JPH10332658A - 液体試料成分の分離方法及び該方法に使用する装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】試料導入部を洗浄液で洗浄しなくともキャリ−
オ−バ−が避けられると共に、多数の液体試料を同一の
分離容器を使用して多数回分離しても、カラムの圧力が
上昇したり、分離が悪くなる現象を避けることができる
液体試料成分の分離方法及び該方法に使用する分離装置
を提供する。 【解決手段】液体試料を、吸着剤を保持した分離容器の
溶出方向とは逆方向から分離容器に導入し、溶離液と共
に溶出先端から分離溶出させることにより、微量の不溶
物と試料導入路に付着した試料とを溶出操作によって除
去できるので、キャリ−オ−バ−とカラムが詰まること
によりカラムの圧力が上昇したり、分離が悪くなる現象
を回避し得るようにした。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、液体試料中の複
数の成分を吸着剤に対する吸着力の差を利用して分離す
る方法及び該方法に使用する分離装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】液体試料中の複数の成分を吸着剤に対す
る吸着力の差を利用して分離する方法としては、一般に
カラムクロマトグラフイ−による方法が知られている。
この方法に於けるカラムへの一般的な試料の導入方法
は、カラム担体の上に直接若しくは試料導入装置（イン
ジエクタ−）を用いて試料を導入するものであり、これ
ら試料の導入は、いずれも試料の溶出方向に対して、上
流で行われるものである。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】上記方法は、カラム上
流から試料を導入するため、同じカラムを血清のような
カラムを通過できない不溶物を含んだ試料の分離・分析
にを繰り返し使用する場合、試料中の微量な不溶物がカ
ラムに詰まるため、カラム内の圧力が上昇したり、分離
が悪くなる現象が生じ、その結果カラム寿命が短くなる
問題があった。そのため、一般的には、試料導入前に、
濾過等の前処理を行って、不溶物を除去して分離を行っ
ていたが、操作が繁雑となり、作業能率が上がらない問
題があった。

【０００４】そればかりか、試料導入装置を用いる場合
は、試料導入装置内に微量な試料が残り、次に分析する
試料を汚染する（キャリ−オ−バ−）原因となるという
問題があった。そのため、試料導入後、試料導入路を多
量の洗浄液で繰り返し洗浄する必要があった。

【０００５】この発明は、試料導入部を洗浄液で洗浄し
なくともキャリ−オ−バ−が避けられると共に、多数の
液体試料を同一の分離器具を使用して多数回分離して
も、分離器具内の圧力が上昇したり、分離が悪くなる現
象を避けることができる液体試料成分の分離方法及び該
方法に使用する分離装置を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記目的に沿う本発明の
分離方法は、液体試料中の複数の成分を吸着剤に対する
吸着力の差を利用して分離する方法において、前記液体
試料を、吸着剤を保持した分離器具の溶出方向とは逆方
向から分離器具に導入して、測定対象物質と測定へ影響
を与える不純物の何れかがほぼ完全に溶出される条件下
で他方を吸着剤に吸着させ、次いで吸着された物質を溶
離液と共に溶出先端から分離溶出させることを特徴とす
る。

【０００７】また、本発明の分離装置は、吸着剤を保持
した分離器具と、該分離器具の一端の溶出側に位置する
液体試料導入部と、前記分離器具の他端に接続された分
離器具内を減圧または減圧及び加圧する手段とを具備し
たことを特徴とする。

【０００８】要するに本発明は、液体試料を溶出方向と
は逆方向から分離器具に導入することによって、微量の
不溶物が分離器具下端（溶出先端部）の吸着剤担持部に
付着するので、不溶物は溶出当初に除去され、分離器具
内に残存しないから、多数回分離操作を行っても分離器
具内の圧力が上昇したり、分離が悪くなる現象を避ける
ことができるようにすると共に、分離器具への試料導入
路に導入した試料が残存していても、溶出操作によって
除去できるから、キャリ−オ−バ−を回避し得るように
したことを要旨とするものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】次に、本発明の実施の形態を説明
する。本発明方法においては、液体試料を分離器具に溶
出方向とは逆方向から導入するため、液体試料中の不溶
物は、溶離液を流すと、逆洗の原理によって、その大部
分は最初に溶離液と共に溶出除去される。また、吸着剤
に吸着された成分は、吸着力の差によって分離される。

【００１０】本発明に使用する吸着剤としては、測定対
象Ａと測定に悪影響を与える不純物Ｂ（複数であっても
良い）に対して吸着力の差の大きいものを使用するのが
良い。例えば、前記測定対象Ａと不純物Ｂとを分離する
場合、ある条件で、測定可能な量以上のＡを吸着し溶出
するが、測定に影響を与えない量以下のＢしか吸着し溶
出させない吸着剤や、Ａについては上記と同じである
が、Ｂについては測定に影響を与えない量より多く吸着
しても、測定に影響を与えない量以下しか溶出させない
吸着剤、Ａについては殆ど吸着しないが、Ｂについては
その殆どを吸着し且つ測定に影響を与えない量以下しか
溶出させない吸着剤を選択すれば良い。測定に悪影響を
与えない不純物Ｂ′については、測定対象Ａと分離でき
てもできなくとも差し支えない。

【００１１】本発明に最も効果的なのは、測定対象と不
純物の一方は、他方が溶出される条件でほぼ完全に吸着
されるような吸着剤を選択することである。これは、例
えば下記の如き性質を有するものが挙げられ、ほぼ完全
に吸着された成分は、下記のように吸着の種類に応じて
溶出させれば良い。この場合、測定対象と不純物のどち
らを吸着させるようにしても良いが、不純物には一般に
種々の成分が含まれるので、測定対象を吸着させるのが
良い。

【００１２】（イオン交換）イオン的に差がある物質間
の分離に用いられる。この場合、吸着された物質の溶出
は、溶離液のイオン性を変える（塩濃度を上げる）か、
ｐＨを変える等の方法で行えば良い。 （疎水吸着）疎水的に差がある物質間の分離である。吸
着された物質の溶出は、溶離液の疎水性を下げる（塩濃
度を下げる、例えばメタノール、エタノール、アセトニ
トリル等の有機溶媒を添加する）ことにより行う。

【００１３】（特異的な親和性）抗原抗体反応、基質と
酵素、レセプタ−とレセプタ−反応物質（例えばホルモ
ン）、レクチンと糖鎖、アビジン（ストレプトアビジ
ン）とビオチン、等のアフイニテイ−クロマトグラフイ−
に使用されている特異的な吸着をする物質を使用する分
離に用いられる。この場合の吸着された物質の溶出は、
特異的吸着の結合を解離させる公知の方法で行えば良
い。

【００１４】本発明に使用する吸着剤は、好ましくは、
上記イオン交換、疎水吸着または特異的な親和性によっ
て吸着し得る吸着剤、例えば、イオン交換樹脂、疎水担
体、ハイドロキシアパタイト、プロテインＡ等が固定化
されたアフイニテイ−担体等が挙げられる。また、吸着剤
の層の厚さも特に厚くしなくとも良く、イオン交換能等
を付与した膜や濾紙等を使用することもできる。

