JPH10502332A

JPH10502332A - ゲル化されたミクロスフェア、このミクロスフェアの製造方法、及びこのミクロスフェアの応用

Info

Publication number: JPH10502332A
Application number: JP7526136A
Authority: JP
Inventors: オトン，ジャック; サーユ，ジャン−ピエール
Original assignee: リポジェル
Priority date: 1994-04-12
Filing date: 1995-04-12
Publication date: 1998-03-03
Also published as: KR970702027A; FR2718369B1; NZ284825A; DK0755248T3; EP0755248A1; MX9604757A; GR3031108T3; DE69510543D1; ES2135728T3; CA2187551A1; US5945120A; FR2718369A1; AU692860B2; AU2347595A; ATE181665T1; BR9507350A; RU2154465C2; US6221387B1; HUT76439A; EP0755248B1

Abstract

(57)【要約】ｎ個の脂質二重層又はｎ個の液状水性層、及びｎ個のゲル化された極性層が同心円状に、且つ交互に重なっていてもよいゲル化された極性コアを有するミクロスフェアに関する。本発明のミクロスフェアは、外側の脂質二重層を少なくとも１つ有し、且つ、ゲル化された物質を含有する内側の極性層を少なくとも１つ有する型の、ゲル化された極性コアを有するリポソームとして設計されたリポソームを脱脂することにより得られる。

Description

【発明の詳細な説明】ゲル化されたミクロスフェア、このミクロスフェアの製造方法、及びこのミクロスフェアの応用本発明は、ゲル化された（gelified）ミクロスフェア、このミクロスフェアの製造方法、及びこのミクロスフェアの応用に関する。ミクロスフェアは、球状の形状をした粒子であり、その大きさは一般に１〜１２５０μｍの間であって、カプセル化された物質を含有する支持材料からなっている。そして、ミクロスフェアは、長期間に亘って薬理学的効果を与える目的で、活性成分をある期間に亘って徐々に放出し得るような形態で薬剤を投与することが望ましい場合、又は、活性成分を、余りに早く消化器官で消化されることから保護する必要がある場合に特に有利である。支持材料の構造によって、支持材料が、カプセル化しようとする物質を入れる、種々の厚みを有する固体状の小胞である、貯蔵槽型マイクロカプセルと、支持材料が、カプセル化しようとする物質が分散された、連続的な網目構造である、ミクロスフェアとしても知られているマトリックス型マイクロカプセルの２つのタイプのマイクロカプセルに分けられる。本発明においては、マイクロカプセル又はミクロスフェアという用語は、マトリックス型のマイクロカプセル又はミクロスフェアを意味する。多くの物質をカプセル化することができる。薬剤のような化学物質をカプセル化でき、又、その代わりに酵素のような巨大分子をカプセル化でき、更に生きた細胞も又カプセル化できる。ミクロスフェアは、製薬、バイオテクノロジー産業、美容術、農業による食料生産、製紙工業等、多くの分野において用いられている。ミクロスフェアの製造方法としては多くの方法が記載されてきており、このような方法として、次のような方法を挙げることができる。相分離法は、米国特許第４，６７５，１８９号及びヨーロッパ特許出願第５２，５１０号に詳細に記載されており、これらの特許文献には、鉱物油又は植物油のようなコアセルベーション剤を使用して相分離法によって調製したミクロスフェアが記載されている。しかしながら、この方法、又はこれに類似する他の方法によって調製したミクロスフェアには、調製中にクラスターを形成する（粒子の相互接着）という不利な点があった。溶媒蒸発法は、米国特許第４，４７９，９１１号、ヨーロッパ特許出願第３０１，９６９号、及びにヨーロッパ特許出願第１４５，２４０号に詳細に記載されている。この方法は、・揮発性であって水と混和しない溶媒に適切なポリマーを溶解して有機相を調製し、これとは別に・活性成分を含有する水性相を調製し、この水性相を有機相に加え、攪拌により、及び／又は乳化剤の存在下で、これらの二つの相を混合し、次に、室温で攪拌しつつ溶媒を蒸発させて、所望のミクロスフェアを得ることを包含している。ヨーロッパ特許出願第１４５，２４０号には、親水性物質と、所謂薬剤保持物質（天然又は合成の粘質物又は高分子量化合物、特にゼラチン）とを含有する内部水性層と、ジクロロメタンのような水と混合しない溶媒中に存在するポリマー、好ましくはポリ乳酸、又は乳酸とグリコール酸との共重合体を含有する外部油層とを有するＷ／Ｏ型エマルジョン（第１エマルジョン）を調製し、次に当該内部水性層を濃縮又は固化させて粘度が５，０００センチポイズよりも大きくなるようにし、次に適当な界面活性剤の存在下で第２のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを調製し、最後に、このようにして得られたエマルジョンから溶媒を蒸発させることによって製造されるマイクロカプセルについて、より詳細に記載されている。この特許出願に記載されたプロセスによって、直径が０．５μｍから４００μｍの範囲のマイクロカプセルが得られるようになった。しかしながら、従来技術に係るこれらのマイクロカプセル即ちミクロスフェアの主な欠点としては、直径がμｍのオーダーかそれ以上（１〜１２５０μｍ）であるということがある。そして、直径が十分に小さく、特にｎｍオーダーかそれ以上、例えば２０ｎｍから６００ｎｍの範囲である粒子を得ることができるようにすることは必要であり及び／又は特に有利であるから、このことについては現在多くの出願がある。よって、本出願人は、必要であれば直径が２０ｎｍになるように直径を制御し得るゲル化されたミクロスフェアを開発すべく鋭意努力した。本発明の対象は、ゲル化された極性コア（gelified polar core，ＧＰＣ）と、それを同心円状に、且つ交互に取り巻く、ｎ個の脂質二重層又は液状の水性層、及びｎ個のゲル化されたポリマー層（ｎは整数である。）とを有してなり、且つリポゲロソーム、（Lipogelosome）（登録商標）（Lipogel社のために出願された商標であって、ゲル化された極性コアを有するリポソームを示す。）と称するリポソームを脱脂することによって得ることができ、且つ外側の脂質二重層を少なくとも１つ包含し、且つゲル化された物質を含有する内側の水性極性層を少なくとも１つ包含するタイプのミクロスフェアである。