらは本発明の範囲内で
ある。
【０１５３】内在デバイスには外科的インプラント、プ
ロテーゼデバイスおよびカテーテル等があり、即ち個体
の体内に導入し、長時間その位置に存在するデバイスで
ある。このようなデバイスには、例えば人工関節、心臓
弁、ペースメーカー、血管移植片、血管カテーテル、脳
脊髄液シャント、尿カテーテル、継続的歩行可能腹膜透
析（continuous ambulatory peritoneal dialysis：Ｃ
ＡＰＤ）カテーテル等がある。
ロテーゼデバイスおよびカテーテル等があり、即ち個体
の体内に導入し、長時間その位置に存在するデバイスで
ある。このようなデバイスには、例えば人工関節、心臓
弁、ペースメーカー、血管移植片、血管カテーテル、脳
脊髄液シャント、尿カテーテル、継続的歩行可能腹膜透
析（continuous ambulatory peritoneal dialysis：Ｃ
ＡＰＤ）カテーテル等がある。
【０１５４】本発明の組成物を注射により投与し、内在
デバイスの挿入の直前に、関連する細菌に対する全身的
な効果を得ることができる。手術後、デバイスが体内に
在る時間中、治療を続けてよい。加えて、該組成物を任
意の外科的手技の手術用カバーに用いて、ストレプトコ
ッカス創傷感染を防御することができる。
デバイスの挿入の直前に、関連する細菌に対する全身的
な効果を得ることができる。手術後、デバイスが体内に
在る時間中、治療を続けてよい。加えて、該組成物を任
意の外科的手技の手術用カバーに用いて、ストレプトコ
ッカス創傷感染を防御することができる。
【０１５５】多くの整形外科医は、プロテーゼ関節を有
するヒトは、菌血症を生み出し得る歯科的処置の前に、
抗生物質予防法を考慮されるべきであると考える。遅延
性の重篤な感染は、時にはプロテーゼ関節を失うに至る
深刻な合併症であり、有意性のある羅病率および死亡率
を伴う。従って、この場合、予防的な抗生物質の代わり
に、活性物質の用途を拡張することが可能である。
するヒトは、菌血症を生み出し得る歯科的処置の前に、
抗生物質予防法を考慮されるべきであると考える。遅延
性の重篤な感染は、時にはプロテーゼ関節を失うに至る
深刻な合併症であり、有意性のある羅病率および死亡率
を伴う。従って、この場合、予防的な抗生物質の代わり
に、活性物質の用途を拡張することが可能である。
【０１５６】前記した治療に加え、本発明の組成物は、
一般に創傷の治療薬として使用でき、創傷組織に曝露し
たマトリックス蛋白質に細菌が付着するのを防ぎ、歯科
治療において抗生物質の予防法に代わって、またはそれ
と組み合わせて、予防的に使用できる。また、本発明の
組成物は挿入直前に、内在デバイスを浸すために使用で
きる。活性物質は創傷または内在デバイスを浸すために
１μｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度であるのが好ま
しい。
一般に創傷の治療薬として使用でき、創傷組織に曝露し
たマトリックス蛋白質に細菌が付着するのを防ぎ、歯科
治療において抗生物質の予防法に代わって、またはそれ
と組み合わせて、予防的に使用できる。また、本発明の
組成物は挿入直前に、内在デバイスを浸すために使用で
きる。活性物質は創傷または内在デバイスを浸すために
１μｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌの濃度であるのが好ま
しい。
【０１５７】ワクチン組成物は、都合よくは、注射可能
な形態である。通常のアジュバントを用いて免疫反応を
高めることができる。ワクチン化に適した単位投与量
は、抗原０.５〜５μｇ／ｋｇであり、このような投与
量は１〜３週間隔で１〜３回投与するのが好ましい。
な形態である。通常のアジュバントを用いて免疫反応を
高めることができる。ワクチン化に適した単位投与量
は、抗原０.５〜５μｇ／ｋｇであり、このような投与
量は１〜３週間隔で１〜３回投与するのが好ましい。
【０１５８】提示した投与量範囲では、本発明の化合物
で、適当な個体への投与を妨げるような、不利な毒性作
用は観察されないであろう。前記の抗体もまた、ＵＤＰ
−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトラン
スフェラーゼ蛋白質を有する細菌の存在を検出するため
の診断試薬として使用できる。以下の実施例の理解を容
易にするために、ある種の頻繁に出ている方法および／
または用語を記載する。
で、適当な個体への投与を妨げるような、不利な毒性作
用は観察されないであろう。前記の抗体もまた、ＵＤＰ
−Ｎ−アセチルグルコサミン・エノールピルビルトラン
スフェラーゼ蛋白質を有する細菌の存在を検出するため
の診断試薬として使用できる。以下の実施例の理解を容
易にするために、ある種の頻繁に出ている方法および／
または用語を記載する。
【０１５９】
【実施例】本発明を以下の実施例によりさらに詳細に記
載する。これらの具体例は、本発明のある特定の態様を
説明するが、開示されている発明の範囲を限定または制
限するものではない。本明細書にて用いるある種の用語
は、前記した用語説明にて示されている。
載する。これらの具体例は、本発明のある特定の態様を
説明するが、開示されている発明の範囲を限定または制
限するものではない。本明細書にて用いるある種の用語
