JPH1053598A - 新規な１又は６−ヒドロキシル化ステロイド、それらの製造法、それらの薬剤としての使用及びそれらを含む製薬組成物 - Google Patents
新規な１又は６−ヒドロキシル化ステロイド、それらの製造法、それらの薬剤としての使用及びそれらを含む製薬組成物Info
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- JPH1053598A JPH1053598A JP9147069A JP14706997A JPH1053598A JP H1053598 A JPH1053598 A JP H1053598A JP 9147069 A JP9147069 A JP 9147069A JP 14706997 A JP14706997 A JP 14706997A JP H1053598 A JPH1053598 A JP H1053598A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な１又は６−ヒドロキシル化ステロイ
ド、それらの製造法及びそれらからなる薬剤を提供す
る。 【解決手段】 このステロイドは、一般式（Ｉ） 【化１】 （ここで、Ｒ1 は水素原子であり且つＲ2 はＯＲ6 基で
あるか、又はＲ1 はＯＲ6 基であり且つＲ2 は水素原子
であるかのいずれかであり、Ｒ6 は１〜１２個の炭素原
子を含有するアシル基又は水素原子を表わし、Ｒ3 は１
〜１２個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ4
は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ
5 はＲ6 と同一である。）を有する。これは、黄体ホル
モン様活性を有する。
ド、それらの製造法及びそれらからなる薬剤を提供す
る。 【解決手段】 このステロイドは、一般式（Ｉ） 【化１】 （ここで、Ｒ1 は水素原子であり且つＲ2 はＯＲ6 基で
あるか、又はＲ1 はＯＲ6 基であり且つＲ2 は水素原子
であるかのいずれかであり、Ｒ6 は１〜１２個の炭素原
子を含有するアシル基又は水素原子を表わし、Ｒ3 は１
〜１２個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ4
は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ
5 はＲ6 と同一である。）を有する。これは、黄体ホル
モン様活性を有する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、ステロイド化合
物に関する。
物に関する。
【０００２】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、新規な１又
は６−ヒドロキシル化ステロイド、それらの製造法、そ
れらの薬剤としての使用及びそれらを含む製薬組成物を
提供することを目的とする。
は６−ヒドロキシル化ステロイド、それらの製造法、そ
れらの薬剤としての使用及びそれらを含む製薬組成物を
提供することを目的とする。
【０００３】
【課題を解決するための手段】発明の概要 本発明の主題は、次の一般式（Ｉ）
【化３】 （ここで、Ｒ1 は水素原子であり且つＲ2 はＯＲ6 基で
あるか、又はＲ1 はＯＲ6 基であり且つＲ2 は水素原子
であるかのいずれかであり、Ｒ6 は１個以上のハロゲン
原子により置換されていてもよい１〜１２個の炭素原子
を含有するアシル基又は水素原子を表わし、Ｒ3 は１〜
１２個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ4 は
１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ5
はＲ6 と同一であっても異なっていてもよく、Ｒ6 と同
じ意味を有し、波線はＲ1 又はＲ2 がα又はβ位にある
こと及びＯＲ5 が２１Ｒ又は２１Ｓ位にあることを示
す。）の化合物にある。
あるか、又はＲ1 はＯＲ6 基であり且つＲ2 は水素原子
であるかのいずれかであり、Ｒ6 は１個以上のハロゲン
原子により置換されていてもよい１〜１２個の炭素原子
を含有するアシル基又は水素原子を表わし、Ｒ3 は１〜
１２個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ4 は
１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基であり、Ｒ5
はＲ6 と同一であっても異なっていてもよく、Ｒ6 と同
じ意味を有し、波線はＲ1 又はＲ2 がα又はβ位にある
こと及びＯＲ5 が２１Ｒ又は２１Ｓ位にあることを示
す。）の化合物にある。
【０００４】式（Ｉ）の化合物とは、その取り得る個々
の全ての異性体又はそれらの異性体の混合物を意味する
ものとする。
の全ての異性体又はそれらの異性体の混合物を意味する
ものとする。
【０００５】１〜１２個の炭素原子を含有するアルキル
基とは、次の基：メチル、エチル、プロピル、イソプロ
ピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチ
ル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，３−ジメ
チルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，
２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３
−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，２−ジメチルヘ
キシル、３，３−ジメチルヘキシル、３−メチル−３−
エチルペンチル、ノニル、２，２−ジメチルヘプチル又
はｎ−デシルを意味する。
基とは、次の基：メチル、エチル、プロピル、イソプロ
ピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチ
ル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，３−ジメ
チルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，
２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３
−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，２−ジメチルヘ
キシル、３，３−ジメチルヘキシル、３−メチル−３−
エチルペンチル、ノニル、２，２−ジメチルヘプチル又
はｎ−デシルを意味する。
【０００６】１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基
とは、次の基：メチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル又はｔ−ブチルを意味する。
とは、次の基：メチル、エチル、プロピル、イソプロピ
ル、ブチル、イソブチル又はｔ−ブチルを意味する。
【０００７】１〜１２個の炭素原子を含有するアシル基
とは、次の基：ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブ
チリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、スク
シニル、ピバロイル又はベンゾイルを意味する。
とは、次の基：ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブ
チリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、スク
シニル、ピバロイル又はベンゾイルを意味する。
【０００８】これらの基がハロゲン原子により置換され
ているときは、そらは好ましくは塩素、沃素又は弗素原
子である。クロルアセチル、ジクロルアセチル、トリク
ロルアセチル又はトリフルオルアセチルが挙げられる。
ているときは、そらは好ましくは塩素、沃素又は弗素原
子である。クロルアセチル、ジクロルアセチル、トリク
ロルアセチル又はトリフルオルアセチルが挙げられる。
【０００９】
【発明の実施の形態】第一の好ましい態様では、本発明
の主題は、Ｒ3 及びＲ4 がメチルである式（Ｉ）の化合
物にある。第二の好ましい態様では、本発明の主題は、
Ｒ1 が水素原子であり、Ｒ2 がヒドロキシル基である式
（Ｉ）の化合物にある。第三の好ましい態様では、本発
明の主題は、Ｒ1 がヒドロキシル基であり、Ｒ2 が水素
原子である式（Ｉ）の化合物にある。
の主題は、Ｒ3 及びＲ4 がメチルである式（Ｉ）の化合
物にある。第二の好ましい態様では、本発明の主題は、
Ｒ1 が水素原子であり、Ｒ2 がヒドロキシル基である式
（Ｉ）の化合物にある。第三の好ましい態様では、本発
明の主題は、Ｒ1 がヒドロキシル基であり、Ｒ2 が水素
原子である式（Ｉ）の化合物にある。
【００１０】第四の好ましい態様では、本発明の主題
は、化合物名が ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン（化合物Ａ）、又は ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン（化合物Ｂ）であり、
それらの立体異性体配置：１α−ＯＨ、１β−ＯＨ、６
α−ＯＨ若しくは６β−ＯＨのいずれか単独の形態で又
はそれらの混合物の形態にある前記の式（Ｉ）の化合物
にある。
は、化合物名が ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン（化合物Ａ）、又は ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン（化合物Ｂ）であり、
