JPH10502638A

JPH10502638A - 癌治療のための、腫瘍細胞を収容した埋込可能な装置

Info

Publication number: JPH10502638A
Application number: JP8504331A
Authority: JP
Inventors: ジェラー，ロビン，リー; ブロウカー，ジェームス，エイチ; ジョンストン，ウイリアム，ディー; レボン，スティーブン，エィ; マリアノフ，デビッド，エィ
Original assignee: バクスター、インターナショナル、インコーポレイテッド
Priority date: 1994-07-08
Filing date: 1995-06-29
Publication date: 1998-03-10
Also published as: CN1157560A; AU699405B2; DE69505391D1; AU2912895A; CA2194555C; ATE172099T1; DE69505391T2; EP0769932B1; ES2125630T3; DK0769932T3; KR970704410A; WO1996001611A1; IL114482A0; EP0769932A1; NO970054L; NO970054D0; CA2194555A1

Abstract

(57)【要約】癌の予防又は治療のための、腫瘍細胞、又は患者の腫瘍の抗原に対応する少なくとも１つの抗原を発現するよう工学的操作を受けた体細胞を収容した埋め込み可能なチャンバーを含む埋め込み可能な装置であって、該チャンバーが使用に際して患者の免疫細胞と該収容された細胞との間に多孔質の境界を提供するための多孔質の壁を有しており、該境界の多孔度が、細胞以下の抗原性材料が該境界を通過することを許容する一方該収容された細胞及び患者の免疫細胞が該境界を通過することを阻止するに十分なものである、装置。

Description

【発明の詳細な説明】癌治療のための、腫瘍細胞を収容した埋込可能な装置本発明の分野本発明は、腫瘍細胞を患者組織から分離するチャンバー内に腫瘍細胞が収容されたものである、患者への腫瘍細胞の埋め込みによる癌の予防及び治療に関する。本発明の背景大部分の腫瘍に関する現在受け入れられる療法は、手術、化学療法、放射線療法、骨髄移植又はこれら治療法の種々の組み合わせである。一般に、これらの治療は、患者の免疫系の活性化とは無関係なメカニズムによって腫瘍細胞を破壊することを目的とする。放射線及び化学療法の間における、免疫システムへの顕著な損傷は残念な副作用である。そのうえ、いくらかの腫瘍に対するこれらの治療の長期的有効性は疑わしい。ａ．免疫系の活性化ここ１０年間で、抗腫瘍活性を媒介する免疫系の活性化に基づいた治療アプローチが開発されてきた。一般に、腫瘍細胞に対する正常な宿主応答は、腫瘍細胞上の又は抗原呈示細胞を経由した、腫瘍関連抗原のＴ細胞による認識で始まる。Ｔ細胞の抗原受容体を経由した認識は、Ｔ細胞の活性化を媒介する信号変換経路を始動させる。これは、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ガンマインターフェロン、腫瘍壊死因子−α、及び他のサイトカインのＴ−細胞及び付属細胞からの分泌をもたらす。こうして、腫瘍細胞を殺すために宿主免疫系が動員される。しかしながら、よく理解されていない理由により、多くの腫瘍に対して、この宿主応答は起こらないか又は腫瘍細胞を殺すには不十分である。免疫系を活性化するのに考えられた一療法は、ＩＬ−２の全身投与である。しかしながら、十分な増幅を達成するために必要とされるＩＬ−２の投与量は、患者に対して毒性であることが判明した。免疫系を活性化するための細胞免疫療法アプローチは、二つのタイプの細胞（ＬＡＫ細胞及びＴＩＬ細胞）に注目してきた。ＬＡＫ（リンフォカイン活性化キラー）細胞は、ＩＬ−２（Lotzeら，Cance r Res．41，p.4420〜4425(1981)；Grimmら，J．Exp．Med．155，p.1823〜1844(1 982)）等のようなサイトカインの使用及び／又は抗ＣＤ３（Ochoaら，Cancer Re s．49，p.693〜700(1989)）等のようなモノクローナル抗体の使用によって非特異的に活性化された免疫系の細胞である。これらの細胞は、古典的な細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）のＴ細胞受容器に特徴的な、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）が関係した制限を伴わずに、有意な抗腫瘍活性を媒介することができる。最近の研究において、進行した腫瘍に対するＩＬ−２及びＬＡＫ細胞の連続した輸注は、黒色腫を有する患者の１２％及び腎細胞癌を有する患者の３％において応答をもたらした(Lotze,Cell Transplantation 2，p.33〜47(1993))。現在までに特徴付けられている大部分のＬＡＫ細胞は、活性化されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる(Ortaldoら,J．Exp．Med．164，p.1193〜1205(1986)；Ferriniら， J．Immunol．138，p.1297〜1302(1987)；Phillips and Lanier,J．Exp．Med．16 4，p.814〜825(19 86))一方、ＬＡＫ細胞はγδＴ細胞（Ｔ細胞受容器の古典的αβサブユニットを欠き、代わりにγδサブユニットを発現しているＴ細胞）として知られているＴ細胞の集団から発生させることもできる（Ochoaら，Cancer Res．49，p.693〜70 0(1989)）。ＬＡＫ細胞は、ＩＬ−２及び抗ＣＤ３モノクローナル抗体の存在下で培養された単離されたＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞から発生させることもできる(Gellerら，J．Immunol．146，p.3280〜3288(1991))。ＴＩＬ（腫瘍浸潤リンパ球）細胞は、試験管内で腫瘍から単離されたリンパ球である。ＬＡＫ細胞と同様に、これらの細胞はＩＬ−２又はＩＬ−４等のようなサイトカインの存在下で培養することによって展開させることができるが、ＬＡＫ細胞とは異なって、これらの細胞は腫瘍特異的である。ＴＩＬ細胞を用いて、黒色腫を有する患者において２０〜５０％の応答率が観察された(Lotze，Cell Transplantation 2,p.33 〜47(1993))。ｂ．腫瘍の免疫原性の増強腫瘍免疫治療に関する他のアプローチは、応答するリンパ球の活性を高めるのでなく、腫瘍細胞の免疫原性を増強させることを伴うものである。多くの腫瘍細胞は適切な免疫応答を誘導するのに必要とされるある程度の免疫原生度を欠いていると信じられている(Houghton and LeWis，「Cytokine Induced Tumor Immuno genicity」，ed．Forniら，Academic Press，p.35〜54(1994))。一般的に、刺激細胞（腫瘍細胞等のような）は、刺激細胞上のクラスＩ又はクラスIIＭＨＣ分子に関連したペプチドとのＴ細胞の係合によってＴ細胞を活性化する。これらのペプチドは、刺激細胞によって外部環境から取り込まれることができ（その場合それらは処理されてＭＨＣクラスII分子と共に提示される）、又は、刺激細胞によって内因的に産生され次いでＭＨＣクラスＩ分子と共に提示されたペプチドであることができる。刺激細胞による外因性のペプチドの提示は、該ペプチドがそれらが由来した細胞上に提示されていことから、間接提示という。直接提示の場合においては、ペプチドは、そのペプチドが由来するものである細胞の表面上に提示される。図１は直接対間接提示を示す概略図である。Ｔ細胞受容器及びＭＨＣ抗原に加えて、抗原提示細胞及び応答体Ｔ細胞の間の相互作用の媒介においてある役割を果たすことができる多数の細胞表而抗原が同定されてきた。これらの同時刺激分子には、分子間接着分子（ＩＣＡＭ）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ−１）、リンパ球機能関連抗原３（ＬＦＡ−３）、熱安定性抗原（ＨＳＡ）、及びリンパ球上のＣＤ２８、及び抗原提示細胞上に存在しなければならないリガンドＢ７を含む（Pardiら,Immunol．Today 13，p.224〜 230(1992); Chenら,Immunol．Today 14，p.483〜486(1993)）。同時刺激分子の不存在下における細胞を与える抗原とＴ細胞受容器の係合は、Ｔ細胞アネルギー、及び腫瘍に対する免疫応答不全をもたらす可能性がある(Gimmiら,Proc．Natl ．Acad．Sci．90，p.6586〜6590(1993))。黒色腫に対するMAGE(van der Bruggenら，Science 254，p.1643〜1650(1991)) 及びMART(Kawakami，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91,p.3515〜3519(1994);Boon ら,Ann．Rev Immunol．12,p.337〜365(1994))抗原及び乳房胸及び膵臓の腫瘍に関するムチン(Finn，J．Cellular Biochem．17D,p.92(1993);Domenechら,J．Cel lular B iochem．17D,p.108(1993);Fontenotら,J．Cellular Biochem．17D,p.125(1993)) を含む幾つかの腫瘍に対して、特有の腫瘍抗原が規定されている。Brown，J.P．ら，米国特許番号第5,141,742（黒色腫に関係した抗原）も参照。腫瘍細胞は、該細胞がＭＨＣ抗原を発現したときでさえも自己ペプチドを効果的に提示（直接提示）しないことが観察されており、腫瘍細胞による抗原の効果的な直接提示のために必要な他の分子の欠損／欠乏があるであろうことを示唆する。多くの腫瘍細胞は低レベルのＢ７を発現することが示されている。従って、一つの治療的アプローチは、患者の腫瘍細胞中へのＢ７に関する遺伝子の導入によって腫瘍細胞の免疫原性を回復させ、こうして直接的腫瘍抗原提示を促進することである(Che nら，Cell 71，p.1093〜1102(1993)及びEPO 600591;Chenら，J．Exp．Med．179 ，p.523〜532(1994); Townsend and Alison，Science 259,p.368〜370(1993);Ba skarら,Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90,p.5687〜5690(1993))。免疫原性のリンパ腫、肥満細胞腫、黒色腫又は肉腫へのＣＤ２８リガンドＢ７の導入は、野性型の腫瘍に対する増加したＣＴＬ活性及びその後の野性型の腫瘍の注射に対する保護をもたらした(Chenら，Cell 71，p．1093〜1102(1993)(黒色腫); Chenら，J． Exp．Med．179，p．523〜532(1994)(肥満細胞腫、線維肉腫、リンパ腫、黒色腫、癌); Townsend and Alison，Science 259，p.368〜370(1993)；Baskarら，Pro c．Natl．Acad．Sci．USA 90，p.5687〜5690(1993)(肉腫))。さらに、Ｂ７を発現しているＥＬ４リンパ腫細胞の注射は、確立されたＥＬ４由来腫瘍を有するマウスにおいて６０％の治癒率をもたらした(Chenら，J．Exp．Med．179,p.523〜5 32(1994))。腫瘍は完全に除去されなかったが、同じく、ネズミのクラスＩ分子に関する遺伝子を有するネズミの結腸腺肉腫又は線維肉腫のトランスフェクションが、未変性の腫瘍の後退を媒介することができた（Plautzら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90，p.4645〜4649(1993)（線維肉腫、結腸癌））。このアプローチは、ヒト臨床試行において現在試験されつつある（Nabel，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90，p.94〜97(1993)（黒色腫））。これら両方の例において、外来遺伝子の導入は、宿主のエフェクター細胞による、腫瘍細胞の直接の、クラスＩに媒介された認識を高めた。その応答は腫瘍特異的である。遺伝学的に変性された腫瘍による治療は、無関係の腫瘍の増殖に影響を与えなかった。