【００１５】液体試料として例えば血清、尿等を使用す
る場合は、分離を向上させるため、溶媒の役割をする緩
衝液等の試液で希釈してから、分離器具に導入すると良
い。尚、このような目的で使用する緩衝液としては、こ
の分野で通常用いられているものを使用すれば良い。こ
の場合、測定対象に対する抗体を添加すると、“測定対
象”が“測定対象＋抗体”の免疫複合体を形成するの
で、疎水性が変化し、疎水吸着によって分離し易くな
る。更に、この抗体にイオン基を付加しておくと、“測
定対象＋抗体＋イオン基”の免疫複合体を形成するの
で、イオン交換によって更に分離し易くなる。

【００１６】更に、イオン基結合抗体とは別の抗体に標
識を結合させ、この標識抗体とイオン基結合抗体とを測
定対象に結合させると、測定対象にはイオン基と標識と
が導入されることとなる。そして、標識として生体成分
にないものを使用すれば、測定対象検出の特異性を向上
させることができる。また、本発明方法によれば、生体
成分中の測定対象を、遊離の標識抗体や測定対象中に含
まれるかもしれない検出を妨げる物質から効果的に分離
することができるので、測定の精度を向上させることが
できる。

【００１７】図１は、本発明の分離方法に使用する分離
装置の一実施例を示す概略図であり、分離器具であるカ
ラムの溶出先端には、試料導入管が連結され、カラムの
他端はパイプを介してカラム内を減圧及び加圧するポン
プに連結されている。

【００１８】本発明に使用する分離器具（分離管）は、
試料導入口（溶出口）と、試料導入のために分離器具内
を減圧（吸引）し得る開口部とを有し、内部に吸着剤を
保持し得るものであれば良く、その形状及び材質は特に
限定されない。即ち、例えばカラムクロマトグラフイー
に於いて通常用いられる、吸着剤を充填した円筒状の所
謂カラムが一般的であるが、例えば、濾紙のようなシー
ト状吸着材又は膜状の吸着剤を、分離管に形成した外方
に向けた膨出部（例えば円盤状膨出部）内で保持した分
離器具の一端に試料導入部を位置させ、他端に減圧手段
を接続するか、大気と接する開口に形成しても良い。ま
た、内部に膜状の吸着剤を保持した遠心濾過チューブ
（日本ミリポアリミテッド社製等）等も勿論使用可能で
ある。

【００１９】分離器具は、通常溶出先端が下端になるよ
うに縦にして使用するが、測定対象と不純物の一方がほ
ぼ完全に吸着される場合は、溶出先端が上端であっても
横であっても差し支えない。分離器具の溶出先端から液
体試料を導入するには、図１に示すように、ポンプによ
り、分離器具（カラム）内を減圧にして、液体試料を試
料導入管から分離器具内に、溶出方向とは逆方向に吸引
する。このまま溶離液を流しても、溶出先端及び試料導
入管（試料導入路）は、溶離液で洗浄されるので、キャ
リ−オ−バ−を回避し得る。

【００２０】しかしながら、液体試料を吸引後、空気、
純水若しくは溶離液等の液体若しくは気体を、好ましく
は試料導入路の容量より多く吸引して、吸引流路内に付
着した液体試料を分離管内に流入させる方が、測定感度
が向上することから好ましい。即ち、試料導入後、試料
導入口から分離器具内の吸着剤までの配管容量以上の気
体若しくは液体を導入することによって、試料の殆ど全
てを分離器具内の吸着剤に導入することができ、測定感
度を向上させることができる。

【００２１】使用する液体若しくは気体としては、分離
及び測定に悪影響を与えないものであるなら良く、特に
限定されない。分離器具のベット量以上の気体を吸入す
る場合は、気体の吸入により分離能が低下しない吸着剤
を選ぶのが良い。液体を導入する場合は、試料の拡散を
少なくするために、吸入速度の最適化等を行うと良い。

【００２２】上記のようにして、試料を吸着剤に吸着さ
せたら、分離器具の上流から溶出先端に向けて、即ち溶
出方向に溶離液を流す。溶離液としては、吸着剤の種類
に応じて、通常カラムクロマトグラフイ−に使用されて
いるものを使用すれば良い。溶離液は、分離器具の上流
から、即ち図１の装置の場合は、ポンプとカラム（分離
器具）との間のパイプに導入しても、試料導入管から導
入しても良い。試料導入管から導入すれば、同時に、吸
引流路に付着した試料を導入できることと、装置が簡略
化される利点が生じる。

【００２３】溶離液をカラム内に導入したら、ポンプで
カラム内を加圧して、溶離液を試料成分と共に、溶出先
端から直接若しくは試料導入管を通して溶出する。本発
明に使用するポンプとしては、分離器具内にエア−を吸
引し得、且つ該エア−を吐出できるものであれば良く、
特に限定されない。

【００２４】ポンプを使用する場合は、選択した条件に
おいて、ポンプの負荷が３０ｋｇｆ／ｃｍ²以下となる
ような吸着剤を選択すると良い。このような吸着剤を選
択することによって、試料導入管からの試料の導入をス
ム−ズに行うことができると共に、分離器具内を加圧す
ることにより行う分離溶出をスム−ズに行うことができ
る。

【００２５】減圧及び加圧する手段としては、ポンプで
なくとも良い。例えば、注射筒のように、外筒に棒状体
を摺動し得るように密嵌させ、液体試料を吸引及び吐出
し得るようにしても差し支えない。この場合、外筒は、
分離器具自体であっても、分離器具とは別のものであっ
ても差し支えない。また、ピペットのように、キャップ
を膨らませて吸引し、キャップを押しつぶして吐出する
ようにしても良い。本発明では、加圧手段は、必ずしも
必要ではなく、吸引した状態で、上記減圧及び加圧手段
を取り外し、大気圧下で吐出させるようにしても良い。

【００２６】液体試料中の測定対象Ａから測定に悪影響
を与える不純物Ｂと不溶物とを分離する場合、例えば、
次のようにして行うことができる。吸着剤として前記Ａ
（若しくはＢ）の全部若しくは大部分を吸着する吸着剤
を使用し、液体試料を溶出先端から吸入後、吸着された
Ａ（若しくはＢ）を溶出させない所定量の溶離液を溶出
先端から吸入し、加圧して溶離液を溶出方向に流して、
不溶物の大部分及びＢ（若しくはＡ）を除去する。つい
で吸着されたＡ（若しくはＢ）を溶出させる所定量の溶
離液を溶出先端から吸入し、加圧して溶離液を溶出方向
に流して、吸着剤に吸着されているＡ（若しくはＢ）を
溶出させて取り出すようにすれば良い。