それらの立体異性体配置：１α−ＯＨ、１β−ＯＨ、６
α−ＯＨ若しくは６β−ＯＨのいずれか単独の形態で又
はそれらの混合物の形態にある前記の式（Ｉ）の化合物
にある。
【００１１】また、本発明の主題は、式（Ｉ）の化合物
の製造法にある。
の製造法にある。
【００１２】本発明に従うこの製造法は、次の一般式
（II）
（II）
【化４】 （ここで、Ｒ3 、Ｒ4 及び波線は前記の意味と同じ意味
を有する。）の化合物の生物学的転化を糸状菌の培養に
よって行い、次いで適当ならば１−ヒドロキシル化化合
物と６−ヒドロキシル化化合物との分離及び（又は）遊
離ヒドロキシル基のエステル化を行うことを特徴とす
る。
を有する。）の化合物の生物学的転化を糸状菌の培養に
よって行い、次いで適当ならば１−ヒドロキシル化化合
物と６−ヒドロキシル化化合物との分離及び（又は）遊
離ヒドロキシル基のエステル化を行うことを特徴とす
る。
【００１３】当業者に知られた糸状菌のうちでも、特に
下記の菌類が選択される。
下記の菌類が選択される。
【表１】
【００１４】菌株の出所 ＡＴＣＣ：アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョン、ロックビル、メリーランド州、米国。 ＭＭＰ：ミコセク・ドゥ・ミュゼーム・ディストワール
・ナチュレル、パリ。 ＮＲＲＬ：ノーザン・ユーチリゼーション・リサーチ・
アンド・デベロプメント・デビジョン、ペオリア、イリ
ノイ州、米国。
ョン、ロックビル、メリーランド州、米国。 ＭＭＰ：ミコセク・ドゥ・ミュゼーム・ディストワール
・ナチュレル、パリ。 ＮＲＲＬ：ノーザン・ユーチリゼーション・リサーチ・
アンド・デベロプメント・デビジョン、ペオリア、イリ
ノイ州、米国。
【００１５】ヒドロキシル化の実施は、菌類の培養を使
用するステロイドの微生物学的ヒドロキシル化を一般に
利用する方法（“ステロイド及びアルカロイドの微生物
学的転化”、Ｈ．イシズカ及びＡ．ナイトウ、発行所：
東京大学印刷所、スプリンガー・フェルラーク、ベルリ
ン、１９８１を参照。）に従って行われる。従って、最
も好ましい発酵条件は、まず、一般的な普通の予備試
験、例えば、栄養培地の最も望ましい選定、適当な基質
溶媒、基質の濃度、温度、曝気、ｐＨ及び発芽の最適な
期間のような技術条件、基質の添加並びに基質と微生物
との接触のような予備試験において分析的なルートで、
特に薄層クロマトグラフィー又はＨＰＬＣによって決定
される。
用するステロイドの微生物学的ヒドロキシル化を一般に
利用する方法（“ステロイド及びアルカロイドの微生物
学的転化”、Ｈ．イシズカ及びＡ．ナイトウ、発行所：
東京大学印刷所、スプリンガー・フェルラーク、ベルリ
ン、１９８１を参照。）に従って行われる。従って、最
も好ましい発酵条件は、まず、一般的な普通の予備試
験、例えば、栄養培地の最も望ましい選定、適当な基質
溶媒、基質の濃度、温度、曝気、ｐＨ及び発芽の最適な
期間のような技術条件、基質の添加並びに基質と微生物
との接触のような予備試験において分析的なルートで、
特に薄層クロマトグラフィー又はＨＰＬＣによって決定
される。
【００１６】栄養培地１リットル当たりほぼ４０〜２，
０００ｍｇの基質の濃度を使用するこが有利であること
がわかった。ｐＨ値は、好ましくは５〜７程度の値に調
節される。培地の温度は、２０〜４０℃程度、好ましく
は２５〜３５℃である。曝気のためには、培地ブイヨン
１リットル当たり毎分ほぼ１リットルの空気が提供され
る。基質の転化は、抽出された試料を薄層クロマトグラ
フィーを使用して又はＨＰＬＣを使用して分析すること
により有利にモニターされる。一般に、２４〜１４４時
間後に、十分な量のヒドロキシル化ステロイドが形成さ
れた。
０００ｍｇの基質の濃度を使用するこが有利であること
がわかった。ｐＨ値は、好ましくは５〜７程度の値に調
節される。培地の温度は、２０〜４０℃程度、好ましく
は２５〜３５℃である。曝気のためには、培地ブイヨン
１リットル当たり毎分ほぼ１リットルの空気が提供され
る。基質の転化は、抽出された試料を薄層クロマトグラ
フィーを使用して又はＨＰＬＣを使用して分析すること
により有利にモニターされる。一般に、２４〜１４４時
間後に、十分な量のヒドロキシル化ステロイドが形成さ
れた。
【００１７】本発明の製造法の生成物の単離、分離及び
精製は、それ自体知られた態様で行われる。例えば、製
造法の生成物は酢酸エチルのような有機溶媒により抽出
し、抽出物を蒸発し、分離し、生成物をカラムクロマト
グラフィーにより精製することができる。
精製は、それ自体知られた態様で行われる。例えば、製
造法の生成物は酢酸エチルのような有機溶媒により抽出
し、抽出物を蒸発し、分離し、生成物をカラムクロマト
グラフィーにより精製することができる。
【００１８】本発明のさらに特定の主題は、糸状菌が下
記の菌株：
記の菌株：
【表２】 から選択される前記の製造法にある。
【００１９】さらに、本発明の特定の主題は、式（II）
の化合物がトリメゲストン： ・［１７β−（Ｓ）］−１７−（２−ヒドロキシ−１−
オキソプロピル）−１７−メチルエストラ−４，９−ジ
エン−３−オンである前記の製造法にある。
の化合物がトリメゲストン： ・［１７β−（Ｓ）］−１７−（２−ヒドロキシ−１−
オキソプロピル）−１７−メチルエストラ−４，９−ジ
エン−３−オンである前記の製造法にある。
【００２０】また、本発明の全く特定の主題は、糸状菌
がクニンガメラ・バイネリ、モルチエレラ・イサベリナ
又はフザリウム・ロゼウムであり、式（II）の化合物が
トリメゲストンであり、これにより１−ヒドロキシル化
及び６−ヒドロキシル化誘導体： ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、及び ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン を得、次いでこれらを分離することを特徴とする、前記
の製造法にある。
がクニンガメラ・バイネリ、モルチエレラ・イサベリナ
又はフザリウム・ロゼウムであり、式（II）の化合物が
トリメゲストンであり、これにより１−ヒドロキシル化
及び６−ヒドロキシル化誘導体： ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、及び ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン を得、次いでこれらを分離することを特徴とする、前記
の製造法にある。
【００２１】さらに、本発明の全く特定の主題は、糸状
菌がクニンガメラ・バイネリ ＡＴＣＣ９２４４であ
り、式（II）の化合物がトリメゲストンであり、これに
より１−ヒドロキシル化誘導体： ・［１α，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１β，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン を単独で又は混合物として得ることを特徴とする、前記
の製造法にある。
菌がクニンガメラ・バイネリ ＡＴＣＣ９２４４であ
り、式（II）の化合物がトリメゲストンであり、これに
より１−ヒドロキシル化誘導体： ・［１α，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１β，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン を単独で又は混合物として得ることを特徴とする、前記
の製造法にある。
【００２２】遊離ヒドロキシル基の場合により行う次の
エステル化は、ステロイドの化学において第二及び第三
ヒドロキシル基をエステル化するのに普通に使用されて
いる方法に従って行われる。適当なエステル化法として
は、例えば、塩基性触媒、例えば、重炭酸ナトリウム若
しくはカリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム若し
くはカリウム、ピリジン、ルチジン、コリジン又は４−
ジメチルアミノピリジンのような塩基の存在下にステロ
イドと酸無水物又はクロリドとを反応させることが挙げ
られる。
エステル化は、ステロイドの化学において第二及び第三
ヒドロキシル基をエステル化するのに普通に使用されて
いる方法に従って行われる。適当なエステル化法として
は、例えば、塩基性触媒、例えば、重炭酸ナトリウム若
しくはカリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム若し
くはカリウム、ピリジン、ルチジン、コリジン又は４−
ジメチルアミノピリジンのような塩基の存在下にステロ
イドと酸無水物又はクロリドとを反応させることが挙げ
られる。
【００２３】一般式（Ｉ）の化合物は、有用な薬理学的
性質、特に黄体ホルモン様活性を有する。さらに、これ
らの化合物は、エストロゲン、アンドロゲン、グルココ
ルチコイド及びミネラロコルチコイド受容体に対して親
和性を有しない。
性質、特に黄体ホルモン様活性を有する。さらに、これ
らの化合物は、エストロゲン、アンドロゲン、グルココ
ルチコイド及びミネラロコルチコイド受容体に対して親
和性を有しない。
【００２４】一般式（Ｉ）の化合物は、黄体不全に起因
する婦人科の障害： ・排卵障害に起因する月経の不規則、 ・月経困難症、 ・月経前症候群、 ・乳房痛、 ・線維腫、閉経障害の機能性出血及び月経過多、 ・不妊症、 ・卵巣の不活性による卵巣ジストロフィー の治療に、又は乳房及び子宮の癌の治療に使用すること
ができる。
する婦人科の障害： ・排卵障害に起因する月経の不規則、 ・月経困難症、 ・月経前症候群、 ・乳房痛、 ・線維腫、閉経障害の機能性出血及び月経過多、 ・不妊症、 ・卵巣の不活性による卵巣ジストロフィー の治療に、又は乳房及び子宮の癌の治療に使用すること
