JPH10319016A - 免疫グロブリンの結合活性を測定する方法 - Google Patents
免疫グロブリンの結合活性を測定する方法Info
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- JPH10319016A JPH10319016A JP10121896A JP12189698A JPH10319016A JP H10319016 A JPH10319016 A JP H10319016A JP 10121896 A JP10121896 A JP 10121896A JP 12189698 A JP12189698 A JP 12189698A JP H10319016 A JPH10319016 A JP H10319016A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 抗体の定性的または定量的検出方法および結
合活性の測定方法の改良。 【解決手段】 抗体の定性的または定量的検出方法およ
び結合活性の測定方法であって、ウイルス、細菌または
寄生虫感染の初期相の診断を可能にする。とくに大規模
な分析臨床検査室における自動化過程に適していて、洗
浄溶液またはサンプル希釈緩衝液に尿素−過酸化水素溶
液を使用することを特徴とする。
合活性の測定方法の改良。 【解決手段】 抗体の定性的または定量的検出方法およ
び結合活性の測定方法であって、ウイルス、細菌または
寄生虫感染の初期相の診断を可能にする。とくに大規模
な分析臨床検査室における自動化過程に適していて、洗
浄溶液またはサンプル希釈緩衝液に尿素−過酸化水素溶
液を使用することを特徴とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗体の定性的また
は定量的検出のためおよびそれらの結合活性の測定のた
めの方法および診断補助剤に関する。これは、ウイル
ス、細菌または寄生虫の感染の初期相の診断を可能にす
る。本発明の診断補助剤は大規模な分析臨床検査室にお
ける自動化過程にとくに適している。
は定量的検出のためおよびそれらの結合活性の測定のた
めの方法および診断補助剤に関する。これは、ウイル
ス、細菌または寄生虫の感染の初期相の診断を可能にす
る。本発明の診断補助剤は大規模な分析臨床検査室にお
ける自動化過程にとくに適している。
【０００２】
【従来の技術】イムノアッセイは、医学的診断の目的で
の血清および血漿サンプル中の免疫グロブリンの検出の
ために、それらのとくに優れた特異性および感度により
頻繁に使用されている。さらに、イムノアッセイは使用
が簡便であることによって傑出している。
の血清および血漿サンプル中の免疫グロブリンの検出の
ために、それらのとくに優れた特異性および感度により
頻繁に使用されている。さらに、イムノアッセイは使用
が簡便であることによって傑出している。
【０００３】急性の感染の場合、診断は、主としてＩｇ
Ｍ抗体の検出に基づいて行われる。しかしながら、新鮮
な初感染とその経過は完了したかまたは再活性化された
感染の信頼できる識別が、付加的な検討なしには可能で
ないケースが臨床検査の実務においては頻繁に認められ
る。しかしながら、たとえば、特定のウイルス、細菌ま
たは寄生虫に特異的なＩｇＧ抗体の結合活性の付加的な
測定は、感染時期についてその付加的測定なしには全く
不可能であるかもしくは不十分な正確さでしか提示でき
ない血清学的状態の評価を可能にすることが知られてい
る。
Ｍ抗体の検出に基づいて行われる。しかしながら、新鮮
な初感染とその経過は完了したかまたは再活性化された
感染の信頼できる識別が、付加的な検討なしには可能で
ないケースが臨床検査の実務においては頻繁に認められ
る。しかしながら、たとえば、特定のウイルス、細菌ま
たは寄生虫に特異的なＩｇＧ抗体の結合活性の付加的な
測定は、感染時期についてその付加的測定なしには全く
不可能であるかもしくは不十分な正確さでしか提示でき
ない血清学的状態の評価を可能にすることが知られてい
る。
【０００４】免疫グロブリンの結合活性の測定は、様々
なアッセイで、たとえばタンパク質変性イムノアッセイ
により行われる。このアッセイは熟練した研究者に、と
くに以下の文献に開示されている。すなわち、J. Schub
ertら (1996), J. Lab. Med.20(12): 713-717; J.J. Gr
ay (1995), J. Virol. Methods 52: 95-104; J. Polane
cら (1994), J. Clin. Lab. Analysis 8: 16-21; H.O.
