JPH10504828A

JPH10504828A - 細胞活性調整のためのヒアルロン酸およびその誘導体

Info

Publication number: JPH10504828A
Application number: JP8508371A
Authority: JP
Inventors: サイモンアスキュライ，サミュエル
Original assignee: ハイアルファーマスティカルコーポレイション
Priority date: 1994-08-30
Filing date: 1995-08-11
Publication date: 1998-05-12
Also published as: AU3159595A; IL114914A0; EP0778776A1; WO1996006622A1; CN1130532A; AP618A; HUT76846A; KR970705401A; AP9500756A0

Abstract

(57)【要約】ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプターを有する分子、例えばヒトの粘着分子（ＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４など）または調節分子（ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するための方法であって、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩、例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば２２５，０００ダルトン｝）；ヒヤル（Hyal）製薬会社によるヒアルロン酸ナトリウムの分画で平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトンのヒアルロン酸の分子分画；米国特許出願08/143983 のもの；ヒアルロン酸ナトリウムの分子量分画（例えばカナダ特許1205031 に開示されているもので平均分子量が５０，０００−１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは他の分画）、あるいは５０，０００ダルトン未満の他の分画、１００，０００−１５０，０００ダルトンの分画、ヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；およびヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示し高親和性細胞表面レセプター（例えば粘着分子、調節分子）を発現する組織あるいは細胞の活性を調節するヒアルロン酸類似物を、薬理学的担体、賦形剤（例えば滅菌水）など人体に無害なものに加えたものを投与する方法である。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称細胞活性調整のためのヒアルロン酸およびその誘導体発明の技術分野本発明は細胞活性の調整、特にヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸類似分子などの特定量、分画を含むヒアルロン酸の使用によるヒトの細胞活性の調整（転形）に関する。発明の背景当初は組織細胞を保持させるための単なるにかわと考えられていた細胞粘着分子は今や、人体の機能に広く貢献するものとしても注目されている。これに関して、文献、BIOTEC GETS A GRIP ON CELL ADHESION，SCIENCE，Vol.260(1993 年５月１４）を参照のこと。例えば、新たな治療法がこの細胞粘着分子に基づいて提案されている。内皮粘着分子の１類としてＩＣＡＭ−１が存在する。この分子（ＩＣＡＭ−１）はヒトライノウイルス（これはかぜの約５０％の原因となっている）を人体細胞へと運搬することが見出されている。このヒトライノウイルスは粘着分子ＩＣＡＭ−１に係止された状態で人体細胞へと侵入する。この可溶性ＩＣＡＭ−１をおとりとして利用し、細胞の感染を阻止することが提案されている。しかし、この可溶性ＩＣＡＭ−１はそれほど粘着性が大きくなく、そのため、その提案は市場に受入れられていない。一般的なかぜの予防のため、遺伝子技術が抗体フラグメントをＩＣＡＭ−１のライノウイルス結合部位に融合させるのに利用されている。他の粘着分子、ＣＤ４４がリンパ球に通常、認められる。このＣＤ４４粘着分子は転移性のすい臓腫瘍細胞の表面に付着し、癌細胞を偶然的に覆い隠し、血流中に自由に循環させている。粘着分子ＩＣＡＭ−１はヒアルロン酸（ヒアルロナン）に対し細胞表面レセプターとして作用することが見出された。このＩＣＡＭ−１は肝臓内皮細胞および角膜内皮細胞中に発現（生産され細胞表面に付着）される。ＩＣＡＭ−１は炎症、癌、感染部に過剰に発現される。ＨＡＲＬＥＣ（ヒアルロン酸（ヒアルロナン）レセプター肝臓内皮細胞）もヒアルロナンにとって細胞表面レセプターとして作用し、また、肝臓内皮細胞および角膜内皮細胞中に発現（生産され細胞表面に付着）される。（本発明者はこれら２つは１つの同じ粘着分子であるか、少なくとも極めて密に関連し１つの同じものに近いと考える）分子ＣＤ４４およびＲＨＡＭＭ（ＨＡ媒介運動性についてのレセプター）もヒアルロン酸（ヒアルロナン）にとって細胞表面レセプターとして作用する。ＲＨＡＭＭは調節分子であり、ＣＤ４４は粘着分子である。したがって、本発明の目的は、病気の新規な治療法、ヒアルロン酸（ヒアルロナン）（ＨＡ）の新規な用途、新規な薬剤組成物の投与、治療に適した新規な薬剤組成物、ＨＡの新規な用途を提供することである。本発明の他の目的は、ヒアルロン酸および薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウム）に関連する分子であってヒアルロン酸の場合と同じレセプターに対する結合機能を有するものを用いた新規な治療法、このヒアルロン酸類似分子の新規な用途、この分子を含む新規な薬剤組成物の投与、さらにこの分子を含む治療に適した新規な薬剤組成物および用途を提供することである。本発明の他の目的は以下の説明から当業者にとって自明であると思われる。本発明の概要本発明の１つの態様は、ヒアルロン酸に対し高親和性細胞表面レセプター［例えば粘着分子（例えば、ＩＣＡＭ−１，ＨＡＲＬＥＣ，ＣＤ４４）および調節分子（例えば、ＲＨＡＭＭ）］を発現する組織および細胞の活性を調整する方法を提供することである。この方法は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；ヒヤル（ Hyal）製薬会社のもので平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトン、米国特許出願08/143983 のもの；ヒアルロン酸系物質の分子量分画｛frac tions ｝（例えばカナダ特許1205031 に開示されているもので平均分子量が５０，０００−１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは５０，０００ダルトン未満の分画および１００，０００−１５０，０００ダルトンのもの、あるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせの治療有効非毒性投与量；好ましくはヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウム）、あるいはその組合わせであって、分子量が７５０，０００ダルトン未満のもの；あるいはヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示しヒトに対し結合し、ヒアルロン酸に対し高親和性細胞表面レセプター（例えば粘着分子あるいは調節分子）を発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整するヒアルロン酸類似物の治療有効非毒性投与量を、人体にあるいは薬理学的担体あるいは人体に無害な賦形剤（例えば滅菌水）に添加した状態で投与することからなる方法を提供する。例えば、損傷、外傷の部位には炎症性応答（反応）が形成された場合、その応答は炎症細胞（例えば好中球、マクロファーゼ、その他の白血球）の炎症部位への転移が含まれる。この炎症性応答によってもたらされる損傷は実際の損傷、外傷よりも大きい場合はある。同じことが繊維症でも言える。ヒアルロン酸系物質の投与により、これが粘着分子あるいは調節分子などの分子のＨＡレセプター（高親和性細胞表面レセプター）に結合し、人体の応答を調整させ損傷を和らげる。同様に、ヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示すヒアルロン酸類似物の投与により、これがＨＡレセプターに結合する。ヒアルロン酸類似物の例としてはレセプターの活性部位に結合するモノクローン抗体、レセプターの活性部位に嵌まるペプチド、およびレセプターの活性部位に嵌まる合成薬品などがある。病気の治療薬としてヒアルロン酸系物質および／またはヒアルロン酸類似物が含まれることがあるが、その場合、ＨＡおよびＨＡ類似物の調整を高揚させる。ＨＡはさらに薬剤を粘着分子（例えば、ＩＣＡＭ−１，ＨＡＲＬＥＣ，ＣＤ４４）およびＲＨＡＭＭ、すなわち調節分子へ移行させる。この薬剤の適当な例としては、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、坑ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系坑炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系坑炎剤、坑真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンなどである。