JPH10504309A

JPH10504309A - 有害昆虫を制御するための組成物および方法

Info

Publication number: JPH10504309A
Application number: JP8507587A
Authority: JP
Inventors: エヌ．レン，ヘザー
Original assignee: バージニアテックインテレクチュアルプロパティーズ，インコーポレーテッド
Priority date: 1994-08-17
Filing date: 1995-08-07
Publication date: 1998-04-28
Also published as: WO1996004791A1; US5514681A; CA2197641A1; PL318648A1; CN1170337A; NO970719L; NO970719D0; FI970657A; KR970705341A; EP0777417A4; FI970657A0; US5852025A; HUT76681A; US5620982A; EP0777417A1; BR9508875A; AU3327195A

Abstract

(57)【要約】プリン、キサンチンオキシダーゼ阻害剤および／またはジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤を含む組成物、およびプリン代謝経路を介してそれらの窒素性老廃物を利用し、貯蔵し、または排泄する有害昆虫の成長を抑制するためにこれらを使用する方法。

Description

【発明の詳細な説明】有害昆虫を制御するための組成物および方法発明の背景１．発明の分野本発明は、窒素性老廃物を利用し、貯蔵し、または排泄するためにプリン代謝経路を利用する有害昆虫の成長の抑制に関する。本発明は、プリン類、プリン代謝酵素阻害剤およびこの経路の特定の補因子の生成を制御する酵素の阻害剤から成る組成物を成長制御量含む処方剤を有害昆虫と接触させることからなる。２．背景技術の説明化学的不妊剤、フェロモン、および環境基準の制御戦略としてこのような優れた昆虫制御技術の最近の発展およびすばらしい前途の有望さにもかかわらず、化学的殺虫剤の使用がまだ優越した役割を果たしている。しかし、環境問題に対する公衆の意識喚起、およびより厳格な政府規制および従来の条件に対する昆虫耐性の増加は、害虫駆除産業にこれらの従来の化学殺虫剤に代替するより安全なものを追求させる。他のものは、昆虫成長阻害剤の有効性を同定し、そして評価することを試みた。しかし、昆虫制御剤の選択性および有効性を増加させることは引き続き必要であるので、主要な昆虫の栄養および代謝経路を理解したうえで、制御剤の合理的処方に関与することが望まれるようになった。発明の要旨大部分の昆虫は、それらが尿酸およびそれらの尿酸分解誘導体として過剰窒素を排泄する点で、尿酸排泄性を示すことは広く知られている（コクラン(1975)の Insect Biochemistry and Function中の「Excretion in Insects」pp.171-281）。尿酸は、表１に示されるプリン異化経路を介して合成され、外側に排泄されるか、またはある場合には代謝貯蔵物として昆虫に貯蔵される。ゴキブリは、尿酸の貯蔵排泄の基礎的性質の優れたモデルである。例えば、ドイツゴキブリでは、パターン調査として、交配中の雌に尿酸のスラリーが流される。直ぐに、雌は、発生中の卵に、胚形成の間使用される尿酸を供給する(ムリンズおよびケイル(1980)のNature 283：567-569)。この生命中枢のサイクルを中断すると、ゴキブリ個体群の成長に非常に決定的であるようであり、ゴキブリ個体群の成長はこれらの尿酸の貯蔵に非常に左右される（インゲブレットソンおよびムリンズ(1986)のComp．Biochem．Physiol．83B:93-97；スイーターら(1992) のJ．Econ．Entomol．85(1)：117-122）。ゴキブリの脂肪体中で、尿酸のde nov o 合成が、栄養細胞中でプリンサルベージを通して大いに起こり、そして尿酸は再利用のために特定化ウロサイト（urocytes）に貯蔵される（コクラン(1985)の Ann．Rev．Entomol．30：29-49）。これは、ウロサイトに隣接する細菌細胞中で分離される内生共生体細菌により貯蔵尿酸塩の尿酸分解消化を通して達成される (ウレンおよびコクラン(1987)のComp．Biochem．Physiol．88B:1023-1026)。尿酸サイクルのこの部分で、内生共生体細菌は、キサンチンデヒドロゲナーゼを用いて、尿酸塩をキサンチンに還元し、そしてこの系のどの部分の崩壊も集団の成長を阻害する。昆虫生理学の別の基礎的一面は、脱皮サイクルであり、角皮上皮細胞が増加し、そして脱皮直前に新たなより大きな外骨格を合成する。（チャップマン(1982) のThe Insects Structure and Function、Cambridge，MA:Harvard University P ress；ヘップバーン(1985)のFundamentals of Insect Physiology 中の「The In tegument」、Ed．