Kangroら (1991), J.Med. Virol. 33: 100-105 に記載
されている。共通して使用されている変性物質の例は尿
素、ジエチルアミン、グアニジン、チオシアナートであ
る。
なアッセイで、たとえばタンパク質変性イムノアッセイ
により行われる。このアッセイは熟練した研究者に、と
くに以下の文献に開示されている。すなわち、J. Schub
ertら (1996), J. Lab. Med.20(12): 713-717; J.J. Gr
ay (1995), J. Virol. Methods 52: 95-104; J. Polane
cら (1994), J. Clin. Lab. Analysis 8: 16-21; H.O.
Kangroら (1991), J.Med. Virol. 33: 100-105 に記載
されている。共通して使用されている変性物質の例は尿
素、ジエチルアミン、グアニジン、チオシアナートであ
る。
【０００５】結合活性の測定は既に、ウイルス性および
非ウイルス性原因の感染、たとえばエプスタイン・バー
ルウイルス（ＥＢＶ）、ルベラウイルス、サイトメガロ
ウイルス（ＣＭＶ）、ハンタウイルス、パルボウイルス
Ｂ19、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヒトヘルペス
ウイルス６型（ＨＨＶ-6）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣ
Ｖ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス
１もしくは２型（ＨＳＶ-１/-２）およびトキソプラズ
マ・ゴンディ感染の診断に有効に用いられてきた。しか
しながら、この方法はとくに技術的な問題により、分析
臨床検査室で広く用いられるには至ってはいない。これ
には主に３つの理由が原因となっている。
非ウイルス性原因の感染、たとえばエプスタイン・バー
ルウイルス（ＥＢＶ）、ルベラウイルス、サイトメガロ
ウイルス（ＣＭＶ）、ハンタウイルス、パルボウイルス
Ｂ19、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヒトヘルペス
ウイルス６型（ＨＨＶ-6）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣ
Ｖ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス
１もしくは２型（ＨＳＶ-１/-２）およびトキソプラズ
マ・ゴンディ感染の診断に有効に用いられてきた。しか
しながら、この方法はとくに技術的な問題により、分析
臨床検査室で広く用いられるには至ってはいない。これ
には主に３つの理由が原因となっている。
【０００６】１．主として用いられる物質、尿素は著者
らによって推薦されている濃度が結晶化点であり、イム
ノアッセイの自動化または部分自動化操作用の装置（イ
ムノアッセイプロセッサー）のすべてのピペットの先端
やチューブをしばしば詰まらせる。 ２．低モル濃度（たとえば５〜６Ｍ）の尿素溶液を使用
すると、方法の有効性がかなり低下する。 ３．文献中にその方法の評価は限界または不能である旨
述べられた範囲が広すぎる。
らによって推薦されている濃度が結晶化点であり、イム
ノアッセイの自動化または部分自動化操作用の装置（イ
ムノアッセイプロセッサー）のすべてのピペットの先端
やチューブをしばしば詰まらせる。 ２．低モル濃度（たとえば５〜６Ｍ）の尿素溶液を使用
すると、方法の有効性がかなり低下する。 ３．文献中にその方法の評価は限界または不能である旨
述べられた範囲が広すぎる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】したがって、抗体の結
合活性を測定する既知の方法は、改良する必要がある。
とくに、自動化イムノアッセイ過程への適用性に改良を
必要としていた。
合活性を測定する既知の方法は、改良する必要がある。