ができる。
【００２５】一般式（Ｉ）の化合物とエストロゲンとの
組合せは、新規であって、本発明の主題の一つを構成す
る。これは、閉経と関係するホルモン補充治療におい
て、特に骨粗鬆症の予防に又は治療に有用性を有する。
好ましいエストロゲンのうちでも、１７β−エストラジ
オール及びそのエステル類、たとえばエストラジオール
バレレート、カプリオネート、デカノエート及びアセテ
ート、エチニルエストラジオール、エストロン、“エキ
ニン起源”のエストロゲン、例えばプレマリン（登録商
標）、又はこれらの化合物の組合せが挙げられる。
組合せは、新規であって、本発明の主題の一つを構成す
る。これは、閉経と関係するホルモン補充治療におい
て、特に骨粗鬆症の予防に又は治療に有用性を有する。
好ましいエストロゲンのうちでも、１７β−エストラジ
オール及びそのエステル類、たとえばエストラジオール
バレレート、カプリオネート、デカノエート及びアセテ
ート、エチニルエストラジオール、エストロン、“エキ
ニン起源”のエストロゲン、例えばプレマリン（登録商
標）、又はこれらの化合物の組合せが挙げられる。
【００２６】また、エストロゲンと一般式（Ｉ）の化合
物との組合せは、避妊薬としての用途も有する。この場
合に、好ましいエストロゲンは、エチニルエストラジオ
ールである。
物との組合せは、避妊薬としての用途も有する。この場
合に、好ましいエストロゲンは、エチニルエストラジオ
ールである。
【００２７】従って、本発明の主題は、一般式（Ｉ）の
化合物からなる薬剤にある。また、本発明の主題は、エ
ストロゲンと一般式（Ｉ）の化合物との組合せからなる
薬剤にあるさらに、本発明の特定の主題は、前記のよう
な化合物Ａ及びＢからなる薬剤にある。
化合物からなる薬剤にある。また、本発明の主題は、エ
ストロゲンと一般式（Ｉ）の化合物との組合せからなる
薬剤にあるさらに、本発明の特定の主題は、前記のよう
な化合物Ａ及びＢからなる薬剤にある。
【００２８】したがって、次の化合物： ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン （これらの化合物は、それらの立体異性体配置：１α−
ＯＨ、１β−ＯＨ、６α−ＯＨ若しくは６β−ＯＨのい
ずれか単独の形態又はそれらの混合物の形態にあり得
る。）は、１７−エストラジオールと組合せることがで
き、しかしてこれは本発明の特定の主題を構成する。従
って、本発明のさらに特定の主題は、このような組合せ
からなる薬剤にある。
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン （これらの化合物は、それらの立体異性体配置：１α−
ＯＨ、１β−ＯＨ、６α−ＯＨ若しくは６β−ＯＨのい
ずれか単独の形態又はそれらの混合物の形態にあり得
る。）は、１７−エストラジオールと組合せることがで
き、しかしてこれは本発明の特定の主題を構成する。従
って、本発明のさらに特定の主題は、このような組合せ
からなる薬剤にある。
【００２９】有効薬量は、治療すべき疾病及び投与経路
によって変わる。これは、例えば、成人の場合に指示に
従って経口投与で１日当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇであ
ろう。
によって変わる。これは、例えば、成人の場合に指示に
従って経口投与で１日当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇであ
ろう。
【００３０】本発明は、前記のような薬剤の少なくとも
１種を活性成分として含有する製薬組成物まで及ぶ。こ
れらの製薬組成物は、消化器経路で、非経口的に又は局
所経路で、例えば皮下経路で使用することができる。こ
れらの製薬組成物は、固体でも液体でもよく、人の医薬
として慣用されている製剤形状で、例えば無味の若しく
は糖衣錠剤、カプセル、顆粒、座薬、丸薬、注射用調合
剤、軟膏、クリーム、ゲル、微小球、ナノスフィアー、
インプラント、パッチの形状で提供できる。活性成分
は、これらの製薬組成物に通常使用される補助剤、例え
ばタルク、アラビアゴム、ラクトース、でんぷん、ステ
アリン酸マグネシウム、ココアバター、水性若しくは非
水性のビヒクル、動物性若しくは植物性の脂肪物質、パ
ラフィン誘導体、グリコール類、各種の湿潤、分散若し
くは乳化剤、保存剤と配合することができる。
１種を活性成分として含有する製薬組成物まで及ぶ。こ
れらの製薬組成物は、消化器経路で、非経口的に又は局
所経路で、例えば皮下経路で使用することができる。こ
れらの製薬組成物は、固体でも液体でもよく、人の医薬
として慣用されている製剤形状で、例えば無味の若しく
は糖衣錠剤、カプセル、顆粒、座薬、丸薬、注射用調合
剤、軟膏、クリーム、ゲル、微小球、ナノスフィアー、
インプラント、パッチの形状で提供できる。活性成分
は、これらの製薬組成物に通常使用される補助剤、例え
ばタルク、アラビアゴム、ラクトース、でんぷん、ステ
アリン酸マグネシウム、ココアバター、水性若しくは非
水性のビヒクル、動物性若しくは植物性の脂肪物質、パ
ラフィン誘導体、グリコール類、各種の湿潤、分散若し
くは乳化剤、保存剤と配合することができる。
【００３１】本発明に従う製造法の出発物質として使用
される一般式（II）の化合物は、既知である（ヨーロッ
パ特許ＥＰ．０００７８２３）。本発明に従う製造法の
過程で使用される菌株も既知である。
される一般式（II）の化合物は、既知である（ヨーロッ
パ特許ＥＰ．０００７８２３）。本発明に従う製造法の
過程で使用される菌株も既知である。
【００３２】
【実施例】以下の実施例は本発明を例示するものであっ
て、これを制限するものではない。
て、これを制限するものではない。
【００３３】例１：１α−ＯＨ−トリメゲストンの産生
／精製 蒸留水１リットル当たり、２０ｇのグルコース、５ｇの
すい臓ペプトン、５ｇの酵母エキス、５ｇのモルトエキ
ス及び２０ｇのバクトアガールよりなる固形栄養培地に
クニンガメラ・バイネリ（Cuninghamella baineri)ＡＴ
ＣＣ９２４４の凍結乾燥菌株を接種する。全体を加熱室
において無菌条件下で２５℃で７日間インキュベートす
る。７日後に、胞子を収穫する。次いで、これらの新鮮
な胞子を使用して、２個の２リットルのエーレンメイヤ
ーフラスコであってそれぞれにオートクレーブで３０分
間滅菌した８００ｍｌの栄養溶液を入れたものに接種す
る。この栄養培地は、９００ｍｌの蒸留水に対して１０
ｇのコーンスティープ、２ｇのＮａＮＯ3 、０．５ｇの
ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０２ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ
2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌを含有した。接種の時点で、無
菌の燐酸塩緩衝溶液（４０ｍｌの水に２ｇのＫ2 ＨＰＯ
4 及び１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を含有）、そして３０ｇのグ
ルコースを含有する６０ｍｌの無菌の水溶液としての栄
養補給物を添加する。培養物を回転振盪機において２０
０ｒｐｍで撹拌しながら２７℃で発育させる。６５時間
後に、４００ｍｇのトリメゲストンを５ｍｌの９９％エ
タノールに溶解してなる溶液をそれぞれのエーレンメイ
ヤーフラスコに添加する。
／精製 蒸留水１リットル当たり、２０ｇのグルコース、５ｇの
すい臓ペプトン、５ｇの酵母エキス、５ｇのモルトエキ
ス及び２０ｇのバクトアガールよりなる固形栄養培地に
クニンガメラ・バイネリ（Cuninghamella baineri)ＡＴ
ＣＣ９２４４の凍結乾燥菌株を接種する。全体を加熱室
において無菌条件下で２５℃で７日間インキュベートす
る。７日後に、胞子を収穫する。次いで、これらの新鮮
な胞子を使用して、２個の２リットルのエーレンメイヤ
ーフラスコであってそれぞれにオートクレーブで３０分
間滅菌した８００ｍｌの栄養溶液を入れたものに接種す
る。この栄養培地は、９００ｍｌの蒸留水に対して１０
ｇのコーンスティープ、２ｇのＮａＮＯ3 、０．５ｇの
ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０２ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ
2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌを含有した。接種の時点で、無
菌の燐酸塩緩衝溶液（４０ｍｌの水に２ｇのＫ2 ＨＰＯ
4 及び１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を含有）、そして３０ｇのグ
ルコースを含有する６０ｍｌの無菌の水溶液としての栄
養補給物を添加する。培養物を回転振盪機において２０
０ｒｐｍで撹拌しながら２７℃で発育させる。６５時間
後に、４００ｍｇのトリメゲストンを５ｍｌの９９％エ
タノールに溶解してなる溶液をそれぞれのエーレンメイ
ヤーフラスコに添加する。
【００３４】使用した基質が全部転化した（７２時間の
接触）後、インキュベート媒質をろ過し、次いでこのろ
液を大過剰のＮａＣｌの添加により飽和させる。次いで
ＮａＣｌで飽和された溶液を２５０ｍｌの酢酸エチルを
使用して撹拌しながら３回抽出する。ＭｇＳＯ4 で乾燥
した後、抽出物を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させ、
９６５ｍｇの黄色油状物を得た。この油状物を塩化メチ
レン／イソプロパノール混合物（９５：５）を使用して