本発明の他の１つの態様は、病気を防止する新規な方法を提供することであって、その方法は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば２２５，０００ダルトン｝；ヒヤル（Hyal）製薬会社のもので平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトンのヒアルロン酸の分子分画、カナダ特許1205031 に開示されているもので平均分子量が５０，０００ −１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは他の分画）、あるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；およびヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示すヒアルロン酸類似物を、人体において高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整するために使用することである。ヒアルロン酸は薬理学的に許容し得る賦形剤あるいは担体（例えば滅菌水）とともに使用される。これにより病気を患っている患者の組織あるいは細胞調整が高められる。ＨＡおよびＨＡ類似分子はＨＡレセプター例えばヒアルロン酸に対する高親和性細胞表面レセプター、例えば粘着分子、調節分子に結合する。ＨＡおよびＨＡ類似分子は上述のような適当な薬剤とともに使用される。この場合、ＨＡ、ＨＡ類似分子および薬剤は治療有効非毒性投与量を以て使用される。ＨＡおよびＨＡ類似分子はさらにＩＣＡＭ−１粘着分子と結合することにより（ライノウイルスが結合ないし係止する代わりに）、ライノウイルスが人体の細胞に入ることを防止し、これにより病気（例えば風邪）を防止するのに使用することができる。したがって、本発明の他の１つの態様は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩、例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば２２５，０００ダルトン｝）；ヒヤル（Hyal）製薬会社のもので平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトンのヒアルロン酸の分子分画；米国特許出願08/143983 のもの；ヒアルロン酸ナトリウムの分子量分画（例えばカナダ特許1205031 に開示されているもので平均分子量が５０，０００−１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは他の分画）、あるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；およびヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示し高親和性細胞表面レセプター（例えば粘着分子、調節分子）を発現する組織あるいは細胞の活性を調節するヒアルロン酸類似物を、人体に投与し、これにより病気を防止する方法である。ヒアルロン酸およびヒアルロン酸類似物は薬理学的に許容し得る賦形剤あるいは担体（例えば滅菌水）とともに使用される。これにより、例えば一般の風邪を防止することができる。病気を予防し得る薬剤をヒアルロン酸（ＨＡ）および／あるいはヒアルロン酸類似物とともに投与する。例えば、アセチルサリチル酸をヒアルロン酸（ＨＡ）および／あるいはヒアルロン酸類似物とともに投与し、病気を予防することができる。ヒアルロン酸（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似物の投与は例えば人体において細胞付着を抑止し、あるいは細胞活性を調節する。ヒアルロン酸（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似物は分子のＨＡレセプター、特にヒアルロン酸に対する高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４などの粘着分子、あるいはRhamm などの調節分子）に結合する。すなわち、ヒアルロン酸（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似物の投与により、これらが分子のＨＡレセプターに結合し、病気を予防する（例えば、粘着分子ＩＣＡＭ−１へのライノウイルスの結合を防止し、ライノウイルスが粘着分子ＩＣＡＭ−１との係合を介して人体細胞内に入るのを防止する）。上述のように、病気予防のための薬剤の投与においてヒアルロン酸系物質の同時に投与してもよい。例えば、病気の予防においてアセチリサリチル酸（アスピリン）の有効量を現在、服用しているが、これと同時に治療有効非毒性投与量（例えば、ヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満）の適当なヒアルロン酸系物質あるいは有効量のヒアルロン酸類似物を服用してもよい。すなわち、これら２つを同時に服用することにより、アスピリンを単独で服用する場合より病気の危険性を減少させると思われる。このヒアルロン酸系物質は薬剤を治療必要部位へ向かわせ、同時にヒアルロン酸系物質が、細胞あるいは組織により発現される高親和性細胞表面レセプター、例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４などの粘着分子、あるいはＲＨＡＭＭなどの調節分子と結合し、これらの活性を調節（転形）する。この場合の投与は、経静脈、経動脈、経口腔、経胸膜、経皮（例えば有効量を表皮から）、粘膜に局所的に（例えば鼻から）、経腸（例えば浣腸により直腸の特定部位へ）、あるいは直接的注射により行うことができる。ヒアルロン酸系物質が投与される場合、その投与量は約１０ｍｇ／７０ｋｇ体重ないし１０００ｍｇ／７０ｋｇ体重であり、より好ましい投与量は約５０ｍｇ／７０ｋｇ体重ないし５００ｍｇ／７０ｋｇ体重である。ヒアルロン酸は明らかにヒトに対し毒性がないから、何らの副作用の心配なく、この範囲より過剰に投与することができる（例えば、３０００ｍｇ／７０ｋｇ体重以上）。このヒアルロン酸系物質の投与が局所的である場合（例えば、皮膚、粘膜に適用される場合）は、皮膚あるいは露出した組織（粘膜など）１平方センチ当たり５ｍｇ以上の割合でヒアルロン酸系物質を投与することができる。痛みの治療に対しては、ヒアルロン酸系物質を１平方センチ当たり最低１０ｍｇ以上の割合でヒアルロン酸系物質を局所的に投与することが好ましい。ヒアルロン酸類似物の投与についても当業者の判断で有効量を投与することができる。以上のように、非局所的投与の場合の有効投与量は、ヒアルロン酸系物質を約１０ｍｇ／７０ｋｇ体重ないし１０００ｍｇ／７０ｋｇ体重あるいはそれ以上である。例えば、ＮＳＡＩＤ例えばインドメタシン（ｎ−メチルグルタミンに溶解して）あるいは他のＮＳＡＩＤが２００ｍｇ／７０ｋｇ体重以上のヒアルロン酸系物質、例えばヒアルロン酸ナトリウムとともに１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の割合で用いられる場合も、胃腸障害、神経異常、鬱などの主な副作用を生じさせるおそれもなく、インドメタシンの量を必要に応じてこれより多くした場合でも、そのような副作用は生じない。もし、ヒアルロン酸の量をこの下限値より少なくした場合は、通常の副作用が再発する。投与が局所的である場合、皮膚、粘膜、組織に対し、１平方センチ当たり５ｍｇ以上の割合でヒアルロン酸系物質を施すことができる。ヒアルロン酸系物質あるいはヒアルロン酸類似物を伴った薬剤の治療有効非毒性投与量は適用される治療の形態により調整される。本発明に適したヒアルロン酸および／またはその塩（ナトリウム塩）、およびその同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニットから選ばれる１つの形態のものは、Hyal Pharmaceuticals社から入手できる。このものはヒアルロン酸ナトリウム（２０ｍｇ／ｍｌ）の１５ｍｌビンである（３００ｍｇ／ビン−ロット番号；２Ｆ３）。このヒアルロン酸ナトリウム分画は平均分子量が２２５，０００の２％溶液である。この小ビンは十分量の水を含み、この水はＵ．Ｓ．Ｐ．に従って注射用に３回蒸留され、滅菌されたものである。ヒアルロン酸および／またはその塩は反応を生じないブチル栓で密封されたホウけい酸硝子ビンに収容されて運ばれる。ヒアルロン酸および／またはその塩（ナトリウム塩）、およびその同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、好ましくはヒアルロン酸および／またはその薬理学的に許容し得る塩は以下の特徴を有する。自然物から得られる精製され、実質的に熱源を含まないヒアルロン酸の分画は以下から選ばれる少なくとも１つの特徴を有する。 i)分子量が１５０，０００〜２２５，０００の範囲内である。 ii)全重量に基づいて硫酸塩化ムコ多糖類を約１．２５％未満含む。 iii)全重量に基づいて０．６％未満のタンパクを含む。 iv)全重量に基づいて１５０ｐｐｍ未満の鉄を含む。 V)全重量に基づいて１５ｐｐｍ未満の鉛を含む。 Vi)０．００２５％未満のグルコサミンを含む。 Vii)０．０２５％未満のグルクロン酸を含む。 Viii)０．０２５％未満のＮ−アセチルグルコサミンを含む。 iX)０．００２５％未満のアミノ酸を含む。 X)ＵＶ吸収係数が２５７ｎｍで約０．２７５未満である。 Xi)ＵＶ吸収係数が２８０ｎｍで約０．２５未満である。 Xii)ｐＨが７．３〜７．９の範囲である。好ましくは、ヒアルロン酸は水と混合され、ヒアルロン酸の分画が１５０，０００〜２２５，０００の範囲の平均分子量を有するものである。より好ましくは、ヒアルロン酸の分画は下記の特徴の少なくとも１つ有するものである（より好ましくはこれら全ての特徴を有していることである）。 i)全重量に基づいて硫酸塩化ムコ多糖類を約１％未満含む。 