とくに、自動化イムノアッセイ過程への適用性に改良を
必要としていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】驚くべきことに、上述の
問題がこれまでタンパク質変性イムノアッセイに用いら
れたことのない物質である尿素−過酸化水素（たとえ
ば、Carl Roth GmbH＋CoKarlsruhe から入手できる：商
品番号 7641.1）をタンパク質変性剤として使用するこ
とによる本発明の範囲内において解決できることが見出
されたのである。この物質は驚くべきことに、低モル濃
度（約２.５〜６.５Ｍ）でも、尿素の高モル濃度（約６
〜８Ｍ）溶液と同様にタンパク質変性イムノアッセイに
有効な性質をもっている。したがって、本発明は抗体の
定性的または定量的検出方法であり、この抗体をそれに
対する抗原と免疫複合体が形成できるように接触させ、
反応混合物を結合活性の低い抗体を含有する免疫複合体
を不安定化するが、一方、結合活性の高い抗体を含有す
る免疫複合体は実質的に維持するタンパク質変性剤と接
触させ、抗体の抗原への結合の程度を熟練した研究者に
は周知の方法により測定する方法において、タンパク質
変性剤は尿素−過酸化水素とする方法に関する。
問題がこれまでタンパク質変性イムノアッセイに用いら
れたことのない物質である尿素−過酸化水素（たとえ
ば、Carl Roth GmbH＋CoKarlsruhe から入手できる：商
品番号 7641.1）をタンパク質変性剤として使用するこ
とによる本発明の範囲内において解決できることが見出
されたのである。この物質は驚くべきことに、低モル濃
度（約２.５〜６.５Ｍ）でも、尿素の高モル濃度（約６
〜８Ｍ）溶液と同様にタンパク質変性イムノアッセイに
有効な性質をもっている。したがって、本発明は抗体の
定性的または定量的検出方法であり、この抗体をそれに
対する抗原と免疫複合体が形成できるように接触させ、
反応混合物を結合活性の低い抗体を含有する免疫複合体
を不安定化するが、一方、結合活性の高い抗体を含有す
る免疫複合体は実質的に維持するタンパク質変性剤と接
触させ、抗体の抗原への結合の程度を熟練した研究者に
は周知の方法により測定する方法において、タンパク質
変性剤は尿素−過酸化水素とする方法に関する。
【０００９】本発明はさらに、抗体の結合活性を測定す
る方法であり、抗体を互いに独立にそれに対する抗原と
の第一および第二の混合物において免疫複合体が形成で
きるように接触させ、２つの混合物の一方は結合活性の
低い抗体を含有する免疫複合体を不安定化するが、一
方、結合活性の高い抗体を含有する免疫複合体は実質的
に維持するタンパク質変性剤と接触させ、両サンプルに
おける抗体の抗原への結合の程度を熟練した研究者には
周知の方法により互いに独立に測定し、抗体の結合活性
を第一および第二の混合物中における抗原-抗体結合の
程度の比によって明らかにする方法において、タンパク
質変性剤は尿素−過酸化水素とする方法に関する。
る方法であり、抗体を互いに独立にそれに対する抗原と
の第一および第二の混合物において免疫複合体が形成で
きるように接触させ、２つの混合物の一方は結合活性の
低い抗体を含有する免疫複合体を不安定化するが、一
方、結合活性の高い抗体を含有する免疫複合体は実質的
に維持するタンパク質変性剤と接触させ、両サンプルに
おける抗体の抗原への結合の程度を熟練した研究者には
周知の方法により互いに独立に測定し、抗体の結合活性
を第一および第二の混合物中における抗原-抗体結合の
程度の比によって明らかにする方法において、タンパク
質変性剤は尿素−過酸化水素とする方法に関する。
【００１０】このタイプの好ましい方法は、抗原を固相
に結合した形態で抗体と接触させ、ついで尿素−過酸化
水素を含有する緩衝溶液で洗浄する方法である。このタ
イプの好ましい方法の例には、酵素イムノアッセイ、ラ
ジオイムノアッセイ、ウエスタンブロットまたは免疫蛍
光アッセイが包含される。しかしながら、熟練した研究
者によれば、本発明の記載に従い尿素−過酸化水素を用
