JPH1053600A - （１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及びペプチドグリカンの溶出用液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 固体の表面に付着又は吸着された、水や生理
食塩水では溶出されないβ−グルカンやペプチドグリカ
ンを、効率良く溶出し得る溶液等の提供。 【手段】 アルブミン及び／又はグロブリンを含んで成
る、（１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及びペプチドグ
リカン溶出用液及びこれを用いる溶出方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【産業上の利用分野】本発明は、固体の表面に付着又は
吸着された（１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及びペプ
チドグリカンの溶出用液等に関する。

【０００２】

【発明の背景】（１→３）β−Ｄ−グルカン（以下、β
−グルカンと略記する。）、ペプチドグリカン等は各種
微生物の細胞壁構成成分として知られており、例えば医
療用器具や細胞培養用器具中のこれらの有無を調べるこ
とにより、これら器具がどのような微生物種（例えば真
菌、グラム陰性菌、グラム陽性菌等）により汚染されて
いるかをある程度確定し得ることは知られている。

【０００３】また、β−グルカンには免疫賦活作用があ
り、ペプチドグリカンには体液性免疫応答の増強効果、
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）誘導物質の効果を高める作用、
細菌内毒素等の生物への影響を高める作用等があること
も知られている。そのため、医療用器具や細胞培養用器
具に付着又は吸着しているβ−グルカンやペプチドグリ
カンの量を管理することは、今後益々重要となると考え
られている。

【０００４】しかしながら、医療用器具や細胞培養用器
具に付着又は吸着したβ−グルカンやペプチドグリカン
は、従来から用いられている蒸留水や生理食塩水等では
充分に溶出することができないため、その量を精度良く
測定することは難しいという問題点があり、これらの効
果的な溶出方法の開発が望まれている現状にある。

【０００５】

【発明が解決すべき課題】本発明は、上記のごとき状況
に鑑みなされたもので、固体の表面に付着又は吸着され
た、水や生理食塩水では溶出されないβ−グルカンやペ
プチドグリカンを、効率良く溶出し得る溶液等の提供を
その課題とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、アルブミン及
び／又はグロブリンを含んで成る、β−グルカン又は／
及びペプチドグリカン溶出用液の発明である。

【０００７】また、本発明は、アルブミン及び／又はグ
ロブリンを含む溶液を用いて溶出することを特徴とす
る、β−グルカン又は／及びペプチドグリカンの溶出方
法の発明である。

【０００８】更に、本発明は、（１→３）β−Ｄ−グル
カン又は／及びペプチドグリカンで汚染された容器又は
器具をアルブミン及び／又はグロブリンを含む溶液を用
いて処理することを特徴とする、容器又は器具の洗浄方
法の発明である。

【０００９】更にまた、本発明は、アルブミン及び／又
はグロブリンを含んで成る、β−グルカン又は／及びペ
プチドグリカンで汚染された容器又は器具の洗浄剤の発
明である。

【００１０】即ち、本発明者らは、固体の表面に付着又
は吸着されたβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン
を効率良く溶出する方法について鋭意研究の結果、通
常、水や生理食塩水では溶出されない、固体の表面に付
着又は吸着されたβ−グルカン又は／及びペプチドグリ
カンが、アルブミン及び／又はグロブリンを含む溶液、
特にアルブミンを含む溶液を用いると極めて効率良く溶
出できることを見出し、本発明を完成するに至った。

【００１１】本発明の溶出用液である、アルブミン及び
／又はグロブリンを含んで成る溶液としては、例えばア
ルブミン及び／又はグロブリンを含む、水溶液や各種緩
衝液の他に、アルブミン及びグロブリンを主たる蛋白成
分としている血漿や血清、或いはこれらを各種緩衝液等
で適宜希釈したもの等も挙げることができる。

【００１２】本発明で用いられる血漿又は血清として
は、脊椎動物由来の血漿または血清であれば特に限定さ
れることなく挙げることができる。

【００１３】本発明で用いられるアルブミン及び／又は
グロブリンとしてはこれらの血漿又は血清中の蛋白成分
を精製又は部分精製することにより得られたアルブミン
又は／及びグロブリンが代表的なものとして挙げられ
る。