この応答は、直接の細胞−細胞接触を必要とすると考えられている。Hockら,Gene Therapy Weekly,p.22(January 9,1995)(murine neuroblasto ma cells expressing Class II MHC)も参照。僅かに異なったアプローチが、膠芽腫の治療のためにTrojanらによって採用された。神経膠腫細胞は高レベルのインスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ−１）を発現する。IGF-1に対するアンチセンス遺伝子による神経膠腫細胞の治療は、腫瘍原性フェノタイプを逆転して細胞を免疫原性にするするようにみえる。これらの研究において、IGF-1アンチセンス配列を発現している神経膠腫細胞の注射は、治療された全ての動物において、前から存在した腫瘍の除去をもたした。(Trojan ら,Science 259，p.94〜97(1993))。この応答はCD8+T細胞によって媒介されることが示されたが、それらが改善された腫瘍細胞によって直接的に活性化されるか又は抗原提示細胞によって取り込まれた抗原を介して間接的に活性化されるか又はその両方によるかは明らかでない。腫瘍の免疫原性を高めるための更なるアプローチは、IL-2,IL-4,IL-6，腫瘍壊死因子，インターフェロン−γ又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM- CSF)等のようなサイトカイン遺伝子を発現するために腫瘍細胞を操作することを伴う(Dranoffら,Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90,p.3539〜3543(1993); Golumbe kら,Science 254,p.713〜716(1991)(renal cell carcinoma); Gansbacherら，Ca ncer Res．50,p.7820〜7825(1990); Gansbacherら，J．Exp．Med．172，p.1217 〜1224(1990); Bannerjiら，J．Immunol．152,p.2324〜2332(1994)(fibrosarcom a); Fearonら，Cell 60,p.397〜403(1990)(colon carcinoma); Columboら，J．E xp．Med．173，p．889〜897(1991)(adeno carcinoma); Haddadaら，Hum．Gene T herapy 4,p.703〜711(1993)(mastocytoma); Lolliniら,Int．J．Cancer 55,p.32 0〜329(1993)(mammary adenocarcinoma); Watanabeら,Proc．Natl．Acad．Sci． USA 86,p.9456〜9460(1989)(neuroblastoma); Pardoll，Curr．Opin．Oncol．4, p.1124〜1129(1992); Tepper and Mule,Hum．Gene Therapy 5,p.153〜164(1994) ;Porgadorら,Cancer Res．52,p.3679〜3686(1992)(Lewis lung carcinoma); WO9 2/05262 Hopkins/University of Texasも参照。ここにも、遺伝学的に変性された腫瘍細胞は、親腫瘍株が非免疫原性である状況において、免疫応答を刺激することができる。この領域の研究者は、免疫応答が、未変性の腫瘍細胞並びに操作された腫瘍細胞の破壊にまで拡がり、幾つかの場合においては実験動物の前から存在した腫瘍の完全な退縮をもたらすことができるということを観察している(D ranoffら,Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90,p.3539〜3543(1993);Golumbekら,Sci ence 254,p.713〜716(1991)(renal cell carcinoma); Gansbacherら，Cancer Res．50,p.7820〜7825(1990); Gansbacherら，J．Exp．M ed．172，p.1217〜1224(1990); Bannerjiら，J．Immunol．152,p.2324〜2332(19 94)(fibrosarcoma); Fearonら，Cell 60,p.397〜403(1990)(colon carcinoma); Columboら，J．Exp．Med．173，p．889〜897(1991); Haddadaら，Hum．Gene The rapy 4,p.703〜711(1993); Lolliniら,Int．J．Cancer 55,p.320〜329(1993); W atanabeら,Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86,p.9456〜9460(1989); Pardoll，Cur r．Opin．Oncol．14,p.1124〜1129(1992); Tepper and Mule,Hum．Gene Therapy 5,p.153〜164(1994);Porgadorら,Cancer Res．52,p.3679〜3686(1992); Vieweg ら,Gene Therapy Weekly,p.20(November 21,1994)(prostratecancer))。一般に、これらの実験的プロトコールは、外因的遺伝子を発現するように遺伝子工学的操作を受けた、照射された腫瘍細胞によって１又は２以上の回数で動物を免疫化することを伴う。照射は細胞が分裂するのを阻止するがそれらの抗原性は消失させない。次いで、抗腫瘍応答が３つの方法のうちの一つで試験される：（ｉ）動物は、免疫化プロセスが完了した後、未変性の腫瘍細胞によってチャレンジされる、（ii）動物は、ワクチン接種プロセスの間、未変性の腫瘍細胞によってチャレンジされる、又は（iii）小さな腫瘍が変性された腫瘍細胞による免疫化の前に確立される。遺伝的に変性された腫瘍細胞を利用した研究の大部分は、様々な腫瘍中へのサイトカイン遺伝子の導入を伴っていた（概説に関してはPardoll,Curr.Opin.Onco l.4,p.1124〜1129(1992); Tepper and Mule,Hum．Gene Therapy 5,p.153〜164(1 994)を見よ）。最も効果的な分子の一つは、幾つかの腫瘍タイプに対する特異的免疫性を増強するGM-CSF（顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子）である(Dranoffら,P roc．Natl．Acad．Sci．USA 90,p.3539〜3543(1993)(B16 melanoma，colon carc inoma，lung carcinoma，fibrosarcoma，renal carcinoma))。GM-CSFは、CD4+と CD8+Ｔ細胞の両方への抗原を提示することのできる、極めて強力な抗原提示細胞である枝状細胞の増殖及び分化を刺激することにより、この抗腫瘍作用を媒介することができるという点において独特である(Steinman,Ann.Rev.Immunol．9,p.2 71〜296(1991))。Metzingerは、免疫系が腫瘍に応答するように活性化されることができる唯一の方法は、枝状細胞等のような専門の抗原提示細胞によって取り込まれ提示された漏出抗原を介するものであるということを最近示唆している(M etzinger,Ann．Rev．Immunol．12,p.991〜1045(1994))。同様に、Bannerjiらは、続く全身的な免疫はCD4+とCD8+T細胞との両方の存在に依存するものの、IL-2 分泌線維肉腫細胞の拒絶はT細胞媒介性でないということを最近示唆している(Ba nnerjiら，J．Immunol．152,p.2324〜2332(1994))。彼らは、変性された細胞の破壊がNK細胞によって媒介され、細胞表面上にクラスＩ及びクラスII分子の両方を発現している抗原提示細胞により取り込まれることができる腫瘍抗原の遊離をもたらすと仮定している。次いで、これらの細胞はCD4+とCD8+T細胞との両方を活性化することができよう。類似のモデルがShoskes及びWoodによって議論されている(Shoskes and Wood,Immunol．today 15,p.32〜38(1994))。最近の実験において、Cohen及び共同研究者は、IL-2に対する遺伝子及び黒色腫細胞から単離したDNAによってトランスフェクトされた同種異系の線維肉腫を当該動物に注射することによって、以前から存在した黒色腫を有するマウスの生存を引き伸ばすことができた(Kim and C ohen，Cancer Res．54,p.2531〜2535(1994))。同種異系の細胞を用いることによって、細胞を照射する（これはサイトカイン発現に影響し得る）必要がない。トランスフェクトされた細胞が線維肉腫であることからそれらは腫瘍を形成せず、及びそれらは同種異系であることからそれらは免疫系を直ちに活性化する。しかしながら、それらは容易に拒絶されることから、免疫系の長期刺激はない。他の者は、線維肉腫を発現したサイトカインと照射された腫瘍細胞とを混合し、次いでワクチンとして該混合物を投与した（WO93/07906，PCT US92/08999）。更に他の者は、非腫瘍性である線維肉腫細胞をアジュバントと組み合わせ、腫瘍ワクチンとして該細胞を投与した(Eggers，米国特許番号第5,208,022)。腫瘍の予防及び治療のための更なる他の治療は腫瘍抗原による免疫化である(W O93/06867 Pardoll,Mulligan)。他のワクチンプロトコールは、照射された腫瘍細胞を細菌アジュバントと共に投与することである(Pardoll,5 Cur．Opin．Immu nology,p.719〜725(1993))。他の者は、未変性の腫瘍細胞を照射しそしてそれらをワクチンとして単独投与した(Dranoffら，90 PNAS，p.3539〜3543，図4A(1993 ))。ｃ．腫瘍進化大部分の癌は、起源はクローナルてあり、そして増殖の有利さを有する遺伝学的変種のダーウィン選択のため、癌の進化の間、亜集団が連続的に発生する信じられている。幾つかの遺伝的変種は特定の腫瘍のタイプに特有であり、そして事実、腫瘍の重篤度を分類するための基礎として役立ち得、他の場合においては、その変化はイディオタイプ的、即ち個人自身の腫瘍に特有である。増殖の有利さを生ずる突然変異には、増殖調節遺伝子における突然変異、形態学、ホルモン依存性、酵素パターン、及び表面抗原における変化を含む。幾つかのこれらの変化は、患者のホメオスタシス的制御又は治療による破壊を逃れることを異常細胞に許す可能性がある。慣用の化学療法は、疾病の進行を遅めるのに初期にはしばしば効果がある。しかしながら、反復治療は、時間と共に、おそらく連続的な低い感受性クローンの進化により、効果が低下する（G．Klein and E．Klein,PNAS USA 74,p.2121(1977)）。Sc hreiber，H.，「Tumor Immunology」，Chapter 32 in Fundatmental Immunology W．Paul，ed．(1993)も参照。ｄ．拡散チャンバー細胞対細胞の接触を防止する拡散チャンバーが、免疫学的メカニズムを研究するために長年の間、用いられてきた。Kleinらは、腫瘍細胞に対する宿主免疫応答を研究するためのモデルとして、拡散チャンバーに入れた腫瘍細胞を用いた。彼らは、腫瘍細胞が遅延型過敏症を促進する可溶因子を生産し、且つ腫瘍増殖を促進する脈管形成を刺激もすると結論している(Tumor Biol.,15,p.160〜165(199 4))。 Stillstromはげっ歯目における免疫性を誘導するために拡散チャンバーに入れた腫瘍細胞を埋め込み、そして10週間後、７日間皮下に配置された拡散チャンバーに入れた腫瘍細胞により誘導された免疫性のレベルは、直接接種された細胞により達成されたものよりも１０〜１００倍低かったことを見出した。他の実験において、彼は、直接接種された動物と腫瘍細胞を収容した拡散チャンバーを与えられた動物との免疫状態に有意な差がないことを発見した。彼はまた、もし数週間皮下に置かれたならば、チャンバーが拒絶されることをも見出した(Acta Path．Microbiol．Scand.，Sec t．B 82,p.676〜686(1974))。 