いて本発明をそのまま実施できる他のイムノアッセイシ
ステムは明瞭であろう。
に結合した形態で抗体と接触させ、ついで尿素−過酸化
水素を含有する緩衝溶液で洗浄する方法である。このタ
イプの好ましい方法の例には、酵素イムノアッセイ、ラ
ジオイムノアッセイ、ウエスタンブロットまたは免疫蛍
光アッセイが包含される。しかしながら、熟練した研究
者によれば、本発明の記載に従い尿素−過酸化水素を用
いて本発明をそのまま実施できる他のイムノアッセイシ
ステムは明瞭であろう。
【００１１】上述の方法は、体液中の診断に関連のある
抗体を検出する本発明の方法にとくに適している。この
タイプの抗体は、ウイルス、細菌もしくは寄生虫たとえ
ば、ＥＢＶ、ルベラウイルス、ＣＭＶ、ハンタウイル
ス、パルボウイルスＢ19、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＢ
Ｖ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２
またはトキソプラズマ・ゴンディ向けられた抗体であ
る。
抗体を検出する本発明の方法にとくに適している。この
タイプの抗体は、ウイルス、細菌もしくは寄生虫たとえ
ば、ＥＢＶ、ルベラウイルス、ＣＭＶ、ハンタウイル
ス、パルボウイルスＢ19、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＢ
Ｖ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、ＲＳＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２
またはトキソプラズマ・ゴンディ向けられた抗体であ
る。
【００１２】結合活性の測定は、部分的にまたは完全に
自動化された市販品を入手できるイムノアッセイ（たと
えばＥＬＩＳＡ）を用いて有利に実施できる。本発明の
他の利点は結果の良好な解析対応性である。
自動化された市販品を入手できるイムノアッセイ（たと
えばＥＬＩＳＡ）を用いて有利に実施できる。本発明の
他の利点は結果の良好な解析対応性である。
【００１３】抗体の結合活性の測定のためのこの新規な
方法は、新鮮な（すなわちごく最近の発生）感染を古い
（すなわちそれほど最近の発生ではない）感染と識別す
るのにとくに適している。とくに本発明は、急性のルベ
ラウイルス感染、または最近その経過を完了した感染、
最初のＣＭＶ感染、最初のＥＢＶ感染、最初のＨＳＶ感
染もしくはトキソプラズマ・ゴンディ感染を検出する方
法に関する。
方法は、新鮮な（すなわちごく最近の発生）感染を古い
（すなわちそれほど最近の発生ではない）感染と識別す
るのにとくに適している。とくに本発明は、急性のルベ
ラウイルス感染、または最近その経過を完了した感染、
最初のＣＭＶ感染、最初のＥＢＶ感染、最初のＨＳＶ感
染もしくはトキソプラズマ・ゴンディ感染を検出する方
法に関する。
【００１４】本発明はさらに、上述の新規な方法の適用
のために適当な診断補助剤（診断試薬、アッセイキッ
ト）に関する。これらのタイプの診断補助剤は、熟練し
た研究者にはそれ自体既知の様式で、本発明の説明に基
づいて製造される。
のために適当な診断補助剤（診断試薬、アッセイキッ
ト）に関する。これらのタイプの診断補助剤は、熟練し
た研究者にはそれ自体既知の様式で、本発明の説明に基
づいて製造される。
【００１５】
【発明の実施の形態】新規な尿素−過酸化水素溶液の調製 市販品を入手できるＥＬＩＳＡキットからの洗浄溶液
は、タンパク質変性剤の希釈溶液としてしばしば使用さ
れる。以下の実施例においては、いわゆるＰＯＤ洗浄溶
液（注文番号：OSEW，Behring Diagnostics GmbH, Marb
urg, Germany）を例として用いた。しかしながら、ＥＬ
ＩＳＡの洗浄に原理的に適当な任意の他の洗浄溶液の使
用が可能であった。尿素−過酸化水素は、２.５mol／Ｌ
〜６.５mol／Ｌの範囲、好ましくは４.５mol／Ｌ〜６.