ii)全重量に基づいて０．４％未満のタンパクを含む。 iii)全重量に基づいて１００ｐｐｍ未満の鉄を含む。 iv)全重量に基づいて１０ｐｐｍ未満の鉛を含む。 V)０．００１６６％未満のグルコサミンを含む。 Vi)０．０１６６％未満のグルクロン酸を含む。 Vii)０．０１６６％未満のＮ−アセチルグルコサミンを含む。 Viii)０．００１６６％未満のアミノ酸を含む。 iX)ＵＶ吸収係数が２５７ｎｍで約０．２３未満である。 X)ＵＶ吸収係数が２８０ｎｍで約０．１９未満である。 Xi)ｐＨが７．５〜７．７の範囲である。本発明者はその他、LifeCore Biomedical 社から製造、販売されていて、以下の特性を有するヒアルロン酸ナトリウムを使用することを提案する。ヒアルロン酸ナトリウムの他の形態のものとして、スカイマート・エンタープライズ社によりＨＡ−Ｍ５０７０の商品名で市販されているものがあり、それの仕様は以下の通りである。仕様テスト結果ロットＮｏ．ＨＧ１００４ｐＨ６．１２コンドロイチンスルフェート検出されずたんぱく質０．０５％重金属２０ｐｐｍ以下ヒ素２ｐｐｍ以下乾燥による損失２．０７％着火時の残渣１６．６９％固有粘度 12.75 dl/s(XW:679,000) 窒素３．１４％アッセイ１０４．１％微生物学的カウント８０／ｇ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）陰性カビおよび酵母５０／ｇ以下ヒアルロン酸および／またはその塩（ナトリウム塩）、およびその同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニットを上記の他のメーカーからのものを選ぶこともできる。以下の文献には適当なヒアルロン酸の原料、製造方法、回収方法が記載されている。米国特許Ｎｏ．４，１４１，９７３には以下の特性を有するヒアルロン酸分画が記載されている。 ”（ａ）平均分子量が７５０，０００以上、好ましくは１，２００，０００以上、すなわち極限粘度数が1400ｃｍ³／ｇ、好ましくは約2000ｃｍ³／ｇ以上；（ｂ）たんぱく質含量が０．５重量％未満；（ｃ）ヒアルロン酸ナトリウムの１％溶液の紫外線吸収度が２５７ｎｍ波長で３．０未満、２８０ｎｍ波長で２．０未満；（ｄ）生理学的緩衝液におけるヒアルロン酸ナトリウムの１％溶液の動粘度が約１０００センチストローク以上、好ましくは１０，０００センチストローク以上；（ｅ）生理学的緩衝液におけるヒアルロン酸ナトリウムの０．１〜０．２％溶液の分子旋光性が２２０ｎｍでの測定において−１１ｘ１０³度−ｃｍ²／モル（二糖類）；（ｆ）生理学的緩衝液に溶かしたヒアルロン酸ナトリウムの１％溶液の１ｍｌをふくろうモンキーの目の硝子液のほぼ半分を置換するようにして投与したとき、硝子前部チャンバーの細胞浸透は認められない、水様液におけるフレアは認められない、ガラス質における霞みまたはフレアは認められない、角膜、レンズ、光彩、網膜および脈絡膜の病理学的変化は認められない、また、上記ＨＵＡは；（ｇ）無菌で発熱源はない；（ｈ）非抗原性のものである。” 米国特許Ｎｏ．４，１４１，９７３を公知技術として挙げているカナダ特許Ｎｏ．１，２０５，０３１は平均分子量が５０，０００〜１００，０００；２５０，０００〜３５０，０００；５００，０００〜７３０，０００のヒアルロン酸分画、およびその製造方法を記載している。高分子量のヒアルロン酸（塩またはその他の形態でもよい）が用いられる場合は、希釈し投与し易いようにし、かつ、筋肉内凝集が生じないようにする。本発明のさらに他の１つの態様は、非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプターを有する分子、例えばヒトの粘着分子（ＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４など）および調節分子（ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節（転形）する薬剤組成物の投与量を提供するものであって、その投与量は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩、例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば２２５，０００ダルトン｝）；ヒヤル（Hy al）製薬会社によるヒアルロン酸ナトリウムの分画で平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトンのヒアルロン酸の分子分画；米国特許出願08/1 43983 のもの；ヒアルロン酸ナトリウムの分子量分画（例えばカナダ特許120503 1 に開示されているもので平均分子量が５０，０００−１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは他の分画）、あるいは５０，０００ダルトン未満の他の分画、１００，０００−１５０，０００ダルトンの分画、ヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；およびヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示し高親和性細胞表面レセプター（例えば粘着分子、調節分子）を発現する組織あるいは細胞の活性を調節するヒアルロン酸類似物を、薬理学的担体、賦形剤（例えば滅菌水）など人体に無害なものに加えたものである。この投与量による治療により病気を患っている患者の組織、細胞の転形が高められる。ヒアルロン酸系物質（ＨＡ）あるいはヒアルロン酸類似分子の投与により、細胞粘着の抑制、細胞活性の転形、調節が図られる。ヒアルロン酸系物質（ＨＡ）およびヒアルロン酸頚似分子は、それぞれ分子（例えば、粘着分子、調節分子）のＨＡレセプターに結合し、病気の予防がなされる。細胞表面レセプターに対するヒアルロン酸系物質（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似分子の意外な高親和性により病気の転形、調節、例えば炎症、繊維症、オンコーゲン制御（癌、転移の抑制）の転形、調節が図られる。この薬剤組成物の投与量は、病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬と、病気予防のためのヒアルロン酸系物質（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似分子とを含む。薬剤はヒアルロン酸系物質（ＨＡ）およびヒアルロン酸類似分子の転形を高める。また、ＨＡは薬剤を分子の細胞表面レセプター、例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４（粘着分子の例）およびＲＨＡＭＭ（調節分子）へと向かわせる。すなわち、本発明のさらに他の１つの態様は、以下の構成からなる薬剤組成物の投与量を提供するものである。（ｉ）病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬；（ii）非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩、例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば２２５，０００ダルトン｝）；ヒヤル（Hyal）製薬会社によるヒアルロン酸ナトリウムの分画で平均分子量が１５０，０００ないし２２５，０００ダルトンのヒアルロン酸の分子分画；米国特許出願08/143983 のもの；例えばカナダ特許1205031 に開示されているもので平均分子量が５０，０００−１００，０００ダルトン、２５０，０００−３５０，０００ダルトン、５００，０００−７３０，０００ダルトンのもの、あるいは他の分画）、あるいは５０，０００ダルトン未満の他の分画、１００，０００−１５０，０００ダルトンの分画、ヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；およびヒアルロン酸系物質と同様にレセプターに対し結合性を示し高親和性細胞表面レセプター（例えば粘着分子、調節分子）を発現する組織あるいは細胞の活性を調節する（転形する）ヒアルロン酸類似物；（iii）人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）。ここで、成分（ii）は薬剤組成物の投与量が投与ないし適用されたとき、これらのレセプターと結合して、ヒトの粘着分子（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４）および調節分子（ＲＨＡＭＭ）を発現する組織および細胞の細胞活性を調節する（転形する）のに作用し、さらに成分（ii）は成分（ｉ）を体内あるいは成分（ii）がヒアルロン酸系物質の場合は、場合に応じて皮膚に運搬させる。この薬剤の適当な例としては、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、坑ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系坑炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系坑炎剤、坑真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンなどである。この薬剤組成物の投与量は容器に複数投与分を入れ、そこから各投与量を取り出すことができる。図面の簡単な説明本発明の具体例を図面を参照して説明する。図１（ａ）はＨＡレセプターＨＡＲＬＥＣに対するポリクローン抗体を用いたＣＣＩ２１８腫瘍の免疫組織化学染色を示し、図１（ｂ）は免疫前抗体を用いた場合の対照を示す。詳細については「物質および方法」の項を参照のこと。