６０Ｈシリカゲルカラム（メルク社、７０〜２３０メッ
シュ）でクロマトグラフィーする。５個の主要画分を得
た。化合物Ａの大部分を含有する２０９ｍｇの画分を、
セミ分取高圧液体クロマトグラフィー（２５０×２１．
２ｍｍ）によりＣ１８結合逆転相でメタノール／水混合
物（５０／５０）を使用して精製する。４０℃の浴温度
で溶媒を真空下に蒸発させた後、８４ｍｇの［１α，１
７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−ヒドロ
キシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエストラ−
４，９−ジエン−３−オン（化合物Ａ）を９６％よりも
高いクロマトグラフィー純度で得た。1Ｈ及び13ＣＮＭ
Ｒ分析は、後記の表１及び表２を参照されたい。
接触）後、インキュベート媒質をろ過し、次いでこのろ
液を大過剰のＮａＣｌの添加により飽和させる。次いで
ＮａＣｌで飽和された溶液を２５０ｍｌの酢酸エチルを
使用して撹拌しながら３回抽出する。ＭｇＳＯ4 で乾燥
した後、抽出物を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させ、
９６５ｍｇの黄色油状物を得た。この油状物を塩化メチ
レン／イソプロパノール混合物（９５：５）を使用して
６０Ｈシリカゲルカラム（メルク社、７０〜２３０メッ
シュ）でクロマトグラフィーする。５個の主要画分を得
た。化合物Ａの大部分を含有する２０９ｍｇの画分を、
セミ分取高圧液体クロマトグラフィー（２５０×２１．
２ｍｍ）によりＣ１８結合逆転相でメタノール／水混合
物（５０／５０）を使用して精製する。４０℃の浴温度
で溶媒を真空下に蒸発させた後、８４ｍｇの［１α，１
７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−ヒドロ
キシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエストラ−
４，９−ジエン−３−オン（化合物Ａ）を９６％よりも
高いクロマトグラフィー純度で得た。1Ｈ及び13ＣＮＭ
Ｒ分析は、後記の表１及び表２を参照されたい。
【００３５】例２：６β−ＯＨ−トリメゲストンの産生
／精製 蒸留水１リットル当たり、２０ｇのグルコース、５ｇの
すい臓ペプトン、５ｇの酵母エキス、５ｇのモルトエキ
ス及び２０ｇのバクトアガールよりなる固形栄養培地に
モルチエレラ・イサベリナ（Mortierella isabellina）
（ＮＲＲＬ１７５７）の凍結乾燥菌株を接種する。全体
を加熱室において無菌条件下で２５℃で７日間インキュ
ベートする。７日後に、胞子を収穫する。次いで、これ
らの新鮮な胞子を使用して、５個の２４０ｍｌのエーレ
ンメイヤーフラスコであってそれぞれにオートクレーブ
で３０分間滅菌した１００ｍｌの栄養溶液を入れたもの
に接種する。この栄養培地は、９００ｍｌの蒸留水に対
して１０ｇのコーンスティープ、２ｇのＮａＮＯ3 、
０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０２ｇのＦｅＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌを含有した。接種の
時点で、無菌の燐酸塩緩衝溶液（４０ｍｌの水に２ｇの
Ｋ2 ＨＰＯ4 及び１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を含有）、そして
３０ｇのグルコースを含有する６０ｍｌの無菌の水溶液
としての栄養補給物を添加する。培養物を回転振盪機で
撹拌しながら２７℃で発育させる。６０〜６６時間後
に、５０ｍｇのトリメゲストンを１ｍｌの９９％エタノ
ールに溶解してなる溶液をそれぞれのエーレンメイヤー
フラスコに添加する。
／精製 蒸留水１リットル当たり、２０ｇのグルコース、５ｇの
すい臓ペプトン、５ｇの酵母エキス、５ｇのモルトエキ
ス及び２０ｇのバクトアガールよりなる固形栄養培地に
モルチエレラ・イサベリナ（Mortierella isabellina）
（ＮＲＲＬ１７５７）の凍結乾燥菌株を接種する。全体
を加熱室において無菌条件下で２５℃で７日間インキュ
ベートする。７日後に、胞子を収穫する。次いで、これ
らの新鮮な胞子を使用して、５個の２４０ｍｌのエーレ
ンメイヤーフラスコであってそれぞれにオートクレーブ
で３０分間滅菌した１００ｍｌの栄養溶液を入れたもの
に接種する。この栄養培地は、９００ｍｌの蒸留水に対
して１０ｇのコーンスティープ、２ｇのＮａＮＯ3 、
０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０２ｇのＦｅＳ
Ｏ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌを含有した。接種の
時点で、無菌の燐酸塩緩衝溶液（４０ｍｌの水に２ｇの
Ｋ2 ＨＰＯ4 及び１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を含有）、そして
３０ｇのグルコースを含有する６０ｍｌの無菌の水溶液
としての栄養補給物を添加する。培養物を回転振盪機で
撹拌しながら２７℃で発育させる。６０〜６６時間後
に、５０ｍｇのトリメゲストンを１ｍｌの９９％エタノ
ールに溶解してなる溶液をそれぞれのエーレンメイヤー
フラスコに添加する。
【００３６】使用した基質が全部転化した（４８時間の
接触）後、インキュベート媒質を布フィルターでろ過し
て発酵ブイヨンの菌糸を分離する。次いで、菌糸を蒸留
水により十分に洗浄する。次いで、洗浄のろ液とろ過さ
れた発酵ブイヨンを一緒にする。洗浄のろ液とろ過され
た発酵ブイヨンとの混合物を大過剰のＮａＣｌの添加に
より飽和させる。次いで、ＮａＣｌで飽和された溶液を
２５０ｍｌの酢酸エチルを使用して撹拌しながら３回抽
出する。抽出物を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させ
る。発酵から生じた第二生成物の抽出物を清浄にするた
めに、塩化メチレン／メタール混合物（９５：５）を使
用して６０Ｈシリカゲルカラム（メルク社、２３０〜４
００メッシュ）でクロマトグラフィーを行う。得られた
画分を油状物の外観を有する単一の画分として集める。
最後に、メタノール／水混合物（６０／４０）を使用し
てセミ分取高圧液体クロマトグラフィー（２５０×２
１．２ｍｍ）によりＣ１８結合逆転相で精製を行う。有
用画分の溶媒を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させた
後、２１ｍｇの［６β，１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロ
キシ−１７−（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）
−１７−メチルエストラ−４，９−ジエン−３−オン
（化合物Ｂ）を９０％よりも高いクロマトグラフィー純
度で得た。1Ｈ及び13ＣＮＭＲ分析は、後記の表１及び
表２を参照されたい。
接触）後、インキュベート媒質を布フィルターでろ過し
て発酵ブイヨンの菌糸を分離する。次いで、菌糸を蒸留
水により十分に洗浄する。次いで、洗浄のろ液とろ過さ
れた発酵ブイヨンを一緒にする。洗浄のろ液とろ過され
た発酵ブイヨンとの混合物を大過剰のＮａＣｌの添加に
より飽和させる。次いで、ＮａＣｌで飽和された溶液を
２５０ｍｌの酢酸エチルを使用して撹拌しながら３回抽
出する。抽出物を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させ
る。発酵から生じた第二生成物の抽出物を清浄にするた
めに、塩化メチレン／メタール混合物（９５：５）を使
用して６０Ｈシリカゲルカラム（メルク社、２３０〜４
００メッシュ）でクロマトグラフィーを行う。得られた
画分を油状物の外観を有する単一の画分として集める。
最後に、メタノール／水混合物（６０／４０）を使用し
てセミ分取高圧液体クロマトグラフィー（２５０×２
１．２ｍｍ）によりＣ１８結合逆転相で精製を行う。有
用画分の溶媒を４０℃の浴温度で真空下に蒸発させた
後、２１ｍｇの［６β，１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロ
キシ−１７−（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）
−１７−メチルエストラ−４，９−ジエン−３−オン
（化合物Ｂ）を９０％よりも高いクロマトグラフィー純
度で得た。1Ｈ及び13ＣＮＭＲ分析は、後記の表１及び
表２を参照されたい。
【００３７】例３：１α−ＯＨ−トリメゲストン及び６
β−ＯＨ−トリメゲストンの産生／精製 それぞれが９０ｍｌの栄養溶液Ｎｏ．１を入れてある５
個の５００ｍｌのエーレンメイヤーフラスコを用意す
る。この栄養培地は、１０ｇのコーンスティープ、２ｇ
のＮａＮＯ3 、０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．
０２ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌ及び
９００ｍｌとするに要する量の蒸留水を含有する。同様
に、１０ｇのＫ2 ＨＰＯ4 、５ｇのＫＨ2 ＰＯ4 及び２
００ｍｌにするのに要する量の脱塩水を含有する栄養溶
液Ｎｏ．２を入れたショットフラスコを用意する。ま
た、１５０ｇのグルコースと３００ｍｌにするに要する
量の脱塩水を含有する栄養溶液Ｎｏ．３を入れたショッ
トフラスコを用意する。実施するには、１５０ｇのグル
コースを１５０ｍｌの脱塩水に強く撹拌しながら加温し
ながら溶解する。完全に溶解した後、容積を３００ｍｌ
の試験容積に調節する。５個のエーレンメイヤーフラス