【００１４】本発明の溶出用液である、アルブミン及び
／又はグロブリンを含んで成る溶液（以下「アルブミン
溶液等」と略記する。）は必ずしもその為に特別に調製
されたものである必要はなく、例えば、日本赤十字社等
より市販されている新鮮液状血漿及び新鮮凍結人血漿、
或は、日本製薬(株)、ローラー社、アーマー社、カッタ
ー社、バクスター社、(株)ミドリ十字社及び化血研等よ
り市販されている加熱人血漿たん白製剤及び人血清アル
ブミン製剤、また、武田薬品工業(株)、大塚製薬(株)、
(株)ミドリ十字社、ヘキスト社、日本赤十字社及び富士
レビオ(株)等より市販されている人免疫グロブリン製
剤、更には、ウィタカー社、ハイクロン社、ギブコ社及
びベーリンガーマンハイム社等より市販されている仔牛
胎児血清等を用いて調製したもの等も本発明の溶出用液
の範疇に含まれる。

【００１５】これら本発明に係るアルブミン溶液等の中
で最も好ましいのは人血清アルブミンを含む水溶液（以
下、ＨＳＡ溶液と略記する。）である。

【００１６】本発明の溶出用液を用いて、例えば医療用
器具、細胞培養用器具等の容器や器具に付着又は吸着さ
れたβ−グルカンやペプチドグリカンを溶出するには、
言い換えれば、本発明の溶出方法を実施するには、例え
ば以下の如く行えばよい。即ち、目的の容器や器具を、
本発明の溶出用液中に適当な方法で浸漬するか、容器等
の内部に本発明の溶出溶液を吸引する等しておき、通常
０〜100℃、好ましくは15〜100℃で、通常数秒〜１２時
間程度、好ましくは数秒〜２時間静置しておくか若しく
は適当に攪拌を行うことによりこれら容器や器具に付着
又は吸着されたβ−グルカンやペプチドグリカンを溶出
することができる。

【００１７】このようにして得られる溶出液中の、β−
グルカン又は／及びペプチドグリカン量を自体公知のβ
−グルカン又は／及びペプチドグリカンの測定法、例え
ば、カイコ等の昆虫体液から調製された試薬を用いる測
定方法等により測定すれば容器、器具等のβ−グルカン
又は／及びペプチドグリカンによる汚染の度合をより正
確に測定することができる。

【００１８】本発明の溶出方法をかかる目的に応用する
場合には、当然のことながら、溶出に用いるアルブミン
溶液等は、測定に影響を与える量のβ−グルカン又は／
及びペプチドグリカンを含んでいてはならない。

【００１９】そのためには、β−グルカン又は／及びペ
プチドグリカン含有量の少ないロットのアルブミン溶液
等を選択するか、或は、β−グルカン又は／及びペプチ
ドグリカンを含んだアルブミン溶液等を使用する場合
は、予めフィルター等を用いてβ−グルカン又は／及び
ペプチドグリカンを除去する必要がある。

【００２０】この場合に使用可能なフィルターとして
は、例えばゼータポアメンブレン（キュノ（株）社商品
名）、ウルチポア（日本ポール社商品名）、ベイオダイ
ン（日本ポール社商品名）等のナイロン６６製フィルタ
ー、例えばＰＴＦＥ膜（日東電工（株）製）等のポリテ
トラフルオロエチレンフィルター等が挙げられる。ま
た、これらフィルターのポアサイズとしては特に限定さ
れないが、例えば0.2〜0.65μmのものが挙げられる。

【００２１】本発明で使用される本発明の溶出用液中の
アルブミン又は／及びグロブリンの濃度としては、使用
するアルブミン又は／及びグロブリンの種類やロットの
違い、或は容器や器具等へのβ−グルカン又は／及びペ
プチドグリカンの付着や吸着の程度等によって異なり必
ずしも一定ではないが、通常、溶液中に蛋白濃度として
0.0001mg/ml以上、好ましくは0.0001〜6.00mg/ml程度、
より好ましくは0.02〜3.00mg/ml程度が挙げられる。よ
り具体的には、例えば人血清アルブミンを用いる場合に
は、通常、0.001mg/dl以上、好ましくは0.001〜6.00mg/
ml程度、より好ましくは0.02〜3.00mg/ml程度であり、
人血漿を用いる場合には、通常0.0001mg/ml以上、好ま
しくは0.0001〜1.0mg/ml程度、より好ましくは0.1〜0.5
mg/ml程度である。

