JPH10327867A - フジツボ第４接着蛋白質遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 フジツボが分泌するセメント中に含まれ
る第４接着蛋白質をコードする遺伝子。 【効果】 接着剤の原料として有用な蛋白質を提供す
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は水中や湿潤な環境で
使用できる接着剤の原料となる蛋白質を組み換えＤＮＡ
技術を用いて製造するために用いるＤＮＡに関する。接
着蛋白質をコードするＤＮＡを組み込んだ組み換え体Ｄ
ＮＡを含む微生物や培養細胞を培養液中で培養し、該培
養物中から得られる蛋白質は、接着剤の原料や細胞培養
の基質として広い用途で利用されることが期待される。

【０００２】

【従来の技術】乾燥条件下で強い接着力を示す接着剤は
様々な種類のものが開発されている。そのうちの多くの
ものは一旦乾燥条件下で接着してしまえば湿潤環境にお
かれてもその強度を維持できる。しかし、湿潤な条件下
や水中で接着を開始した場合、有効な強度に達すること
ができる接着剤は存在しなかった。

【０００３】フジツボは、セメントと呼ばれる蛋白質を
主成分とする物質を基盤に分泌して、海水中で強く接着
することができる。この蛋白質のアミノ酸組成は調べら
れており、一般的な不溶性の蛋白質とは異なることが示
唆されていた（G.Walker,J.mar.biol.Ass.U.K.(1972)5
2,429-7435 ）。セメントのギ酸不溶性画分中に含まれ
る第１接着蛋白質、並びにギ酸可溶性画分中に含まれる
約60kDaの第２接着蛋白質、及び約20KDaの第３接着蛋白
質については、すでにその遺伝子がクローニングされ、
その構造が決定されているが、その他の蛋白質成分につ
いては未だわかっていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、遺伝子工学
的手法を用いてセメント中に含まれる第４接着蛋白質を
生産すべく、その生産のもととなる遺伝子を提供するこ
とを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、セメント中
に含まれる第４接着蛋白質の全配列を得るために、セメ
ント由来の約50kDaのギ酸不溶性蛋白質をグアニディン
塩酸水溶液及びジチオスレイトールを用いて単離、その
部分アミノ酸配列をまず決定し、それをもとに第４接着
蛋白質をコードするｃＤＮＡを単離することに成功し、
本発明を完成した。

【０００６】即ち、本発明は、以下の(a) 又は(b) の蛋
白質をコードする遺伝子である。 (a) 配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質 (b) 配列番号２に記載のアミノ酸配列において１若しく
は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
ノ酸配列からなり、かつ接着性を有する蛋白質

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の遺伝子は、(a) 配列番号２に記載のアミノ酸配
列からなる蛋白質、又は(b) 配列番号２に記載のアミノ
酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換
若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ接着性
を有する蛋白質をコードする。ここで、欠失、置換若し
くは付加は、本願の出願時において常用される技術、例
えば、部位特異的変異誘発法（Nucleic Acids Res. 10,
6487-6500,1982 ）により生じさせることができる。

【０００８】本発明の遺伝子は、例えば、以下の手順で
得ることができる。まず、フジツボの底殻より分泌され
るセメントを集め、６Mグアニディン塩酸／燐酸緩衝液
（ＰＨ６）により可溶化される画分を遠心により除去す
る。この不溶性画分を７Ｍグアニディン塩酸／Tris緩衝
液(PH8.5)中、0.2Mジチオスレイトールにより60℃で還
元処理を施し、可溶化される画分を遠心後回収する。こ
れを５％酢酸に対して透析後、エバポレーターで乾固
し、電気泳動にて分離する。分離された50kDa近辺の第
４接着蛋白質は、そのまま0.1 ％ＳＤＳ／10％メタノー
ルを含むTris-ホウ酸緩衝液中でＰＶＤＦ膜に電気的に
転写し、切り出してプロテインシークエンサーによりア
ミノ末端からのアミノ酸配列を決定する。