図２はラットに５μｇの¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡを静脈注射したのちの血液からの放射能の消失に関連するものであり、挿入図は¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡの静脈注射後、１０分後のラットの種々の器官における放射能の回収を示している。ここでＫＣは Kupffer 細胞、ＰＣは柔組織細胞、ＬＥＣは肝臓内皮細胞を示す。図３はヒト結腸癌ＣＣＬ２１８をヌードラットの１本の脚に接種後の３週間のヌードラットのシンチグラフ像、同じく２．５ＭＢｑ¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡを含むＨＡを１．５ｍｇを注射後２４時間のヌードラットのシンチグラフ像を示す。図３ｂにおいて肝臓は鉛で覆われている。矢線は腫瘍を示す。図４（ａ）は¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡの静脈注射後にＨＡレセプターＨＡＲＬＥＣに対するポリクローン抗体を用いたＣＣＩ２１８腫瘍の免疫組織化学染色を示し、図４（ｂ）はヒアルロニダーゼ処置後の図４（ａ）と同様の免疫組織化学染色を示し、図４（ｃ）および（ｄ）は、それぞれ免疫前抗体（対照）を用いた以外は図４（ａ）および図４（ｂ）と同様の免疫組織化学染色を示し、図４（ｅ）および（ｆ）は、それぞれビオチニル化ＨＡ結合タンパクを用いた以外は図４（ａ）ないし図４（ｄ）と同様の腫瘍のＨＡ染色を示している。図５は腫瘍に３．５μｇ¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡ（０．７５ＭＢｑ）を投与される以前のＣＣＩ２１８誘導腫瘍、１ｄ（ａ）および１５ｄ（ｂ）を有するヌードラットのシンチグラフ像。図６は３７℃での培養における¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡのＬＥＣに対する細胞アソシエーションの抑制を示すもので、結果は平均±ＳＤ、ｎ＝３（対照媒体）、ｎ＝６（１Ａ２９媒体）で示されている。なお、詳細については「物質および方法」の項を参照のこと。図７は¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡを２ｍｇ静脈注射した１８−２０時間後の腫瘍組織および対照筋肉組織における放射能の回収を示している。図８は¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡを２ｍｇ静脈注射した１８−２０時間後のＨＡおよびＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１について染色した腫瘍組織の凍結切片を示す。なお、詳細については「物質および方法」の項を参照のこと。ここで（ａ）はＨＡについての染色；（ｂ）はＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１についての染色；（ｃ）はヒアルロニダーゼ処置後のＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１についての染色を示す。以下、本発明を実証する具体例について説明する。実施例１多糖類ヒアルロナン（ヒアルロン酸：ＨＡあるいはＨＹＡ）はレセプター媒介エンドサイトーシスを介して主として肝臓の表皮細胞により循環から急速に消失する。ＨＹＡのレセプターはこれらの細胞において特徴づけられ、ラットの肝臓表皮細胞（ＬＥＣ）から浄化され、ポリクローン抗体が生産される。ＨＹＡについての他の細胞表面レセプターが記述され、その中にリンパ球ホーミングレセプターＣＤ４４およびフィブロブラストのＨＹＡ媒介運動性についてのレセプター（ＲＨＡＭＭ）が含まれる。多くの腫瘍がＨＹＡで富化され、或る腫瘍から得られる細胞のＨＹＡ結合部位が記述された。先の知見によれば、マウスの肥満細胞腫およびヒト乳癌などの変形組織は、肝臓表皮細胞にもともと見られるＨＡレセプターに対し陽性として染色される。この実施例はアクセス可能なＨＹＡ結合部位が生体中の腫瘍組織に存在するかどうかを判定するため、およびこれらの可能性のある部位と前記のＨＹＡ結合タンパクとの関係を判定するために行われた。なお、最近開発された¹²⁵Ｉ−ラベリング法で、多糖類の平均分子量あるいはレセプター結合特性を著しく変化させない方法が採用された。物質および方法多糖類ラベリングおよび取込み／反転検査に用いられたＨＡは、鳥の組織から抽出したもので、ヒヤル（Hyal）製薬会社（カナダ国）により供給されたものである。このＨＡの分子量分布はクロマトグラフィーにより、すなわち、ポロシティが４００、１０００および２０００の目盛り付きセファクリル(Sephacryl)ＨＲ（ファーマシア、アプサラ、スウェーデン）を用い、０．２５ＭのＮａＣｌ、０．０５％クロルブタノールを用いて判定した。各分画におけるＨＡ量は２１４ｎｍでの吸収を判定することによりモニターした。放射能はパッカード・オートガンマー・カウンターにより測定した。平均分子量は４５０，０００ダルトンのオーダーであり、平均分子量が５００，０００ −８００，０００ダルトンの粉体から作られたものである。ＨＡのラベリングＨＡは、グラーベ等の方法［Glabe CG，Harty P.K，Rosen S.D，蛍光多糖類の製造と特性、Anal，Biochem．130;287-294（1983）］による多糖類のＣＤＢｒ活性後にＤＬ−チロシン（シグマ・ケミカル社、米国）でラベリングした。簡単に説明すると、１５ｍｇのＨＡをｐＨ１１で８ｍｇのＣＮＢｒを用い５分間活性化した。この活性化した多糖類を、ｐＨ８．０のほう酸塩緩衝液０．２Ｍで平衡化したセファデックスＧ２５（ＰＤ１０，ファーマシア、アプサラ、スウェーデン）を用い、反応混合物から分離した。活性化したＨＡはチロシン（Ｔ）１ｍｇで一晩培養した。このＴ−結合ＨＹＡ（Ｔ−ＨＡ）を、燐酸緩衝塩液（ｐＨ＝７．５）（ＰＢＳ）［ＮａＣｌ（８ｇ／ｌ），ＫＣｌ（０，２ｇ／ｌ）．ＫＨ₂ＰＯ₄ （０．２ｇ／ｌ）およびＮａ₂ＨＰＯ₄（１．１５ｇ／ｌ）を含む］で平衡化したＰＤ１０コラムを用い非結合Ｔから分離した。このＴ−ＨＡの一部を¹²⁵Ｉでヨウ化した。このヨウ化は１００μｇのＴ−ＨＡと０．５ｍＣｉ¹²⁵Ｉとを、１０μｇの１．３．４．６−テトラクロロ−３ａ，６ａ−ジフェニルグリコシリル（シグマ・ケミカル社、ＵＳＡ）のフィルムで覆った小さなガラス管中に収容して行った。組込まれない¹²⁵ＩをＰＢＳで平衡化したＰＤ１０コラムを用いて除去した。このヨウ化したＴ−ＨＡ（¹²⁵Ｉ−Ｔ −ＨＡ）を５℃にて保持した。比放射能は通常、１５００−５０００であった。ゲル濾過クロマトグラフィにおいて、この¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡは高分子量プロフィールを示し、循環から消失し、生合成的にラベルされた高分子のＨＡの動態および器官分布が認められた。生体内、生体外において、この¹²⁵Ｉラベル多糖類が分離されたラットの肝臓によっても摂取され、ラベリングが、これら細胞（１、２）に見られる特定の細胞表面レセプターへの結合に対し干渉しないことが見出された。免疫染色全ての染色はＡＢＣ−エリート法(Vectastain^R Elite ABC)で行われた。６μ ｍの凍結切片を用意し、ゼラチン−クロマルンで塗布したガラススライド上にセットした。蒸留水７５０ｍｌ中のクロマルン（ＫＣｒ（ＳＯ₄）₂・１２Ｈ₂Ｏ）０．５ｇと、蒸留水２５０ｍｌ中のゼラチン５ｇを５６℃に加熱後、混合した。血清タンパクへの非特異的結合を除去するため、抗血清および免疫前血清を、ラット血清（６ｍｇタンパク／ｍｌゲル）とカップリングしたセファローズ^R４Ｂゲル（ファーマシア、ＬＫＢテクノロジー・アプサラ）に吸着させた。このカップリングは製造者（アッフィニティ・クロマトグラフィ；原理および方法；ファーマシア・ＬＫＢバイオテクノロジー）により記載された方法で行った。この血清およびゲルは等量で混合し４℃で６時間培養した。この凍結切片を冷メタノール中で１０分間固定し、１０分間乾燥したのち、燐酸塩緩衝塩液（ＰＢＳ）で洗浄した。ペルオキシダーゼをＨ₂Ｏ₂の０．３％メタノール溶液中でブロックし、切片をもう一度、ＰＢＳ中で洗浄した。内因性ビオチンとビオチン結合活性をブロックするため、アビジン／ビオチン・ブロッキング・キット（ベクター・ラバラトリース）を用いた。ついで切片を、４％ヤギ血清を含むＰＢＳ中にて３０分間培養した（Vectastain^RエリートＡＢＣ）。ＨＡＲＬＥＣ抗血清を４％ヤギ血清を含むＰＢＳ中に１；３００の割合で希釈し、１時間培養した。ＰＢＳ中で洗浄したのち、切片をＰＢＳに１；２００の割合で希釈した第２のヤギ抗ラビット抗体（Vectastain^RエリートＡＢＣ）を用いて３０分間、培養した。この第２抗体で培養したのち、切片を洗浄し、ついでＡＢＣエリートＡＢＣ複合体（Vectastain^RエリートＡＢＣ）で培養した。色を出すため、１０ｍｇの３−アミノ−９−エチルカルバゾール（６ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かしたもの）を４５ｍｌの１５ｍＭアセテート緩衝液（ｐＨ）および４μｌのペルヒドロール（Ｍｅｒｃｋ）と混合し、この混合液にて切片を７．５分、培養した。洗浄後、切片をメイヤーズ・ヘマトキシリン中で１．５分間、対比染色した。ガラススライドはケルサーズ・グリセロール−ゼラチン（Ｍｅｒｃｋ）中に配置させた。切片のヒアルロニダーゼ処理メタノール固定およびＰＢＳ洗浄の後、切片をストレプトマイシス・ヒアルロニダーゼ（天野製薬会社、日本）５Ｕ／ｍｌ、ペプスタチン（Ｓｉｇｍａ）１ｍｇ／ｍｌ、０．１ＭのＮ−エチルマレイミド、０．１ＭのＥＤＴＡ（Ｍｅｒｃｋ）およびトラシロール（Ｂａｙｅｒ）５ＫＩＥ／ｍｌで３７℃で２時間培養した。その後、通常の染色手順が行われた。生体での摂取についての検討４匹のメスのヌードラット（Ｎｕ／Ｎｕ）で体重が２００−２５０ｇのものを、約３ｘ１０⁶細胞（０．