BiggsとEiseleinは、ある腫瘍細胞タイプがチャンバーの外に拡散するウイルス粒子を遊離し、腫瘍細胞によるその後のチャレンジに対する免疫を提供することを示すために拡散チャンバーを用いた。彼らは、チャンバーの非常に低い空孔率が免疫化を阻止し得ることも示している(Cancer Research，Vol 25,p.1888〜1 893(1965))。 Cochrumらの米国特許番号第5,015,476は、寄生生物をマイクロカプセル包埋しそして寄生生物の感染に対する免疫化を得るためにそれらを埋め込むときのアジュバントとしてのリンフォカイン又はサイトカインの使用を開示している。本発明の要約出願人の新規な癌療法は、実験的腫瘍動物の６０％を治癒させた。癌の予防のために用いられたときは、該方法は１００％効果的であった。実験動物は１０⁶ 腫瘍細胞の注射によってチャレンジしたにもかかわらず、腫瘍を発生しなかった。出願人の発明は、患者における癌の予防又は治療のための方法であって、腫瘍細胞の第一のセットを投与することを含み、ここに該第一の腫瘍細胞の少なくともいくつかは該患者の腫瘍細胞上に見出される抗原に対応する少なくとも一の腫瘍抗原を有し、該腫瘍細胞は埋め込み可能なチャンバー内に収容されており、該チャンバーは患者の免疫細胞と該収容された細胞との間の多孔質の境界手段を含む壁手段によって規定されており、該境界手段は細胞以下の抗原性材料に対して透過性であり、それによって該境界手段は患者の免疫細胞と該収容された腫瘍細胞との間の接触を阻止し、そしてそれによって該境界手段は細胞以下の抗原性材料が該チャンバーを出ることを許容するものである方法である。該投与される腫瘍細胞は未変性であってもよく、又は、該腫瘍細胞は免疫増強性分子（例えばリンフォカイン）を発現し分泌するように変性されていてもよい。代わりに、腫瘍細胞に代えて、該投与される細胞は、腫瘍関連抗原又は他の抗原を発現するように操作されたトランスフォームされていない体細胞であってよく、また、それらはサイトカインを発現するように更に操作されていてよい。腫瘍細胞は生きた又は放射線照射されたものであってよい。該腫瘍細胞は、腫瘍の進行を防止するために予防的に、又は存在する腫瘍又は転移を治療するために治療的に投与されることができる。該腫瘍細胞は、腫瘍の外科的除去の後、投与される自家腫瘍細胞であってよい。それらは同種異系であってよい。又は、それらは同種異系ドナー起源の腫瘍細胞株からであってよい。該腫瘍細胞は、化学療法又は放射線照射療法等のような他の癌治療の前、間、又は後に投与されることができる。それらは、例えばリポソーム等を使用したサイトカインの局所的投与と共に投与されることができる。本発明によれば、細胞以下の材料が該チャンバー内へ又は該チャンバー外へと通過することを許容する一方、該腫瘍細胞を保持することができる任意の適した埋め込み可能な細胞収容チャンバーを用いて、投与された腫瘍細胞は該患者の細胞から隔離される。チャンバーは、投与された細胞と患者の免疫細胞との間の、細胞対細胞の接触を防止する。腫瘍細胞は、存在する腫瘍の部位又は腫瘍から遠方の部位に埋め込まれてよい。本発明は、更に、腫瘍細胞を収容したチャンバーを提供する。代わりの具体例においては、放射線照射された腫瘍細胞が、やはりチャンバーに入れた生きた腫瘍細胞と共に又はこれを伴わずに、チャンバーに入れて投与される。好ましくは、チャンバーは、生きた腫瘍細胞が患者の免疫系細胞と接触した場合に生存するであろうよりも長い期間、生きた腫瘍細胞が埋め込み後生存することを許容するようなものである。他の代わりの具体例においては、チャンバーは、その中に収容された放射線照射された腫瘍細胞が、それらが患者の免疫系細胞と接触した場合に生存するであろうよりも長い期間、埋め込み後に生存することを許容するものである。すなわち、チャンバーは収容された細胞の拒絶を好ましくは遅らせ又は防止する。好ましい一具体例において、チャンバーは、埋め込まれた腫瘍細胞に対する患者の免疫応答を高めるためのアジュバントとして作用する、その表面での慢性創傷治癒炎症を引き起こすタイプである。本発明は更に、新規な癌治療であって、（ii）非腫瘍原性した腫瘍細胞の投与と共に（ｉ）埋め込み可能な細胞収容チャンバーに入れた腫瘍細胞を投与すること投与を含む癌治療を提供する。非腫瘍原性にした腫瘍細胞は、「遊離」細胞の接種としてチャンバー外側に投与される。それらは好ましくは放射線照射によって非腫瘍原性にされる。代わりとして、それらを非腫瘍原性にするいかなる方法を使用してもよい。例えば、放射線未照射の腫瘍細胞のＩＬ−２との組み合わせの投与はそれらを非腫瘍原性にすることが報告されている。本発明によれば、チャンバー外側に投与された腫瘍細胞は未変性であってよく又はそれらは、免疫増強性のポリペプチドを発現するように変性されていてよい。代わりとして、腫瘍細胞の代わりに、該チャンバーの外側に投与される細胞は、サイトカインと共に又はサイトカインを伴わずに、腫瘍関連抗原又は他の抗原を発現するように操作されたトランスフォームされていない細胞であってよい。それらは自家の又は同種異系であってよい。又は、それらは自家の又は同種異系の細胞から発生される細胞株からであってよい。チャンバーの内側又はチャンバーの外側に埋め込まれた腫瘍細胞は自家のもの即ち患者の存在する腫瘍から採取されたものであってよい。代わりに、それらは同種異系（患者の腫瘍細胞上に発見された抗原に対応する腫瘍抗原を有する腫瘍細胞を有する他の個人から採取される）であってよい。又は、それらは、患者において治療され又は防止されるべき腫瘍のタイプに対応した腫瘍細胞株からのものであってよい。それらは、サイトカインの付随的発現を伴う又は伴わない、腫瘍関連抗原又は他の抗原を発現するように操作された非腫瘍細胞であってもよい。図面の簡潔な記述図１は、直接抗原提示対間接抗原提示を示す概略図である。図２は、本発明の好ましい具体例において用いられるチャンバーの図である。図３は、実施例１に記述されたように、本発明による治療の後の、マウスの腫瘍チャレンジへの応答を示している表である。動物は、各々１０⁶個の細胞を収容する二つの装置を埋め込まれた。１匹の動物はただ一の装置を埋め込まれた。全ての動物は、埋め込み後３週目に１０⁶個の遊離MCA-38細胞による第一のチャレンジを受けた。実験Ｉにおいては、第二のチャレンジは埋め込み後８週目に与えられ、実験IIにおいては、第二のチャレンジは埋め込み後１１週目に与えられた。図４は、実施例１に記述されたように、装置の埋め込みのときに１０³ MCA-38 細胞によってチャレンジされた動物におけるチャレンジ部位で腫瘍が検出された日数を示している。対照動物は装置を埋め込まれなかった。図５は、実施例２に記述されたように切除された一つの塊からの組織を含有する装置の埋め込み後のイヌ142-3における、残存する皮下の塊の大きさを示している。図６は、＞９５％の腫瘍の外科切除の後の、イヌ4008における残存する腫瘍の塊の大きさを示している。切除された腫瘍は、実施例２に記述されたように、皮下に埋め込まれる装置に加えるるための組織源として使用された。図７（実施例３から）は、前から存在しているＭＣＡ−３８腫瘍がチャンバーの内側と外側との両方に放射線照射されたＭＣＡ−３８腫瘍細胞の投与によって治療された、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。それはまた、チャンバーの外側の放射線照射された細胞と組み合わせたチャンバーの内側の放射線照射されていない細胞の投与による治療に関する生存率をも示している。図８（実施例３から）は、前から存在しているＭＣＡ−３８腫瘍がチャンバーの内側と外側との両方への放射線照射された及び放射線照射されていないＭＣＡ −３８腫瘍細胞の投与によって治療された、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。図９（実施例３から）は、背面の皮下空間内に前から存在しているＭＣＡ−３８腫瘍がチャンバーの内側と外側との両方への放射線照射された腫瘍細胞の投与によって治療された、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。図１０は、実施例４の実験のためのプロトコールを示している。図１１（実施例４から）は、前から存在しているＭＣＡ−３８腫瘍が切除され、次いで放射線照射されていないＭＣＡ−３８腫瘍細胞を収容したチャンバーの投与及びチャンバー該への細胞の無投与によって治療された、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。図１２は、実施例５の実験のためのプロトコールを示している。図１３（実施例５から）は、同系動物中で増殖させそして移転させたＢ１６黒色腫によって最初に免疫化された後、Ｂ１６黒色腫によってチャレンジされた、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。図１４（実施例６から）は、放射線照射された遊離のＣ５７卵巣腫瘍細胞と、放射線照射されたＣ５７卵巣腫瘍を収容した装置との療法で最初に免疫化された後の４週目に、Ｃ５７卵巣腫瘍によってチャレンジされた、Ｃ５７／Ｂ６マウスの生存率を示している。本発明の詳細な記述少なくとも投与された腫瘍細胞と患者の免疫細胞との間の細胞対細胞の接触を防止しつつ患者へ腫瘍細胞を投与することを含む、腫瘍治療の新規な方法が記述されている。ここに用いられるものとして、「腫瘍」という語は固形腫瘍、転移腫瘍細胞及び血液、骨髄、及びリンパ系の非固形癌を含むべきである。語「腫瘍」は、癌（上皮細胞から誘導された癌）、肉腫（間葉組織から誘導された）リンパ腫（リンパ組織の固形腫瘍）、及び白血病（リンパ球又は他の造血細胞の骨髄又は血液を有する腫瘍）を含むべきである。ここに用いられるものとして、癌の「治療」又は癌のための「療法」は、存在する腫瘍を除去し、疾病の進行を遅らせ、存在する腫瘍の大きさを減少させ、治療又は療法がなければ起こるであろう腫瘍の拡大を防止し、腫瘍の形成の開始を遅らせ、腫瘍の拡大を遅らせ、及び転移を防止し、減少させ又は遅らせる出願人の方法を含む。ここに用いられるものとして、「転移」は、元の腫瘍と不連続の部位に位置する腫瘍細胞（通常、腫瘍細胞のリンパ性及び／又は血行性拡散による）を意味する。本発明によれば、腫瘍細胞と患者の免疫細胞との間の細胞対細胞の接触を防止するチャンバー手段を用いて、腫瘍細胞は患者内に埋め込まれる。好ましくは、この分離は、公開されたＰＣＴ特許出願WO 92/07525（参照によってその全体をここに導入する）に記述されたような装置、又は係属中の米国特許出願番号第8/ 179,860（これも参照によってその全体をここに同様に導入する）に記述された装置を用いて達成される。このタイプの装置の使用は、細胞対細胞の接触を防止し、細胞以下の物質が該チャンバーを通過することを許容し、及び埋め込み部位に患者に脈管構造を提供する。加えて、古典的な異物カプセルの形成を妨げ、且つその表面に、アジュバントとして作用する慢性的な創傷治癒炎症を提供する。直接の細胞対細胞接触による以外であれば、如何なる方法での患者の免疫系との相互作用を埋め込まれた腫瘍細胞に許容する、細胞分離のための如何なる全ての装置も適していよう。代わりの手段は、中空糸、シート膜又は、（例えば、アルギン酸塩のマクロ又はマイクロカプセル又はリポソームに入れた）単一の腫瘍細胞又は腫瘍細胞集団のカプセル封入を含む。患者から無傷で回収できるチャンバーの使用が、特に生きた腫瘍細胞が該チャンバーに入れて投与されるときは、好ましい。これは、収容された腫瘍細胞を患者から除去することができるという利点を提供する。好ましいチャンバーの使用は、生きた自家腫瘍細胞、生きた同種異系の腫瘍細胞、又は腫瘍抗原を発現するように工学的操作を受けた、生きた非腫瘍の同種異系の又は自家の細胞を投与することを許容するという利点も有する。患者へ投与される先行技術の腫瘍細胞ワクチンは、通常、チャンバーやカプセル技術を伴わず、放射線照射された腫瘍細胞又は同種異系の細胞を用いる。本発明の一具体例によれば、チャンバー内に収容された、放射線照射されていない生存細胞は、宿主免疫応答によって拒絶又は破壊されず、そしてそれらが生存している間、持続した免疫刺激作用を有すると信じられる。対照的に、先行技術の非生存腫瘍細胞は、宿主から直ぐさま除去されることから、一時的な刺激を与えるのみである。チャンバーは患者内に埋め込まれその後細胞を負荷されてよく、又はチャンバーは埋め込みに先立ち負荷されてもよい。驚くべきことに、遊離の放射線照射された細胞の投与と組み合わせてチャンバー内に投与された腫瘍細胞は、別個に用いられた何れの技術よりも卓越した治療を提供することができる。