M.S.Blum、pp139-183、ニューヨーク、John Wiley & Sons，In c.）。同時に、例えば内部および外部の生殖器官の発達が各段階で進行し、最終脱皮に達して、性的に成虫になる場合のゴキブリのように、内部組織の多くが成長している（チャップマン(1982)のThe Insects Structure and Function、Camb ridge，MA:Harvard University Press）。この過程の間、昆虫は、細胞の急速な成長を達成するためにそれらの代謝貯蔵物に頼ることが多い。プリン代謝経路は、これらの過程全ての中心であり、そして昆虫の恒常性（ホメオスタシス）の中心である。既知の生化学的経路の全てについてと同様、加水分解酵素およびそれらの補因子は、プリン消化経路の機能化にも必須である。この経路も、ヌクレオチドおよび核酸生合成で再利用するための遊離プリン塩基を利用するために働く（レーニンガー(1970)のBiochemistry：The Molecular Basi s of Cell Structure and Function、２版、pp740-742）。この経路に関与する酵素の内の２つは、キサンチンオキシダーゼおよびジヒドロ葉酸レダクターゼ（テトラヒドロホレートデヒドロゲナーゼとしても知られている）である。硫化モリブデン鉄フラボ酵素であるキサンチンオキシダーゼ（E ．C．1.2.3.2）は、グアノシンモノホスフェートおよびイノシンモノホスフェートからキサンチンへ、そして最終的に尿酸に至るプリン異化の作用経路で後半に作用する。この経路で、キサンチンオキシダーゼは、ヒポキサンチンをキサンチンに変換すること、およびキサンチンを尿素に変換することの両方を触媒する（コフラン(1980)のMolybdenum and Molybdenum-Containing Enzymes、ニューヨーク、Pergamon Press）。キサンチンデヒドロゲナーゼとして機能すると、同じ酵素が、ゴキブリの脂肪体中の内生共生体細菌の尿素分解経路で尿酸をキサンチンに還元する（ウレンおよびコクラン(1987)のComp．Biochem．Physiol．88B：102 3-1026）。ジヒドロ葉酸レダクターゼは、テトラヒドロ葉酸の合成を触媒し、テトラヒドロ葉酸は尿酸およびプリン合成経路で必須の補因子である(クーセルズおよびベネット(1979)のThe Use of Antibiotics中の「Trimethoprim and Cotri moxazole」、３版、ロンドン、William Heinemann Medical Books，Ltd.)。それらのプリンの再利用および排泄につながるこれらの昆虫系を理解することが、昆虫の恒常性（ホメオスタシス）を中断するための、そしてそれは昆虫個体群の成長を阻害するための新規組成物および方法を提供する本発明に至る。したがって、１つの具体例では、これらの組成物は、(1)グアニン（2-アミノ-1,7-ジヒドロ-6H-プリン-6- オン）のようなプリン、ヒポキサンチン(1,7- ジヒドロ-6 H-プリン-6- オン)、またはキサンチン(3,7- ジヒドロ-1H-プリン-2,6- ジオン) およびそれらの混合物、および(2)キサンチンオキシダーゼ阻害剤、好ましくは 6- 非置換ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン群の内の１つ、例えばオキシプリノール(4 ,6- ジヒドロキシピラゾロ[3,4-d]ピリミジン)、4-メルカプト-6- ヒドロキシピラゾロ[3,4-d]ピリミジン、4,6-ジメルカプトピラゾロ[3,4-d]ピリミジン、4-アミノ-6- ヒドロキシピラゾロ[3,4-d]ピリミジン、4-ヒドロキシ-6-メルカプト[3 ,4-d]ピリミジン、またはアロプリノール(４- ヒドロキシピラゾロ[3,4-d]ピリミジン)およびその混合物からなる。別の具体例で、これらの組成物は、(1)プリン、(2)キサンチンオキシダーゼ阻害剤、および(3)ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、例えばトリメトプリム(2,4- ジアミノ-5-(3,4,5-トリメトキシベンジル)ピリミジン)、メトトレキセート(N-[4-[[(2,4- ジアミノ-6-プテリジニル)メチル]メチルアミノ]ベンゾイル]-L-グルタミン酸)またはピリメタミン(5-(4-クロロフェニル)-6-エチル-2,4- ピリミジンジアミン)およびそれらの混合物からなる。特定の酵素阻害剤と組み合わせた特定のプリンが本発明を例示するのに利用される一方で、図１の経路の任意の酵素についての任意のプリンおよび阻害剤は、本発明にしたがって用いることができることがわかる。さらに、ゴキブリが本発明を例示するのに使用される一方で、本発明の組成物および方法が、プリン代謝経路を利用して、その窒素性老廃物を利用するか、貯蔵するかまたは外部へ排泄する全ての有害昆虫の成長を抑制するのに使用できることがわかる。