JPH10298198A - Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチド - Google Patents
Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチドInfo
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- JPH10298198A JPH10298198A JP9117432A JP11743297A JPH10298198A JP H10298198 A JPH10298198 A JP H10298198A JP 9117432 A JP9117432 A JP 9117432A JP 11743297 A JP11743297 A JP 11743297A JP H10298198 A JPH10298198 A JP H10298198A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 メモリー化された、細胞傷害性Ｔリンパ球
（以下、ＣＴＬと略す）誘導用ペプチドを提供し、それ
を用いたＣＴＬの検出方法を提供する。 【解決手段】 式（化１）：Phe Tyr Ile Gln Met Cys
Thr Glu Leu 、又は式（化２）：Arg Phe Tyr Ile Gln
Met Cys Thr Glu Leu で表されるアミノ酸配列からなる
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導用ペ
プチド。該ペプチドを用いたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴ
Ｌの検出方法。ＨＬＡ−Ａ２４と、式（化１）又は式
（化２）で表されるアミノ酸配列からなるペプチドとの
複合体を細胞表面に提示する細胞に特異的に細胞溶解又
はサイトカイン遊離反応を起こすＣＴＬ。 【効果】 免疫機能又はＡ型インフルエンザ感染の有無
の診断等に有用である。
（以下、ＣＴＬと略す）誘導用ペプチドを提供し、それ
を用いたＣＴＬの検出方法を提供する。 【解決手段】 式（化１）：Phe Tyr Ile Gln Met Cys
Thr Glu Leu 、又は式（化２）：Arg Phe Tyr Ile Gln
Met Cys Thr Glu Leu で表されるアミノ酸配列からなる
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導用ペ
プチド。該ペプチドを用いたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴ
Ｌの検出方法。ＨＬＡ−Ａ２４と、式（化１）又は式
（化２）で表されるアミノ酸配列からなるペプチドとの
複合体を細胞表面に提示する細胞に特異的に細胞溶解又
はサイトカイン遊離反応を起こすＣＴＬ。 【効果】 免疫機能又はＡ型インフルエンザ感染の有無
の診断等に有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、メモリー化された
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球誘導用抗原
ペプチドに関する。なお、本明細書における細胞傷害性
Ｔリンパ球とはＣＤ８陽性のキラーＴ細胞全体を指し、
以下ＣＴＬと略す。本発明は、更に、該ペプチドによる
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬの検出方
法、及び該ペプチドよって誘導されたＣＴＬに関する。
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球誘導用抗原
ペプチドに関する。なお、本明細書における細胞傷害性
Ｔリンパ球とはＣＤ８陽性のキラーＴ細胞全体を指し、
以下ＣＴＬと略す。本発明は、更に、該ペプチドによる
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬの検出方
法、及び該ペプチドよって誘導されたＣＴＬに関する。
【０００２】
【従来の技術】各種疾患において免疫機能状態を測定す
ることができれば治療する上で非常に有利である。例え
ば、癌患者の場合、各種制癌剤の投与や放射線による治
療を受けているために免疫機能が低下しており、そのた
めに治療の予後が悪いことがしばしばある。したがっ
て、患者の免疫状態を知ることは、治療の予後を予測す
る上で重要である。例えば細胞性免疫におけるＴ細胞の
機能状態に関しては、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４陽性）の
機能を精製ツベルクリンタンパクやカンジダ抗原タンパ
クを用いた遅延型皮膚反応で検査することができる。一
方癌患者等に対する各種免疫療法が普及しようとしてお
り、例えば癌細胞を選択的に傷害するＣＴＬを利用しよ
うと、ヒト腫瘍組織適合性抗原（ＭＨＣ）クラスＩ拘束
性のペプチドを用いたワクチン療法やＣＴＬを中心とす
る養子免疫療法が最近行われようとしている。この場合
もＣＴＬを誘導できるか等、予め疾患患者におけるＣＴ
Ｌの機能状態を検査することが望ましいが、このために
はＭＨＣクラスＩ拘束性の抗原ペプチドが必要となる。
ＭＨＣクラスＩ拘束性とは、あるＭＨＣクラスＩ分子を
有するＣＴＬは自身と同じクラスＩ分子を有する標的細
胞しか認識し傷害しないことを指す。すなわち、あるク
ラスＩ分子を有するＣＴＬは自身と同じクラスＩ分子と
抗原ペプチドの複合体を特異的に認識するＴ細胞レセプ
ター（ＴＣＲ）を有しており、該複合体を有する標的細
胞のみを認識する。したがってＭＨＣクラスＩ拘束性の
抗原ペプチドとはあるＭＨＣクラスＩ分子に結合し抗原
性を示すことができるペプチドを意味する。ウィルス感
染細胞や腫瘍細胞は各々の特異抗原を有しているが、そ
の抗原が細胞内でプロセシングされＭＨＣクラスＩ分子
上に提示されることにより該細胞はそれを認識するＴＣ
Ｒを持ったＣＴＬに選択的に障害される。したがってＣ
ＴＬを利用した治療においては、このようなＣＴＬが増
殖できるような免疫機能状態にあるか、また前駆細胞と
なるメモリー化されたＣＴＬが適当に保存されている必
要があり、疾患患者におけるＣＴＬの機能状態を検査す
るにはクラスＩ拘束性抗原ペプチドが必要となる。
ることができれば治療する上で非常に有利である。例え
ば、癌患者の場合、各種制癌剤の投与や放射線による治
療を受けているために免疫機能が低下しており、そのた
めに治療の予後が悪いことがしばしばある。したがっ
て、患者の免疫状態を知ることは、治療の予後を予測す
る上で重要である。例えば細胞性免疫におけるＴ細胞の
機能状態に関しては、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４陽性）の
機能を精製ツベルクリンタンパクやカンジダ抗原タンパ
クを用いた遅延型皮膚反応で検査することができる。一
方癌患者等に対する各種免疫療法が普及しようとしてお
り、例えば癌細胞を選択的に傷害するＣＴＬを利用しよ
うと、ヒト腫瘍組織適合性抗原（ＭＨＣ）クラスＩ拘束
性のペプチドを用いたワクチン療法やＣＴＬを中心とす
る養子免疫療法が最近行われようとしている。この場合
もＣＴＬを誘導できるか等、予め疾患患者におけるＣＴ
Ｌの機能状態を検査することが望ましいが、このために
はＭＨＣクラスＩ拘束性の抗原ペプチドが必要となる。
ＭＨＣクラスＩ拘束性とは、あるＭＨＣクラスＩ分子を
有するＣＴＬは自身と同じクラスＩ分子を有する標的細
胞しか認識し傷害しないことを指す。すなわち、あるク
ラスＩ分子を有するＣＴＬは自身と同じクラスＩ分子と
抗原ペプチドの複合体を特異的に認識するＴ細胞レセプ
ター（ＴＣＲ）を有しており、該複合体を有する標的細
胞のみを認識する。したがってＭＨＣクラスＩ拘束性の
抗原ペプチドとはあるＭＨＣクラスＩ分子に結合し抗原
性を示すことができるペプチドを意味する。ウィルス感
染細胞や腫瘍細胞は各々の特異抗原を有しているが、そ
の抗原が細胞内でプロセシングされＭＨＣクラスＩ分子
上に提示されることにより該細胞はそれを認識するＴＣ
Ｒを持ったＣＴＬに選択的に障害される。したがってＣ
ＴＬを利用した治療においては、このようなＣＴＬが増
殖できるような免疫機能状態にあるか、また前駆細胞と
なるメモリー化されたＣＴＬが適当に保存されている必
要があり、疾患患者におけるＣＴＬの機能状態を検査す
るにはクラスＩ拘束性抗原ペプチドが必要となる。
【０００３】メモリー化されたＣＴＬとは、特異的な抗
原レセプターを有する処女リンパ球プールが抗原刺激を
受けた際細胞傷害性を示すＣＴＬと共にクローナルに増
殖した該抗原性を記憶した免疫記憶細胞であり、再度抗
原刺激を受けると直ちに細胞傷害性を示すＣＴＬと該抗
原性を記憶した免疫記憶細胞プールにクローナルに増殖
する。したがってあるメモリー化された該ＣＴＬの存在
は、過去に該抗原性ペプチドによる刺激を受けた証明に
なる。またインビトロで処女リンパ球プールよりＣＴＬ
を誘導することは一般的に難しく、ＣＴＬの機能状態を
検査するにはメモリー化されたＣＴＬを用いることが好
ましい。ＭＨＣクラスＩ拘束性の抗原ペプチドは、ウイ
ルス由来のタンバクより多くが発見されている。しか
し、特殊な感染ウイルス由来の抗原ペプチドはその疾患
の治療や診断には利用可能であるが、対象となる人は限
られている。一方、ほとんどのヒトが感染したことがあ
るインフルエンザウイルス等に対しても、ウィルスタン
パク由来のＭＨＣクラスＩ拘束性抗原ペプチドが存在す
ると考えられ、これらの抗原ペプチドが分かれば、該ウ
ィルスの感染経験の確認のほかに、例えばヒトのＣＴＬ
の機能状態、すなわち正常性、異常性などを検査できる
ようになり、その利用価値は高い。上記ペプチドとし
て、ヒトのＭＨＣクラスＩ分子の一種であるＨＬＡ−Ａ
２（ＤＮＡタイプ* ０２０１）に対しては、配列表の配
列番号３に示すアミノ酸配列からなる、Ａ型インフルエ
ンザウイルスのマトリックスタンパクＭ１由来のペプチ
ドである５７ＫＧＩＬＧＦＶＦＴＩＬＴＶ６８があり、
該ペプチドの機能的最小構成単位はアミノ酸番号２〜１
０からなるペプチドである〔Ｍ．Ａ．ベドナレック（M.