このようなミクロスフェアは、以下の点、即ち・好ましくは２０〜６００ｎｍの範囲で直径が制御できる点、・安定である点、・水溶性の活性物質を封入できる点、・ゲル化された物質（gelified substance）の融点によって、中程度の早さで放出する形態及び放出が遅い形態の何れも調製できる点、・細網内皮系統によって殆ど認識されない物質の配位子が結合する基剤（見えないミクロスフェア(stealthy microspheres)）、又は電荷を有する化合物の配位子が結合する基剤（電気療法における電気的標的（electrical target））として用い得る点、及び・直径が２０〜４０ｎｍのオーダーである場合には、見えない（細網内皮系統によって認識されない）ようにし得る点で有利である。本発明によれば、ゲル化可能（gelifiable）物質は、多糖類、ポリペプチド類、又はポリアクリルアミドのような、重合し得る又は重合し得ないゲル化可能物質から選択される。重合し得ないゲル化可能物質は、好ましくはゼラチン、アガロース、又はカラゲニンから選択され、重合し得るゲル化可能物質は、好ましくはポリアクリルアミドゲルから選択される。ゲル化された極性コアを有するこのようなリポソーム即ちリポゲロソームについては、ヨーロッパ特許第３９３，０４９号に詳細に記載されており、これらのリポゲロソームは、単層構造（unilamellar）リポゲロソームの場合には、１つの二重層である層間相、多層構造（multilamellar）のリポゲロソームの場合には、複数の、同心円状に重なった二重層である層間相、及びその中に包み込まれた内側のゲル化された極性水性相から構成されている旨、このヨーロッパ特許には記載されている。このヨーロッパ特許には、このような単層構造又は多層構造のリポゲロソームを得る方法について詳細に記載されている。液状である最初の水性層の中で当該リポゲロソームが調製されるのであるが、この水性層に、１又は幾つかの重合し得る若しくは重合し得ないゲル化可能化合物に属する化合物を存在させて、当該水性相をゲルに転化することによって、カプセル化され、且つゲル化された水性層になる。更に、カプセル化されなかった水性層は、物理的作用、化学的作用、又は酵素の作用によって、ゲル化不能にすることができる。二層である界面相は、例えば４類（class-４）の脂質（燐脂質）からなるが、２類（class-２）の脂質及び３類（class-３）の脂質（遊離コレステロール）及び／又は５類（class-５）の脂質と組み合わせてもよい。この脂質の分類は、Ｈａｕｔｏｎ教授らによって提案された、極性の水性相と単層又は二重層の界面相との間の分配係数Ｋ_D、及び界面相と疎水性即ち非極性の相との間のＫ_cに基づいた分類であり（Hauton及びLafont、Biochimie，1987，69, 177-204）、ここでは、この脂質の分類を使用する。この分類は上述したヨーロッパ特許第３９３，０４９号にも記載されている。このようなリポゲロソーム（ＬＧＳ）は、一般に二重層の数によって、・小型単層構造リポゲロソーム（ＳＵＬＧＳ）、大型単層構造リポゲロソーム（ＬＵＬＧＳ）、及び・多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）に分類できる。本発明によれば、当該リポゲロソームの脱脂は幾つもの方法で実施でき、直径が制御されたゲル化されたミクロスフェアが得られる。ａ）単層構造又は多層構造リポゲロソームの表面脱脂（１）当該単層構造又は多層構造リポゲロソームの表面脂質二重層を、水に混和しない有機溶媒、又は水に混和しない有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、次いで、（３）表面が脱脂されたゲル化されたミクロスフェアを含有する水性相を分離する（最も外側の二重層の除去）。単層構造リポゲロソームを脱脂した（唯一の脂質層を除去した）場合には、本発明の通りの均質なゲル化されたミクロスフェア、即ち脂質二重層を含まず、且つ上記の重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）に対応する均質のゲル化されたミクロスフェアからなるゲル化されたミクロスフェアが得られる。このゲル化されたミクロスフェアは、又、ゲロソーム（gelosomes）（登録商標）（ＧＳ）［Lipogel社のために出願された商標であり、小型均質ゲロソーム（ＳＨＧＳ）、大型均質ゲロソーム（ＬＨＧＳ）がある。）］、又はポリメリソーム（polymerisomes）（登録商標）（Lipogel社のために出願された商標であり、この商標も又、本発明に従って得られたゲル化されたミクロスフェアを示す。）とも称される。多層構造リポゲロソームを表面脱脂した（最も外側の脂質二重層を除去した）場合には、ハイブリッド多層ゲロソーム（ＧＳ）（＝ハイブリッドＭＧＳ）又はハイブリッド多層ポリメリソームと称される、リポソーム（ＬＧＳ）とゲロソーム（ＧＳ）との合いの子であって、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）と、このゲル化された極性コアに同心円状に重なるとともに重合され又は重合されなかったゲル化された水性層によって仕切られた脂質二重層とからなっており、最外層が重合され又は重合されなかったゲル化された水性層である構造のミクロスフェアが得られる。本発明に従って得られるミクロスフェアは、実際には、・上記ミクロスフェアの調製に使用される脱脂をしていない出発ＬＧＳが二層構造である場合には、単層構造ＬＧＳであり、・上記ミクロスフェアの調製に使用される脱脂をしていない出発ＬＧＳが多層構造である場合には、多層構造ＬＧＳである。これらのミクロスフェアは、重合され又は重合されなかった水性表面層で囲まれている（表１、図２及び図３）。水と混和しない有機溶媒としては、特にヘプタンが使用されるが、これには限定されない。ｂ）単層構造又は多層構造リポゲロソームの完全脱脂（１）水と混和若しくは一部混和する有機溶媒、又は水と混和若しくは一部混和する有機溶媒の混合物によって、単層構造リポゲロソーム又は多層構造リポゲロソームから脂質を抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、（３）水性層から有機溶媒を分離し、次いで（４）ゲル化され完全に脱脂されたミクロスフェアを分離する。本発明に従えば、水に混和する有機溶媒を用いて段階（１）を実施した場合には、段階（２）の前に非極性溶媒を添加して、二相への分配が可能になるようにする。単層構造リポゲロソームを完全脱脂した（唯一の脂質二重層を除去した）場合には、上に定義の通りの均質なゲロソーム（ＧＳ）又は均質なポリメリソームが得られる。