コ及び２個のショットフラスコをオートクレーブで１２
１℃で３０分間滅菌する。９０ｍｌの栄養栄養溶液Ｎ
ｏ．１を入れてあるエーレンメイヤーフラスコのそれぞ
れに、予備培養物を播種する直前に、４ｍｌの栄養溶液
Ｎｏ．２及び６ｍｌの栄養溶液Ｎｏ．３を無菌状態で添
加する。次いで、１ｍｌの菌株フザリウム・ロゼウム
（Fusarium roseum ）（ＡＴＣＣ１４７１７）の冷凍接
種物により接種を行う。５個のエーレンメイヤーフラス
コを、２．５ｃｍの軌道寸法を有する軌道型振盪機にお
いて２７℃の温度で２００ｒｐｍで４８時間撹拌する。
β−ＯＨ−トリメゲストンの産生／精製 それぞれが９０ｍｌの栄養溶液Ｎｏ．１を入れてある５
個の５００ｍｌのエーレンメイヤーフラスコを用意す
る。この栄養培地は、１０ｇのコーンスティープ、２ｇ
のＮａＮＯ3 、０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．
０２ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．５ｇのＫＣｌ及び
９００ｍｌとするに要する量の蒸留水を含有する。同様
に、１０ｇのＫ2 ＨＰＯ4 、５ｇのＫＨ2 ＰＯ4 及び２
００ｍｌにするのに要する量の脱塩水を含有する栄養溶
液Ｎｏ．２を入れたショットフラスコを用意する。ま
た、１５０ｇのグルコースと３００ｍｌにするに要する
量の脱塩水を含有する栄養溶液Ｎｏ．３を入れたショッ
トフラスコを用意する。実施するには、１５０ｇのグル
コースを１５０ｍｌの脱塩水に強く撹拌しながら加温し
ながら溶解する。完全に溶解した後、容積を３００ｍｌ
の試験容積に調節する。５個のエーレンメイヤーフラス
コ及び２個のショットフラスコをオートクレーブで１２
１℃で３０分間滅菌する。９０ｍｌの栄養栄養溶液Ｎ
ｏ．１を入れてあるエーレンメイヤーフラスコのそれぞ
れに、予備培養物を播種する直前に、４ｍｌの栄養溶液
Ｎｏ．２及び６ｍｌの栄養溶液Ｎｏ．３を無菌状態で添
加する。次いで、１ｍｌの菌株フザリウム・ロゼウム
（Fusarium roseum ）（ＡＴＣＣ１４７１７）の冷凍接
種物により接種を行う。５個のエーレンメイヤーフラス
コを、２．５ｃｍの軌道寸法を有する軌道型振盪機にお
いて２７℃の温度で２００ｒｐｍで４８時間撹拌する。
【００３８】次いで、この予備培養物を使用して、栄養
溶液Ａ、即ち、３０ｇのコーンスティープ理カー、６ｇ
のＮａＮＯ3 、１．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．
０６ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、１．５ｇのＫＣｌ及び
２６５０ｍｌとするに要する量の蒸留水を入れてある３
リットルの発酵器に接種する。次いで、発酵器をオート
クレーブで１２１℃で４５分間滅菌する。次いで、３０
ｍｌの溶液Ｂを入れた５００ｍｌの導入フラスコを準備
する。これは、次のように調製する。１５０ｍｌの蒸留
水を磁気撹拌機を収納した５００ｍｌのビーカーに入
れ、加温しながら撹拌する。次いで、９０ｇのグルコー
スをゆっくりと導入する。完全に溶解した後、６ｇのＫ
2 ＨＰＯ4 、次いで３ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を添加する。蒸
留水により容積（試験）を３００ｍｌにする。次いで、
フラスコをオートクレーブで１２１℃で３０分間滅菌す
る。播種する前に、３００ｍｌの溶液Ｂを発酵器に無菌
状態で導入する。次いで、接種用フラスコを使用して５
０ｍｌの予備培養物によって接種を行う。発酵は、２７
℃の温度に、０．３バールの圧力、２００ｒｐｍの初期
撹拌及び９０ｎｌ／ｈ、即ち０．５０ｖｖｍの曝気量で
行う。酸素の分圧は５０％に調節し、ｐＨは１Ｍ硫酸を
使用して２８時間まで６．５に調節する。次いで、生物
学的転化の終了まで自由に発育させる。
溶液Ａ、即ち、３０ｇのコーンスティープ理カー、６ｇ
のＮａＮＯ3 、１．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．
０６ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、１．５ｇのＫＣｌ及び
２６５０ｍｌとするに要する量の蒸留水を入れてある３
リットルの発酵器に接種する。次いで、発酵器をオート
クレーブで１２１℃で４５分間滅菌する。次いで、３０
ｍｌの溶液Ｂを入れた５００ｍｌの導入フラスコを準備
する。これは、次のように調製する。１５０ｍｌの蒸留
水を磁気撹拌機を収納した５００ｍｌのビーカーに入
れ、加温しながら撹拌する。次いで、９０ｇのグルコー
スをゆっくりと導入する。完全に溶解した後、６ｇのＫ
2 ＨＰＯ4 、次いで３ｇのＫＨ2 ＰＯ4 を添加する。蒸
留水により容積（試験）を３００ｍｌにする。次いで、
フラスコをオートクレーブで１２１℃で３０分間滅菌す
る。播種する前に、３００ｍｌの溶液Ｂを発酵器に無菌
状態で導入する。次いで、接種用フラスコを使用して５
０ｍｌの予備培養物によって接種を行う。発酵は、２７
℃の温度に、０．３バールの圧力、２００ｒｐｍの初期
撹拌及び９０ｎｌ／ｈ、即ち０．５０ｖｖｍの曝気量で
行う。酸素の分圧は５０％に調節し、ｐＨは１Ｍ硫酸を
使用して２８時間まで６．５に調節する。次いで、生物
学的転化の終了まで自由に発育させる。
【００３９】４６時間の活発な増殖過程の後に、６ｇの
トリメゲストンを７０ｍｌのアセトンに溶解し、次いで
これを無菌状態で細胞懸濁液に添加する。次いで、培養
を同じ条件下で継続させる。９６時間後に、発酵を止め
る。次いで、布フィルターによりろ過して発酵ブイヨン
から菌糸体を分離する。次いで菌糸体を蒸留水で十分に
洗浄する。次いで、洗浄のろ液とろ過された発酵ブイヨ
ウンを一緒にする。次いで、ＮａＣｌにより飽和させた
溶液を５００ｍｌの酢酸エチルで３回、次いで５００ｍ
ｌの塩化メチレンにより１回抽出する。有機画分を集
め、４０℃の浴温度で真空下に蒸留乾固させる。得られ
た乾燥抽出物を、塩化メチレン／メタノール混合物（９
５−５）を使用して、１０μの球状シリカで分取高圧液
体クロマトグラフィーにより正常相で精製する。いくつ
かの画分を得たが、そのうちの２個が化合物Ａ及び化合
物Ｂを含有する。溶媒を４０℃の浴温度で真空下に蒸発
させた後、次の物質： ・［１α，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン／１７β−エス
トラジオール（化合物Ａ）、及び ・［６β，１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン／１７β−エス
トラジオール（化合物Ｂ） が９０％よりも高いクロマトグラフィー純度で得られ
た。1Ｈ及び13ＣＮＭＲ分析は、後記の表１及び表２を
参照されたい。
トリメゲストンを７０ｍｌのアセトンに溶解し、次いで
これを無菌状態で細胞懸濁液に添加する。次いで、培養
を同じ条件下で継続させる。９６時間後に、発酵を止め
る。次いで、布フィルターによりろ過して発酵ブイヨン
から菌糸体を分離する。次いで菌糸体を蒸留水で十分に
洗浄する。次いで、洗浄のろ液とろ過された発酵ブイヨ
ウンを一緒にする。次いで、ＮａＣｌにより飽和させた
溶液を５００ｍｌの酢酸エチルで３回、次いで５００ｍ
ｌの塩化メチレンにより１回抽出する。有機画分を集
め、４０℃の浴温度で真空下に蒸留乾固させる。得られ
た乾燥抽出物を、塩化メチレン／メタノール混合物（９
５−５）を使用して、１０μの球状シリカで分取高圧液
体クロマトグラフィーにより正常相で精製する。いくつ
かの画分を得たが、そのうちの２個が化合物Ａ及び化合
物Ｂを含有する。溶媒を４０℃の浴温度で真空下に蒸発
させた後、次の物質： ・［１α，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン／１７β−エス
トラジオール（化合物Ａ）、及び ・［６β，１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン／１７β−エス
トラジオール（化合物Ｂ） が９０％よりも高いクロマトグラフィー純度で得られ
た。1Ｈ及び13ＣＮＭＲ分析は、後記の表１及び表２を
参照されたい。
【００４０】下記の表１は、トリメゲストンの２個の代
謝産物の 1ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3 、ｐｐ
ｍで表わしたｄ、Ｈｚで表わしたＪ）を示す。この表
は、得られた結果を要約する。記載した大部分の帰属化
は、２Ｄ １Ｈ−１Ｈ又は１Ｈ−１３Ｃの相関関係の研
究の後に行った。
謝産物の 1ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3 、ｐｐ
ｍで表わしたｄ、Ｈｚで表わしたＪ）を示す。この表
は、得られた結果を要約する。記載した大部分の帰属化
は、２Ｄ １Ｈ−１Ｈ又は１Ｈ−１３Ｃの相関関係の研
究の後に行った。
【００４１】
【表３】
【００４２】下記の表２は、トリメゲストンの２個の代
謝産物の 1ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3 ）を示
す。
謝産物の 1ＨＮＭＲ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3 ）を示
す。
【００４３】
【表４】
【００４４】本発明の化合物の薬理学的研究 １）ホルモン受容体に対する本発明の化合物の活性の研
究 ヒト組替え型受容体（ＨＧＲ、ＨＰＲ、ＨＡＲ、ＨＭ
Ｒ、ＨＥＲ）を使用する。
究 ヒト組替え型受容体（ＨＧＲ、ＨＰＲ、ＨＡＲ、ＨＭ
Ｒ、ＨＥＲ）を使用する。
【００４５】ヒトプロゲステロン受容体（ＨＰＲ） Ｎ．Ｒ．ウエッブ他により報告された一般的方法論（J.