は、前記した用語説明にて示されている。
【０１６０】実施例はすべて標準的技法を用いて行う。
その方法は、詳細に記載したことを除いて、当業者に周
知であり、かつ慣用的である。以下の実施例の慣用的分
子生物学的技法は、Ｓambrookら、MOLECULAR CLONING：
A LABORATORY MANUAL，2nd Ed；Ｃold Ｓpring Ｈarbor
Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.
（1989）などの標準的実験室マニュアルに記載されてい
るように行うことができる。
その方法は、詳細に記載したことを除いて、当業者に周
知であり、かつ慣用的である。以下の実施例の慣用的分
子生物学的技法は、Ｓambrookら、MOLECULAR CLONING：
A LABORATORY MANUAL，2nd Ed；Ｃold Ｓpring Ｈarbor
Ｌaboratory Ｐress，Ｃold Ｓpring Ｈarbor，Ｎ.Ｙ.
（1989）などの標準的実験室マニュアルに記載されてい
るように行うことができる。
【０１６１】実施例１ ライブラリー製造 配列番号：１に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチ
ドは、イー・コリにおけるストレプトコッカス・ニュー
モニエの染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーより入
手した。ある場合には、重複するストレプトコッカス・
ニューモニエＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のク
ローンからの配列決定データを、配列番号：１の隣接Ｄ
ＮＡ配列を構築するために使用した。ライブラリーは通
常の方法、例えば以下の方法１および２により製造でき
る。全細胞ＤＮＡは、ストレプトコッカス・ニューモニ
エ０１００９９３より、標準法に準じて単離し、二つの
方法のどちらかによりサイズ分画する。
ドは、イー・コリにおけるストレプトコッカス・ニュー
モニエの染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーより入
手した。ある場合には、重複するストレプトコッカス・
ニューモニエＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のク
ローンからの配列決定データを、配列番号：１の隣接Ｄ
ＮＡ配列を構築するために使用した。ライブラリーは通
常の方法、例えば以下の方法１および２により製造でき
る。全細胞ＤＮＡは、ストレプトコッカス・ニューモニ
エ０１００９９３より、標準法に準じて単離し、二つの
方法のどちらかによりサイズ分画する。
【０１６２】方法１ 標準法に準じてサイズ分画化するために、全細胞ＤＮＡ
をニードルに通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまで
の大きさのＤＮＡフラグメントを、エクソヌクレアーゼ
およびＤＮＡポリメラーゼで処理することにより、平滑
末端化し、ＥｃｏＲＩリンカーを加える。フラグメント
を、ＥｃｏＲＩで切断したベクターラムダＺａｐＩＩに
ライゲートし、標準法によりライブラリーをパッケージ
ングし、次いでパッケージングしたライブラリーでイー
・コリを感染させる。ライブラリーは標準法により増幅
する。
をニードルに通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまで
の大きさのＤＮＡフラグメントを、エクソヌクレアーゼ
およびＤＮＡポリメラーゼで処理することにより、平滑
末端化し、ＥｃｏＲＩリンカーを加える。フラグメント
を、ＥｃｏＲＩで切断したベクターラムダＺａｐＩＩに
ライゲートし、標準法によりライブラリーをパッケージ
ングし、次いでパッケージングしたライブラリーでイー
・コリを感染させる。ライブラリーは標準法により増幅
する。
【０１６３】方法２ 全細胞性ＤＮＡを、ライブラリーベクター（例えば、Ｒ
ｓａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓｈｌ２３５Ｉ）にク
ローニングするための一連のフラグメントを生じるのに
適当な制限酵素の一つでまたはこれを組み合わせたもの
で部分的加水分解し、このようなフラグメントを標準法
に準じてサイズ分画化する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮ
Ａおよびフラグメントにライゲートし、次いでＥｃｏＲ
Ｉで切断したベクターラムダＺａｐＩＩにライゲート
し、標準法によりライブラリーをパッケージングし、お
よびパッケージングしたライブラリーでイー・コリを感
染させる。ライブラリーを標準法により増幅する。
ｓａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓｈｌ２３５Ｉ）にク
ローニングするための一連のフラグメントを生じるのに
適当な制限酵素の一つでまたはこれを組み合わせたもの
で部分的加水分解し、このようなフラグメントを標準法
に準じてサイズ分画化する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮ
Ａおよびフラグメントにライゲートし、次いでＥｃｏＲ
Ｉで切断したベクターラムダＺａｐＩＩにライゲート
し、標準法によりライブラリーをパッケージングし、お
よびパッケージングしたライブラリーでイー・コリを感
染させる。ライブラリーを標準法により増幅する。
【図１】 ストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
【図２】 ストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
【図３】 ストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
−１のポリぺプチド配列（配列番号：１）を示す。
【図４】 図１ないし３のポリぺプチド配列より推定し
たストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ−１のア
ミノ酸配列（配列番号：２）を示す。
たストレプトコッカス・ニューモニエＭｕｒＡ−１のア
ミノ酸配列（配列番号：２）を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＮ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＣＤ 9/00 39/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 39/395 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ｚ 48/00 ＡＢＥ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＡ 9/00 ＡＢＬ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＢＭ Ｇ０１Ｎ 33/573 ＡＢＮ // Ｃ１２Ｐ 21/08 ＡＣＤ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19）
Claims (24)
- 【請求項１】（ａ）配列番号：２のアミノ酸１ないし４
２７を有してなるポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドと少なくとも６０％同一であるポリヌクレオチ
ド； （ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレ
オチド；および （ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なく
とも１５の連続的塩基を有してなるポリヌクレオチドか
らなる群から選択されるメンバーを含有してなる単離さ
れたポリヌクレオチド。 - 【請求項２】 ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項
１記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項３】 ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項
１記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項４】 配列番号：１に示されるヌクレオチド１
ないし１４２６を有してなる請求項２記載のポリヌクレ
オチド。 - 【請求項５】 ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドをコードする
配列番号：１に示されるヌクレオチドを有してなる請求
項２記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項６】 配列番号：２のアミノ酸１ないし４２７
を有してなるポリペプチドをコードする請求項２記載の
ポリヌクレオチド。 - 【請求項７】（ａ）ＮＣＩＭＢ寄託番号４０７９４に含
まれ、配列番号：１のポリヌクレオチド配列を有するＤ
ＮＡによって発現される同一成熟ポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドと少なくとも６０％同一であるポ
リヌクレオチド； （ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレ
オチド；および （ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なく
とも１５塩基を有してなるポリヌクレオチドからなる群
から選択されるメンバーを含有してなる単離されたポリ
ヌクレオチド。 - 【請求項８】 請求項２に記載のＤＮＡを有してなるベ
クター。 - 【請求項９】 請求項８に記載のベクターを有してなる
宿主細胞。 - 【請求項１０】 前記したＤＮＡによってコードされる
ポリペプチドを請求項９に記載の宿主細胞から発現させ
ることからなるポリペプチドの産生方法。 - 【請求項１１】 ポリペプチドを発現する細胞が請求項
８に記載のベクター中に含まれるｃＤＮＡによってコー
ドされるポリぺプチドを発現するように、該細胞を該ベ
クターで形質転換またはトランスフェクションすること