二層構造リポゲロソームを完全脱脂した場合には、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）が得られ、このゲル化された極性コア（ＧＰＣ）は、液体状態の水性層と、重合され又は重合されなかったゲル化された状態にある単一の表面層によって囲まれている。多層構造リポゲロソームを完全脱脂した場合には、多層ゲロソーム（ＧＳ）（ multilayered gelosomes＝ＭＧＳ）又は多層構造ポリメリソームが得られ、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）が得られ、このゲル化された極性コア（ＧＰＣ）は、互いに液状の水性層で隔てられている、重合され又は重合されなかったゲル化された水性層によって囲まれている。有機溶媒としてはｎ−ブタノールが有利であるが、これには限定されない。本発明のもう一つの対象は、ｎ涸の脂質二重層又はｎ涸の液状の水性層、及びｎ涸のゲル化された極性層（ｎは整数である。）が、周りを同心円状に、且つ交互にその回りに重なっていてもよいゲル化された極性コア（ＧＰＣ）を有する本発明のとおりのミクロスフェアを調製する方法であり、この方法は、（ａ）外側の脂質二重層を含めてｎ＋1個の脂質二重層と、少なくとも１個の、ゲル化された物質を含有する内側の極性水性相を有するリポゲロソームと称するリポソームを調製する段階と、（ｂ）当該リポゲロソームを脱脂する段階とを包含することを特徴とする。段階（ａ）はヨーロッパ特許第３９３，０４９号に記載されている。当該方法の有利な態様によれば、脱脂の段階の前に、リポゲロソームを、直径に従って、好ましくは超音波処理によって選別する。当該方法の他の有利な態様によれば、脱脂の段階の前に、カプセル化されていない物質を、好ましくは接線限外濾過（tangential ultrafiltration）により除去する。続いて、限外濾過残留物（ultrafiltration retentate）中のリポゲロソーム濃縮物が得られる。引き続いて、上記限外濾過残留物において脱脂段階を実施する。当該方法の他の有利な態様によれば、脱脂段階（ｂ）は、表面脱脂の場合には、（１）当該単層構造又は多層構造のリポゲロソームの表面脂質二重層を、水と混和しない有機溶媒、又は水と混和しない有機溶媒の混合物で抽出すること、（２）有機相と水性相の二層に分配すること、及び、（３）表面が脱脂された、ゲル化されたミクロスフェアを含有する水性相を、上に記載されたようにして分離することを包含している。当該方法の他の有利な態様によれば、脱脂段階（ｂ）は、完全脱脂の場合には、（１）水と混和若しくは一部混和する有機溶媒、又は水と混和若しくは一部混和する有機溶媒の混合物によって、単層構造リポゲロソーム又は多層構造リポゲロソームから脂質を抽出すること、（２）有機相と水性相の二層に分配すること、（３）水性層から有機溶媒を分離すること、及び（４）完全に脱脂されたゲル化されたミクロスフェアを、上に記載されたようにして分離することを包含している。上記の工程の組み合わせに加えて、本発明は、以下の記載から明らかになる他の工程の組み合わせも包含する。以下の記載は、本発明が対象としている方法に関する実施例及び添付された図面に関する。・図１は、単層構造リポゲロソームを脱脂して得られたゲル化されたミクロスフェアを図示する。・図２は、二層構造リポゲロソームを表面脱脂又は完全脱脂して得られたゲル化されたミクロスフェアを図示する。・図３は、多層構造リポゲロソームを表面脱脂又は完全脱脂して得られたゲル化されたミクロスフェアを図示する。・図４は、単層構造リポゲロソームのモル体積の変化を直径Ｒとの関係で（ｌｏｇ／ｌｏｇ座標で）図示する。・図５は、均質ゲロソーム（ＳＨＧＳ又はＬＨＧＳ）のモル体積の変化を直径Ｒ−ｈとの関係で（ｌｏｇ／ｌｏｇ座標で）図示する。・図６は、多層構造リポゲロソームのモル体積の変化を直径Ｒの関数として（ｌｏｇ／ｌｏｇ座標で）図示する。しかしながら、これらの例は本発明の対象について例示するのみであって、本発明を如何様にも限定するのではないことを理解されたい。本発明のゲル化されたミクロスフェアの種々のタイプを以下の表１及び図１〜３に示す。単層構造のリポゲロソームを表面脱脂又は完全脱脂して得られた、重合され又は重合されなかったゲル化されたミクロスフェアを図１に図示する。単層構造リポゲロソームは、重合され又は重合されなかった、半径がＲ_GPCのゲル化された極性コア（ＧＰＣ）（白で表されている。）と、厚さがｈ＝１０^-8 ｃｍの燐脂質二重層（黒色で表されている。）とを有している。したがって、当該単層構造リポゲロソームの半径は、Ｒ＝Ｒ_GPC＋ｈである。単層構造のリポゲロソームを脱脂することにより、上述のように、ゲル化された極性コアが重合されなかった場合には均質なゲロソーム（ＳＨＧＡ又はＬＨＧＳ）が得られ、ゲル化された極性コアが重合された場合には均質なポリメリソームが得られる。本発明のとおりの、重合され又は重合されなかったゲル化されたミクロスフェアの半径は、Ｒ_GPCに等しい。ＬＧＳ及びミクロスフェアを囲んでいる液状の水性層は、ダッシュ記号の列で陰影を付けて表されている。二層構造のリポゲロソームを表面脱脂又は完全脱脂して得られた、重合され又は重合されなかったゲル化されたミクロスフェア図２に図示する。図２Ａは、重合され又は重合されなかった、半径がＲ_GPCのゲル化された極性コア（ＧＰＣ）（白色で表されている。）と、厚さがｈ＝１０^-8ｃｍであって、厚さＨのゲル化された水性層で分けられている２つの脂質二重層（黒色で表されている。）とを有している二層構造リポゲロソームを表している。そして、当該二層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）の半径は、Ｒ_LGS＝Ｒ_GPC＋２ｈ＋Ｈ・・・（１）である。図２Ｂは、当該二層構造ＬＧＳを表面脱脂して得られたハイブリッド多層ゲロソーム又はポリメリソームを表す。表面の脂質二重層のみが抽出されるので、脂質二重層で囲まれ、更に厚さＨの表面の重合され又は重合されないゲル化された水性層で囲まれている、半径がＲ_GPCの重合され又は重合されないゲル化された極性コア（ＧＰＣ）を有しているミクロスフェアが得られる。これらの本発明のミクロスフェアの半径は、Ｒ＝Ｒ_GPC＋ｈ＋Ｈ・・・（２）である。図２Ｃは、上記の二層構造ＬＧＳを完全脱脂して得られたハイブリッド多層ゲロソーム又はポリメリソームを表す。どちらの脂質二重層も抽出されるので、厚さｈの液状の水性層で囲まれ、一番外側を、厚さＨの、表面の重合され又は重合されなかったゲル化された水性層で囲まれている、半径がＲ_GPCの、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）を有しているミクロスフェアが得られる。これらのミクロスフェアの半径は、Ｒ＝Ｒ_GPC＋ｈ＋Ｈ・・・（３）である。図３は、多層構造のリポゲロソーム（ＭＬＧＳ）を表面脱脂又は完全脱脂して得られたミクロスフェアを示す。