出願人はこの結果についてのメカニズムを知らないが、遊離の細胞の使用は、高められた免疫応答を開始させる初期の細胞対細胞の接触を許容し、そしてチャンバーに入れた細胞の使用は、その後の長期の免疫応答の増強を許容すると考えられる。存在している腫瘍に対する治療の場合には、投与される細胞は好ましくは自家細胞であり、そして好ましくは、異種の腫瘍に存在するかもしれない全ての様々な細胞の混合物を好ましくは含む。好ましくは、投与される腫瘍細胞は、患者自身の腫瘍の異種性を反映する。患者中に存在する腫瘍の塊は、慣用の外科技術を用いて除去される。除去された腫瘍細胞は収集され、適した媒体中に混合され、そして所望される細胞の投与量に依存してチャンバー又はマルチチャンバー中へ負荷される。チャンバー中の細胞は放射線照射されてもされなくてもよい。チャンバーは皮下に、腹膜内に、又は組織タイプに関係なく腫瘍の部位内に、又はいかなる他の適した部位に埋め込まれてもよい。負荷されたチャンバーは、チャンバー埋め込み部位又はチャンバー埋め込み部位から遠方における、遊離の非生存（放射線照射された）腫瘍細胞の投与と組み合わせて投与されてもされなくてもよい。マルチチャンバー及び複数の部位が使用されてよい。同種異系腫瘍細胞が用いられるならば、それらは好ましくは腫瘍生検によって決定されるような、患者の腫瘍によって発現されている少なくとも一の抗原を発現する腫瘍細胞株からのものである。同種異系細胞は、ここに記述されるようにチャンバー内に投与される。収容される細胞は放射線照射されていてもされていなくてもよい。加えて、同種異系細胞は放射線照射され、そして自由な細胞として投与されてもよい。代わりに、本発明によれば、腫瘍細胞を収容したチャンバーは、ある量の免疫増強分子（例えば、リンフォカイン）と共に投与されてもよい。該投与量は、免疫増強分子（例えば、リンフォカイン）を発現及び分泌するように工学的操作を受けた非腫瘍細胞（例えば、線維芽細胞）を用いて投与することもできる。負荷されたチャンバーは、免疫増強分子と共に又はこれを伴わずに、遊離の放射線照射された腫瘍細胞と共に又はこれを伴わずに、投与されることができる。工学的操作を受けた細胞は、１つより多くのサイトカイン又は免疫増強分子を発現することができる。リポソーム、マイクロカプセル、時間放出力プセル、又はマイクロポンプ（それらの全てが薬物放出の当業者に知られている）等のような、免疫増強分子の直接局所的投与のための他の源が用いられることができる。ここで用いられるものとして、「免疫増強分子」は、本発明のチャンバー及び腫瘍細胞と組み合わせて用いられるとき免疫系の活性度を刺激又は高めるいかなる分子も含む。当業者は、これがサイトカイン、並びにリン脂質を含む抗原性脂質、ホルモン、炭水化物、核酸、ウイルス粒子成分、細菌細胞抗原、及び蛋白質を含んでよいことを認識するであろう。当業者は、本発明において使用するためには免疫増強分子は、免疫応答を高め、刺激し又は引き出すのに十分高い量及び抗原性の度合い有して存在しなければならないということを認識するであろう。免疫増強性分子は、生きた又は放射線照射された細胞から分泌又は漏出されてよく又は死細胞からの分解生成物であってよく、又はそれは合成の又は精製された薬物であってよい。幾つかの免疫増強分子は、Frostら,WO92/05262に記述されている。高性能の免疫アジュバントとしてのサイトカインの使用は業界で知られており、そして HoughtonとLewisによって「Cytokine Induced Tumor Immunogenity」，Eds．For ni，G.ら(1994)のChapter 5「Active Specific Immunotherapy in Humans」に記述されている。Golumbek,P.T.,らは、ネズミのモデルにおいて癌ワクチンとして、マイクロカプセル中に含まれる放射線照射された腫瘍細胞とGMC-SFの同時注射を記述している(Cancer Research，53,p.5841〜5844(December 15，1993))。適切な投与量を含むプロトコールを決定するに際して、当業者は、放射線照射され変性された又は未変性の腫瘍細胞を用いた癌ワクチンに関するNational Ins titutes of Health Recombinant DNA Advisory Committeeによって承認され、公表された多くのプロトコールを参照することができる。例えば、Human Gene The rapy April 1994 Vol.5,p.553〜563及び公表されたプロトコールへのその中の引用文献を参照。これらの公表されたプロトコールは、(ｉ)Immunization of Canc er Patients Using Autologous Cancer Cells Modified by Insertion of the G ene for Tumor Necrosis Factor，Principal Investigator S.A.Rosenberg，Hum an Gene Therapy 3,p.5 7〜73(1992);(ii)Immunization of Cancer Patients Using Autologous Cancer Cells Modified by Insertion of the Gene for Interleukin-2，Principal Inv estigator S.A.Rosenberg，Human Gene Therapy 3,p.75〜90(1992);(iii)A Pilo t Study of Immunization with Interleukin-2 Secreting Allogeneic HLA-A2 M atched Renal Cell Carcinoma Cells in Patients with Advanced Renal Cell C arcinoma，Principal Investigator B.Gansbacher，Human Gene Therapy 3,p.69 1〜703(1992); (iv)Immunization with Interleukin-2 Transfected Melanoma C ells．A PhaseＩ−II Study in Patients with Metastatic Melanoma，Human Ge ne Therapy 4,p.323〜330(1993); (ｖ)Gene Therapy of Cancer:A Pilot Study of IL-4 Gene Modified Fibroblasts Admixed with Autologous Tumor to Elici t an Immune Response，Principal Investigators M.T.Lotze and I.Rubin,Huma n Gene Therapy 5,p.41〜55(1994)(melanoma,renal cell carcinoma,breast,col on);(vi)腫瘍細胞とIL-2を発現するように工学的操作を受けた線維芽細胞とを組み合わせるプロトコールが結腸癌に関して1995年２月17日に承認された(San Die go Regional Cancer); (vii)PhaseＩ Study of Cytokine-Gene Modified Autolo gous Neuroblastoma Cells for Treatment of Relapsed/Refractory Neuroblast oma; Principal Investigator: M.K.Brenner; RAC Approval No.9206-018; (vii i)PhaseＩ Study of Non-replicating Autologous Tumor Cell Injections Usin g Cells Prepared with or Without Granulocyte-Macrophage Colony Stimulati ng Factor Gene Transductionin Patients with Metastatic Renal Cell Carcin oma; Principal Investigator: J.Simons; RAC Approval No.930 3-040;(ix)PhaseＩ Trial of Human Gamma Interferon-Transduced Autologous Tumor Cells in Patients with Disseminated Maligant Melanoma; Principal I nvestigator: H.F.Seigler; RAC Application No.9306-043;(ｘ)PhaseＩ Study of Transfected Cancer Cells Expressing the Interleukin-2 Gene Product in Limited Stage Small Cell Lung Cancer;(ｘｉ)Immunization of Maligant Mel anoma Patients with Interleukin-2 Secreting Melanoma Cells Expressing De fined Allogeneic Histocompatibility Antigens; Principal Investigator:T.K .Das Gupta; RAC Application No.9309-056;及び（ｘii）Genetically Engineer ed Autologous Tumor Vaccines Producing Interleukin-2 for the Treatment o f Metastatic Melanomas; Principal Investigator:J.S.Economon; RAC Applica tion No.9309-058を含む。これらのプロトコールは、参照によってそれらの全体がここに導入される。ＩＬ−２を発現した細胞に関する癌治療プロトコールが記述されている公開されたＰＣＴ出願WO93/07906及びＩＬ−２を分泌する同種異系の黒色腫細胞を投与するためのプロトコールが記述されているＰＣＴ出願WO94/1 8995も参照のこと。当業者は、患者選択に関係するその中の部分、投与量、前処理評価、同時の治療、及び強力な毒性の処理がここに全て適用できることを認識するであろう。一般に、所望の投与量は、腫瘍細胞に対する、患者による保護的免疫応答を引き出すのに効果的であろう細胞数である。例えば、約150gの重さの腫瘍を有する70kgの患者を治療するためには、1994年１月11日に出願された係属中の米国特許出願番号8/179,860に記述されているように、40μlの内腔を有する、合計５〜１０（又は腫瘍細胞の所望の数を含むのに必要なそのような装置の数）の装置中に収容された約５×１０⁷〜５×１０⁸個の自家の放射線照射された又は放射線照射されていない腫瘍細胞を投与するであろう。同様な数までの遊離の放射線照射された細胞が同時に投与されてよい。患者中に存在する腫瘍の大きさの減少が約３週間から数カ月までの間に明らかになろう。転移の除去は検出するのがより困難であるかもしれない。埋め込み物は、一時的効果のために何週間もの間患者中に残されてよい。存在している腫瘍の治療のために、好ましくは埋め込み物は、腫瘍が存在する可能性がある間は患者内にそのまま残すべきである。腫瘍の予防のためには、埋め込みは、患者が腫瘍の発生の危険に曝され続けている間は、患者内にそのまま残すべきである。一又はそれより多くの埋め込み物が、埋め込まれた腫瘍細胞の生存性を評価するためにときどき取り出されてよい。遊離の放射線照射された細胞は、埋め込み時に投与してよく、そして元の遊離の放射線照射された細胞が患者の免疫系によって破壊されてしまいそうな期間（約２〜６週間）が経過した後再び再投与してよい。一具体例におけるように、もし腫瘍細胞の持続的な生存性を望むならば、埋め込み装置は摘出されて、必要なら新鮮な腫瘍細胞を収容した新しい装置で置き換えられてよい。代わりに、埋め込み物は、摘出せずに、そのままの部位で中身を空にされそして再負荷されてよい。置き換え腫瘍細胞は、もし自家腫瘍細胞が投与されるならば、元の腫瘍の切除の時に収穫され後の使用のために凍結された細胞であってよい。同種異系の腫瘍細胞の投与の場合においては、同様のガイドラインに従うであろう。ドナー腫瘍細胞の少なくとも幾つかの抗原又は可溶因子は、好ましくは、腫瘍生検により決定されたものとしての患者の腫瘍細胞上に見出されるものに対応する。