of Methods in Celland Molecular Biology (1990), V
ol.2, No.4, 173-188) に従って、昆虫−バキュロウイ
ルスの細胞系において過剰発現させることによって組替
え型ヒトプロゲストゲン受容体を得る。その応用がヒト
ホルモン受容体、例えばヒトグルココルチコイド受容体
の発現について報告されている（Ｇ．スリニバサン他、
Molecular Endocrinology (1990), Vol.4, NO.2, 209-2
16）。バキュロゴールド・トランスフェクション・キッ
ト（ファーミンゲン社、参照番号２１０００Ｋ）を使用
してヒトプロゲストゲン受容体をコードする部位を含有
するＰ．カストナー他により報告されたｃＤＮＡ断片
（The EMBO Journal (1990), Vol.9, No.5, 1603-1614
）をインサートし、相当する組替え型ウイルスを調製
する。
of Methods in Celland Molecular Biology (1990), V
ol.2, No.4, 173-188) に従って、昆虫−バキュロウイ
ルスの細胞系において過剰発現させることによって組替
え型ヒトプロゲストゲン受容体を得る。その応用がヒト
ホルモン受容体、例えばヒトグルココルチコイド受容体
の発現について報告されている（Ｇ．スリニバサン他、
Molecular Endocrinology (1990), Vol.4, NO.2, 209-2
16）。バキュロゴールド・トランスフェクション・キッ
ト（ファーミンゲン社、参照番号２１０００Ｋ）を使用
してヒトプロゲストゲン受容体をコードする部位を含有
するＰ．カストナー他により報告されたｃＤＮＡ断片
（The EMBO Journal (1990), Vol.9, No.5, 1603-1614
）をインサートし、相当する組替え型ウイルスを調製
する。
【００４６】この方法で得られた組替え型ウイルスを使
用して、上記の知られた方法に従って、ＳＦ９昆虫細胞
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）にプロゲストゲン受容体
を発現させる。２×１０7 個〜２．５×１０7 個のＳＦ
９細胞を、１７５ｃｍ2 のファルコンフラスコにおいて
１０％の胎児牛血清（ＦＳＣ）及び５０μｇ／ｍｌのゲ
ンタマイシンを補給したＴＮＭ−ＦＨ培地で培養する。
感染させ、次いで２７℃で４０〜４２時間インキュベー
トした後、細胞を１ｍｌの溶解用緩衝液（１）に採り、
２回の凍結−融解サイクル（−８０℃／０℃）によって
溶解させ、次いで４℃で２０９００Ｇで３０分間遠心分
離する。組替え型ヒトプロゲストゲン受容体を含有する
上層液を１ｍｌの量で液体窒素中に貯蔵する。上層液を
使用時に、０．１％のゼラチンを含有する１０ｍＭのト
リス緩衝液（０．２５Ｍのサッカロース、ＨＣｌ、ｐＨ
７．４）により希釈し、次いで増大する濃度の未標識プ
ロゲステロン（０〜２５０００×１０-9Ｍ）か又は未標
識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のいずれか
の存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化１７α，２１
−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−
３，２０−ジオンと共に０℃で２４時間インキュベート
する。次いで、各インキュベート中の結合したトリチウ
ム化１７，２１−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，
９−ジエン−３，２０−ジオン（Ｂ）の濃度を活性炭−
デキストラン吸着技術を使用して測定する。
用して、上記の知られた方法に従って、ＳＦ９昆虫細胞
（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）にプロゲストゲン受容体
を発現させる。２×１０7 個〜２．５×１０7 個のＳＦ
９細胞を、１７５ｃｍ2 のファルコンフラスコにおいて
１０％の胎児牛血清（ＦＳＣ）及び５０μｇ／ｍｌのゲ
ンタマイシンを補給したＴＮＭ−ＦＨ培地で培養する。
感染させ、次いで２７℃で４０〜４２時間インキュベー
トした後、細胞を１ｍｌの溶解用緩衝液（１）に採り、
２回の凍結−融解サイクル（−８０℃／０℃）によって
溶解させ、次いで４℃で２０９００Ｇで３０分間遠心分
離する。組替え型ヒトプロゲストゲン受容体を含有する
上層液を１ｍｌの量で液体窒素中に貯蔵する。上層液を
使用時に、０．１％のゼラチンを含有する１０ｍＭのト
リス緩衝液（０．２５Ｍのサッカロース、ＨＣｌ、ｐＨ
７．４）により希釈し、次いで増大する濃度の未標識プ
ロゲステロン（０〜２５０００×１０-9Ｍ）か又は未標
識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のいずれか
の存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化１７α，２１
−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，９−ジエン−
３，２０−ジオンと共に０℃で２４時間インキュベート
する。次いで、各インキュベート中の結合したトリチウ
ム化１７，２１−ジメチル−１９−ノルプレグナ−４，
９−ジエン−３，２０−ジオン（Ｂ）の濃度を活性炭−
デキストラン吸着技術を使用して測定する。
【００４７】ヒトグルココルチコイド受容体（ＨＧＲ） ヒトグルココルチコイド受容体をコードする部位を有す
るＳ．Ｍ．ホレンベルグ他により報告されたｃＤＮＡ断
片（Nature (1985), Vol.318, No.19/26 635）を使用し
て、プロゲストゲン受容体について前記した方法に従っ
て、組替え型ヒトグルココルチコイド受容体を含有する
ＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞を溶解用緩衝
液（２）により溶解させる。上層液を、増大する濃度の
未標識デキサメタゾン（０〜１０００×１０-9Ｍ）か又
は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のい
ずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化１１
β，１７β−ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグ
ナ−１，４，６−トリエン−２０−イン−３−オンと共
に０℃で２４時間インキュベートする。次いで、各イン
キュベート中の結合したトリチウム化１１β，１７β−
ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグナ−１，４，
６−トリエン−２０−イン−３−オン（Ｂ）の濃度を活
性炭−デキストラン吸着技術を使用して測定する。
るＳ．Ｍ．ホレンベルグ他により報告されたｃＤＮＡ断
片（Nature (1985), Vol.318, No.19/26 635）を使用し
て、プロゲストゲン受容体について前記した方法に従っ
て、組替え型ヒトグルココルチコイド受容体を含有する
ＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞を溶解用緩衝
液（２）により溶解させる。上層液を、増大する濃度の
未標識デキサメタゾン（０〜１０００×１０-9Ｍ）か又
は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のい
ずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化１１
β，１７β−ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグ
ナ−１，４，６−トリエン−２０−イン−３−オンと共
に０℃で２４時間インキュベートする。次いで、各イン
キュベート中の結合したトリチウム化１１β，１７β−
ジヒドロキシ−６，２１−ジメチルプレグナ−１，４，
６−トリエン−２０−イン−３−オン（Ｂ）の濃度を活
性炭−デキストラン吸着技術を使用して測定する。
【００４８】ヒトエストロゲン受容体（ＨＯＲ） 位置４４０にグリシンを有する“野生型”のヒトエスト
ロゲン受容体をコードするＬ．トーラ他により報告され
た発現ベクターＨＥＧＯ（The EMBO Journal (1989) Vo
l.8, No.7, 1981-1986）に記載されたｃＤＮＡ断片を使
用して、プロゲストゲン受容体について前記した方法に
従って、組替え型エストロゲン受容体を含有するＳＦ９
細胞の上層液を得る。得られた細胞を溶解用緩衝液
（１）により溶解させる。上層液を、増大する濃度の未
標識エストラジオール（０〜１０００×１０-9Ｍ）か又
は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のい
ずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化エスト
ラジオールと共に０℃で２４時間インキュベートする。
次いで、各インキュベート中の結合したトリチウム化エ
ストラジオール（Ｂ）の濃度を活性炭−デキストラン吸
着技術を使用して測定する。
ロゲン受容体をコードするＬ．トーラ他により報告され
た発現ベクターＨＥＧＯ（The EMBO Journal (1989) Vo
l.8, No.7, 1981-1986）に記載されたｃＤＮＡ断片を使
用して、プロゲストゲン受容体について前記した方法に
従って、組替え型エストロゲン受容体を含有するＳＦ９
細胞の上層液を得る。得られた細胞を溶解用緩衝液
（１）により溶解させる。上層液を、増大する濃度の未
標識エストラジオール（０〜１０００×１０-9Ｍ）か又
は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０-9Ｍ）のい
ずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウム化エスト
ラジオールと共に０℃で２４時間インキュベートする。
次いで、各インキュベート中の結合したトリチウム化エ
ストラジオール（Ｂ）の濃度を活性炭−デキストラン吸
着技術を使用して測定する。
【００４９】ヒトアンドロゲン受容体（ＨＡＲ） ヒトアンドロゲン受容体をコードする部位を含有するｃ
ＤＮＡ断片を使用して、プロゲストゲン受容体について
前記した方法に従って、組替え型ヒトアンドロゲン受容
体を含有するＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞
を溶解用緩衝液（３）により溶解させる。上層液を、増
大する濃度の未標識テストステロン（０〜１０００×１
０-9Ｍ）か又は未標識被検化合物（１〜２５０００×１
０-9Ｍ）のいずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチ
ウム化テストステロンと共に０℃で２４時間インキュベ
ートする。次いで、各インキュベート中の結合したトリ
チウム化テストステロン（Ｂ）の濃度を活性炭−デキス
トラン吸着技術を使用して測定する。
ＤＮＡ断片を使用して、プロゲストゲン受容体について
前記した方法に従って、組替え型ヒトアンドロゲン受容
体を含有するＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞
を溶解用緩衝液（３）により溶解させる。上層液を、増
大する濃度の未標識テストステロン（０〜１０００×１
０-9Ｍ）か又は未標識被検化合物（１〜２５０００×１
０-9Ｍ）のいずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチ
ウム化テストステロンと共に０℃で２４時間インキュベ
ートする。次いで、各インキュベート中の結合したトリ
チウム化テストステロン（Ｂ）の濃度を活性炭−デキス
トラン吸着技術を使用して測定する。
【００５０】ヒトミネラロコルチコイド受容体（ＨＭ
Ｒ） ヒトミネラロコルチコイド受容体をコードする部位を含
有するＥ．Ｅ．ボリウ他により報告されたｃＤＮＡ断片
（Proc. Natl. Acad. Sci., (1991) Vol.88, 10681-106
85）を使用して、プロゲストゲン受容体について前記し
た方法に従って、組替え型ミネラロコルチコイド受容体
を含有するＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞を
溶解用緩衝液（４）により溶解させる。上層液を、増大
する濃度の未標識アルドステロン（０〜１０００×１０
-9Ｍ）か又は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０
-9Ｍ）のいずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウ
ム化アルドステロンと共に０℃で２４時間インキュベー
トする。次いで、各インキュベート中の結合したトリチ
ウム化アルドステロン（Ｂ）の濃度を活性炭−デキスト
ラン吸着技術を使用して測定する。
Ｒ） ヒトミネラロコルチコイド受容体をコードする部位を含
有するＥ．Ｅ．ボリウ他により報告されたｃＤＮＡ断片
（Proc. Natl. Acad. Sci., (1991) Vol.88, 10681-106
85）を使用して、プロゲストゲン受容体について前記し
た方法に従って、組替え型ミネラロコルチコイド受容体
を含有するＳＦ９細胞の上層液を得る。得られた細胞を
溶解用緩衝液（４）により溶解させる。上層液を、増大
する濃度の未標識アルドステロン（０〜１０００×１０
-9Ｍ）か又は未標識被検化合物（１〜２５０００×１０
-9Ｍ）のいずれかの存在下に一定濃度（Ｔ）のトリチウ
ム化アルドステロンと共に０℃で２４時間インキュベー
トする。次いで、各インキュベート中の結合したトリチ
ウム化アルドステロン（Ｂ）の濃度を活性炭−デキスト
ラン吸着技術を使用して測定する。
【００５１】細胞溶解用緩衝液 （１）トリス−ＨＣｌ、ｐＨ８ ２０ｍＭ ＥＤＴＡ ０．５ｍＭ ＫＣｌ ４００ｍＭ グリセリン ２０％ 同時に添加 ＤＴＴ ２ｍＭ ＰＩＣ* 混合物 １％ （２）ＫＨ2 ＰＯ4 −ＮａＯＨ、ｐＨ７ ５０ｍＭ グリセリン ２０％ 同時添加 ＤＴＴ（ジチオトレイット） ５ｍＭ モリブデン酸ナトリウム ２０ｍＭ ＰＩＣ* 混合物 ０．１％ （３）トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５ ２０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｈ2 Ｏ １ｍＭ グリセリン １０％ 同時に添加 ＰＭＳ （弗化フェニルメチルスルホニル）０．１ｍＭ モリブデン酸ナトリウム ２０ｍＭ ＰＩＣ* 混合物 ０．１％ （４）トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４ ２０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｈ2 Ｏ １ｍＭ グリセリン １０％ 同時に添加 タングステン酸ナトリウム ２０ｍＭ ＰＩＣ* 混合物 ０．１％ ＊ＰＩＣ* 混合物：ロイペプチン、ペプスタチンＡ、ア
プロチニン、アンチペイン、キモスタチン（２．５μｇ
／ｍｌの最終濃度の各ペプチド）
プロチニン、アンチペイン、キモスタチン（２．５μｇ
／ｍｌの最終濃度の各ペプチド）
【００５２】結果の表出及び計算方法 ・相対的結合親和性（ＲＢＡ）の計算 相対的結合親和性（ＲＢＡ）の計算は全ての受容体につ
き同じである。次の２つの曲線を描く。未標識の参照ホ
ルモンの濃度の対数の関数としての結合トリチウム化ホ
ルモンＢ／Ｂ0 の％、及び未標識の被検化合物の濃度の
対数の関数としてのＢ／Ｂ0 。次の方程式：
き同じである。次の２つの曲線を描く。未標識の参照ホ
ルモンの濃度の対数の関数としての結合トリチウム化ホ
ルモンＢ／Ｂ0 の％、及び未標識の被検化合物の濃度の
対数の関数としてのＢ／Ｂ0 。次の方程式：
【数１】Ｉ50＝１００（Ｂ0 ／Ｂ0 ＋Ｂｍｉｎ／Ｂ0 ）
／２、即ち Ｉ50＝１００（１＋Ｂｍｉｎ／Ｂ0 ）／２＝５０（１＋
Ｂｍｉｎ／Ｂ0 ） の直線を決定する。ここで、Ｂ0 ＝どの未標識化合物も
存在しないときの結合トリチウム化ホルモンの濃度。 Ｂｍｉｎ＝最高濃度の未標識参照ホルモンの存在下での
結合トリチウム化ホルモンの濃度。 直線Ｉ50と曲線との交点は、受容体へのトリチウム化ホ
ルモンの特異的結合を５０％抑止する未標識参照ホルモ
ンの濃度（ＣＨ）と未標識被検化合物を濃度（ＣＸ）を
評価するのを可能にさせる。試験化合物の相対的結合親
和性（ＲＢＡ）は次式によって決定される。
／２、即ち Ｉ50＝１００（１＋Ｂｍｉｎ／Ｂ0 ）／２＝５０（１＋
Ｂｍｉｎ／Ｂ0 ） の直線を決定する。ここで、Ｂ0 ＝どの未標識化合物も
存在しないときの結合トリチウム化ホルモンの濃度。 Ｂｍｉｎ＝最高濃度の未標識参照ホルモンの存在下での
結合トリチウム化ホルモンの濃度。 直線Ｉ50と曲線との交点は、受容体へのトリチウム化ホ
ルモンの特異的結合を５０％抑止する未標識参照ホルモ
ンの濃度（ＣＨ）と未標識被検化合物を濃度（ＣＸ）を
評価するのを可能にさせる。試験化合物の相対的結合親
和性（ＲＢＡ）は次式によって決定される。
【数２】ＲＢＡ＝１００（ＣＨ）／（ＣＸ）
【００５３】参照物質のエストラジオール、プロゲステ
ロン、デキサメタゾン、テストステロン及びアルドステ
ロンのＲＢＡは、任意に１００に等しいものとみなす。
得られたＲＢＡの結果を下記の表に示す。
ロン、デキサメタゾン、テストステロン及びアルドステ
ロンのＲＢＡは、任意に１００に等しいものとみなす。
得られたＲＢＡの結果を下記の表に示す。
【表５】 ＲＢＡが０に等しい化合物は、２５００００ｎＭよりも
大きいＩＣ50を有する。
大きいＩＣ50を有する。
【００５４】・結論 化合物Ａ（１α−ＯＨ）はヒトプロゲステロン受容体に
対して良好な相対的結合親和性を有するが、これはトリ
メゲストンの親和性よりも９倍弱い。他方、化合物Ｂ
（６−ＯＨ）のみがこの受容体に対して中程度のＲＢＡ
を有する。ヒトグルココルチコイド及びミネラロコルチ
コイド受容体に対して中程度のＲＢＡ並びにヒトアンド
ロゲン受容体に対して弱いＲＢＡを示すトリメゲストン
とは対照をなして、これらの二つの化合物のみがこれら
の受容体に対してＲＢＡを有しないか又は無視できるＲ
ＢＡを有する。ヒトエストロゲン受容体に対するＲＢＡ
は、トリメゲストン並びに化合物Ａ及びＢについて０で
ある。
対して良好な相対的結合親和性を有するが、これはトリ
メゲストンの親和性よりも９倍弱い。他方、化合物Ｂ
（６−ＯＨ）のみがこの受容体に対して中程度のＲＢＡ
を有する。ヒトグルココルチコイド及びミネラロコルチ
コイド受容体に対して中程度のＲＢＡ並びにヒトアンド
ロゲン受容体に対して弱いＲＢＡを示すトリメゲストン
とは対照をなして、これらの二つの化合物のみがこれら
の受容体に対してＲＢＡを有しないか又は無視できるＲ
ＢＡを有する。ヒトエストロゲン受容体に対するＲＢＡ
は、トリメゲストン並びに化合物Ａ及びＢについて０で
ある。
【００５５】２）本発明の化合物の黄体ホルモン様活性
の決定：ウサギでの子宮内膜の変化 ａ）方法 使用する動物は、生後４０〜４５日の性的未成熟の雌の
ウサギである。動物は、エストラジオール（ウサギ１頭
当たり５μｇ／０．２ｍｌのコーンオイル溶液、１０％
のエタノールを含有）により第１日から第５日まで皮下
経路で毎日処理し、次いで被検化合物を第８日から第１
１日まで投与する。第１２日目に、動物を犠牲にし、各
動物から子宮角を切除し、組織学的研究のためにブアン
氏液中で固定させる。固定させた後、試料を脱水し、包
み込み、切断し、載せ、パラフィンを除き、次いで試料
をヘマラム−エオシン−サフロンにより染色する。