A.Bednarek）ら、ジャーナル オブ イムノロジー（Jo
urnal of Immunology ）、第１４７巻、第４０４７〜４
０５３頁（１９９１）〕。そして、このペプチドはＨＬ
Ａ−Ａ２を保有する健常人や癌患者の末梢血リンパ球か
らメモリー化されたＣＴＬを誘導するために利用されて
いる〔Ｍ．Ｅ．レッシング（M.E.Ressing ）ら、キャン
サー リサーチ（Cancer Resarch）、第５６巻、第５８
２〜５８８頁（１９９６）ほか〕。
原レセプターを有する処女リンパ球プールが抗原刺激を
受けた際細胞傷害性を示すＣＴＬと共にクローナルに増
殖した該抗原性を記憶した免疫記憶細胞であり、再度抗
原刺激を受けると直ちに細胞傷害性を示すＣＴＬと該抗
原性を記憶した免疫記憶細胞プールにクローナルに増殖
する。したがってあるメモリー化された該ＣＴＬの存在
は、過去に該抗原性ペプチドによる刺激を受けた証明に
なる。またインビトロで処女リンパ球プールよりＣＴＬ
を誘導することは一般的に難しく、ＣＴＬの機能状態を
検査するにはメモリー化されたＣＴＬを用いることが好
ましい。ＭＨＣクラスＩ拘束性の抗原ペプチドは、ウイ
ルス由来のタンバクより多くが発見されている。しか
し、特殊な感染ウイルス由来の抗原ペプチドはその疾患
の治療や診断には利用可能であるが、対象となる人は限
られている。一方、ほとんどのヒトが感染したことがあ
るインフルエンザウイルス等に対しても、ウィルスタン
パク由来のＭＨＣクラスＩ拘束性抗原ペプチドが存在す
ると考えられ、これらの抗原ペプチドが分かれば、該ウ
ィルスの感染経験の確認のほかに、例えばヒトのＣＴＬ
の機能状態、すなわち正常性、異常性などを検査できる
ようになり、その利用価値は高い。上記ペプチドとし
て、ヒトのＭＨＣクラスＩ分子の一種であるＨＬＡ−Ａ
２（ＤＮＡタイプ* ０２０１）に対しては、配列表の配
列番号３に示すアミノ酸配列からなる、Ａ型インフルエ
ンザウイルスのマトリックスタンパクＭ１由来のペプチ
ドである５７ＫＧＩＬＧＦＶＦＴＩＬＴＶ６８があり、
該ペプチドの機能的最小構成単位はアミノ酸番号２〜１
０からなるペプチドである〔Ｍ．Ａ．ベドナレック（M.
A.Bednarek）ら、ジャーナル オブ イムノロジー（Jo
urnal of Immunology ）、第１４７巻、第４０４７〜４
０５３頁（１９９１）〕。そして、このペプチドはＨＬ
Ａ−Ａ２を保有する健常人や癌患者の末梢血リンパ球か
らメモリー化されたＣＴＬを誘導するために利用されて
いる〔Ｍ．Ｅ．レッシング（M.E.Ressing ）ら、キャン
サー リサーチ（Cancer Resarch）、第５６巻、第５８
２〜５８８頁（１９９６）ほか〕。
【０００４】一方ＭＨＣ拘束性抗原ペプチドはまずＭＨ
Ｃ分子に対する結合性を有することが必須であることか
ら、この観点からの該ペプチドの構造解析も進んでい
る。例えば、ヒトのＭＨＣクラスＩ分子であるＨＬＡ−
Ａ、−Ｂ、−Ｃに結合するペプチドは９〜１０個のアミ
ノ酸よりなり、ペプチドの構造については、ＨＬＡ−Ａ
２を中心として多くの情報が集まり、ＨＬＡ−Ａ２やＡ
２４分子との結合に必要なモチーフ構造としてＮ末端よ
り２番目、及びＣ末端のアミノ酸として適当な種類が明
らかにされている［特表平８−５００１０６号］。ＨＬ
Ａ−Ａ２４についても詳しい解析が行われ〔Ａ．コンド
ウ（A.Kondo ）ら、ジャーナル オブ イムノロジー、
第１５５巻、第４３０７〜４３１２頁（１９９５）〕、
Ｎ末端より２番目がＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔの
いずれかのアミノ酸であり、Ｃ末端がＬｅｕ、Ｐｈｅ、
Ｔｒｐのいずれかのアミノ酸であることが共通のモチー
フ構造であることが知られている。このＨＬＡ−Ａ２４
結合モチーフ構造を有するアミノ酸配列は、例えば、Ａ
型インフルエンザウィルス由来のヌクレオプロテインに
は１０個以上存在している。
Ｃ分子に対する結合性を有することが必須であることか
ら、この観点からの該ペプチドの構造解析も進んでい
る。例えば、ヒトのＭＨＣクラスＩ分子であるＨＬＡ−
Ａ、−Ｂ、−Ｃに結合するペプチドは９〜１０個のアミ
ノ酸よりなり、ペプチドの構造については、ＨＬＡ−Ａ
２を中心として多くの情報が集まり、ＨＬＡ−Ａ２やＡ
２４分子との結合に必要なモチーフ構造としてＮ末端よ
り２番目、及びＣ末端のアミノ酸として適当な種類が明
らかにされている［特表平８−５００１０６号］。ＨＬ
Ａ−Ａ２４についても詳しい解析が行われ〔Ａ．コンド
ウ（A.Kondo ）ら、ジャーナル オブ イムノロジー、
第１５５巻、第４３０７〜４３１２頁（１９９５）〕、
Ｎ末端より２番目がＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔの
いずれかのアミノ酸であり、Ｃ末端がＬｅｕ、Ｐｈｅ、
Ｔｒｐのいずれかのアミノ酸であることが共通のモチー
フ構造であることが知られている。このＨＬＡ−Ａ２４
結合モチーフ構造を有するアミノ酸配列は、例えば、Ａ
型インフルエンザウィルス由来のヌクレオプロテインに
は１０個以上存在している。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、該モチ
ーフ構造を有するペプチドがすべてＨＬＡ−Ａ２４に結
合できる訳ではなく、モチーフ以外の部分のアミノ酸も
重要であり、更にＨＬＡ結合性ペプチドがＨＬＡ拘束性
を示す抗原ペプチドであるためには、ＣＴＬによって認
識されなければならない。すなわち、該ペプチドはＨＬ
Ａ分子との結合だけでなく、ＣＴＬのＴＣＲとの結合又
は認識に適したアミノ酸配列を有していなければならな
い。実際、ＨＬＡ結合性ペプチドであってもＣＴＬによ
り認識されない、又は認識できるＴＣＲを持ったＣＴＬ
が存在しない例は非常に多く、一般的にその方が多い。
更に、検査対象者のＣＴＬの機能状態についての診断を
するために利用される抗原ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ
分子と抗原ペプチドの結合物を認識するＴＣＲをもった
ＣＴＬがメモリー化されているものである必要がある。
このメモリーはウイルスによる繰り返し感染やワクチン
技与の結果により、限られたペプチドに対して成立する
と考えられている。
ーフ構造を有するペプチドがすべてＨＬＡ−Ａ２４に結
合できる訳ではなく、モチーフ以外の部分のアミノ酸も
重要であり、更にＨＬＡ結合性ペプチドがＨＬＡ拘束性
を示す抗原ペプチドであるためには、ＣＴＬによって認
識されなければならない。すなわち、該ペプチドはＨＬ
Ａ分子との結合だけでなく、ＣＴＬのＴＣＲとの結合又
は認識に適したアミノ酸配列を有していなければならな
い。実際、ＨＬＡ結合性ペプチドであってもＣＴＬによ
り認識されない、又は認識できるＴＣＲを持ったＣＴＬ
が存在しない例は非常に多く、一般的にその方が多い。
更に、検査対象者のＣＴＬの機能状態についての診断を
するために利用される抗原ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ
分子と抗原ペプチドの結合物を認識するＴＣＲをもった
ＣＴＬがメモリー化されているものである必要がある。
このメモリーはウイルスによる繰り返し感染やワクチン
技与の結果により、限られたペプチドに対して成立する
と考えられている。
【０００６】ＨＬＡ−Ａ２４は、日本人の約６０％が保
有するなど東洋人に特に頻度が高いＭＨＣクラスＩ分子
であるにもかかわらず、ＨＬＡ−Ａ２４拘束性の抗原ペ
プチドとしては２、３の癌細胞由来の抗原ペプチド（チ
ロシナーゼ、β一カテニン等）しか見つかっておらず、
例えば、ＣＴＬ機能状態を検査する場合に汎用性の有
る、例えば、大多数の日本人が既に感染していると考え
られるインフルエンザウイルスタンパク由来の抗原ペプ
チドは見つかっていない。したがって、従来東洋人、特
に日本人のＣＴＬの機能状態を十分に検査することはで
きなかった。本発明の目的は、メモリー化されたＣＴＬ
誘導用ペプチドを提供すると共に、それを用いたＣＴＬ
の検出方法を提供することにある。
有するなど東洋人に特に頻度が高いＭＨＣクラスＩ分子
であるにもかかわらず、ＨＬＡ−Ａ２４拘束性の抗原ペ
プチドとしては２、３の癌細胞由来の抗原ペプチド（チ
ロシナーゼ、β一カテニン等）しか見つかっておらず、
例えば、ＣＴＬ機能状態を検査する場合に汎用性の有
る、例えば、大多数の日本人が既に感染していると考え
られるインフルエンザウイルスタンパク由来の抗原ペプ
チドは見つかっていない。したがって、従来東洋人、特
に日本人のＣＴＬの機能状態を十分に検査することはで
きなかった。本発明の目的は、メモリー化されたＣＴＬ
誘導用ペプチドを提供すると共に、それを用いたＣＴＬ
の検出方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は、下記式（化１）又は式（２）で示
す、配列表の配列番号１又は配列番号２で表されるアミ
ノ酸配列からなることを特徴とする、メモリー化された
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導用ペプチドに関する。