本発明のさらに別の具体例は、昆虫成長抑制に有効な量の組成物を含む昆虫餌または誘引物質処方を含む。図面の説明図１は、プリン異化の経路を示す。発明の詳細な説明本発明は、有害昆虫、特にゴキブリによる成長抑制量の特定の新規組成物を含有する処方物の摂取が、恒常性（ホメオスタシス）を破壊し、そして個体群の成長を阻害するという知見に基づいている。本発明の組成物は、処方の単独の活性成分であってもよいし、またはそれらは、他の通常の殺虫剤のような１つまたはそれ以上の追加の活性成分と混合してもよい。本発明の組成物は、「餌」または「誘引物質」と処方してもよい。本発明を説明する目的で、これらの語は、有害昆虫が誘引されそしてそれらが摂取する全処方を意図する。このような組成物は、当業界で熟練したものによく知られており、本発明の組成物に関して不活性である任意のこのような材料が、本発明の実施に使用できることがわかる。使用の際、処方は、有害昆虫に、有害昆虫の所在位置に、および／または有害昆虫の巣に塗布され得る。以下の実施例は、例示のみの目的で包含され、特に特定されない限り、限定されることを意味しない。実施例１−一般的方法ストック研究所「VPI」株由来のドイツゴキブリ(Blatella germanica L.)が、混合した生活ステージの実験コロニーを形成させるのに使用された。他に特定されない限り、各昆虫コロニーの42匹の昆虫は、各々５匹の新たに羽化した後の成虫雄および雌、第５令の若虫ステージの各々８匹の雄および雌、および第３令の若虫ステージの各々８匹の雄および雌を含んでいた。各実験ブロックでは同じストックコロニーから昆虫を選択するように心掛け、そして各コロニーは、処理に先立って２４時間順化させた。コロニーは、繊維状の平板を設けた１ガロンのガラス製電槽に収容し、綿で栓をしたガラスバイアルに連続的に新鮮な水道水を供給した。電槽は、ペトロラタムの薄い被膜で縁取られ、そして強力な伸縮性のあるバンドで適所に保持された３層の目の荒い薄地の綿布（チーズクロス）で綿密に被覆された。これらの手段は、試験昆虫の脱走、並びに他の昆虫による混入を防いだ。各試験は、食物が処理されていない「対照」コロニー、および濃度％（ｗ／ｗ）を形成するために試験された組成物と食物が混合された「試験」コロニーを含んだ。特に断わらない限り、食物は、アグウェイラボラトリーのラット餌(Agway Laboratory Rat Chow)であり、食物ペレットを粉砕して微細粉末にすることにより製造し、そして試験コロニーについては、乳鉢および乳棒を使用して、試験化合物を食物とともに粉砕し混合することにより試験化合物を混入させた。処理されたまたは未処理のいずれかの食物をステンレス鋼プランセットで前もって計量し、こぼれによる損失を避けるためにプラスチック製カップに入れたプランセットと共に供給された。試験の間に、プランセットは、週毎に計量され、そして、必要であれば、食物は補充された。反復実験コロニーは毎日連続して開始され、全コロニーは飼育中と同じ周囲温度(25℃)、および湿度の条件下でストック研究所で収容された。昆虫が含まれていないことを除き対照コロニーと一致する対照「ブランクコロニー」は、周囲湿度の変化による食物の湿度の損失または取得についてモニターした。このような変化の全てが、食物消費の計算に係数化された。全ての死んだ昆虫の記録を続け、それは食物が計量される時に毎週計測し、性別が鑑定された。死んだ昆虫は、全身尿酸アッセイにかける前に凍結され、そして−４℃で貯蔵された。他に特定されない限り、各コロニーの全個体群は、３週ごとに計測した。昆虫の全部または雌の全部が死んだかまたは瀕死であるとき、コロニーは生育できないと判断され、そして実験は終了した。残りの昆虫は、上述のとおり凍結または凍結保存により殺されて、尿酸について分析するのを待った。各コロニーについての個体群数の平均変化率（Δ％）が計算され、開始数（４２）が１００％に相当した。食物消費は、個々のゴキブリ当たりのミリグラム（ＩＣｍｇ）で、若虫の羽化の前の最初の３週間の実験に関して計測された。これらの測定は、試験組成物が摂取されたか否か、そしてこのような組成物が個体群の成長を阻害するのに有効であるか否かを決定した。実施例２−尿酸アッセイ死んだゴキブリの全身尿酸含量の測定は、基本的に標準ウリカーゼアッセイに従って行われた（コクラン(1973)のComp．Biochem．Physiol．A46：409-419）。個々のゴキブリは、切り取られた羽根や足と供に、24-48 時間、60℃で乾燥され、計量され、そして微細粉末に粉砕された。尿酸は、0.6%炭酸リチウム水溶液を用い、３時間、60℃で、連続して振盪しながら乾燥組織から抽出した。抽出物は、遠心して組織破片を取り除いた。ウリカーゼと混合した後、分光光度計により 292nm での最大吸収を測定し、そして尿酸濃度を乾燥組織1mg 当たりの尿酸μg で計算した。実施例３−キサンチン食物組成物の評価２つの実験（３ａ）および（３ｂ）で、粉砕したラット餌である基本のゴキブリ飼料に１％キサンチン[Sigma Chemical Co.]