【００２２】本発明の溶出方法により得られた溶出液
を、そのβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン濃度
を測定すべく、例えばカイコ等の昆虫体液から調製され
た試薬を用いる測定方法に付した場合、通常は測定に何
ら支障を生じず、正確な測定値が得られるが、溶出に用
いた本発明の溶出用液中のアルブミン等の濃度が高すぎ
ると正確な値が得られなくなる場合もある。

【００２３】即ち、本発明の溶出用液であるアルブミン
溶液等、即ち、人血清アルブミン（ＨＳＡ）溶液、人血
漿溶液、人血清溶液、牛胎児血清溶液、牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）溶液、グロブリン溶液等は、何れも蛋白濃
度が高くなると、上記した如き方法による、溶出後のβ
−グルカン又は／及びペプチドグリカンの測定に於て、
反応阻害作用が生じ、実際の値よりも低い値が出る。従
って、容器や器具等の固体表面に付着又は吸着されたβ
−グルカン又は／及びペプチドグリカンの量を測定しよ
うとする場合等にはそのような高濃度のものは好ましく
ない。上述した如きβ−グルカン又は／及びペプチドグ
リカンの測定法による測定時に阻害を生じるアルブミン
等の濃度はその種類により著しく異なる。即ち、例えば
ＨＳＡの場合には蛋白濃度が0.1mg/ml程度で阻害が起る
が、人血漿の場合には蛋白濃度１mg/ml程度で阻害が起
る。尚、単に洗浄又は溶出のみに使用する場合には高濃
度のものでも一向に差支えない。

【００２４】尚、アルブミン等による、β−グルカン又
は／及びペプチドグリカンの測定への阻害作用は、アル
ブミン等を予めオートクレーブ処理しておくことにより
ある程度回避し得る。この場合のオートクレーブの条件
としては、例えば通常用いられる温度（121℃程度）で1
5〜120分程度が挙げられる。このようなオートクレーブ
処理を行ったＨＳＡ溶液の場合には、阻害が起こる蛋白
濃度は1.0mg/ml程度（未処理の場合の約十倍濃度）とな
る。

【００２５】本発明の溶出方法により得られた溶出液中
のβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン量を測定す
る場合に用いられる試薬としては、例えば以下のような
ものが挙げられる。即ち、先ず、β−グルカン又は／及
びペプチドグリカンを測定するための試薬としては、例
えば昆虫の体液成分から調製されたβ−グルカン又は／
及びペプチドグリカンと特異的に反応する試薬が挙げら
れる。

【００２６】β−グルカンを測定するための試薬として
は、例えば昆虫の体液成分から調製されたβ−グルカン
と特異的に反応する試薬や、例えばリムルス属（Limulu
s），タキプレウス属（Tachypleus），或いはカルシノ
スコルピウス属（Carcinoscorpius）に属するカブトガ
ニの血球成分を含みβ−グルカンとは反応するがエンド
トキシンとは反応しない性質を有する試薬が挙げられ
る。尚、これら試薬は、目視にてβ−グルカンの存在を
確認できる試薬（例えば合成基質を用いる試薬等）でも
良い。これら試薬は市販されているものを適宜使用して
もよいし、また公知の方法により自製したものを使用し
てもよい。

【００２７】ペプチドグリカンを測定するための試薬と
しては、例えば昆虫の体液成分から調製されたペプチド
グリカンに対して特異的な試薬等が挙げられ、市販され
ているものを適宜使用してもよいし、また公知の方法に
より自製したものを使用してもよい。

【００２８】昆虫の体液成分から、上記した如きβ−グ
ルカン又は／及びペプチドグリカンを測定するための試
薬を調製する方法としては、例えば、β−グルカン測定
用試薬については特開昭63-141598号公報、ペプチドグ
リカン測定用試薬については特開昭63-141599号公報に
示されているような以下の方法が挙げられる。