発明の第１の発明は、下記式（化１）又は式（２）で示
す、配列表の配列番号１又は配列番号２で表されるアミ
ノ酸配列からなることを特徴とする、メモリー化された
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導用ペプチドに関する。
【０００８】
【化１】Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu
【０００９】
【化２】Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu
【００１０】第２の発明は該ペプチドを用いた、ＨＬＡ
−Ａ２４拘束性ＣＴＬの検出方法に関する。第３の発明
は、ＨＬＡ−Ａ２４分子と式（化１）又は式（化２）で
表されるアミノ酸配列からなるペプチドとの複合体を細
胞表面に提示する細胞に特異的に細胞溶解又はサイトカ
イン遊離反応を起こすＣＴＬに関する。
−Ａ２４拘束性ＣＴＬの検出方法に関する。第３の発明
は、ＨＬＡ−Ａ２４分子と式（化１）又は式（化２）で
表されるアミノ酸配列からなるペプチドとの複合体を細
胞表面に提示する細胞に特異的に細胞溶解又はサイトカ
イン遊離反応を起こすＣＴＬに関する。
【００１１】本発明者らは、ＭＨＣクラスＩ分子である
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性を示す抗原ペプチドとして、Ａ型
インフルエンザウイルスのヌクレオプロティン由来のＨ
ＬＡ−Ａ２４結合性モチーフ構造からなるアミノ酸配列
を有するペプチドより、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２
４拘束性ＣＴＬを誘導できるものを検索した。その結
果、配列表の配列番号１記載のアミノ酸配列を有するペ
プチドが目的のペプチドであることを明らかにした。更
に、該ペプチドが５０％以上のＨＬＡ−Ａ２４保有健常
人及び癌患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）よりＨＬＡ−
Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導できることを明らかにした。
すなわち該ペプチドが一般的にＣＴＬの機能状態を検査
するのに有用であることを明らかにし、本発明を完成し
た。
ＨＬＡ−Ａ２４拘束性を示す抗原ペプチドとして、Ａ型
インフルエンザウイルスのヌクレオプロティン由来のＨ
ＬＡ−Ａ２４結合性モチーフ構造からなるアミノ酸配列
を有するペプチドより、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２
４拘束性ＣＴＬを誘導できるものを検索した。その結
果、配列表の配列番号１記載のアミノ酸配列を有するペ
プチドが目的のペプチドであることを明らかにした。更
に、該ペプチドが５０％以上のＨＬＡ−Ａ２４保有健常
人及び癌患者の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）よりＨＬＡ−
Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導できることを明らかにした。
すなわち該ペプチドが一般的にＣＴＬの機能状態を検査
するのに有用であることを明らかにし、本発明を完成し
た。
【００１２】
【発明の実施の形態】以下、本発明を具体的に説明す
る。本発明の第１の発明は、配列表の配列番号１又は配
列番号２で表されるアミノ酸配列からなることを特徴と
するメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導
用ペプチドであり、本明細書においては該ペプチドの機
能的誘導体も包含する。本明細書において、配列表の配
列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドの機
能的誘導体とは、例えば配列表の配列番号１で表される
アミノ酸配列全体のうち１個以上のアミノ酸が欠失、置
換、逆位又は付加によってアミノ酸配列は異なるが、配
列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドと同
一の抗原性を示しメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束
性ＣＴＬを誘導できる機能を有するペプチドを意味す
る。配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列からな
るペプチドの機能的誘導体も同様に、配列番号２で表さ
れるアミノ酸配列からなるペプチドと同一の抗原性を示
しメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導
できる機能を有するペプチドを意味する。
る。本発明の第１の発明は、配列表の配列番号１又は配
列番号２で表されるアミノ酸配列からなることを特徴と
するメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導
用ペプチドであり、本明細書においては該ペプチドの機
能的誘導体も包含する。本明細書において、配列表の配
列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドの機
能的誘導体とは、例えば配列表の配列番号１で表される
アミノ酸配列全体のうち１個以上のアミノ酸が欠失、置
換、逆位又は付加によってアミノ酸配列は異なるが、配
列番号１で表されるアミノ酸配列からなるペプチドと同
一の抗原性を示しメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束
性ＣＴＬを誘導できる機能を有するペプチドを意味す
る。配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列からな
るペプチドの機能的誘導体も同様に、配列番号２で表さ
れるアミノ酸配列からなるペプチドと同一の抗原性を示
しメモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導
できる機能を有するペプチドを意味する。
【００１３】このような機能的誘導体として、例えば標
的細胞の細胞内プロセシングにより配列表の配列番号１
又は配列番号２で表されるアミノ酸配列からなる抗原ペ
プチドで誘導したＣＴＬに認識されるペプチドを生じる
Ａ型インフルエンザウイルスヌクレオプロティン由来の
ペプチドも含まれ、更に該タンパク質の変異型由来のペ
プチドであってもよい。また該ペプチドの付加塩、ペプ
チドのアミド、エステル、Ｎ−アシル誘導体なども包含
する。本発明のペプチドは、Ａ型インフルエンザウイル
スヌクレオプロティン分子のタンパク分解により調製す
ることができるほか、液相又は固相のアミノ酸のカップ
リングによる有機化学的方法により調製することができ
る。また、該ペプチドのアミノ酸配列をコードした核酸
を用いた組換えＤＮＡ技術によっても調製することがで
きる。該ペプチドはＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導目
的のほか、Ａ型インフルエンザウィルスの感作の有無を
皮膚反応を利用した遅延型過敏反応により検出する場合
にも使用することができる。更に本発明のペプチドはＡ
型インフルエンザ感染症や他の疾患に対する予防や治療
の目的で使用することもできる。
的細胞の細胞内プロセシングにより配列表の配列番号１
又は配列番号２で表されるアミノ酸配列からなる抗原ペ
プチドで誘導したＣＴＬに認識されるペプチドを生じる
Ａ型インフルエンザウイルスヌクレオプロティン由来の
ペプチドも含まれ、更に該タンパク質の変異型由来のペ
プチドであってもよい。また該ペプチドの付加塩、ペプ
チドのアミド、エステル、Ｎ−アシル誘導体なども包含
する。本発明のペプチドは、Ａ型インフルエンザウイル
スヌクレオプロティン分子のタンパク分解により調製す
ることができるほか、液相又は固相のアミノ酸のカップ
リングによる有機化学的方法により調製することができ
る。また、該ペプチドのアミノ酸配列をコードした核酸
を用いた組換えＤＮＡ技術によっても調製することがで
きる。該ペプチドはＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ誘導目
的のほか、Ａ型インフルエンザウィルスの感作の有無を
皮膚反応を利用した遅延型過敏反応により検出する場合
にも使用することができる。更に本発明のペプチドはＡ
型インフルエンザ感染症や他の疾患に対する予防や治療
の目的で使用することもできる。
【００１４】第２の発明は該ペプチドを用いることを特
徴とする、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴ
Ｌの検出方法に関する。なおメモリー化されたＨＬＡ−
Ａ２４拘束性ＣＴＬは例えば体外摘出試料より得ること
ができる。本明細書における体外摘出試料とは、血液の