これらのＭＬＧＳは、重合され又は重合されなかった、半径がＲ_GPCのゲル化された極性コア（ＧＰＣ）（白で表されている。）と、ｎ個の脂質二重層（黒色で表されている。）とを有しており、それぞれの二重層は、層さがｈ＝１０^-8ｃｍである。ここでｎは３である。したがって、当該多層構造リポゲロソームの半径は、Ｒ_LGS＝Ｒ_GPC＋ｎｈ＋（ｎ−１）Ｈ・・・（４）であり、ｎ＝３のときは、Ｒ_GPC＋３ｈ＋２Ｈに等しくなる。当該三層構造ＬＧＳを表面脱脂することによって、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）、脂質二重層、次に第１のゲル化された水性層、第２の脂質層、そして次に表面に第２の重合され又は重合されなかったゲル化された水性層を有しているハイブリッド多層ゲロソーム又はポリゲロソームが得られる。本発明のこのようなミクロスフェアの半径は、Ｒ＝Ｒ_GPC＋２ｈ＋２Ｈ・・・（５）である。当該三層構造ＬＧＳを完全脱脂することによって、重合され又は重合されなかったゲル化された極性コア（ＧＰＣ）、第１の液状の水性層（陰影を付して示した。）、第１のゲル化された水性層、第２の液状の水性層、そして表面に第２の重合され又は重合されなかった水性層を有している多層構造ゲロソーム又はポリゲロソームが得られる。本発明のこのようなミクロスフェアの半径は、Ｒ＝Ｒ_GPC＋２ｈ＋２Ｈである。実施例１：リポゲロソーム（ＬＧＳ）及び（表面脱脂又は完全脱脂をした）本発明のミクロスフェアの物理的パラメータの測定：ミクロスフェアの径が制御されているかどうかの評価タイプの明確な球状粒子における物理的パラメータを計算する規絡化方法を決めるために必要な条件は、ＬＭＴ単位系を厳密に決定することである。種々の単位系のなかで、従来のＣ．Ｇ．Ｓ単位系は、生物学者が実用するのに最も適していた。しかしながら、一つの単位系からもう一つの単位系に変えるのは、適当な変換ファクタを用いれば容易である。Ｃ．Ｇ．Ｓ単位系について述べれば、常に、長さはcmで、表面積はcm²で、体積はcm³で、密度はｇ・cm^-3で、濃度はｇ・cm^-3又はmol・cm^-3で、そして時間は秒で表さねばならない。これらの条件は規絡化モデルが得られるようにするのに必要であり、これらの条件が満たされないと、互いに関連する単位が使用されないことになるから、生物科学においては不完全な状態になる（Hauton J．C．et al.,Biochimie,1987,69, 177-204，Lipid Biodynamics: new perspectives）１）明確に記述された球状粒子の物理的パラメータ１個の、半径Ｒ（cm）を有する、リポゲロソーム（ＬＧＳ）、ゲロソーム（ＧＳ）、又はリポゲロソーム（ＬＧＳ）とゲロソーム（ＧＳ）との混成構造を有する粒子のような球状粒子Ｘは、体積Ｖ_x（cm³）、密度ｄ_x、（ｇ・cm^-3）、質量Ｍ_x（ｇ）、及び表面積Ｓ_x（cm²）を有する多分子体（polymolecular entity）である（これらの粒子の物理的パラメータは、下付き添え字で表す。）。１モルのＸ即ちＮ個即ち６．０２３×１０²³個のＸ粒子（モル当り物理的パラメータは上付き添え字で表す）は、Ｖ_xＮcm³のモル体積（ＭＶ）ＭＶ_xを有し、これは４／３・πＲ³Ｎcm³即ち２５．２２×１０²³Ｒ³cm³に等しく、ｍ_xＮｇのモル質量（ＭＭ）ＭＭ_x即ち２５．２２×Ｒ³ｄ_xｇ、及び４πＲ²Ｎcm²即ち７５．６８×１０²³Ｒ²cm²に等しいＳ_xＮcm²のモル表面積（ＭＳ）ＭＳ_xを有している（４／３π＝４．１８８、４／３πＮ＝２５．２３×１０²³、４π＝１２．５６６４、４πＮ＝７５．６９×１０²³である。）。もし粒子種Ｘの濃度を［Ｘ］（mol・cm^-3）で表すと、（試験管内の全血、プラズマ、間質液、胆汁、管腔内容物等の水性相の）明確に規定できる標準体積cm³ 当たりの粒子の数ｎ_xを与える以下の関係Ｎ_x＝［Ｘ］Ｎ、又はＮ_x＝［Ｘ］／Ｎ^-1 （アボガドロ数の逆数Ｎ^-1は、０．１６６×１０^-23に等しく、１つの原子、分子、又は粒子の濃度をmol・cm^-3で表した定数となる。）が存在する。粒子のモル当り物理的若しくは化学的パラメータにＮ^-1をかけるか又はＮで割ると、粒子１個当りのこれらのパラメータが得られる。２）単層構造リポゲロソームの脱脂半径Ｒ（cm）を有する単層構造リポゲロソームの場合において、ＰＰ（極性相）として知られている、重合され又は重合されなかったゲル化された水性相が包み込まれており、このゲル化された水性相は、直径Ｒ−ｈの球の形態で存在している。ｈは、ＢＩＰ（二層界面相）として知られている表面の脂質二重相のcmで表した厚さを表す。包み込まれたゲル化された水性相は記号ＧＰＣ（ゲル化された極性コア）で示される。下の結果は、上に説明した計算方法で得られ、種々の直径を有する単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）、及び本発明のミクロスフェア、換言すれば脱脂によって得られたミクロスフェア（即ちＧＰＣ）の物理的特性を示す。下記の記号を用いた。Ｒ＝cmで表したリポゲロソーム（ＬＧＳ）の与えられた半径。ｈ＝４０×１０^-8cm（換言すれば４０Å即ち４ｎｍ）近辺である、表面脂質二重層の厚さ。したがって半−ＢＩＰ（half-BIP）は２０×１０^-8cmである。ＭＶ_LGS＝半径Ｒのリポゲロソーム（ＬＧＳ）のcm³で表したモル体積。ＭＶ_GPC＝半径Ｒ単層構造リポゲロソーム、（ＬＧＳ）が有するゲル化された極性コア（ＧＰＣ）のcm³で表したモル体積、即ち単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）を脱脂して得られたミクロスフェアのモル体積。ＭＶ_BIP＝半径Ｒの単層構造リポゲロソーム（（ＬＧＳ）を包む唯一の表面ＢＩＰのcm³で表したモル体積。ＭＶ_AIP(o)＝半径Ｒの単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）を包む唯一の表面ＢＩＰの外側の燐脂質単層をcm³で表したモル体積。ＭＶ_BIP(i)＝半径Ｒの単層構造ＬＧＳを包む唯一の表面ＢＩＰの内側の燐脂質単層をcm³で表したモル体積。ＭＳ_LGS＝半径Ｒのリポゲロソーム（ＬＧＳ）のcm²で表したモル表面積。ＭＳ_GPC＝半径Ｒ−ｈのＧＰＣのcm²で表したモル表面積、即ち単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）を脱脂して得られたゲル化されたミクロスフェアのモル表面積。４つの例を示す。ａ）Ｒ＝１００×１０^-8cm（即ち直径２０ｎｍ）である単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）：ＭＶ_LGS＝２．