０mol／Ｌの範囲で使用される。至適濃度は５.３mol／
Ｌである。尿素−過酸化水素はイムノアッセイを実施す
るために用いられる他の溶液、たとえばサンプル希釈緩
衝液中での使用も意図される。
は、タンパク質変性剤の希釈溶液としてしばしば使用さ
れる。以下の実施例においては、いわゆるＰＯＤ洗浄溶
液（注文番号：OSEW，Behring Diagnostics GmbH, Marb
urg, Germany）を例として用いた。しかしながら、ＥＬ
ＩＳＡの洗浄に原理的に適当な任意の他の洗浄溶液の使
用が可能であった。尿素−過酸化水素は、２.５mol／Ｌ
〜６.５mol／Ｌの範囲、好ましくは４.５mol／Ｌ〜６.
０mol／Ｌの範囲で使用される。至適濃度は５.３mol／
Ｌである。尿素−過酸化水素はイムノアッセイを実施す
るために用いられる他の溶液、たとえばサンプル希釈緩
衝液中での使用も意図される。
【００１６】イムノアッセイ操作 上述の新規な尿素−過酸化水素溶液は、イムノアッセイ
たとえばＥＬＩＳＡを慣用方法で実施する際に用いられ
る。既知の方法と比較して新規な方法における改良点
は、サンプルのインキュベーションに続いて、尿素−過
酸化水素を含有する洗浄溶液のその方法に適当な容量
（たとえばマイクロタイタープレートに基づくＥＬＩＳ
Ａでは約０.３ml）で２回洗浄し、ついでたとえば各回
同じ容量の洗浄溶液で２回洗浄する点である。自動化装
置の製造業者によって提供された洗浄溶液の留置時間は
必ずしも変更する必要はない。自動化操作が要求される
場合には、アッセイはＥＬＩＳＡプロセッサー上で実施
する（たとえば Behring Diagnostics GmbH から入手可
能）。
たとえばＥＬＩＳＡを慣用方法で実施する際に用いられ
る。既知の方法と比較して新規な方法における改良点
は、サンプルのインキュベーションに続いて、尿素−過
酸化水素を含有する洗浄溶液のその方法に適当な容量
（たとえばマイクロタイタープレートに基づくＥＬＩＳ
Ａでは約０.３ml）で２回洗浄し、ついでたとえば各回
同じ容量の洗浄溶液で２回洗浄する点である。自動化装
置の製造業者によって提供された洗浄溶液の留置時間は
必ずしも変更する必要はない。自動化操作が要求される
場合には、アッセイはＥＬＩＳＡプロセッサー上で実施
する（たとえば Behring Diagnostics GmbH から入手可
能）。
【００１７】以下の実施例では Behring Diagnostics G
mbH のＥＬＩＳＡを使用して改良した。洗浄溶液として
はＰＯＤ洗浄溶液を用いた。これらの実施例は本発明を
さらに例示するためのものであり、いかなる意味におい
ても本発明を限定するものではない。
mbH のＥＬＩＳＡを使用して改良した。洗浄溶液として
はＰＯＤ洗浄溶液を用いた。これらの実施例は本発明を
さらに例示するためのものであり、いかなる意味におい
ても本発明を限定するものではない。
【００１８】
【実施例】実施例１ ：結合活性のＥＬＩＳＡ測定を至適化するた
め、最初に、様々なモル濃度の試薬を用いて新鮮なおよ
び古いルベラ感染についてそれぞれの血清で、尿素洗浄
工程と尿素−過酸化水素洗浄工程を比較した。 結果：図１は、濃度範囲２.５mol／Ｌ〜６.５mol／Ｌで
新規な尿素−過酸化水素溶液が、上記２つのグループの
血清の間の最良の分離を達成することを示している。
め、最初に、様々なモル濃度の試薬を用いて新鮮なおよ
び古いルベラ感染についてそれぞれの血清で、尿素洗浄