ほか、手術等により摘出したリンパ節、脾臓、その他各
種臓器が包含され、これらの試料に存在するリンパ球や
浸潤リンパ球細胞が好適に使用される。
徴とする、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴ
Ｌの検出方法に関する。なおメモリー化されたＨＬＡ−
Ａ２４拘束性ＣＴＬは例えば体外摘出試料より得ること
ができる。本明細書における体外摘出試料とは、血液の
ほか、手術等により摘出したリンパ節、脾臓、その他各
種臓器が包含され、これらの試料に存在するリンパ球や
浸潤リンパ球細胞が好適に使用される。
【００１５】メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性Ｃ
ＴＬの検出をインビトロで実施する場合、例えば該ＣＴ
Ｌを含む試料を本発明の抗原ペプチドで処理した抗原提
示細胞と共にＩＬ−２存在下で数回刺激し該ペプチドに
対し特異的なＣＴＬを誘導することによって実施するこ
とができる。この際、用いられるペプチド濃度は、細胞
培養液中１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌであり、好ま
しくは１０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌである。更に好ま
しくは、該ペプチドは一時的に添加後、過剰量を取り除
く。抗原提示は、本発明のペプチドを必ずしも抗原提示
細胞上に提示する必要はなくＨＬＡ−Ａ２４分子との複
合体としてもよい。ＨＬＡ−Ａ２４分子は天然のＨＬＡ
−Ａ２４分子である必要はなく、抗原ペプチド結合性を
本質的に保存している断片であってもよい。これらの断
片は、例えば、天然のＨＬＡ−Ａ２４分子のタンパク分
解又は組み換えＤＮＡ技術により調製することができ
る。この複合体はβ2 −ミクログロブリン、更に複合体
を認識する抗体を共存させて安定化させることができ
る。
ＴＬの検出をインビトロで実施する場合、例えば該ＣＴ
Ｌを含む試料を本発明の抗原ペプチドで処理した抗原提
示細胞と共にＩＬ−２存在下で数回刺激し該ペプチドに
対し特異的なＣＴＬを誘導することによって実施するこ
とができる。この際、用いられるペプチド濃度は、細胞
培養液中１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌであり、好ま
しくは１０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌである。更に好ま
しくは、該ペプチドは一時的に添加後、過剰量を取り除
く。抗原提示は、本発明のペプチドを必ずしも抗原提示
細胞上に提示する必要はなくＨＬＡ−Ａ２４分子との複
合体としてもよい。ＨＬＡ−Ａ２４分子は天然のＨＬＡ
−Ａ２４分子である必要はなく、抗原ペプチド結合性を
本質的に保存している断片であってもよい。これらの断
片は、例えば、天然のＨＬＡ−Ａ２４分子のタンパク分
解又は組み換えＤＮＡ技術により調製することができ
る。この複合体はβ2 −ミクログロブリン、更に複合体
を認識する抗体を共存させて安定化させることができ
る。
【００１６】誘導された特異的ＣＴＬは、ＣＴＬを誘導
したペプチドと放射性物質で標識した標的細胞に対する
傷害性の確認のほか、放射能の取込みよって測定できる
ＣＴＬ増殖の増加やＣＴＬより遊離されるＧＭ−ＣＳ
Ｆ、ＩＦＮ−γ等のサイトカイン量を測定することによ
り検出することができる。その他蛍光色素等によって標
識された抗原ベプチドや複合体の使用によって直接確認
することもできる。この場合ＣＴＬを、ＣＴＬ特異性抗
体とカップリングさせた第１蛍光マーカーと接触させて
から第２蛍光マーカーとカップリングさせた抗原ペプチ
ド−ＭＨＣ複合体を接触させ、そして二重標識細胞の存
在をＦＡＣＳ分析によって行うことができる。また、誘
導されたＣＴＬの細胞傷害活性の強さを比較することに
よって、あるいは抗原特異的な細胞傷害活性やサイトカ
イン遊離活性を有するＣＴＬ出現頻度よりメモリー化さ
れたＣＴＬの数を測定する〔Ａ．モレッタ（A.Moretta
）ら、ジャーナル オブ イクスペリメンタル メデ
ィスン（Journal of Experimental medicine）、第１５
８巻、第５７１〜５８５頁（１９８３）、Ｙ．ミヤヒラ
（Y.Miyahira）ら、ジャーナル オブ イムノロジカル
メソッズ（Journal of Immunological Methods）、第
１８１巻、第４５〜５８頁（１９９５）〕ことも可能で
あり、これにより体外摘出試料を調製した生物の該ペプ
チド抗原に対する感作状態や免疫記憶状態を検査するこ
とも可能である。
したペプチドと放射性物質で標識した標的細胞に対する
傷害性の確認のほか、放射能の取込みよって測定できる
ＣＴＬ増殖の増加やＣＴＬより遊離されるＧＭ−ＣＳ
Ｆ、ＩＦＮ−γ等のサイトカイン量を測定することによ
り検出することができる。その他蛍光色素等によって標
識された抗原ベプチドや複合体の使用によって直接確認
することもできる。この場合ＣＴＬを、ＣＴＬ特異性抗
体とカップリングさせた第１蛍光マーカーと接触させて
から第２蛍光マーカーとカップリングさせた抗原ペプチ
ド−ＭＨＣ複合体を接触させ、そして二重標識細胞の存
在をＦＡＣＳ分析によって行うことができる。また、誘
導されたＣＴＬの細胞傷害活性の強さを比較することに
よって、あるいは抗原特異的な細胞傷害活性やサイトカ
イン遊離活性を有するＣＴＬ出現頻度よりメモリー化さ
れたＣＴＬの数を測定する〔Ａ．モレッタ（A.Moretta
）ら、ジャーナル オブ イクスペリメンタル メデ
ィスン（Journal of Experimental medicine）、第１５
８巻、第５７１〜５８５頁（１９８３）、Ｙ．ミヤヒラ
（Y.Miyahira）ら、ジャーナル オブ イムノロジカル
メソッズ（Journal of Immunological Methods）、第
１８１巻、第４５〜５８頁（１９９５）〕ことも可能で
あり、これにより体外摘出試料を調製した生物の該ペプ
チド抗原に対する感作状態や免疫記憶状態を検査するこ
とも可能である。
【００１７】体外摘出試料として例えばヒト血液を用い
る場合、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ
を含む試料としてヒト血液より調製したＰＢＭＣを用い
ることができる。ＰＢＭＣとしてはフィコール比重遠心
法等の常法により得られるが、更に抗ＣＤ４抗体を結合
した磁気ビーズを用いてＣＤ４陽性細胞を除いたり、Ｃ
Ｄ８陽性細胞を精製して用いてもよい。抗原提示細胞と
しては自己のＰＢＭＣ又は接着性細胞等が使用可能であ
る。
る場合、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬ
を含む試料としてヒト血液より調製したＰＢＭＣを用い
ることができる。ＰＢＭＣとしてはフィコール比重遠心
法等の常法により得られるが、更に抗ＣＤ４抗体を結合
した磁気ビーズを用いてＣＤ４陽性細胞を除いたり、Ｃ
Ｄ８陽性細胞を精製して用いてもよい。抗原提示細胞と
しては自己のＰＢＭＣ又は接着性細胞等が使用可能であ
る。
【００１８】メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性Ｃ
ＴＬを検出する場合誘導効果を増強するために抗原刺激
は２回行うのが好ましいが、ＰＢＭＣを用いる場合１回
目の抗原刺激はＨＬＡ−Ａ２４複合体を用いなくともよ
く抗原ペプチドをＰＢＭＣ懸濁液中に添加すればよい。
これはＰＢＭＣ中に含まれる抗原提示細胞上に抗原ペプ
チドが少量ではあるが結合し、これが抗原刺激として働
く。なお２回目の抗原刺激はＨＬＡ−Ａ２４と抗原ペプ
チドの複合体を用いることが好ましい。誘導されたＣＴ
Ｌは標的細胞への傷害性により検出することができる。
ＴＬを検出する場合誘導効果を増強するために抗原刺激
は２回行うのが好ましいが、ＰＢＭＣを用いる場合１回
目の抗原刺激はＨＬＡ−Ａ２４複合体を用いなくともよ
く抗原ペプチドをＰＢＭＣ懸濁液中に添加すればよい。
これはＰＢＭＣ中に含まれる抗原提示細胞上に抗原ペプ
チドが少量ではあるが結合し、これが抗原刺激として働
く。なお２回目の抗原刺激はＨＬＡ−Ａ２４と抗原ペプ
チドの複合体を用いることが好ましい。誘導されたＣＴ
Ｌは標的細胞への傷害性により検出することができる。
【００１９】メモリー化されたＣＴＬの検出目的で本発
明のペプチドを用いる場合、該ペプチドは凍結乾燥物や
ジメチルスルホキシド溶液として供給され、使用時に水
溶液又は水で希釈して使用される。該溶液はＨＬＡ−Ａ
２４拘束性ＣＴＬ誘導目的のほか、Ａ型インフルエンザ
ウィルスの感作の有無を皮膚反応を利用した遅延型過敏
反応により検出する場合にも使用することができる。こ
の場合、本発明のペプチドを通常１μｇ〜１ｍｇを皮下
に投与し、１〜２日後に肉眼的に異常の有無を観察すれ
ばよい。一方本発明のペプチドをＡ型インフルエンザ感
染症や他の疾患に対する予防や治療の目的で投与する場
合、鉱物油、フロイント不完全アジュバント等に溶解又
は懸濁した製剤が用いられる。