【０００９】また、内部アミノ酸配列を得るために、電
気泳動によって分離された第４接着蛋白質を、銅染色後
ゲルから切り出し、脱色後１％CNBr／70%ギ酸中にて断
片化する。エバポレーターによって乾固後、再度電気泳
動により分離、ＰＶＤＦ膜に転写してアミノ末端配列同
様プロテインシークエンサーによってその部分アミノ酸
配列を決定する。

【００１０】一方、フジツボ全組織をチオシアン酸グア
ニディン等により可溶化し、フェノール／クロロホルム
による抽出を行い、イソプロパノールにより沈殿させる
ことにより全ＲＮＡを得ることができる。全ＲＮＡを得
る方法はこの方法に限定されるものではなく、LiCl沈殿
法や塩化セシウム溶液に重層して遠心することによって
も得られる。全ＲＮＡから、オリゴdTセルロースカラム
を用いてポリアデニル酸鎖を有するＲＮＡ( ポリA-ＲＮ
Ａ) を調製する。このポリA-ＲＮＡを鋳型として逆転写
酵素を用いて２本鎖ＤＮＡを調製する。この２本鎖ＤＮ
Ａの合成はS1ヌクレアーゼ法やオカヤマーバーグ法によ
り行ないえるが、市販のｃＤＮＡ合成キットを用いて合
成することも可能である。次いで、得られたｃＤＮＡを
適当なベクターに挿入し、このベクターを適当な宿主に
導入して増幅させると共に目的のＤＮＡを持つクローン
を選択する。ベクターはλファージ由来の各種ベクター
たとえばλgt10やλZapII など、あるいはpBR322等のプ
ラスミドベクターを用いることができる。目的クローン
の選択には、第４接着蛋白質由来の部分アミノ酸配列の
一部に相当するオリゴヌクレオチドを合成してプローブ
として用い、これに強く結合するクローンを選択すれば
よい。配列の決定はサンガー法やマキサム−ギルバート
法等の一般的な方法によって決定できる。以上の手順に
より翻訳開始コドンから終始コドン、さらにポリアデニ
ル酸鎖付加シグナルを含む第４接着蛋白質ｃＤＮＡの全
長を単離することができる。なお、本発明の遺伝子を導
入した大腸菌は、工業技術院生命工学工業術研究所に寄
託番号FERM P-16246として寄託されている（寄託日：平
成９年５月26日）。

【００１１】単離した遺伝子は適当な発現ベクターに挿
入し、微生物や培養細胞に導入して発現させることによ
り、その遺伝子がコードするペプチドを大量調製するこ
とが可能である。

【００１２】

【実施例】

〔実施例１〕アカフジツボの第４接着蛋白質の部分アミ
ノ酸配列の決定 岩手県宮古市宮古湾で採取したアカフジツボの底殻より
分泌されるセメントを集め、グアニディン塩酸水溶液(p
H6)に懸濁し、可溶性画分を除去した後、再度グアニデ
ィン塩酸水溶液(pH8.5)に懸濁し、0.2Mになるようにジ
チオスレイトールを加え、60℃、窒素下で還元処理し
た。モノヨード酢酸を加えてカルボキシメチル化した
後、200000×g で１時間遠心し、得られた上清を５％酢
酸に対して透析した。エバポレートにより溶媒を除去し
た後、ＳＤＳ−電気泳動により分離、0.1 ％ＳＤＳ存在
下でＰＶＤＦ膜に電気的に転写し、ＣＢＢにより染色し
て第４接着蛋白質を得た。また、断片ペプチドを得るた
め、ＳＤＳ−電気泳動による分離後、銅染色により第４
接着蛋白質を特定し、切り出した後、１％ CNBr / 70％
ギ酸により断片化を行ない、エバポレート後、電気泳動
により分離、前述同様ＰＶＤＦ膜に転写して第４接着蛋
白質の断片ペプチドを得た。それぞれプロテインシーク
エンサーにより、アミノ酸配列を決定した。