５ｍｌのＲＰＭＩ媒体中）のヒト細胞系ＣＣＬ２１８（American Tissue Type Collection）で皮下接種した。この接種は実験の前にエーテル麻酔１４−３０ｄのもとで１つの後脚に対して行った。この動物をペントバルビタール（４５ｍｇ／ｋｇ体重）で麻酔させ、尾静脈を介して、あるいは約１−２ｃｍ²大の腫瘍に直接３．４〜１５００μｇの¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡ（５〜１５ｘ１０⁶ｃｐｍ）を注射した。ＨＡの特異的活性を軽減させより高い化学量を得るため、０．１５ＭＮａＣｌ０．０５〜１．０ｍｌ、１０ＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ＝７．４）に溶した未ラベルＨＡを時折、添加した。実験後、これら動物を死なせ、腫瘍、器官を放射能について評価した。得られたデータはマッキントッシュ・コンピュータ（アップル・コンピュータ社、米国）を用いて処理し、グラフはクリケット・グラフ・プログラム（バージョン１．３，クリケット・ソフトウエア社、米国）およびキャンバス（バージョン３．０．２，デネバ・システム社、米国）を用いて作成した。シンチグラフィーによる検討ラットを麻酔にかけ、上述のように注射を行った。動的実験において、注射はガンマーカメラの標準中間解像コリメータ上にラットを置いて行われた。画像はガンマー１１システム（フィリップス社）の３４ｋｅＶ、８０％セッティングで６４ｘ６４画素マトリックス・ワードモードで集められた。この動的シーケンスは毎分１画像でプリセットされ、１５分間行われた。１５分後、静的画像が注射後、異なる時間で集められた。これらの画像はヘルメスシステム（核診断、スウェーデン、英国）へ送られ、関連部分（ＲＯＩ；６）が描かれた。或る場合には、散乱のため腫瘍あるいは肝臓自体よりも大きい面積をカバーするＲＯＩを描く必要があった。結果免疫組織化学により、ＨＡＲＬＥＣに対するポリクローン抗体がヌードラットにおけるヒト大腸癌細胞系ＣＣＬ２１８の腫瘍の構造を認識し得ることが見出された。染色は主に血管内皮および腫瘍細胞の上に集中し、腫瘍の周りに向かって増大するように見える（図１ａ）。免疫前抗体はほとんど染色が認められず（図１ｂ）、ＨＡＲＬＥＣ−染色がこのシステムにおいて特異的であることを示した。 ¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡのトレーサ投与を静脈注射により行ったところ、放射能が肝臓への血液から急速に消失し、数分後には血液からほとんど放射能が認められなかった（図２）。肝臓による結合能力は非常に大きく、肝臓を通過後は血液中にトレーサーは残っておらず、僅かに少量が他の組織に達するだけであった。そのため、肝臓の結合能力を超える量が注射され、ＨＡ１．５ｍｇの投与においては、２４時間の通常の循環でも残存が認められ、腫瘍中の放射能の蓄積がシンチグラフィにより認められた（図３）。この放射能の主な部分は肝臓の上に認められ、背景上の可なりの活性が腫瘍上に観察された（図３ａ）。この腫瘍上の活性は単なる大きいサイズの組織から期待できるものよりも数倍大きかった。肝臓を鉛で覆うことにより、５０％最大レベルが腫瘍のサイズと良く対応するシンチグラフィ画像を生じさせた（図３ｂ）。処置した動物の免疫組織化学分析の結果、切片のヒアルロニダーゼ処理によりＨＡＲＬＥＣ免疫反応が特異的に増大し（図４ａおよび４ｂ）、免疫前応答の増大は生じないこと（図４ｃおよび４ｄ）が判明した。レセプター染色を大きくするとＨＡ自体の染色と合致することになる（図４ｅおよび４ｆ）。ＨＡの染色は周縁部分、血管内および周囲で最も顕著であるが、しかし、他のレセプター染色構造もＨＡについて陽性を示した。肝臓での摂取を減少させ、治療応答を達成させる手段として、２匹の動物に単一の¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡの腫瘍内への注射を行った。１匹のラットに対しては高比活性（０．２５ＭＢｑ／μｇ）のラベル付きＨＡ３．４μｇを与え、腫瘍に９０％以上残留するようにした。ほどんどのものが通常循環に達することがなく、肝臓により摂取されなかった（図５ａ）。注射後１５ｄでも、腫瘍および肝臓上の放射能の割合が注射直後に観察されたものと同程度であった（図５ｂ）。この動物は７ｄに亘り、腫瘍の退行が約２ｃｍ²から１ｃｍ²へ進ことを示した。腫瘍の減少、軟化が次第に進み、ｄ１４では触診では認めることができなかった。死亡させた後のｄ１５での組織化学分析では、腫瘍が約の０．５ｃｍ²の大きさで以前として存在していることを示した。比活性が僅か０．０２５ＭＢｑ／μｇであるが、２５０μｇのＨＡを腫瘍内へ注射したもう１匹のラットは応答を示さず、死亡させたときの腫瘍の大きさは約５ｃｍ²であった（これらのラットは同時に死亡させた）。考察ＨＡＲＬＥＣの免疫組織化学的染色はヒアルロニダーゼ処置なしでも腫瘍に現れるという事実（図１）は、結合部位は或る程度、占有されていないことを示し、循環しているＨＡの摂取の可能性を示すものである。これは肝臓レセプターについて観察されたものと符合する。実施例２血流からのＨＡ（ヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩）の主たる部位は、肝臓内皮細胞（ＬＥＣ）によるレセプター媒介エンドサイトーシスによるものである。このＬＥＣにおけるＨＡレセプター（ＨＡＲ）は表面¹²⁵ＩラベルラットＬＥＣのＨＡアッフィニティークロマトグラフィによる特徴づけられ、ラットＬＥＣ薄膜から相同へ精製される。このレセプター（ＨＡＲＬＥＣ）は平均分子量が約９０ｋＤであり８５ないし１００ｋＤの範囲に亘り、そのｐｌは約６。７である。このレセプターに対する単一特異的ポリクローン抗体（ＨＡのＬＥＣおよびＬＥＣ薄膜への結合を抑制する抗体、抗ＨＡＲＬＥＣと呼ぶ）が生じる。８５−９０ｋＤのタンパク種もこの抗体により腎臓、脾臓、胸腺、リンパ節中にイムノブロッティングで検出される。同じ組織が肝臓とともに抗ＨＡＲＬＥＣで陽性に染色され、免疫組織化学染色が主として腎臓、脾臓、リンバ節中のシヌソイドのような管部位および小腸の毛細血管に限られるだけでなく、胸腺の網様細胞などの特定の構造に限られる。角膜もＨＡＲＬＥＣとしての特徴を有し、抗ＨＡＲＬＥＣにより特異的に染色される。このＣＥＣ染色は染色前に角膜をＨＡで処理することにより抑制され、この染色強度はヒアルロニダーゼ処理により回復する。ＨＡＲＬＥＣはアッフィニティークロマトグラフィによる一連の工程によりラット肝臓から精製された。最終工程において、ほとんど全てのＨＡはＨＡ−セファロースに結合し、ＨＡ−オリゴ糖により特異的に溶出された。精製ＨＡＲＬＥＣのトリプト消化により幾つかのペプチドが生産され、これらはリバースフェイズ・クロマトグラフィにより分離された。４つのペプチドが配列され、細胞内粘着分子−１（ＩＣＡＭ−１）と同じであることが見出された。ＩＣＡＭ−１は５５ｋＤのコアポリペプチドを有する８０〜１１４ｋＤのグリコシル化単一鎖タンパクである。これは通常、低いレベルで発現するが、正常の肝臓内皮のシヌソイドに見られ、さらにリンパ節、脾臓、腎臓の或る毛細血管の内皮、あるいは角膜内皮細胞にも見られる。ＩＣＡＭ−１の免疫組織化学的部位特定は、報告されたＨＡＲＬＥＣの染色と良く一致する。この部位特定はＨＡ結合および摂取が見出された組織にも一致する。ＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１はマウスの肥満細胞腫における腫瘍内皮にも発現し、静脈投与された放射ラベル付きＨＡと結合する。腫瘍組織での可なりの放射能の増大が見出された（対照と比較して約５倍）。免疫組織化学により、このＨＡは、ＩＣＡＭ−１が染色陽性を示す部位、すなわち主として血管に局在化することが見出された。ＩＣＡＭ−１免疫反応はその部位のヒアルロニダーゼ処理により劇的に増大する。ここに、ＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１がＨＡについてのレセプターであり、ＨＡがヌードラットにおいてヒト腫瘍へ指向すること、この指向が主として腫瘍内皮のＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１への結合を介して行われるという証拠をここに提示する。物質および方法多糖類ラベリングおよび取込み／反転検査に用いられたＨＡは、鳥の組織から抽出したもので、ヒヤル（Hyal）製薬会社（カナダ国）により供給されたものである。このＨＡの平均分子量は約４５０，０００ダルトンであった。ＨＡのラベリングＨＡは、ＤＬ−チロシン（シグマ・ケミカル社、米国）でラベリングした。モノクローン抗体ラットＩＣＡＭ−１に対するこのモノクローン抗体、クローン１Ａ２９は宮坂氏（大阪大学）から提供されたものである。内皮細胞の培養ラットＬＥＣをラット肝臓のコラーゲナーゼ灌流後により分離し、ＲＰＭＩ媒体中で血清なしで培養した。抗体抑制実験４〜５時間培養した１００，０００〜２００，０００ＬＥＣを０．５μｇ／ｍｌの¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡで接種し、競合実験においては未ラベルＨＡあるいは抗ＩＣＡＭ−１上澄媒体（１：２で希釈）で接種した。この抗ＩＣＡＭ−１としてＨＡ１１５ｎｇ／ｍｌを含む対照媒体を作り（１：２で希釈）、これを抗体上澄液中のＨＡのため抑制結合活性を示す対照として使用した。これらのコンペティターは放射能ラベル付きＨＡの添加前に添加された。全接種時間は３５〜４０分とした。接種終了後、この媒体を除去し、細胞を洗浄し前述同様に放射能について分析した（１０）。免疫染色全ての染色はＡＢＣ−エリート法(Vectastain^R Elite ABC)で行われた。６μ ｍの凍結切片を用意し、ゼラチン−クロマルンで塗布したガラススライド上にセットした。