明のペプチドを用いる場合、該ペプチドは凍結乾燥物や
ジメチルスルホキシド溶液として供給され、使用時に水
溶液又は水で希釈して使用される。該溶液はＨＬＡ−Ａ
２４拘束性ＣＴＬ誘導目的のほか、Ａ型インフルエンザ
ウィルスの感作の有無を皮膚反応を利用した遅延型過敏
反応により検出する場合にも使用することができる。こ
の場合、本発明のペプチドを通常１μｇ〜１ｍｇを皮下
に投与し、１〜２日後に肉眼的に異常の有無を観察すれ
ばよい。一方本発明のペプチドをＡ型インフルエンザ感
染症や他の疾患に対する予防や治療の目的で投与する場
合、鉱物油、フロイント不完全アジュバント等に溶解又
は懸濁した製剤が用いられる。
【００２０】本発明の第３の発明は、ＨＬＡ−Ａ２４分
子と配列表の配列番号１又は配列番号２で表されるアミ
ノ酸配列からなるペプチドとの複合体を表面に提示する
細胞に特異的に細胞溶解又はサイトカイン遊離反応を起
こすＣＴＬである。例えば、該ＣＴＬはＨＬＡ−Ａ２４
分子を有するヒトＰＢＭＣを、本発明の抗原ペプチドで
処理した抗原提示細胞共存下ＩＬ−２存在下で数回刺激
することによって調製することができる。この際、用い
られるペプチド濃度は１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ
であり、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌであ
る。また該ペプチドは一時的に添加後、過剰量を取り除
く方が好ましい。
子と配列表の配列番号１又は配列番号２で表されるアミ
ノ酸配列からなるペプチドとの複合体を表面に提示する
細胞に特異的に細胞溶解又はサイトカイン遊離反応を起
こすＣＴＬである。例えば、該ＣＴＬはＨＬＡ−Ａ２４
分子を有するヒトＰＢＭＣを、本発明の抗原ペプチドで
処理した抗原提示細胞共存下ＩＬ−２存在下で数回刺激
することによって調製することができる。この際、用い
られるペプチド濃度は１ｎｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ
であり、好ましくは１０ｎｇ／ｍｌ〜１μｇ／ｍｌであ
る。また該ペプチドは一時的に添加後、過剰量を取り除
く方が好ましい。
【００２１】該ＣＴＬは該ＣＴＬを誘導可能な新たな抗
原ペプチドのスクリーニングに用いることができるほ
か、新鮮な又は予め誘導して保存しておいた該ＣＴＬを
試験管内で増やした後、患者本人に移入することにより
インフルエンザウイルスに対する感染予防や治療に用い
ることができる。なお本発明により得られるＣＴＬは、
ＨＬＡ−Ａ２４分子上に提示された本発明における抗原
ペプチドの抗原性を認識し傷害活性を有するものを指
し、その他の抗原性認識等により限定されるものではな
い。
原ペプチドのスクリーニングに用いることができるほ
か、新鮮な又は予め誘導して保存しておいた該ＣＴＬを
試験管内で増やした後、患者本人に移入することにより
インフルエンザウイルスに対する感染予防や治療に用い
ることができる。なお本発明により得られるＣＴＬは、
ＨＬＡ−Ａ２４分子上に提示された本発明における抗原
ペプチドの抗原性を認識し傷害活性を有するものを指
し、その他の抗原性認識等により限定されるものではな
い。
【００２２】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものでは
ない。
【００２３】実施例１．Ａ型インフルエンザウイルスの
ヌクレオプロティン（ＮＰ）由来のＨＬＡ−Ａ２４結合
性モチーフペプチドの選択及び合成 ４９８アミノ酸よりなるＡ型インフルエンザウイルスの
ＮＰのアミノ酸配列について、ＨＬＡ−Ａ２４適合性抗
原ペプチドのモチーフ構造を有する配列（Ｎ末端より２
番目がＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔのいずれかのア
ミノ酸であり、Ｃ末端がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒ
ｐのいずれかのアミノ酸であるペプチド）を検索した。
その結果、下記表１に示した１５個のペプチドが存在す
ることが明らかとなった。
ヌクレオプロティン（ＮＰ）由来のＨＬＡ−Ａ２４結合
性モチーフペプチドの選択及び合成 ４９８アミノ酸よりなるＡ型インフルエンザウイルスの
ＮＰのアミノ酸配列について、ＨＬＡ−Ａ２４適合性抗
原ペプチドのモチーフ構造を有する配列（Ｎ末端より２
番目がＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔのいずれかのア
ミノ酸であり、Ｃ末端がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｒ
ｐのいずれかのアミノ酸であるペプチド）を検索した。
その結果、下記表１に示した１５個のペプチドが存在す
ることが明らかとなった。
【００２４】
【表１】
【００２５】なお、表１において配列番号の項の番号
は、各ペプチドのアミノ酸配列を示した配列表の配列番
号を示す。またＮＰ中の位置の項の番号は、ＮＰのＮ末
端からのアミノ酸数を示す。表１に示したペプチドより
配列表の配列番号４、１、２に示す各アミノ酸配列から
なる３種のペプチドをペプチド合成機（島津製作所社
製）、ＨＰＬＣを用いて作製し、各々Ｆｌｕ−１、２、
３と命名した。
は、各ペプチドのアミノ酸配列を示した配列表の配列番
号を示す。またＮＰ中の位置の項の番号は、ＮＰのＮ末
端からのアミノ酸数を示す。表１に示したペプチドより
配列表の配列番号４、１、２に示す各アミノ酸配列から
なる３種のペプチドをペプチド合成機（島津製作所社
製）、ＨＰＬＣを用いて作製し、各々Ｆｌｕ−１、２、
３と命名した。
【００２６】実施例２．健常人ＰＢＭＣからのＣＴＬの
誘導 （１）ヒト血液試料からのＰＢＭＣの調製 ＨＬＡ−Ａ２４を保有する４人の健常人、健常人Ａ（Ａ
２４／３１又は３３）、健常人Ｂ（Ａ２４）、健常人Ｃ
（Ａ２４）、健常人Ｄ（Ａ２４／２６）から採血を行っ
た。なお（）内の記号はＨＬＡ−Ａ２４のＤＮＡタイプ
を示す。ＰＢＭＣは以下の分離方法に従って調製した。
すなわち、採血液を４００×ｇで２０分間室温で遠心
後、バフィーコート層をピペットで回収し、Ficoll−Pa
que 分離液（ファルマシア社製）上に重層後、４００×
ｇで２０分間室温で遠心した。中間層のＰＢＭＣをピペ
ットで回収後、９０％牛胎児血清（ＦＣＳ、インターゲ
ン社製）と１０％ジメチルスルホキシド（シグマ社製）
からなる保存液に懸濁した状態で液体窒素中に保存し
た。なお、各健常人から得られたＰＢＭＣを、それぞれ
試料Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄと命名した。以下の実験において
は、これら保存ＰＢＭＣより必要量を用時融解して用い
た。
誘導 （１）ヒト血液試料からのＰＢＭＣの調製 ＨＬＡ−Ａ２４を保有する４人の健常人、健常人Ａ（Ａ
２４／３１又は３３）、健常人Ｂ（Ａ２４）、健常人Ｃ
（Ａ２４）、健常人Ｄ（Ａ２４／２６）から採血を行っ
た。なお（）内の記号はＨＬＡ−Ａ２４のＤＮＡタイプ
を示す。ＰＢＭＣは以下の分離方法に従って調製した。
すなわち、採血液を４００×ｇで２０分間室温で遠心
後、バフィーコート層をピペットで回収し、Ficoll−Pa
que 分離液（ファルマシア社製）上に重層後、４００×
ｇで２０分間室温で遠心した。中間層のＰＢＭＣをピペ
ットで回収後、９０％牛胎児血清（ＦＣＳ、インターゲ
ン社製）と１０％ジメチルスルホキシド（シグマ社製）
からなる保存液に懸濁した状態で液体窒素中に保存し
た。なお、各健常人から得られたＰＢＭＣを、それぞれ
試料Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄと命名した。以下の実験において
は、これら保存ＰＢＭＣより必要量を用時融解して用い
た。
【００２７】（２）抗原提示細胞の調製 （１）で調製した凍結ＰＢＭＣを凍結融解後放射線照射
を行い、細胞濃度を４×１０6 個／mlに調整後、２４ウ
ェル培養プレートに１ｍｌ／ウェルずつ分注し、ＣＯ2
インキュベーター内で１．５時間培養した。その後、非
接着細胞を吸引除去し、更に各ウェルをＲＰＭＩ１６４
０で洗浄して非接着細胞を除いた。β2ミクログロブリ
ンを終濃度３μｇ／ｍｌ、及び実施例１で調製した３種
のベプチドを個別に終濃度２０μｇ／ｍｌ含む３種の５
Ｈ−ＲＰＭＩを個別に０．５ｍｌ／ウェルずつ分注し、
更に２時間ＣＯ2 インキュベーター内で培養した。２時
間後に上清を吸引除去し５Ｈ−ＲＰＭＩで１回洗浄し、
プレートの各ウェルに残った細胞を抗原提示細胞として
使用した。
を行い、細胞濃度を４×１０6 個／mlに調整後、２４ウ
ェル培養プレートに１ｍｌ／ウェルずつ分注し、ＣＯ2
インキュベーター内で１．５時間培養した。その後、非
接着細胞を吸引除去し、更に各ウェルをＲＰＭＩ１６４
０で洗浄して非接着細胞を除いた。β2ミクログロブリ
ンを終濃度３μｇ／ｍｌ、及び実施例１で調製した３種
のベプチドを個別に終濃度２０μｇ／ｍｌ含む３種の５
Ｈ−ＲＰＭＩを個別に０．５ｍｌ／ウェルずつ分注し、