５５×１０⁶cm³、ＭＶ_GPC＝０．５４×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの２２％）、ＭＶ_BIP＝１．９８×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの７８％）、ＭＶ_BIP(o)＝１．２３×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの６２．２％）、ＭＶ_BIP(i)＝０．７５×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの３７．８％）、ＭＳ_LGS＝７．５７×１０¹²cm²、ＭＳ_GPC＝２．７２×１０¹²cm²、ｂ）Ｒ＝５００×１０^-8cm（即ち直径１００ｎｍ）である単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）：ＭＶ_LGS＝３１５×１０⁶cm³、ＭＶ_GPC＝２４７×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの７７．９％）、ＭＶ_BIP＝７０×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの２２．１％）、ＭＶ_BIP(o)＝３６×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの５２％）、ＭＶ_BIP(i)＝３３×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの４８％）、ＭＳ_LGS＝１８９×１０¹²cm²、ＭＳ_GPC＝１６０×１０¹²cm²、ｃ）Ｒ＝２，５００×１０^-8cm（即ち直径５００ｎｍ）である単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）：ＭＶ_LGS＝３９，４１３×１０⁶cm³、ＭＶ_GPC＝３７，５４５×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの９５．３％）、ＭＶ_BIP＝１，８６２×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの４．７％）、ＭＶ_BIP(o)＝９３９×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの５０．４％）、ＭＶ_BIP(i)＝９２３×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの４９．６％）、ＭＳ_LGS＝４，７３０×１０¹²cm²、ＭＳ_GPC＝４，５８０×１０¹²cm²、ｄ）Ｒ＝１０，０００×１０^-8cm（即ち直径２０００ｎｍ又は２μｍ）である単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）：ＭＶ_LGS＝２，５２２，４３２×１０⁶cm³、ＭＶ_GPC＝２，４９２，２８４×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの９８．８％）、ＭＶ_BIP＝３０，１５５×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_LGSの１．２％）、ＭＶ_BIP(o)＝１５，１０８×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの５０．１％）、ＭＶ_BIP(i)＝１５，０４７×１０⁶cm³ （即ちＭＶ_BIPの４９．９％）、ＭＳ_LGS＝７５，６９０×１０¹²cm²、ＭＳ_GPC＝７５，０７６×１０¹²cm²、小型単層構造リポゲロソーム、（ＳＵＬＧＳ）又は大型単層構造リポゲロソーム（ＬＵＬＧＳ）を脱脂することによって、上述のように、表面にある唯一の脂質二重層は抽出され、ＧＰＣ（ゲル化された極性コア）だけが残り、重合された均質ゲロソーム（ＧＳ）（均質ポリメリソーム）又は重合されなかった均質ゲロソーム（ＧＳ）が得られる。図４及び図５は、いずれもＬｏｇ／Ｌｏｇ座標で示してあり、一方は、cm³で表したＭＶ_LGSの値の変化をcmで表したＲとの関係で示し、他方は、ＭＶ_GSの値の変化を（Ｒ−ｈ）との関係で示してあり、（Ｒ−ｈ）はcmで表されている。 cm³・mol^-1で表されるＭＶ（モル体積）は、ｇ・cm^-3で表される密度ｄをかけることによって、ｇ・mol^-1で表されるＭＭ（モル質量）として表すことができる。重合され又は重合されなかった、カプセル化されているゲル化されたの極性水性相の密度ｄ_pp、及び表面脂質二重層の比重ｄ_BIPは分かっているから、リポゲロソーム（ＬＧＳ）の比重ｄ_LGS、又はゲロソーム（ＧＳ）の比重ｄ_GSは計算できる。３）多層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）の脱脂多層構造リポゲロソーム、（ＬＧＳ）（ＭＬＧＳ）は、重合され又は重合されなかった、cmで表した半径がＲ_GPCのＧＰＣ（ゲル化された極性コア）からなっており、このＧＰＣには、厚さｈが４０×１０^-8cmの近辺である第１の脂質二重層が同心円状に重なっており、その上から、厚さＨが１００×１０^-8cmのオーダーである、重合され又は重合されなかったゲル化された水性層が重なり、その上から第２の脂質二重層が重なり、以下同様である。記号ｎが脂質二重層の数を表すから、多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）の直径Ｒは式（３）で与えられる。Ｒ_GPCが２１０×１０^-8cmであって、ｎ個の脂質二重層と、（ｎ−１）個の厚さ１００×１０^-8の重合され又は重合されなかったゲル化された水性層を有するＬＧＳの、ＭＶ_LGSの値、並びに重合され又は重合されなかった、カプセル化されているゲル化されたの極性水性相の体積％である％ＭＶ_pp、及び脂質相の体積％である％ＭＶ_BIPの変化を例として表２に示す。図６には、多層構造リポゲロソームについて、上記のパラメータがＬｏｇ／ｌｏｇ座標で示されている。実際には、特定の種類の多層構造リポゲロソーム、（ＭＬＧＳ）について、物理的パラメータを完全に特定しようとするなら、この多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）のパラメータＲ_GPC、ｎ、ｈ、及びＨを決める必要がある。本発明によれば、表面脱脂の間は、多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）の表面即ち外側にある厚さｈの脂質二重層が抽出されるだけである。