【００２７】Ａと不溶物とを一緒に溶出させる場合は、
溶出液を複数個のフラクションに分けて、Ａを分離して
も良いし、溶出液を濾過してＡを分離しても良い。上記
のようにして吸着剤に吸着された成分は、全て洗浄除去
されるので、上記分離器具を使用し、別の液体試料につ
いて、同様に上記操作を繰り返し行うことができる。

【００２８】上記実施例では、溶離液を溶出先端から導
入しているが、分離器具の上流から導入しても良い。上
記実施例では、加圧して溶離液を溶出させているが、自
然滴下のような常圧で行っても、溶出先端から吸引して
溶出させても良い。

【００２９】上記実施例では、溶出先端に試料導入管を
接続しているが、溶出先端の形状により、直接試料が吸
引できる場合は、試料導入管は使用しなくとも勿論良
い。また、上記実施例では、減圧により液体試料を吸引
し、その後、加圧して溶離液を溶出させている。分離器
具の溶出先端を上方にして試料を導入し、ついで、溶出
先端を下端にして上端から溶離液を注入し、滴下して常
圧で実施することもできる。また、分離器具の溶出先端
への液体試料の導入は、例えば注射器のような器具を用
いて分離管の溶出先端へ液体試料を注入することによっ
て行っても良い。分離が迅速にできることから、最初に
述べた実施例のようにすることが好ましい。

【００３０】本発明の方法及び装置に適用する試料とし
ては、一般にカラムクロマトグラフイ−に使用される液
体試料であれば良いが、特に微量の不溶物を含む血清等
の生体成分の分離に有用である。

【００３１】

【実施例】次に、実施例及び比較例を挙げて本発明を更
に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。 実施例１ （１）使用した試薬類の調製 抗体液 ペルオキシダ−ゼ標識抗α−フエトプロテイン抗体Fab’
フラグメント（Fab’−ＰＯＤ、和光純薬工業（株）
製）３６．２μｇ／１０ミリリットルと、Fab’−ＰＯ
Ｄと違うエピトープを認識することを確認した抗α−フ
エトプロテイン抗体に硫酸化チロシンペプチド［Ａｌａ
−（Ｔｈｙ（ＳＯ₃））₈］を結合したFab’フラグメン
ト（Fab’−ＹＳ８、和光純薬工業（株）製）３．７μ
ｇ／１０ミリリットルとを含有する５０ｍＭＮ−（２−
アセタミド）−２−アミノエタンスルホン酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．５）を調製し、これを抗体液とした。

【００３２】試料 α−フエトプロテイン（ＡＦＰ、和光純薬工業（株）
製）を、５０ｍＭＮ−（２−アセタミド）−２−アミノ
エタンスルホン酸緩衝液（ｐＨ６．５）で希釈して、１
００ｎｇ／ミリリットルとなるように調製し、これを試
料とした。 基質液 ３２ｍＭ４−アセトアミドフエノ−ルと３８ｍＭ過酸化
水素とを含む１０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ６．５）を
調製し、これを基質液とした。

【００３３】（２）分析方法 上記抗体液１００マイクロリットルと試料１０マイクロ
リットルとを混合し、８℃で５分間反応させた。この混
合液８０マイクロリットルを、ＰＯＲＯＳ−ＤＥＡＥカ
ラム（０．４６×１ｃｍ，パ−セプテイブ社製）に、下
記〜の方法により導入した。ついで、５０ｍＭトリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ｐＨ８．
０，０．３Ｍ塩化ナトリウム含有）１０ミリリットルで
カラムを洗浄後、５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタン緩衝液（ｐＨ８．０，３Ｍ塩化ナトリウム
含有）３ミリリットルで、Fab’−ＰＯＤ、ＡＦＰとFa
b’−ＹＳ８の免疫複合体を溶出させた。得られた溶出
液２ミリリットルに、上記基質液２００マイクロリット
ルを加え、３７℃で１０分間反応させ、その蛍光強度
を、励起波長３２８ｎｍ、蛍光波長４３２ｎｍで測定し
た。得られた結果を図３に示す。尚、溶離液（緩衝液）
は、いずれもカラムのポンプ側から導入した。

【００３４】（２）試料の導入方法 比較例 図２に示すように、ポンプ（シリンジポンプＳＩＬ１０
Ａ、島津製作所製）に、インジエクタ−（Ｍｏｄｅｌ７
１２５型、ＲＨＥＯＤＹＮＥ社製）、ＰＯＲＯＳ−ＤＥ
ＡＥカラム（分離器具）の順で結合させた装置を使用
し、インジエクタ−によって試料８０マイクロリットル
をカラムに導入した。 本発明方法−１） 図１に示すように、比較例と同じポンプにＰＯＲＯＳ−
ＤＥＡＥカラムを直接結合し、カラム溶出出口に容量１
００マイクロリットルの試料導入管を結合した装置を使
用した。試料導入管から試料８０マイクロリットルをポ
ンプで吸引した後、空気１００マイクロリットルを吸引
した。

【００３５】本発明方法−２） 上記と同じ装置を使用し、試料導入管から試料８０マ
イクロリットルをポンプで吸引した後、空気２００マイ
クロリットルを吸引した。 本発明方法−３） 上記と同じ装置を使用し、試料導入管から試料８０マ
イクロリットルをポンプで吸引した後、精製水２００マ
イクロリットルを吸引した。

【００３６】（３）結果 図３から明らかなように、本発明方法−２）及び−３）
により得られた蛍光強度は、比較例と同等であるが、本
発明方法−１）により得られた蛍光強度は、比較例より
も約１０％程度低下した。このことから、試料導入後、
導入路を十分に洗浄することにより、従来の方法と同等
の測定感度が得られることが判る。

【００３７】尚、データは示していないが、種々の濃度
のα−フエトプロテイン溶液について、本発明方法−
１）、−２）及び−３）により蛍光強度を求めて、α−
フエトプロテイン濃度と蛍光強度との関係を表す検量線
を作成したところ、何れの方法によっても良好な直線性
を有する検量線が得られた。このことから、本発明方法
−１）によっても、目的成分の分析を精度良く実施し得
ることが判る。

【００３８】実施例２ 濁りが認められるヒト血漿検体試料１００マイクロリッ
トルを、実施例１と同じＰＯＲＯＳ−ＤＥＡＥカラムに
下記の方法（導入法１）及び２））により導入し、導入
毎にポンプで、５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン緩衝液（ｐＨ８．０，３Ｍ塩化ナトリウム含
有）を、ポンプ側から導入して流速３ミリリットル／分
でカラムに流し、カラムにかかる圧力を測定した。結果
を図４に示す。

【００３９】［導入法１）］（比較例） 図２に示すように、ポンプに、インジエクタ−、ＰＯＲ
ＯＳ−ＤＥＡＥカラム（分離器具）の順で結合した実施
例１で比較に使用した装置を使用し、インジエクタ−に
よって試料１００マイクロリットルを導入し、５０ｍＭ
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ｐＨ
８．０，３Ｍ塩化ナトリウム含有）を１ミリリットル吐
出させた。