の決定：ウサギでの子宮内膜の変化 ａ）方法 使用する動物は、生後４０〜４５日の性的未成熟の雌の
ウサギである。動物は、エストラジオール（ウサギ１頭
当たり５μｇ／０．２ｍｌのコーンオイル溶液、１０％
のエタノールを含有）により第１日から第５日まで皮下
経路で毎日処理し、次いで被検化合物を第８日から第１
１日まで投与する。第１２日目に、動物を犠牲にし、各
動物から子宮角を切除し、組織学的研究のためにブアン
氏液中で固定させる。固定させた後、試料を脱水し、包
み込み、切断し、載せ、パラフィンを除き、次いで試料
をヘマラム−エオシン−サフロンにより染色する。
【００５６】ｂ）組織学 切片を光学顕微鏡の下で、まず、低倍率で切片の間に形
態学的な変化が存在しないことを確認するために検査
し、次いで子宮角のそれぞれについて子宮内膜の増殖
（子宮レース）の半定量的な評価を０〜４（０．５の中
間値として）のマックファイルスケールに従って行い、
二つの数字を平均する。同様に、子宮角の肥大の程度を
同じスケールに従って評価する。場合により、最高の倍
率で粘膜又は子宮筋層の形態学的な観察を行うことがで
きる。
態学的な変化が存在しないことを確認するために検査
し、次いで子宮角のそれぞれについて子宮内膜の増殖
（子宮レース）の半定量的な評価を０〜４（０．５の中
間値として）のマックファイルスケールに従って行い、
二つの数字を平均する。同様に、子宮角の肥大の程度を
同じスケールに従って評価する。場合により、最高の倍
率で粘膜又は子宮筋層の形態学的な観察を行うことがで
きる。
【００５７】ｃ）維持されたプロトコール １−ＯＨ代謝産物（化合物Ａ）を皮下経路で１０、１０
０及び１０００μｇ／ｋｇの薬量で又は経口で１０００
μｇ／ｋｇの薬量で試験した。また、６−ＯＨ代謝産物
（化合物Ｂ）を皮下経路で１００、１０００及び１００
００μｇ／ｋｇの薬量で試験した。対照例として、プロ
ゲステロンを皮下経路で１００及び１０００μｇ／ｋｇ
の薬量で投与した。
０及び１０００μｇ／ｋｇの薬量で又は経口で１０００
μｇ／ｋｇの薬量で試験した。また、６−ＯＨ代謝産物
（化合物Ｂ）を皮下経路で１００、１０００及び１００
００μｇ／ｋｇの薬量で試験した。対照例として、プロ
ゲステロンを皮下経路で１００及び１０００μｇ／ｋｇ
の薬量で投与した。
【００５８】ｄ）参照文献Ｃ．クラウベルグ “性ホルモン、特に黄体ホルモンの生理学及び病理学
１：性的未成熟なウサギにおける黄体ホルモンのための
生物学的試験”、Zetralbl. Gynakol.,1930, 54,2757-7
0Ｍ．Ｋ．マックファイル “プロゲスチンの検定法”、J. Physiol.(London)、 193
4, 83, 145-56
１：性的未成熟なウサギにおける黄体ホルモンのための
生物学的試験”、Zetralbl. Gynakol.,1930, 54,2757-7
0Ｍ．Ｋ．マックファイル “プロゲスチンの検定法”、J. Physiol.(London)、 193
4, 83, 145-56
【００５９】注：トリメゲストンは、この試験におい
て、１μｇ／ｋｇの薬量から始まって黄体ホルモン様活
性を、また経口投与で３及び１０μｇ／ｋｇの薬量で並
びに皮下経路で３μｇ／ｋｇの薬量で強い活性を有す
る。他方、子宮レースへのプロゲステロンの最高活性は
皮下経路で１０００μｇ／ｋｇに位置している（４のマ
ックファイル指数）。
て、１μｇ／ｋｇの薬量から始まって黄体ホルモン様活
性を、また経口投与で３及び１０μｇ／ｋｇの薬量で並
びに皮下経路で３μｇ／ｋｇの薬量で強い活性を有す
る。他方、子宮レースへのプロゲステロンの最高活性は
皮下経路で１０００μｇ／ｋｇに位置している（４のマ
ックファイル指数）。
【００６０】結果 得られた結果を以下の表に示す。
【表６】 平均は子宮レースについて得た（マックファイル指
数）。
数）。
【００６１】結論 このクラウベルグ−マックファイル試験は、１ｍｇ／ｋ
ｇで化合物Ｂについて良好な黄体ホルモン様活性を示す
（マックファイル指数：３．８）。同様に、化合物Ａ
は、０．０１ｍｇ／ｋｇの薬量から始まって活性であり
（マックファイル指数：３．８）、１ｍｇ／ｋｇの薬量
で経口投与で皮下経路よりも良好な活性を表わす（マッ
クファイル指数は３．８に対して４である。子宮角の強
い肥大）。さらに、子宮の切片の組織学的観察は、形態
学的な異常を示さない。
ｇで化合物Ｂについて良好な黄体ホルモン様活性を示す
（マックファイル指数：３．８）。同様に、化合物Ａ
は、０．０１ｍｇ／ｋｇの薬量から始まって活性であり
（マックファイル指数：３．８）、１ｍｇ／ｋｇの薬量
で経口投与で皮下経路よりも良好な活性を表わす（マッ
クファイル指数は３．８に対して４である。子宮角の強
い肥大）。さらに、子宮の切片の組織学的観察は、形態
学的な異常を示さない。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ロベール・アズラ フランス国リ・オランジ、リュ・ベルト ロ、13ビス (72)発明者 イザベル・ラクロワ フランス国ショワジ・ル・ロワ、アブニ ュ・デ・マロニエ、１
Claims (16)
- 【請求項１】 次の一般式（Ｉ） 【化１】 （ここで、 Ｒ1 は水素原子であり且つＲ2 はＯＲ6 基であるか、又
はＲ1 はＯＲ6 基であり且つＲ2 は水素原子であるかの
いずれかであり、Ｒ6 は１個以上のハロゲン原子により
置換されていてもよい１〜１２個の炭素原子を含有する
アシル基又は水素原子を表わし、 Ｒ3 は１〜１２個の炭素原子を含有するアルキル基であ
り、 Ｒ4 は１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基であ
り、 Ｒ5 はＲ6 と同一であっても異なっていてもよく、Ｒ6
と同じ意味を有し、 波線はＲ1 又はＲ2 がα又はβ位にあること及びＯＲ5
が２１Ｒ又は２１Ｓ位にあることを示す。）の化合物。 - 【請求項２】 Ｒ3 及びＲ4 がメチルである請求項１に
記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項３】 Ｒ1 が水素原子であり、Ｒ2 がヒドロキ
シル基である請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項４】 Ｒ1 がヒドロキシル基であり、Ｒ2 が水
素原子である請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項５】 化合物名が ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン であり、それらの立体異性体配置：１α−ＯＨ、１β−
ＯＨ、６α−ＯＨ若しくは６β−ＯＨのいずれか単独の
形態又はそれらの混合物の形態にある請求項１〜４のい
ずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項６】 エストロゲン化合物と組合せた請求項１
に記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項７】 １７β−エストラジオールと組合せた請
求項５に記載の式（Ｉ）の化合物。 - 【請求項８】 請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物
を製造するにあたり、次の一般式（II） 【化２】 （ここで、Ｒ3 、Ｒ4 及び波線は前記の意味と同じ意味
を有する。）の化合物の生物学的転化を糸状菌の培養に
よって行い、次いで適当ならば１−ヒドロキシル化化合
物と６−ヒドロキシル化化合物との分離及び（又は）遊
離ヒドロキシル基のエステル化を行うことを特徴とす
る、式（Ｉ）の化合物の製造法。 - 【請求項９】 糸状菌が下記の菌株： クニンガメラ・バイネリ ＡＴＴＣ９２４４ モルチエレラ・イサベリナ ＮＲＬＬ１７５７又はＮＭ
Ｐ１０８ フザリウム・ロゼウム ＡＴＣＣ１４７１７ から選択されることを特徴とする、請求項８に記載の製
造法。 - 【請求項１０】 式（II）の化合物がトリメゲストン： ［１７β−（Ｓ）］−１７−（２−ヒドロキシ−１−オ
キソプロピル）−１７−メチルエストラ−４，９−ジエ
ン−３−オン であることを特徴とする、請求項８に記載の製造法。 - 【請求項１１】 糸状菌がクニンガメラ・バイネリ、モ
ルチエレラ・イサベリナ又はフザリウム・ロゼウムであ
り、式（II）の化合物がトリメゲストンであり、これに
より１−ヒドロキシル化及び６−ヒドロキシル化誘導
体： ・［１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン、及び ・［１７β−（Ｓ）］−６−ヒドロキシ−１７−（２−
ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチルエス
トラ−４，９−ジエン−３−オン を得、次いでこれらを分離することを特徴とする、請求
項８に記載の製造法。 - 【請求項１２】 糸状菌がクニンガメラ・バイネリ Ａ
ＴＴＣ ９２４４であり、式（II）の化合物がトリメゲ
ストンであり、これにより１−ヒドロキシル化誘導体： ・［１α，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン、又は ・［１β，１７β−（Ｓ）］−１−ヒドロキシ−１７−
（２−ヒドロキシ−１−オキソプロピル）−１７−メチ
ルエストラ−４，９−ジエン−３−オン を得ることを特徴とする、請求項８に記載の製造法。 - 【請求項１３】 請求項１〜４のいずれかに記載の一般
式（Ｉ）の化合物からなる薬剤。 - 【請求項１４】 請求項５に記載の一般式（Ｉ）の化合
物からなる薬剤。 - 【請求項１５】 請求項６又は７に記載の組合せからな
る薬剤。 - 【請求項１６】 請求項１３〜１５のいずれかに記載の
薬剤の少なくとも１種を含有する製薬組成物。
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