リポゲロソーム（ＬＧＳ）とゲロソーム（ＧＳ）との混成構造を有する粒子が、次に得られ、この粒子は、厚さがＨの、重合され又は重合されなかったゲル化された水性層、及び重合され又は重合されなかったＧＰＣを取り囲んでいる（ｎ−１）個の脂質二重層を有している。これらの混成構造を有する粒子の直径は、Ｒ_LGS−ｈに等しくなる。ここでＲ_LGSは多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）の半径である。本発明によれば、完全脱脂の間に、多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）のすべての脂質二重層は抽出され、残った空間は、有機相／水性相分配を行っている間に、液状の水性極性相によって占有される。よって、多層ゲロソーム（ＭＧＳ）として示される非均質構造が得られ、この構造において、多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）に由来する、最初からカプセル化されているゲル化された水性相は、重合されていてもよいし、重合されていなくてもよい。これらの非均質ゲロソーム（ＧＳ）の半径は、Ｒ_LGS−ｈに等しくなる。ここでＲ_LGSは脱脂前の多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）の半径である。完全脱脂の後における、このようにして空き、且つ有機相／水性相分配に由来する液状の水性極性相によって占有された、脂質の空間のモル％は、脱脂されていない多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）の％ＭＶ_BIPに等しくなる。実施例２：本発明のミクロスフェアの調製Ａ．生成物ａ）燐脂質：脂質相は、Ｓｔｅｒｎ−Ｆｒａｎｃｅから入手した脱脂大豆の燐脂質からなっており、この燐脂質は乾燥粉末の状態で提供され、重量／体積で７．５％の濃度で使用された。ｂ）重合し得ないゲル化可能物質・フランス、Ｓａｎｏｆｉ−Ｂｉｏｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社から入手したＢ１５０Ｂｌｏｏｍ型のゼラチンこのゼラチンは、融点が３０〜３５℃であり、重量／体積で７．５％の濃度で使用された。・フランス、Ｓａｎｏｆｉ−Ｂｉｏｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社から入手したカラゲニン８０／２０（Ｗ／Ｗ）のゼラチン／カラゲニン混合物は、融点が５０℃である。この混合物は、重量／体積で７．５％の濃度で使用された。上記割合及び濃度のゼラチン又はゼラチン／カラゲニン混合物は、それぞれの融点である３０〜３５℃及び５０℃よりも低い温度で、重合されないゲル状水性相を与える。ｃ）重合し得るゲル化可能物質・Ｓｉｇｍａ社から入手したアクリルアミド／ビス−アクリルアミド重合され得られる水性相は、Ｓｉｇｍａ社から入手したアクリルアミド／ビス −アクリルアミド、ＢｉｏＲａｄ社から入手したＴｅｍｅｄ（登録商標）、及びＢｉｏＲａｄ社から入手した過硫酸アンモニウムを、適切な濃度条件で混合して得た。詳細には、重量／体積で１５％のアクリルアミド／ビス−アクリルアミド濃度を使用した。ポリアクリルアミドゲルは重合し得る化合物から選択された例ではあるが、これには限定されない。ｄ）氷結防護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｇｅｎｔ）・ｓｉｇｍａ社から入手した蔗糖（重量／体積で７．５％の濃度で使用）を使用。Ｂ．手順与えられた濃度は、出発時の水性相において用いられた濃度である。そして、この水性相に燐脂質を分散させた。下記のプロセスは、大部分が１００ｎｍのオーダーの直径即ち５×１０^-8cmの半径Ｒを有するリポゲロソーム（ＬＧＳ）を得ることができる超音波処理（工業的規模で行うのに適している）を包含している故に、リポソーム及びリポゲロソームを調製する数々のプロセスのなかでも好ましく、工業的規模で行うのに適している。Ｓｅｍａ−Ｔｅｃ社（ニース）から入手したレーザー粒子径測定装置で測定した準弾性光散乱によれば、リポゲロソーム（ＬＧＳ）の個数の内の８１％は直径９２．７ｎｍ（半径Ｒが４１３×１０^-8cm）のところに集まり、１９％は直径３１２ｎｍ（半径Ｒが１，５６０×１０^-8cm）のところに集まっている。このプロセスは、以下の工程、即ち１）Ｓｔｅｒｎ−Ｆｒａｎｃｅから入手した脱脂大豆の燐脂質を、重量／体積で７．５％の濃度で３時間、機械的に緩やかに攪拌し、ゲル化剤（濃度７．５％のゼラチン若しくはゼラチン／カラゲニン混合物、又はＴｅｍｅｄ（登録商標）及び過硫酸アンモニウムを含有しない濃度１５％のアクリルアミド／ビス−アクリルアミド）を含有する水性相に液体の状態で分散させる工程を包含している。７．５％（Ｗ／Ｖ）の蔗糖を凍結保護剤として添加してもよい。ａ）重合し得ないゲル化剤（ゼラチン又はゼラチン／カラゲニン混合物）の場合には、機械的攪拌の段階を、これらのゲル化剤の融点よりも高い温度で実施する。ｂ）ポリアクリルアミドを重合し得るゲル化剤として用いる場合には、Ｔｅｍｅｄ（登録商標）も過硫酸アンモニウムも加えずに、機械的攪拌の段階を実施する。これによって重合が進行することが防止される。この機械的攪拌によって、直径が２９７ｎｍから２，０８４ｎｍまでばらつき、平均直径が５０４ｎｍ（即ち半径Ｒが２，５２０×１０^-8cm）である多層構造リポソームが得られる（未だ、リポゲロソームに転換されていないからである。）。２）このプロセスは、リポソーム懸濁液の体積に合わせたチタニウム製超音波発振子（ｓｏｎｏｔｒｏｄｅｓ）を取り付けたＳｏｎｒｏｒｅａｔｏｒ超音波発生装置（ベルギー国、Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ、ＵｎｄａｔｉｍＵｌｔｒａｓｏｎｉｃｓ社製）による超音波処理を包含している。２０ｋＨｚの周波数を用い、出力はリポソーム懸濁液の体積に合わせた。１０ cm³のオーダーの体積の場合には、超音波処理の時間を３〜４分間とし、７００〜７５０cm³の体積の場合には１０分間に延長した。ａ）上記の重合し得ないゲル化剤の場合には、これらのゲル化剤の融点よりも高い温度で超音波処理を実施する。ｂ）重合し得るゲル化剤であるポリアクリルアミドを、ゲル化剤として用いる場合には、重合を起こさせるＴｅｍｅｄ（登録商標）及び過硫酸アンモニウムを、超音波処理を開始するときに添加する。超音波処理の最後で水で（１／１０〜１／２０に）薄めると、リポソームにカプセル化されていない水性相では重合が起こらず、他方リポソームにカプセル化されている水性相では重合が起こる。３）カプセル化されなかった化合物を接線限外濾過によって除去すると、リポソーム及び／又はリポゲロソームは残留物中に残る。