血清タンパクへの非特異的結合を除去するため、ＨＡＲＬＥＣ抗血清を、ラット血清（６ｍｇタンパク／ｍｌゲル）とカップリングしたセファローズ^R ４Ｂゲル（ファーマシア、ＬＫＢテクノロジー・アプサラ）に吸着させた。この凍結切片を冷メタノール中で１０分間固定し、１０分間乾燥したのち、燐酸塩緩衝塩液（ＰＢＳ）で洗浄した。内因性ペルオキシダーゼをＨ₂Ｏ₂の０．３％メタノール溶液中でブロックし、切片をもう一度、ＰＢＳ中で洗浄した。内因性ビオチンとビオチン結合活性をブロックするため、アビジン／ビオチン・ブロッキング・キット（ベクター・ラバラトリース）を用いた。ついで切片を、４％ヤギ血清を含むＰＢＳ中にて３０分間培養した（Vectastain^RエリートＡＢＣ）。ＨＡＲＬＥＣ抗血清を４％ヤギ血清を含むＰＢＳ中に１：３００の割合で希釈し、１時間培養した。ＰＢＳ中で洗浄したのち、切片をＰＢＳに１：２００の割合で希釈した第２のＨＲＰ−共役ヤギ抗ラビット抗体（Vectastain^RエリートＡＢＣ）を用いて３０分間、培養した。ＨＡの染色は軟骨からのビオチニル化ヒアルロナン結合タンパク（ｂ−ＨＡＢＰ）を用い、ＣＰＣ処理なしで、凍結切片に対して行った。この凍結切片はメタノールで処理し、かつ、内因性ビオチンとビオチン結合活性をブロックするためアビジン／ビオチン・ブロッキング・キット（ベクター・ラバラトリース）を用いて処理したものである。この第２抗体、ｂ−ＨＡＢＰで培養したのち、切片を洗浄し、ついでＡＢＣエリートＡＢＣ複合体（Vectastain^RエリートＡＢＣ）で培養した。色を出すため、３，３−ジアミノベンジジンまたは３−アミノ−９−エチルカルバゾールを含むペルオキシダーゼ基板キット（ベクター・ラバラトリース）を用いた。この混合液にて切片を５〜１０分、培養した。洗浄後、切片をメイヤーズ・ヘマトキシリン中で１．５分間、対比染色した。ガラススライドはケルサーズ・グリセロール−ゼラチン（Ｍｅｒｃｋ）中に配置させた。切片のヒアルロニダーゼ処理メタノール固定およびＰＢＳ洗浄の後、切片をストレプトマイシス・ヒアルロニダーゼ（天野製薬会社、日本）５Ｕ／ｍｌ；ペプスタチン（Ｓｉｇｍａ）１．８μｇ／ｍｌ；１．８ｍＭのＥＤＴＡ（Ｍｅｒｃｋ）；大豆トリプシン・インヒビター１．８μｇ・ｍｌ；２．０ｍＭのヨード酢酸（Ｓｉｇｍａ）；０．１８ｍＭのｅ−アミノ−ｎ−カプトロン酸（Ｓｉｇｍａ）；および９．０ｍＭのベンズアミド（Ｓｉｇｍａ）で３７℃で２時間培養した。その後、通常の染色手順が行われた。生体での摂取についての検討複数のメスのヌードラット（Rowette Ｎｕ／Ｎｕ）で体重が約２００ｇのものを、約３ｘ１０⁶細胞（μｌｓ−ＭＥＭ媒体(Gibco)中）のヒト細胞系ＣＣＬ２１８(American T issue Type Collection)で皮下接種した。この接種は実験の繭にエーテル麻酔、１４−３０ｄのもとで１つの後脚に対して行った。この動物を麻酔させ、静脈注射を介して２ｍｇの¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡ（２〜３ｘ１０⁶ｃｐｍ）を注射した。ＨＡの特異的活性を軽減させより高い濃度を得るため、０．１５ＭＮａＣｌ、１０ｍＭのＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ＝７．４）（０．０５〜１．０ｍｌ）に溶かしたラベルしていないＨＡを添加した。１８〜２０時間後、これら動物を死なせ、腫瘍、器官を放射能について評価した。結果ＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１に対するＨＡの結合をさらに特徴づけるため、分離したラットＬＥＣ、放射能ラベル付きＨＡ、およびラットＩＣＡＭ−１に対し特徴づけられモノクローン抗体を用いて実験を行った（lalenti A およびDi Ros a M.; ヒアルロン酸は急性、慢性炎症を転形させる；エイジェント・アクション４３：４４−４７）。¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡのＬＥＣへの細胞合体が、３７℃での実験により、約６０％抑制できた（図６）。しかし、この抑制の約２０％が抗体組織培養媒体中のＨＡの存在に基因することが、同量のＨＡを含み、抗体を含まない媒体を用いた対照実験での抑制結果（図６）から見出された。ラットの他の組織における内皮細胞で発現されたＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１がＬＥＣと同等のＨＡに対する結合機能を有するか否かを見るため、反転および組織分布実験をヒトからの大腸癌を後脚に有するラットを用いて行った。その結果、¹²⁵Ｉ−Ｔ−ＨＡ（２ｍｇ）の静脈注射後１８〜２０時間において、殆どの放射能が予想通り、肝臓に見られ、血液中には殆ど認められなかった。腫瘍における放射能の回収は対照の筋組織（湿潤重量調整後）の量の３倍以上であり、この増加は統計的に有意義なものであった（ｐ＝０．００１，ｎ＝３）（図７）。腫瘍組織を組織化学技法により分析したところ、腫瘍中のＨＡは主に腫瘍の基質および血管に集中し（図８ａ）、同じ部位におけるＩＣＡＭ−１は圧倒的に血管に集中していた（図８ｂ）。ＩＣＡＭ−１染色ははっきりと観察することができたが、驚くほど弱かった（図８ｂ）。しかし、ヒアルロニダーゼ処理の後は、この染色は急激に増大した（図８ｃ）。考察ラットＩＣＡＭ−１に対するモノクローン抗体が培養においてラットＬＥＣに対するラベル付きＨＡの細胞合体を抑制し得るという事実（図６）は、ＩＣＡＭ −１がＨＡに対する重要な細胞表面レセプターであることを証明している。この抑制は僅か５０％程度であるが、この細胞合体が３７℃で実験されたので、この抑制は、細胞内部からの非結合レセプターの連続的発現することからして完成されたものではない。ＬＥＣにおけるレセプターに対する高分子ＨＡの親和性は非常に高く、ラベル付きＨＡは多分、遊離レセプター部位への結合について競合すると思われる。ＩＣＡＭ−１における他のＨＡ結合部位、つまり１Ａ２９結合により影響されないもの、の存在の可能性も考慮する必要がある。この実験で使用されたモノクローン抗体は内皮細胞への白血球の付着を抑制させることが先に説明された。この抗体がＬＥＣへのＨＡの結合を抑制させるので、ＨＡはＩＣＡＭ−１の白血球結合部位に近い部位に結合し、内皮細胞へのＨＡの結合が同じ細胞への白血球の付着を抑制させる。したがって、ＨＡの全身投与は炎症性の病気に対し良い効果を与える。この効果は、ＩＣＡＭ−１に対する抗体による全身投与に見られる炎症の減少と同様に、急性および慢性炎症の動物モデルでも認められた。腫瘍組織に対する放射能ラベル付きＨＡの静脈投与を増大させた場合（図７）、腫瘍中にＨＡについての結合構造の存在が認められた。高ビオチニル化ＨＡ結合タンパクを用いてＨＡの染色を行った結果、ＨＡが血管の内部、周囲に集中した（図８ａ）。予想どおり、ＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１の染色も血管に認められたが、やや弱かった（図８ｂ）。ＨＡの角膜ＥＣへの投与はＣＥＣレセプターの免疫組織化学的染色を減少させたが、それはヒアルロニダーゼ処理により回復することができた。このヒアルロニダーゼ処理は腫瘍部位に対しても試みられた。この効果はＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１の染色の劇的な増大を生じさせた（図８ｃ）。このことは、ＨＡＲＬＥＣ／ＩＣＡＭ−１に結合されたＨＡが特定の抗体の結合を抑制させていることを示すものである。静脈投与されたＨＡはＩＣＡＭ−１を介して内皮細胞に殆ど結合される。これはＨＡを細胞毒性薬剤の担体として、この種のＨＡ−レセプターを発現する腫瘍へ適用し得ることを示唆している。これら実施例について、本発明の範囲以内において種々の変更が可能なことは明らかであり、上記の記述は単なる例示に過ぎないことを理解されたい。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年９月２５日【補正内容】請求の範囲１．ヒアルロン酸に対し高親和性細胞表面レセプター［例えば粘着分子（例えば、ＩＣＡＭ−１，ＨＡＲＬＥＣ，ＣＤ４４）および／または調節分子（例えば、ＲＨＡＭＭ）］を発現する組織および細胞の活性を調整する方法であって；該方法が、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、治療有効非毒性投与量を以て、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）とともに投与し、人体において粘着分子のような高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整することを特徴とする方法。２．病気あるいは容体を治療するための治療有効非毒性量の薬剤あるいは治療剤をさらに含有する請求の範囲１記載の方法。３．該薬剤あるいは治療剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、抗ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系抗炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系抗炎剤、抗真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲２記載の方法。４．ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、人体において高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整するための使用。５．治療有効非毒性量の薬剤をさらに含有する請求の範囲４記載の使用。６．