を添加する効果が研究された。各実験のコロニーは、実施例１で記載されたとおりに設定され、ラット餌のみ（ＲＣ）またはラット餌＋１％キサンチン（ＲＣＸ）のいずれかを与えた。各実験は、各条件について３つの反復実験コロニーを含んでいた（ｎ＝３）。個体群は、６および９週（３ａ）または１０および１２週（３ｂ）で計測され、平均個体群数の変化率（Δ％）を計算した。最初の３週の処理の間の飼料の個々の消費（ＩＣｍｇ）は、食物−重量データから計算した。結果を表１に示す。キサンチンの添加は、餌の摂取を阻害したり個体群の成長に悪影響を与えないようであった。実際、個体群の数がラット餌のみで飼育されたものよりキサンチン処理コロニーで高かったので、キサンチンは、生殖を増進したようであった。表１は、１％キサンチン不含（ＲＣ）または含有（ＲＣＸ）食物を与えたドイツゴキブリのコロニーで時間（週）経過に対する平均個体群数での平均個別消費（ＩＣｍｇ）および変化率（Δ％）を示す。ｎ＝３。実施例４−キサンチン−オキシプリノール組成物の評価ドイツゴキブリのコロニーは上述のとおりに作られた。投与された飼料は、ラット餌のみ（ＲＣ）、オキシプリノール[Sigma Chemical Co.]を加えたラット餌 (RC ＋OXY%)、および１％キサンチン(RCX)およびオキシプリノール(OXY%)を５つの濃度(w/w)で加えたラット餌だった。個体消費(ICmg)、個体群の成長抑制、および全身尿酸濃度を測定した。最初の３週での個体消費(ICmg)を計算し、結果を以下の表２ａに示した。オキシプリノールのみの添加は、未処理食物で飼育した対照に対して食物消費が減少した。飼料へのキサンチンの添加は、オキシプリノール処理食物の消費を、０．１％オキシプリノール濃度で３５％まで、そして１．０％オキシプリノール濃度で５６％まで増加させる原因となった。表2aは、1%キサンチン含有または不含で、そして種々の濃度(w/w)のオキシプリノール(OXY%)で３週間たったラット餌の平均個別消費（ＩＣｍｇ）を示す。５．５、６、７、９、１０および１２週の処理で、平均コロニー個体群数の変化率（Δ％）は上記のように決定され、その結果を以下の表２ｂに示した。飼料にオキシプリノールのみを添加すると個体群の成長を阻害しなかった。キサンチンに加えてオキシプリノールを添加すると、個体群の成長を絶滅点まで阻害した。表2bは、1%キサンチン含有または不含で、そして種々の濃度(w/w)のオキシプリノール(OXY%)で時間（週）経過に対して食物を供給されたドイツゴキブリのコロニーで、平均個体群数の変化率(＋または−Δ%)を示す。注意書き以外は、n=3。 5-9 週の処理の間に死んだゴキブリについて標準ウリカーゼアッセイから全身尿酸濃度を計算した。ドイツゴキブリのVPI 研究所株由来のサンプルも、処理前の一般的な「ベースライン」レベルの尿酸塩を示すために分析された。以下の表 2c に示されるとおり、VPI 株の雌は、一般にステージにかかわらず雄よりわずかに高い尿酸レベルを示す。しかし、以下の表 2d-2fに示されるとおり、飼料中にキサンチンおよびオキシプリノールを加えて数週間の飼育後、年齢または性別にかかわらず全ての群で全身尿酸塩濃度が著しく低下する。表2cは、典型的な飼育実験で使用されるものであるドイツゴキブリのVPI 研究所株の異なる年齢および性別での平均全身尿酸濃度(μg/mg乾燥組織重量、±SEM) を示す。表2dは、不含(RC)または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(W/W)のオキシプリノール(OXY%)を含有する食物での雄ドイツゴキブリの平均全身尿酸濃度(μg/mg 乾燥組織重量、±SEM)を示す。表2eは、不含(RC)または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(W/W)のオキシプリノール(OXY)を含有する食物での雌ドイツゴキブリの平均全身尿酸濃度(μg/mg乾燥組織重量、±SEM)を示す。表2fは、不含(RC)または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(W/W)のオキシプリノール(OXY%)を含有する食物を供給された若虫のドイツゴキブリの平均全身尿酸濃度(μg/mg乾燥組織重量、±SEM)を示す。実施例５−異なる期間供給されたキサンチン−オキシプリノール組成物の評価上述のとおりコロニーは作られた。食物は、１％キサンチンおよび種々の濃度のオキシプリノールで処理され、そして２４時間または１、２または３週のいずれかの期間供給された。処理時間の終わりに処理食物を取り除き、そして昆虫には、残りの試験時間、未処理のラット餌が供給された。以下の表３に示されるとおり、データは、最小用量のオキシプリノールが、個体群の阻害を達成するためにずっと摂取されねばならないことを示す。例えば、２４時間処理は、対照と比較して個体群の数に影響を及ぼしたが、いずれの濃度のオキシプリノールでも個体群の数を制御しなかった。