【００１３】〔実施例２〕アカフジツボｃＤＮＡライブ
ラリーの作製 岩手県宮古市宮古湾で採取した底殻直径４−５cmのアカ
フジツボ10個体をチオシアン酸グアニディン、クエン酸
ナトリウム、N-ラウリルザルコシン酸ナトリウム、２−
メルカプトエタノール等の溶液中で組織を機械的に破砕
し、フェノール及びクロロホルムによる抽出を行なっ
て、蛋白質などを除去した後、イソプロパノールを加え
て沈殿させることにより全ＲＮＡを抽出し、オリゴdTセ
ルロースカラムに導通してポリアデニル酸鎖を有するＲ
ＮＡ( ポリA-ＲＮＡ) を調製した。この操作により約２
μgのポリA-ＲＮＡが得られた。次にこのポリA-ＲＮＡ
を鋳型として逆転写酵素を用いて２本鎖ｃＤＮＡを調製
した。この操作はアマシャム社のｃＤＮＡ合成キットを
用いて添付のプロトコールに従って行なった。次いで得
られた２本鎖ＤＮＡに EcoRI−NotI−BamHI アダプター
を付加し、ファージベクターλZapII に挿入した。この
操作は、アマシャム社のｃＤＮＡ合成システムを用いて
添付のプロトコールに従って行なった。挿入の完了した
ファージベクターは同キットに添付のインビトロパッケ
ージング溶液を用いて組み換えＤＮＡをファージ内に封
入させた。封入の完了した組み換えファージは、大腸菌
XL-I blueに感染させ、増幅した。

【００１４】〔実施例３〕第４接着蛋白質ｃＤＮＡを含
む組み換えファージの選択 実施例２で得られた組み換えファージを増幅させ、得ら
れた５万個のプラークをナイロンメンブレン ハイボン
ドN(Amersham社)上に固定した。次いで、実施例１で決
定した断片ペプチドの一部の相補鎖に相当するオリゴヌ
クレオチドプローブAA(T,C)AT(T,C,A)CA(A,G)CA(A,G)GC
(T,C,A,G)GT(T,C,A,G)TTをミリジェンサイクロンＤＮＡ
合成機により合成し、α³²P-ATPによる末端ラベルによ
り標識して、プラークハイブリダイゼーションを行なっ
た。その結果、１万クローンより、プローブと結合する
20個以上のプラークが得られた。これらのうち10個のプ
ラークを任意に選び、挿入されているｃＤＮＡの長さを
アガロース電気泳動により調べて、最も長い挿入断片を
持つものについてファージベクターからEXASSIST syste
m(Stratagene社)を用いてプラスミドベクターを切り出
した。

【００１５】〔実施例４〕第４接着蛋白質遺伝子の配列
決定 実施例３で得られた挿入断片の配列をアプライドバイオ
システムズ社製３７３A-ＤＮＡシーケンサー及びシーケ
ンシングキットを用いて配列を決定した。その結果、こ
の挿入断片が第４接着蛋白質の成熟体の全長を含む配列
であることが判明した。得られた接着蛋白質遺伝子は配
列番号１に示した通り、開始コドンから翻訳終了コドン
まで５６４アミノ酸配列をコードする全長１９１３ bp
の配列である。５６４のアミノ酸残基のうち、最上流か
ら１８残基はシグナルペプチドにあたり、成熟体のＮ末
端は１９番目のThr である。また、下流側の非翻訳領域
にはポリアデニル酸鎖が存在した。