【００２９】即ち、体液の得られる昆虫としては、特に
制限はないが、なるべく大型のもので飼育方法の確立し
ているものが望ましく、例えば、タバコスズメガ，カイ
コガ等の鱗翅類、センチニクバエ，イエバエ等の双翅
類、トノサマバッタ，エンマコオロギ等の直翅類、セン
ノキカミキリ等の甲虫類等が挙げられるが、これらに限
定されるものではない。体液としては体腔から得られる
ヘモリンパ（hemolymph）が最も得られやすくより一般
的である。体液を得る方法としては、例えば、昆虫を氷
上に置き動きを止めた後、トウキビ因子（サトウキビに
含まれるグルコース，アミノ酸などから成る高分子物
質）を不純物として含む蔗糖、またはトウキビ因子その
ものを含む生理食塩水を体腔に注射し、その後しばらく
放置して、体腔よりヘモリンパを集めるといった方法等
が挙げられる。ヘモリンパを遠心分離機にかけ、血球を
除いた後透析すれば血漿が得られ、この血漿中にはエン
ドトキシンとは反応しないがβ−グルカンと特異的に反
応して酵素活性を発現する物質（或は発現を誘引する物
質）と、ペプチドグリカンと特異的に反応して酵素活性
を発現する物質（或は発現を誘引する物質）とが共存し
ている。そのため、これはこのまま、β−グルカン又は
／及びペプチドグリカンを測定するための試薬として使
用することができる。

【００３０】また、これから、β−グルカン測定用試薬
を得ようとする場合には、上記血漿中よりペプチドグリ
カンと反応して酵素活性を発現する（或は発現を誘引す
る）物質を除去すれば、これをβ−グルカンと特異的に
反応する試薬とすることができる。また、ペプチドグリ
カン測定用試薬を得ようとする場合には、上記血漿中よ
りβ−グルカンと反応して酵素活性を発現する（或は発
現を誘引する）物質を除去すれば、これをペプチドグリ
カンと特異的に反応する試薬とすることができる。上記
血漿中からペプチドグリカンと反応して酵素活性を発現
する（或は発現を誘引する）物質又はβ−グルカンと反
応して酵素活性を発現する（或は発現を誘引する）物質
を除去する方法としては、一般に生化学の分野で用いら
れている分離精製法がいずれも挙げられるが、ペプチド
グリカンと反応して酵素活性を発現する（或は発現を誘
引する）物質を除去する場合にはペプチドグリカンを結
合させた担体を、また、β−グルカンと反応して酵素活
性を発現する（或は発現を誘引する）物質を除去する場
合にはβ−グルカンを結合させた担体を用いるアフィニ
ティークロマトグラフィーにより極めて容易に且つ効率
よく行うことができる。

【００３１】また、本発明の溶出方法により得られた溶
出液中のβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン量を
上記した如き昆虫体液由来の試薬を用いて測定する場合
の手法は、通常この分野で用いられる方法（例えば特開
昭63-141598号公報や特開昭63-141599号公報等に開示さ
れた方法）であれば特に限定されることなく使用可能で
ある。

【００３２】通常良く用いられる手法としては、例え
ば、溶出液の適当量と上記した如き昆虫由来の試薬の適
当量とを混合して一定時間反応させた後、反応液の色調
の変化の程度を目視にて判定し、それに基づいて溶出液
中のβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン量を半定
量する目視判定法や、マイクロプレートリーダー［例え
ばモレキュラーデバイス社製のサーモマックス（THERMO
max）等］やエンドトキシン測定装置（例えば和光純薬
工業(株)製のトキシノメーターET-301等）を用いて、溶
出液の適当量と上記した如き昆虫由来の試薬の適当量と
を混合して反応を開始させ、その反応の結果生じる色
素量を吸光度変化としてとらえ、吸光度が予め設定した
閾値に達するための時間を活性化時間として求めるか、
その反応の結果生じる色素量を透過光量の変化として
とらえ、透過光量が予め設定した閾値に減少するまでの
時間をゲル化時間として求めるかし、当該活性化時間又
はゲル化時間を指標に溶出液中のβ−グルカン又は／及
びペプチドグリカン量を定量する方法等が挙げられる。