工程と尿素−過酸化水素洗浄工程を比較した。 結果：図１は、濃度範囲２.５mol／Ｌ〜６.５mol／Ｌで
新規な尿素−過酸化水素溶液が、上記２つのグループの
血清の間の最良の分離を達成することを示している。
【００１９】実施例２：尿素−過酸化水素による新規な
方法の有効性を、ルベラ血清変換により、従来技術の慣
用方法と比較して調べた。 結果：表１参照。結合活性のＥＬＩＳＡ測定は、新規方
法によって以下のように評価した：１５％以下＝急性感
染、１５〜２０％＝急性感染の耐性範囲、２０％以上＝
最近のものではない感染。
方法の有効性を、ルベラ血清変換により、従来技術の慣
用方法と比較して調べた。 結果：表１参照。結合活性のＥＬＩＳＡ測定は、新規方
法によって以下のように評価した：１５％以下＝急性感
染、１５〜２０％＝急性感染の耐性範囲、２０％以上＝
最近のものではない感染。
【００２０】
【表１】
【００２１】実施例３：方法の識別は、確認されたルベ
ラＩｇＭ陽性血清グループと比較して、確認されたルベ
ラＩｇＭ陰性血清グループに示すことである。 結果：表２参照。ルベラ感染の初期相からの血清の大部
分は約５％未満の結合活性指数を有し、一方、感染の後
期に由来するルベラ血清の大部分は約５０％の平均結合
活性指数を有する。
ラＩｇＭ陽性血清グループと比較して、確認されたルベ
ラＩｇＭ陰性血清グループに示すことである。 結果：表２参照。ルベラ感染の初期相からの血清の大部
分は約５％未満の結合活性指数を有し、一方、感染の後
期に由来するルベラ血清の大部分は約５０％の平均結合
活性指数を有する。
【００２２】
【表２】
【００２３】
【表３】
【００２４】実施例４：ルベラ系に対して実施例３をチ
ェックするためには方法の識別を単純ヘルペスウイルス
（ＨＳＶ）の例を用いて再び示すことである。確認され
たＨＳＶ ＩｇＭ陽性血清のグループを確認されたＨＳ
Ｖ ＩｇＭ陰性血清グループと比較する。 結果：表３参照。単純ヘルペスウイルス感染の初期相か
らの血清の大部分は約５％未満の結合活性指数に達する
が、感染の後期からの単純ヘルペスウイルス血清は約50
％より大きい平均結合活性指数を有する。
ェックするためには方法の識別を単純ヘルペスウイルス
（ＨＳＶ）の例を用いて再び示すことである。確認され
たＨＳＶ ＩｇＭ陽性血清のグループを確認されたＨＳ
Ｖ ＩｇＭ陰性血清グループと比較する。 結果：表３参照。単純ヘルペスウイルス感染の初期相か
らの血清の大部分は約５％未満の結合活性指数に達する
が、感染の後期からの単純ヘルペスウイルス血清は約50
％より大きい平均結合活性指数を有する。
【００２５】
【表４】
【００２６】
【表５】
【図１】Enzygnost（登録商標）抗−ルベラウイルスＩ
ｇＧ ＥＬＩＳＡアッセイにおけるタンパク質変性物
質、尿素および尿素−過酸化水素のモル濃度至適化試験
結果を示すグラフであり、Ａはルベラ感染の初期相（血
清AB 05：ルベラ接種後４週に採取）、Ｂはルベラ感染
の後期相（血清 281：ルベラウイルスとの接触数年後）
である。
ｇＧ ＥＬＩＳＡアッセイにおけるタンパク質変性物
質、尿素および尿素−過酸化水素のモル濃度至適化試験
結果を示すグラフであり、Ａはルベラ感染の初期相（血
清AB 05：ルベラ接種後４週に採取）、Ｂはルベラ感染
の後期相（血清 281：ルベラウイルスとの接触数年後）
である。
Claims (16)
- 【請求項１】 抗体の定性的または定量的検出方法であ
り、この抗体をそれに対する抗原と免疫複合体が形成で
きるように接触させ、反応混合物を結合活性の低い抗体