更に２時間ＣＯ2 インキュベーター内で培養した。２時
間後に上清を吸引除去し５Ｈ−ＲＰＭＩで１回洗浄し、
プレートの各ウェルに残った細胞を抗原提示細胞として
使用した。
【００２８】（３）ペプチドＦｌｕ−１、−２、−３を
用いた健常人ＰＢＭＣからのエフェクター細胞の調製 ＰＢＭＣの抗原刺激によりエフェクター細胞を調製し
た。まず、保存ＰＢＭＣを溶解後、細胞濁度が８×１０
6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。な
お、５Ｈ−ＲＰＭＩは、ＲＰＭ１１６４０培地にヒトＡ
Ｂ型血清（バイオウィタッカー社製）を終濃度５％（ｖ
／ｖ）、非必須アミノ酸（すべてギブコＢＲＬ社製）を
終濃度０．１ｍＭ、ピルビン酸ナトリウム（ギブコＢＲ
Ｌ社製）を終濃度１ｍＭ、Ｌ−グルタミン（ギブコＢＲ
Ｌ社製）を終濃度２ｍＭ、硫酸ゲンタマイシン（ギブコ
ＢＲＬ社製）を終濃度１０μｇ／mlとなるよう加えた培
地である。次に、実施例１で調製した３種のペプチドを
個別に２０μｇ／ｍｌとなるように溶解した３種の５Ｈ
−ＲＰＭＩに、上記のように調製したＰＢＭＣ懸濁液を
等量混合した後、２４ウェル培養プレートの各ウェルに
１ｍｌずつ分注し、３７℃のＣＯ2 インキュベーター内
で培養した。培養中２、３日置きに、培養上清を半量除
き、終濃度２０Ｕ／ｍｌのｒＩＬ−２（塩野義製薬社
製）を含む５Ｈ−ＲＰＭＩを等量加えた。培養開始１週
間後に細胞を遠心操作により回収し、細胞濃度が２×１
０6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。
各ペプチドで刺激した３種の細胞懸濁液を（２）の方法
に従って調製した刺激ペプチドと同一ペプチドを負荷さ
せた抗原提示細胞を含むプレートに１ｍｌ／ウェルずつ
加え、再刺激した。再び１週間ＣＯ2 インキュベーター
内で培養後、細胞を回収し、エフェクター細胞とした。
用いた健常人ＰＢＭＣからのエフェクター細胞の調製 ＰＢＭＣの抗原刺激によりエフェクター細胞を調製し
た。まず、保存ＰＢＭＣを溶解後、細胞濁度が８×１０
6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。な
お、５Ｈ−ＲＰＭＩは、ＲＰＭ１１６４０培地にヒトＡ
Ｂ型血清（バイオウィタッカー社製）を終濃度５％（ｖ
／ｖ）、非必須アミノ酸（すべてギブコＢＲＬ社製）を
終濃度０．１ｍＭ、ピルビン酸ナトリウム（ギブコＢＲ
Ｌ社製）を終濃度１ｍＭ、Ｌ−グルタミン（ギブコＢＲ
Ｌ社製）を終濃度２ｍＭ、硫酸ゲンタマイシン（ギブコ
ＢＲＬ社製）を終濃度１０μｇ／mlとなるよう加えた培
地である。次に、実施例１で調製した３種のペプチドを
個別に２０μｇ／ｍｌとなるように溶解した３種の５Ｈ
−ＲＰＭＩに、上記のように調製したＰＢＭＣ懸濁液を
等量混合した後、２４ウェル培養プレートの各ウェルに
１ｍｌずつ分注し、３７℃のＣＯ2 インキュベーター内
で培養した。培養中２、３日置きに、培養上清を半量除
き、終濃度２０Ｕ／ｍｌのｒＩＬ−２（塩野義製薬社
製）を含む５Ｈ−ＲＰＭＩを等量加えた。培養開始１週
間後に細胞を遠心操作により回収し、細胞濃度が２×１
０6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。
各ペプチドで刺激した３種の細胞懸濁液を（２）の方法
に従って調製した刺激ペプチドと同一ペプチドを負荷さ
せた抗原提示細胞を含むプレートに１ｍｌ／ウェルずつ
加え、再刺激した。再び１週間ＣＯ2 インキュベーター
内で培養後、細胞を回収し、エフェクター細胞とした。
【００２９】（４）ＣＴＬ標的細胞の調製 細胞傷害活性測定のための標的細胞として、ＨＬＡ−Ａ
２４を発現しているＥＢＶトランスフォームＢ細胞であ
るＴＩＳＩ（ＷＳＮＯ９０４２）を用いた。ＴＩＳＩ細
胞をＣＴＬ傷害活性測定前日に、実施例１で調製した３
種のペプチドを個別に１０μｇ／mlとなるよう溶解した
培地（以下、＋と表記）中で一晩培養し、各ペプチドを
負荷した３種のＴＩＳＩ細胞を調製した。一方対象標的
細胞として、ペプチドを含まない培地（以下、−と表
記）中で１晩培養したＴＩＳＩ細胞を調製した。測定当
日、各ペプチドを負荷したＴＩＳＩ細胞及びペプチドを
負荷しなかったＴＩＳＩ細胞各々５×１０6 個を２００
μＣｉのＮａ2 51 ＣｒＯ4 溶液中で３７℃、１時間混和
し、その後１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培養液で
洗浄し４種の標的51Ｃｒ標識ＴＩＴＳ細胞を調製した。
２４を発現しているＥＢＶトランスフォームＢ細胞であ
るＴＩＳＩ（ＷＳＮＯ９０４２）を用いた。ＴＩＳＩ細
胞をＣＴＬ傷害活性測定前日に、実施例１で調製した３
種のペプチドを個別に１０μｇ／mlとなるよう溶解した
培地（以下、＋と表記）中で一晩培養し、各ペプチドを
負荷した３種のＴＩＳＩ細胞を調製した。一方対象標的
細胞として、ペプチドを含まない培地（以下、−と表
記）中で１晩培養したＴＩＳＩ細胞を調製した。測定当
日、各ペプチドを負荷したＴＩＳＩ細胞及びペプチドを
負荷しなかったＴＩＳＩ細胞各々５×１０6 個を２００
μＣｉのＮａ2 51 ＣｒＯ4 溶液中で３７℃、１時間混和
し、その後１０％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培養液で
洗浄し４種の標的51Ｃｒ標識ＴＩＴＳ細胞を調製した。
【００３０】（５）ＣＴＬによる細胞傷害活性の測定 （３）で調製した３種のエフェクター細胞を９×１０6
個／ｍｌ〜１×１０5個／ｍｌの範囲で５Ｈ−ＲＰＭＩ
で各々５段階に希釈した。各希釈濃度の３種のエフェク
ター細胞懸濁液を各々９６ウェル培養プレートの各ウェ
ルにエフェクター細胞懸濁液を１００μｌ／ウェル（９
×１０5 〜１×１０4 個／ウェル）分注しておき、これ
に（４）で調製した各51Ｃｒ標識ＴＩＳＩ細胞及びＫ５
６２細胞をそれぞれ１×１０4 個及び３×１０5 個含む
細胞懸濁液１００μｌ４種を個別に加えた。なお、Ｋ５
６２細胞は、混入するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に
よる非特異的障害を除くために用いた。上記細胞懸濁液
を４００×ｇで２分間遠心後、３７℃のＣＯ2 インキュ
ベーター中に５時間放置した。その後各ウェルの培養液
上清を採取し、ガンマカウンターを用いて遊離された51
Ｃｒ量を測定した。特異的細胞傷害活性は以下の計算式
（数１）に従って算出した。
個／ｍｌ〜１×１０5個／ｍｌの範囲で５Ｈ−ＲＰＭＩ
で各々５段階に希釈した。各希釈濃度の３種のエフェク
ター細胞懸濁液を各々９６ウェル培養プレートの各ウェ
ルにエフェクター細胞懸濁液を１００μｌ／ウェル（９
×１０5 〜１×１０4 個／ウェル）分注しておき、これ
に（４）で調製した各51Ｃｒ標識ＴＩＳＩ細胞及びＫ５
６２細胞をそれぞれ１×１０4 個及び３×１０5 個含む
細胞懸濁液１００μｌ４種を個別に加えた。なお、Ｋ５
６２細胞は、混入するナチュラルキラー（ＮＫ）細胞に
よる非特異的障害を除くために用いた。上記細胞懸濁液
を４００×ｇで２分間遠心後、３７℃のＣＯ2 インキュ
ベーター中に５時間放置した。その後各ウェルの培養液
上清を採取し、ガンマカウンターを用いて遊離された51
Ｃｒ量を測定した。特異的細胞傷害活性は以下の計算式
（数１）に従って算出した。
【００３１】
【数１】特異的細胞傷害活性（％）＝〔（各ウェルの測
定値−最小放出値）／（最大放出値−最小放出値）〕×
１００
定値−最小放出値）／（最大放出値−最小放出値）〕×
１００
【００３２】上式（数１）において、最小放出値は標的
細胞及びＫ５６２細胞のみ入っているウェルの51Ｃｒ量
であり、標的細胞からの51Ｃｒの自然遊離量を示す。ま
た、最大放出値は、標的細胞に界面活性剤トリトンＸ−
１００を加えて細胞を破砕した際の51Ｃｒ遊離量を示し
ている。
細胞及びＫ５６２細胞のみ入っているウェルの51Ｃｒ量
であり、標的細胞からの51Ｃｒの自然遊離量を示す。ま
た、最大放出値は、標的細胞に界面活性剤トリトンＸ−
１００を加えて細胞を破砕した際の51Ｃｒ遊離量を示し
ている。
【００３３】その結果、試料Ａ、Ｂ、Ｃ、ＤよりＦｌｕ
−１で誘導したエフェクター細胞は、すべてにおいて細
胞傷害活性を示さなかった。一方、試料Ｂ、Ｃ、Ｄより
Ｆｌｕ−２あるいはＦｌｕ−３で誘導したエフェクター
細胞は、細胞傷害活性を示した。Ｆｌｕ−２の誘導で得
られた各ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を図１に、Ｆｌｕ
−３の誘導で得られた各ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を
図２にそれぞれ特異的細胞障害活性（％、縦軸）とＥ／
Ｔ（横軸）との関係で示す。両図において、□印は試料
Ｂ、◇印は試料Ｃ、○印は試料Ｄを用いた結果を、実線
はベプチド負荷した標的細胞、破線はベプチド無負荷の
標的細胞を用いた結果を示す。各試料ごとの実線と破線
の差が抗原ペプチド特異的な細胞傷害活性を示す。な
お、横軸のＥ／Ｔは、標的細胞に対するエフェクター細