【００４０】［導入法２）］（本発明方法） 図１に示すように、ポンプにＰＯＲＯＳ−ＤＥＡＥカラ
ムを直接結合し、カラム溶出出口に容量１００マイクロ
リットルの試料導入管を結合した実施例１と同じ装置を
使用した。試料導入管から試料１００マイクロリットル
をポンプで吸引し、更に精製水２００マイクロリットル
を吸引した後、ポンプで加圧して吸引方向とは逆方向に
５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝
液（ｐＨ８．０、３Ｍ塩化ナトリウム含有）を１ミリリ
ットル吐出させた。

【００４１】図４より明らかなように、比較例の導入法
１）（従来法）では導入回数が増えるに従って圧力が上
昇するが、本発明方法の導入法２）では導入回数が増え
ても圧力の上昇はほとんど認められない。この結果か
ら、本発明方法によれば、不溶物を含んだ試料でも直接
カラム（分離器具）に導入でき、しかもカラムの寿命が
著しく向上することがわかる。

【００４２】実施例３ （１）抗体液、試料及び基質液 実施例１に同じ。 （２）洗浄液及び溶離液 洗浄液：５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン緩衝液、ｐＨ８．０、０．３Ｍ塩化ナトリウム含
有。 溶離液：５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン緩衝液、ｐＨ８．０、３Ｍ塩化ナトリウム含有。

【００４３】（３）分析方法及び結果 抗体液１００マイクロリットルと試料１０マイクロリッ
トルとを混合し、８℃で５分間反応させた。また、容量
５ミリリットルの注射筒に、ザルトバインドメンブラン
アドソ−バ−Ｄ５Ｆ（Sartobind^TM Membrane Adsorber
D5F、略名ＭＡＤ５Ｆ、ザルトリウス社製）を結合し、更
に該ＭＡＤ５Ｆの溶出口に容量１００マイクロリットル
の導入管を結合した装置を準備した。

【００４４】上記注射筒のシリンジを引くことにより、
前記混合液８０マイクロリットルを導入管内に導入し、
次いで、更に注射筒シリンジを引くことにより、洗浄液
５ミリリットルを導入管から前記ＭＡＤ５Ｆ内に吸引し
た後、注射筒シリンジを押して洗浄液を吐出させること
によりＭＡＤ５Ｆを洗浄した。この洗浄操作を３回繰り
返した。

【００４５】ついで、溶離液３ミリリットルを同様に吸
引、吐出し、Fab’−ＰＯＤ、ＡＦＰとFab’−ＹＳ８の
免疫複合体を溶出させた。得られた溶出液２ミリリット
ルに、基質液２００マイクロリットルを加え、３７℃で
１０分間反応させ、その蛍光強度を励起波長３２８ｎ
ｍ、蛍光波長４３２ｎｍで測定したところ、実施例１の
本発明方法−３）と同等の蛍光強度が得られた。以上の
ことから、ポンプの代わりに注射筒を用いても、同様の
結果が得られることが判る。

【００４６】実施例４ 測定装置 １．装置構成 装置構成について図５〜図７の装置外観図及び図８の配
管系統図を用いて説明する。反応ディスク１は、３重の
ライン構成のターンテーブルであり、内周は試料容器
２、中周は抗原抗体反応容器３と溶離液Ａ収納容器４、
そして外周は酵素反応セル５が配置されている。試料容
器２、抗原抗体反応容器３、溶離液Ａ収納容器４は、ク
ーラユニット２７により８℃に保冷されており、酵素反
応セル５はヒータユニット２８により４０℃に温調され
ている。

【００４７】第１のプローブ６を有する分注ユニット
は、試料容器２に収納された試料、第１の試薬（Ｒ１）
８、第２の試薬（Ｒ２）９、第３の試薬（Ｒ３）１０を
吸引して反応容器への分注を行う。この第１のプローブ
６は、定量シリンジポンプ１２と洗浄シリンジポンプ１
３に配管されており、このシリンジポンプによりプロー
ブの吸引吐出や洗浄が行われる。なお、この配管内はタ
ンク２３からの純水で満たされている。洗浄ポット７
は、第１のプローブ６の洗浄に用いられる。また第１の
プローブ６は、追加試料容器設置部の追加試料１１の吸
引も行うことができる。

【００４８】第２のプローブ１４を有する分注ユニット
は、抗原抗体反応容器３中の抗原抗体反応液の吸引とカ
ラム１８への導入、溶離液Ａ２０による洗浄と溶離液Ａ
収納容器４への分注、溶離液Ｂ２１および／または溶離
液Ｃ２２による免疫複合体の溶出および溶出液の酵素反
応セル５への分注を行う。この第２のプローブ１４は、
カラム用シリンジポンプ１７に管を介して接続されてお
り、このシリンジポンプ１７により各吸引吐出が行われ
る。この配管内もタンク２３からの純水で満たされてい
る。多連バルブ１９は、溶離液Ａ／Ｂ／Ｃの変更を行う
流路切替弁である。洗剤１６は、カラムおよび第２のプ
ローブ１４配管内の洗浄に用いられる。また、洗浄ポッ
ト１５は、第２のプローブ１４の洗浄および分析に使用
しなかった溶出液の排出に用いられる。

【００４９】検出器２５は、酵素反応セル４の蛍光強度
を測定する蛍光測光部である。検出器２５は、反応液に
励起光を照射し、反応液から発される蛍光量をホトマル
（光電子増倍管）にて測定するものである。またホトマ
ルはその蛍光量に応じてゲインを調整できるようになっ
ている。

【００５０】排出ノズル２６は、分析終了反応液を不図
示のポンプにより排水する廃液処理部である。その廃液
はドレインタンク２４に収納される。純水タンク２３
は、各プローブおよび配管の洗浄に用いられる純水を収
納している。

【００５１】ドレインタンク２４は、各プローブや反応
液の廃液を収納する。表示器２９、キーボード３０、プ
リンター３１は、分析の依頼や結果表示および動作の開
始などを行う装置制御部である。

【００５２】２．分析シーケエンス 分析シーケンスは、１つの試料を分析する際に、装置の
各ユニット動作の流れを示すものである。すなわち一連
の分析動作において、どのタイミングで試料・試薬が分
注・反応・測光・排出されるかを示すものである。

【００５３】（１）１試薬、２溶離液の場合 前処理として第１の試薬（Ｒ１）のみの抗原抗体反応を
行い、分析として溶離液Ｂのみによる免疫複合体の溶出
を行う動作をおこなった場合の分析シーケンスを図９に
示す。

【００５４】１）準備 分析に使用する試薬、溶離液Ａ／Ｂ、純水、洗剤、カラ
ムをセットする。試料容器２を反応ディスク１内周にセ
ットし保冷する。抗原抗体反応容器３および溶離液Ａ収
納容器４を、反応ディスク１中周にセットし保冷する。
酵素反応セル５を、反応ディスク１外周にセットし４０
℃に温調する。第１のプローブ６、第２のプローブ１４
の配管内を、純水により洗浄する。