からなる、該細胞の産生方法。 - 【請求項１２】 配列番号：２のアミノ酸１ないし４２
７と少なくとも６０％同一であるアミノ酸配列を有して
なるポリペプチド。 - 【請求項１３】 配列番号：２に示されるアミノ酸配列
を有してなるポリペプチド。 - 【請求項１４】 請求項１２に記載のポリペプチドに対
する抗体。 - 【請求項１５】 請求項１２に記載のポリペプチドの活
性を阻害するアンタゴニスト。 - 【請求項１６】 治療上有効量の請求項１２に記載のポ
リペプチドを個体に投与することからなる、ＭｕｒＡ−
１を必要とする個体の治療方法。 - 【請求項１７】 治療上有効量のポリペプチドを、該ポ
リぺプチドをコードするＤＮＡを個体に提供し、該ポリ
ペプチドをインビボで発現させることによって、投与す
る請求項１６記載の方法。 - 【請求項１８】 ＭｕｒＡ−１ポリぺプチドを阻害する
必要のある個体の治療方法であって、治療上有効量の請
求項１５に記載のアンタゴニストを該個体に投与するこ
とからなる治療方法。 - 【請求項１９】 請求項１２に記載のポリぺプチドの発
現に関連する疾患の診断方法であって、該ポリペプチド
をコードする核酸配列を測定することからなる診断方
法。 - 【請求項２０】 宿主由来の試料中の請求項１２に記載
のポリペプチドの存在について解析することからなる診
断方法。 - 【請求項２１】 請求項１２に記載のポリぺプチドに結
合し、その活性を阻害する化合物の同定方法であって、 ポリペプチドのための結合部（該結合部は化合物の該結
合部への結合に応答して検出可能なシグナルを提供する
ことができる第２の成分と結合している）をその表面上
に発現している細胞を、結合部との結合を可能とする条
件下で、スクリーニングされる化合物と接触させ；およ
び該化合物と該結合部との相互作用から生じるシグナル
の有無を検出することによって、その化合物が該結合部
に結合してその結合部を活性化または阻害するかどうか
を決定することからなる同定方法。 - 【請求項２２】 哺乳動物を中耳炎、結膜炎、肺炎、菌
血症、髄膜炎、静脈洞炎、胸腔蓄膿および心内膜炎、特
に例えば、脳脊髄流体の感染などの髄膜炎から保護する
ように抗体を産生するのに適当なＭｕｒＡ−１またはそ
のフラグメントもしくは変種を該哺乳動物に接種するこ
とからなる、哺乳動物にて免疫学的応答を誘発する方
法。 - 【請求項２３】 哺乳動物において免疫学的応答を誘発
する方法であって、免疫学的応答を誘発し、抗体を産生
して、該哺乳動物を疾患から保護するために、ＭｕｒＡ
−１またはそのフラグメントもしくは変種をイン・ビボ
にて発現するように、遺伝子療法を介して、ＭｕｒＡ−
１フラグメントまたはその変種をコードする遺伝子をデ
リバーすることからなる免疫学的応答の誘発方法。 - 【請求項２４】 ＭｕｒＡ−１ポリヌクレオチドまたは
それによりコードされる蛋白質をコードして発現し、哺
乳動物に導入されると、その哺乳動物にて所定のＭｕｒ
Ａ−１ポリヌクレオチドまたはそれによりコードされる
蛋白質に対する免疫学的応答を誘発する、ＤＮＡを有し
てなる免疫学的組成物。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9613907.6A GB9613907D0 (en) | 1996-07-03 | 1996-07-03 | Novel compounds |
| US2897696P | 1996-10-21 | 1996-10-21 | |
| US9613907 | 1996-10-21 | ||
| US60/028976 | 1996-10-21 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001384271A Division JP2002262892A (ja) | 1996-07-03 | 2001-12-18 | ＭｕｒＡ−１ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1080290A true JPH1080290A (ja) | 1998-03-31 |
Family
ID=26309618
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9215404A Pending JPH1080290A (ja) | 1996-07-03 | 1997-07-03 | ＭｕｒＡ−１ |
| JP2001384271A Pending JP2002262892A (ja) | 1996-07-03 | 2001-12-18 | ＭｕｒＡ−１ |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001384271A Pending JP2002262892A (ja) | 1996-07-03 | 2001-12-18 | ＭｕｒＡ−１ |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0816502A3 (ja) |
| JP (2) | JPH1080290A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691161A (en) * | 1996-08-01 | 1997-11-25 | Eli Lilly And Company | Peptidoglycan biosynthetic mura protein from Streptococcus pneumoniae |