胞の割合を示す。細胞傷害活性を示した試料Ｂ、Ｃ、Ｄ
より誘導されたエフェクター細胞は、図１と図２の比較
により、いずれもＦｌｕ−２で誘導したエフェクター細
胞の方がＦｌｕ−３で誘導したエフェクター細胞より強
い細胞傷害活性を示した。これらの結果よりＦｌｕ−
２、Ｆｌｕ−３ペプチドがメモリー化されたＨＬＡ−Ａ
２４拘束性ＣＴＬを誘導できる抗原ペプチドであること
が明らかとなった。
−１で誘導したエフェクター細胞は、すべてにおいて細
胞傷害活性を示さなかった。一方、試料Ｂ、Ｃ、Ｄより
Ｆｌｕ−２あるいはＦｌｕ−３で誘導したエフェクター
細胞は、細胞傷害活性を示した。Ｆｌｕ−２の誘導で得
られた各ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を図１に、Ｆｌｕ
−３の誘導で得られた各ＣＴＬの細胞傷害活性の結果を
図２にそれぞれ特異的細胞障害活性（％、縦軸）とＥ／
Ｔ（横軸）との関係で示す。両図において、□印は試料
Ｂ、◇印は試料Ｃ、○印は試料Ｄを用いた結果を、実線
はベプチド負荷した標的細胞、破線はベプチド無負荷の
標的細胞を用いた結果を示す。各試料ごとの実線と破線
の差が抗原ペプチド特異的な細胞傷害活性を示す。な
お、横軸のＥ／Ｔは、標的細胞に対するエフェクター細
胞の割合を示す。細胞傷害活性を示した試料Ｂ、Ｃ、Ｄ
より誘導されたエフェクター細胞は、図１と図２の比較
により、いずれもＦｌｕ−２で誘導したエフェクター細
胞の方がＦｌｕ−３で誘導したエフェクター細胞より強
い細胞傷害活性を示した。これらの結果よりＦｌｕ−
２、Ｆｌｕ−３ペプチドがメモリー化されたＨＬＡ−Ａ
２４拘束性ＣＴＬを誘導できる抗原ペプチドであること
が明らかとなった。
【００３４】実施例３．癌患者ＰＢＭＣからのＣＴＬの
誘導 （１）癌患者ＰＢＭＣの調製 ＨＬＡ−Ａ２４の２人の癌患者、患者Ｅ（Ａ２４／* ０
２０６）、患者Ｆ（Ａ２４）から真空採血管を用いて１
０ｍｌ採血を行い、実施例２（１）と同様の方法により
それぞれ１．４×１０7 個、１．６×１０7 個のＰＢＭ
Ｃを回収した。各患者から得られたＰＢＭＣをそれぞれ
試料Ｅ、Ｆと命名した。得られたＰＢＭＣは９０％ＦＣ
Ｓと１０％ジメチルスルホキシドからなる保存液に懸濁
した状態で液体窒素中に保存した。
誘導 （１）癌患者ＰＢＭＣの調製 ＨＬＡ−Ａ２４の２人の癌患者、患者Ｅ（Ａ２４／* ０
２０６）、患者Ｆ（Ａ２４）から真空採血管を用いて１
０ｍｌ採血を行い、実施例２（１）と同様の方法により
それぞれ１．４×１０7 個、１．６×１０7 個のＰＢＭ
Ｃを回収した。各患者から得られたＰＢＭＣをそれぞれ
試料Ｅ、Ｆと命名した。得られたＰＢＭＣは９０％ＦＣ
Ｓと１０％ジメチルスルホキシドからなる保存液に懸濁
した状態で液体窒素中に保存した。
【００３５】（２）抗原提示細胞の調製 （１）で調製した凍結ＰＢＭＣを凍結融解後放射線照射
を行い、細胞濃度が４×１０6 個／mlとなるように５Ｈ
−ＲＰＭＩに懸濁した。このＰＢＭＣにＦｌｕ−２ペプ
チド４０μg ／ｍｌ、β2 ミクログロブリン６μｇ／ｍ
ｌを含む５Ｈ−ＲＰＭＩを等量混合し、３７℃のＣＯ2
インキュベーター内で時々かくはんしながら３時間培養
した。遠心後、１×１０6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−
ＲＰＭＩに懸濁、２４ウェルプレートに１ｍｌ／ウェル
ずつ分注し、抗原提示細胞とした。
を行い、細胞濃度が４×１０6 個／mlとなるように５Ｈ
−ＲＰＭＩに懸濁した。このＰＢＭＣにＦｌｕ−２ペプ
チド４０μg ／ｍｌ、β2 ミクログロブリン６μｇ／ｍ
ｌを含む５Ｈ−ＲＰＭＩを等量混合し、３７℃のＣＯ2
インキュベーター内で時々かくはんしながら３時間培養
した。遠心後、１×１０6 個／ｍｌとなるように５Ｈ−
ＲＰＭＩに懸濁、２４ウェルプレートに１ｍｌ／ウェル
ずつ分注し、抗原提示細胞とした。
【００３６】（３）Ｆｌｕ−２ペプチドを用いた癌患者
ＰＢＭＣからのエフェクター細胞の調製 （１）で調製した凍結ＰＢＭＣを融解した後融解したＰ
ＢＭＣを用いて、実施例２の（３）で示した健常人ＰＢ
ＭＣの場合と同様に抗原刺激を行った。なお、刺激開始
時に用いた細胞数は、 試料Ｅが、５．２×１０6 個／ウ
ェル、試料Ｆが４．３×１０6 個／ウェルであった。１
週間培養後、細胞を回収し、１×１０6〜２×１０6 個
／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。そして
下記のように（２）で調製した抗原提示細胞を含むプレ
ートに加え再刺激を行い、再び１週間培養し、エフェク
ター細胞とした。なお、エフェクター細胞は、試料Ｅよ
り１．２×１０6 個、試料Ｆより２．９×１０6 個それ
ぞれ得られた。
ＰＢＭＣからのエフェクター細胞の調製 （１）で調製した凍結ＰＢＭＣを融解した後融解したＰ
ＢＭＣを用いて、実施例２の（３）で示した健常人ＰＢ
ＭＣの場合と同様に抗原刺激を行った。なお、刺激開始
時に用いた細胞数は、 試料Ｅが、５．２×１０6 個／ウ
ェル、試料Ｆが４．３×１０6 個／ウェルであった。１
週間培養後、細胞を回収し、１×１０6〜２×１０6 個
／ｍｌとなるように５Ｈ−ＲＰＭＩに懸濁した。そして
下記のように（２）で調製した抗原提示細胞を含むプレ
ートに加え再刺激を行い、再び１週間培養し、エフェク
ター細胞とした。なお、エフェクター細胞は、試料Ｅよ
り１．２×１０6 個、試料Ｆより２．９×１０6 個それ
ぞれ得られた。
【００３７】（４）ＣＴＬによる細胞傷害活性の測定 ９６ウェル培養プレートの各ウェルに、（１）で調製し
た試料Ｅより得られたエフェクター細胞を１．５×１０
5 〜６×１０3 個、試料Ｆより得られたエフェクター細
胞を３．６×１０6 〜４×１０3 個／ウェルずつ分注し
ておき、これに実施例２の（３）と同様に調製した１×
１０4 個の51Ｃｒ標識ＴＩＳＩ細胞及び３×１０5 個の
Ｋ５６２細胞を加え、実施例２（５）と同様にして細胞
傷害活性の測定を行った。その結果試料Ｆから誘導した
エフェクター細胞が、図１と同様な縦軸と横軸との関係
で表した、図３に示すような有意な細胞傷害活性を示し
た。なお図３において実線は、Ｆｌｕ−２を負荷した標
的細胞を用いた場合の結果を、破線はＦｌｕ−２を負荷
しなかった標的細胞を用いた場合の結果を示す。Ｅ／Ｔ
は標的細胞に対するエフェクター細胞の割合を示す。な
お、試料Ｅから誘導したエフェクター細胞は、有意な細
胞傷害活性を示さなかった。
た試料Ｅより得られたエフェクター細胞を１．５×１０
5 〜６×１０3 個、試料Ｆより得られたエフェクター細
胞を３．６×１０6 〜４×１０3 個／ウェルずつ分注し
ておき、これに実施例２の（３）と同様に調製した１×
１０4 個の51Ｃｒ標識ＴＩＳＩ細胞及び３×１０5 個の
Ｋ５６２細胞を加え、実施例２（５）と同様にして細胞
傷害活性の測定を行った。その結果試料Ｆから誘導した
エフェクター細胞が、図１と同様な縦軸と横軸との関係
で表した、図３に示すような有意な細胞傷害活性を示し
た。なお図３において実線は、Ｆｌｕ−２を負荷した標
的細胞を用いた場合の結果を、破線はＦｌｕ−２を負荷
しなかった標的細胞を用いた場合の結果を示す。Ｅ／Ｔ
は標的細胞に対するエフェクター細胞の割合を示す。な
お、試料Ｅから誘導したエフェクター細胞は、有意な細
胞傷害活性を示さなかった。
【００３８】
【発明の効果】本発明の抗原ペプチドは、抗原特異的な
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導す
ることができ、ＣＴＬに関する免疫機能を検査するため
に有用である。また誘導された材料を用いて、免疫機能
あるいはＡ型インフルエンザの感染の有無の診断等を実
施することができる。
メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性ＣＴＬを誘導す
ることができ、ＣＴＬに関する免疫機能を検査するため
に有用である。また誘導された材料を用いて、免疫機能
あるいはＡ型インフルエンザの感染の有無の診断等を実
施することができる。
【００３９】
【００４０】配列番号：１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４１】配列番号：２ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４２】配列番号：３ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列： Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Ile Leu Thr Val 1 5 10