【００５５】２）装置制御部で分析依頼操作を行ったあ
と、スタートをかける。 （ａ）反応ディスク１が動作し、溶離液Ａ収納容器４が
第２のプローブ１４のアクセス位置に移動する［AD］。
次に第２のプローブ１４が、溶離液Ａ収納容器４に溶離
液Ａを分注する［A］。 （ｂ）反応ディスク１が動作し、試料容器２が第１のプ
ローブ６のアクセス位置に移動する［SD］。次に第１の
プローブ６が試料を吸引する［S］。

【００５６】（ｃ）反応ディスク１が動作し、抗原抗体
反応容器２が、第１のプローブ６のアクセス位置に移動
する［SD］。次に第１のプローブ６が試料を抗原抗体反
応容器３に吐出する［S］。 （ｄ）反応ディスク１が動作し、抗原抗体反応容器３
が、第１のプローブ６のアクセス位置に移動する［S
D］。

【００５７】（ｅ）第１のプローブ６が第１の試薬（R
1）を吸引し、抗原抗体反応容器３に分注する［R1］。 （ｆ）抗原抗体反応が始まり、約4.5分間反応が進む。 （ｇ）反応ディスク１が動作し、抗原抗体反応容器３
が、第２のプローブ１４のアクセス位置に移動する［I
D］。次に第２のプローブ１４が、抗原抗体溶液を吸引
する［I］。

【００５８】（ｈ）反応ディスク１が動作し、溶離液A
収納容器４が、第２のプローブ１４のアクセス位置に移
動する［AD］。次に第２のプローブ１４が溶離液Ａを吸
引しながら、抗原抗体液をカラム１８に導入する
［I］。 （ｉ）第２のプローブ１４が洗浄ポット１５のアクセス
位置に移動し、溶離液Ａでカラム１８の洗浄を行う［A
液洗浄］。

【００５９】（ｊ）第２のプローブ１４が、洗浄ポット
１５のアクセス位置に移動し、溶離液Ｂでカラムの洗浄
を行う［B液溶出］。 （ｋ）反応ディスク１が動作し、酵素反応セル５が第２
のプローブ１４のアクセス位置に移動する［B分画分注
D］。次に第２のプローブ１４が、酵素反応セル５に免
疫複合体の溶出、分取をおこなう［B分画分注］。

【００６０】（ｌ）第２のプローブ１４が、洗浄ポット
１５のアクセス位置に移動し、溶離液Bでカラムの洗浄
を行う［B液溶出］。 （ｍ）反応ディスク１が動作し、酵素反応セル５が、第
１のプローブ６のアクセス位置に移動する［R3D］。次
に第１のプローブ６が試薬３を吸引し、酵素反応セル５
に吐出する［R3］。

【００６１】（ｎ）この時点で溶出液の酵素反応が始ま
る。 （ｏ）反応ディスク１が動作し、酵素反応セル５が検出
器アクセス位置に移動する［測光D］。次に酵素反応セ
ル５の蛍光強度を測定する［測光］。 （ｐ）蛍光強度の測定は約10分間測定する。

【００６２】（ｑ）蛍光強度の測定中に第２のプローブ
１４が、洗浄ポット１５アクセス位置に移動し、カラム
１８と第２のプローブ１４の洗浄を行う［カラム洗
浄］。 （ｒ）不図示の装置データ処理部により、複数ゲインか
ら得られた各測光データは、その蛍光強度変化が測定可
能範囲内に納まっているゲインのデータを選択し、演算
され、試料中の測定対象物の濃度を算出する。同時に、
結果を表示部およびプリンターに出力する。

【００６３】（ｓ）反応ディスク１が動作し、排出ノズ
ルアクセス位置に移動する［反応液排出D］。 （ｔ）分析反応終了液は不図示のポンプにより排水され
る。 以上で、試料の一連の分析動作が終了する。

【００６４】この分析シーケンスにおいて、第１の試薬
（Ｒ１）を第２の試薬（Ｒ２）の動作に、溶離液Ｂを溶
離液Ｃの動作に変更することもできる。また第１の試薬
（Ｒ１）動作時に第２の試薬（Ｒ２）を、溶離液Ｂ動作
時に溶離液Ｃを使用しても、またその逆に使用すること
もできる。

【００６５】（２）２試薬、３溶離液の分析シーケンス 上記分析シーケンスにおいて、抗体液の第１の試薬（Ｒ
１）、第２の試薬（Ｒ２）および溶離液Ｂ，Ｃの動作を
全て盛り込むこともできる。その分析シーケンス例を図
１１に示す。

【００６６】本例では，第１の試薬（Ｒ１）分注後１
８．９分後に第２の試薬（Ｒ２）を分注し、その後１
８．６分後に反応液のカラム１８への導入を行う。そし
て、溶離液Ａ液洗浄後、溶離液Ｂによる溶出、溶離液Ｃ
による溶出が引き続き行われ、それぞれの溶出液の酵素
反応を測光測定することになる。結果データは、溶離液
Ｂ、Ｃによる免疫複合体量についてそれぞれ演算、算出
することになる。さらに、２つの結果データを用い、そ
の合計免疫複合体量ならびに各割合も算出することがで
きる。

【００６７】3．動作シーケンス 分析シーケンスを繰り返すことにより、複数の試料を連
続的に分析することができる。しかし、分析シーケンス
を繰り返すだけでは、一連の分析シーケエンスが実行さ
れるのに必要な時間毎に１件の分析結果しか得られな
い。そこで処理能力を上げるために一つの分析シーケン
ス中に他の分析シーケンスの動作を更に組み込んで装置
を作動させることが一般的に行われている。一つの分析
シーケエンス中に他の分析シーケンスの動作を組み込ん
だものは動作シーケンスと呼ばれる。

【００６８】本装置の動作シーケンスは、反応ディスク
ユニットの動作を基本に、他のユニットの動作が占有す
る時間を基に作製されている。図１０や図１２に示した
動作シークエンスは、一つの分析シーケンス中に他の分
析シークエンスの動作を最大限に組み込んだ場合あり、
１動作シーケンスを実行するのに要する時間は１５０秒
である。この動作シーケンスを繰り返すことにより、複
数の試料を連続的に分析した場合、１５０秒毎に分析結
果が得られる。即ち、このように動作シーケンスを設定
することにより、１試薬、２溶離液の分析シーケンス処
理の場合で７倍、また、２試薬、３溶離液の分析シーケ
ンス処理の場合で２０倍処理能力が上がったことにな
る。

【００６９】４．動作シーケンスに於ける各ユニットの
動作 各ユニットの動作の詳細について以下に説明する。 （１）反応ディスクの動作。 （ａ）［AD］は、溶離液Ａの分注を行うために、溶離液
Ａ収納容器４を第２のプローブ１４のアクセス位置に移
動させる動作を示す。