該薬剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、抗ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系抗炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系抗炎剤、抗真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標La six として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲５記載の使用。７．病気あるいは容体を予防するための方法であって、その方法は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、治療有効非毒性投与量を以て、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅薗水）とともに投与し、人体において粘着分子のような高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整することにより病気あるいは容体を予防することを特徴とする方法。８．ヒアルロン酸（ＨＡ）とともに、病気あるいは容体を予防する薬剤を投与することを特徴とする請求の範囲７記載の方法。９．ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ −１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節する薬剤組成物の投与量を提供するものであって、その投与量が非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）に添加してなるものである。１０．該非毒性有効投与量が、ヒアルロン酸系物質とともに、病気あるいは容体を治療するための治療有効非毒性量の薬剤あるいは治療剤をさらに含有する請求の範囲９記載の薬剤組成物の投与量。１１．（ｉ）病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬；（ii）非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物；（iii）人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）；からなり；ここで、成分（ii）は薬剤組成物の投与量が適用されたとき、該レセプターと結合して、ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するよう作用し、さらに成分（ii）は成分（ｉ）を体内あるいは成分（ii）がヒアルロン酸系物質の場合は、場合に応じて皮膚に運搬させることを特徴とする薬剤組成物の投与量。１２．該薬剤あるいは治療剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、抗ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系抗炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系抗炎剤、抗真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲１１記載の薬剤組成物の投与量。１３．請求の範囲９、１０、１１、１２記載の投与量を複数倍、収納した容器であって、そこから各投与量を取出すようにした容器。１４．ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプターを発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するための薬剤組成物の製造における、（ｉ）病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬；（ii）非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物；（iii）人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）；の使用であって、成分（ii）は薬剤組成物の投与量が適用されたとき、該レセプターと結合して、ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するよう作用し、さらに成分（ii）は成分（ｉ）を体内あるいは成分（ii）がヒアルロン酸系物質の場合は、場合に応じて皮膚に運搬させることを特徴とする使用。１５．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲１４記載の使用：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１６．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲１または２記載の方法：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１７．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲４または５記載の使用：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１８．予防されるべき病気あるいは容体が下記のものから選ばれるものである請求の範囲７または８記載の方法：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）癌および転移（vi）癌および発癌制御による転移。１９．脳卒中、風邪、ウイルス性病気から選ばれるヒトの病気の予防のための薬剤組成物の製造におけるヒアルロン酸（ＨＡ）系物質および適当な希釈剤の使用であって、該ＨＡ系物質がＨＡおよびその薬理学的に許容し得る塩から選ばれ、該ＨＡ系物質が細胞あるいは組織の発現された表面レセプターと結合するための有効量を以て投与され、該ＨＡ系物質ですでに結合されている表面レセプターの同じ部位を介して病気が組織あるいは細胞に入り込むのを防止し、これにより病気を予防するようにしたことを特徴とする使用。２０．有効非毒性量の薬剤をさらに含む請求の範囲１９記載の使用。２１．該薬剤が、遊離ラジカル除去剤；ＮＳＡＩＤ；アセチリサリチル酸；非イオン系界面活性剤、アニオン系界面活性剤、カチオン系界面活性剤から選ばれる抗ウイルス剤；抗真菌薬、解毒剤、抗菌剤から選ばれるものである請求の範囲２０記載の使用。２２．脳卒中、風邪、ウイルス性病気から選ばれるヒトの病気の予防のための薬剤組成物の製造におけるヒアルロン酸（ＨＡ）系物質および適当な希釈剤の使用であって該ＨＡがＨＡレセプターとの結合により組織あるいは細胞に伝達されるものであって、該使用がＨＡ系物質の有効非毒性量の使用であって、該ＨＡ系物質がＨＡおよびその薬理学的に許容し得る塩から選ばれ、かつ分子量が７５０，０００ダルトン以下であり、これにより高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整し、これにより投与された該ＨＡ系物質を細胞あるいは組織の発現された表面レセプターと結合せしめ、該ＨＡ系物質ですでに結合されている表面レセプターの同じ部位を介して病気が組織あるいは細胞に入り込むのを防止するようにしたことを特徴とする使用。２３．ＨＡ系物質とともに、病気を予防する薬剤をさらに含む請求の範囲２２記載の使用。２４．該薬剤が、遊離ラジカル除去剤；ＮＳＡＩＤ；アセチリサリチル酸；非イオン系界面活性剤、アニオン系界面活性剤、カチオン系界面活性剤から選ばれる抗ウイルス剤；抗真菌薬、解毒剤、抗菌剤から選ばれるものである請求の範囲２３記載の使用。２５．病気あるいは容体の予防のための薬剤組成物の投与量の製造におけるヒアルロン酸および適当な希釈剤の使用であって、投与量がヒアルロン酸およびその薬理学的に許容し得る塩、あるいはその組合わせから選ばれたヒアルロン酸系物質の非毒性有効量と、ヒトへの投与に適した薬理学的賦形剤とを有し、細胞あるいは組織の発現された表面レセプターと結合することにより、該ヒアルロン酸系物質ですでに結合されている表面レセプターの同じ部位を介して病気が組織あるいは細胞に入り込むのを防止し、これにより（ｉ）風邪、脳卒中（ii）、ウイルス性病気（iii）から選ばれる病気を予防するようにしたことを特徴とする使用。２６．該投与量がヒアルロン酸系物質とともに、病気を予防する非毒性有効量の薬剤あるいは治療剤をさらに含む請求の範囲２５記載の使用。２７．該薬剤あるいは治療剤が、遊離ラシカル除去剤；ＮＳＡＩＤ；アセチリサリチル酸；非イオン系界面活性剤、アニオン系界面活性剤、カチオン系界面活性剤から選ばれる抗ウイルス剤；抗真菌薬、解毒剤、抗菌剤から選ばれるものである請求の範囲２６記載の使用。２８．予防されるべき病気あるいは容体が下記のものから選ばれるものである請求の範囲２２または２３記載の使用：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）ウイルス性病気。２９．薬剤組成物の製造におけるヒアルロン酸およびその薬理学的に許容し得る塩、あるいはその組合わせから選ばれたヒアルロン酸系物質の使用であって、これにより、ヒアルロン酸系物質に対する高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の表面レセプターと結合することにより、該ヒアルロン酸系物質ですでに結合されている高親和性表面レセプターにウイルスが結合するのを防止し、病気あるいは容体を防止することを特徴とする使用。３０．薬剤組成物の製造のためのヒアルロン酸の使用であって、これにより、人体においてヒアルロン酸系物質に対する高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の表面レセプターと結合することにより、ウイルス性病気を防止することを特徴とする使用。３１．