本発明によれば、所望により、腫瘍細胞は放射線照射により、マイトマイシンＣ処理により、又は当該分野において既知の他の処理により、非腫瘍原性にされてよい。既知のヒト腫瘍特異性抗原を発現するように工学的操作を受けたヒト細胞株が創り出され次いで本発明に従って投与されることができる。そのような既知の腫瘍抗原の例には、ＭＡＧＥ，ＭＡＲＴ，及びムチンが含まれる。Brownらへの米国特許番号第5,141,742は黒色腫関連抗原を記述している。また、投与される細胞の抗原は、好ましくは、腫瘍生検によって決定され、患者の腫瘍細胞のものと少なくとも一部は一致する。ヒト細胞株の調製及び所望の抗原を発現するそのような細胞の工学的操作は、当業者に知られた技術を伴う。細胞は、好ましくは、所望の抗原又は可溶因子を効果的に発現するタイプである。細胞の遺伝的変性は、遺伝子治療において良く知られている一つ以上の技術によって行うことができよう(Human Gene Therapy April 1994，Vol.5,p.543〜563)。外因性DNAを細胞内に届けるための通常用いられる一技術は、レトロウイルスベクターの使用を伴う。これらのベクターは、標的細胞の大きな割合に感染でき、そして細胞ゲノム中に一体化することができる。レトロウイルスベクターは選択された細胞株において転写欠如性であるように構成され、従ってトランスデュースされていない細胞を感染することは不可能である。DNAを細胞中へと放出するために提案又は使用されてきた他のウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、及びポリオウイルスが含まれる。レトロウイルスベクター及びアデノ随伴ウイルスベクターは、ex vivo遺伝子治療（即ち、患者の体から取り出された細胞内へのＤＮＡ送達）のために最も頻繁に提案され又は用いられている。遺伝子治療のために用いられ又は提案されてきた非レトロウイルス送達技術としては、ＤＮＡリガンド複合体、遺伝子銃技術及びエレクトロポレーション、及びリポフェクションが挙げられる。大部分の条件下では、これらの送達技術並びにアデノウイルスベクター等のようなあるウイルスベクターは、細胞ゲノム中へのＤＮＡの有意な一体化をもたらさない。これは、外因性ＤＮＡによる受容細胞の安定なトランスフォーメーションは非常に低い頻度でしか起こらないことを意味する。特定の条件に依存して、ウイルス又は非ウイルス法のいずれかが、本発明に従って次いで埋め込まれるものである細胞内への、遺伝子の導入に適したものであろう。原発性腫瘍細胞の遺伝子操作は、先に記述されている(Patelら,Hum an Gene Therapy 5,p.577〜584(1994))。癌の予防のための出願人の方法は、腫瘍発生の高い危険性に曝されている患者（例えば、遺伝子スクリーニングによって、腫瘍発生について高い危険性があると同定された個人）のために特に適している。癌と診断された患者のための治療として、出願人の治療は、成功裏に腫瘍切除を受けた患者及び微細転移の存在の危険性の高い患者に特に適している。本発明で使用されるチャンバーは、患者の免疫系の細胞とチャンバー内の細胞との間の直接の細胞対細胞の接触を阻止する。本発明の好ましいチャンバー（図２）は、内腔(4)へアクセスするためのポート(3)を有する、互いに超音波溶接されたポリエステルメッシュ(2) によって取り囲まれた二つの二重層膜(1)を含む装置である。各二重層は、Gore, Flagstaff,Arizona,Product No.L31324によって製造された５μｍのＰＴＦＥ膜及びMillipore，Bedford,Massachusetts,Product No.SF1R8148E1によって製造された０．４５μｍＰＴＦＥ膜を含む。一端に、細胞を負荷するために装置の内部へアクセスを許容するためのポリエステルのポート（PE90 内径0.034インチ，外形0.050インチ）を有する。装置は内部内腔を有する。この装置は、1994年１月11日に出願された同時係属の出願番号8/179,860及び1994年３月17日に出願された同時係属の出願番号8/210,068に記述されている。この好ましい装置が同種異系組織を免疫拒絶から長期間防護することができる利点（本発明の全ての具体例に関して必要とされないが）を有していることを、先の研究が示している(Car r-Brendelら,J.Cellular Biochem．18A,p.223(1994)及びJohnsonら，Cell Trans plantation 3,p.220(1994))。当業者が本発明において有用であると分かるであろう他の細胞含有チャンバーには以下のものが含まれる。即ち、アガロースマイクロカプセル（Iwataら,J.Bi omed.Mater.Res.26,p.967〜977(1992);J.Bioact．and Comp．Polymers 3,p.356 〜369(1988),及びDepuyら,J.Biomed.Mater.Res.22,p.1061〜1070(1988)); Hollo w fibers of XM50(Winnら,J.Biomed.Mater.Res.23,p.31〜44(1989)及びAltmanら ,Proc．of Third Meeting of ISAO,Supp．5,p.776〜779(1981);Diabetes,35,p.6 25〜633(1986));Alginate-polylysine(Wongら,Biomat.,Art．Cells and Immob． Biotech．19,p.675〜686(1991));Microcapsules of alginate-polylysine(O'She aら,Biochim.et Biophy.Acta 804,p.133〜136(1984),Sunら,App．Biochem．and Bio tech．10,p.87〜99(1984),Chicheporticheら,Diabetologia 31,p.54〜57(1988) 及びGoosenら，米国特許番号第4,689,293，1987年８月25日; 米国特許番号第4,1 487,758，1984年12月11日; 米国特許番号第4,806,355，1989年2月21日，及び米国特許番号第4,673,566，1987年6月16日);Chitosan-alginate(McKnightら，J．o f Bioact．and Comp．Poly．3,p.334〜355(1988));Polyacrylonitrile or other uttrafiltration membranes in a U-shaped device(Moussyら,Artif．Org．13, p.109〜115(1989),Lepeintreら,Ar-tif．Org．14,p.20〜27(1990)，及びJaffrin 及びReach,米国特許番号第4,578,191，1986年3月25日);Hollow fibers of polya crylonitrile(Aebischerら，Biomat．12,p.50〜56(1991)及びLacyら,Science 25 4,p.1782〜1784(1991));Track-etched polycarbonate membranediffusion chamb ers(Gates and Lazarus,Lancet,Dec.17,p.1257〜1259(1977));Polymerized 2-hy droxyethyl methacrylate pHEMA membrane devices(Ronelら,J.Biomed.Mater.Re s.17,p.855〜864(1983);Microcapsules of polyacrylates(Douglas and Sefton, Biotechand Bioeng.36,p.653〜664(1990);Trans Am．Soc．Artif．Inter．Org.3 5,p.791〜799(1989));Acrylic copolymer hollow fibers(Lanzaら,Proc.Natl.Ac ad.Sci.88,p.11100〜11104(1991));polyol copolymer film WO 93/22427;Intrav ascular devices(Berguer，米国特許番号第4,309,776，1982年1月12日)及びGask ill,米国特許番号第4,911,717，1990年3月27日);Cationic-anionic crosslinked membranes，e.g．chitosan and polyaspartic or polyglutamic acid(Jarvis，米国特許番号第4,803,168，1989年2月7日); Surface-conforming bonding bridg e layer of a multifunctional mate rial and semipermeable polymer layer for cell encapsulation(Cochrum,米国特許番号第4,696,286，1987年9月29日);Vascular perfusion devices(Chickら，米国特許番号第5,002,661，1991年3月26日);Macromer polymer encapsulation， Desaiら，WO 93/16687; Barium-alginatec coss-linked microcapsules(Zekorn ら,Acta.Diabetol.29,p.99〜106(1992))，他の膜装置(Wardら,Fourth World Bio mat．Con.,Berlin,p.152,April 24〜28,1992));他のカプセル封入装置(Aebische r，WO 94/07999;米国特許番号第5,283,187; WO 93/00128; WO 93/00127; WO 93/ 00063; WO 92/19195; WO 91/10470; WO 91/10425; WO 90/15637; WO 90/02580) 及び細胞埋め込み装置: 米国特許番号第4,241,187;第4,892,538;及び第4,391,90 9である。「Islet Transplantation with Immunoisolation」,Lanza,R.P．ら,41 Diabetes,p.1503(1992)は、「Tissue Engineering」,260Science,p.920(1993) においてLanger及びVacantiがするように、細胞を収容するために用いられる種々のチャンバーを概説している。もしも、上述の特定のチャンバーが、埋め込まれた腫瘍細胞への又は腫瘍細胞からの細胞以下の物質の出入りを許容するのに十分透過性でない場合、当業者はそのようなチャンバーの透過性がそのようなチャンバーの基本設計を変えずに変更できることを理解するであろう。更に、もし移植細胞と宿主免疫細胞との直接の接触を防止し且つ患者の免疫応答を刺激する細胞以下の抗原性材料の遊離を許容するような方法で、埋め込まれた細胞を収容する性質を装置が有するならば、出願人はここに示されていない他の装置が本発明において使用できると信じている。出願人は、患者の免疫応答を引き起こす細胞以下の物質を単離又は同定していないが、それは含まれる腫瘍細胞から漏出又は分泌された免疫原性分子（抗原）を含むと信じられる。腫瘍細胞は腫瘍が関係した抗原のみに限らず、多くの抗原を漏出させる。これは、その部位へ多くの数のマクロファージや抗原提示細胞を動員し、これが今度は高められた免疫応答を提供すると考えられる。サイトカイン等のような免疫増強性分子の投与は、該部位で免疫応答を更に高める。出願人の発明は現行の癌免疫療法に対しておびただしい数の利点を提供する。これまでに発行された多くの研究は「遊離の」放射線照射された細胞（即ち、細胞はチャンバー中に収容されていない）のみの投与を必要とする。細胞が増殖して及び更なる腫瘍の原因になることを防止するための安全予防措置として、細胞は放射線照射される。しかしながら、それらは１〜２週間内に体内から除去され、一時的な投与を提供するのみであり、そして場合によっては、放射線照射は、工学的操作を受けた細胞内のいかなるサイトカインの生産も妨害しうる。出願人の発明においては、収容される細胞を放射線照射することは必ずしも必要でない。たとえ、放射線照射された細胞が用いられた場合であっても、先行技術の遊離の放射線照射された細胞よりも長い期間、それらはチャンバー内で免疫原性として存在し続けるであろう。出願人の、チャンバーの使用は、先行技術と異なり、遊離の腫瘍細胞を患者内へ導入する必要がないよう腫瘍細胞を隔離する安全性を提供する。