【００７０】（ｂ）［ID］は、抗原抗体反応液の吸引を
行うために、抗原抗体反応容器３を第２のプローブ１４
のアクセス位置に移動させる動作を示す。 （ｃ）［測光］は、測光を行うために、酵素反応セル５
を検出器２５アクセス位置に移動させる動作を示す。
尚、この測光の動作は同一周期（本例では３０秒毎）で
繰り返される。

【００７１】（ｄ）［SD］は、試料を吸引するために、
試料容器２を第１のプローブ６のアクセス位置に移動さ
せ、次いで、試料の吐出をおこなうために、抗原抗体反
応容器３を第１のプローブ６のアクセス位置に移動させ
る動作を示す。 （ｅ）［R1D］は、第１の試薬（R1）の分注を行うため
に、抗原抗体反応容器３を第１のプローブ６のアクセス
位置に移動させる動作を示す。

【００７２】（ｆ）［B分画分注D］および［C分画分注
D］は、溶離液Ｂまたは溶離液Ｃの溶出液の分注を行う
ために、酵素反応セル５を第２のプローブ１４のアクセ
ス位置に移動させる動作を示す。 （ｇ）［R3D］は、第３の試薬（R3）の分注を行うため
に、酵素反応セル５を第１のプローブ６のアクセス位置
に移動させる動作を示す。

【００７３】（ｈ）［R2D］は、第２の試薬（R2）の分
注を行うために、抗原抗体反応容器３を第１のプローブ
６のアクセス位置に移動させる動作を示す。 （ｉ）［撹拌D］は、液の撹拌を行うために、抗原抗体
反応容器３を第１のプローブ６のアクセス位置に移動さ
せる動作を示す。尚、液の混合を要求されない分析で
は、この動作は選択されない。 （ｊ）［反応液排水D］は、分析終了反応液の排水を行
うために、抗原抗体反応容器３を排出ノズル２６のアク
セス位置に移動する動作を示す。

【００７４】（２）第１のプローブ６の動作 （ａ）［S］は、試料容器２のアクセス位置に移動し、
試料を吸引し、次いで、抗原抗体反応容器３のアクセス
位置に移動し、分注を行う動作を示す。また、［S洗
浄］で，洗浄ポット７のアクセス位置に移動し、プロー
ブ洗浄を行う動作を示す。

【００７５】（ｂ）［R1］は、第１の試薬（R1）のアク
セス位置に移動し、試薬を吸引し、次いで抗原抗体反応
容器３のアクセス位置に移動し、分注を行う動作を示
す。また、［撹拌］は、反応液を吸引吐出し、液の混合
撹拌を行う動作を示す。尚，液の混合を要求されない分
析ではこの動作は選択されない。更に、［R1洗浄］は、
洗浄ポット７のアクセス位置に移動し、プローブ洗浄を
行う動作を示す。

【００７６】（ｃ）［R2］は、第２の試薬（R2）のアク
セス位置に移動し、試薬を吸引し、次いで抗原抗体反応
容器３のアクセス位置に移動し、分注を行う動作を示
す。また、［撹拌］は、反応液を吸引吐出し、液の混合
撹拌を行う動作を示す。但し、液の混合を要求されない
分析ではこの動作は選択されない。更に、［R2洗浄］
は、洗浄ポット７のアクセス位置に移動し、プローブ洗
浄を行う動作を示す。

【００７７】（ｄ）［R3］は、第３の試薬（R3）のアク
セス位置に移動し、試薬を吸引し、次いで酵素反応セル
５のアクセス位置に移動し、分注を行う動作を示す。ま
た、［R3洗浄］は、洗浄ポット７のアクセス位置に移動
し、プローブ洗浄を行う動作を示す。

【００７８】（３）第２のプローブ１４の動作 （ａ）［A］は、洗浄ポット１５のアクセス位置に移動
し、カラム用シリンジポンプ１７で溶離液Ａを吸引吐出
することにより配管内を溶離液Ａに置換し、次いで溶離
液Ａ収納容器位置４のアクセス位置に移動し、溶離液Ａ
の分注を行う動作を示す。

【００７９】（ｂ）［I］は、抗原抗体反応容器３のア
クセス位置に移動し、抗原抗体反応液を吸引し、次いで
溶離液Ａ収納容器４のアクセス位置に移動し、次に溶離
液Ａを吸引しながら、抗原抗体反応液をカラム１８へ導
入する動作を示す。 （ｃ）［A液洗浄］は、洗浄ポット１５のアクセス位置
に移動し、カラム用シリンジポンプ１７で溶離液Ａの吸
引吐出を繰り返すことにより、溶離液Ａでカラムの洗浄
を行う動作を示す。

【００８０】（ｄ）［B液溶出］は、洗浄ポット１５の
アクセス位置に移動し、カラム用シリンジポンプ１７で
溶離液Ｂの吸引吐出を繰り返すことにより、溶離液Ｂで
カラムに吸着された免疫複合体の溶出を行う動作を示
す。また、［B分画分注］は、酵素反応セル５のアクセ
ス位置に移動し、溶出液の吐出を行う動作を示す。 （ｅ）［C液溶出］は、洗浄ポット１５のアクセス位置
に移動し、カラム用シリンジポンプ１７で溶離液Cの吸
引吐出を繰り返すことにより、溶離液Cでカラム結合し
た免疫複合体の溶出を行う動作を示す。また、［C分画
分注］は、酵素反応セル５のアクセス位置に移動し、溶
出液の吐出を行う動作を示す。

【００８１】（ｆ）［カラム洗浄］は，洗浄ポット１５
のアクセス位置に移動し、カラム用シリンジポンプ１７
で純水の吸引吐出を繰り返すことにより、カラム１８お
よび第２のプローブ１４の洗浄を行った後、洗剤１６の
アクセス位置に移動し、洗剤１６を吸引しカラム１８ま
で導入し、次いで洗浄ポット１５のアクセス位置に移動
し、再度カラムシリンジポンプ１７が純水を吸引吐出を
繰り返すことにより、洗剤の洗浄を行う動作を示す。

【００８２】（４）排出ノズル２６の動作 （ａ）［反応液排水］は、排出ノズル２６のアクセス位
置に移動してきた抗原抗体反応容器３に排出ノズルを挿
入し、分析終了反応液の排水を行う動作を示す。

【００８３】（５）検出器２５の動作 （ａ）［測光］は，検出器２５のアクセス位置に移動し
てきた酵素反応セル５の蛍光測光を行う動作を示す。
尚、この［測光］は，酵素反応中の酵素反応セル５の連
続的測光を１回とし，同一間隔で１サイクル中に５回
（本例では３０秒毎）繰り返される。

【００８４】５．注記 本説明中の各ユニットの動作時間、反応時間、試料容器
や各種反応容器の数量、各溶液の吸引吐出量、設定温
度、分析シーケンス及び動作シーケンス等は本内容に限
定されるものでなく、種々変更することができるのは勿
論である。