計算では、この時間の間に摂取されたオキシプリノールの個体消費は６−１０４μｇの範囲であることが明らかになった。表3 は、ラット餌のみ(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(W/W)のオキシプリノール(OXY%)を加えたラット餌で飼育されたコロニーでの平均個体群数の変化率（＋または−）を示す。処理の期間は、ラット餌のみが供給された後、24時間、または１、２または３週間だった。n=3。０．１％オキシプリノールで１または２週間処理すると、対照と比較して、より低い個体群の数になり、１−２週間まで卵の孵化を遅らせるが、処理コロニーは、それらが１２週で終了するときに回復した。しかし、０．１％オキシプリノールでの３週の処理は、処理後の週で、個体群の数に実質的な減少を起こし、１２週までは回復は記録されず、そしてただ１つの生育可能な卵が通常より６週遅く孵化した。２％オキシプリノールで２週間、あるいは１％または２％オキシプリノールで３週間処理されたコロニーは、「回復」時間が１５週に延長された場合でさえ回復しなかった。オキシプリノールの平均個別消費は、各々734 μg、579 μg、および1140μgであった。実施例６−食物選択の評価各条件で３つの複製で上述のとおりコロニーを作った。未処理食物（ＲＣ）またはキサンチン＋オキシプリノール（ＲＣＸ＋Ｏ％）で処理した食物を含んだプランシェットが、各コロニーにともに提供された。各プランシェットの食物の重さを計算して、各々どくらい消費されたかを決定した。処理は、１％キサンチンと、０．１％、０．５％または１．０％(w/w)濃度でのオキシプリノールとを含むラット餌から成った。対照コロニーには、未処理のラット餌２プランシェット分が与えられた。以下の表４に示されるとおり、結果は、昆虫が同量の処理および未処理食物（０．５％オキシプリノールで）を消費するか、または未処理食物より処理されたもの（０．１％および２．０％オキシプリノールで）を多く食べたかを示した。摂取されたオキシプリノールの範囲は、最初の３週で、個体当たり２９μｇと２６５μｇの間であると計算され、そして高い水準の個体群の成長制御が、特に１．０％オキシプリノール濃度で達成された。表４は、処理(RCX＋0%)および未処理(RC)食物が、食物の選択として互いに供給されたときのコロニーでの時間（週）に対する個体消費（ICmg）および平均個体群の数での変化率(Δ%)を示す。最初の３週間で摂取されたオキシプリノールの量は、μg/個体(IC μg OXY)で示され、そして消費された処理と未処理食物の比率は、摂取総量の率(総%)で示される。実施例７−キサンチン−オキシダーゼ組成物の生活ステージ効果先に記述されたとおりドイツゴキブリのコロニーを、３つの異なるコロニーに分離された普通に混合されたステージに収容した。コロニーは、新たに脱皮した成虫（５匹の雄と５匹の雌、６−７週令）、大きな若虫（８匹の雄と８匹の雌、５−６週令）、または小さな若虫（８匹の雄と８匹の雌、３−４週令）から成る。年長の成虫のコロニー（５匹の雄と５匹の雌、７−８週令）も試験された。コロニーは、未処理のラット餌（ＲＣ）、または１％キサンチン（ＲＣＸ）と種々のレベル(w/w)のオキシプリノール(OXY%)で処理したラット餌で飼育した。個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を各ステージで測定し、そして各々、成虫、大きな若虫、小さな若虫および年長の成虫について以下の表5a から5dに示す。これらの表中のデータにより、キサンチンとオキシプリノールでの処理の最初の影響が、ゴキブリの繁殖を攻撃するものとして起こることが確認される。この効果は、恐らく不可逆な酵素阻害のために置換されることができない尿酸貯蔵物を含めた昆虫の代謝貯蔵物の消耗により起こるものであろう。しかし、着色コロニーで孵化する非常に小さな若虫はまた、通常は弱すぎて生存できなくて、そしてまれにしかそれらの第 2齢に達しないという点で影響される。それらは、通常出生前にこれらに変化する代謝保存が付与されない可能性がある。処理食物でのそれらの連続飼育は、幼若若虫がそれら自身の代謝貯蔵物、特に尿酸の貯蔵を開始させることも防ぐ。雄の成虫は、第 1に死んだことが観察された。交配で、雄の成虫は、貯蔵物の大部分を利用して尿酸塩および成熟精子を雌に受け渡す。栄養貯蔵物の大規模な投入を必要とする卵をちょうど作った雌は、通常排卵管から突き出た生育できない卵−ケースとともにその後直ぐに死ぬ。コクランは、周期的摂食が、卵の産生に関連して成虫の雌に起こることを観察した(Cochran(1983)Entomol．Exp．Appl．34：51-57)。この卵嚢のサイクルにおいて、卵母細胞が成熟する間に、雌は精力的に食べ、そして卵−ケースを抱く間に、小食になる。これらの現象は、新たに発生した成虫で摂食比率が高くて初期の死亡率が低く（表５ａ）、並びに年長の成虫で摂食比率が低いこと（表５ｄ）を説明する。これらの後者の雌は、コロニーが作られた直後に卵嚢を満たした卵をすでに成熟させたようであり、そしてそのため、それらのサイクルの一部で摂食比率が低いようである。