【００１６】

【発明の効果】本発明はフジツボ第４接着蛋白質遺伝子
を提供する。本発明の遺伝子から作られる蛋白質は、接
着剤の原料として極めて有用である。

【００１７】

【配列表】

配列番号 １ 配列の長さ ： １９１３ 配列の型 ： 核酸 鎖の数 ： ２本鎖 トポロジー ： 直鎖状 配列の種類 ： mRNA to cDNA 起源 生物名 ：アカフジツボ（Megabalanus rosa) 配列 ATG TTA CTT CGC CCG GTG CTG CTG CTG GCC GCG CTG GCG GCC CTG GCC 48 Met Leu Leu Arg Pro Val Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Ala Leu Ala 1 5 10 15 GCC GCC ACC GGC TCC AGG CCG TAC TTC CCC GTC TCC AGC CTG AAG CCA 96 Ala Ala Thr Gly Ser Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ser Ser Leu Lys Pro 20 25 30 GTC CTC TCT GGG ATC GGC CTG CCG GCC TTC TAT AAG CCC GAC TAC GCC 144 Val Leu Ser Gly Ile Gly Leu Pro Ala Phe Tyr Lys Pro Asp Tyr Ala 35 40 45 CTC AGC GGC CTG GTC GGT TAC CTG AAC ACC AGG CCC AAG ATC GTG ACG 192 Leu Ser Gly Leu Val Gly Tyr Leu Asn Thr Arg Pro Lys Ile Val Thr 50 55 60 CAG GCG CAG TTC ACC GCC CGT ATT CAG AAG TAT GCC CCG GTG ATC AAG 240 Gln Ala Gln Phe Thr Ala Arg Ile Gln Lys Tyr Ala Pro Val Ile Lys 65 70 75 80 CGC ATT GTC CTG CCA ATG AGG AGG AAG TAC TCG GGT ATC CTG GGA GAT 288 Arg Ile Val Leu Pro Met Arg Arg Lys Tyr Ser Gly Ile Leu Gly Asp 85 90 95 CTG ATA CAG GTG GCC GTG ATT CGC TAC TAC GGC TGT GAG CCC GTC ATC 336 Leu Ile Gln Val Ala Val Ile Arg Tyr Tyr Gly Cys Glu Pro Val Ile 100 105 110 GGC TCC AGT ATC CAT TTG GAC CGC ATC TTC GGC GAG TAC ATC AAA CGC 384 Gly Ser Ser Ile His Leu Asp Arg Ile Phe Gly Glu Tyr Ile Lys Arg 115 120 125 CAG AGC ATG CCG TCC CCG TAC AAA TAC AAC GCC AAG TAC GTC ACC GGC 432 Gln Ser Met Pro Ser Pro Tyr Lys Tyr Asn Ala Lys Tyr Val Thr Gly 130 135 140 TTC ATC AGG GGC TTC ATG GGC TAC ATG CAC AAG AAC TAC AAG CCG TCG 480 Phe Ile Arg Gly Phe Met Gly Tyr Met His Lys Asn Tyr Lys Pro Ser 145 150 155 160 CAG CTG GTG GTT CCC GTC GTG AAG CCG ACC TAC CCC GGC TAC GGG CTG 528 Gln Leu Val Val Pro Val Val Lys Pro Thr Tyr Pro Gly Tyr Gly Leu 165 170 175 CTG ACC GTG CTG CAG AGT GTC GGC CTG CCG GCG CTG ACC AAC CCT AGG 576 Leu Thr Val Leu Gln Ser Val Gly Leu Pro Ala Leu Thr Asn Pro Arg 180 185 190 ATG TCG CTC GGC GGC GTC GTG GCC TAC CTG CAG CTG GCC AAC ATC CAG 624 Met Ser Leu Gly Gly Val Val Ala Tyr Leu Gln Leu Ala Asn Ile Gln 195 200 205 CAG GCA GTG TTC ATC AGC CGC ATC CGG AGC CAG CGC AAG GCC ATC AGG 672 Gln Ala Val Phe Ile Ser Arg Ile Arg Ser Gln Arg Lys Ala Ile Arg 210 215 220 AGG CTG GTG TCC AAG TAC CGG TCG CGC TAT TCG GGA GTT CAG CTG GAC 720 Arg Leu Val Ser Lys Tyr Arg Ser Arg Tyr Ser Gly Val Gln Leu Asp 225 230 235 240 CTT CTC TGT TTG GCC GCC CTG CGC TAC TAC GGA GTG CCC AGG ACC GCC 768 Leu Leu Cys Leu Ala Ala Leu Arg Tyr Tyr Gly Val Pro Arg Thr Ala 245 250 255 AGA TAT GTC GTC GAC TTC GAC TAT GCC CTC GAG CAC AGC CTG AAG TCT 816 Arg Tyr Val Val Asp Phe Asp Tyr Ala Leu Glu His Ser Leu Lys Ser 260 265 270 ACG GCT ATT GTC CAT TAC AAC CCC TCG TAC GTC AGA ACC TTC CTC TCC 864 Thr Ala Ile Val His Tyr Asn Pro Ser Tyr Val Arg