フランス、Ｆｉｌｔｒｏｎ社製の装置を使用したが、この装置は処理しようとする体積に合わせて調整することができる。使用した膜は、カットオフ閾値が３００ｋＤａ又は１，０００ｋＤａ（より正確には、３００，０００ｇ・mol^-1又は１，０００，０００ｇ・mol^- ¹ ）である。水で希釈しないときには、接線限外濾過は、重合し得ないゲル化剤（ゼラチン又はゼラチン／カラゲニン混合物）の融点よりも高い温度で実施しなければならない。超音波処理の後に水で適切に希釈することによって、室温で切線限外濾過を行うことができる。カプセル化された重合し得ない化合物を透析するときの収率を向上させるべく、カプセル化されていないゼラチンを断片に分解するのにパパインが用いられてきた。次いで温度を低下させると、リポソームがリポゲロソームに変化し、これは限外濾過残留物中に濃縮される。重合し得るゲル化剤としてポリアクリルアミドを用いる場合には、超音波処理に引き続いて直ちに適切に希釈し限外濾過することによって、カプセル化されていない重合し得る剤が除去され、他方、カプセル化された、重合可能な剤によってリポソームはリポゲロソームに転換せられる。４）リポゲロソーム（ＬＧＳ）の表面脱脂又は完全脱脂リポゲロソームは、処理条件を選べば、限外濾過残留物中に多少なりとも濃縮されるが、水とは混和しない溶媒（又は水とは混和しない溶媒の混合物）によって表面脱脂される。水に溶解しない溶媒としてはヘプタンが用いられる。完全脱脂は、水に混和する溶媒、又はｎ−ブタノールのように水に一部混和する溶媒によって行うことができる。有機相と水性相との２相に分配した後、上述の種々のミクロスフェア、即ち、重合されなかった小型均質ゲロソーム（ＳＨＧＳ）若しくは大型均質ゲロソーム（ＬＨＧＳ）、重合された小型均質ゲロソーム（ＳＨＧＳ）若しくは大型均質ゲロソーム（ＬＨＧＳ）（即ち均質ポリメリソーム）、重合されなかったゲル状水性相で取り囲まれた多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）（リポゲロソーム（ＬＧＳ）とゲロソーム（ＧＳ）との混成構造を有する。）、重合されたゲル状水性相で取り囲まれた多層構造リポゲロソーム（ＭＬＧＳ）（リポゲロソーム（ＬＧＳ）とゲロソーム（ＧＳ）との混成構造を有する。）、及び重合されなかった多層ゲロソーム又は重合された多層構造ゲロソーム（多層構造ポリメリソーム）は、極性水性相に回収される。レーザー粒子径測定装置及び電子顕微鏡検査法により、表面又は完全脱脂による単層構造リポゲロソーム（ＬＧＳ）の直径の減少を追跡することにより、用いた方法が正しく実施されたことを確認することができる。更に有機溶媒／水分配で得られた有機相中の脂質を定量することによって、脱脂が有効であったことを確認することができる。上記の記載からも明らかなように、本発明は、今ここで詳細に述べてきた機器、生成物、及び適用した方法には限定されない。反対に、発明の背景又は本発明の範囲から逸脱することなく、本発明は、本発明が対象としている分野の専門化であれば思い付くような全ての変形を網羅する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年４月１６日【補正内容】請求の範囲１．ｎ個の脂質二重層又はｎ個の液状である水性層と、ｎ個のゲル化された極性層とで同心円状に且つ交互に覆われているゲル化された極性コアを有することを特徴とし、ここでｎは１に等しいかそれより大きな整数であり、且つ、少なくとも１つの外側の脂質二重層と、少なくとも１つのゲル化された物質を含有している内側の極性水性相とを含んでいる型のゲル化された極性コアを有してなるリポソームの脱脂によって得ることができることを特徴とするミクロスフェア。２．ゲル化可能な物質が、多糖、ポリペプチド、又はポリアクリルアミドのような、重合し得る又は重合し得ないゲル化可能物質から選択されることを特徴とする請求項１に係るミクロスフェア。３．重合し得ないゲル化可能物質が、ゼラチン、アガロース、又はカラゲニンから選択され、重合し得るゲル化可能物質が、ポリアクリルアミドゲルから選択されることを特徴とする請求項２に係るミクロスフェア。４．ゲル化された極性コアを有していること、少なくとも１つの外側の脂質二重層と少なくとも１つのゲル化された物質を含有する内側の極性水層とを含む型の、ゲル化された極性コアを有するリポソームの脱脂によって得られること、及びゲル化可能な物質が、多糖、ポリペプチド、又はポリアクリルアミドのような重合し得る又は重合し得ないゲル化可能物質から選ばれ、当該重合し得ないゲル化可能物質が、ゼラチン−アガロース混合物を除くゼラチン、アガロース、又はカラゲニンから選ばれた物質であることを特徴とするミクロスフェア５．直径が２０〜６００ｎｍである請求項１〜４の何れか１項に係るミクロスフェア。６．（１）ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和しない有機溶媒、又は水に混和しない有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、且つ、（３）ゲル化され表面脱脂されたミクロスフェアを含有する水性相を分離することによって、ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脱脂を行うことによって脱脂を行うことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に係るミクロスフェア。７．（１）ゲル化された極性コアを有する単層構造又は多層構造リポソームの脂質を、水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒、又は水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、（３）水性相から有機溶媒を分離し、（４）ゲル化され完全脱脂されたミクロスフェアを分離することによって、ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの完全脱脂を行うことによって脱脂を行うことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に係るミクロスフェア。８．水に混和する有機相を用いて段階（１）を行う場合に、段階（２）に先立って非極性有機溶媒を添加することを特徴とする請求項７に係るミクロスフェア。９．ｎ個の脂質二重層又はｎ個の液状である水性層と、ｎ個のゲル化された極性層とで同心円状に且つ交互に覆われていてもよい（ここでｎは整数である）ゲル化された極性コアを有する請求項１〜８のいずれか１項に係るミクロスフェアを調製する方法であって、（ａ）外側の脂質二重層を含めてｎ＋１個の脂質二重層と、少なくとも１個の、ゲル化された物質を含有する内側の極性の水性相を有する型の、ゲル化された極性コアを有するリポソームを調製する段階と、（ｂ）当該ゲル化された極性コアを有するリポゲロソームを脱脂する段階とを有してなることを特徴とする調製方法。