【００３３】本発明の溶出用液は、固体の表面に付着又
は吸着されたβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン
を効果的に溶出するために用いられるものであり、その
構成要素の好ましい態様や具体例は上で述べたとおりで
ある。また、本発明の溶出液は、β−グルカン又は／及
びペプチドグリカンで汚染された容器や器具等の洗浄剤
にもなり得る。

【００３４】また、必然的に本発明の溶出方法はβ−グ
ルカン又は／及びペプチドグリカンで汚染された容器や
器具等の洗浄方法にもなり得る。

【００３５】本発明の洗浄方法の対象となる容器や器具
等としては、例えばディスポーザブル注射針、ディスポ
ーザブル注射筒、ディスポーザブル輸血セット及び輸液
セット、ディスポーザブル採血用器具、人工心肺用ディ
スポーザブルセット、医療用人工血管、人工心臓弁、心
臓ペースメーカー、透析型人工腎臓装置等の医療用具
や、β−グルカン又は／及びペプチドグリカン試験に使
用するディスポーザブル実験器具（滅菌済みピペット、
滅菌済み試験管、滅菌済みピペットチップ等）等が挙げ
られるがこれらに限定されるものではない。

【００３６】以下に、実施例を挙げて本発明を更に具体
的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定
されるものではない。

【００３７】

【実施例】

実施例１ 〔試薬〕 (１)ペプチドグリカン標準液 ミクロコッカス ルテウス（Micrococcus luteus）の乾
燥菌体１gを、シュレイファーらの方法（Schleifer,K.
H.,and Kandler,O.,Bacteriol.Rev.,36,407-477(197
2)）に準じて処理し、トリプシン処理細胞壁（ペプチド
グリカン）95mgを得た。この20mgを注射用水［大塚製薬
（株）製、ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工業(株)製）に
よりβ−グルカン又は／及びペプチドグリカンが検出さ
れないことを確認済み］20mlに加え、超音波処理により
分散させたものをペプチドグリカン標準液とした。尚、
これを使用するにあたっては、必要に応じて注射用水
［大塚製薬（株）製、ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工業
(株)製）によりβ−グルカン又は／及びペプチドグリカ
ンが検出されないことを確認済み］で適宜希釈して用い
た。 (２)β−グルカン又は／及びペプチドグリカン測定用試
薬 ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工業(株)製）を使用した。 (３)ＨＳＡ溶液（溶出用液） ＨＳＡ２５％溶液（カッター社製、注射用）を注射用水
［大塚製薬（株）製、ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工業
(株)製）によりβ−グルカン又は／及びペプチドグリカ
ンが検出されないことを確認済み］で２％まで希釈し、
121℃、20分間オートクレーブ処理した後、更に注射用
水で20倍に希釈したものをＨＳＡ溶液とした。尚、ＳＬ
Ｐ試薬セット（和光純薬工業(株)製）によりβ−グルカ
ン又は／及びペプチドグリカンが検出されないことを確
認した後に使用した。 (４)蒸留水 ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工業(株)製）によりβ−グ
ルカン又は／及びペプチドグリカンが検出されないこと
を確認した自製の蒸留水を使用した。

【００３８】〔操作〕予め乾熱滅菌処理（250℃、２時
間）したガラス製試験管に、ＨＳＡ溶液又は蒸留水５ml
を分注し、これに市販ピペットチップ（個別滅菌包装
品）を１本浸漬させ、攪拌後、室温で１時間静置して、
β−グルカン又は／及びペプチドグリカンの溶出を行っ
た。その後、溶液中からピペットチップを取り去り溶出
液を得た。この溶出液中のβ−グルカン又は／及びペプ
チドグリカン濃度を、トキシノメーターET-301（和光純
薬工業(株)）を用いて測定した。測定操作は常法に従っ
て以下のように行った。0.1mlのβ−グルカン又は／及
びペプチドグリカン測定用試薬に0.1mlの溶出液を加
え、攪拌後、30℃保温下に、上記混合液の透過光量が５
％減少するまでの時間（以下、Ｔａと略称する。）を測
定した。別に、注射用水とペプチドグリカン標準液を用
いて作成した各種濃度のペプチドグリカン溶液を検体と
して同様の測定を行い、ペプチドグリカン濃度とＴａと
の関係を表す検量線を作成した。この検量線にもとづい
て溶出液中のβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン
濃度を、ペプチドグリカン濃度として算出した。