そのうえ、この好ましいチャンバーを用いた好ましい一具体例においては、チャンバーそれ自身が細胞以下の抗原性物質のためのアジュバントとして働く。マクロファージは、装置の外面に引き寄せられ、従って、抗原物質が装置内の腫瘍細胞から漏出するとき抗原物質を取り込む位置にある。本発明によって使用することのできる工学的操作を受けた細胞としては、サイトカインを分泌するように工学的操作を受けた腫瘍細胞（Sobol et al.,WO95/07 105; Addision et al.,Gene Therapy Weekly，p.19(November 1994)）；細胞性及び／又は液性抗腫瘍活性を高めるよう外来抗原を発現するように工学的操作を受けた細胞（Plantz et al.，PNAS 90，p．4645(1993)（同種異系組織適合性遺伝子）；Gansbacher WO94/18995（サイトカイン、接着分子、同時刺激因子又は腫瘍関連抗原を発現するように工学的操作を受けた同種異系腫瘍細胞）；Allion e et al.，Gene Therapy Weelky，p.20(January 1995)(IL-2，IL-4，IL-6，IL-7 ，IL-10，TNF∝，CMCSFを発現するよう工学的操作を受けた乳腺癌細胞)；Hock e t al.，Gene Therapy Weelky，p.22(January 1995)（クラスIIＭＨＣを発現するネズミ神経芽細胞）（このアプローチは、直接的細胞−細胞接触を必要とすると考えられているが、漏出ＭＨＣは、本発明による免疫増強性分子となるであろう。）；及び、腫瘍起源細胞中における、免疫増強性分子と自殺遺伝子の双方の同時発現(Frost et al.，WO 92/05262)。全体として、次の実施例及び数字で示されたデータは、多数の異なった実験状況における本出願人の発明の有効性を実証している。腫瘍を収容したチャンバーワクチンとして（すなわち、腫瘍形成より前に）使用される場合、実験動物の10 0％まで腫瘍形成を阻止するのに有効である。微小腫瘍の存在下に埋め込まれる場合、試験された動物の75％より多くにおいて効果が実証される。最後に、大型の腫瘍の外科的摘出と組み合わせた場合、装置の埋め込みは、埋め込まれた動物の60％において腫瘍の再増殖を阻止した。総合すると、これらのデータから幾つかの結論を導き出すことができる。第１に、全ての実験を概観するとき、動物の100％に治癒が得られるのではないものの、チャンバーを有するほうがそうでないものより優れている。最悪でも、腫瘍は一層ゆっくりと進行する。最善の場合、動物は腫瘍を全く発生させない。対照動物と比べて、チャンバーの存在下においては、何れの場合にもより速やかに又はより大きな腫瘍を発生させた動物は見られなかった。このデータは、チャンバーを用いた場合、抗腫瘍免疫応答を生み出すために、遺伝変性させていない腫瘍細胞を効果的に使用することができるということが実証されている。この免疫応答を生み出すのに、チャンバー内の腫瘍細胞は、遊離の腫瘍細胞よりも遙に効果的であり、チャンバー内の照射細胞は、生きた細胞よりも効果的であるように見える。これは、細胞における照射によって誘導された変化による、細胞の免疫原性の増強によるものと想定される。以下の実施例は、本発明の幾つかの具体例を説明するために提供されているものであり、本発明の範囲を限定するものと解してはならない。実施例１：げっ歯類腺癌モデル使用細胞株：ＭＣＡ−３８（Dr．August Ochoa，NCIの寛大な贈与物）は、生体内又は試験管内で維持することのできるネズミの結腸癌である。試験管内での維持のために、細胞は、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％の非必須アミノ酸、１％のＬ−グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)、0.1％のβ−メルカプトエタノール及び10％の胎仔牛血清（ Irvine Scientific，Irvine,カリフォルニア州）を補充したＲＰＭＩ（Sigma Ch emical Company，St．Louis,ミズリー州）で増殖させた。細胞を、週２回のトリプシン処理により日常的に継代培養した。使用動物：大半の実験において、雌性Ｃ57／Ｂ６マウス(Harlan Sprague Da wley)を使用した。示した場合には、胸腺除去マウス(Harlan Sprague Dawley)を使用した。動物は何れも、実験動物を飼育しそして使用するための標準の手順に従って維持された。装置：これらの試験には、上記及び米国特許出願8/179,860に記述されているラミネート膜を採用している超音波シールされた4.5μｌ又は20μｌのポート付き装置を利用した。装置は、70％エタノール中で終夜滅菌され、次いで滅菌食塩水中における３回の洗浄によってエタノールが除去された（Baxter Scientifi c Products，Waukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：負荷のために、ＭＣＡ−38細胞をトリプシン処理し、洗浄しそして遠心によりペレット化した。示した場合以外、ＭＣＡ−38細胞は、Hami ltonシリンジを用いて３μｌ中の10⁶個の細胞を装置の中心内腔内に負荷することにより、4.5μｌのポート付き装置内に封入した。より大型の装置には、20μ ｌ中の10⁷個の細胞を負荷した。装置は、23ゲージ針及びシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓によってシールされた。装置のポートは、シリコーンによって完全に満たされ、そしてポートは半分に切断された。残っているポートを、 70％のエタノール中に手短に浸漬した。負荷された装置は、食塩水を３回交換して洗浄された。上記のように補充された装置は、ＲＰＭＩ1640中に入れられ、37 ℃にて埋め込み迄インキュベートされた。埋め込み物を埋め込まれる動物は、１ｍＬの滅菌食塩水中に希釈した１ｍＬのケタミン（Fort Dodge Laboratories，Fort Dodge,アイオワ州）と0.75ｍＬのキシラジン（Rugby Laboratories，Rockville Center，New York）の混合物0.2〜0 .3ｍＬの腹腔内注射によって麻酔された。腹部領域をベタジンで拭い、そして腹側正中線切開を加えた。止血鉗子を用いて、正中線切開の両側に小さい皮下ポケットを作り、4.5μｌの装置を各ポケット内に１つずつ挿入した。装置挿入後、切開を滅菌ステープルを用いて閉じ、腹部領域を再びベタジンで拭った。20μｌの装置を使用する場合には、１つのみを挿入した。腫瘍チャレンジ：各示した時点において、カプセル封入していないＭＣＡ− 38細胞で動物をチャレンジした。埋め込み後のチャレンジのためには、10⁶個の新たにトリプシン処理したＭＣＡ−38細胞を50μｌの滅菌食塩水に希釈して、右後肢の筋肉内に注射した。再チャレンジする場合には、10⁶個の細胞の第２の注射は、左後肢内に行い、そして、該当する場合には、10⁶個の細胞の第３の注射は、右後肢内に行った。埋め込み時におけるチャレンジのためには、動物を、10³ 個の遊離のＭＣＡ−38細胞でチャレンジした。予備実験は、僅か500個の遊離ＭＣＡ−38細胞が腫瘍形成に十分であることを示した。組織学：実験完了後、埋め込まれた装置を回収し、グルタルアルデヒド中で固定し、切片を作成し、そして、装置内の生存腫瘍細胞の存在につきヘマトキシリン・エオシン染色によって、光学顕微鏡法を用いて解析した。免疫隔離装置内のＭＣＡ−38細胞の生存：装置内において免疫攻撃の不存在下にＭＣＡ−38細胞が生存する能力を評価するため、10⁴又は10⁶個の細胞を4.5 μｌの装置内に封入して胸腺除去マウス内に埋め込んだ。３週間の埋め込み期間の終わりに、装置を摘出し、組織学的処理を行い、そして生きた組織の存在について解析を行った。ＭＣＡ−38細胞は、装置内において生存していた。何れの場合においても、実質的な壊死領域が装置の中央にあったが、健康に見える細胞が、外周にそって存在していた。壊死領域の幅は、装置内に負荷した当所の細胞数に依存していた（すなわち、10⁴個の細胞を収容したものに比して、10⁶個の細胞を収容した装置の方が壊死が大きかった）。ＭＣＡ−38細胞を収容した装置の腫瘍ワクチンとしての使用：同系Ｃ57／Ｂ６マウスに、各々10⁶個のＭＣＡ−38細胞を収容した２つの装置を３又は４週間埋め込んだ。これらの動物は、次いで上記のように10⁶個の遊離のＭＣＡ−38細胞の注射によってチャレンジされた。図３に示すように、２つの実験において、０／８匹の動物がチャレンジ部位に腫瘍を発生させ、一方、対照動物の全ては注射の10週後に腫瘍を発生させた。マウスに埋め込まれた空の装置は、後の遊離ＭＣＡ−38細胞によるチャレンジからマウスを防護しなかった。これらの動物のうちの５匹が、10⁶個の細胞による第２のチャレンジを、最初の埋め込みの８〜11週後に受けた。この場合、埋め込み動物の４／５が、双方の埋め込み部位に腫瘍のない状態を維持し、再び、対照動物の全てが注射部位に腫瘍を発生させた。１匹の実験動物が、第２の注射の部位に腫瘍を発生させた。この動物は装置を１つだけ埋め込まれたものであった。腫瘍のない状態を維持した動物のうちの３匹が、装置の埋め込みの７か月後に第３のチャレンジを受けた。これらの動物の２匹において、腫瘍チャレンジを受ける前に皮下の装置が除去され、第３の動物は元の位置に装置のある状態で、チャレンジを受けた。装置を有する動物は、第３のチャレンジ後も腫瘍のない状態を維持した一方、装置の除去された動物の両方共が、装置を全く埋め込まれなかった対照動物を同様、腫瘍を発生させた。しかしながら、装置を除去された動物は確かに腫瘍を発生させはしたものの、それらは、対照群に比して遙にゆっくりであった。対照は、チャレンジの10日後に腫瘍を発生させた。実験動物の１匹はチャレンジの25日後に腫瘍を発生させ、第２の動物は、チャレンジの36日後に腫瘍を発生させた。取り出された装置の組織学は、細胞の90％より多くが死に、装置内の材料の高度な石灰化があることを明らかにした。しかしながら、幾らかの生きた細胞が残っている証拠があった。これらの結果は、装置の取り出された動物が、装置を全く埋め込まれなかった対照と同じ速度で腫瘍を発生させなかったことから、この装置がそれ自身は抗腫瘍効果を媒介するものでないということを示唆している。同時に、この装置は、腫瘍に対する免疫学的防護を維持するのに必要であるように見える。すなわち、装置を取り出された動物においては腫瘍はよりゆっくりと出現する一方、それらの装置の不存在下においては、装置を埋め込まれていた動物における長期の免疫はないように見える。ＭＣＡ−38細胞を収容した装置の腫瘍治療としての使用：別の一連の実験においては、動物は、ＭＣＡ−38細胞を収容した装置の埋め込み時に、遊離のＭＣＡ−38細胞でチャレンジされた。この場合、動物は10³ 個の遊離腫瘍細胞でチャレンジされた。この実験においては、我々は、腫瘍形成の時間を有意に遅らせることができた（図４）ｐ＝0.036。この実験においては、１匹の動物が、32日目の屠殺時に腫瘍のない状態であった。第２の実験においては、装置を有しない動物の全てが、16日目までに腫瘍を発生させており、その時には、1/10匹の埋め込み動物がチャレンジ部位に腫瘍を発生させていた。これらの結果は、腫瘍細胞を収容した装置の埋め込みが、埋め込み時に導入された腫瘍の増殖を遅らせ又は阻止することができるということを示唆している。実施例２：イヌモデル使用動物： Baxterの動物施設(142-3)のイヌを、ピンヘッドからおよそ４分の１のサイズまでにわたる数個の皮下塊により同定した。組織学的解析は、これらの塊を上皮封入体嚢胞と診断した。第２の犬（4008）は、外部の供給業者から調達した。この犬は、生検を受けて腺管内乳癌と診断された直径約10ｃｍの乳癌を有していた。装置：これらの試験には、上記及び米国特許出願8/179,860に記載されたラミネート膜を採用した、超音波シールされた40μｌのポート付き装置を利用した。装置は70％エタノール中にて終夜滅菌し、次いで滅菌食塩水中での３回の洗浄によりエタノールを除去した（Baxter Scientific Products，Waukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：標準の方法でイヌを麻酔した。腫瘍の周りの領域の毛を剃った。イヌ142-3の場合には、最も大きい塊は外科的に切除され、滅菌食塩水中に入れられた。この塊は、２対の外科用鋏を用いて細切された。細切された小片は、免疫隔離装置内に次のようにして負荷された。すなわち、80μｌの重力沈降させた組織を、Hamiltonシリンジ内に吸い取った。