それらの最初の若虫孵化は、これらのコロニーにおける個体群の数の急激な上昇、さらに成虫が繁殖を試みたとき、コロニーが徐々に減少し、そして新たに孵化した若虫は死ぬことになることを説明する。若虫は、成虫と同一の死亡パターンを伴い、そして、それらが最初の卵母細胞を成熟させるための準備に通常活発に摂食すると、成虫段階への脱皮の後、処理飼料によりほとんどが影響を受けた。大きな若虫コロニー（表５ｂ）、および小さな若虫コロニー(表５c)で個体群が減少する比率での遅れは、主要な衝撃が繁殖の間に起こることの別の証拠である。これは、これらの年齢群についての実験の9-11週の間に起こった。キサンチンを伴うオキシプリノールについての有効な用量範囲は、これらの実験で非常に広範であり、その結果新たに脱皮した成虫で3 週間測定した99.5μg/ 個体で死亡率が高くなり（表５ａ）、そしてコロニーが若虫として出発した場合に、個体消費が高ければそれだけゆっくり防除する。しかし、処置を開始するとゴキブリの年齢に応じて異なる効果を示すが、それらが繁殖を試みると、全て影響を受けることは明らかである。表5aは、未処理ラット餌(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w) のオキシプリノール(OXY%)で処理されたラット餌を摂食した、新たに脱皮した成虫のドイツゴキブリのコロニーにおける個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。表5bは、未処理ラット餌(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w) のオキシプリノール(OXY%)で処理されたラット餌を摂食した大きな若虫のドイツゴキブリ（開始日で5-6 週令）のコロニーにおける個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。表5cは、未処理ラット餌(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w) のオキシプリノール(OXY%)で処理されたラット餌を摂食した小さな若虫のドイツゴキブリ（開始日で3-4週令）のコロニーにおける個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。表5dは、未処理ラット餌(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w) のオキシプリノール(OXY%)で処理されたラット餌を摂食した年長の成虫のドイツゴキブリ（開始日で8-9 週令）のコロニーにおける個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。実施例８−トリメトプリムを含む組成物の評価ドイツゴキブリの複製コロニーを記述のとおり調製した。投与された食物は、ラット餌のみ（ＲＣ）、種々の濃度のトリメトプリムを有するラット餌（ＲＣ＋Ｔ％）(w/w)、または１％キサンチン（ＲＣＸ）および種々の濃度(w/w)のトリメトプリム（Ｔ％）を有するラット餌のいずれかであった。以下の表６ａで示されるとおり、処理されたコロニーには、結果的に多少の弱化はあったが、トリメトプリムのみの添加は個体群の成長を阻害しなかった。しかし、下記の表６ｂで示されるとおり、キサンチンとトリメトプリムとの組み合わせは個体群の成長を急速に阻害した。全身の尿酸濃度は、先に記述したとおりに標準ウリカーゼアッセイから算出した。以下の表６ｃに示されるとおり、尿酸代謝は、キサンチンとトリメトプリムとを組み合わせた処理により影響されなかった。最初の３週間で、処理コロニーの個体群の平均Δ％が−８２％であり、それらが死んだとき、その６５％がまだ若虫であった。これは、実験に使用された若虫の７２％を示し、そして若虫脱皮の間、最も効果的であることが確認される。表6aは、開始数(42)=100% であるドイツゴキブリのコロニーにおいて、平均個体群の数での変化率(Δ%)に関連して示される、時間（週）に対して未処理ラット餌(RC)または種々の濃度(w/w)のトリメトプリムを有するラット餌(RC＋T%)の平均個体消費(ICmg)を示す。n=5。表6bは、コロニーの開始数(42)=100% であるとき、未処理餌(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w)のトリメトプリム(T%)を有する食物を供給されたドイツゴキブリのコロニーにおいて、平均個体消費(ICmg)および平均個体群の数での時間（週）の変化率(Δ%)を示す。表6cは、未処理食物(RC)、または1%キサンチン(RCX)および2%トリメトプリム(w/ w)を有する食物を供給された3 群のドイツゴキブリでの平均全身尿酸濃度(μg/m g乾燥組織重量±SEM)を示す。