Thr Phe Leu Ser 275 280 285 CGC TTC AGC ACC AAG CTC GTC ACC CTG CCG TAC CCC GGC TAC GAC ATG 912 Arg Phe Ser Thr Lys Leu Val Thr Leu Pro Tyr Pro Gly Tyr Asp Met 290 295 300 ATC ACA ATC TTC AGG GGC TTC GGT CTT CCT AAG CTT TAC CAG CCC CGA 960 Ile Thr Ile Phe Arg Gly Phe Gly Leu Pro Lys Leu Tyr Gln Pro Arg 305 310 315 320 TAC ACC CTT GGA GGT CTC GTG TCC TAC CTG AAG GTG GCC AAG ATC AGT 1008 Tyr Thr Leu Gly Gly Leu Val Ser Tyr Leu Lys Val Ala Lys Ile Ser 325 330 335 CAG CCC ACC TTT ATT GGA CAG ATC AAG AAG TAC GCC AAG AAG ATT AAG 1056 Gln Pro Thr Phe Ile Gly Gln Ile Lys Lys Tyr Ala Lys Lys Ile Lys 340 345 350 AAG TTC ATT CGG AAA TAC AAG AAG AAG TAC TCT GGG TAC AGG TCC GAC 1104 Lys Phe Ile Arg Lys Tyr Lys Lys Lys Tyr Ser Gly Tyr Arg Ser Asp 355 360 365 CTG CTC CAA TTG GCC GCT ATC CGG TAC TGC CTG TAC CCG AGG AGC TAC 1152 Leu Leu Gln Leu Ala Ala Ile Arg Tyr Cys Leu Tyr Pro Arg Ser Tyr 370 375 380 CCG ATC AAG TTC AGC ACT GTC TTC CAG CGG GCT CTG TCT TCT TAC TCC 1200 Pro Ile Lys Phe Ser Thr Val Phe Gln Arg Ala Leu Ser Ser Tyr Ser 385 390 395 400 ACG TAC AGC GTC AGC AGC GTT AGC TCG TTC CTG GGA CTC TTC ACC CAA 1248 Thr Tyr Ser Val Ser Ser Val Ser Ser Phe Leu Gly Leu Phe Thr Gln 405 410 415 TAT CTG AAG AAG CCC GCT TAC GTG GGC TAC AAC CTG AAG CCG GTG CTG 1296 Tyr Leu Lys Lys Pro Ala Tyr Val Gly Tyr Asn Leu Lys Pro Val Leu 420 425 430 CTG CAG GCT GGC CTG CCG AAG CTC AGC ATG CCT CAG TAC TCC CTC TCT 1344 Leu Gln Ala Gly Leu Pro Lys Leu Ser Met Pro Gln Tyr Ser Leu Ser 435 440 445 GGC CTC ATG TCC TAC ATC CAC GGC AAC AAG TAC TCC GAC TCC TCC CTA 1392 Gly Leu Met Ser Tyr Ile His Gly Asn Lys Tyr Ser Asp Ser Ser Leu 450 455 460 ATC GGA CTC ATC CGG GTG TAC GGA CCG AAG ATC AAA CGG ATT GTC CAC 1440 Ile Gly Leu Ile Arg Val Tyr Gly Pro Lys Ile Lys Arg Ile Val His 465 470 475 480 CAG TAC AAG AGC CGA TAT TCG GGA ATC CAG GCT GAT CTG CTG CAG CTG 1488 Gln Tyr Lys Ser Arg Tyr Ser Gly Ile Gln Ala Asp Leu Leu Gln Leu 485 490 495 TGC GCC ATT CGC TAC TAC TCG CTG CCA GTC GTC TTC AGG AGT TCG TAC 1536 Cys Ala Ile Arg Tyr Tyr Ser Leu Pro Val Val Phe Arg Ser Ser Tyr 500 505 510 AGC TTC GGC ACC ATT TTC CAG CAG TAC CTC GGC TCC CAG AAC CTG AAG 1584 Ser Phe Gly Thr Ile Phe Gln Gln Tyr Leu Gly Ser Gln Asn Leu Lys 515 520 525 GTG TAC AAC GCC TCC ACC GTC AAA CGC TTC ATC AAC GGG TTT GTC AGC 1632 Val Tyr Asn Ala Ser Thr Val Lys Arg Phe Ile Asn Gly Phe Val Ser 530 535 540 TAC ATC CGC AAG AGG CAG TCC AAC AAG TAC AGC GGG CCG ATG TGG GTG 1680 Tyr Ile Arg Lys Arg Gln Ser Asn Lys Tyr Ser Gly Pro Met Trp Val 545 550 555 560 TGC AGA CGC TGC TAATGTGAAG CCTATCCGGT ATAATAGACA GATTGAGCGT 1732 Cys Arg Arg Cys GTTTAACTGG ATTGTGCACA GCTCAACAAT TAGGCATTTT CGACCATCCA TGTTGCGGTA 1792 AACAAAAAAG CAAAAAAGAT ATGTAGGAAT AGCTTCCTAT AGCGCGAGCT TTCTGTGGTA 1852 TTACCACTCG GGACGTTTTT GTGAAAATAC ATTTTTAAAC ACTAAAAAAA AAAAAAAAAA 1912 A 1913