シリンジの針を装置のポート内に挿入し、内容物をすべて装置の内腔内に排出した。装置を、23ゲージ針とシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓によりシールした。装置のポートをシリコーンで満たし、そしてポートを半分に切断した。止血鉗子を用いて腫瘍摘出部位の両側に小さいポケットを作り、各ポケットに装置を１つ挿入した（合計２つの装置を埋め込んだ）。装置の挿入後、切開を閉じて縫合し、そして腹部領域を再びベタジンで拭った。イヌ4008の場合には、随伴する血管を焼灼しつつ、約95％の腫瘍塊を外科的に摘出した。次いで、切開を縫合し、残存腫瘍のベースライン測定を行った。摘出された腫瘍は切り開かれ、種々の深さの、数個の0.5ｃｍ直径の小片が取り出された。これらの小片は、２対の外科用鋏を用いて更に細切された。細切された小片は、８個の装置内に上記のようにして負荷された。腫瘍が摘出された部位の背後に４つの小さい腹側の皮下切開を加え、そして２つの装置を各切開内に挿入した。これらの切開は、次いで縫合され、そして腹部領域はベタジンで拭われた。動物のモニタリング：イヌ142-3に残存する塊を週に２乃至３回測定した。測定は、２つの寸法について行われ、各塊の総表面積を計算するのに用いられた。２名の異なった技術者による二重の測定が行われ、値は各時間点につき平均された。同様に、イヌ4008のに残存する腫瘍も、２つの寸法で週に３回測定された。イヌ142-3からの最大の塊の摘出及び該摘出塊からの組織を収容した装置の挿入の後、４この残りの増殖のうちの２つが、２つの独立した測定によって決定されたところにより、サイズの劇的な減少を示した（図５）。他の２つは、形態学的に明確であったが、寸法変化を示さなかった。残存の塊におけるこのサイズ減少は、動物に対する如何なる更なる操作を伴うことなしに起こった。イヌ4008における残存腫瘍のサイズは、当所増大したように見えたが、これは恐らく、外科的外傷によって生じた浮腫のためであった（７日目における増大に注意、図６）。その後は、２組の独立した測定によって決定されたところによると、手術後30日を越えると幾分一定になる、残存腫瘍のサイズの一貫した減少があった。実施例３：予め存在する小型の腫瘍使用細胞株：ＭＣＡ−38は、生体内でも試験管内でも維持することのできるネズミの結腸癌である。試験管内での維持のために、細胞は、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％の非必須アミノ酸、１％のＬ−グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)、0.1％のβ−メルカプトエタノール及び10％の胎仔牛血清（Irvine Scientific，Irvine,カリフォルニア州）を補充したＲＰＭＩ（Sigma Chemical Company，St．Louis,ミズリー州）中で増殖させた。細胞を、週２回のトリプシン処理により日常的に継代培養した。使用動物：雌性Ｃ57／Ｂ６マウス(Harlan Sprague DaWley)を使用した。動物は何れも、実験動物を飼育しそして使用するための標準の手順に従って維持された。免疫隔離装置：これらの試験には、同時継続の米国特許7/735,401及び7/861 ,512に記述されている、ラミネート膜を採用した超音波シールした4.5μｌのポート付き装置を利用した。装置は、70％エタノール中において終夜滅菌され、次いで滅菌食塩水中における３回の洗浄によりエタノールを除去された（Baxter Scientific Products，Waukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：負荷のために、ＭＣＡ−38細胞をトリプシン処理し、洗浄しそして遠心によりペレット化した。示した場合以外、Hamiltonシリンジを用いて３μｌのペレット化された細胞を免疫隔離装置の内腔内に負荷することによって、10⁶個のＭＣＡ−38細胞が4.5μｌのポート付き装置内に封入された。示した場合には、細胞は、負荷前に3500Radsに暴露された。装置は、23ゲージ針及びシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓でシールされた。装置のポートはシリコーンで完全に満たされ、そしてポートは半分に切断された。残ったポートは70％エタノールに手短に浸漬された。負荷された装置を、食塩水の３回の交換により洗浄した。装置を上記の通りに補充されたＲＰＭＩ1640中に入れ、3 ℃にて埋め込みまでインキュベートした。埋め込み物の埋め込みを受ける動物を、１ｍＬの滅菌食塩水中に希釈した１ｍＬのケタミンと0.75ｍＬのロンプン（rompum）の混合物0.2〜0.3ｍＬの腹腔内注射によって麻酔した。腹部領域ベタジンで拭い、腹部正中線切開を加えた。止血鉗子を用いてこの正中線切開の両側に小さいポケットを作り、各ポケットに１つの装置を挿入した。装置の挿入後、滅菌ステープルを用いて切開を閉じ、腹部領域を再びベタジンで拭った。遊離の照射細胞の注射：埋め込み時に、幾つかの実験動物には、また遊離の照射腫瘍細胞をも投与した。照射のためには、細胞を上記のように負荷のために準備した。細胞を、10⁶個／50ｍＬの濃度に懸濁させた。細胞に、コバルト60からの3500〜4000Radsを照射した。10⁶個の細胞を注射した。腫瘍チャレンジ：埋め込み前に腫瘍を開始させるために、埋め込みの３〜７日前に動物に10³個の遊離のＭＣＡ−38細胞を、注射した。注射は、右後肢の筋肉内注射又は背部皮下スペース内の何れかに行った。予備試験は、僅か500個の遊離のＭＣＡ−38細胞が、腫瘍形成に十分であることを示した。埋め込み後の第２のチャレンジの場合には、第２の注射は左後肢に行った。予め存在する腫瘍の治療：埋め込み３日前に、動物に10³個の遊離の腫瘍細胞を注射した。埋め込み時に、動物に照射ＭＣＡ−38細胞を収容した２つの装置を埋め込み、そしてまた10⁶個の遊離の照射腫瘍細胞を装置の外部に投与した。図７に示すように、装置の内外の双方の照射細胞によって処置された５匹の動物の何れも、最初の90日以内には腫瘍を発生させなかった。90日目に、これらの動物のうちの２匹が、10⁶個の腫瘍細胞でチャレンジされ、これら２匹の動物のうちの１匹が、このチャレンジから腫瘍を発生させた。他の動物の何れも、150日を超えて腫瘍のない状態を維持した。図８に示すように、この処置は、装置内の照射細胞と装置外の遊離の照射細胞との組み合わせによって最もよく働いた。装置に入れた無照射腫瘍細胞と遊離の照射細胞との組み合わせによっても幾らかの防護が得られたが、それは、装置に入れた照射細胞と遊離の照射細胞との組み合わせを投与するのに比して小さかった。遊離の照射細胞の注射のみでは、腫瘍の発生に対して効果がなかった。背部皮下スペース内に腫瘍を発生させた場合、照射細胞を収容した装置を遊離の照射細胞と組み合わせて埋め込むことは、治療した動物の60％を救助した（無治療の動物の全てが、当所に腫瘍を発生させた部位に腫瘍を発生させた。）（図９）。実施例４：腫瘍摘出後の装置による治療使用細胞株：ＭＣＡ−38は、生体内でも試験管内でも維持することのできるネズミの結腸癌である。試験管内での維持のために、細胞は、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％の非必須アミノ酸、１％のＬ−グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)、0.1％のβ−メルカプトエタノール及び10％の胎仔牛血清（Ivine Scientific，Irvine,カリフォルニア州）を補充したＲＰＭＩ（Sigma Chemical Company，St．Louis,ミズリー州）中で増殖させた。細胞を、週２回のトリプシン処理により日常的方法で継代培養した。使用動物：雌性Ｃ57／Ｂ６マウス(Harlan Sprague Dawley)を使用した。動物は何れも、実験動物を飼育しそして使用するための標準の手順に従って維持された。免疫隔離装置：これらの試験には、同時継続の米国特許7/735,401及び7/861 ,512に記述されている、ラミネート膜を採用した超音波シールした4.5μｌのポート付き装置を利用した。装置は、70％エタノール中において終夜滅菌され、次いで滅菌食塩水中における３回の洗浄によりエタノールを除去された（Baxter S cientific Products，Waukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：負荷のために、ＭＣＡ−38細胞をトリプシン処理し、洗浄しそして遠心によりペレット化した。示した場合以外、Hamiltonシリンジを用いて３μｌのペレット化された細胞を免疫隔離装置の中央内腔内に負荷することによって、10⁶個のＭＣＡ−38細胞を4.5μ ｌのポート付き装置内に封入した。装置は、23ゲージ針及びシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓でシールされた。装置のポートはシリコーンで完全に満たされ、そしてポートは半分に切断された。残ったポートは70％エタノールに手短に浸漬された。負荷された装置を、食塩水の３回の交換により洗浄した。装置を上記の通りに補充されたＲＰＭＩ1640中に入れ、37℃にて埋め込みまでインキュベートした。埋め込み物の埋め込みを受ける動物を、１ｍＬの滅菌食塩水中に希釈した１ｍＬのケタミンと0.75mＬのロンプン（rompum）の混合物0.2〜0.3ｍＬの腹腔内注射によって麻酔した。腹部領域をベタジンで拭い、腹部正中線切開を加えた。止血鉗子を用いてこの正中線切開の両側に小さいポケットを作り、各ポケットに１つの装置を挿入した。装置の挿入後、滅菌ステープルを用いて切開を閉じ、腹部領域を再びベタジンで拭った。腫瘍チャレンジ：腫瘍を開始させるために、埋め込み前に、動物に10⁵個の遊離のＭＣＡ−38細胞を注射した。注射は背部皮下スペース内に行った。予備試験は、僅か500個の遊離のＭＣＡ−38細胞が腫瘍を形成するのに十分であることを示した。腫瘍摘出後の治療のための腫瘍療法としての、ＭＣＡ−38細胞を収容した免疫隔離装置の使用：この実験のプロトコールは、図１０に概説されている。要するに、動物は10⁵個の細胞を背部皮下スペース内に注射され、触知可能な腫瘍が観察されるまでモニターされた。10日目に、腫瘍は、全ての動物から外科的に除去された。動物の半分（ｎ＝５）は、それ以上の治療を受けなかった。他の半分（ｎ＝５）は、各10⁶個の無照射ＭＣＡ−38細胞を収容した装置を２つ埋め込まれた。装置は、背部側の皮下に埋め込まれた。両群の動物は、元の腫瘍部位における腫瘍の再発につき観察された。図11に示すように、対照動物（埋め込み無し）の全ては、手術から30日以内に元の腫瘍部位に腫瘍を再発させた。埋め込み物を有する動物のうちの２匹は腫瘍を再発させたのに対して、３匹は180日を超えて腫瘍のない状態を維持した。群間におけるこれらの差は、高度に有意である（ｐ＜0.05）。実施例５：げっ歯類黒色腫モデル使用細胞株：Ｂ16は、生体内でも試験管内でも維持可能な、ネズミの黒色腫である。試験管内での維持のために、細胞は、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％の非必須アミノ酸、１％のＬ−グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)、0.1％のβ−メルカプトエタノール及び10 ％の胎仔牛血清（Ivine Scientific，Irvine,カリフォルニア州）を補充したＲＰＭＩ（Sigma Chemical Company，St．Louis,ミズリー州）中で増殖させた。細胞を、週２回のトリプシン処理により日常的に継代培養した。使用動物：雌性Ｃ57／Ｂ６マウス(Harlan Sprague Dawley)を使用した。動物は何れも、実験動物を飼育しそして使用するための標準の手順に従って維持された。免疫隔離装置：これらの試験には、同時継続の米国特許7/735,401及び7/861 ,512に記述されている、ラミネート膜を採用した超音波シールした4.5μｌのポート付き装置を利用した。装置は、70％エタノール中において終夜滅菌され、次いで滅菌食塩水中における３回の洗浄によりエタノールを除去された（Baxter Scientific Products，Wa ukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：負荷のために、Ｂ¹⁶細胞をトリプシン処理し、洗浄しそして遠心によりペレット化した。