| US6194170B1 (en) | 1997-09-25 | 2001-02-27 | Smithkline Beecham Corporation | MurF of Streptococcus pneumoniae |
| CA2244954A1 (en) * | 1997-09-25 | 1999-03-25 | Smithkline Beecham Corporation | Murf |
| US6346396B1 (en) | 1999-01-29 | 2002-02-12 | Jianzhong Huang | MurA |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691161A (en) * | 1996-08-01 | 1997-11-25 | Eli Lilly And Company | Peptidoglycan biosynthetic mura protein from Streptococcus pneumoniae |
| WO1998018931A2 (en) * | 1996-10-31 | 1998-05-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Streptococcus pneumoniae polynucleotides and sequences |
-
1997
- 1997-07-02 EP EP97304806A patent/EP0816502A3/en not_active Withdrawn
- 1997-07-03 JP JP9215404A patent/JPH1080290A/ja active Pending
-
2001
- 2001-12-18 JP JP2001384271A patent/JP2002262892A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002262892A (ja) | 2002-09-17 |
| EP0816502A3 (en) | 1999-10-20 |
| EP0816502A2 (en) | 1998-01-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH11504820A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウスのスレオニル−ｔＲＮＡシンセターゼ | |
| JP2000515724A (ja) | 新規化合物 | |
| JP2001508650A (ja) | 新規細菌ポリペプチドおよびポリヌクレオチド | |
| JP2000502898A (ja) | スタフィロコッカスシグナルトランスダクションシステムの成分 | |
| JPH10191987A (ja) | 新規３−デヒドロキナ酸シンターゼ | |
| JP2002516868A (ja) | ｎｒｄＥ | |
| JP2001505050A (ja) | 新規ＦａｂＨ | |
| JPH11506618A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウスの新規バリル−ｔＲＮＡシンセターゼ | |
| JPH1080290A (ja) | ＭｕｒＡ−１ | |
| JPH11506018A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウス由来の２成分シグナルトランスダクションシステムタンパク質 | |
| JP2001502529A (ja) | ＳｐｓＡポリヌクレオチドおよびポリペプチド | |
| JPH11192091A (ja) | ＳｅｃＡ | |
| JPH10201484A (ja) | 新規ＦｔｓＬ | |
| JP2000000098A (ja) | 新規ｅｒａ | |
| JPH11253173A (ja) | 新規ヒスチジンキナーゼ | |
| JP2002272484A (ja) | ｄｅｘＢ | |
| JPH10313873A (ja) | 新規ＤｉｖＩＢ | |
| JPH10225296A (ja) | 新規ｓｐｏ−ｒｅｌ | |
| JPH11137248A (ja) | ＭｕｒＡ | |
| JP2000502561A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウスの新規ｔｃｓｔｓ応答レギュレーター | |
| JP2002522010A (ja) | ｎｒｄＦ | |
| JP2002524066A (ja) | ｇｃｐ | |
| JPH11146792A (ja) | 新規化合物 | |
| JP2000502563A (ja) | スタフィロコッカス・アウレウス由来の２成分シグナルトランスダクションシステム | |
| JP2002504321A (ja) | 新規ｐｇｓＡ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20020122 |