【００１８】配列番号 ２ 配列の長さ ：５４６ 配列の型 ： アミノ酸 トポロジー ： 不明 配列の種類 ： 蛋白質 起源 生物名 ： アカフジツボ（Megabalunus rosa) 配列 Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｖａｌ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ １ ５
１０ １５ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｙｒ
Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ａｒｇ
Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ ５０ ５５
６０ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｉｌｅ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｓｅｒ ８５
９０ ９５ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｙ
Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ １００ １０５
１１０ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ａｌａ
Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｉｌｅ １１５ １２０
１２５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｌｙｓ
Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｔｙｒ
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｓｅｒ １６５
１７０ １７５ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ａｌａ １８０ １８５
１９０ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｇｌｎ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｅｕ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ ２１０ ２１５
２２０ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｇｌｙ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ｔｙｒ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ ２４５
２５０ ２５５ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｖａｌ
Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ ２６０ ２６５
２７０ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｔｈｒ ２７５ ２８０
２８５ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ
Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｈｒ ２９０ ２９５
３００ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｈｅ ３２５
３３０ ３３５ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ ３４０ ３４５
３５０ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｌｅｕ
Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｉｌｅ ３５５ ３６０
３６５ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ ３７０ ３７５
３８０ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｌｅｕ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ａｓｎ
Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｎ ４０５
４１０ ４１５ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｐｒｏ
Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ ４２０ ４２５
４３０ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｇｌｙ ４３５ ４４０
４４５ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｉｌｅ
Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｔｙｒ ４５０ ４５５
４６０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ａｌａ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ａｌａ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ
Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｐｈｅ ４８５
４９０ ４９５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｔｙｒ ５００ ５０５
５１０ Ａｓｎ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｉｌｅ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ ５１５ ５２０
５２５ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｓｅｒ
Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｔｒｐ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ａｒｇ ５３０ ５３５
５４０ Ａｒｇ Ｃｙｓ ５４５

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の(a) 又は(b) の蛋白質をコードす
   る遺伝子。 (a) 配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる蛋白質 (b) 配列番号２に記載のアミノ酸配列において１若しく
   は数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミ
   ノ酸配列からなり、かつ接着性を有する蛋白質