示した場合以外、Hamiltonシリンジを用いて３μ ｌのペレット化された細胞を免疫隔離装置の中央内腔内に負荷することによって、10⁶個のＢ16細胞を4.5μｌのポート付き装置内に封入した。装置は、23ゲージ針及びシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓でシールされた。装置のポートはシリコーンで完全に満たされ、そしてポートは半分に切断された。残ったポートは70％エタノールに手短に浸漬された。負荷された装置を、食塩水の３回の交換により洗浄した。装置を上記の通りに補充されたＲＰＭＩ1640中に入れ、37 ℃にて埋め込みまでインキュベートした。埋め込み物の埋め込みを受ける動物を、１ｍＬの滅菌食塩水中に希釈した１ｍＬのケタミンと0.75ｍＬのロンプン（rompum）の混合物0.2〜0.3ｍＬの腹腔内注射によって麻酔した。腹部領域をベタジンで拭い、腹部正中線切開を加えた。止血鉗子を用いてこの正中線切開の両側に小さいポケットを作り、各ポケットに１つの装置を挿入した。装置の挿入後、滅菌ステープルを用いて切開を閉じ、腹部領域を再びベタジンで拭った。遊離の照射細胞の注射：埋め込み時に、埋め込み装置を有する全ての動物は更に、10⁶個の遊離の照射培養Ｂ16細胞をチャレンジ部位に注射された。照射のためには、細胞は、上記のようにして負荷用に準備された。細胞を、10⁶個／50 ｍＬの濃度に懸濁させた。細胞に、コバルト60からの3500〜4000Radsを照射した。10⁶の細胞を注射した。腫瘍チャレンジ：装置の埋め込みの４周後、動物を無照射のＢ16細胞の注射によってチャレンジした。チャレンジには、５×10⁵個の新たにトリプシン処理されたＢ16細胞を、50μｌの滅菌食塩水に懸濁させ、そして右後肢の筋肉内に注射した。予備試験は、10⁴個の遊離のＢ16細胞が腫瘍の形成には十分であることを示した。腫瘍ワクチンとしての、生体内で誘導された腫瘍組織を収容した免疫隔離装置の使用：この実験のためのプロトコールは、図１２に概説されている。要するに、動物を第１ラウンドにおいて、無照射Ｂ16細胞を収容した装置で又は遊離の照射Ｂ16細胞の注射によって治療した。これらの動物の全てが、５×10⁴個のＢ1 6細胞によるチャレンジの後に腫瘍を発生させた。両群の動物からの腫瘍を外科的に摘出し、約１ｍｍ²の小片に細切し、4.5μｌの装置に負荷した。培養した無照射Ｂ16細胞を収容した第３の組の装置もまた用意した。これら３つの組の装置を、第２の組の無処置の動物に埋め込み、そして２つの群の全てにまた遊離の、照射された培養Ｂ16細胞を投与した。対照動物には治療を行わなかった。４周後に、動物を培養Ｂ16細胞でチャレンジした。図１３に示すように、遊離の照射細胞の注射のみによって治療された動物内で増殖させた腫瘍を収容した装置で免疫された３匹の動物のうちの１匹が、チャレンジ後140日を超えて腫瘍のない状態を維持した。こうして、無処置の動物を免役するのに用いた腫瘍細胞は、培養細胞ではなく、寧ろ動物の第１ラウンドにおいて増殖する間に進化を受けた細胞であった。これらのデータは、進化を受けた、自家ヒト腫瘍細胞等のような腫瘍細胞を収容したチャンバーが本出願人の発明を実施するのに有用であろうということを示している。実施例６：げっ歯類卵巣腫瘍使用細胞株：Ｃ57ovは、生体内でも試験管内でも維持することの可能なネズミ腫瘍である。それは、Ｂ16細胞（５×10⁵）の静脈内注射を受けた動物中、実験室において同定された。組織学的検査は、それがＢ16由来でないことを示唆した。試験管内での維持のため、細胞は、１ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％の非必須アミノ酸、１％のＬ−グルタミン、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)、0.1％のβ−メルカプトエタノール及び10％の胎仔牛血清（Irvine Scientific，Irvine,カリフォルニア州）を補充したＲＰＭＩ（Sigma Chemical Company，St．Louis,ミズリー州）中で増殖させた。細胞を、週２回のトリプシン処理により日常的に継代培養した。使用動物：雌性Ｃ57／Ｂ６マウス(Harlan Sprague Dawley)を使用した。動物は何れも、実験動物を飼育しそして使用するための標準の手順に従って維持された。免疫隔離装置：これらの試験には、同時継続の米国特許7/735,401及び7/861 ,512に記述されている、ラミネート膜を採用した超音波シールした4.5μｌのポート付き装置を利用した。装置は、70％エタノール中において終夜滅菌され、次いで滅菌食塩水中における３回の洗浄によりエタノールを除去された（Baxter S cientific Products，Waukegan，イリノイ州）。装置の埋め込み：負荷のために、Ｃ57ov細胞をトリプシン処理し、洗浄しそして遠心によりペレット化した。示した場合以外、Hamiltonシリンジを用いて３ μｌのペレット化された細胞を免疫隔離装置の中央内腔内に負荷することによって、10⁶個のＣ57ov細胞を4.5μｌのポート付き装置内に封入した。装置は、23ゲージ針及びシリンジを用いて植え込まれたシリコーン栓でシールされた。装置のポートはシリコーンで完全に満たされ、そしてポートは半分に切断された。残ったポートは70％エタノールに手短に浸漬された。負荷された装置を、食塩水の３回の交換により洗浄した。装置を上記の通りに補充されたＲＰＭＩ1640中に入れ、37℃にて埋め込みまでインキュベートした。埋め込み物の埋め込みを受ける動物を、１ｍＬの滅菌食塩水中に希釈した１ｍＬのケタミンと0.75ｍＬのロンプン(rompum)の混合物0.2〜0.3ｍＬの腹腔内注射によって麻酔した。腹部領域をベタジンで拭い、腹部正中線切開を加えた。止血鉗子を用いてこの正中線切開の両側に小さいポケットを作り、各ポケットに１つの装置を挿入した。装置の挿入後、滅菌ステープルを用いて切開を閉じ、腹部領域を再びベタジンで拭った。遊離の照射細胞の注射：埋め込み時に、埋め込み装置を有する全ての動物は更に、10⁶個の遊離の照射培養Ｃ57ov細胞をチャレンジ部位に注射された。照射のためには、細胞は、上記のようにして負荷用に準備された。細胞を、10⁶個／5 0ｍＬの濃度に懸濁させた。細胞に、コバルト60からの3500〜4000Radsを照射した。腫瘍チャレンジ：装置の埋め込みの４周後、動物を無照射のＣ57ov細胞の注射によってチャレンジした。チャレンジには、５×10⁴個の新たにトリプシン処理されたＣ57ov細胞を、50μｌの滅菌食塩水に懸濁させ、そして右後肢の筋肉内に注射した。予備試験は、10³個の遊離のＣ57ov細胞が腫瘍の形成には十分であることを示した。腫瘍ワクチンとしての、Ｃ57ovを収容した免疫隔離装置の使用：動物は、各 10⁶個の照射Ｃ57ov細胞を収容した２つの装置を埋め込まれた。埋め込み時に、動物はまた、10⁶個の照射Ｃ57ov細胞の注射をも受けた。動物は、４週後にＣ57o vによってチャレンジされた。結果は図１４に示されており、60％の動物は、30 日を超えて腫瘍のない状態を維持した。本発明は、特定の方法及び装置によって記述されたが、本発明の考察に基づいて変更及び修正が当業者に思いつくであろうということを理解しなければならない。上記の説明的実施例において記述されている本発明において、夥しい数の修正及び変更が、当業者に思いつかれることが予測されており、従って、添付の請求の範囲に見られるような限定のみがこれに加えられる。従って、添付の請求の範囲は、そのような等価な変更の全てを請求の範囲内に包含するよう意図されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＮＯ，ＳＧ，ＶＮ (72)発明者ジョンストン，ウイリアム，ディーアメリカ合衆国60047イリノイ、キルディア、ウエストヨークシャーレイン 20851 (72)発明者レボン，スティーブン，エィアメリカ合衆国60084イリノイ、ワウコンダ、ガーランドロード 29770 (72)発明者マリアノフ，デビッド，エィアメリカ合衆国53142ウイスコンシン、ケノーシャ、フィフティーセブンスアベニュー 7212 ナンバー103

Claims

【特許請求の範囲】１．癌の予防又は治療のための埋め込み可能な装置であって、（ａ）腫瘍細胞、又は患者の腫瘍の抗原に対応する少なくとも１つの抗原を発現するよう工学的操作を受けた体細胞を収容した埋め込み可能なチャンバーを含んでおり、（ｂ）該チャンバーが、使用に際して患者の免疫細胞と該収容された細胞との間に多孔質の境界を提供するための多孔質の壁を有するものであり、（ｃ）該境界の多孔度が、細胞以下の抗原性材料が該境界を通過することを許容する一方、該収容された細胞及び患者の免疫細胞が該境界を通過することを阻止するのに十分なものである、装置。２．該チャンバーとは別個にか又は該チャンバー内に収容された免疫増強性分子の源を更に含む、請求項１の装置。３．該免疫増強性分子がリンホトキシン、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−10、ＩＬ−12、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ、ＴＧＦ−β又は腫瘍抗原である、請求項２の装置。４．該源が、免疫増強性分子を含んだリポソームである、請求項２の装置。５．該源が、免疫増強性分子を含んだマイクロカプセルである、請求項２の装置。６．該源が、やはり該チャンバー内に収容された、免疫増強性分子を分泌するよう工学的操作を受けた体細胞である、請求項２の装置。７．該腫瘍細胞が、免疫増強性分子を発現し分泌するよう工学的操作を受けたものである、請求項１の装置。８．該腫瘍細胞が生きているものである、先行の請求項の何れかの装置。９．該腫瘍細胞が非腫瘍原性である、請求項１乃至７の何れかの装置。１０．該腫瘍細胞が、照射を受けたものである、請求項１乃至７の何れかの装置。１１．該腫瘍細胞が自家のものである、請求項１の装置。１２．該腫瘍細胞が同種異系のものである、請求項１の装置。１３．該腫瘍細胞が同種異系腫瘍細胞株からのものである、請求項１の装置。１４．非腫瘍原性であり且つ該チャンバー内に収容されていないものである投与可能な第２の腫瘍細胞と組み合わせた、先行の請求項の何れかの埋め込み可能な装置。１５．該腫瘍細胞が自家のものである、請求項１４の装置。１６．該第２の腫瘍細胞が同種異系のものである、請求項１４の装置。１７．該第２の腫瘍細胞が同種異系腫瘍細胞株からのものである、請求項１４の装置。１８．該第２の腫瘍細胞の少なくとも幾らかが、免疫増強性分子を発現し分泌するよう工学的操作を受けたものである、請求項１４の装置。１９．該第２の腫瘍細胞が、該患者腫瘍細胞の抗原に対応する少なくとも１つを発現するよう工学的操作を受けた非腫瘍性ヒト細胞である、請求項１４の装置。２０．該腫瘍細胞が、患者の癌を予防又は治療するための方法であり該患者腫瘍細胞の抗原に対応する少なくとも１つを発現するよう工学的操作を受けた非腫瘍性ヒト細胞である、請求項１乃至１８の何れかの装置。２１．該非腫瘍性ヒト細胞が、中皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、肝細胞、骨髄芽球又は繊維芽細胞である、請求項２０の装置。２２．該チャンバーがマイクロカプセル、中空繊維、限外濾過膜チャンバー、膜拡散チャンバー、又は血管濯流装置である、先行の請求項の何れかの装置。２３．該チャンバーが該チャンバーへのアクセスを提供するためのポート手段を含むものである、先行の請求項の何れかの装置。２４．患者の癌の治療又は予防を目的とした、製造における、患者の免疫細胞が当該境界を通過することを阻止する一方細胞以下の抗原性材料が当該境界を通過することを許容する多孔質の境界を使用に際して提供するための多孔質の壁を有するチャンバーと、該チャンバー内に収容されて該境界を通過できない細胞とを含む埋め込み可能な装置の使用であって、該細胞が、該患者の腫瘍細胞の抗原に対応する少なくとも１つの抗原有する腫瘍細胞、患者腫瘍細胞の抗原に対応する少なくとも１つの抗原を発現するよう工学的操作を受けた非腫瘍性ヒト細胞、又は患者の腫瘍細胞の抗原に対応する少なくとも１つの抗原を発現するよう工学的操作を受けた他の体細胞である、使用。２５．固形腫瘍、転移腫瘍又は白血病癌を治療又は予防することを目的とする、請求項２４の使用。２６．リンパ腫、黒色腫、結腸癌、乳癌、肺癌、繊維肉腫、腎癌又は神経芽細胞種を治療又は予防することを目的とする、請求項２４の使用。