実施例９−キサンチン−オキシプリノール組成物での耐性ゴキブリの処理ゴキブリを、ゴキブリ防除に一般に使用される殺虫剤に耐性であることが知られている２つのドイツゴキブリ株の研究所ストックから持ってきたことを除き、先に記述のとおりゴキブリのコロニーを調製した。この２つの株は、（Ａ）ハウソーン(Hawthorne)株および（Ｂ）ラス・パルムズ(Las Palms)株であった。これらの２つの株により示された耐性比の割合は、以下の表７ａに示す。表７ａは、ハウソーンおよびラスパルムズ耐性株についての耐性比（ＲＲ）の概要であり、耐性を上昇させる連続体において、ＲＲ＞２．０は耐性が発生していることを示し、そしてＲＲ≧３．０は耐性の遺伝子頻度が増加したことを示す。ＲＲは、（試験株ＬＴ₅₀）÷（感受性株ＬＴ₅₀）として計算され、ＬＴ₅₀は処理個体群で、酔わせて５０％死亡率を達成するためにかかる時間である。最初の３週間での個体消費（ICmg）は、先述のとおりに計算された。以下の表７ｂおよび７ｃに示されるとおり、両方の株についてのICmgは、食物混合物の全濃度にわたって一致した。ハウソーン株は、３％オキシプリノールを含有する飼料の２２％の消費で最大限の減少を示した。これは、最初の３週について１２６０μｇのオキシプリノールの用量を表す。表７ｂは、ハウソーンおよびラスパルムズ耐性株のドイツゴキブリによる、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w)のオキシプリノール(O XY%)とともに供給されるげっ歯類餌の時間（週）に対する平均個体消費(ICmg)を示す。個体群成長に対するキサンチン−オキシプリノールの組み合わせの効果は、先に記載したとおりに測定された。以下の表７ｃおよび７ｄに示されるとおり、組み合わせは、両方の耐性株の個体群成長を防除した。表７ｃは、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w)のオキシプリノール(OXY%)とともに食物を供給されたハウソーン耐性株のドイツゴキブリのコロニーにおける、時間（週）に対する平均個体群数のパーセント変化(＋または−)を示す。n=3。表７ｄは、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w)のオキシプリノール(OXY%)とともに食物を供給されたラスパルムズ耐性株のドイツゴキブリのコロニーにおける、時間（週）に対する平均個体群数のパーセント変化（＋または−）を示す。n=3。実施例10−キサンチン−トリメトプリム組成物を用いた耐性ゴキブリの処理ドイツゴキブリのコロニーを、ハウソーンおよびラスパルムズ耐性株を使用して、記述のとおり調製した。以下の表８ａに示されるとおり、ハウソーン株について、食物中のトリメトプリムの濃度に対する直接比において、対照に関して摂食は阻害された。６２％の最大減少は４．０％Ｔ濃度で起こり、これは最初の３週に対して個体当たり６３９μｇのトリメトプリムの用量を表す。ハウソーン株の個体群成長はより高い濃度で防除された。表8aは、時間（週）に対して、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)および種々の濃度(w/w)のトリメトプリム(T%)を有する食物を供給されたハウソーン耐性株のドイツゴキブリのコロニーにおける平均個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。ラスパルムズ株について、以下の表８ｂに示されるとおり、処理食物のICmgでの減少でさえトリメトプリムの濃度での増加に直接関与して起こった。対照と比較して、最大の阻害は、３週間で１個体当たり1758μgのトリメトプリムの摂取用量に事実上等しい6%T で、38% だった。個体群の数は、処理の6 週で 3分の2 に減少した。表8bは、時間（週）に対して、未処理(RC)、または1%キサンチンなし(RCX)および種々の濃度(w/w)のトリメトプリム(T%)を有する食物を供給されたラスパルムズ耐性株のドイツゴキブリのコロニー中の平均個体の消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。n=3。実施例11−キサンチン−オキシプリノール−トリメトプリム組成物を用いたゴキブリの処理ＶＰＩ感受性株のドイツゴキブリのコロニー、およびハウソーン耐性株のコロニーに、未処理ラット餌（ＲＣ）、または2%オキシプリノール(OXY)および2%トリメトプリム(T)を組み合わせた１％キサンチン（ＲＣＸ）で処理(w/w)されたラット餌を供給した。コロニー個体群における個々の消費および変化の結果は、表 9a(VPI 株)および9b(ハウソーン株)に示す。両方ともに、コロニーは、ICmgが≧ ５０％に衰えたにもかかわらず、処理6 週までに実質的に消失した。表9a：時間（週）に対して、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)、2%オキシプリノール(OXY)および2%トリメトプリム(T)(w/w)を有する食物を供給されたVP I 感受性株のドイツゴキブリのコロニーにおける平均個体の消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。