薬剤組成物の製造のためのヒアルロン酸の使用であって、これにより、粘着分子のＨＡレセプターと結合し、病気を運ぶ微生物の結合を防止し、該微生物が体内の細胞、組織に該粘着分子を介して入り込むのを防止することを特徴とする使用。３２．病気を予防するための薬剤の有効非毒性量をさらに含む請求の範囲３１記載の使用。３３．該薬剤が有効量のアセチリサリチル酸（アスピリン）である請求の範囲２０記載の使用。３４．病気が脳卒中である請求の範囲３３記載の使用。３５．ＨＡが分子量７５０．０００ダルトン未満である請求の範囲４ないし６、１４、１５、１９ないし３４のいづれか１に記載の使用。３６．ＨＡが分子量１５０，０００ダルトン以上である請求の範囲４ないし６、１４、１５、１９ないし３５のいづれか１に記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＧＡＡ６１Ｋ 45/00 38/21 37/02 ＡＧＡ 45/00 37/66 Ｚ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒアルロン酸に対し高親和性細胞表面レセプター［例えば粘着分子（例えば、ＩＣＡＭ−１，ＨＡＲＬＥＣ，ＣＤ４４）および／または調節分子（例えば、ＲＨＡＭＭ）］を発現する組織および細胞の活性を調整する方法であって；該方法が、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、治療有効非毒性投与量を以て、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）とともに投与し、人体において粘着分子のような高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整することを特徴とする方法。２．病気あるいは容体を治療するための治療有効非毒性量の薬剤あるいは治療剤をさらに含有する請求の範囲１記載の方法。３．該薬剤あるいは治療剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、坑ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系坑炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系坑炎剤、坑真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲２記載の方法。４．ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、人体において高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整するための使用。５．治療有効非毒性量の薬剤をさらに含有する請求の範囲４記載の使用。６．該薬剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、坑ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系坑炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系坑炎剤、坑真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標La six として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲５記載の使用。７．病気あるいは容体を予防するための方法であって、その方法は、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、治療有効非毒性投与量を以て、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）とともに投与し、人体において粘着分子のような高親和性細胞表面レセプターを発現する組織あるいは細胞の細胞活性を調整することにより病気あるいは容体を予防することを特徴とする方法。８．ヒアルロン酸（ＨＡ）とともに、病気あるいは容体を予防する薬剤を投与することを特徴とする請求の範囲７記載の方法。９．ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ −１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節する薬剤組成物の投与量を提供するものであって、その投与量が非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物を、人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）に添加してなるものである。１０．該非毒性有効投与量が、ヒアルロン酸系物質とともに、病気あるいは容体を治療するための治療有効非毒性量の薬剤あるいは治療剤をさらに含有する請求の範囲９記載の薬剤組成物の投与量。１１．（ｉ）病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬；（ii）非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物；（iii）人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）；からなり；ここで、成分（ii）は薬剤組成物の投与量が適用されたとき、該レセプターと結合して、ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するよう作用し、さらに成分（ii）は成分（ｉ）を体内あるいは成分（ii）がヒアルロン酸系物質の場合は、場合に応じて皮膚に運搬させることを特徴とする薬剤組成物の投与量。１２．該薬剤あるいは治療剤が、遊離ラジカル除去剤、例えばアスコルビン酸（ビタミンＣ）、抗がん剤、化学治療剤、坑ウイルス剤例えば非イオン系界面活性剤（例えばノンオキノール−９［ノニルフェノキシポリメトキシエタノール］；商標、Delfen、避妊クリーム）、アニオン系界面活性剤（例えば塩化セチルピリジニウム）、カチオン系界面活性剤（例えば塩化ベンズアルコニウム）、非ステロイド系坑炎剤（ＮＳＡＩＤ）例えばインドメタン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ケトロラクの(+/-)トロメタミン塩（商標Toadolとして市販）、ステロイド系坑炎剤、坑真菌薬、解毒剤（例えば浣腸などの経腸投与薬）、鎮痛剤、気管支拡張剤、抗菌剤、抗生物質、貧血治療剤（例えば糖尿病、ベルジャ−病）、抗体モノクローン剤、育毛のための局所投与用ミノキシジル、利尿剤（例えばフロセミド、商標Lasix として市販）、免疫抑制剤（例えばシクロスポリン）、リンパ球剤（例えばインターロイキン−２など）、アルファ・ベータインターフェロンから選ばれるものである請求の範囲１１記載の薬剤組成物の投与量。１３．請求の範囲９、１０、１１、１２記載の投与量を複数倍、収納した容器であって、そこから各投与量を取出すようにした容器。１４．ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプターを発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するための薬剤組成物の製造における、（ｉ）病気の治療のための非毒性有効量の薬剤あるいは治療薬；（ii）非毒性有効投与量のヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸、その薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウムで平均分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし１５０，０００ダルトンと２２５，０００ダルトンとの間｝；および／またはヒアルロン酸系物質の分子量分画、例えば、ヒアルロン酸ナトリウムあるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニット、あるいはこれらの組合わせ；および／またはレセプターに対し結合性に関しヒアルロン酸系物質と同様の機能を有するヒアルロン酸類似物；（iii）人体に無害な薬理学的賦形剤（例えば滅菌水）：の使用であって、成分（ii）は薬剤組成物の投与量が適用されたとき、該レセプターと結合して、ヒアルロン酸系物質に対し高親和性細胞表面レセプター（例えばＩＣＡＭ−１、ＨＡＲＬＥＣ、ＣＤ４４、ＲＨＡＭＭなど）を発現する細胞あるいは組織の細胞活性を調節するよう作用し、さらに成分（ii）は成分（ｉ）を体内あるいは成分（ii）がヒアルロン酸系物質の場合は、場合に応じて皮膚に運搬させることを特徴とする使用。１５．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲１４記載の使用：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１６．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲１または２記載の方法：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１７．細胞あるいは組織の細胞活性の調節が、場合に応じて下記病気あるいは容体から選ばれるものの治療あるいは予防のためのものである請求の範囲４または５記載の使用：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）発癌制御。１８．予防されるべき病気あるいは容体が下記のものから選ばれるものである請求の範囲７または８記載の方法：（ｉ）風邪（ii）脳卒中（iii）炎症（iv）繊維症（v）癌および転移（vi）癌および発癌制御による転移。