を含有する免疫複合体を不安定化するが、一方、結合活
性の高い抗体を含有する免疫複合体は実質的に維持する
タンパク質変性剤と接触させ、抗体の抗原への結合の程
度を熟練した研究者には周知の方法により測定する方法
において、タンパク質変性剤は尿素−過酸化水素とする
方法。 - 【請求項２】 抗体の結合活性を測定する方法であり、
抗体を互いに独立にそれに対する抗原との第一および第
二の混合物において免疫複合体が形成できるように接触
させ、２つの混合物の一方は結合活性の低い抗体を含有
する免疫複合体を不安定化するが、一方結合活性の高い
抗体を含有する免疫複合体は実質的に維持するタンパク
質変性剤と接触させ、両サンプルにおける抗体の抗原へ
の結合の程度を熟練した研究者には周知の方法により互
いに独立に測定し、抗体の結合活性を第一および第二の
混合物中における抗原-抗体結合の程度の比によって明
らかにする方法において、タンパク質変性剤は尿素−過
酸化水素とする方法。 - 【請求項３】 抗原は固相に結合した形態で抗体と接触
させ、ついで尿素−過酸化水素を含有する緩衝溶液で洗
浄する請求項１または２記載の方法。 - 【請求項４】 酵素イムノアッセイ、ラジオイムノアッ
セイ、ウエスタンブロットまたは免疫蛍光アッセイによ
って行われる請求項１〜３のいずれかに記載の方法。 - 【請求項５】 診断に関連のある体液中の抗体の検出に
用いられる請求項１〜４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 診断に関連のある抗体はウイルス、細菌
または寄生虫に向けられた抗体である請求項５記載の方
法。 - 【請求項７】 診断に関連のある抗体はＥＢＶ、ルベラ
ウイルス、ＣＭＶ、ハンタウイルス、パルボウイルスＢ
19、ＶＺＶ、ＨＨＶ−６、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＩＶ、Ｒ
ＳＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２またはトキソプラズマ・
ゴンディに向けられた抗体である請求項５たは６記載の
方法。 - 【請求項８】 尿素−過酸化水素は２.５〜６.５Ｍの濃
度で用いられる請求項１〜７のいずれかに記載の方法。 - 【請求項９】 請求項１〜８のいずれかに記載の方法に
よって抗体の結合活性を測定することにより初期感染と
古い感染を識別する方法。 - 【請求項１０】 急性ルベラウイルス感染もしくはその
経過を最近完了した感染、最初のＣＭＶ感染、最初のＥ
ＢＶ感染、最初のＨＳＶ感染またはトキソプラズマ・ゴ
ンディ感染を検出する方法。 - 【請求項１１】 尿素−過酸化水素からなるイムノアッ
セイ用の洗浄溶液。 - 【請求項１２】 尿素−過酸化水素からなるイムノアッ
セイ用のサンプル希釈緩衝液。 - 【請求項１３】 尿素−過酸化水素は２.５〜６.５mol
／Ｌの濃度で存在する請求項１１または１２記載の洗浄
溶液またはサンプル希釈緩衝液。 - 【請求項１４】 尿素−過酸化水素は４.５〜６.０mol
／Ｌの濃度で存在する請求項１３記載の洗浄溶液または
サンプル希釈緩衝液。 - 【請求項１５】 尿素−過酸化水素は約５.３mol／Ｌの
濃度で存在する請求項１３記載の洗浄溶液またはサンプ
ル希釈緩衝液。 - 【請求項１６】 請求項１〜１０のいずれかに記載の方
法を実施する診断補助剤。
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