１０．脱脂段階に先立って、ゲル化された極性コアを有するリポソームを、直径に従って、好ましくは超音波処理によって選別することを特徴とする請求項９に係る方法。１１．脱脂段階に先立って、カプセル化されていない物質を、好ましくは接線限外濾過によって選別することを特徴とする請求項９又は１０に係る方法。１２．脱脂工程（ｂ）が、表面脱脂の場合であって、（１）ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和しない有機溶媒、又は水に混和しない有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、且つ、（３）ゲル化され表面脱脂されたミクロスフェアを分離する工程を包含することを特徴とする請求項９〜１１のいずれか１項に係る方法。１３．脱脂工程（ｂ）が、完全脱脂の場合であって、（１）ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒、又は水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、（３）水性相から有機溶媒を分離し、（４）ゲル化され完全脱脂されたミクロスフェアを分離する工程を包含することを特徴とする請求項９〜１１のいずれか１項に係る適用。１４．活性物質の運搬手段としての請求項１〜８のいずれか１項に係るミクロスフェアの応用。１５．診断剤としての請求項１〜８のいずれか１項に係るミクロスフェアの応用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＸ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ｎ個の脂質二重層又はｎ個の液状である水性層と、ｎ個のゲル状極性層とで同心円状に且つ交互に覆われているゲル化された極性コアを有することを特徴とし、ここでｎは整数であり、且つ、少なくとも１つの外側の脂質二重層と、少なくとも１つのゲル化された物質を含有している内側の極性水性層とを含んでいる型のゲル化された極性コアを有してなるリポソームの脱脂によって得ることができることを特徴とするミクロスフェア。２．直径が２０〜６００ｎｍである請求項１に係るミクロスフェア。３．ゲル化可能な物質が、多糖、ポリペプチド、又はポリアクリルアミドのような、重合し得る又は重合し得ないゲル化可能物質から選択されることを特徴とする請求項１又は２に係るミクロスフェア。４．重合し得ないゲル化可能物質が、ゼラチン、アガロース、又はカラゲニンから選択され、重合し得るゲル化可能物質が、ポリアクリルアミドゲルから選択されることを特徴とする請求項３に係るミクロスフェア。５．（１）ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和しない有機溶媒、又は水に混和しない有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、且つ、（３）ゲル化され表面脱脂されたミクロスフェアを含有する水性相を分離することによって、ゲル化された極性コアを有する単層構造又は多層構造リポソームの表面脱脂を行うことによって脱脂を行うことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に係るミクロスフェア。６．（１）ゲル化された極性コアを有する単層構造又は多層構造リポソームの脂質を、水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒、又は水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、（３）水性相から有機溶媒を分離し、且つ（４）ゲル化され完全脱脂されたミクロスフェアを分離することによって、ゲル化された極性コアを有する単層構造又は多層構造リポソームの完全脱脂を行うことによって脱脂を行うことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に係るミクロスフェア。７．水に混和する有機相を用いて段階（１）を行う場合に、段階（２）に先立って非極性有機溶媒を添加することを特徴とする請求項６に係るミクロスフェア。８．ｎ個の脂質二重層又はｎ個の液状である水性層と、ｎ個のゲル化された極性層とで同心円状に且つ交互に覆われていてもよい（ここでｎは整数である）ゲル化された極性コアを有する請求項１〜７のいずれか１項に係るミクロスフェアを調製する方法であって、（ａ）外側の脂質二重層を含めてｎ＋１個の脂質二重層と、少なくとも１個の、ゲル化された物質を含有する内側の極性の水性相を有する型のゲル化された極性コアを有するリポソームを調製する段階と、（ｂ）当該ゲル化された極性コアを有するリポソームを脱脂する段階とを有してなることを特徴とする調製方法。９．脱脂段階に先立って、ゲル化された極性コアを有するリポソームを、直径に従って、好ましくは超音波処理によって選別することを特徴とする請求項８に係る方法。１０．脱脂段階に先立って、カプセル化されていない物質を、好ましくは接線限外濾過によって選別することを特徴とする請求項８又は９に係る方法。１１．脱脂工程（ｂ）が、表面脱脂の場合であって、（１）ゲル化された極性コアを有する上記の単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和しない有機溶媒、又は水に混和しない有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、且つ、（３）ゲル化され表面脱脂されたミクロスフェアを含有する水性相を分離する工程を包含することを特徴とする請求項８〜１０のいずれか１項に係る方法。１２．脱脂工程（ｂ）が、完全脱脂の場合であって、（１）ゲル化された極性コアを有する単層構造又は多層構造リポソームの表面脂質二重層を、水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒、又は水に混和するか若しくは一部混和する有機溶媒の混合物で抽出し、（２）有機相と水性相の二相に分配し、（３）水性相から有機溶媒を分離し、（４）ゲル化され完全脱脂されたミクロスフェアを分離する工程を包含することを特徴とする請求項８〜１０のいずれか１項に係る方法。１３．活性物質の運搬手段としての請求項１〜７のいずれか１項に係るミクロスフェアの応用。１４．診断剤としての請求項１〜７のいずれか１項に係るミクロスフェアの応用。