表9b：時間（週）に対して、未処理(RC)、または1%キサンチン(RCX)、2%オキシプリノール(OXY)および2%トリメトプリム(T)(w/w)を有する食物を供給されたハウソーン耐性株のドイツゴキブリのコロニーにおける平均個体消費(ICmg)および平均個体群数での変化率(Δ%)を示す。実施例12−オキシプリノールまたはトリメトプリムを有するプリンの評価ＶＰＩ感受性株のゴキブリのコロニーは、先に記載されたとおりに調製した。供給された食物は、ラット餌のみ(RC)、1%キサンチンおよび3%トリメトプリムを有するラット餌(w/w)(RCX ＋T)、1%ヒポキサンチンおよび3%トリメトプリムを有するラット餌(HX ＋T)、1%グアニンおよび3%トリメトプリムを有するラット餌(G ＋T)、および1%ヒポキサンチンおよび1%オキシプリノールを伴ったラット餌(HX ＋OXY)であった。コロニー個体群中の個体消費(ICmg)および変化の結果は、以下の表10に示されており、前述のとおり計算した。飼料混合物中のキサンチン成分をヒポキサンチンおよびグアニンに置き換えた結果は、キサンチンで得られたものと強く匹敵した。これは、トリメトプリムおよびオキシプリノールの両方を有する場合であり、そのため個体群成長は防除されて、コロニーは消失した。ある種の摂食阻害が、トリメトプリム混合物の全てに起こった。表10は、時間（週）に対して、未処理(RC)、または1%プリン(w/w)と、3%トリメトプリム(T)または1%オキシプリノール(OXY)のいずれかとを有する食物を供給されたVIP 感受性株のドイツゴキブリのコロニー中の平均個体群数での平均個体の消費(ICmg)および変化率(Δ%)を示す。プリンは、キサンチン(X)、ヒポキサンチン(HX)またはグアニン(G)であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．プリンと、キサンチンオキシダーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、およびそれらの混合物からなる群から選択される第２の成分を含んでなる組成物。２．前記プリンが、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチン、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項１に記載の組成物。３．前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が、６−非置換ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン化合物である請求項１に記載の組成物。４．前記ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤が、トリメトプリム、メトトレキセート、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項１に記載の組成物。５．前記ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンが、アロプリノール、オキシプリノール、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項３に記載の組成物。６．プリンと、キサンチンオキシダーゼ阻害剤、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤、およびそれらの混合物からなる群から選択される第２の成分とを包含する成長抑制量の組成物を有害昆虫と接触させることよりなる、プリン代謝経路を介してその窒素性老廃物を利用し、貯蔵し、または排泄する有害昆虫を防除する方法。７．前記昆虫がゴキブリである請求項６に記載の方法。８．前記プリンが、グアニン、キサンチン、ヒポキサンチン、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項６に記載の方法。９．前記キサンチンオキシダーゼ阻害剤が、６−非置換ピラゾロ[3,4-d]ピリミジンである請求項６に記載の方法。 10．前記ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン化合物が、アロプリノール、オキシプリノール、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項９に記載の方法。 11．前記ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤が、トリメトプリム、メトトレキセート、およびそれらの混合物からなる群から選択される請求項６に記載の方法。 12．前記組成物が、有害昆虫に摂取される有害昆虫の餌または誘引物質に組み込んで投与される請求項６に記載の方法。