【００３９】〔結果〕図１に、市販ピペットチップから
の溶出液中のペプチドグリカン濃度の測定結果を示す。
図１の結果から明らかな如く、ピペットチップに付着又
は吸着されたβ−グルカン又は／及びペプチドグリカン
は、蒸留水では殆ど溶出されないが、本発明のＨＳＡ溶
液を用いることにより、効率よく溶出し得ることが判
る。

【００４０】実施例２ 〔試薬〕 (１)ペプチドグリカン溶液 実施例１で調製したペプチドグリカン標準液を注射用水
で希釈して、１μg/mlの溶液としたものをペプチドグリ
カン溶液とした。 (２)β−グルカン又は／及びペプチドグリカン測定用試
薬 実施例１で用いたものと同じ。 (３)ＨＳＡ溶液 実施例１で用いたものと同じ。 (４)蒸留水 実施例１で用いたものと同じ。 〔操作〕予め乾熱滅菌処理（250℃、２時間）したガラ
ス製試験管に、ＨＳＡ溶液又は蒸留水４mlを分注し、こ
れを市販の使い捨て血清用ピペット（10ml用。個別滅菌
包装品）に吸引、吐出させる操作を２回行って溶出液を
得た。この溶出液中のβ−グルカン又は／及びペプチド
グリカン濃度をペプチドグリカン濃度として、実施例１
と同様の操作により求めた。図２に、市販の使い捨て血
清用ピペットからの溶出液中のペプチドグリカン濃度の
測定結果を示す。図２の結果から明らかな如く、使い捨
て血清用ピペットに付着又は吸着されたβ−グルカン又
は／及びペプチドグリカンは、蒸留水では殆ど溶出され
ないが、本発明のＨＳＡ溶液を用いることにより、効率
よく溶出し得ることが判る。

【００４１】実施例３ 〔試薬〕 (１)ペプチドグリカン溶液 実施例１で調製したペプチドグリカン標準液を注射用水
で希釈して、１μg/mlの溶液としたものをペプチドグリ
カン溶液とした。 (２)β−グルカン又は／及びペプチドグリカン測定用試
薬 実施例１で用いたものと同じ。 (３)ＨＳＡ溶液 実施例１で用いたものと同じ。 (４)蒸留水 実施例１で用いたものと同じ。 〔操作〕市販のガラス製試験管又はポリプロピレン製試
験管にペプチドグリカン溶液４mlを分注し、室温で２時
間放置した。その後、ペプチドグリカン溶液を除去し、
クリーンベンチ内で１２時間風乾した。次いで、これら
試験管にＨＳＡ溶液又は蒸留水２mlを分注し、攪拌後、
室温で１時間静置して、β−グルカン又は／及びペプチ
ドグリカンの溶出を行った。この溶液（溶出液）中のβ
−グルカン又は／及びペプチドグリカン濃度をペプチド
グリカン濃度として、実施例１と同様の操作により求め
た。 〔結果〕図３に、市販のガラス製試験管からの溶出液中
のペプチドグリカン濃度の測定結果を、また、図４に、
市販のポリプロピレン製試験管からの溶出液中のペプチ
ドグリカン濃度の測定結果を夫々示す。図３及び図４の
結果から明らかな如く、ガラス製試験管及びポリプロピ
レン製試験管に付着又は吸着されたβ−グルカン又は／
及びペプチドグリカンは、蒸留水では殆ど溶出されない
が、本発明のＨＳＡ溶液を用いることにより、効率よく
溶出し得ることが判る。