【００８５】実施例５.AFPの測定 (1) 使用装置 実施例４の装置を使用した。

【００８６】(2) 使用した試薬類の調製 抗体液 実施例１と同じ抗体液を使用し、実施例４の装置の第１
の試薬（R1）の位置にセットした。 試料 AFP濃度420ng/mlのヒト血清を生理食塩水で1/10、2/1
0、3/10、4/10、5/10、6/10、7/10、8/10、9/10倍に稀
釈し、これを試料とした。またAFP濃度100ng/mlの標準
品（和光純薬工業社製）を標準液として用いた。

【００８７】 基質液 実施例1と同じ基質液を使用し、実施例４の装置の第３
の試薬（R3）の位置にセットした。 溶離液 溶離液A：50mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン緩衝液（pH8.0、0.3M塩化ナトリウム含有） 溶離液B：50mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン緩衝液（pH8.0、3.0M塩化ナトリウム含有） これらの２つを溶離液とし、実施例４の装置の溶離液
Ａ、溶離液Ｂの位置に夫々セットした。

【００８８】(3) 分析方法 実施例４の分析シーケンス１（１試薬、２溶離液）を用
いて、以下の分析条件で分析し、各試料について１分間
あたりの蛍光強度の変化を測定した。得られた測定値と
ＡＦＰ標準液の測定値との比較から各試料中のＡＦＰ濃
度を算出した。尚、各試料について５回づつ測定を行っ
た。

【００８９】試薬１：100μl 試料：3μl 抗原抗体反応液カラム導入量：20μl 基質量：100μl 分画量：1ml カラム洗浄液量：18 ml カラム：POROSE-DEAEカラム（5.5 x 6.9 mm）

【００９０】結果 稀釈倍率と測定値との関係を図１３に示す。図１３から
明らかな如く原点を通る良好な直線関係となることが判
る。また、各試料について測定値の変動係数を求めたと
ころ0.8%〜6.0%と良好な値であった。

【００９１】実施例６.糖鎖構造の異なるAFPの分別測定 (1) 使用装置 実施例４の装置を使用した。

【００９２】(2) 使用した試薬類の調製 第１の試薬 レンズマメレクチン（LCA、（株）ホ−ネンコーポレー
ション社製）10mg／10ミリリットルと、５個の硫酸残基
を有する硫酸化チロシンペプチド［Ala-(Tyr(SO₃)₅)］
が結合した抗α−フェトプロテイン抗体Fab'フラグメン
ト（Fab'-YS5、和光純薬工業（株）製）を1.75 nmol／1
0ミリリットルとを含有する50mM N-（2-アセトアミド)
−２−アミノエタンスルホン酸（ACES）緩衝液（pH6.
5）を調製し、これを第１の試薬とし、実施例４の装置
の第１の試薬（R1）の位置にセットした。

【００９３】 第２の試薬 上記Fab'-YS5と認識部位が違うことを確認したペルオキ
シダーゼ標識抗α−フェトプロテイン抗体Fab'フラグメ
ント（Fab'-POD、和光純薬工業（株）製）402pmol／1ミ
リリッターと、Fab'-YS5、Fab'-PODと認識部位が違うこ
とを確認した抗α−フェトプロテイン抗体のFab'フラグ
メントに８個の硫酸残基を有する硫酸化チロシンペプチ
ド［Ala-(Tyr(SO₃)₈)］が結合したもの（Fab'-YS8、和
光純薬工業（株）製）72 pmol／1ミリリッターとを含有
する50mM ACES緩衝液（pH6.5）を調製し、これを第２の
試薬とし、実施例４装置の第２の試薬（R2）の位置にセ
ットした。

【００９４】尚、Fab'-YS8を作製するために用いられた
抗体は、ＬＣＡが結合していないＡＦＰにのみ結合する
性質を有している。これに対して、Fab'-YS5 及びFab'-
PODを作製するために用いられた抗体は、ＬＣＡの結合
の有無に拘わらず全てのＡＦＰに結合する性質を有して
いる。

【００９５】 試料 ＡＦＰ濃度690ng/mlで、ＡＦＰ−L3分画比（%）が46%の
ヒト血清を生理食塩水で1/10、2/10、3/10、4/10、5/1
0、6/10、7/10、8/10、9/10倍に稀釈したものを試料と
した。また、ＡＦＰ濃度200ng/mlで、ＡＦＰ−L3分画比
（%）が0%の標準品、及びＡＦＰ濃度200ng/mlで、ＡＦ
Ｐ−L3分画比（%）が100%の標準品（何れも和光純薬工
業（株）社製）を標準液として用い検量線を作製した。 基質液 実施例1と同じ基質液を使用し、実施例４の装置の第３
の試薬（R3）の位置にセットした。

【００９６】 溶離液 溶離液Ａ：50mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン緩衝液（pH8.0、0.3M塩化ナトリウム含有） 溶離液Ｂ：50mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン緩衝液（pH8.0、0.78M塩化ナトリウム含有） 溶離液Ｃ：50mMトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタ
ン緩衝液（pH8.0、3.0M塩化ナトリウム含有） これらの３つを溶離液とし、夫々を実施例4の装置の溶
離液Ａ、溶離液Ｂ及び溶離液Ｃの位置にセットした。

【００９７】(3) 分析方法 実施例４の分析シーケンス２（２試薬、３溶離液）を用
いて、以下の分析条件で分析した。尚、溶離液Ｂで免疫
複合体１（Fab'-POD−AFP−Fab'-YS5）がカラムから溶
出され、溶離液Ｃで免疫複合体２（Fab'-POD−AFP−Fa
b'-YS8−Fab'YS5）がカラムから溶出される。得られた
免疫複合体１分画と免疫複合体２分画の夫々について１
分間あたりの蛍光強度の変化を測定し、得られた夫々の
測定値の合計と、ＡＦＰ標準液の測定値から各試料中の
ＡＦＰ濃度を算出した。

【００９８】また、免疫複合体１分画についての測定値
と免疫複合体２分画についての測定値とを下記式に代入
して各試料の分画比（％）を求め、これを、予めＬ3分
画比０％の標準液とＬ3分画比１００％のＡＦＰ標準液
とを用いて同様にして得られた分画比を用いて作製した
検量線に当てはめ、各試料中のＡＦＰ−L3分画比（%）
を求めた。

【００９９】分画比（％）＝ 免疫複合体１分画の測定
値／（免疫複合体１分画の測定値＋ 免疫複合体２分画
の測定値）

【０１００】第１の試薬：100μl 第２の試薬：10μl 試料：10μl 抗原抗体反応液カラム導入量：80μl 基質量：100μl 免疫複合体1分画量：1 ml 免疫複合体２分画量：1 ml カラム洗浄液量：18 ml カラム：POROSE-DEAEカラム（5.5 x 6.9 mm）