【００４３】配列番号：４ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４４】配列番号：５ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４５】配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４６】配列番号：７ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４７】配列番号：８ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４８】配列番号：９ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４９】配列番号：１０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５０】配列番号：１１ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５１】配列番号：１２ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５２】配列番号：１３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５３】配列番号：１４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５４】配列番号：１５ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００５５】配列番号：１６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【図１】健常人ＰＢＭＣからＦｌｕ−２ペプチドで誘導
したエフェクター細胞の特異的細胞傷害活性を示す図で
ある。
したエフェクター細胞の特異的細胞傷害活性を示す図で
ある。
【図２】健常人ＰＢＭＣからＦｌｕ−３ペプチドで誘導
したエフェクター細胞の特異的細胞傷害活性を示す図で
ある。
したエフェクター細胞の特異的細胞傷害活性を示す図で
ある。
【図３】癌患者ＰＢＭＣから誘導したエフェクター細胞
の特異的細胞傷害活性を示す図である。
の特異的細胞傷害活性を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 14/52 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＹ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 加藤 郁之進 滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号 寳酒造 株式会社中央研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 下記式（化１）又は式（化２）で示す、
配列表の配列番号１又は配列番号２で表されるアミノ酸
配列からなることを特徴とするメモリー化されたＨＬＡ
−Ａ２４拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球誘導用ペプチド。 【化１】Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu 【化２】Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu - 【請求項２】 式（化１）又は式（化２）で表されるア
ミノ酸配列からなるペプチドを使用することを特徴とす
る、メモリー化されたＨＬＡ−Ａ２４拘束性細胞傷害性
Ｔリンパ球の検出方法。 - 【請求項３】 ＨＬＡ−Ａ２４分子と式（化１）又は式
（化２）で表されるアミノ酸配列からなるペプチドとの
複合体を表面に提示する細胞に特異的に細胞溶解又はサ
イトカイン遊離反応を起こす細胞傷害性Ｔリンパ球。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9117432A JPH10298198A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9117432A JPH10298198A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10298198A true JPH10298198A (ja) | 1998-11-10 |
Family
ID=14711510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9117432A Pending JPH10298198A (ja) | 1997-04-22 | 1997-04-22 | Ｃｔｌ誘導用抗原ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10298198A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2008044567A1 (ja) * | 2006-10-12 | 2010-02-12 | 日本電気株式会社 | Ｈｌａ結合性ペプチド、その前駆体、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| WO2011130858A1 (en) * | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Centre Hospitalier De L'université De Montréal | Method for the identification of t cell epitopes |
| JP5067624B2 (ja) * | 2006-02-07 | 2012-11-07 | 日本電気株式会社 | Ｈｌａ結合性ペプチド、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| US9511134B2 (en) | 2006-05-18 | 2016-12-06 | Epimmune Inc. | Inducing immune responses to influenza virus using polypeptide and nucleic acid compositions |
-
1997
- 1997-04-22 JP JP9117432A patent/JPH10298198A/ja active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5067624B2 (ja) * | 2006-02-07 | 2012-11-07 | 日本電気株式会社 | Ｈｌａ結合性ペプチド、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| JP2012229225A (ja) * | 2006-02-07 | 2012-11-22 | Nec Corp | Ｈｌａ結合性ペプチド、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| US9045531B2 (en) | 2006-02-07 | 2015-06-02 | Nec Corporation | HLA-binding peptide, precursor thereof, and DNA fragment and recombinant vector coding for said HLA-binding peptide |
| US9511134B2 (en) | 2006-05-18 | 2016-12-06 | Epimmune Inc. | Inducing immune responses to influenza virus using polypeptide and nucleic acid compositions |
| JPWO2008044567A1 (ja) * | 2006-10-12 | 2010-02-12 | 日本電気株式会社 | Ｈｌａ結合性ペプチド、その前駆体、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| US8324345B2 (en) | 2006-10-12 | 2012-12-04 | Nec Corporation | HLA-binding peptide, precursor thereof, DNA fragment and recombinant vector encoding the same |
| JP2013078325A (ja) * | 2006-10-12 | 2013-05-02 | Nec Corp | Ｈｌａ結合性ペプチド、その前駆体、それをコードするｄｎａ断片および組み換えベクター |
| WO2011130858A1 (en) * | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Centre Hospitalier De L'université De Montréal | Method for the identification of t cell epitopes |
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