【００４２】実施例４ 〔試薬〕 (１)β−グルカン溶液 カードラン（β−グルカン、和光純薬工業（株）製）20
mgを0.25N NaOH溶液 20mlに溶解した後、これを注射用
水［大塚製薬（株）製、ＳＬＰ試薬セット（和光純薬工
業(株)製）によりβ−グルカン又は／及びペプチドグリ
カンが検出されないことを確認済み］で希釈して10ng/m
lの溶液としたものをβ−グルカン溶液とした。 (２)β−グルカン又は／及びペプチドグリカン測定用試
薬 実施例１で用いたものと同じ。 (３)ＨＳＡ溶液 実施例１で用いたものと同じ。 (４)蒸留水 実施例１で用いたものと同じ。 〔操作〕市販のポリスチレン製試験管又はポリプロピレ
ン製試験管にβ−グルカン溶液４mlを分注し、室温で２
時間放置した。その後、β−グルカン溶液を除去し、ク
リーンベンチ内で１２時間風乾した。次いで、これら試
験管にＨＳＡ溶液又は蒸留水２mlを分注し、室温で１時
間静置して、β−グルカン又は／及びペプチドグリカン
の溶出を行った。この溶液（溶出液）中のβ−グルカン
又は／及びペプチドグリカン濃度をβ−グルカン濃度と
して、以下の操作により求めた。0.1mlのβ−グルカン
又は／及びペプチドグリカン測定用試薬に0.1mlの溶出
液を加え、攪拌後、30℃保温下に、上記混合液の透過光
量が５％減少するまでの時間（以下、Ｔａと略称す
る。）を測定した。別に、注射用水と各種濃度のβ−グ
ルカン溶液を検体として同様の測定を行い、β−グルカ
ン濃度とＴａとの関係を表す検量線を作成した。この検
量線にもとづいて溶出液中のβ−グルカン又は／及びペ
プチドグリカン濃度を、β−グルカン濃度として算出し
た。 〔結果〕図５に、市販のポリスチレン製試験管からの溶
出液中のβ−グルカン濃度の測定結果を、また、図６
に、市販のポリプロピレン製試験管からの溶出液中のβ
−グルカン濃度の測定結果を夫々示す。図５及び図６の
結果から明らかな如く、ポリスチレン製試験管及びポリ
プロピレン製試験管に付着又は／吸着されたβ−グルカ
ン又は／及びペプチドグリカンは、蒸留水では殆ど溶出
されないが、本発明のＨＳＡ溶液を用いることにより、
効率よく溶出し得ることが判る。

【００４３】

【発明の効果】本発明は、容器、器具等の固体表面に付
着又は吸着されたβ−グルカン又は／及びペプチドグリ
カンを効率良く溶出する方法を提供するものであり、本
発明の溶出方法によれば従来の溶出方法では溶出困難で
あったものまで、簡便にかつ効果的に溶出できる点に顕
著な効果を奏するものであり、斯業に貢献するところ大
なる発明である。

【００４４】

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で得られた、市販のピペットチップか
らの溶出液中のペプチドグリカン濃度の測定結果を示
す。

【図２】実施例２で得られた、市販の使い捨て血清用ピ
ペットからの溶出液中のペプチドグリカン濃度の測定結
果を示す。

【図３】実施例３で得られた、市販のガラス製試験管か
らの溶出液中のペプチドグリカン濃度の測定結果を示
す。

【図４】実施例３で得られた、市販のポリプロピレン製
試験管からの溶出液中のペプチドグリカン濃度の測定結
果を示す。

【図５】実施例４で得られた、市販のポリスチレン製試
験管からの溶出液中のβ−グルカン濃度の測定結果を示
す。

【図６】実施例４で得られた、市販のポリプロピレン製
試験管からの溶出液中のβ−グルカン濃度の測定結果を
示す。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アルブミン及び／又はグロブリンを含
   んで成る、（１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及びペプ
   チドグリカン溶出用液。
2. 【請求項２】 アルブミンを含んで成る溶液である、請
   求項１に記載の溶出用液。
3. 【請求項３】 アルブミンが人血清アルブミンである、
   請求項１又は２に記載の溶出用液。
4. 【請求項４】 アルブミン及び／又はグロブリンを含む
   溶液を用いて処理することを特徴とする、（１→３）β
   −Ｄ−グルカン又は／及びペプチドグリカンの溶出方
   法。
5. 【請求項５】 （１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及び
   ペプチドグリカンで汚染された容器又は器具をアルブミ
   ン及び／又はグロブリンを含む溶液を用いて処理するこ
   とを特徴とする、容器又は器具の洗浄方法。
6. 【請求項６】 アルブミン及び／又はグロブリンを含ん
   で成る、（１→３）β−Ｄ−グルカン又は／及びペプチ
   ドグリカンで汚染された容器又は器具の洗浄剤。 【０００１】