【０１０１】結果 稀釈倍率と測定値との関係を図1４に示す。図1４から明
らかな如く、AFP濃度は原点を通る良好な直線関係とな
ることが判る。また、ＡＦＰ−L3分画比（%）は試料を
稀釈しても変化しないことが判る。これは、特定のレク
チンと反応する（特定の糖鎖構造を有する）ＡＦＰの割
合は試料を稀釈しても変化しないためである。

【０１０２】

【発明の効果】本発明は、多数回分離しても、分離器具
内の圧力が上昇したり、分離が悪くなる現象を避けるこ
とができるので、分離器具内の寿命が著しく向上すると
共にキャリ−オ−バ−が生じないという従来技術では解
決できなかった課題を解決したものであり、それ故極め
て画期的な発明である。また、ポンプを使用して加圧溶
出する場合、本発明によれば、溶出先端の解放端から試
料を導入するので、特殊な試料導入装置を必要としない
利点が得られる。

【０１０３】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の分離装置を示す概略図である。

【図２】従来の分離装置を示す概略図である。

【図３】実施例１の蛍光強度の測定結果を示す棒グラフ
である。

【図４】実施例２のカラム圧力の変動の測定結果を示す
折れ線グラフである。

【図５】本発明の分離装置の実施例を示す一部切欠平面
図である。

【図６】本発明の分離装置の実施例を示す正面図であ
る。

【図７】本発明の分離装置の実施例を示す側面図であ
る。

【図８】本発明の分離装置の実施例を示す配管系統図で
ある。

【図９】１試薬、２溶離液の場合の本発明の分離装置の
分析シーケンスを示すものである。

【図１０】１試薬、２溶離液の場合の本発明の分離装置
の動作シーケンスを示すものである。

【図１１】２試薬、３溶離液の場合の本発明の分離装置
の分析シーケンスを示すものである。

【図１２】２試薬、３溶離液の場合の本発明の分離装置
の動作シーケンスを示すものである。

【図１３】実施例５による希釈倍率とＡＦＰ濃度測定値
との関係を示す検量線図である。

【図１４】実施例６による希釈倍率とＡＦＰ濃度測定値
との関係を示す検量線図並びに希釈倍率とＡＦＰ−Ｌ３
分画比（％）との関係を示す検量線図である。

【符号の説明】

１ 反応ディスク ２ 試料容器 ３ 抗原抗体反応容器 ４ 溶離液Ａ収納容器 ５ 酵素反応セル ６ 第１のプローブ ７ 洗浄ポット ８ 第１の試薬Ｒ１（抗体液） ９ 第２の試薬Ｒ２（抗体液） １０ 第３の試薬Ｒ３（蛍光基質液） １１ 追加試料 １２ 定量シリンジポンプ １３ 洗浄シリンジポンプ １４ 第２のプローブ １５ 洗浄ポット １６ 洗剤 １７ カラムシリンジポンプ １８ カラム １９ 多連バルブ ２０ 溶離液Ａ ２１ 溶離液Ｂ ２２ 溶離液Ｃ ２３ 純水タンク ２４ ドレインタンク ２５ 検出器 ２６ 排出ノズル ２７ クーラーユニット ２８ ヒータユニット ２９ 表示器 ３０ キーボード ３１ プリンター

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 林 正佳 京都府京都市中京区西ノ京桑原町１番地 株式会社島津製作所三条工場内 (72)発明者 荒島 秀嘉 京都府京都市中京区西ノ京桑原町１番地 株式会社島津製作所三条工場内 (72)発明者 奥山 哲史 京都府京都市中京区西ノ京桑原町１番地 株式会社島津製作所三条工場内 (72)発明者 花房 信博 京都府京都市中京区西ノ京桑原町１番地 株式会社島津製作所三条工場内 (72)発明者 谷水 弘治 京都府京都市中京区西ノ京桑原町１番地 株式会社島津製作所三条工場内

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】液体試料中の複数の成分を吸着剤に対する
   吸着力の差を利用して分離する方法において、前記液体
   試料を、吸着剤を保持した分離器具の溶出方向とは逆方
   向から分離器具に導入し、溶離液と共に溶出先端から分
   離溶出させることを特徴とする液体試料成分の分離方
   法。
2. 【請求項２】前記液体試料を、前記分離器具に吸引して
   導入する請求項１に記載の分離方法。
3. 【請求項３】前記溶離液を、前記分離器具の溶出方向と
   は逆方向から分離器具に吸引して導入する請求項１また
   は２に記載の分離方法。
4. 【請求項４】前記液体試料が、不溶物を含んだ試料であ
   る請求項１〜３のいずれか１項に記載の分離方法。
5. 【請求項５】前記液体試料に溶解している測定対象と測
   定に悪影響を与える不純物の一方の大部分は、他方が溶
   出する条件で前記吸着剤に吸着される請求項１〜４のい
   ずれか１項に記載の分離方法。
6. 【請求項６】前記液体試料を吸引後、気体若しくは液体
   を吸引して、吸引流路に付着した液体試料を前記分離器
   具内に流入させる請求項２に記載の分離方法。
7. 【請求項７】前記分離器具内を溶出方向に加圧して、前
   記吸着させた液体試料の分離溶出を行う請求項１〜６の
   いずれか１項に記載の分離方法。
8. 【請求項８】前記液体試料の吸着剤への吸着と溶出と
   を、同一の前記分離器具を使用し、別の液体試料につい
   て繰り返し行う請求項１〜７のいずれか１項に記載の分
   離方法。
9. 【請求項９】前記吸着剤を保持した分離器具が、吸着剤
   を充填したカラムである請求項１〜８のいずれかに記載
   の分離方法。
10. 【請求項１０】前記吸着剤を保持した分離器具が、シー
    ト状若しくは膜状の吸着剤を、分離管内若しくは分離管
    に形成した外方に向けた膨出部内で保持した分離器具で
    ある請求項１〜８のいずれかに記載の分離方法。
11. 【請求項１１】吸着剤を保持した分離器具と、該分離器
    具の一端の溶出側に位置する液体試料導入部と、前記分
    離器具の他端に接続された分離器具内を減圧または減圧
    及び加圧する手段とを具備したことを特徴とする液体試
    料中の成分を吸着剤に対する吸着力の差を利用して分離
    する装置。
12. 【請求項１２】前記分離器具内を減圧または減圧及び加
    圧する手段が、分離器具内にエア−を吸引し得、且つ該
    エア−を吐出し得るポンプである請求項１１に記載の装
    置。
13. 【請求項１３】前記ポンプにかかる負荷が、３０ｋｇｆ
    ／ｃｍ²以下となるように前記吸着剤を選択する請求項
    １２に記載の装置。
14. 【請求項１４】前記吸着剤を保持した分離器具が、吸着
    剤を充填したカラムである請求項１１〜１３のいずれか
    に記載の分離方法。
15. 【請求項１５】前記吸着剤を保持した分離器具が、シー
    ト状若しくは膜状の吸着剤を、分離管内若しくは分離管
    に形成した外方に向けた膨出部内で保持した分離器具で
    ある請求項１１〜１４のいずれかに記載の装置。